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Extracción "casera" de ADN
(y comparación con el protocolo normalizado)
La presente práctica se puede realizar perfectamente en una cocina normal de una casa. Es más, en un laboratorio de un centro de enseñanza media es frecuente que no se disponga de aparatos o reactivos necesarios para llevarla a cabo y que, por el contrario, siempre hay en una cocina (nevera con congelador, batidora, hielo, etc.) MATERIAL Y REACTIVOS
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Muestra vegetal Agua (destilada o mineral) Sal de mesa Bicarbonato sódico Detergente líquido o champú Alcohol isoamílico a 0ºC

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Batidora Nevera Colador o centrífuga Vaso Tubo de ensayo Varilla fina

FUNDAMENTO La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico, probablemente el único reactivo de esta práctica que no suele haber en una cocina. REALIZACIÓN 1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado: o 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo. o 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. o 5 g de bicarbonato sódico. o 5 ml de detergente líquido o champú. 2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos. 3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.

4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante. 5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón. 6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su estremo con el aspecto de un copo de algodón mojado. RESULTADOS El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN. Resulta curioso comparar este método de extracción con el correspondiente protocolo que siguen los laboratorios de análisis: Protocolo QIAGEN de purificación de ADN

Normas generales de uso del laboratorio
Para el desarrollo de las prácticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad. 1. Antes de realizar una práctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y técnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan. 2. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar cada práctica se procederá a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado. 3. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material. 4. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulación. 5. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor. 6. No tacar con las manos y menos con la boca los productos químicos. 7. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. 8. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. 9. Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos, álcalis, etc.) deberá hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se verterán bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarán resbalar suavemente por su pared. 10. Cuando se quiera diluir un ácido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: ácido sobre agua. 11. Cuando se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco. 12. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro. 13. Las pipetas se cogerán de forma que sea el dedo índice el que tape su extremo superior para regular la caída de líquido. 14. Al enrasar un líquido con una determinada división de escala graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal. 15. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos debe evitarse la ebullición violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo se acercará a la llama inclinado y procurando que ésta actúe sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullición rápida, se retirará, acercándolo nuevamente a los pocos segundos y

retirándolo otra vez al producirse una nueva ebullición, realizando así un calentamiento intermitente. En cualquier caso, se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona. 16. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de haberlos calentado con el fin de evitar roturas. 17. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen.

…. 2..El Microscopio óptico compuesto PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO • • Sistema óptico o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen de ésta. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias. o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación. 4. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior. Sistema mecánico o SOPORTE: Mantiene la parte óptica. cambiar los objetivos. ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la . o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Permite. Puede ser monocular. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. 3. o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Para realizar el enfoque: a. al girar. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO 1. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular. binocular. o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación. o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. ya debería estar en esas condiciones. o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto. empleando el tornillo macrométrico. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. o REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Amplía la imagen del objetivo.

j. Mirando. 3. asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. pues se mancharía de aceite. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. 3. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen. Si no se va a usar de forma prolongada. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. e. es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. cuando se observe algo nítida la muestra. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino. b. ahora sí. se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. 2. Si se ensucian.preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio. si desea enfocar otro campo. Al finalizar el trabajo. Cuando no se está utilizando el microscopio. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. d. g. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. Bajar totalmente la platina. ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. b. Pasar al siguiente objetivo. limpiarlas muy . Mirando directamente al objetivo. h. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión. f. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. 2. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y. i. aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. Por tanto. Empleo del objetivo de inmersión: a. hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación. a través de los oculares. c.

micrométrico. 9. 8.4. Si se mancha de aceite. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico. revólver y condensador). al acabar el curso. platina. encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y. secarlo con un paño. porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. mejor. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. No hay que abusar de este tipo de limpieza. . limpiarla con un paño humedecido en xilol. 5. con un papel de óptica. 6. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo. suavemente con un papel de filtro o. 7. Si se derrama sobre ella algún líquido. Después de utilizar el objetivo de inmersión.

.......................................1 l ....................100 ml o Solución B  Ácido tánico....................100 ml 9........................................................................... o Eosina............................................................ Acido-Alcohol: (decolorante para tinción Ziehl-Neelsen) o Ácido clorhídrico concentrado .......................................................................................100 ml Para preparar la solución de uso..................................................................100 ml 7....................................................... Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples.......................................0..................... Colorante para esporas: o Solución acuosa saturada de verde malaquita 5.................2 g  Etanol 95%........................2 g o Agua destilada..........1................................................. saturada en etanol al 95%..... Azul de metileno: Colorante de contraste para tinción de flagelos......................................................3 g o Ácido acético glacial. o Cristal violeta (violeta de genciana)....................Preparación de colorantes 1............................................................ Hematoxilina: Para observación de células sanguíneas.........................0.......100 ml o Solución C  Cloruro sódico...........................................................97 ml 2.................. sol......................... o Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen.............100 ml 3.. Colorante para flagelos de Leifson: o Solución A  Fucsina básica ......................1 ml o Azul de metileno.................. se mezclan cantidades iguales de las soluciones A....................................................................................................0.................................................5 g  Agua destilada...................................................................................................................... o Fucsina básica.................. B y C y se guarda en frasco cerrado herméticamente en la nevera donde es estable durante varias semanas......................................................................... o Azul de metileno................................................................ 6.................100 ml 8.............................................3 g  Agua destilada......................................................................................................3 ml o Etanol 95% ......... Fucsina diluida: Para tinción Gram y tinción simple.............. Cristal violeta: Para tinción Gram y tinción simple.............. Eosina: Para observación de células sanguíneas................10 ml o Agua destilada................ o Hematoxilina.............................1.................................................................100 ml 4........ o Solución de hidróxido potásico al 1%..5 g o Agua destilada.......................10 ml o Fenol 5% en solución acuosa........... Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tinción ácido-alcohol resistente......1 g o Etanol 95%...........................................30 ml o Agua destilada.........025 ml o Agua destilada...................................................................1 g o Agua destilada................100 ml 10..................

