c
 


  

c c
  c



 

 

 


Las técnicas son de dos tipos:

x Ópticas
x Electroanaliticas.

Ópticas: absorción, fluorescencia molecular, IR, absorción y emisión atómica,

quimioluminiscentes.

El instrumento, cualquiera sea la técnica , consta generalmente de cinco

componentes:

x Fuente de energía radiante (FER)

x Selector de banda (SB)
x Cubeta (donde se coloca la muestra)
x Detector (registra la señal)
x Registrador

£
 

  



  


Para cualquier técnica la FER debe generar una radiación que sea lo
suficientemente potente para ser detectada y medible fácilmente. Además esa
FER debe ser estable y la potencia Po , potencia incidente, debe ser constante
durante un determinado tiempo. Es decir , durante el tiempo de duración del
análisis. Generalmente las FER están conectadas a una fuente reguladora de
potencia. Dentro de las FER hay de dos clases:
x Continuas
x De línea

Las FER continuas son aquellas que emiten radiación en forma continua en un
todas las longitudes de onda de la región espectral. Es decir son aquellas que
presentan un espectro de emisión que es una banda que va generalmente
desde la zona del UV (aproximadamente 190 - 350 nm) hasta 800nm (visible). A
mayor longitud de onda esta el IR.
La emisión debe ser en un amplio rango de longitudes de onda. Suele n usarse
en técnicas que involucran moléculas como absorción, fluorescencia y
fosforescencia molecular.



  



 
En esta región el equipo viene con lámparas de Hidrogeno, de Deuterio, estas
emiten radiación en la región del UV.

£
 

   
Constan de un tubo de vidrio al vacío que en su interior tiene H 2 o D2 a baja
presión que cuando se produce una descarga eléctrica los electrones de esa


c
 
 
  

descarga colisionan con las moléculas del gas y provocan la excitación hacia
niveles energéticos superiores de los electrones del gas. Cuando esos
electrones vuelven a su estado fundamental lo hacen emitiendo radiación
continua en la zona del UV. Tiene n espectro continuo en la zona del UV

Dentro de la zona del UV hay también lámparas de argon (Ar) , lámparas de

xenón (Xe), lámparas de mercurio a alta y a baja presión. Estas también se
usan en el UV pero son mas intensas que las anteriores.
Particularmente la de Xe se utiliza en fluorescencia molecular.

En la zona del visible se usa generalmente la lámpara de filamento de

tungsteno o wolframio, este tipo de lámparas son como las que de los faros de
auto. Es un tubo de vidrio al vacío con un filamento de tungsteno (wolframio)
adentro. Cuando se hace una descarga eléctrica circula corriente que genera
un calentamiento en el filamento de tu ngsteno y ese calentamiento provoca una
emisión de radiación en la zona del visible en la zona del IR cercano. Alcanzan
temperaturas de 3700K
Hoy en día estas lámparas tienen en su interior una cierta cantidad de algún
halógeno, generalmente I2 gaseoso, con el objeto de aumentar la vida útil de la
lámparas, dado que las descargas pueden fundir o gastar el filamento . Esta
aumenta porque el I 2 al ponerse en contacto con el tungsteno en estado
gaseoso se une a este (I2W), y lo vuelve a unir al resto del filamento, por eso
duran muchísimo más.

Eso además hace que el máximo de emisión se desplace hacia la zona del
visible .

El IR se divide en tres regiones: cercano, medio y lejano.

x En el cercano se puede usar la lámpara de Tg (Tungsteno)
x En el medio y en el lejano las lámparas son de sólidos inertes que se
calientan a temperaturas entre 1500 y 2000 K.

0 

 

Las FER de línea se caracterizan porque emiten un número limitado de bandas
muy estrechas de radiación y cada una de esas bandas de radiación abarca un
intervalo muy pequeño de longitudes de onda. Se dice que emiten líneas, un
rango muy chiquito de longitudes de onda. En los gráficos se ven líneas
(bandas muy estrechas). Este tipo de fuente se utiliza en las técnicas que
involucran átomos (absorción atómica, en emisión atómica no se usa FER)
Y
La mas usada es la lámpara de cátodo hueco, otra es la lámpara de descarga
sin electrodos.

c 
Hay un tercer tipo de fuente, ni continúa ni de líneas, que es el láser. El láser es
una fuente de energía radiante muy intensa, que emite radiación en un ancho
de banda muy estrecho pero en forma continua. Son fuentes que presentan
una elevada resolución y suelen usarse mucho en la técnica Raman, absorción
molecular e IR


c
 
 
  

£
 !

 
 
—edio activo, componente principal de la fuente, puede ser de un cristal sólido
(generalmente rubí), un semiconductor (generalmente arseniato de galio),
colorantes orgánicos o esta formado de un gas, general mente argon.
El tubo es bombardeado por una fuente externa que excita a los electrones
hacia niveles superiores, cuando vuelven hacia el estado fundamenta l emiten
energía. Los espejos reflejan la radiación emitida , generando cascadas de
electrones y esto hace que la intensidad de la radiación emitida sea mayor. El
haz que emerge de esa fuente es una radiación muy potente.
Cualquier tipo de las fuentes antes vistas forman parte del primer dispositivo de
un instrumento , según la técnica se usan diferentes lámparas.

 "

Dentro de los SB tenemos los filtros y los monocromadores

x Filtros: de absorción y de interferencia

x —onocromadores: los de redes y los de prismas


!
#: aislar un rango de longitudes de onda lo mas estrecho
posible, es decir que esa radiación que emerge (Po) tiene que ser lo mas
monocromática posible para que solamente emita un rango muy chiquito de
longitud de onda (ley de Lambert-Beer, el rango es Ȝ + ǻȜ). La luz salida de la
FER es policromática, se la hace lo menos ancha posible.
Los instrumentos mas sencillos usan filtros

c
$"
  esta relacionado con la resolución (por ejemplo
50nm es mucho). Hoy en día algunos instrumentos tienen un ancho de banda
de 0,1 nm . Los filtros por lo general tienen anchos de banda relativamente
grandes, sobre todo los filtros de absorción. El ancho de banda efectivo da una
idea sobre la calidad del SB.

Hay dos clases de SB: filtros y monocromadores


£
 !
  " !

Son dos vidrios coloreados que tienen la finalidad de absorber la radiación y un
vidrio central, en un soporte plástico. La radiación que no fue seleccionada es
transmitida generando el ancho de banda seleccionado, generalmente se usa
en la región del visible. El ancho de banda de estos filtr os va de 20 a 250 nm

 
  
%    ): se usan tanto en la región del UV como
en la región del visible, en algunos casos en la región del IR y proporcionan
anchos de banda más estrechos que los anteriores. Tienen la característica de
generar un ancho de banda efectivo en función de la interferencia óptica.
Generalmente como material dieléctrico F2Ca o F2—g

Una radiación incidente coincide con la radiación siguiente que incide en el

material dieléctrico, se suman, se ponen en fase y así sucesivamente de tal
manera que la emergente es estrecha y muy intensa. Interferencia óptica
constructiva. Las restantes radiaciones pasan, se pierden. Hoy en día son los
más usados.


c
 
 
  


   se tienen los de redes y los de prisma. Tienen diferentes
resoluciones
Los instrumentos que tiene monocromadores permiten hacer un barrido
espectral, por lo tanto se puede hacer un curva espectrometrica.

£
 !

  
Constan de una rendija de entrada por donde penetra un haz de radiación
policromatica, es la encargada de selecciona r. Además tiene dos espejos o
lentes colimadores que tienen la función de generar, producir, un haz de
radiación paralelo, tiene además un sistema dispersivo que puede ser una red
de reflexión o un prisma que tiene la función e dispersar a la radiación en sus
longitudes de onda individuales. Hoy en dia la mayoría usan redes de
difracción, los prismas son mas caros. Tiene tambien una venta na o rendija de
salida que selecciona o aisla el ancho de banda deseado.

 &


El haz incide en el espejo colimador, que genera haces paralelos que inciden
en el sistema dispersivo (por ejemplo una red de reflexión. El Angulo de
incidencia es distinto al Angulo inicial) cuando la radiación incide en la red se
produce un fenómeno de difracción (fenómeno que genera la dispersión de la
radiación) y esa radiación va contra el segundo espejo y sale por la rendija de
salida, siendo lo mas estrecha posible. La cantidad de dientes de la red varia la
aliad, van desde 300 a 2500 dientes.

' 
En los instrumentos que tiene prisma también hay una rendija de entrada, una
lente colimadora , pero el fenómeno de dispersión ocurre por un proceso de
refracción (desvío de la dirección). Luego pasa por una lente focalizadora
(movil) hacia la ventana de salida. Hoy en día los instrumentos tienen redes. El
material del prisma varia según el uso, l os prismas de cuarzo se usan en el UV
y de vidrio se usan en el visible, lo cual constituye una limitación.

£"
Hay de muchos tipos y formas, según la región de trabajo (redondas,
cuadradas, de flujo, etc.)
En el UV generalmente las cubetas son de cuarzo o sílice fundido, en la región
del visible pueden ser de vidrio o plástico.
En el IR son de un vidrio especial o cubetas que tienen una ventana de NaCl
cristalino. Se seleccionan según región. Las cubetas no deben tener
imperfecciones y deben estar limpias.

( 
Dispositivos que tienen la función de detectar la energía radiante que les llegue
y traducirla en una señal que sea fácilmente medible, esta señal generalmente
es eléctrica. Deben tener ciertas características: deben ser estables e un
amplio intervalo de longitudes de onda, una elev ada sensibilidad en la región
de trabajo, además deben presentar una elevada relación señal-ruido
(R=señal/ruido). La señal eléctrica que se genera en el detector debe ser


c
 
 
  

proporcional a la potencia de radiación que llega al detector. Tienen que dar

una respuesta rápida.
Dentro de los detectores hay dos grupos
x Fotoeléctricos: de tipo A y B
x Térmicos

) 
Son los que se utilizan en el UV , en el visible y en el IR cercano
)  se respuesta se basa en el poder calorífico que brinda la radiación
(esto se vera mas adelante),se utilizan generalmente en la zona del IR.

Dentro de los fotoeléctricos se tienen dos tipos, en general los fotoeléctricos, el

A y el B se basan en que tiene una superficie que tiene la capacidad de
absorber la radiación electromagnetica, esta absorción genera la emisión de e-
y entonces da lugar a una fotocorriente
En el primer grupo, llamado A la absorción de energía radiante provoca la
emisión de electrones y genera una fotocorriente desd e la banda de
conducción hasta la banda de valencia y eso también genera una fotocorriente.
* c+    
x Celda fotovoltaicas
x Fototubos de vacío
x Tubos fotomultiplicadores
* #
x Fotodiodos
x Fotodiodos dispuestos linealmente

£  generalmente se utilizan en instrumentos muy sencillo s

que se usan para mediciones directas (de campo), en la región del visible y
esta formado por un tubo de vidrio que en su interior tiene un electrodo de Cu,
sobre la superficie de ese electrodo se deposita un material semiconductor,
generalmente selenio, y a su vez se lo recubre con un baño de Ag o Au.
Cuando incide la radiación que proviene de la fuente de energía radiante, se
produce una promoción, una excitación de los electrones del material
semiconductor, se genera una corriente de e-, esta corriente es recolectada por
el electrodo y es la que se mide, es proporcional a la cantidad de radiación que
incidió.

" de los equipos más viejos. Ver fotocopia. Es un tubo de

vidrio al que se le ha hecho vacío y que en su interior tiene un cátodo
semicilíndrico y un alambre que actúa como ánodo, ese cátodo esta recubierto
por un material fotosensible que cuando llega la radiación se genera una
emisión de electrones que se dirigen al catodo generando una foto corriente y
esa fotocorriente es proporcional a la radiación incidente.
Esa fotocorriente es muy débil, estos instrumentos necesitan tener un
amplificador.

"   también se los llama P—T. Están formados por un
tubo de vidrio al vacío que contiene un cátodo recubierto con un material
fotosensible y un ánodo. La diferencia con el tubo al vacío es que entre el
ánodo y el cátodo hay un conjunto de 9 o 10 plaquitas recubiertas por un


c
 
 
  

material fotosensible que se denominan dinodos que tienen la función de emitir

o amplificar la emisión de electrones. Esos dinodos están colocados de manera
tal que uno presenta potenciales men os negativos que el que precede, lo cual
intensifica la señal haciendo innecesario el uso de amplificadores.

* #
Los otros dos tipos de detectores se basan en que cuando absorben la
radiación electromagnética provocan la promoción de electrones de la capa de
conducción a la banda de valencia, generando huecos positivos y e - que dan
lugar a una fotocorriente.

 están formados por unos dispositivos que esta recubierto por un
material semiconductor. Este dispositivo esta colocado sobre una placa de
vidrio o de cuarzo y todo el conjunto esta dentro de un recipiente al vacío.
Generalmente como el material semiconductor se suele utilizar silicio o
germanio , cualquiera de los dos tienen cuatro electrones en la capa de
valencia , quiere decir que cuando se van a fabricar el detec tor , el fotodiodo,
colocan ese material semiconductor y a su vez le agregan como impurezas en
algunos casos Galio y en otros casos Arsénico, con el objeto de aumentar la
capacidad conductora del material. Cuando se le agrega (dopaje) As , estamos
frente a un semiconductor tipo n, cuando se le agrega Galio es de tipo p.

Este tipo de material semiconductor tiene la característica de que cuando incide

radiación electromagnética provoca la promoción de estos electrones que
adquieren la energía suficiente como para romper el enlace que los mantiene
en una estructura rígida y pasan a la banda de conducción, se generan huecos
positivos y negativos por aumento de temperatura. La respuesta es muy rápida
,más que los anteriores (nanosegundos). En algunos casos se requiere
amplificador.




 consiste en una serie de fotodiodos tipo
n-p (200- 250 hasta 3000-3500 fotodiodos). Este tipo de detector se utiliza en
instrumentos que se llaman ³arreglo de diodos´. Con este tipo de detector se
puede hacer un barrido espectral muy rápidamente , en aproximada mente 0, 1
segundos de distintas longitudes de onda. Este tipo de instrumentos, por tener
este tipo de detector , no usan SB de tipo monocromadores, sino que tiene
espejos como sistema dispersivo. Es el único instrumento que la radicación
policromatica incide sobre la muestra.

 
Es uno dispositivo que decodifica la señal que llega y permite su lectura,
pueden ser analógicos, digitales, incorporados o no.

,
Existen diferentes tipos de instrumentos:

I-Simple haz
II-doble haz (b) en el esp acio
III doble haz temporal (c)


c
 
 
  

-.
Es el mas sencillo. La conformación esa una FER, SB, Cubeta, Detector,
Registrador. Se dice simple haz porque de la FER, llega a la muestra
solamente un haz de radiación.
Este tipo de instrumento se calibra con blanco (de reactivo o agua destilada) El
0%T es automático, luego se pone la cubeta y se lleva a 100%T.
No conviene usarlo para hacer barrido espectral porque no h ay forma de
compensar las fluctuaciones de la FER. Cuando se calibra habría que hacerlo
con el blanco para cada longitud de onda, es poco practico.
Son instrumentos sencillos, se usan para mediciones puntuales, no para hacer
curva espectrometricas

("-.
Se caracterizan en que cuando la radiación emergente del SB se divide en dos
haces, de tal manera que una parte de la radiación pasa a través de una
cubeta de referencia y la otra parte a la través de la muestra. Hay dos cubetas
(una de referencia do nde va el blanco y otra con la muestra)

Hay dos tipos

("$.
 la radiación se divide en dos y de manera
simultanea atraviesan la muestra y la cubeta de referencia , cada una llega a su
detector, cuyas señales convergen a un amplificador de l tal manera que se
compensan para formar una sola señal que llega al registrador.

