RFLP Method

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Método RFLP - Fragmentos de Restricción Polimórficos
RFLP (a menudo pronunciado "rif" de labios, como si se tratara de una palabra) es un método usado por los biólogos moleculares que seguir una secuencia particular de ADN, que se transmite a otras células. RFLPs se puede utilizar en muchos entornos diferentes para lograr diferentes objetivos. RFLP se pueden utilizar en los casos de paternidad o casos penales para determinar el origen de una muestra de ADN. RFLP se pueden utilizar determinar el estado de la enfermedad de un individuo. RFLP se pueden utilizar para medir las tasas de recombinación que puede llevar a un mapa genético con la distancia entre los loci RFLP mide en cM. En esta página web, usted puede ver cómo se producen los RFLP y, a continuación tres ejemplos de la aplicación del análisis de RFLP: paternidad, estado de la enfermedad, Y mapeo genético.

RFLP Producción Cada organismo hereda su ADN de sus padres. Dado que el ADN se replica en cada generación, cualquier secuencia dada pueden pasar a la siguiente generación. Un RFLP es una secuencia de ADN que tiene un sitio de restricción en cada extremo con una "objetivo"Secuencia en el medio. Una secuencia de la blanco es cualquier segmento de ADN que se unen a una sonda mediante la formación de pares complementarios base. Una sonda es una secuencia de ADN de cadena sencilla que se ha etiquetado con radiactividad o una enzima de tal forma que la sonda puede ser detectado. Cuando una sonda de pares de bases a su objetivo, el investigador puede detectar esta unión y saber dónde está la secuencia diana desde la sonda sea detectable. RFLP produce una serie de bandas cuando un Southern blot se realiza con una combinación particular de enzima de restricción y la secuencia de la sonda. Por ejemplo, vamos a seguir un particular RFLP que se define por la enzima de restricción EcoR I y la secuencia diana de 20 bases GCATGCATGCATGCATGCAT. EcoR I se une a su reconocimiento seuqence GAATTC y corta el ADN de doble cadena, como se muestra:

En el segement de ADN se muestra a continuación, puede ver los elementos de un RFLP; una secuencia diana flanqueado por un par de sitios de restricción. Cuando este segmento de ADN es cortada por EcoR I, tres fragmentos de restricción se producen, pero sólo uno contiene la secuencia diana que puede ser obligado por la secuencia de la sonda complementaria (púrpura).

Echemos un vistazo a dos personas y los segmentos de ADN que llevan a que contienen este RFLP (para mayor claridad, sólo veremos una de las dos bases de ADN). Desde que Jack y Jill son organismos diploides, tienen dos copias de este RFLP. Cuando examinamos una copia de Jack y una copia de Jill, vemos que son idénticas:

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html

18/05/2010

(1.(1.bio. se extrajo el ADN de las células blancas de la sangre de los tres individuos y sometidos a análisis de RFLP. parece ser que Jack podría ser el padre. Jack 2 carece de un sitio de restricción EcoR I que Juana tiene 1.3 kb)-GAATTC- Por lo tanto.(4.2 kb) --.2 kb) --.html 18/05/2010 .2 kb) ---GCATGCATGCATGCATGCAT--.edu/courses/genomics/method/RFLP. ya que heredó el fragmento Payle 12.(8.GAATTC- Cuando examinamos sus propios ejemplares de esta segunda RFLP. vemos que no son idénticos.3 kb)-GAATTCJill 2:-GAATTC .(4.(8. Los resultados se muestran a continuación: En este caso. es posible que otro hombre de similar patrón RFLP podría ser tan well.RFLP Method Página 2 de 6 Jack 1:-GAATTC --.davidson. Sería muy poco probable que dos hombres (excepto los gemelos idénticos) compartiría con varios patrones de RFLP y así se pudo confirmar la paternidad.2 kb) -GCATGCATGCATGCATGCAT.8 kb) -CCCTTT.4 kb de Jill y el fragmento de 4. En este escenario.(1. cuando Jack y Jill tienen su objeto de ADN para el análisis de RFLP. varios más loci RFLP se pongan a prueba. En un escenario diferente.3 Jack. Los resultados se muestran a continuación: http://www.GAATTCJill 1:-GAATTC --. tendrán una banda en común y una banda que no coincide con el de otros en el peso molecular: Caso de paternidad Usemos la tecnología RFLP para determinar si Carlos es el padre del hijo de Jill llamado Payle.8 kb) -GAATTC.2 kb) -GCATGCATGCATGCATGCAT.(1.2 kb) ---GCATGCATGCATGCATGCAT--. Jack 2:-GAATTC . Sin embargo.To estar seguro. se extrajo el ADN de las células blancas de la sangre de los tres individuos y sometidos a análisis de RFLP.(1.2 kb corriente arriba de la secuencia diana (diferencia en cursiva).(1.