....... o Orceína....... o Solución de azul algodón  Sol.........................................0...................................hasta saturación 18.....................100 ml o Sudán III........................................100 ml o Fenol.........................................................................................................................................2 g o Ácido acético........................................ o Yodo.............. Orceína A: Tinción de cromosomas......... 7) ................1 g o Yoduro potásico..................................... Verde de metilo acético: Igual composición que la eosina (num............................................................................................................................................25 g o Agua destilada.....2 g o Agua destilada...45...................... Lactofenol: Para preparaciones microscópicas en fresco de mohos..100 ml 12...........200 ml o Agua..................................................10 ml  Glicerol......................... Sudán III: Tinción específica de grasas.......................................................................................................................................................2 g o Ácido acético............................................300 ml 14...............................................................................................................................10 ml  Agua..............55 ml o Agua............................................................55 ml 16............... o Orceína........................ Lactofenol al Azul Algodón: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos............ o Ácido láctico.... Orceína B: Tinción de cromosomas..............................................8 ml 15... Safranina: Colorante de contraste para tinción Gram (preferible a la fucsina) y esporas..................................................................................................................8 ml o Ácido clorhídrico 1 mol/l...............................................100 g o Glicerol......................................................................... o Alcohol etílico.....................................45................................. saturada de azul algodón (azul anilina soluble)..........................................80 ml Mezclar esta solución con lactofenol a partes iguales 13.3 ml o Agua............................................................................100 m 17................................................... o Safranina...............................................................11..8................... Lugol: Solución de yodo para tinción Gram................................................................................................

tomar. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse. Esperar a que el metanol se evapore completamente. por lo que se puede usar el asa de siembra. Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol.Preparación de un frotis bacteriano Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos. una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. que se toma con el asa de siembra. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. 2. 5. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. 3. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber. Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido. Lo normal es continuar con el proceso de tinción. en condiciones asépticas. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tinción concreta. aunque carecen de contraste. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. FIJACIÓN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS 4. ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua. . TINCIÓN DEL FROTIS BACTERIANO 6. las preparaciones pueden ser observadas al microscopio. Con metanol (para bacterias procedentes de medio líquido). Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. directamente sobre el portaobjetos. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. Es necesaria muy poca cantidad de agua. no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana. que resulta suficiente. Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias. REALIZACIÓN DEL FROTIS 1. ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Dejar enfriar el porta entre los pases. Flamear el asa de siembra.

pero en ningún caso se debe frotar el porta. Alcohol de 70º Alcohol de 95º Acetona pura Acetona-xilol (1:1) Xilol 11. Lavar la preparación con agua para eliminar el colorante. el nombre del alumno. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones manteniéndolos un mínimo de 5 minutos en cada baño. euparal o algún medio de montaje sintético. 7. 8. Se anotará en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparación.En ocasiones el colorante tiñe sólo en caliente. por lo que el tiempo que dure su actuación se deberá sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante. Emplear bálsamo de Canadá. Si se quiere montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersión. pero el objetivo es que la preparación quede totalmente deshidratada. Esta operación se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis. e. pero sin que vaya dirigido directamente sobre él. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente baño. 9. d. pues podría arrastrar parte del frotis consigo. La serie de alcoholes puede modificarse en función de la disponibilidad de los reactivos. pero teniendo mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se produciría la destrucción de las células. . 10. en su caso. Eliminar la máxima cantidad de agua de los portaobjetos golpeándolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm. Montar la preparación. la fecha y. MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIÓN La técnica siguiente es de aplicación para cualquier preparación microscópica que se desee montar de forma definitiva. b. c. Observar la preparación al microscopio llegando hasta el máximo aumento. a. Secar el porta presionando entre dos papeles de filtro.

2. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético. 3. 3. 2. cocos en cadenas arrosariadas). Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales. MATERIAL • • • • • Mechero Bunsen o de alcohol Asa de siembra o aguja enmangada Pinzas Portaobjetos Muestras bacterianas de origen natural: yogur. vinagre. aunque también Gluconobacter.Observación de bacterias OBJETIVOS 1. En esta preparación se podrán. Teñir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos. Además. el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio. Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen. por tanto. • Colorantes para tinción: a) Solución de cristal violeta al 1% b) Solución de safranina al 0. principalmente Acetobacter aceti.5% c) Azul de metileno al 1% Microscopio y aceite de inmersión • BACTERIAS DEL YOGUR El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. 1. sarro dental. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus. poco productor de ácido. Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua. pero muy aromático. . muy acidificante. suelo. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares. 4. observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos. 4. y el Lactobacillus bulgaricus. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra. Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión. Observar al máximo aumento del microscopio. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa. etc. BACTERIAS DEL VINAGRE El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación.

2. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín. 3. Dejar secar y fijar con calor. Foto de distintos tipos de morfología bacteriana (x1500) . Teñir 2-3 minutos. pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas. así como la parte que no se va a teñir. sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. Está constituido principalmente por restos proteicos. cocobacilos. 4. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis. las bacterias se habrán adherido al vidrio y sólo habrá que fijarlas por calor y teñirlas con un colorante cualquiera. Con una aguja enmangada tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos. Dejar secar y fijar con calor. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparación. diplococos y bacilos. Teñir 2-3 minutos. desconocidas para los microbiólogos. Después de varios días. pero suelen abundar bacterias saprófitas. 1. Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado.1. muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas. incluso. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos. 3. BACTERIAS DEL SUELO La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prácticamente infinita. lavar el exceso de colorante y secar. 2. BACTERIAS DEL SARRO DENTAL El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. lavar el exceso de colorante y secar.