("$.  a la salida de la FER hay una espejo rotatorio que hace
que la radiación pase a través de la cubeta de referencia y de la muestra
alternativamente, las señales van llegan a un único detector, se amplifica y
registra. La cuña óptica disminuye la potencia de la radiación que pasa través
de la cubeta de referencia para tener una intensidad semejante a la que
proviene de la muestra. Sino existiese la cuña, la radiación de la FER que pasa
por la cubeta no perdería potencia. En cambio si disminuye la potencia e la
muestra entonces la cuña achica la diferencia entre las intensidades de las
señales.


/
 
"$.
x Las posibles fluctuaciones generadas por el ruido del instrumento
pueden ser compensadas ya que existen dos haces. Estas fluctuaciones
se deben mayoritariamente a cambios de voltaje en la FER
x Permite hacer un barrido espectral

c 
Hay un tercer grupo de instrumentos llamados instrumento multicanal o arreglo
de diodos.

Son instrumentos que tienen una conformación óptica muy sencilla pero tienen
la característica de que pueden o permiten detectar en forma simultanea
lectura en toda la región del espectro.
Registra lecturas en todas las longitudes de onda, permitiendo obtener mucha
información rápidamente.


c
 
 
  

Esta formad por una FER seguida por la cubeta de la muestra, luego un SB fijo
y el detector que en este caso son diodos supuestos linealmente (muchos
diodos n-p soportados por un chip)
La radiación que incide sobre la muestra es policromatica, una vez que la
atraviesa el SB dispersa la radiación en sus diferentes longitudes de onda que
llegan a los diodos. Es tan rápido el proceso que la radiación policromatica no
alcanza a destruir la muestra (en caso de que la muestra sea plausible de ser
destruida por la radiación).

' 



x 0
 Y
 
Y
x 0 Y
 
Y
x



 Y

Son técnicas de emisión. Las primeras dos también se conocen como tecnicas
fotoluminiscentes. Son técnicas donde las moléculas son excitadas por la
acción de una fuente de energía radiante.
En la quimiluminicencia las moléculas son excitadas a través de una reacción
química.
En ambos casos la excitación genera la señal analitica.

Son tecnicas mas selectivas, ya que no todas las moleculas tiene propiedades
luminiscentes.





Al aplicar radiación se excita a las moléculas de tal forma que los electrones
saltan a estados de energía superiores
Cuando una molécula es excitada absorbe energía , que le permite a los
electrones absorber energía. Los electrones tratan siempre de deshacerse de
ese exceso de energía volviendo al estado fundamental. Esta energía en
exceso se puede perder en diferentes procesos:

x Radiantes: se pierden o absorben en forma de foton , hȞ. Es lo que se

mide

x No radiante: generalmente se da por pérdida, transferencia o disipación

de calor al medio

' 
 


/!
" 
 Este proceso que se debe a choques entre moléculas
excitadas y el solvente, ocurre entre estados vibracionales de un mismo nivel
electrónico.

£
 !


 es un proceso intramolecular, ocurre cuando dos niveles
electrónicos están muy próximos y generan un sola pamiento de los niveles
vibracionales, es decir, vibran juntos y se va perdiendo parte de esa energía
hasta llegar a un nivel menor de energía


c
 
 
  

' 0

: se debe a que la energía involucrada en el proceso de
conversión interna puede , en algunos casos, provocar una predisociación de la
molecular. Romper algún enlace y entonces el analito pasa a ser otro
compuesto.

(
 ocurre cuando la energía es muy alta y rompe los enlaces de la
molecula, con lo cual no tiene lugar el proce so de absorción.

Estos procesos ocurren muy rápido (de 10 -5 a 10-9 segundos)

La longitud de onda aplicada en estas tecnicas, que es la que produce la

absorción depende de los factores anteriores .
A longitud de onda bajas (UV) puede ocurrir que las molécu las sufran un
proceso de disociación molecular. Se rompen enla ces y esa molécula original
ya no es la misma.

 
 

En caso de producirse relajación vibracional y conversión interna, una vez que
todos los electrones están en el nivel vibracional mas bajo del nivel electrónico
excitado, vuelven a su estado fundamental emitiendo energía (fotones) .
A este proceso radiante se lo llama fluorescencia molecular. Se puede definir
fluorescencia molecular como la diferencia de energía desde el nivel vibracional
mas bajo del estado excitado hacia cualquier nivel vibracional del estado
fundamental.
La molecula se excita en el UV y emite en el visible, de la ecuación E:hȞ/Ȝ se
deduce que a menor longitud de onda mayor energia y viceversa. Entonces si
la molecula absorbe en el UV y emite en el visible, es porque hay per dida de
energia por estos procesos no radiantes.
La fluorescencia es un proceso también muy rápido (10 -6 a 10-10 segundos)

Una de las características de la fluorescencia molecular, desde el punto de

vista del proceso, es que la fluorescencia ocurre entre niveles electrónico s de
igual multiplicidad (singu lete, por el principio de Pauli , electrones con spines
apareados).

  
 

Existe otro proceso no radiante que se llama cruce entre sistemas

£ 
  este proceso no radiante suele darse cuando por algún
motivo (por ejemplo un solapamiento entre diferentes niveles vibracionales de
estados electrónicos excitados singulete -triplete) los electrones pasan de un
estado excitado , singulete, a un estado excitado, triplete, que se forma con
energía transitoria, inestab le, donde los electrones tienen los spines
desapareados, no siguen el principio de Pauli.
Pero aun en este estado triplete puede haber un exceso de energía que se
pierde por relajación vibracional de manera que los electrones queden en el
nivel vibracional mas bajo de ese estado triplete y de allí vuelvan al
fundamental emitiendo energía .


c
 
 
  

Este proceso se denomina fosforescencia y en general toma un poco mas de

tiempo que la fluorescencia (de 10 -4 a 10 segundos)

La principal diferencia con la fluorescencia es que la fosforescencia ocurre

entre niveles electrónicos de diferente multiplicidad (triplete)

£

 

Puede darse otro proceso no radiante que es el proceso de conversión externa.
Ese proceso involucra la transferencia de energ ía entre las moléculas que son
excitadas y las moléculas del solvente. Ese proceso provoca una disminución
en la intensidad de fluorescencia y se conoce con el nombre de QUENCHING
La disminución en la intesidad tambien puede deberse a la disociación y
predisociación.

Ambas técnicas requieren una longitud de onda de excitación y necesitan una

longitud de onda de emisión.
Es decir, se necesitan dos selectores de banda. . Las longitudes de onda tienen
la relacion Ȝexciatacion < Ȝemision , es decir, que la longitud de onda de emisió n sea
mayor que la de absorción.




R   ,a mayor longitud de onda menor ǻE
Teoricamente toda molecula que absorbe energia puede ser luminiscente, para
estimar o determinar esto existe un parametro ³rendimiento cuantico´ que esta
presente en ambas técnicas

ë


ë 

 ë 

 

 
 
 

Este parámetro nos da una idea cualitativa para poder interpretar como pueden
influir factores estructurales y el entorno químico en la intensidad de
fluorescencia o fosforescencia. Este parámetro relaciona las distintas
velocidades relativas de los distintos procesos radiantes y no radiantes.
x Kf= velocidad relativa de fluorescencia
x Krv: relajación vibracional
x Kces= cruce entre sistemas
x Kce=conversión externa
x Kci=conversión interna
x Kpd= pre disociación
x Kd= disociación

Una molecular tiene características de ser fluorescente si Kces es mínimo o

nula y Kci también, Kpd y Kd deben ser nulas. ĭf es un valor entre 0 y 1. Esta
en manuales, handbooks, etc.

Esta relacionada con medio y estructura. Kpd y Kd están relacionadas con la

estructura mientras que Ices y Kci dependen del medio (solvente, pH, etc.). Por
eso se puede estimar las fluorescencias (si son fuertes o no, cualitativamente)


c
 
 
  

x ĭf cercanos a 1 = mucha fluorescencia o fosforescencia

x ĭf cercanos a 0 = poca fluorescencia o fosforescencia.

La emisión siempre ocurre en la región del visible

0     
 





 


Uno de los factores fundamentales para que una molécu la sea fluor o
fosforescente es el tipo de transiciones que presenta. Generalmente las
molecular que presentan fluorescencia son moléculas que presentan
transiciones ʌĺʌ* y las que presentan fosforescencia son moléculas con
transiciones nĺʌ* .
Como a veces esto es impredecible (si tiene o no características de fosfo o
fluorescente) se hacen siempre determinadas consideraciones. Se sabe que
generalmente para las moléculas que tengan este tipo de transiciones se parte
de que la energía de excitación ocurre a longitudes de onda partir de 250nm
hasta aproximadamente 380nm. Es decir en la región del UV. A menores
longitudes de onda, en el UV lejano, la energía es tan alta q ue puede darse el
proceso de la disociación de la molécula, en este caso son moléculas que
tienen transferencia ıĺı*

Es importante conocer la estructura de las moléculas. Determinadas moléculas

como por ejemplo los hidrocarburos no aromáticos, con dobles enlaces, que
tiene trancisiones ʌĺʌ* , generalmente tienen características fluorescentes.
Los hidrocarburos aromáticos, por ejemplo el benceno, por si solo tiene
características fluorescentes.

1

La presencia de sustituyentes pueden variar la intensidad de fluorescencia,
fundamentalmente cuando los sustituyentes son halógenos. En los aromáticos
halogenados se produce conversión externa y eso disminuye la intensidad .
También hay moléculas que tiene grupos C=O o algún heteroatomo como N, S
donde predominan las transposiciones n ĺʌ* y esto hace que la molécula
tenga características fosforescentes.

.
Es importante la estructura en el sentido de la rigidez. Entre fluoreno y bifenilo,
por ejemplo, el grupo ±CH2- en el fluoreno le brinda mayor rigidez haciendo
que tenga mayor eficiencia que aquellas que no son rígidas (se mueven). Si se
mueven están favorecidos los choques entre moléculas y por lo tanto la
conversión interna, lo cual disminuye la intensidad.



,")
 
 

   . Debe ser óptima de tal manera que se eviten choques entre
moléculas y se vean favorecidas la conversión externa, ya que esto disminuye
la intensidad de fluorescencia


c
 
 
  


 debe ser el adecuado: si se usa un solvente muy viscoso las
colisiones disminuyen lo que puede favorecer la fluorescencia . También es
importante conocer la polaridad del solvente , esta puede provocar una re
orientación de las moléculas de l solvente alrededor de las moléculas que uno
quiera excitar y esto puede provocar elevación de la señal de flor o
fosforescencia

-: siempre es importante controlarlo. Hay especies que son fluorescentes a

cierto pH y a otro no.

231

Otro factor a tener en cuanta es la presencia de átomos pesados.
Se debe elegir el solvente adecuado para e vitar que estos átomos pesados
favorezca la conversión externa y disminuya la fluorescencia (por ejemplo
cuando se usa como solvente bromuro de isopropilo) .
Otro factor es la presencia de O 2 disuelto, en algunos casos la presencia de O 2
puede generar una oxidación de las moléculas y esto hace que cambie la
estructura de las moléculas y disminuya la intensidad de fluorescencia

Todas estas variables y la estructura molecular se deben conocer y tener en

cuenta al hacer una determinación cuantitativa.

  c£2   £ £c
2 £  4

22 £  

El fluorimetro es un instrumento sencillo, de simple haz. Tiene una FER , un
dispositivo (selector de banda), un lugar donde se pone la muestra (cubeta) y a
90º respecto de la radiación incidente tiene colocado otro selector de banda y
luego viene el detector

Hay dos selectores de banda porque se necesita una longitud de onda de

excitación y de emisión
La mayoría de los equipos que se utilizan en el laboratorio son fluorimetros , es
decir que tienen como selectores de banda filtros, o en algunos casos
monocromadores, pero uno fija las longitudes de onda con las que va a trabajar
(Ȝex y Ȝem)

Hay otros instrumentos que tienen monocromadores de red, se llaman

espectrofluorimetros y permiten hacer espectros (barridos de longitudes de
onda). Uno puede obtener con este instrumento Ȝex y Ȝem, es decir se hacen
dos curvas espectrometricas.

 
Siempre hay una FER que provoca la excitación de las moléculas. Las FER
que se utilizan en la técnica de fluorescencia y fosforescencia molecular son
fuentes continuas. Son aquellas que emiten en un amplio rango de longitudes
de onda, el espectro que se obtiene es una banda.


c
 
 
  

En las lámparas usadas en estas técnicas la potencia que emiten tiene que ser
de mayor intensidad que en absorción molecular.
Dentro de las FER mas comunes utilizadas están: lámparas de Xe, lámpara de
Hg a baja presión y la lámpara de Hg a alta presión. Cualquiera de las tres son
tubos de vidrio donde adentro hay gas a baja presion (salvo de la Hg a alta
presion) y tienen filamentos de los distintos componentes. Cuando se genera la
descarga electrica emiten radiación. La lampara de Hg a alta presion emite
lineas intensas de radiación en forma continua.

En los primeros fluorimetros se utilizaba la lámpara de Hg a baja presión, esta

tenia la característica que emitía a longitudes de onda definidas, si bien era
continúa tenia determinadas longitud de onda de a las que emitía con mayo
intensidad, esto hacia que esas lámparas fueran inestables. Hoy en día la
mayoría de los equipos tiene lámpara de Xe. Este es estable, por l o que el
espectro es mas continúo y mas uniforme. Hay algunas que combinan la de Xe
y la de alta presión. Los equipos mas caros usan láser como FER

 "

Los selectores de banda que puede tener los fluorimetr os son filtro de
interferencia, el espectrofluorimetro tiene monocromadores de red.

£"
Las cubetas son de cuarzo o de vidrio, pero la característica que tienen que
presentar es que todas las caras sean transparentes (a diferencia de las de
absorción molecular).Esto se debe a que lo que vamos a medir es un señal de
fluorescencia y esta se emite en toda dirección y sentido.

( 
Los detectores pueden ser de cualquiera de los vistos de tipo fotoelectrico,
P—T, diodos dispuestos linealmente, etc. El detector esta colocado a 90º
respecto de la radiación incidente porque solo se necesita la señal de
fluorescencia, no la relación P/Po. Colocando el detector en cualquier otro
ángulo se asegura que lo q ue llega al detector es solo la señal de fluorescencia
y no hay perdida por absorción. Se necesita otro selector de banda para que al
detector solo llegue la Ȝem.


 

   
 
En fosforescencia molecular el instrumento tiene muy pocas dif erencias.