cuántos. ¿Qué podrías hacer como investigador a ser más seguro de que Jack no era el padre de Payle? Situación sanitaria En este ejemplo. Sin embargo. RFLPs son conocidos por CF y por lo que sería fácil determinar si una persona en homocigosis de tipo salvaje (peso).html 18/05/2010 . a menudo podemos determinar quién en esta familia es portadora. Para parejas que están esperando un niño. sería fácil de probar tanto los padres y hacer una predicción sobre el estado de la enfermedad final de su feto. a menudo un análisis de RFLP se lleva a cabo sobre el ADN de la pareja.edu/courses/genomics/method/RFLP. Por lo tanto. aunque es posible que Payle lleva a una nueva mutación en este locus y una banda de distinto tamaño se haya producido. Por ejemplo.RFLP Method Página 3 de 6 Esta vez. si ambos padres eran homocigotos peso. es muy probable que el padre de Payle no es Jack. queremos saber si una persona lleva toda la fibrosis quística (FQ) alelos y si es así.bio.davidson. Debido a que la FQ es una enfermedad recesiva. anyonne padece esta enfermedad debe ser homocigóticos para alelos de enfermedad. se puede determinar que Jack no es el padre de Payle desde Payle tiene una banda de alrededor de 6 kb y Jack no lo hace. Heterocigotos "porteador". si una pareja llega a un asesor en genética. o alelos homocigóticos la enfermedad y por lo tanto tienen esta enfermedad. De la información de pedigrí. Entonces todos sus hijos también serían homocigóticos peso: http://www.

pero con el análisis RFLP. Con el aumento de información de la secuencia genómica.html 18/05/2010 . Veamos un ejemplo sencillo en moscas de la fruta.davidson. esto se realizó mediante la observación de los fenotipos. es posible medir la distancia genética entre dos loci RFLP si son una parte de los genes o no. Dos loci RFLP con dos bandas RFLP posible en cada lugar: http://www.bio. si ambos padres son heterocigotos. necesita ser capaz de observar la recombinación. Mapeo genético Para calcular la distancia genética entre dos loci. Tradicionalmente. aunque los niños heterocigotos sería el doble de probabilidades de que cualquiera de los genotipos homocigóticos. que podrían tener los niños con cualquiera de los tres genotipos. un creciente número de enfermedades genéticas se puede predecir a partir de análisis RFLP.edu/courses/genomics/method/RFLP.RFLP Method Página 4 de 6 Sin embargo.

La hembra es heterocigoto en ambos loci. Sus patrones de bandas RFLP se puede ver en el Southern blot a continuación: El macho sólo puede producir un tipo de gametos (1 y 2). 1 y 2 de la izquierda o cromosoma 3 y 4 del cromosoma derecha. la frecuencia de la progenie cuatro posibles pueden ser medidos y de esta información.RFLP Method Página 5 de 6 Estos loci se encuentran en el mismo cromosoma de la hembra (izquierda) y el macho (derecha).html 18/05/2010 . El macho es homocigota para la banda 1 en el locus de la parte superior y 2 para el lugar más bajo. http://www. la distancia genética entre los dos loci RFLP (superior e inferior) se puede determinar. Cuando estas dos moscas pareja. El lugar más bajos puede producir bandas. El locus superior puede producir dos diferentes bandas llamada 1 y 3. porque se ha producido la recombinación entre los dos loci y por lo tanto las bandas RFLP se mezclen de manera que 1 está ahora vinculada a 4 y 3 se vincula a 2. pero la hembra puede producir cuatro gametos diferentes.davidson. Los otros dos cromosomas son recombinantes.bio. 2 o 4. Dos de los cuatro posibles se llaman los padres porque llevan dos bandas RFLP del mismo cromosoma.edu/courses/genomics/method/RFLP.

el 70% de la progenie se producen a partir de huevos genotipo parental y el 30% fueron producidas por los huevos genotipo recombinante.RFLP Method Página 6 de 6 En este ejemplo. Davidson.bio. preguntas y sugerencias a: macampbell@davidson.html 18/05/2010 .davidson. Davidson College. estos dos loci RFLP de 30 cM alejados unos de otros. Carolina del Norte 28036 Envíe sus comentarios.edu/courses/genomics/method/RFLP. Por lo tanto. Web de la célula Front Page Genómica Esquema del curso y Plan de Estudios Calendario de Genómica Biología molecular del curso Biología Materiales del Curso Biología Página de inicio © Copyright 2001 Departamento de Biología.edu http://www.