8. 2. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. 10. 3. Otra posibilidad es adquirir el equipo completo de colorantes ya preparados. Preparar los frotis bacterianos. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación. Secar la preparación. Teñir con cristal violeta 1min. por lo que puede ser necesario ajustar los tiempos. 5. Lavar con abundante agua el exceso de colorante. 4. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30seg) 7. Cubrir con Lugol 1min. Cada vez que se prepara la batería de colorantes para realizar la tinción Gram presentan algunas diferencias respecto a los preparados en otro momento. cada vez que se preparan los colorantes. Lavar con agua el exceso de Lugol. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste. En un laboratorio de Microbiología. 9. Teñir con safranina 1min. Los tiempos de exposición a los colorantes son orientativos. se suelen hacer pruebas con cultivos patrón de los dos tipos (Gram+ y Gram-) para ajustar así los tiempos y tener la certeza de que el resultado de todas las tinciones que se hagan mientras duren esos colorantes son fiables. 6. FOTOS DE LOS RESULTADOS foto de tinción mixta foto de Bacillus foto de Enterobacter . pero es mucho más caro.Tinción Gram • • • • • • • Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Asa de siembra Cubeta de tinción Cultivo bacteriano Pinzas • • • • • • • Frasco lavador Mechero de alcohol Papel de filtro Cristal violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina REALIZACIÓN 1. 11.

7. 3. Decolorar con la mezcla ácido-alcohol. Prepara un frotis bacteriano. Calentar la preparación en un mechero Bunsen durante 5 min. . Lavar con agua el resto de colorante. 4. Lavar con agua para que no prosiga la decoloración. 9.Tinción ácido-alcohol resistente • • • • • • • Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Asa de siembra Cubeta de tinción Cultivo bacteriano Pinzas • • • • • • Frasco lavador Mechero de alcohol Papel de filtro azul de metileno fucsina-fenol mezcla de ácido y alcohol REALIZACIÓN 1. 8. Examinar al microscopio. Teñir con azul de metileno 1 min. Cubrir la preparación con carbofucsina. Lavar con agua el resto de colorante. 10. 6. 5. Secar la preparación. Si se evapora. No debe hervir. se añade más carbofuxina para que no se seque en ningún momento. 2.

4. durante 5 min. Lavar con agua el resto de colorante. Secar la preparación. Añadir más colorante si la muestra se seca. Teñir con safranina 1 min. . Lavar con agua el resto de colorante. 3. Teñir con verde malaquita. Preparar los frotis bacterianos indicados. 7. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero para que el colorante humee. 2. 5.Tinción de esporas • • • • • • Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Asa de siembra Cubeta de tinción • • • • • • Pinzas Frasco lavador Mechero de alcohol Papel de filtro Verde Malaquita Safranina Cultivo bacteriano REALIZACIÓN 1. Observar la preparación al microscopio. pero sin que hierva. 6.

teñidas por la safranina. RESULTADOS Las siguientes fotos han sido obtenidas a partir de preparaciones teñidas con azul de metileno y no con lactofenol-safranina. Disolver con ayuda de una aguja enmangada un poco de levadura sobre un porta que contenga 2 o 3 gotas de agua ligeramente azucarada.Gemación de levaduras MATERIAL • • • • Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Levadura • • • Agua azucarada Aguja enmangada Lactofenol-safranina TÉCNICA 1. Repetir los pasos anteriores mezclando sobre el portaobjetos la suspensión acuosa de la levadura con una gota de lactofenol-safranina. 3. • • • Levadura x600 Levadura x1500 Gemación de levaduras . Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio. o Retrasar un poco el desprendimiento de las células hijas gracias a la acción desfavorable del fenol para la vida normal de las levaduras. Con este procedimiento se consigue una doble finalidad: o Ver mejor las células de las levaduras. 2.

Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas entre los dos vidrios. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que será ya el definitivo. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidióforos). se aplastarán éstos ligeramente sobre la gota o se seccionarán con un bisturí. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado. Tomar el material a observar en una mínima cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los portaobjetos. 2. 2. PREPARACIÓN EN CINTA ADHESIVA TÉCNICA 1. Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de mohos. 3. 5. 4. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa. Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa. los conidióforos. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa.Observación microscópica de hongos OBJETIVOS 1. Realizar la misma operación en otro portaobjetos que se usará para lavar la muestra. . Observar la morfología de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras que las originan MATERIAL • • Microscopio Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con alcohol Aguja enmangada o lanceta • • Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos Solución de lactofenol al azul algodón Cinta adhesiva transparente • • PREPARACIÓN EN FRESCO DE MOHOS TÉCNICA 1.