La FER también es continua , generalmente lámpara de Xe. Con dos

diferencias
Que esa lámpara actúa en forma de flash, va irradiando la muestra en forma
alternada. Esto es porque la fosforescencia tarda un poco mas en ocurrir que la
fluorescencia. De tal manera que después de un determinado tiempo uno pude
medir la intensidad de fosforescencia

Como selectores de banda tienen exactamente los mismo y las cubetas

también son las mismas.
Los detectores también son los mismo s


c
 
 
  

Los equipos de fosforescencia vienen provisto de un dispositivo que permite

trabajar a temperaturas muy bajas (T de N 2 liquido, se aplica burbujeando ).
Esto es para evitar que en algunos casos la señal de fluorescencia sufra alguna
disminución o degradación.
La fosforescencia es muy sensible y selectiva.

YY YY  Y YY
Y  Y Y
  Y
 YYYYY YY Y  YY
Y  Y

 Y
  Y
Y
Y  Y YYYY  Y


  



 




  


Relación entre la señal de fluorescencia con respecto a la concentración.
Cualquiera de la tres técnicas son sensibles selectivas y permiten o tienen
limites de detección muy bajos , es decir que podemos determinar pequeñas
cantidades de muestras.
La intensidad de fluo rescencia es proporcional a la intensidad de radiación
incidente. Podemos plantear.

© 
Donde K es una constante que depende de la eficiencia cuantica de la
molecula.

Si recordamos la ley de Beer:

 m


 

c
©
©  © 
Si reemplazo y saco factor común Po y luego desarrollando la serie de Taylor:

 © 

Õ 

  

 ©
  

   

Si la A es menor que 0,05 (soluciones diluidas) los términos elevados al

cuadrado y al cubo y demás se hacen despreciables. Si eso ocurre podemos
decir que:

  

 ©   

La fluorescencia molécula r es mas sensible que la absorción molecular por lo

que se pueden medir valores muy chicos de señales dado que a bajas
concentraciones la relación es lineal. Esto o curre cuando trabajamos con
soluciones diluidas y permite hacer determinaciones cuantitativas.
Esta tecnica es mas sensible que la absorción molecular ya que se trabaja en
rangos de A muy chicos, lo que conduce a pendientes mas elevadas.

La fluorescencia molecular se aplica para compuestos organicos, inorgánicos

(en este caso se los debe quelar primero, solos no son luminiscentes),


c
 
 
  

muestras ambientales, etc. La fosforescencia tiene aplicaciones similares, pero

es mas seleciva aun que la fluorescencia.

'5 



 
67 / 

 
 
Seleccionar mediante una curva espectrometrica las longitudes de onda de
excitación y emisión y calibrado: el instrumento se calibra a 0 intensidad con el
blanco de reactivo y al 100 con el testigo de máxima concentración, la curva
queda entonces como Intensidad vs concentración.
37 '  !
1
1  
87 ' 
 
  
97 & !
 
 

. Ô
 
C = X tS x0 3 porque es una curva de calibr ado g.l = n-2 

5

% !
,7

Es una técnica muy selectiva, muy sensible y tiene la ventaja de que es una
técnica simple. Ocurre cuando una reacción química genera una especie, esa
especie esta excitada y cuando vuelve a su estado fundamental lo hace
emitiendo radiación. Esa radiación puede ser transmitida o transportada a otra
especie que luego emite radiación.
Se la define como emision de radiación electromagnética generada a traves de
una reaccion quimica, la emision ocurre en el visible y en el IR

Puede ser directa o indirecta

(  un precurso reacciona con un oxidante fuerte, el precurso genera un
producto transitorio excitado p ->p*, luego vuelve emitiendo hv


  otro camino, mas usado, es en forma indirecta. El precursor mas el
oxidante dan el producto el ectronico excitado, pero este no alcanza para emitir,
se lo ayuda agregando un fluoroforo que recibe la energia del producto
intermedio y cuando vuelve al fundamental emite fotones.



* 

 h  P 
P*
P* 
 P hR
Son dos caminos para legar a la emision, reacc ion en medio adecuado (con
oxidante fuerte y catalizador) o transferencia d energia
A +B reaccionan, me dan una especie excitada (los electrones de C* están en
un nivel excitado) cuando vuelven lo hacen emitiendo radiación
HȞ puede ser transferida a otra e specie (P) provocar la excitación y cuando
vuelve al estado inicial lo hace emitiendo.


 
Solo consiste en tener un recipiente donde .. Se produce la reacción y se mide
directamente la señal que emite. Se necesita un recipiente donde se coloca la
muestra y un detector (solo detectar emisión de radiación que se genera).
Generalmente es un P—T


c
 
 
  

Lo que hay que tener en cuenta es que la reacción ocurre muy rápidamente y
hay que medir en el momento que se logro la máxima intensidad de
quimioluminiscencia. Uno tiene que buscar el T—, porque cuando se va a hacer
una curva de calibrado, si se toma el tiempo incorrecto la intesidad es menor y
la curva ya no es tan buena. El tiempo es un parámetro muy importante (tiempo
donde se produce la máxima señal). Se d ebe realizar previamente un grafico
de señal función del tiempo, eso hace a la sensibilidad del metodo.

£

 
 
Se debe trabajar con soluciones testigos. Hay que controlar las variables
experimentales u operacionales . Hay determinado s componentes o reactivos
que tienen características luminiscentes (siempre se usan), tiene la
característica de provocar componentes luminiscentes. El que más se usa es
luminol (a) y luciferina , este en medio alcalino en presencia de O 2, tiene la
característica de formar un componente que es el 3 -aminoftlalato y emitir
radiación característica a 420-425 nm. Esta intensidad de radiación a esta
longitud de onda se ve modificada por la presencia de algunos metales , por
ejemplo Cu, Fe, V, Co, ya que disminuye n la intensidad de la señal. Uno puede
determinar pequeñas cantidades de metales con estas técnicas.
Para hacer la determinación cuantitativa , se preparan testigos con distintas
concentraciones se hace la curva de calibrado y se da un resultado como
intervalo de confianza,
Con cualquiera de las tres técnicas se pueden hacer determinación de
compuestos orgánicos, inorgánicos, en pequeñas cant idades ya que son muy
sensibles y selectivas


 !

Se basa en la absorción o emisión de energi radiante por parte de átomos.
Esos átomos generan absorción o emisión que da origen a espectros de
bandas estrechas, que son aproximadamente de 10 -5 a 10-2 nanómetros.
El Ȝ+ǻȜ es mucho mas chico que en emision o absorción molecular

Esto es porque se ven involucrados los niveles electrónicos (ni lo rotacionales

ni los vibracionales). Los espectros son más sencillos. El ensanchamiento que
se ve puede deberse a tres fenómenos o procesos
x Efecto de incertidumbre
x Efecto por presión
x Efecto ³ensanchamiento dopple r´


 " 

$

  esta relacionado con el
tiempo que tardan los electrones cuando pasan del estado fundamen tal al
estado excitado y volver al estado fundamental, en un tiempo muy limitado. Al
volver se provoca el ensanchamiento
  !
% 
 
.7 se debe a choques que se generan
entre las especies que absorben energía o emiten y los otros iones o atomos
presentes en el medio. Eso provoca una disipación o cambios en lo niveles


c
 
 
  

energéticos y como consecuencia trae que haya una dispersión con respecto a
la longitud de onda de absorción.
  ocurre cuando usamos como atomizador a la llama. Los
átomos de la especie en estudio por efecto térmico chocan debido al
movimiento en el interior de la llama da provocan el ensanchamiento en la
banda

 
  !


 
Se usan atomizadores, hay de dos tipos:

I l s c l i t i ci


t iz r s is l lctric

l

iscr t s  l ctr t r ic s

c. 

: Son aquellos donde la muestra se introduce en
forma de solución y se convierte en una niebla de gotitas muy chiquitas
mediante un nebulizador que luego es transportado por un gas hacia la zona
donde se produce la atomización. En cambio en los atomizadores discretos se
coloca en su interior un determinado volumen (cantidad de muestra) y allí se
produce la atomización de la especie.

 se puede utilizar tanto en emisión como en absorción atómica. Una

llama esta compuesta por una mezcla de un combustible y un comburente
(mezcla C/C).
Es importante conocer la temperatura a la cual toda la muestra entra en estado
atómico gaseoso.
Uno de los parámetros fundamentales es la temperatura
;

Zona de combustión primaria: es el cono interno es la zona donde recién
comienza a generarse y producirse las reacciones de combustión entre el
combustible y el oxidante. Son reacciones rápidas que no alcanzan a llegar al
equilibrio
En esta zona todavía no se alcanza la temperatura óptima
;
"!

  en esta zona las reacciones de combustión
están en equilibrio termodinámico, la temperatura deseada se logra y es
constante y homogénea, se logra la misma temperatura. Es la zona de trabajo

  .
 zona secundaria, es la externa. La más fría, es la zona que
esta en contacto con la atmósfera, difusa. Pueden ocurrir reacciones
secundarias, no conviene trabajar allí.

Para seleccionar la T optima se debe tener en cuenta que la mezcla C/C

genera un fondo de llamada

Otros factores de dependencia además de la mezcla C/C

x La velocidad con que fluyen los gases para tomar la llama
x De la relación molar C/ C
x Del diseño del quemador


c
 
 
  

x De la altura de la llama

También es importante la velocidad de ingreso de la muestra o de los testigos a

la llama

' .


 
   en solución, es aspirada a través de un capilar y
transportada a traves de un tubo plastico de diametro pequeños hacia el interior
del nebulizador. L a velocidad con que ingresa la muestra y los testigos debe
mantenerse siempre igual y debe ser reproducible (preparados de igual
manera). Una vez que llegan al nebulizador este transforma la soluci ón en finas
gotas (spray), de tamaño homogéneo muy chiquitas, de tal manera que antes
de que llegan a la llama, el propio nebulizador , a traves del spoiler, es el
encargado de desechar aquellas gotas que no son homogéneas , las de mayor
tamaño. Una vez que el spray homogeneo llega a la llama (optima) ocurren tres
procesos.

67  !


 ocurre cuando el aerosol llega a la llama, se
evapora el solvente y quedan las partículas de la sal. Depende del tamaño de
gotas, velocidad de ingreso, tiempo de contacto con la llama y tipo de solvente.
Si estas condiciones no son buenas, la muestra estaría contaminada

37.!
 las partículas sólidas pasan al estado de vapor y una vez
que ocurrió esta etapa ocurre la etapa final . Esta etapa depende de la
capacidad de volatilizacion de la muestra y de la temperatura.

87c.!
 la sal se disocia y se forman los átomos neutros al estado
gaseoso, quedando disponibles para absorber o emitir energia.

 puede usarse tanto en emision como en absorción atomica

Como atomizador la llama es mas económica, pero debe tenerse cuidado con
la temperatura de a llama, que sea optima y suficiente para lograr la
atomización completa de la muestra y además debe tenerse cuidado que
cuando se selecciona la mezcla C/C para trabajar el espectro de emisión de
esa muestra no interfiera en la señal del analito.

£'<

 

Este atomizador se utiliza en la técnica de emisión atómica, no en absorción

atomica
' un gas calentado y parcialmente ionizado que tiene la característica
de conducción la electricidad. Generalmente como plasma se utiliza Argon
c
 $ esta formada por un tubo de cuarzo, dentro d e otro, rodeados por
una bobina de inducció n que esta conectada a un generador de radio
frecuencia. Por el interior de esos tubos circula un gas inerte, generalmente
Argon
Cuando se genera una descarga eléctrica que proviene de la bobina de
inducción ese argon se ioniza, generando en el medio iones argon y una
corriente eléctrica de electrones que genera el plasma, logrando un aumento
de temperatura del gas que llega a alcanzar en el extremo superior de la


c
 
 
  

antorcha entre 9000 y 10000 grados Kelvin. Es ahí donde se logra la

atomización de la muestra. Es una llama muy luminosa pero sin combustión.
Una de las ventajas frente a la llama es que se logra mayor temperatura sin
que haya combustión. La temperatura se controla , se la mantiene estable y
constante, haciendo fluir Argon en forma tangencial (contr acorriente,
refigerando el tubo ). No hay espectro de fondo porque no hay combustión


 
  
El equipo tiene una entrada para el capilar donde se introduce la muestra, esta
llega al nebulizador, se forma el spray y de allí es introduci da por la parte
inferior de la antorcha de plasma hacia el cono superior que es donde se
producen los tres procesos ya vistos.
Condiciones operacionales
Una de las variables que uno debe contr olar es como generar ese plasma,
regular la generacion de la radiofrecuencia. Si es muy baja o no es la optima el
plasma que se genera es un plasma con forma de lagrima y hay perdida de
muestra, no llega toda la zona de combustión maxima
La forma adecuada del plasma es como lo indica el dibujo B donde esa
antorcha tiene como una inflexión de tal manera que no deja que se escapen
las gotitas. De esta manera llega mayor cantidad de muestra.


/£' 
 
x Temperatura: es muchísimo mayor , el tiempo de contacto entre la
muestra y la antorcha es menor, lo que optimiza los procesos de
evaporación, volatilizacion y atomizacion
x Los limites de detección son mucho mas bajos que si se utiliza la llama.
x Otra ventaja es que con el ICP como atomizador hay una elevada
densidad electrónica en el medio y esa densidad electrónica evita que
existan interferencias debido a especies que se ionizan fácilmente,
x Otra ventaja es que el efecto matriz o las interferencias generadas por el
efecto matriz es menor que utilizando la llama y eso se debe a que
estamos en un medio químicamente inerte que favorece el tiempo de
vida de los átomos neutros en estado gaseoso donde no hay
combustión.

Atomizadores discretos-> electrotérmicos-> horno de grafito

Se utiliza en absorción atómica.
Se les llama así porque se coloca determinado volumen o cantidad de muestra,
hasta que se logra la atomizacion completa.

-
   Se utiliza en absorción atomica, no en emisión.
Es un cilindro de grafito recubierto por un material piroelectrico. Esta abierto en
los dos extremos y tiene un orificio en la parte frontal por donde se introduce la
muestra. La longitud es aproximadamente de 5 cms y tiene n diámetro interno
de 3 a 8 mm.
Ese cilindro abierto permite que este conectado a un par de conectores
eléctricos y alrededor del tubo circula un gas inerte (Argon) que tiene la función
de desalojar vapores que pueden quedar en el interior del tubo. Dentro del
cilindro se encuentra una plataforma llamada ³plataforma de l´vov´ , también


c
 
 
  

recubierta del material piroelectr ico y sobre ella se deposita la muestra de tal
manera que queda toda concentrada sobre esa plataforma.

Como ese horno esta conectado a esos contactos eléctricos la muestra sufre
un proceso de atomización debido a un calentamiento provocado por
resistencias eléctricas (electrotérmico).
Dentro de ese horno ocurren los tres procesos ya vistos (evaporación del
solvente, volatilización o calcinación y atomización)
La evaporación del solvente ocurre a temperaturas alrededor de los 100ºC,
luego hay una etapa de calcinación que comprende entre 350 y 1500ºC. en la
ultima fase, la atomización, las temperaturas son mayores , de 1500 hasta
3000ºC, donde se logra la atomización completa de la muestra.
Este ciclo se va programando según el tipo de muestra que se tiene. Hoy en
día los equipos tardan entre 3 o 4 segundos en lograr la atomización completa.

