CROMATOGRAFIA

Separacomponentes de una mezcla, identifica un compuesto

comparando su comportamiento con el de sustancias conocidas.

Fase móvil o eluyente:

Formada por la solución que atraviesa la fase estacionaria; es la
muestra que esta siendo analizada y el disolvente que se mueven
en el interior de una columna, interactúa con la fase estacionaria y
se separa.

Fase estacionaria o adsorbente:

Constituido por un sólido poroso que queda soportado en el
interior de la columna. Esta separa los componentes y en dado
caso los retiene.
 CROMATOGRAFIA DE COLUMNA

 Las moléculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad

de las moléculas por la fase estacionaria o por la fase móvil.

 Utiliza una columna de vidrio vertical llena con soporte adsorbente

(sílice, alumina u oxido de magnesio) a través de la cual la fase
móvil se fuerza a pasar por presión.

 Las sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro

de la banda total. La separación y resolución aumenta con la
longitud de la columna.


Nota: La cromatografía de liquido puede llevarse a
cabo en columnas o en superficies planas, pero la
cromatografía de gases y fluidos supercríticos están
restringidas a las columnas.
 CROMATOGRAFIA DE ELUCION EN
COLUMNA
 Constituida por un tubo angosto relleno con un sólido inerte;
mantiene la fase estacionaria en su superficie.

 Implica la purificación de una especie por lavado en una columna

mediante la adición continua de la fase móvil.

 La fase móvil contiene la muestra y el eluyente la cual se

introduce en la parte superior de la columna como un tapón
angosto.

 Los componentes de la fase móvil se distribuyen entre la fase

móvil y la estacionaria, la fase móvil ocupa los espacios abiertos
entre partículas del materia de empaque
Orden aproximado de elución de compuestos y de
polaridad
DE EXCLUSION O FILTRACION EN GEL
 Las moléculas son separadas por su tamaño.

 El gel consiste en una cama de esferas con poros de un

tamaño dado (por ejemplo sefadex).

 Moléculas de igual o menor tamaño que el poro entran a las

esferas, mientras que las mas grandes pasan por la columna.

 El tiempo de residencia depende del tamaño y salen de la

columna por tamaño.
INTERCAMBIO IONICO

 Separa moléculas en base a su carga iónica.

 La fase estacionaria presenta una matriz con carga (matriz de

la columna: Sustancia que está empapada de solvente y que se
empaqueta en la columna. También se denomina el lecho de la
columna).

 Al eluir una muestra, las moléculas de igual carga salen con el

amortiguador. Las moléculas de carga opuesta se adhieren al
material de empaque con distintos grados de afinidad.


 Para desprender la muestra adherida se usa una solución alta
en cloruro de potasio o de sodio se puede recolectar las
muestras desde las que menos afinidad por la columna tiene
hasta las de mayor afinidad.

 El tipo de empaque dependerá de qué queremos aislar.

 El pH es importante porque puede alterar la carga de la

columna.
 FASE INVERSA
 Cromatografía de interacción en la que la fase estacionaria, con
moléculas hidrofóbicas, interactúa con moléculas hidrofóbicas en
la muestra

 La matriz consiste de fibras de silicato con cadenas de

hidrocarburos. Estas atraerán a las moléculas hidrofóbicas de la
muestra mientras que las hidrofílicas salen con el amortiguador.

 Las moléculas son eluídas de la columna lavando con soluciones

de distinta concentración de alcohol o cualquier otro solvente no
polar.
 CROMATOGRAFIA DE GASES

 Componentes de una mezcla se separar como consecuencia de

que se reparten entre una fase gaseosa y una estacionaria
contenida en la columna.

 La muestra se vaporiza y se inyecta en la cabeza de una

columna cromatografica.

 La elucion se lleva a cabo mediante el flujo de una fase móvil

de gas inerte; la fase móvil no interactúa con el analito solo lo
transporta a través de la columna.