4. 3. RESULTADOS • • • Moho del tomate: x600 x1500 Aspergillus: x150 x600 (foto a / foto b) Penicillum: x600 x1500 . Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentración de esporas.2. 5. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.

tal y como ha quedado demostrado en el experimento 1. De este modo. bicarbonato. Tras la reacción con el glúcido reductor se forma óxido de Cobre (I) de color rojo. .Reconocimiento de glúcidos • • • • • • Tubos de ensayo Gradilla Pinzas Mechero Pipetas MATERIALES • Solución de Fehling A y B • Solución alcalina (sosa. por lo tanto. en presencia de ClH y en caliente. 2. maltosa. ESTUDIO DE AZÚCARES REDUCTORES FUNDAMENTO Los monosacáridos y la mayoría de los disacáridos poseen poder reductor. Solución de Lugol fructosa. Sin embargo. 5. es decir. la hidrólisis no se ha realizado correctamente y si en el resultado final aparece una coloración verde en el tubo de ensayo se debe a una hidrólisis parcial de la sacarosa. 4. TÉCNICA 1. la sacarosa se hidroliza.) • ClH diluido • Soluciones al 5% de glucosa. etc. Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solución de glucosa. potasa. el glúcido presente es reductor. sacarosa y almidón. maltosa. Las soluciones de esta sal tienen color azul. 2. lactosa. si el resultado es positivo. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan. La prueba de que se ha verificado la hidrólisis se realiza con el licor de Fehling y. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prácticas con las distintas muestras de glúcidos. Este carácter reductor puede ponerse de manifiesto por medio de una reacción redox llevada a cabo entre ellos y el sulfato de Cobre (II). HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA FUNDAMENTO La sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres por lo que carece de poder reductor y la reacción con el licor de Fehling es negativa. 1. glucosa y fructosa. el cambio de color indica que se ha producido la citada reacción y que. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo y será negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso. que deben al grupo carbonilo que tienen en su molécula. Añadir 1ml de solución de Fehling A (contiene CuSO4) y 1ml de Fehling B (lleva NaOH para alcalinizar el medio y permitir la reacción) 3. lactosa fructosa o sacarosa (según indique el profesor). aparecerá un precipitado rojo. incorpora una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos que la forman. Si el resultado es negativo. que sí son reductores.

TÉCNICA 1. Observar y anotar los resultados. lo cual sólo ocurre en frío. Realizar la prueba de Fehling como se indica en el experimento 1. 3. 5. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de la solución de almidón. Dejar enfriar. Como los polisacáridos no tienen poder reductor. 4. 4. la reacción de Fehling da negativa. Observar y anotar los resultados. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a una reacción química sino a la adsorción o fijación de yodo en la superficie de la molécula de amilosa. 3. Como reactivo se usa una solución denominada lugol que contiene yodo y yoduro potásico. sin que llegue a hervir. 2. . INVESTIGACIÓN DE POLISACÁRIDOS (ALMIDÓN) FUNDAMENTO El almidón es un polisacárido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la amilopectina. 3. Añadir 3 gotas de la solución de lugol. Enfriar el tubo de ensayo al grifo y observar cómo. 2. Calentar suavemente. reaparece el color azul.TÉCNICA 1. 6. 5. a los 2-3 minutos. Calentar a la llama del mechero durante unos 5 minutos. Tomar 3ml de solución de sacarosa y añadir 10 gotas de ClH diluido. hasta que pierda el color. Neutralizar añadiendo 3ml de solución alcalina.

TÉCNICA 1. En los seres vivos. Observar los resultados: en el tubo con Sudán III todo el aceite tiene que aparecer teñido. cloroformo o acetona Aceite de oliva 1. Al otro tubo añadir 4-5 gotas de tinta roja. Agitar ambos tubos y dejar reposar. Éstos se combinan con los iones sodio o potasio del hidróxido para dar jabones. 2. 4. Pasado este tiempo. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en . 5. TÉCNICA . otra intermedia semisólida que es el jabón formado y una superior lipídica de aceite inalterado. que son en consecuencia las sales sódicas o potásicas de los ácidos grasos. ésta se irá al fondo y el aceite no estará teñido. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%. Añadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solución alcohólica de Sudán III. 2. . TINCIÓN FUNDAMENTO Los lípidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudán III. 3. mientras que en el tubo con tinta. la hidrólisis de los triglicéridos se realiza mediante la acción de enzimas específicos (lipasas) que dan lugar a la formación de ácidos grasos y glicerina. Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30 minutos. SAPONIFICACIÓN FUNDAMENTO Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásico descomponiéndose en los dos elementos que las integran: glicerina y ácidos grasos.Reconocimiento de lípidos MATERIALES • • • • • • Tubos de ensayo Gradilla Varillas de vidrio Mechero Vasos de precipitados Pipetas • • • • • Solución de NaOH al 20% Solución de Sudán III Tinta china roja Eter. SOLUBILIDAD FUNDAMENTO Los lípidos son insolubles en agua. . 3. se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solución de sosa sobrante junto con la glicerina formada.

como el éter. acetona. etc. 3. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo. TÉCNICA 1. 4. Por el contrario. por su menor densidad. se sitúa sobre el agua. 4. Añadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de éter u otro disolvente orgánico. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar. que es transitoria. en cambio no lo hace en el agua y el aceite subirá debido a su menor densidad. 5.pequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso. CUESTIONES 1. cloroformo. benceno. pues desaparece en reposo por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que. ¿Qué son los jabones? ¿Cómo se pueden obtener los jabones? ¿Por qué en la saponificación la glicerina aparece en la fase acuosa? ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas? Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudán III y aceite-tinta y explica a qué se debe la diferencia entre ambos resultados. 3. Observar los resultados: Se verá cómo el aceite se ha disuelto en el éter y. ¿Qué ocurre con la emulsión de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo?¿Y con la de benceno y aceite?¿A qué se deben las diferencias observadas entre ambas emulsiones? . 6. 2. 2. las grasas son solubles en disolventes orgánicos.