/

x Trabajar con hornos de grafito tiene algunas ventajas en comparación
con la llama:
x Se puede trabajar con pequeñas cantidades de muestra (micro o nano
gramos o litros)
x Los limites de detección son mucho mas bajos que la llama
x La muestra no sufre ningún proceso de dilución en el horno, si se ponen
por ejemplo 5ȝgr entran al ciclo 5 ȝgr. Si se usa la llama la muestra debe
estar diluida, debe ser aspirada (se puede perder) luego llega a la
mezcla C/C donde también se puede perder.
Se debe controlar bien que tipo de reactivo se utiliza, si necesita agua, etc

(
/
x Es un método muy caro
x Si por algún motivo el ciclo no es completo (no se logra la atomización
completa) y dentro del horno quedan moléculas que pueden absorber la
radiación o pueden dispersarla, conduciendo a errores.

Las técnicas son absorción y emisión atómica.

!
!

Se basa en medir la emisión de energía radiante generada por parte de átomos
neutros en estado gaseoso. Luego de que fueron excitados térmicamente. La
técnica de emisión atómica es una técnica analítica cualitativa y cuantitativa
porque relaciona la emisión con la concentración. Cualitativa porque esos
átomos emiten a una longitud de onda característica, propia de cada elemento
y cuantitativa porque relaciona la emisión con la concentración.
En la técnica de emisión atómica no hay FER, la energía la proveen la llama y
el ICP (funciona como atomizador y como FER). La muestra se coloca en el
atomizador. Llega todo a la llama o al ICP. Luego tiene selectores de banda o
filtros de interferencia o monocromadores. La radiación llega al detector, que
generalmente son P—T y luego al registrador .
La variable más importante a controlar es la temperatura.


c
 
 
  

Generalmente la técnica de emisión se usa para detectar metales

monovalentes o bivalentes: Li, Na, K etc. Tanto en forma cuantitativa como
cualitativa, ya que la longitud de onda de emisión es característica de cada
elemento.
La técnica es cuantitativa porque la IE (intensidad de emisión)=kC, a
soluciones diluidas la relación es lineal, lo que permite preparar curvas de
calibrado.

El resultado se expresa bajo las condiciones usuales y la expresión V i Vii.

Las variables, en el caso de al presión del gas, se deben controlar.
Excepcionalmente en la práctica no se puede controlar la presión de gas
(porque es de línea). Así que no se hace curva de calibrado. Se aplica el
método del factor.
c" !
!

Se basa en medir la absorción de energía radiante por parte de los átomos
neutros en estado gaseoso luego de haber sido excitados por una fuente de
energía radiante. La característica es que la fuente es discontinua, entra
radiación en un número limitado de l ongitudes de onda características. La
lámpara que más se utiliza en absorción atómica es la lámpara de cátodo
hueco.

 $ tubo cilíndrico hueco con ventana de cuarzo o
vidrio, en su interior tiene Argon a baja presión y tiene como ánodo s un
alambre de Tungsteno y como cátodo tiene una lamina cilíndrica que esta
recubierta con la sal del elemento a determinar. Hoy en día hay lámparas
multielemento. Emite radiación característica del analito en estudio, es hace a
la técnica mas selectiva.

Otra lámpara que suele utilizarse es la lámpara de descarga sin electrodos.

Luego de la FER viene el Atomizador que en este caso es la llama o el horno
de grafito.
Dispositivo que actúa como selector de banda: filtros o monocromadores.
Detector: los mas comunes tiene P—T y luego el registrador.
También existen elementos simples y de doble haz.

º  

  

  
   
x Generación de hidruros
x Técnica de vapor frío.

*
 !
$  
Se usa cuando se quiere determinar pequeñas cantidades, trazas de Arsénico,
Selenio, Bismuto, antimonio, plomo y con la técnica de absorción atómica
propiamente dicha no se puede cuantificar.
Lo que se hace es tratar a la muestra con NaBH 4 en medio acido, de tal
manera que se forme un hidruro y ese hidruro tiene la característica de s er
volátil, puede ser arrastrado por un gas y llevado directamente hacia un
atomizador. En el atomizador se descompone el hidruro y se originan los
átomos neutros en estado gaseoso de ese elemento.
3BH4 - + 3H+ + 4H3 AsO 3 3 H3BO 3 + 9H 3As + 3H 2O 


c
 
 
  

La cuantificación se hace por testigos y curva de calibrado, como es usual.



/
El analito es arrastrado de la matriz y esto hace que disminuyan las posibles
interferencias por la matriz.

  
Se utiliza para determinar pequeñas cantidades de Hg en solución. El equipo
es semejante al anterior pero se mezcla la solución de mercurio con una
solución de cloruro estañoso Cl 2Sn en presencia de algún oxidante fuerte
(H2SO4 o HNO3). De esta manera esto se agita y el ion mercurio se convierte
en vapor metálico (vapor de Hg) y es arrastrado por un gas inerte hacia la
cubeta de absorción y de allí se mide directamente a la longitud de onda
característica del Hg que es 264nm

Se puede determinar cuantitativamente en ambos casos

Tanto en absorción como en emisión atómica puede haber dos tipos de

interferencia: espectrales y químicas.

  se dan cuando la absorción o emisión de una especie genera un

solapamiento de las bandas características, provocando dispersión de la señal
o disminuyendo la intensidad.

67 La mas común es aquella que se origina cuando el atomizador es Y

y
la mezcla C/C proporción aun espectro de fondo de absorción o emisión.
Solución: cambiar la mezcla C/C.

37 Otra que puede ocurrir es, sobre todo en el YY , que quede
algún metal (St,Ti) que a determinada temperatura forman óxidos con las
paredes de los hornos refractarios y esos óxidos emitan en la zona donde
emite el analito y que tamb ién enmascaren la señal a cuantificar. Este tipo de
interferencia se trata de eliminar aumentando la temperatura hasta que los
óxidos sean inestables y no interfieran en la medición.

87 Otra interferencia posible es que la atomización no sea completa y quede

moléculas que generan un espectro (por ejemplo el Ca 2+). Se soluciona
aumentando la temperatura.

97 Otra interferencia es que en la muestra haya dos sustancias que emitan o

absorban a longitudes de onda cerca, solapando las señale s

 .
En absorción o emision atómica es importante controlar la interferencia
provocada por la matriz del compuesto, es decir por los otros componentes
presentes. Este caso se presenta cuando debido a la presencia de compuestos
en la matriz interfieren con la muestra. Por ejemplo el Ca 2+ en leche, en la
leche hay otros componentes, se debe separa al Ca 2+ y atomizarlo todo, de
otra manera el resto de los constituyentes interfiere.


c
 
 
  

El Y
 es particularmente importante en el análisis de alimentos, ya
que son matrices complejas

Se soluciona trabajando con instrumentos que presentan determinadas

características.
Esta interferencia es mas frecuente en absorción atómica y puede corregirse
de dos formas:

) !


 


 : los equipos ya viene
equipados así (con una lámpara continua y otra de cátodo hueco). De tal
manera que ambas radiaciones pasan en forma alternada a través del
atomizador, así la radiación que proviene de la lámpara de cátodo hueco es
absorbida por los átomos neutros al estado gaseoso y por las moléculas que
generan ese efecto matriz mientras que la radiación que provino de la lámpara
continua es absorbida por las moléculas de tal manea que al detector llega
solamente la compensación de ambas señales y esa es la señal que se registra
YYYYYYYYYYYYYYYYYY

Õ   



Y 
 YY YY Y  Y 

 

 


£ !
  ;

Otra forma de corregir, evitar o disminuir el efecto matriz es a través de la
corrección por efecto Zeeman. En este caso también hay una compensación de
señales de tal manera que al detector solo llega la señal correspondiente al
analito.
Este instrumento es un horno de grafito rodeado por un electroimán que
desdobla los niveles energéticos correspondientes a los átomos libres neutros
al estado gaseoso, de tal forma que c uando llega la radiación de la LCH
absorben de manera alternada los ANLg y las posible moléculas que
interfieren. —ediante un dispositivo el detector solo registra la señal de los
ANLg.
Cuando la luz pasa en forma normal absorben los ANLg y las moléculas,
cuando pasa en forma polarizada y el nivel electrónico se desdobla, solo
absorben los ALNg.

5
Las interferencias químicas generalmente ocurren cuando no se tuvo en cuenta
o no se controlaron correctamente las condiciones operacionales

67La presencia o formación de compuestos poco volátiles (algunos aniones,

SO4, PO4, tienen la característica de que a determinada T reaccionan y forman
compuesto poco volátiles con el analito en estudio, por ejemplo con —g o Ca).
Esto lleva a que haya menos ANLg , interfiriendo asi con la cantidad a
determinar. Se soluciona agregando a la solución del analito un compuesto
llamado agentes liberadores, que tienen la característica de reaccionar con el
anion antes de que este lo haga con el analito. Se usa Litio o Silic io como
agentes liberadores.


c
 
 
  

37Otra posible interferencia es el equilibrio de disociación. Algunos compuestos

tienen la característica de afectar y modificar el equilibrio de disociación de
algunas sales. Por ejemplo: si se tiene ClNA a determinada T se f orman los
ALNg, pero si hay HCl en el medio en determinadas condiciones los átomos de
Cl provenientes del HCl hacen efecto de masa y desplazan el equilibrio.

," 
.!
 se debe elegir la T adecuada del atomizador de tal
manera que no provoque la ionizaci ón de la muestra. De no ser posible
cambiar la T de ionización se agrega al medio supre sores de ionización cuya
función es ionizarse mas rápidamente que el analito en estudio. En el medio
habrá electrones que desplazan el equilibrio a favor de la no ionizació n del
analito. Esta situación lógicamente no sucede en el ICP, dado que el plasma es
gas parcialmente ionizado.

  " !


 

Esta técnica de absorción de energía radiante co mprende la zona que va

desde 700 nm hasta aproximadamente 1300/1500 nm .
La región puede dividirse en cer cano, medio y lejano
Generalmente desde el punto de vista analítico las determinaciones
cualicuantitativas se trabajan en ir cercano y medio
La técnica se usa mucho para la determinación de compuestos orgánicos.

£    

Los espectros se grafican en porcentaje de transmitancia en función del
numero de onda (1/Ȝ). Los espectros dan picos o bandas característicos a
distintos grupos funcionales, por eso decimos que es una técnica que permite
identificar compuestos. (Hay dos espectros de ejemplos en fotococopia1): son
dos alcanos que presentan similitud en algunos picos, por ejemplo en zona de
2800-3000 cm-1, hay una banda típica de unión C-H, luego en 1600-1400 cm-1
hay otra banda característica de la unión C -C ).
Es una tecnica cualitativa y puede usarse para hacer cuantificaciones, estas
ultimas se ven condicionadas por el estructura del compuesto. Las moleculas
polinucleares, por ejemplo, son difíciles de determinar cuantitativamente porque
las bandas se superponen.

*
 !


La radiación proviene de zona del IR cercano -1500nm [E:hc/v] cuanto mayor es
la longitud de onda menor es la energía: la radiación qu e proviene de esa zona
no es muy intensa (como si lo es la UV. y visible).
Esa radiación no alcanza para producir transiciones electrónicas, es decir, solo
alcanza para generar cambios en las energías rotacionales y vibracionales. Es
decir que la absorció n a partir de moléculas en esta zona es bastante selectiva:
no todas las moléculas son capaces de absorber radiación a esta longitud de
onda, porque para que se produzca esta absorción de energía las moléculas
deben tener un momento dipolar distinto de 0.
La absorción cambia cuando el momento bipolar de la molecula es distinto de
cero. Las moléculas no son rígidas, sino que tienen un movimiento alrededor
de un eje imaginario (movimientos vibracionales de tensión o deformación).
Eso genera un cambio en cada molécula que esta relacionado con la densidad


c
 
 
  

de carga que hay alrededor de cada átomo y la distancia que hay entre ambos
centro de cargas.

Ejemplo HCL
H -CI
ó+ ó-

Cuando la radiación que proviene de una fuente de energía incide sobre una
molécula y la frecuencia de esa radiación coincide con al frecuencia vibracional
y rotacional propias de la molécula, se origina un cambio en el momento dipolar
de la molécula yeso produce la absorción de energía radiante. Entonces ese
cambio de momento es lo que va a medir.

£


Esa característica la tienen las moléculas formadas por heteratomos (en
general). —ientras que las moléculas homopolares (O 2, N2) tienen un momento
dipolar igual a cero: esas no absorben en el IR.
El cambio de momento bipolar en est as tecnicas es irreversible.

Los espectros de moléculas sencillas son simples (con pocos picos) mientras
que en las moléculas mas complejas hay muchas bandas, que pueden
superponerse haciendo mas difícil la determinación.
La condición para que, la molécu la absorba en al región IR es tener un
momento diferente de cero, entonces al momento de ser irradiada la molécula
ese momento cambie (se perturbe).


 

Lo que existen actualmente son Dispersivos y no dispersivos.

1.- Instrumental dispersivo (simple y doble haz)

2.- Instrumental no dispersivo (simple haz)

60
 
 %"$.7 
En general se usan para hacer determinaciones cualitativas.
Se llaman así porque tiene un sistema de monocromadores qu e dispersan la
radiación que llega a la red de reflexión y emerge por la hendija de salida (ver
fotocopia 1)
Hay una FER, un espejo a la salida de ella que divide la radiación en dos. Esa
radiación pasa a través de dos cubetas (muestra y referencia), lueg o la
radiación que viene de la cubeta de referencia se atenúa con un atenuador,
luego se unen esas dos radiaciones, producen una interferencia constructiva y
así llegan al detector.
El monocromador esta después de la muestra (para esta técnica no es
necesario ponerlo antes, porque la radiación IR no es tan potente y no modifica
a la muestra). Tanto la FER como los detectores tiene características térmicas:
responden (sobre todo los detectores) a cambios de temperatura.
Funciona de igual manera que cualqui er insterumento de doble haz.


c
 
 
  

30
 

  
Permiten hacer determinaciones cuali y cuantitativas.
Este tipo de instrumentos se conocen como instrumentos de IR con
transformada de Fourier. No tienen sistema dispersivo sino que cuentan con un
interferometro, cuya funcion es modelar y modular la radiación proveniente de
la Fer.

Tiene un algoritmo matemático cuya función es decodificar la señal que se

registra y transformarla en un espectro fácilmente identificable o que se pueda
interpretar bien
Los componentes de estos instrumentos (que en general son de simple haz)
son:
FER, interferómetro, compartimiento de muestra, detector.


  ! 
El interferómetro es que el reemplaza al monocromador y la diferencia que
tiene con este es que solo permite que pase una rango estrecho de longitudes
de onda pero no ocurre el proceso de dispersión sino que aca hay movimientos
de espejos que permiten que llegue radiación a la muestra a diferentes
longitudes de onda

El interferómetro esta compuesto por una combinación de espejos: fijos y

móviles que redirigen la radiación hacia la cubeta de la muestra; y en el medio
de ellos hay otro dispositivo llamado cortador del haz o de la radiación cuya
función es dividir el haz de radiación que le llega.
El cortador del haz esta recubierto por un material que permite que parte de
radiación se refleje y otra se transmita.





