RFLP Method

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Método RFLP - Fragmentos de Restricción Polimórficos
RFLP (a menudo pronunciado "rif" de labios, como si se tratara de una palabra) es un método usado por los biólogos moleculares que seguir una secuencia particular de ADN, que se transmite a otras células. RFLPs se puede utilizar en muchos entornos diferentes para lograr diferentes objetivos. RFLP se pueden utilizar en los casos de paternidad o casos penales para determinar el origen de una muestra de ADN. RFLP se pueden utilizar determinar el estado de la enfermedad de un individuo. RFLP se pueden utilizar para medir las tasas de recombinación que puede llevar a un mapa genético con la distancia entre los loci RFLP mide en cM. En esta página web, usted puede ver cómo se producen los RFLP y, a continuación tres ejemplos de la aplicación del análisis de RFLP: paternidad, estado de la enfermedad, Y mapeo genético.

RFLP Producción Cada organismo hereda su ADN de sus padres. Dado que el ADN se replica en cada generación, cualquier secuencia dada pueden pasar a la siguiente generación. Un RFLP es una secuencia de ADN que tiene un sitio de restricción en cada extremo con una "objetivo"Secuencia en el medio. Una secuencia de la blanco es cualquier segmento de ADN que se unen a una sonda mediante la formación de pares complementarios base. Una sonda es una secuencia de ADN de cadena sencilla que se ha etiquetado con radiactividad o una enzima de tal forma que la sonda puede ser detectado. Cuando una sonda de pares de bases a su objetivo, el investigador puede detectar esta unión y saber dónde está la secuencia diana desde la sonda sea detectable. RFLP produce una serie de bandas cuando un Southern blot se realiza con una combinación particular de enzima de restricción y la secuencia de la sonda. Por ejemplo, vamos a seguir un particular RFLP que se define por la enzima de restricción EcoR I y la secuencia diana de 20 bases GCATGCATGCATGCATGCAT. EcoR I se une a su reconocimiento seuqence GAATTC y corta el ADN de doble cadena, como se muestra:

En el segement de ADN se muestra a continuación, puede ver los elementos de un RFLP; una secuencia diana flanqueado por un par de sitios de restricción. Cuando este segmento de ADN es cortada por EcoR I, tres fragmentos de restricción se producen, pero sólo uno contiene la secuencia diana que puede ser obligado por la secuencia de la sonda complementaria (púrpura).

Echemos un vistazo a dos personas y los segmentos de ADN que llevan a que contienen este RFLP (para mayor claridad, sólo veremos una de las dos bases de ADN). Desde que Jack y Jill son organismos diploides, tienen dos copias de este RFLP. Cuando examinamos una copia de Jack y una copia de Jill, vemos que son idénticas:

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html

18/05/2010

GAATTC- Cuando examinamos sus propios ejemplares de esta segunda RFLP. Sin embargo.2 kb) --.3 kb)-GAATTC- Por lo tanto.To estar seguro.(1.(4.2 kb) --. ya que heredó el fragmento Payle 12.2 kb) ---GCATGCATGCATGCATGCAT--. Jack 2:-GAATTC .(8.RFLP Method Página 2 de 6 Jack 1:-GAATTC --.8 kb) -GAATTC. se extrajo el ADN de las células blancas de la sangre de los tres individuos y sometidos a análisis de RFLP.(1. es posible que otro hombre de similar patrón RFLP podría ser tan well. En este escenario.3 Jack.2 kb) -GCATGCATGCATGCATGCAT.3 kb)-GAATTCJill 2:-GAATTC .(1. Jack 2 carece de un sitio de restricción EcoR I que Juana tiene 1.html 18/05/2010 .4 kb de Jill y el fragmento de 4.2 kb) -GCATGCATGCATGCATGCAT. tendrán una banda en común y una banda que no coincide con el de otros en el peso molecular: Caso de paternidad Usemos la tecnología RFLP para determinar si Carlos es el padre del hijo de Jill llamado Payle.(1.8 kb) -CCCTTT.davidson. se extrajo el ADN de las células blancas de la sangre de los tres individuos y sometidos a análisis de RFLP.2 kb) ---GCATGCATGCATGCATGCAT--. Los resultados se muestran a continuación: http://www. cuando Jack y Jill tienen su objeto de ADN para el análisis de RFLP. parece ser que Jack podría ser el padre.(8. varios más loci RFLP se pongan a prueba.edu/courses/genomics/method/RFLP.GAATTCJill 1:-GAATTC --.(1.(1.2 kb corriente arriba de la secuencia diana (diferencia en cursiva).(4. Los resultados se muestran a continuación: En este caso. En un escenario diferente.bio. vemos que no son idénticos. Sería muy poco probable que dos hombres (excepto los gemelos idénticos) compartiría con varios patrones de RFLP y así se pudo confirmar la paternidad.