4. 3. Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa) o 2-3ml de leche. destaca la reacción del Biuret. pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CONH que se destruye al liberarse los aminoácidos. 2. Agitar para que se mezcle bien. 2. etc. Observar los resultados. se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas. ácidos. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET) FUNDAMENTO Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas. Añadir 3ml de solución de NaOH al 20%. en un medio fuertemente alcalino. COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS FUNDAMENTO Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70ºC o al ser tratadas con soluciones salinas. Calentar uno de los tubos al baño María. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solución de albúmina al 1-2%.Reconocimiento de prótidos • • • • • Tubos de ensayo Gradilla Mechero Vasos de precipitados Pipetas MATERIALES • Solución de HCl concentrado • Alcohol etílico • Solución de SO4Cu al 1% • NaOH al 20% • Clara de huevo o leche • Solución de albúmina al1-2% 1. . 2. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan por destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria. 5. Observar los resultados. alcohol. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas. y el Cu. TÉCNICA 1. 3. que sirven por tanto para su identificación. TÉCNICA 1. añadir a otro 2-3ml de HCl concentrado y al tercero 2 o 3ml de alcohol etílico. El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa. Añadir 4-5 gotas de solución de SO4Cu al 1%.

2. 4. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo? ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización? ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína? ¿Qué coloración da la reacción del Biuret? ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret? 6.CUESTIONES 1. 3. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué? . 5.

5. quitando las nerviaciones más gruesas. . pues acompañarán fácilmente al disolvente a medida que éste asciende. 4. INTRODUCCIÓN Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso). carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones. MATERIALES • Alcohol metílico puro (cuidado. de anchura y unos 10 a 15 cms. Tira de papel cromatográfico Wathman (con un buen papel de filtro se obtienen. Estas bandas poseerán diferente grosor. • Capilar o micropipeta (cuentagotas en su defecto). sus vapores son muy tóxicos). Tijeras.Separación de pigmentos vegetales mediante cromatografía en papel Esta práctica ha sido enviada por Gabriel Salas López. por tanto. Espinacas u hojas verdes. de solución de pigmentos). 2. Colocar en un mortero trozos de hojas de espinacas lavadas. • Cápsula de Petri o vaso de precipitados. Tubo de ensayo en gradilla. Triturar sin golpear hasta que el líquido adquiera una coloración verde intensa (utilizar campana de gases a lo largo de toda la práctica). TÉCNICA 1. Éter etílico. • FUNDAMENTO Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares. clorofila-b (verde). Colocar en la tapadera de una caja de Petri metanol absoluto hasta una altura de 0. Cortar una tira de papel de filtro de unos 8 cms. Las menos solubles avanzarán menos en la tira de papel de filtro. • • • • • • Mortero.5 a 1 cm. dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolución. dependiendo del material utilizado) que estarán más o menos alejados de la disolución alcohólica según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. incluso. Filtrar en un embudo con papel de filtro y recoger en un tubo de ensayo (es suficiente con 2 o 3 cc. varias bandas de diferentes colores (hasta siete o más. mejores resultados). Aparecerán. ya que las más solubles se desplazarán a mayor velocidad. lo que permite su separación cuando una solución de las mismas asciende por capilaridad a través de una tira de papel poroso (papel de cromatografía o de filtro) dispuesta verticalmente sobre una película de un disolvente orgánico (etanol). junto con 10 o 15 cc de éter etílico. profesor de Biología del IES Cerro Milano de Alhama. Almería. 3. Embudo con papel de filtro.

7. La solubilidad en alcohol de los pigmentos es. Podemos sustituir la placa de petri por un vaso de precipitados y fijar el papel cromatográfico con una pinza a un soporte horizontal colocado en el borde del vaso (por ejemplo. Por encima de las clorofilas aparece más de una banda. ¿Qué pigmentos son los más abundantes? 4. Poner con el capilar en el papel de cromatografía entre 5 y 10 gotas de solución de pigmentos. CUESTIONES Y RESULTADOS 1. Las gotas se pondrán siempre en el mismo punto (se puede marcar con un lápiz). 8. 2. ¿Por qué empleamos éter etílico para extraer la clorofila? 3. una varilla de vidrio). clorofila a. situado a nos 2 cm por encima del borde inferior del papel. 6. Esperar unos 30 minutos y observar. clorofila b y xantofila. espaciadas en el tiempo con el fin de que vaya secándose el éter etílico y aumente la cantidad de pigmentos. Indicar qué pigmento corresponde a cada banda. Doblar el papel cromatográfico a lo largo y colocarlo en la placa de petri con la mancha de pigmento a 1 cm. de la superficie del eluyente.de altura. de mayor a menor: carotenos. ¿qué significado tiene? .

de leche descremada en un vaso ancho de 600 ml. Continuar añadiendo ácido acético diluido hasta que no precipite más caseína. hasta que la caseína esté completamente seca. Colocar el producto entre varias toallas de papel para ayudar a secar la caseína. Añadir. Agitar esta mezcla durante unos minutos y guardarla para utilizarla luego en la siguiente práctica. Agitar continuamente la mezcla con una varilla de vidrio durante todo el proceso de adición. Dejar que la caseína se seque completamente al aire durante uno o dos días y finalmente pesarla. Introducir 200 ml. 2. Filtrar la masa de caseína al vacío durante aproximadamente 15 minutos para separar todo el líquido que sea posible. 9. Calentar la mezcla que se guardaba del experimento anterior a ebullición suave durante aproximadamente 10 minutos. 2. 8. inmediatamente.Aislamiento de caseína y lactosa • • • • • MATERIALES Vasos de precipitados • Mechero. 7. AISLAMIENTO DE LA LACTOSA 1. poniendo nuevas toallas de papel. Separar la caseína con ayuda de una varilla o espátula y colocarla en otro vaso. 4. Esto causará la precipitación casi completa de las albúminas (proteinas del suero). 2. Filtrar la mezcla caliente al vacío para separar las albúminas precipitadas y el . 3. 10. Agitar la caseína hasta que se forma una gran masa amorfa. Debe evitarse un exceso de ácido porque puede hidrolizarse parte de la lactosa. rejilla y trípode • Varilla de vidrio o espátula • Trompa de vacío Papel secamanos de • laboratorio • Erlenmeyer • Leche descremada Acético glacial Carbonato cálcico en polvo Etanol 95% Etanol acuoso 25% Carbón activo • 1. 6. Debe utilizarse cuanto antes y durante el mismo período de trabajo. con un cuentagotas. Cambiar el producto por lo menos en tres o cuatro ocasiones. 5.03 g/ml. Esta mezcla contiene lactosa. aunque se guarde en la nevera. La densidad de la leche es de 1. Calentar la leche hasta aproximadamente los 40° C y añadir gota a gota una disolución de ácido acético diluido (1 volumen de ácido acético glacial en 10 volúmenes de agua). No se debe dejar la leche en reposo durante mucho tiempo antes de utilizarla. 5 g de carbonato de calcio en polvo al primer vaso (que contiene el líquido del que se ha separado la caseína). Presionar la caseína con una espátula durante la operación de filtrado. Calcular el porcentaje de caseína aislada. AISLAMIENTO DE LA CASEINA 1. ya que la lactosa puede convertirse lentamente en ácido láctico.