Llega radiación de la FER , pasa por el espejo colimador (para que vayan en
forma paralela), los rayos llegan al cortador del haz y parte de ellos se reflejan
y esa radiación que se refleja incide en el espejo móvil, otra parte de la
radiación atraviesa el cortador del haz y llega al espejo fijo. Entonces cuando,
por movimientos mecánicos, se va moviendo el espejo móvil de tal manla que
ambos espejos quedan a igual distancia del divisor del haz, ambas radiaciones
(las de los dos espejos) quedan en fase y se produce interferencia co nstructiva
que aumenta la intensidad de esa radiación que luego pasa por la muestra a
una determinada longitud de onda. El funcionamiento del cortador es similar al
del filtro de interferencia
—ientras que si las distancias de ambos espejos son diferentes, la radiación no
esta más en fase y al detector le van llegan diferentes señales en función de la
distancia entre los espejos.

Lo que se registra en el detector es un interferograma que a través de la

transformada de Fourier se decodifica y se obtiene un espectro convencional.
Estos equipos son de ultima generación, en vez de tener un sistema óptico de
monocromadores tienen un inteferometro con espejos que selecciona una
longitud de onda por medio del espejo móvil.


c
 
 
  


   
Es la señal en función de la distancia de los espejos. Como el barrido es muy
amplio, el interferograma es como en b, el algoritmo desarma eso y lo
transforma en una señal que se puede leer como el (a) (fotocopia 2).

  

 
 
1
 
 
Son sólidos inertes que se calientan eléctricamente y alcanzan temperaturas de
alrededor de 1500 -2200 K. Sonn fuentes continuas, es decir que el espectro
de emisión de la lámpara debe ser una banda que abarque un amplio rango de
longitudes de onda. La inten sidad de radiación varía en función de la
temperatura.

Hay varios tipos de FER con las características anteriormente descriptas.

67
 


 
 
Es la más común. Formada por un cilindro formado por una mezcla de oxido de
Circonio y otros óxidos de diferentes metales. Ese cilindro tiene un diámetro de
1-2 mm y una longitud de aproximadamente 50mm. Esta rodeado por una
cubierta de un material protector que tiene la función de evitar que ese cilindro
se sobrecaliente y se queme. En los e xtremos del cilindro se ha conectado
cables de platino cuya función es transmitir la electricidad y alcanzar
temperaturas entre 1200 y 2200 aproximadamente. Ver figura 4. La mayor
intensidad de emisión depende de la temperatura que alcance la lámpara.

37*" 
Es una varilla cilíndrica de aproximadamente 50mm de longitud y 5 mm de
diámetro. Esa varilla de es carburo de silicio y esta rodeada de una resistencia
que hace que se alcanzen temperaturas que van desde 1300 a 1800 K
emitiendo asi en forma continua en el IR

87



 
Es un alambre en forma de espiral de Ni y Cr. Alcanza temperaturas de hasta
1000K.

97c   

Es una lámpara que utilizan los instrumentos que permiten trabajar en la región
del IR lejano. Consiste e n un tubo de cuarzo que tiene vapor de mercurio a baja
presión. Cuando pasa la electricidad (cuando se conecta) ese vapor de
mercurio se ioniza originando un plasma y ese plasma emite una radiación
continua en la región del IR lejano.

=7
 
 

Es la misma que vimos en absorción molecular. Se usa en IR cercano.

>7
 £23% 

 

 
 
  
  7
Actualmente hay instrumentos que tiene como FER un láser de CO2. Este tipo
de fuente generalmente se usa cuando se esta haciendo un control
medioambiental para determinar contaminantes atmosféricos (NH3, benceno)
Esta serie de lámparas son comunes. La característica fundamental es que son
sólidos inertes que se calientan y emiten radiación .


c
 
 
  

£" 
Son recipientes que presentan ventanas que son transparentes a la radiación
IR. Esas ventanas pueden ser de NaCI, NaBr, KBr,CeBr

 "

Según el instrumento: sistema dispersivo(monocromadores)
Sistema no dispersivo: interferómetro.

( 
La característica principal de los detectores de IR es que su respuesta depende
del poder calorífico de la radiación
Hay tres tipos de detectores

Los dos primeros (térmicos) generalmente se usan en instrumentos con

sistemas dispersivos mientras que los fotoconductores y piroelectricos se usan
en equipos no dispersivos.
60( ) 
Este tipo de detector, cuando llega la radiaci ón se produce un calentamiento y
ese aumento de temperatura es lo que se registra (hay una variación de
temperatura).La respuesta depende de la capacidad calorifica de la radiación.

Hay de varios tipos:

‡ Neumático de golay
‡ Termocuplas
‡ Bolometros

Los tres funcionan bajo el mismo principio .

1 
Es una cámara que en su interior tiene gas a baja presion y en un extremo
tiene una membrana4cuando la radiación incide en el detector, el gas se
calienta, se expande y ejerce presión sobre la membrana que se desplaza
según el poder calorifico de la radiación, generando una señal termica ǻT y ese
aumento de temperatura es
la senal que se mide,
 
La unión de un alambre con una esfera en la punta de Bismuto y Antimonio,
todo eso soportado o colocado sobre un soporte conductor yeso colocado
dentro de una cámara donde se ha hecho vacío. Cuando llega la radiación,
incide en el gas, se genera un aumento de temperatura y ese aumento de
temperatura genera una diferencia de potencial y esta ultima es la señal que se
mide. Generalmente esa señal es muy chica y requiere amplificador.
# 
Funcionan de forma semejante a las termocuplas con la única dif erencia que
están formadas por laminas de platino o de níquel. Se genera un aumento de
temperatura, una diferencia de potencial y de ahí la señal que se mide.


c
 
 
  

30(    

Se basan en que cuando llega la radiación la absorben y la tr ansforman en una
señal medible
Están formados por láminas cristalinas de materiales pirolectricos que tienen la
característica de presentar propiedades térmicas y eléctricas. Generalmente se
usa como material piroelectrico sulfato de triglicina (STG). Est e material se
coloca entre dos electrodos y cuando la radiación es absorbida se produce un
calentamiento del STG y al calentarse varia la distribución de carga en la
superficie, lo que genera una corriente eléctrica y esa corriente eléctrica es la
señal que se mide.(Parecidos a los diodos n -p)

80(  
  
Están formados por una delgada capa de un material semiconductor.
Generalmente se usa sulfato de Pb. Este material semiconductor esta
depositado sobre un vidrio y todo eso esta recub ierto por un tubo de vidrio y
sellado al vacío. Cuando llega la radiación se produce una promoción de los
electrones de valencia, del sulfato de Pb y esto hace que se genera una
corriente y esa corriente es la señal que se mide.


c
 
 
  

)
 


Estas técnicas cuantitativas que se basan en reacciones electroquímicas, es
decir, que tiene en cuenta las propiedades eléctricas de los analitos cuando
están en solución dentro de una celda electroquímica. Generalmente son
especificas respecto a una tecnica optica. El instrumento es mas sencillo y mas
barato que los usados en tecnicas opticas.
Este tipo de celda tiene la particularidad de ser especificas debido a que se
puede determinar actividades de distintas especies cua ndo se encuentran en
disolución y estas especies están en distintos estado de oxido -reducción
Puedo determinar Fe 2+, Fe3+

Además , con esta técnica puedo determinar la actividad de la especie que es

importante para calcular constantes de equilibrio. Adem ás la instrumentación
utilizada es mas barata. En ese tipo de técnica se tiene en cuenta reacciones
de oxido reducción que ocurren en la interfase electrodo -disolución
Para poder aplicar una técnica electroanalítica necesitamos una celda
electroquímica. Esta es un recipiente que tiene conectados dos electrodos que
están sumergidos en un recipiente que contiene una disolución del electrolito a
determinar . Pueden ser de tipo galvanicas o electroquimicas.

!
 , 
Definición: es la responsable de las transformaciones químicas que sufren las
especies debido al paso de corriente eléctrica a trabes de los electrodo s y del
movimiento o transporte de especies cargadas o no desde la disolución hacia
los electrodos.

£
 

 , 
Puede haber de dos tipos:
Una de ellas es la celda galvanica y la otra es la celda electrolítica
La celda galvánica es aquella que al conectarse a dos electrodos las
reacciones electroquímicas ocurren espontáneamente y se genera una
corriente. Este tipo de celda se utiliza en técnicas potenciometricas


c
 
 
  

En la celdas electrolíticas se requiere de una fuente externa de energía para

que funcione y esa energía es consumida y así tiene lugar la reacción. Este tipo
de celda se utiliza en técnicas polarograficas.

Teniendo en cuanta la nomenclatura de la IUPAC siempre el proceso de

reducción ocurre en el cátodo y el proceso de reducción en el ánodo y siempre
el potencial de una celda según la iupac es : el potencial del cátodo menos el
potencial del ánodo. Los e- que circulan se deben a la redox. Los iones se
mueven hacia los electrodos, este movimiento puede deberse a tres procesos

La especie que esta dentro de la celda electroquímica se mueve con tipo de

movimiento:

x Conveccion
x —igración
x Difusión

£Yes el movimiento de la disolución originado por agi tación debido a

un aumento de T, una agitación magnética o mecanica.

  es el movimiento o movilidad de los iones provocados por atracción

electroestatica entre los iones y los electrodos (positivos atraen partículas
negativas y viceversa)


 es el movimiento de la especie originado por un gradiente de

concentración (de mayor concertación hacia la interfase electrodo -disolución) .

Dependiendo de la tecnica a usar es tos movimiento son de mayor o menor

importancia.

  .1 . 

Alrededor de los electrodos se forma una doble capa difusa. Esta se forma por
un primer reordenamiento. Luego de aplicar un potencial . si aumenta el
potencial la doble capa se hace mas gruesa y esto hace que los electrones no
puedan alcanzar la interfase , allí no hay proceso faradicos y no se produce
redox. Se dice que el electrodo esta polarizado. La capa es la responsable de
que existan dos procesos que dan origen a dos tipos de corrientes (Faradicas y
no faradicas)
En una celda electroquímica siempre se produce una corriente porque hay una
transferencia de electrones desde el seno de la solución hacia el electrodo.
Pero esa cantidad de corriente esta gobernada y limitada por distintos
procesos. Esos proceso se denominas faradicos y no faradicos.

ÿY   son aquellos donde siempre hay un reacción de oxido

reducción en la superficie o interfase electrodo-disolución. La corriente allí
generada se llama corriente faradica. Esta corriente es necesaria en
potenciometria.


c
 
 
  

ÿYY   : pueden ocurrir cuando por algún proceso

termodinámico o cinético (por ejemplo adscorcion), no ocurra una reacción
redox y tenga lugar otro s procesos que generan una corriente , pero la
corriente es una corriente de carga. Esos procesos que ocurren modific an de
alguna manera la interfase electrodo -disolución. Se dice entonces que la
corriente generada es no faradica.

El grafico a representa un electrodo polarizado. Es decir a medida que aumenta

(varia) el potencial, no hay variación en la intensidad de cor riente. Esto sucede
cuando ocurren procesos no faradicos
El grafico b representa a un determinado potencial constante varia la intensidad
de corriente. En este caso el electrodo esta despolarizado . Esto sucede cuando
ocurren procesos faradicos.

'  .


Son los procesos que ocurren cuando hablamos de la polarizacion de un
electrodo: ocurren distintos procesos antes de llegar a la polarizacion o
despolarizacion del electrodo.

á


    
Aqui la especie oxidada se mueve desde el seno de la solución hacia el la
interfase electrodo disolucion mediante un movimiento de migración.



 

 
Se debe a la generación de alguna reacción química y dar origen a especies
intermedias . estas especies intermedias pueden también oxidarse o reducirse .
Si ocurre no hay transferencia de electrones
  " 

 
En las proximidades de la superficie de cada electrodo puede ocurrir la quinta
etapa , es decir, ocurrir un cambio en el estado físico de la especie, la cual
puede adsorberse , disociarse o cristalizarse antes de la transferencia de
electrones.
£  
  
  
La cuarta etapa puede ocurrir a dis tintas velocidades.

La polarizacion depende entonces de las velocidades de reaccion de las

diferentes etapas. Por supuesto la etapa mas lenta es la que controla el
proceso y eso lleva asociado que la intensidad de corriente se vea limitada por
cada una de estas etapas.
x Si la primera etapa es la mas lenta, se dice que el electrodo esta
polarizado por concentración .
x Si la segunda etapa es la mas lenta el electrodo esta polarizado por
reacción quimica
x Si la tercera etapa es la lenta el electrodo esta polarizado por adsorción
o disociación
x Si la cuarta etapa es la lenta el electrodo esta despolarizado

£ 

 
Se calcula utilizando la ecuación de Nersnt . Esta ecuación surge de una serie
de consideraciones termodinámicas, trabajando a P y T constante que se basa


c
 
 
  

en los cambios de energía libre para una reacción dentro de una celda
electroquímica.

Si consideramos según la IUPAC.

‘‘
Y Y

‘Y‘ 

 Y‘Y
Y
‘



  ‘   Y
      Y  Y  
  


‘
Y‘

Y Y



Podemos a través de ecuación llegar escribirla como la ecuación de nersnt

como esta en la transparencia
Recordemos que la actividad de una especie es

A
 


A

El f esta relacionado con la fuerza iónica de la solución (I). I depende de la

concentración y carga de la especie.
Cuando en química analítica se trabaja con soluciones diluidas el coeficiente de
actividad f tiende a 1 , por lo tanto podemos decir que a=C, si la solución es
diluida.
Considerando el ejemplo anterior tenemos




 Y  Y  Y  Y 

Y Y
  reaccion en el electrodo
‘ 

El potencial frente al eletrodo de referencia se calcula siguiendo el esquema de

celda.
Esquema de una celda

x Hacia afuera el electrodo (Zn 0)

x La barra / indica electrodo, sumergido en una solución de Zn 2+ con una

dada concentración molar

x La doble barra // indica puente salino

x Cu2+ con su concentración molar / (el otro electrodo) Cu 0 (Zn2+)

x Hacia fuera los electrodos. Al centro sus soluciones

x ǻP=potencial de un solo electrodo

x Ep=E2-E1 potencial de unión liquida

El potencial se unión liquid a se genera cuando se ponen en contacto dos

soluciones de distintas concentración. Desde el punto de vista experimental ,
este potencial se puede minimizar colocando al puente salino y se hace casi
despreciable por lo tanto en el Ej no se considera.


c
 
 
  

Existe otro parámetro que es el potencial norma de electrodo o potencial

estándar de electrodo. Ese potencial es una constante física característica de
los pares redox. Ese potencial se calcula cando el cociente de actividad de la
especies reducidas y oxidas es igual a 1. Esto ocurre cuando los reactivos y
productos tiene una actividad igual a 1
! u


u



Y  Y
Y 2 
 Y
Y Y
 
 Y

   


El potencial del electrodo de H es cero (E=0)

'
 
La técnica que utiliza estas celdas es la potenciometria
x Utiliza celdas galvanicas
x Utiliza dos electrodos : uno de referencia y otro indicador
x Utiliza soluciones electrolíticas
x
Una técnica potenciometrica se basa en relaciona r la concentración de una
especie con la medida del potencial que se genera entre un electrodo indicador
y un electrodo de referencia.

 
  es aquel cuyo potencial responde a la variación de la
actividad de las especies en estudio.

    
 : mantiene constante su potencial aun cuando se
producen pequeños pasajes de corriente , generalmente se utiliza como anodo.

'


 +
 

Dentro de lo electrodo s indicadores tenemos dos tipos: los indicadores

metálicos y los indicadores de membrana

 
  
Se basan en que el potencial se genera a traves de una redox, que ocurre en la
interfase electrodo-disolucion, mientras que en los electrodos selectivos el
potencial se genera medianrte un intercambio de iones a traves de la
membrana.