RFLP Method Página 3 de 6 Esta vez. aunque es posible que Payle lleva a una nueva mutación en este locus y una banda de distinto tamaño se haya producido. ¿Qué podrías hacer como investigador a ser más seguro de que Jack no era el padre de Payle? Situación sanitaria En este ejemplo. RFLPs son conocidos por CF y por lo que sería fácil determinar si una persona en homocigosis de tipo salvaje (peso).bio. queremos saber si una persona lleva toda la fibrosis quística (FQ) alelos y si es así. De la información de pedigrí. Entonces todos sus hijos también serían homocigóticos peso: http://www. Por ejemplo. sería fácil de probar tanto los padres y hacer una predicción sobre el estado de la enfermedad final de su feto. anyonne padece esta enfermedad debe ser homocigóticos para alelos de enfermedad. Heterocigotos "porteador". Sin embargo. si ambos padres eran homocigotos peso. es muy probable que el padre de Payle no es Jack. a menudo podemos determinar quién en esta familia es portadora.davidson.html 18/05/2010 . se puede determinar que Jack no es el padre de Payle desde Payle tiene una banda de alrededor de 6 kb y Jack no lo hace. Por lo tanto. si una pareja llega a un asesor en genética.edu/courses/genomics/method/RFLP. cuántos. a menudo un análisis de RFLP se lleva a cabo sobre el ADN de la pareja. Debido a que la FQ es una enfermedad recesiva. Para parejas que están esperando un niño. o alelos homocigóticos la enfermedad y por lo tanto tienen esta enfermedad.

un creciente número de enfermedades genéticas se puede predecir a partir de análisis RFLP.edu/courses/genomics/method/RFLP. Tradicionalmente. que podrían tener los niños con cualquiera de los tres genotipos. Con el aumento de información de la secuencia genómica.html 18/05/2010 . necesita ser capaz de observar la recombinación.davidson. Mapeo genético Para calcular la distancia genética entre dos loci. Dos loci RFLP con dos bandas RFLP posible en cada lugar: http://www. aunque los niños heterocigotos sería el doble de probabilidades de que cualquiera de los genotipos homocigóticos. si ambos padres son heterocigotos. pero con el análisis RFLP.bio. es posible medir la distancia genética entre dos loci RFLP si son una parte de los genes o no. esto se realizó mediante la observación de los fenotipos.RFLP Method Página 4 de 6 Sin embargo. Veamos un ejemplo sencillo en moscas de la fruta.

RFLP Method Página 5 de 6 Estos loci se encuentran en el mismo cromosoma de la hembra (izquierda) y el macho (derecha).html 18/05/2010 . porque se ha producido la recombinación entre los dos loci y por lo tanto las bandas RFLP se mezclen de manera que 1 está ahora vinculada a 4 y 3 se vincula a 2. Cuando estas dos moscas pareja. http://www. Dos de los cuatro posibles se llaman los padres porque llevan dos bandas RFLP del mismo cromosoma. Los otros dos cromosomas son recombinantes. La hembra es heterocigoto en ambos loci. pero la hembra puede producir cuatro gametos diferentes. 2 o 4. 1 y 2 de la izquierda o cromosoma 3 y 4 del cromosoma derecha. la distancia genética entre los dos loci RFLP (superior e inferior) se puede determinar.davidson. El locus superior puede producir dos diferentes bandas llamada 1 y 3. El lugar más bajos puede producir bandas.bio.edu/courses/genomics/method/RFLP. la frecuencia de la progenie cuatro posibles pueden ser medidos y de esta información. El macho es homocigota para la banda 1 en el locus de la parte superior y 2 para el lugar más bajo. Sus patrones de bandas RFLP se puede ver en el Southern blot a continuación: El macho sólo puede producir un tipo de gametos (1 y 2).

RFLP Method Página 6 de 6 En este ejemplo. Davidson.bio.edu/courses/genomics/method/RFLP.edu http://www. Davidson College. Por lo tanto. Carolina del Norte 28036 Envíe sus comentarios. estos dos loci RFLP de 30 cM alejados unos de otros. el 70% de la progenie se producen a partir de huevos genotipo parental y el 30% fueron producidas por los huevos genotipo recombinante. preguntas y sugerencias a: macampbell@davidson. Web de la célula Front Page Genómica Esquema del curso y Plan de Estudios Calendario de Genómica Biología molecular del curso Biología Materiales del Curso Biología Página de inicio © Copyright 2001 Departamento de Biología.davidson.html 18/05/2010 .

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