El filtrado puede enturbiarse debido a la cristalización rápida de la lactosa. Lavar el producto con unos pocos mililitros de etanol acuoso frío al 25 %. C12H22O11·H2O.03 g/ml. Esto puede controlarse soplando suavemente sobre la superficie de la disolución de lactosa. debe evitarse otra filtración. se requieren varios días para que la cristalización haya finalizado. La lactosa cristaliza con una molécula de agua. Con este valor. Pesar el producto cuando esté completamente seco. Añadir 175 ml de etanol del 95% (lejos de cualquier llama) y 1 ó 2 g de carbón activo a la disolución caliente. Si la turbidez aumenta con relativa rapidez al dejarla en reposo. 6. hasta aproximadamente 30 ml. El filtrado debe ser transparente. Concentrar el filtrado (transparente). si la mezcla entra en ebullición con demasiada fuerza. 5. Pasar la disolución a un matraz Erlenmeyer y dejarla reposar durante la noche o hasta que se inicie el siguiente período de trabajo. La densidad de la leche es de 1. Desalojar los cristales y filtrarlos al vacío. después de la filtración al vacío. 7. 9. .3. También se puede formar espuma. pues se perdería producto. 4. La lactosa cristaliza en la pared y en el fondo del matraz. filtrar la solución caliente al vacío. calcular el porcentaje de lactosa en la leche. Utilizar varias varillas para ayudar a conseguir una ebullición homogénea y evitar las salpicaduras que se producirían al ir aumentando el precipitado. en un vaso de boca ancha de 600 ml. Después de haberlo mezclado todo bien. con un mechero Bunsen. En algunos casos. 8. carbonato de calcio que aún quede.

se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él por acción del detergente. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. o 1.Extracción "casera" de ADN (y comparación con el protocolo normalizado) La presente práctica se puede realizar perfectamente en una cocina normal de una casa. hielo. Las proteínas asociadas al ADN. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón . 2. por el contrario. ajo. etc. 4.5 g de sal de mesa. extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente. o 5 g de bicarbonato sódico. Sólo queda. No usar agua del grifo. Es más. para lo cual se utiliza alcohol isoamílico. tomates. en un laboratorio de un centro de enseñanza media es frecuente que no se disponga de aparatos o reactivos necesarios para llevarla a cabo y que. En ese momento. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla. o 5 ml de detergente líquido o champú. de gran longitud. REALIZACIÓN 1. probablemente el único reactivo de esta práctica que no suele haber en una cocina. 3.) y cortarla en cuadraditos. el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN. batidora. siempre hay en una cocina (nevera con congelador. permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. etc. si es posible destilada y si no mineral. proteínas y otras sustancias en menor proporción. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado: o 120 ml de agua. Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente. preferiblemente pura.) MATERIAL Y REACTIVOS • • • • • Muestra vegetal Agua (destilada o mineral) Sal de mesa Bicarbonato sódico Detergente líquido o champú Alcohol isoamílico a 0ºC • • • • • • Batidora Nevera Colador o centrífuga Vaso Tubo de ensayo Varilla fina • FUNDAMENTO La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN. por tanto. carbohidratos. vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN.

teniendo éste inclinado. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante. .frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente. 6. hay fragmentos de ARN. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. entremezclado con él. 5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su estremo con el aspecto de un copo de algodón mojado. RESULTADOS El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.

Repetir el paso anterior con la muestra restante. Desechar el filtrado y el tubo colector. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente y centrifugar durante 1 minuto a 10000 rpm. 3. Incubar la mezcla a 65ºC durante 2 horas. 10. Añadir 500 µl de tampón AW a la columna DNeasy y centrifugar durante 2 minutos a 13000 rpm para secar bien la membrana. 2. 12. Añadirle 400 µl del tampón AP1.5 o de 2 ml y añadirle 100 µl de tampón AE precalentado a 65 ºC directamente en la membrana DNeasy. 8. Centrifugar durante 5 minutos a 13000 rpm. Desechar el filtrado y reutilizar el tubo para el siguiente paso. Centrifugar durante 1 minuto a velocidad mayor a 8000 rpm (10000 rpm) y desechar el líquido filtrado. Colocar la columna DNeasy en un tubo nuevo de recogida. 14. 4 µl de RNasa A (100 mg/ml) y 20 µl de proteinasa K. Recoger el sobrenadante y pasarlo a un tubo-columna QIAshredder y centrifugar durante 2 minutos a velocidad máxima. Añadir 130µl del tamón AP2. sin arrastrar ningún resto de precipitado (si lo hay). 13.Protocolo QIAGEN 1. 6. 9. Transferir la columna DNeasy a un microtubo de 1. Pesar 100 mg de la muestra. 15. Repetir el paso anterior. Añadir 1. 4.5 volúmenes de tampón AP3/E y mezclar inmediatamente mediante pipeteo. mezclar bien e incubar 5 minutos en hielo. Mezclar vigorosamente. 5. Transferir el líquido que se ha filtrado al tubo de abajo a un tubo eppendorf nuevo. 7. . añadir 500 µl de tampón AW y centrifugar durante 1 minuto a 10000 rpm. Guardar la muestra obtenida en congelación. Recoger 650 µl de esa mezcla. 11. a la columna DNeasy mini spin. incluyendo cualquier precipitado que pueda haberse formado.