Dentro de los indicadores metálicos tenemos

x Los de 1era especie
x Los de 2da especie
x Los redox

6 

 
Son electrodos que están constituidos por una barra de metal sumergida en
una solución que contiene los propio s iones. Ejemplo: una barra de Cu0 que se
sumerge en una solución de Cu 2+


c
 
 
  

!


A 


 Y  Y  Y  Y  Y Y
 

‘   



 


 
Están formados por una barra metálica que esta en contacto con una solución
saturada de una sala poco soluble del metal y una determinada concertación
del anion correspondiente a la sal

Ejemplo: Ag 0/ClAg(sat) ;Cl-(Xm)

Cuando la concentración molar del anion (Cl -) es mayor que 1— este electrodo
se comporta como electrodo de referencia .
Si no, es un electrodo anionico ([Cl -]<1—).

  &

Están formados por una barra de metal inerte (platino, paladio, oro) que esta
sumergida en una solución que contiene una cupla redox
Ej: Pt/Fe 2+; Fe3+ o Pd/Cs3+; Cs4+

YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY q 

 q
YYYYYYYYYYY q 
 q YYYYYYYY
ë

YYYY q 
YYYYYYY  

    
u
 Y
 Y



    
 su potencial no varia aun cuando hay pequeños
pasajes de corriente, permanece constante en función del tiempo
Dentro de los electrodos de referencia tenemos el electrodo de H que es el que
se utiliza para calcular los potenciales normales o estándar y ese electrodo
tiene un potencial igual a cero. A todas las T y cuando la actividad de H + es 1—.

 
Otro electrodo muy frecuente es el de calomel. Este electrodo es un tubo de
vidrio que en su interior tiene una pasta de Hg que esta en contacto con una
solución de Hg 2Cl2. Esa pasta de cloruro mercurioso esta saturada y con una
elevada concentración de KCl.
En el extremo inferior del tubo tiene un a orificio poroso que esta en contacto
con la solucion de CLK (es de tipo anionico , [Cl -]>1— ) y además en la parte
interna hay un alambre de platino que es el que hace el contacto.
Este electrodo de calomel saturado (ECS) es que el que se usa como
referencia y tiene un E=0.268 V

Otro electrodo de referencia que se usa es el electrodo de Agº/ClAg (s); Cl-(Xm).

Cuando la concentración de Cl es mayor a 1— el electrodo es de referencia.


c
 
 
  

El potencial de este e lectrodo de referencia es E=0.24 2V . su E se calcula

usando al electrodo de H como E de referencia.

'
   
Es una constante fisica caracteristica de cada especie. El potencial normal de
electrodo se calcula cuando las actividades de las especies reducidas y
oxidadas son iguales a 1—. Asi se puede calcular los diferentes potenciales de
las distintas especies y poder clasificarlos , teniendo en cuenta su capacidad de
reducirse



  
Una de las aplicaciones prácticas es la titulacion potenciometrica: consiste en
medir el potencial de una celda galvanica luego del agregado de alicuotas de
un agente valorado , trabajando a corriente nula

Una celda de titulacion es un recipiente donde tenemos: electrodo indicador ,

electrodo de referencia, una bureta, la solución del electrolito. Nosotros vamos
a ir mirando el potencial en función de lo mililitros de agente valorado gastados.

De esa curva de titulacion potenciometrica vamos a obtener los militros de

agente valorado que gastamos en la titulacion y por medio de una reacción
estequiometrica calculas la concertación del analito. Se utiliza una celda
galvanica , es decir , la única corriente que debe generarse es la corriente que
proviene de la reacción de oxido reducción, e n la interfase electrodo -disolución

En los electrodos indicadores metálicos la corriente se produce por una

reacción redox

En un titulacion potenciometrica están involucrados dos tipos de reacciones:

una reacción electrónica y una reacción química .

Puede entonces haber titulaciones de precipitación, neutralización, de

formación de complejos, y una reacción redox. Cualquiera de estas reacciones
puede producir al agregar el agente valorante . Dan lugar a cuatro tipos de
titulaciones potenciometricas.

 " 


El otro tipo de electro dos indicadores que existen son electrodos selectivos de
cationes y moleculas.

 " 

 o electrodo selectivo a iones.
Estos tiene la particularidad de estar formados por una membrana que es
selectiva a distintos iones. La membrana esta en contacto con los iones pero
de actividad conocida y constante. Permiten hacer medidas directas, hay
especificos para cada ion.
La presencia de esa membrana en la disolución hace que se modifique la
movilidad de los iones dentro de esa solución y se genere un potencial que va
a depender de la concentración. Se genera un potencial por gradiente de
concentración que genera un intercambio de iones a trav es de la membrana
Este potencial es el que se usa para calcular la concertación


c
 
 
  

Es importante conocer la naturaleza de la membrana.

Existen electrodos selectivos a cada ion, la capacidad del electrodo de ser o no

selectivo depende en gran parte de la membrana. Esta debe presentar una
minima solubilidad , es decir la solubilidad de la membrana en la disolución del
analito debe tender a cero. La membrana responde selectivamente a distintos
iones , es importante conocer la composición de la membrana.

Además, la membrana debe tener una determinada conductividad eléctrica.

Generalmente , la conductividad esta dada por iones monovalentes que
constituyen la membrana. Además , la membrana debe tener una reactividad
selectiva con el analito o sea debe interactu ar electivamente con el analito ne
estudio. Generalmente, las membranas son de moléculas grandes o agregados
moleculares como vidrios, resinas, sílice. Algunas membranas están formados
por compuestos inorgánicos como haluros de Ag. Esto hace que sean poco
solubles o insolubles. Deben estar siempre hidratadas para facilitar la reacción
de intercambio que ocurre a ambos lados de la misma.

Las tres características fundamentales que debe cumplir una membrana son:
x —inima solubilidad (dada por la composición con grandes moleculas)
x Conductividad eléctrica (dada por los iones monovalentes)
x Reactividad selectiva al analito en estudio. La membrana tiene que
poder interactuar de manera selectiva con el analito.

Hay dos tipos de membrana que se utilizan en este tipo de electrodo: las
membranas cristalinas, las no cristalinas y dentro de esta ultima tenemos las
membranas de vidrio, las formadas por líquidos y las movilizadas por líquidos
rígidos.

" 

 
 
El mas común es el electrodo selectivo a H + que es el electrodo selectivo a pH.
Hoy en día los electrodos selectivos son electrodos combinados . El indicador y
el de referencia están juntos dentro de un tubo de vidrio.
Dentro de ese tubo de vidrio hay una solución de HCl concetrado , saturada
con ClK, de actividad de H + constante y un alambre de Ag que actúa como
electrodo de referencia.
A su vez en el interior tiene otro electrodo de referencia de Ag/ClAg que forma
junto con el electrodo indicad or la celda que se utiliza para medir pH.
La membrana de vidrio esta formada por redes tridimensionales de silicatos y
dentro de esas redes existen cationes mono, bi y triv alentes. Los monovalentes
son los encargados de la conductividad selectiva de la membrana , los bi y
trivalentes permanecen retenidos por los silicatos y mantiene humeda y rigida a
la membrana. Esta membrana esta en contacto con la solucion de H de
actividad desconocida

'
 )" 
 : una de la característica fundamental de la
membrana es que debe estar hidratada para poder medir la actividad de
analito. Debe estar hidratada en la cara externa cuando esta en contacto con la
solución del analito y la parte interna cuando es ta en contacto con la disolución


c
 
 
  

del analito de actividad constante. La región intermedia esta seca , allí es

donde se encuentran los iones monovalentes, se desplazan a lo largo de esa
red cristalina y son los responsables de la conducción eléctrica que va a
permitir generar un potencial.

Los iones Na + originan el potencial entre la disolución externa y la membrana

externa y un potencial entre la solución interna y la membrana interna. (P i y Pii).
La diferencia a ambos lados de la membrana es lo que se conoce como
potencial limite, potencial de membrana o potencial de superficie. La reacción
de intercambio que ocurre genera el gradiente de concentración . El movimiento
genera carga en la membrana y eso genera el potencial.

3 $
I # "



" I I # $
I 


V: acido salicilico.

El equilibrio de la reacción , como debe estar hidratada la membrana, tiende a

desplazarse hacia la derecha. La superficie de la membrana predomina el
Acido Silicico y lo mismo ocurre en la cara interna de la membrana. El
equilibrio esta desplazado según la concentración de protones tanto en el
medio como en la disolución y eso genera un potencial limite Eb = E2 - E1.
Este es un parámetro analítico que se usa para medir pH.

 - 

El potencial limite esta dado por la diferencia de potencial de los potenciales a
cada lado de la membrana (cada uno responde a la ecuación de Nersnt) . Este
es el parámetro analítico que da una idea del pH de la solución.
En esa solución externa hay solución de H + cuya concentración o actividad no
conocemos pero del lado interno hay una conc entración de protones conocida
y constante.
El potencial limite queda en función de la actividad de la especie en disolución
(es que el no se conoce).
pH=-log(a) , Eb=L-0,059pH potencial limite e n función del pH para un electrodo
selectivo a pH.
El potencial limite es el parámetro analítico que me va dar el pH de la solución.
Es decir, el potencial de un electrodo indicador de este tipo, será igual al
potencial limite, responsable del pH, mas un potencial de referencia interno
mas un cierto potencial de asimetría (este potencial de asimetría e s muy chico
y se debe a las distintas tensiones en la estructura de la membrana)
Eind= Eb + Eref2 + Easi
Eb=E ind - Eref


c
 
 
  


'
  
Es un potencial muy pequeño y se debe a las diferencias de tensiones en la
estructura de la membrana, generada fundamentalmente por desgaste. Es
despreciable.


 - 
Este mismo electrodo, selectivo a H+, puede según las condiciones ser
sensible a otros iones monovalentes y en ese caso cuando el electrodo se usa
para medir soluciones básicas puede ser que sea sensible a iones Na+, K+. L a
mediad o el valor de pH en ese casos era menor que el valor real y en ese caso
se dice que el electrodo presenta un error alcalino. Entonces debe definirse un
parámetro que se denomina coeficiente de selectividad.
Ese coeficiente indica como afecta la presencia de un ion en la disolución sobre
la mediad del pH. Es decir sobre el valor del potencial limite . En algunos casos
puede darse que el electrodo sufra lo que se conoce con el nombre de error
acido. Sucede a solución de pH inferiores a 0,5 o 1. en estos casos el pH
medido es mayor que el real.

£ 
?
Esta variable esta involucrada dentro de la ecuación del potencial limite de
membrana -log (a1KA,B,b1)-. Este coeficiente de selectividad representa la
relacion que existe entr la respuesta de dos iones que estan presentas en la
misma disoclucion. Es el grado de interferencia que genera un ion sobre otro.
Indica cuanto interfiere la otra especie con respecto al electrodo del analito (B
interfiere con con el electrodo selectivo a A, por ejemplo)
Toma valores de 0 a 20 o 30 y es un dato que vie ne tabulado por el fabricante.
Si el coeficiente tiende a 0 indica que el ion no interfiere en la medicion

- 
 el pH de una solución debe ser una constante universal.
Según IUPAC y según el instituto nacional de patrones y tecnología (NIST)
establece como pH operacional aquel que se obtiene de la calibración directa
del instrumento con disoluciones patrones conocidas preparadas a partir de
estándares primarios, seguido de la determinación de pH de la disolución
incógnita. Estas soluciones se compran, no se preparan y no se conoce su
fuerza iónica.

c!
 -@ 
Sirve para medir si una solución es acida o es básica , pero no se puede saber
la concentración de H + que hay en la solución si hacemos una medida directa.
Esto se debe a como se calibra el electrodo, al no conocerse la fuerza ionica de
los buffers es imposible relacionarla con la fuerza iónica de la muestra,
entonces al ser diferentes los coeficiente de actividad no se puede medir [H +]

 " 

 
,

Con los otros tipos de electrodos de " 


 
 tenemos los de
membrana liquida. Ese tipo de electrodo esta formado por un tubo de vidrio que
en su interior tiene otro tubo de vidrio y en el extremo inferior presenta una


c
 
 
  

membrana de plástico porosa que se encuentra impregnada por un liquido

hidrofobito, esta saturada de uno o varios intercambiadores iónicos orgánicos
que se encuentran entre los dos tubos.
Dentro el tubo interno se encuentra un electrodo de referencia inte rno
sumergido en una solución acuosa del metal que uno quiere determinar.
Generalmente se usa para cationes bivalentes aunque los hay para
monovalentes.
El potencial se genera de la misma mane ra que el de vidrio, a traves d e un
intercambio ionico en la membrana.

 
 

, 
. 
 


En este caso los electrodos son semejantes al anterior con la única diferencia
en que la membrana ya no es de plástico son que son membranas de cloruro
de polivinilo y esto hace que la membrana sea mas flexible y eso hace que el
coeficiente de selectividad sea menor. Con estos eléctrodos se pueden hacer
medidas directas de diferentes cationes y aniones. Cuando se calibra el
instrumental se lo hace con su solución patrón preparada por uno mismo.
Quiere decir que uno va a conocer esas soluciones patrones entonces va a
permitir conocer la concentración de la muestra.

c7  " 

 
 

Hay de dos clases:
x 1)Cristal único (membrana formada por un único cris tal)
x 2)Policristalinos o mezcla de cristales.

67£ :
 las membranas están formadas por Fluoruros de Lantano
(LaF3) y es selectiva a iones F-. el electrodo es un tubo de vidrio que en la
parte inferior tiene una membrana que tiene un diámetro de 1 0 mm
aproximadamente y un espesor de 2 o 3 mm . esa membrana , que es de LaF 3,
mediante un tratamiento con F 2Eu (fluoruro de europio) con el objeto de
aumentar la capacidad conductora de la membrana. Se crean huecos en la
membrana para que los iones F pued an moverse con mayor facilidad y se
genere el potencial limite.
Dentro de ese tubo de vidrio que forma parte del electrodo se encuentra un
disolución que contiene NaCl y NaF donde la actividad de F es constante y
conocida, en la cual esta sumergido el elec trodo de referencia interno .
Dependiendo de la concentración molar de F que hay en la disolución se
genera un potencial y ese potencial limite generado es el que se va a relacionar
después, a través de la ecuación de Nersnt con la concentración de F -
La característica que tiene este electrodo es que se puede trabajar en un
amplio rango de temperatura (entre 0 y 80ºC) sin que haya variación del
potencial. La única limitación que tiene el uso del electrodo es que a pH
superiores a 8 empiezan a interferir lo ±OH del medio y a pH menos a 4 o 5
comienzan a molestar los H+, pues se forma HF en el medio y ya no se tiene
iones F- para detectar (el electrodo tiene una menor respuesta) . Es bastante
selectivo.



c
 
 
  

37.  : generalmente la membrana es una mezcla de sales de

haluros de Ag con sulfuros de Ag en relación 1:1. se hace una mezcla
homogénea de tal manera que aumente la conductividad de la membrana. Son
electrodo que se suelen usar como electrodos selectivos para iones Ag +. Es
decir que como electrodo selectivo de Ag podemos tener de membrana
cristalina o no cristalina (según como este formada la membrana)

Lo importante siempre es conocer la composición de la membrana y saber que

siempre se puede hacer una medida directa, salvo en el caso del e lectrodo de
vidrio selectivo a protones.

2  
Existen electrodos selectivos a moléculas. Hay de dos tipos
x Electrodos selectivos a moléculas gaseosas
x Electrodos selectivos a moléculas orgánicas

También se conocen como sondas sensibles a gase s. Son dispositivos

formados con un electrodo selectivo de iones que esta retenido por una
membrana permeable a gases y entre el electrodo selectivo y la membrana
sensible se encuentra una solución interna que es la que va generar el
producto para su posterior detección.

El gas disuelto pasa a través de la membrana permeable y se encuentra con la

solución interna- Al entrar en contacto se generan diferentes productos , en el
caso del CO 2 se generan H+ y HCO3- ,uno de los productos que se genera es
que reacciona con el electrodo selectivo.
Se pueden usar, todo, para determinaciones cuantitativas (con lo selectivos)
Se calibran con testigos preparados por uno mismo , luego se lee la muestra y
se obtiene la concentración del analito. Son lecturas directas d e replicas, el
resultados se expresa como es usual.

  

Estas técnicas abarcan un conjunto de técnicas que permiten obtener
información de una especie a través de la medición de corriente en función de
un potencial aplicado. Se mide intens idad de corriente en función de un
potencial aplicado. El grafico generado generalmente es sigmoidal
Dentro de estas técnicas tenemos
 
£l sic
       
          l r r fi  r 
ls s
lt  r  tri  rri li  l             
 lt  r  tri i r i  ic Tit
l ci   r  tric
    
 s r s
i ic s
st i r l l r r fi cl sic , l lt r tri i r i á ic r
tit l ci s r tric y lt r tri i r i á ic r s s r s
í ic s.


c
 
 
  

La voltamperometria de barrido lineal tiene la caracteristica de que el potencial

que se va aplicando tiene que variar linealmente con el tiempo.

Generalidades de la voltamperometria de barrido lineal

x En cualquiera de las dos técnicas se miden corriente I vs potencial
x Se usa una celda voltamperometrica

La celda voltamperometrica esta compuesta por : tres electrodos sumergidos

en una solución que contiene al analito y un exceso de un electrolito soporte
(disolución no reactiva de alta molaridad). Los electrodos estan conectados a
un generador de potencial de barrido lineal.
Estos electrodos son
x Electrodo de referencia: mantiene constante su potencial durante la
medición
x Electrodo auxiliar: es un alambre de Pt cuya función es conducir la
electricidad desde la fuente generadora de potencial hacia el tercer
electrodo (indicador)
x Electrodo indicador: es un microelectrodo , también llamado electrodo de
trabajo.

  

 
Es una varilla de teflón que en la parte inferior tiene una plaquita o disco con
características conductoras, Este disco a su vez esta conectado a un hilo de Pt
que sirve como conexión.
El disco puede estar recubierto de diferente materiales (Pt, Hg, Au, C grafito) y
según sea ese material va a presentar diferentes potenciales dependiendo
también del electrolito soporte donde esta sumergido (fotocopia 1).
Generalmente este electrodo se utiliza en la voltamperometria hidrodinámica
empleando sensores químicos. Se suele usar también en polarografias por
pulsos

 - 

Hay otro microelectrodos mas usados que son los microelectrodos de gotas de
Hg. Son tubos de vidrio que tiene un de posito, reservorio, donde se coloca el
Hg y en esa gotita de Hg es donde se produce la electrolisis. Las gotas deben
ser chiquitas y homogéneas para mantener la reproducibilidad del resultado.
Este tipo de electrodos de gota se usa mucho en polarografia clásica y en
titulaciones amperometricas.
Se trabaja con microeletrodos porque uno debe trabajar también en
condiciones de polarización por concentración.

'   £


En esta técnica se usa una celda de polarografia (los tres electrodos, el analito
y la solución de electrolito soporte). Dentro de esa celda polarografica pueden
ocurrir tres tipos de movimiento (conveccion, difusión y migración) que dan
lugar a respetivas corrientes. En esta técnica la única que debe existir es la de
difusión en la interfase electrodo disolución.


c
 
 
  

Las corriente de conveccion se elimina trabajando en reposo y a temperatura

constante y la de migración se elimina usando un electrolito soporte , que
³enmascara´ a la posible corriente de migración que genere el analito
En estas condiciones la única corriente involucrada en la determinación de la
de difusión. El polarograma reflejara la relación entre el potencial y la corriente
de difusión que ocurre dentro de la celda polarografica. Otra condiciones es
que cuando se hace una cuantificación se debe asegurar que no haya O 2
disuelto. Si hay O 2 disuelto este se reducirá muy fácilmente cuando se apliquen
los potenciales, generando una onda polarogr afica que puede enmascarar a la
onda polarografica de la especie en estudio. Este problema se resuelve
burbujeando con N 2

'  

Es un grafico de intensidad de corriente versus potencial
La curva B corresponde al electrolito soporte, que tiene un potencial de
reducción mucho mas negativo que la especie a determinar. Esta característica
del electrolito soporte es una condiciones operacional

Los potenciales aplicados son negativos, ya que la corriente que generan es de

baja intensidad y fácilmente medible. Si se usaran potenciales positivos podría
ocurrir que generen corrientes muy altas y eso haría que no se pueda o que
interfiera, al momento de hacer una determinación cuantitativa. La corriente alta
que se genera cuando se aplican potenciales positivos es debido a la oxidación
del agua.

*
 
  
A medida que se aplican potenciales (y se va midiendo la corriente) se produce
un reordenamiento de cargas en la superficie de la gota de Hg, se va formando
la doble capa (este proceso corresponde a la parte plana de la curva). En esta
fase el electrodo esta polarizado por carga.
A determinado potencial la especie se reduce y el electrodo queda polarizado
por concentración. La corriente de difusión es la corriente entre la corriente
limite (microelectrodo polarizado por carga) menos la corriente residual
(generada cuando el electrodo esta polarizado por carga, la corriente residual
es generada por el electrolito soporte).
En determinación cuantitativa I:kC, es decir, en este método se pueden usar
testigos, construir una curva de calibrado y expresar el resultado como
 tSo
El grafico queda, según cada testigo y su correspondiente señal, como
intensidad de corriente vs concertación del testigo. La relación entre ambos es
lineal. —uestra y testigo se tratan de la misma manera.

De un polarograma se puede obtener mucha información, por ejemplo la

corriente de difusión y el potencial de media onda.

'

 
Esta definido como el potencial donde la intensidad de corriente es la mitad de
la corriente limite, es un parámetro cualitativo que es característico del analito
en un determinado medio. Depende entonces: del analito, del pH, del electrolito
inerte, de la temperatura, pero NO depende de la concentración.


c
 
 
  

Permite tener una idea cualitativa para poder identificar o diferenciar distin tos
analitos. Como se ve en la fotocopia, cambiando el pH o el electrolito soporte
pueden diferenciarse analitos en una mezcla.

Para aplicar la polarografia es fundamental que la especie sea electroactiva, y

se puede hacer siempre y cuando las condiciones operacionales estén bien
fijadas. Estas son: temperatura, reposo, electrolito soporte y ausencia de O 2

  $ 


Hay dos tipos de voltampermetria hidrodinamica: la titulacion amperometrica y
los sensores químicos.
Una característica de estas técnicas es que se trabaja en agitación, es decir,
que la corriente de conveccion junto a la difusión serán parte de la medición. La
única corriente eliminada es la de migración, mediante el uso del electrolito
soporte.

!
 ) 
Se basa en medir la intensidad de corriente de una solución a medida que se
van agregando alícuotas de un agente valorado trabajando a potencial
constante. Se miden corrientes de conveccion y de difusión.

Se usa una celda amperometrica. Esta consta de: tres electrodos (referencia,
auxiliar y el de trabajo, que en este caso se usa goteo de Hg), una bureta
desde donde se agrega el agente valorado y un vaso de precipitado que
contiene la disolución del analito y el electrolito soporte.
Tiene además un generador de potencial conectado.

El potencial constante que se aplica se determina haciéndole un polarograma a

toda las especies involucradas (analito, agente valorado y producto de
reacción). Cada especie tendrá su curva característica , siempre y cuando sea
electroactivo.
Una vez seleccionado el potencial se agregan las alícuotas del agente
valorado.
Los gráficos obtenidos son curvas que presentan en un punto un quiebre, ese
punto de quiebre es el punto de equivalencia. La forma de la curva depende de
cual sea la especie electroactiva.


/
     
Permite hacer una determinación cuantitativa siempre y cuando una de las
especies sea electroactiva, mientras que en polarografia todas las especies
deben serlo. Esto permite, por ejemplo, titular un analito no electroa ctivo si el
agente valorado o el producto lo son.

Condiciones operacionales.
x Se debe trabajar en agitación.
x No debe haber O2 disuelto

Como electrodo se usa comúnmente el goteo de Hg, aunque a veces aplica
también el de disco de Hg.


c
 
 
  


 ,
Esta variedad de voltamperometria hidrodinamica permite hacer
determinaciones directas cuantitativas usando sensores químicos. Hay
sensores químicos:
x Para moléculas gaseosas (CO2 disuelto por ejemplo)
x Para moléculas orgánicas, también llamados biosensores (por ejemplo
para glucosa)

( 
!

 ,
Es un dispositivo que esta formado por un sistema de recono cimiento y un
transductor.
El sistema de reconocimiento también se conoce con el nombre de receptor.
Este receptor puede estar formado por membranas sensibles a gases o
también puede estar formado por microorganismo, enzimas inmovilizadas.
Cuando los sistemas de reconocimiento tienen caracteristicas biologicas se les
llama biosensores, sino se les llama simplemente sensores quimicos.

Los transductores pueden ser potenciometricos (como los electrodos sensibles

a moléculas), voltampermotricos u ópticos.
El transductor voltamperometrico tiene una membrana sensible a gases, una
disolución de ClK y un cátodo con disco de Pt. Cuando el O 2 difunde a través
de la membrana y al aplicar un determinado potencial este se reduce en el
cátodo generando una señal de corriente proporcional a la concentración de O2
disuelto (son similares a los potenciometricos, solo varia el transductor, en vez
de tener un electrodo selectivo poseen uno voltamperomtrico porque se aplica
un potencial)
También hay sensores químicos que detectan moléculas orgánicas donde el
receptor es una enzima inmovilizada. En lugar de una membrana permeable
tiene una que contiene a la enzima. La membrana esta rodeada de un anillo de
plata que actúa como ánodo. Luego hay una membrana de diálisis y otra de
acetato (actúan como filtros) y un microeletrodo de Pt. Lo único que varia es la
membrana.

La reacción entre la glucosa y la enzima da acido gluconico y H 2O2

El H2O2 a determinado potencial que se aplica, se oxida y genera una señal de
corriente proporcional a la concertación de glucosa.
Cuando se tiene un sistema óptico en ve de microeletrodos hay una fibra óptica
concentrada a una espectrofluorimetro o fotometro y en la membrana hay un
reactivo o colorante que reacción con el producto generando la señal óptica. La
señal viaja por la fibra óptica hasta un P—T.
En resumen:
Los sistemas de reconocimiento pueden ser: membranas sensibles a gases o
membrana sensible a compuestos orgánicos
Los transductores pueden ser: potenciometricos, voltamperom etricos u opticos.

) !


Este método consta de tres pasos: Electrodepocision, redisolución y
determinación mediante barrido lineal de potencial.


c
 
 
  

Es una aplica de voltamperometrica que generalmente se usa para determinar

analitos en trazas. Cuando la concentración es muy baja, aplicando la
voltamperometria común no se lograría determinar.
El último paso corresponde en realidad a la voltamperometria común, así que
se puede decir que la clave de estos métodos consiste en dos pasos
fundamental: la eletrodeposicion y l a redisolución.
 

Se aplica un determinado potencial que logra que se reduzca a los analitos en
disolución (el potencial debe conocerse). Se aplica el potencial y se agita la
solución durante determinado tiempo. Con esto se logra que el ana lito se
preconcentre en las cercanías del electrodo.
!

Una vez preconcentrado el analito se detiene la agitación y s e comienza a
aplicar potenciales cada vez mas negativos. Al ir aplicando esos potenciales las
especies vuelven a disolverse, pero cuando lo hacen, cada una empieza a
oxidarse y al oxidarse genera una corriente que se registra y permite
determinar cuantitativamente la concertación. Se obtiene un grafico de picos
(intensidad de corriente en función del potencial). Los picos tiene un punto
máximo, con ese valor y trabajando con testigo, se puede hacer una curva de
calibrado.
El microelectrodo que se utiliza tiene un plaquita cubierta con una solución de
Hg y es de carbono vitrificado. Se trabaja en un determinado tiempo de
aplicación, el potencial debe conocerse para asegurar que logre reducir a la
especie.
Los gráficos obtenidos son muy claros, lo que permite hacer determinaciones
fácilmente.

Ejemplo:
Si se tiene una mezcla de Pb y Cd, se busca primero el potencial de reducción
de ambos, se preparan testigos con Cd y Pb, juntos, y registrando los picos
máximos se hace la curva de calibrado
Grafico.

£
 
Las técnicas conductimetricas permiten medir la conductividad de una solución
electrolítica y esa conductividad esta dada por todos los iones presentes en la
disolución. Ese valor de conductividad va a depender de todos los iones
presentes en la disolución. Esto quiere decir que dependerá de la movilidad de
los iones cuando se aplica una diferencia de potencial

En esta técnica no interesa lo que ocurra en la interfase electrodo disolución

sino lo que suceda en el sena de la solución cuando se aplica un potencial.
Se hace uso de la ley de ohm s, que sirve para cualquier conductor eléctrico, en
este caso electrolitos disueltos.
La ley dice que la corriente generada o que fluye a traves d e un conductor es
directamente proporcional al potencial aplicado e inversamente propo rcional a
la resistencia que ejercen los electrolitos en disolución. [A]=[V]/[ȍ]. Se puede
usar siempre que los potenciales sean bajos, del orden de 0 a 100 volts.
Si aplicamos potenciales bajos podemos aplicar la ley de ohms para calcular la
conductividad de la especies en disol ución.


c
 
 
  

Cuando se conoce el potencial aplicado y se aplica, los electrolitos se mueven

generando una corriente, la única variable que no se conoce es la resistencia.
A partir de la ley de omhs se puede despejar ese valor de resistencia R=E/i
E: potencial aplicado, i: corriente que ejercen los electrolitos.
El valor de la resistencia R depende de la distancia con que estén ubicados los
dos electrodos y va a depender también del área de los electrodos. (se
estandariza 1 cm de distancia y 1 cm2 de superficie d e electrodo).
Quiere decir que ese valor de resistencia va a estar relacionado con el valor ȡ
(ro) , resistencia especifica.

Quiere decir que cuando se quiere medir la conductividad lo que se esta

midiendo (G= conductividad eléctrica) es la inversa de la resistencia que se
esta generando en el seno de la solución. Reemplazando ro por L/a, queda
G=1/roxA/l, donde 1/ro es k , la conductividad especifica.