Su determinación se realiza observando durante la metafase la dotación cromosómica de una célula y la obtención de una fotografía de esta observación permite investigaciones genéticas sobre ese individuo o esa especie. Agrúpalos de acuerdo con su tamaño. REALIZACIÓN 1. . 3. 2. La figura siguiente representa un cariotipo humano.Estudio del cariotipo humano Se denomina cariotipo al conjunto de cromosomas de una especie determinada. 4. Identifica cada pareja de homólogos ayudándote del cariotipo ordenado de la figura. forma y bandas de tinción. Recorta cada uno de los cromosomas.

.5. Pega cada pareja en una plantilla vacía como la de la figura anterior.

RESULTADOS El resultado de esta práctica debe ser semejante a lo que muestran las siguientes fotos obtenidas con microscopio óptico: • • Aspecto general de la epidermis o Epidermis de cebolla en fresco x150 o Epidermis de cebolla azul de metileno x150 También se pueden llegar a ver determinadas partes de las células o Nucleo x600 o Nucleo x1500 o Nucleo con retículo endoplasmático x1500 o Retículo endoplasmático x600 . Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que está adherida por su cara inferior cóncava. Colocar sobre la preparación un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio.Observación de epidermis de cebolla MATERIAL • • • • • Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubeta Agujas enmangadas • • • • • Pinzas Escalpelo Verde de metilo acético o azul de metileno Cuentagotas Cebolla TÉCNICA 1. Identifica las distintas células del tejido epidérmico y las de las hojas del bulbo de cebolla. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. 6. empezando por el más bajo. 3. ¡No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporación del mismo! 4. 5. Escurrir el agua. estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. 2. Con el cuentagotas bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. Observa la preparación a distintos aumentos. Si es preciso. añadir una gotas de verde de metilo acético (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. Pon el porta sobre la cubeta de tinción para que caiga en ella el agua y los colorantes.

Retira una parte pequeña de la epidermis de la hoja de puerro y llévala sobre un porta en el que habrás colocado dos o tres gotas de agua. células oclusivas x1500 Aquí tienes un esquema de lo que se puede observar • . Pon el cubre y examina la preparación al microscopio. sus células oclusivas y su estructura: o Estoma cerrado. RESULTADOS El resultado de esta práctica debe ser semejante a lo que muestran las siguientes fotos obtenidas con microscopio óptico: • • Aspecto general de la epidermis teñida con azul de metileno: o Epidermis de puerro con estomas x150 o Epidermis de puerro con estomas x600 También se pueden ver con detalle los estomas. Ten la precaución de que sea una capa incolora y de que esté perfectamente extendida. 3. células oclusivas x1500 o Estoma abierto. Identifica en tu preparación la estructura de las células que aparecen en el esquema. 2.Observación de epidermis de puerro MATERIAL • • • • Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cuentagotas con agua • • • • Agujas enmangadas Pinzas Escalpelo Un puerro TÉCNICA 1.

5. corta en dos mitades el tomate. 3. Coloca encima un cubreobjetos y comprime suavemente con los dedos hasta obtener un completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate. ayudándote de unas pinzas. Selecciona el mejor grupo de células y pasa a mayores aumentos.Observación de pulpa de tomate MATERIAL • • • Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos • • • Escalpelo Pinzas Tomate TÉCNICA 1. Deposítalo en el centro de un portaobjetos sin poner agua. 6. Obtén. un trozo de pulpa de tomate de unos 2mm de grosor. RESULTADOS El resultado de esta práctica debe ser semejante a lo que muestran las siguientes fotos obtenidas con microscopio óptico: • • Células de la pulpa del tomate x150 Cromoplasto de célula de tomate x600 . Identifica los distintos orgánulos celulares visibles y dibuja lo que observes en el apartado observaciones. 4. Utilizando un escalpelo. Lleva la preparación a la platina del microscopio y realiza una observación con pequeños aumentos. 2.

tienen un solo núcleo que ocupa casi todo el glóbulo. 3. 5. Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo. Monocitos: son los leucocitos mayores. 9. 4. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA (foto) Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparación. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. núcleo grande. Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción . 3. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes. Hay varias clases de leucocitos: 1. poco frecuentes normalmente.Observación de células sanguíneas MATERIALES • • • • • Microscopio Portaobjetos Mechero de alcohol Lanceta estéril Cubeta de tinción • • • • Frasco lavador Alcohol absoluto Hematoxilina Eosina TÉCNICA 1. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. teñido de morado por la hematoxilina. Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto. con abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina. son los más móviles y su función principal es la fagocitosis. 2. 7. hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina (foto). 8. 2. redondo. Con la lanceta estéril realizar una punción en un pulgar. neutrófilos y basófilos. Polimorfonucleares (foto): núcleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinófilos. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina película de sangre. Observar al microscopio. 6. Linfocitos (foto): de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. Evitar la desecación del colorante agregando más líquido.

Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raíz quede extendida. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA (foto x150 / x600) Se realizará a fuertes aumentos. La orceína A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tinción. 4. La preparación presenta el aspecto de una dispersión de células por todo el campo que abarca el microscopio. Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos. Con la presión sobre el porta de la preparación se logra una extensión y difusión de las células del meristemo de la cebolla. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. hasta la emisión de vapores tenues. 3. Con las pinzas tomar uno de los ápices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos. Si la preparación está bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presión que se realice. 2. Se observan células en diversas fases o estados de división celular. evitando la ebullición.Mitosis en células de raíz de cebolla • • • • • • • • MATERIALES Microscopio • Frasco lavador Portaobjetos • Mechero de alcohol Cubreobjetos • Tijeras Lanceta estéril • Papel de filtro Cubeta de tinción • Vaso de precipitados Aguja enmangada • Vidrio de reloj Pinzas • Orceína A Palillos • Orceína B TÉCNICA 1. Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremos de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orceína A. 5. 5 o 6. Ver secuencia completa . 7. 6. Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Sobre la preparación colocar unas tiras de papel de filtro. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presión. evitando que el cubre resbale. El aspecto reticulado así como el mayor tamaño de algunos núcleos corresponde a las células que se encontraban en los procesos iniciales de la división mitótica. Se ven los cromosomas teñidos de morado por la orceína. Al cabo de 3-4 días aparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud. Observar al microscopio. añadir una gota de orceína B y dejar actuar durante 1 minuto.

3. 2. Con ayuda de un bisturí. cortar una finísima capa de grasa. colocarla en un porta y cubrirla con unas gotas de formol. Dejar actuar unos 5 minutos. cubrirla con un cubreobjetos y observar al microscopio.Observación de células de tejido adiposo MATERIAL • • • • Microscopio Porta y cubreobjetos Bisturí o escalpelo Frasco lavador • • • • Cubeta de tinción Tocino u otra grasa animal Formol Sudán III TÉCNICA 1. Volver a lavar la preparación con agua. Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudán III. . Dejar actuar 4 minutos.

3. . No cojas flores del tipo de la margarita ya que son inflorescencias. Coge la flor y desgaja cuidadosamente los sépalos. 6. pégalos en la cartulina indicando nombre y características de cada una de las partes de esta flor.Estudio de la flor MATERIAL • • • • Flores Pinzas Tijeras Cartulina • • • Pegamento Papel absorbente Prensa TÉCNICA 1. Haz lo mismo con los pétalos. están constituidas por un gran número de flores. 4. colocándolos sobre una cartulina de manera que formen un círculo y se hallen en una posición igual a la que tenían en la flor. Corta los estambres y sitúalos en un tercer círculo interior. que colocarás en la misma cartulina. es decir. pon en el centro los pistilos. Coloca sobre el conjunto una hoja porosa (puede utilizarse papel de periódico) y prénsalo. pero en un círculo interior al anterior. Una vez que estén secos estos componentes florales. 5. Escoge flores dialipétalas (pétalos separados). Por último. 2.

2. Corta el opérculo y observa en el interior las branquias. Termina realizando un corte vertical. Realiza un dibujo en el apartado de observaciones.Disección de un pez MATERIAL • • • Tijeras Escalpelo Cubeta de disección • • • Pez óseo (trucha) Aguja enmangada Pinzas TÉCNICA 1. empieza cortando la aleta pectoral . Realiza ahora un corte vertical hasta llegar al ano. 3. Realiza un segundo dibujo. Introduce el pez en la cubeta de disección y obsérvalo detenidamente tratando de reconocer las partes más importantes de su anatomía externa. Haz un corte rectangular en un lado. corta hasta la altura del ano (situado delante de la la aleta anal). Desde el arranque de dicha aleta y siguiendo una línea recta. Corta después desde el ano paralelamente al primer corte hasta llegar a la altura de la base de la aleta pectoral. . Retira el trozo de musculatura y quedarán a la vista las vísceras del pez.

Disección de un mejillón MATERIAL • • • • • Tijeras Escalpelo Plancha de disección Vaso de precipitados Mechero • • • • • Mejillones frescos Aguja enmangada Pinzas Alfileres Trípode y rejilla TÉCNICA 1. las líneas concéntricas que presentan y que indican las etapas de crecimiento del animal. Anota todas estas observaciones. Observa también si la charnela presenta dientes. ¿Has podido reconocer el sexo del mejillón examinado? . Extrae el animal y deposítalo en la plancha de disección. el pie. los músculos aductores anterior y posterior y el hepatopáncreas de color verdoso. observa su tamaño y la impresión que dejan en el interior de la concha. Localiza el ápice y la charnela (bisagra de unión de las valvas). 3. Observa la concha. Localiza la boca. 5. Introduce el mejillón en un vaso de precipitados con agua caliente durante unos minutos hasta que las valvas se abran. ¿Qué significa bivalvo? 2. la glándula del biso con los filamentos que segrega y que sirven para adherirse a los objetos y la joroba de polichinela que contiene los órganos reproductores. 4. CUESTIONES 1. Deposita lateralmente el mejillón sobre la plancha de disección y observa el manto (repliegue carnoso exterior). Separa la concha del resto del animal cortando con el escalpelo o la tijera los músculos aductores. Extiende el borde del manto y sujétalo con alfileres. los palpos labiales. ¿Cómo se denominan también los moluscos con dos valvas?¿Por qué? 3. 2. su forma. el número de valvas. las branquias.

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