La conductividad de una solución depende de varios factores:

x Geometría del electrodo (área y distancia entre ellos)
x Tipos de iones presentes
x Concentración (la conductividad aumenta con la concentración, pero no
indefinidamente, a muy altas co ncentraciones diminuye porque la
electricidad se pierde en roces electroestáticos, fuerzas de van der walls,
etc)
x Temperatura: idem concentración
x Solvente utilizado
x Potencia que se aplique.

£
 da una idea de cómo se mueven los iones al aplicar un
determinado potencial
£
  conductividad de un determinado volumen, un
centímetro cúbico. (es la conductividad que tiene lugar en el centímetro cúbico
de solución que se encuentra entre los electrodos, área 1 cm2, distancia 1 cm)
£
,
 : se representa con la letra lambda mayúscula, ǻ,
indica o expresa la conductividad eléctrica de todos los iones presentes en la
disolución por un gramo equivalente de soluto ǻ=k[1000/C] (concentración por
litro). Cuanto se mueven los electrolitos en un litro de solución.
La conductividad equivalente disminuye con la concentración, en agua y a 25
grados, en otros solventes el comportamiento puede ser diferente.
Este valor también se representa como la suma de la conductividades de las
especies en disolución ǻ=Ȉ Ȝ+ Ȝ-.
En química analítica se trabaja a dilución infinita y esa conductividad
equivalente esta dada por la sumatoria de cada una de las especies en
disolución, pero no interfieren entre si.

La alta contribución de los H y los OH es muy grande ya que tiene un gran

tamaño, una capacidad condu ctora y una movilidad elevada.


 
Se pueden hacer determinaciones directas de conductividad, se puede usar en
varias cosas, por ejemplo:


c
 
 
  

Para conocer la naturaleza de diferentes electrolitos que forman parte de una

sal inorgánica (entre isómeros de la sal), ya que tendrán diferentes
conductividades.
Ayuda a conocer la salinidad o el tipo de sales que componente diferentes
aguas (puede conocerse el tipo de electrolito, cualitativamente al menos) .
Conocer la composición de sal de difer entes matrices (leche, gaseosas, etc

Para hacer estas determinaciones se utilizan celdas como las esquematizadas

en la fotocopia, (a,b y d). Constan de dos recipientes que tiene conectados a
ambos lados los electrodos separados una distancia constante y tienen un área
determinada, generalmente son de platino recubierto de negro de platino.
Se introduce la muestra y el nivel es el mismo (el nivel del volumen, esquema
a), en ese tipo de celda se hace una medida directa (requiere mucha muestra)
Sino se tiene mucha muestra se usa una celda del tip o b que es como copa
invertida que contiene los electrodos. Esta copa se introduce en la muestra (se
usa en mediciones in situ)
La celda d es una celda de flujo, la muestra circula constantemente, los
electrodos tienen forma anular y suelen usarse en cromatografía
Lo importante en estas determinaciones es controlar las variables
operacionales, temperatura, Tipos de iones presentes, Concentración, Solvente
utilizado, Potencia que se aplique.

!

 
Para esta titulación se utiliza una celda como la indicada en el esquema c. los
electrodos están a igual distancia, hay un termómetro para asegurarse una
temperatura constante y una bureta con el agente valorado

Se basa en medir la variación de la conductividad eléctrica de una disolución a

medida que se agregan alícuotas del agente valorado, la conductividad varia
antes y después del punto de equivalencia y la forma de las curva va a variar
en función de los electrolitos en disolución y del tipo de titulación (hay
titulaciones acido base y por precipitación)

Dentro de las acido base están: las de acido y base fuertes, las de acido débil
con base fuerte, las de acido y bases débiles y generalmente se utilizan, como
en potenciometría, cuando la solución presenta turbidez o coloración y no se
puede aplicar un método colorimétrico.
También se usan mucho para determinar las constante de equilibrio de ácidos
o bases débiles
Es importante tener en cuanta que la concentración del agente valorante debe
ser similar o levemente superior a la del analito.

£   
Es una técnica de separación que se basa en separar diferentes analitos que
forman parte de una muestra para pode cuantificarlos posteriormente.
£ !
1    
Teniendo en cuenta como esta formada la fase estacionaria y la fase movil (los
analitos estan en la fase estacionaria) se la puede clasificar en


c
 
 
  

c7£   


En papel y en capa fina. Donde la fase estacionaria se coloca sobre una placa
o papel.
Este tipo de cromatografía ge neralmente se usa para análisis cualitativo.
La fase estacionaria son sólidos, en el caso del papel es un papel de filtro en el
que se siembra la muestra y luego se le hace pasar el solvente que revela la
macha y esta mancha se mide. La capa fina es de vid rio y silica y funcionan de
la misma manera.

#7£   


 
Se divide en
Cromatografía gaseosa : dos tipos CG solida (CGS) y CG liquida (CGL), esta
ultima es mas usada.
En esta cromatografia la fase movil es un gas y la fase movil puede ser un
solido o un liquido impregando en un solido.

£   ,
La fase movil es un liquido y la fase estacionaria es un solido o un liquido que
tiene diferentes propiedades:
x En algunos casos donde la F.E tiene características polares, la
separacion ocurre por un fenomeno de adsorcion
x En otros casos lo solidos son intercambiadores iónicos, dan lugar a la
cromatografia liquida de intercambiadores iónicos
x En otros casos los sólidos son tales que permiten la separecion en
funcion del tamaño de la moléculas, este tipo se denomina cromatografia
liquida de exclusión.
x Otros sólidos san lugar a la cromatografia liquida de adsorción, todo
depende de las características de la FE.

Siempre existe una cierta relación entre ambas fases. El soluto que va a
separarse tiene que tener una determinada constante de distribución entre
ambas fases K=Cs/Cm. La adsorción es un fenómeno de afinidad entre el
soluto y la fase estacionaria.

Lo que se registra es un cromatograma, un grafico que indica como se separan

los componentes de una mezcla en función del tiempo.

Es importante asegurarse una buena resolución de los picos que se van

obteniendo en el cromatograma. Los picos tiene que partir y volver a la línea de
base, con forma de campana de gauss totalmente definida.

El parámetro importante es el tiempo de retención. Con el tiempo de retención

se puede identificar al analito. Para conocer el tiempo de retención de un
analito se le hace un cromatograma a un testigo del analito.
El tiempo de retención es independiente de la cantidad de muestra ingresada y
siempre en un cromatograma cuando comienza la corrida, generalmente,
aparece un piquito chiquito a u n determinado tiempo. Ese tiempo se denomina
³tiempo muerto´ y corresponde a algún analito que no fue retenido.
Generalmente se toma como referencia.


c
 
 
  

Para que exista una buena resolución de los picos, uno tiene que tener en
cuenta algunos parámetros:

 esta variable esta relacionada con la constante de
distribución de cada una de las especies que constituyen la muestra. Brinda
una idea acerca de como cada especie se distribuye en la fase móvil y en la
fase estacionaria. Este parámetro de eficacia de la columna se indica con la
1 m Į-1
letra R= N

4  Į 
L
V= , donde L es la longitud de la columna y Tr el tiempo de retención
Tr
A partir del cromatograma, donde uno conoce Tr y L, puede determinar la
eficacia de la columna.
   !
: este es otro parámetro importante para
lograr una buena separación. Este factor relaciona las constante de distribución
de los distintos analitos. Se le llama Į. Además da una idea de las posiciones
relativas de cada uno de los analitos. También se puede calcular a través del
K (Tr -T )
cromatograma ya que Į= a = a m , Tm, y los tiempos de retención se
K b (Trb -Tm )
obtienen desde el cromatograma.

'  !

 este parámetro tambien es importante para una buena
separación, se puede calcular a partir del cromatograma, su formula es:
1 m Į-1
R=
4
N
 , donde N es el numero de platos teóricos, y Į es el factor de
 Į 
selectividad.
El valor de R según sea, indica el poder de resolución. Por ejemplo R:0.75
muestra picos superpuestos, lo cual no permite sa ber que cantidad de analito.
representa el pico
En cambio un valor mas elevado de R, por ejemplo R:1,5 brinda una buena
resolución.
Un valor R de 1 tampoco da una buena resolución, los picos muestran una
mezcla.
A mayor R mejor es la resolución, para mejorar este valor se puede trabajar
con columnas mas largas, ya que dan mas tiempo de contacto entre el soluto y
la FE. En algunos casos esto mejor la resolución.

En función del tipo de columna (que se compran con determinada fase

estacionaria) uno debe saber elegir el tipo y la longitud para poder hacer una
buena determinación cuantitativa.

£    
Hay de dos tipos:
£   , , CGL, donde la fase móvil es un gas y la fase
estacionaria es un liquido.
£    , CGS, donde la fase móvil es un gas y la fase
estacionaria es un sólido.


c
 
 
  

Esta técnica se usa mucho para la separación de componentes volátiles. Los

analitos deben ser estables a la temperatura necesaria para su volatilización.
La CGS se basa en la separación de los analitos teniendo en cuenta la
diferencia de temperatura de volatilización de cada analito y en la capacidad
que tengan para ser adsorbidos por la fase estacionaria
La CGL se basa en la diferencia de volatilización de cada analito y en la
solubilidad de cada uno en los componentes de la mezcla.

Características que debe tener la muestra para poder se cuantificada por CG.
Los compuestos deben estar en estado gaseoso
No deben descomponerse a la temperatura de separación
No deben descomponerse ni adsorberse en la fase estacionaria (no tienen que
quedar retenidos)
Tiene que ser fácilmente detectables

£    
Tiene un tuvo de gas que contiene a la fase móvil (carrier), tiene válvulas
reguladoras que regulan la salida del gas (flujo constante y conocido)
El gas: debe ser químicamente inerte, su flujo debe ser constante y conocido.
Para elegirlo se tiene en cuenta:
que debe tener una buena afinidad con el analito,
Cual es la fase estacionaria
Que tipo de detector que se utilizara
Teniendo esto en cuenta se elige el gas, generalmente se usan N2, H2, CO2,
He, Ar.

La fase móvil se divide en dos caminos, uno entra a la columna cromatografica

y la otra va directo al detector.
El cromatógrafo tiene además un horno cuya función es termoestatizar la a la
columna, porque es fundamental que la columna donde se produce la
separación tenga la temperatura adecuada, pues de ella depende la
separación.
En uno de los extremos de la columna se encuentra el sistema de inyección de
la muestra, que consiste en una cámara de vaporización instantánea que al
momento de inyectar la muestra (con jeringas o con una válvula de inyección la
muestra se volatiliza enseguida. Una vez volatilizada, ingresa arra strada por la
fase móvil a través de la columna. En es columna se produce la separación y
desde allí van llegando los distintos analitos, se detectan y luego se desechan.

Es fundamental controlar la temperatura de la columna, porque allí se produce

la separación , pero también es muy importante asegurarse que la temperatura
de la cámara de volatilización sea la apropiada
Las columnas son capilares, largos y de diámetro pequeño

Sistemas de inyección
Jeringas: la inyección debe hacerse rápido para una buena reproducibilidad y
resolución. No se usa mas este método.

Válvulas de inyección: un sistema de carga y descarga, loop, y recipiente

pequeño de volumen fijo.


c
 
 
  

( 
( 
.

%(7 
Es el mas común y versátil
Se basa en la capacidad de conductividad eléctrica que tienen la fase móvil.
Esta formada por una quemador o mechero y en la parte superior de ese
quemador tiene un electrodo colector de electrones. Al llegar el gas inerte y el
analito se ionizan y generan electrones que son colectado dando lugar a una
corriente Es una corriente muy débil (10 -10 ± 10-12 A) por lo tanto necesita un
amplificador de corriente. Esa corriente es proporcional a la concentración del
analito
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Este tipo de detector se basa en que un filamento de tungsteno ( W) libera calor
cuando circula a través de el un gas.
El detector tiene una cámara en cuyo interior hay un alambre en forma de
espiral por donde circula corriente. Cuando a través de ese espiral circula el
gas , se ioniza, genera una corriente eléctrica y esta se detecta.

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Este tipo de detector generalmente se usa en instrumentos que se usan para
determinaciones medioambientales (de compuestos como halógenos, algunos
grupos Ar)
El ECD se basa en medir la disminución de la cor riente generada entre dos
electrodos. Entre esos dos electrodos hay una placa de un metal radiactivo,
cuando el gas con el analito atraviesan esa placa el material radioactivo ioniza
al gas generando un flujo de electrones , ese flujo de electrones genera una
corriente que es la que se detecta.

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Tubos o recipientes donde se encuentra la fase móvil: son de materiales inerte,

generalmente vidrio. Los solventes mas utilizados suele ser metanol,
acetonitrilo, cloroformo o mezclas de ellos. Deben ser de muy buena calidad y
no deben interaccionar con la muestra.

Válvulas: permitir y regular la entrada de estos reactivos. La fase móvil debe

fluir en forma continua.

Bombas: generalmente un par, de presión, cuya función es impulsar la fase ovil

en forma controlada hacia una cámara de mezclado (nº4). Allí se mezcla y se
homogeneiza la fase móvil donde llega a una válvulas o sistema de inyección.
Allí convergen la fase móvil y la muestra. Se inyectan pequeños volúmenes de
muestra, que deben ser controlados, debido a que se busca una buena
reproducibilidad. Esa válvula de inyección es semejante a las válvulas
rotatorias vistas en cromatografía gaseosa. Algunos equipos requ ieren una
precolumna para reconcentrar la muestra. Esas columnas (ver fotocopia) de
HPLC son bastante distintas a las de cromatografía liquida convencional. Una
vez que se va produciendo la separación va llegando a un detector. Estos
detectores tienen la característica de tener una microcubeta, de volumen muy
pequeño, que va generando una señal eléctrica a medida que va pasando la


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muestra. Puede ser cualquier detecto r, de cualquier tipo (común, arreglo de

diodos, conductimetrico, etc). La señal de la microc ubeta es registrada por el
PLC o la computadora y se genera un cromatograma , que es igual al de
cromatografía gaseosa (señal versus tiempo).

Colector de fracciones: se utiliza cuando se empela la cromatografía de forma

cualitativa, para separar pero no c uantificar. En este tipo de cromatografía la
temperatura es un parámetro no muy importante. Se trabaja, generalmente, a
temperatura ambiente.

c

Son muy amplias, mucho mas que las gaseosas. Se usa mucho en análisis
farmacéutico, para control de calidad de principios activos, en el campo de
bioquímica y medio ambiente , alimentos, etc. Es una técnica cara por las
columnas y el mantenimiento.

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La cromatografía liquida se basa en la separación de diferentes analitos
presentes en una muestra, teniendo en cuenta la absorción selectiva de cada
uno en la fase estacionaria. En este caso como fase móvil tenemos una fase
liquida y como fase estacionaria generalmente un solido que puede ser:
aluminas, sílices o diferentes resinas de intercambio iónico, que dependiendo
de la relación carga tamaño de la especie, los componentes serán mas o
menos retenidos en la fase estacionaria y esto es lo que va a permitir la
separación de cada analito. Ocurre entre la fase estacionaria y los
componentes de la mezcla diferentes mecanismo que van a permitir la
separación. Estos mecanismo pueden ser absorción, intercambio iónico o un
mecanismo de reparto ente una fase y otra.

Cuando la fase estacionaria es orgánica tiene lugar un proceso de distribución

entre la fase estacionaria y la mezcla que lleva los analitos a separar
Si se usa una resina , esta puede estar cargada y cuando se produce la
separación se produce un mecanismo o reacción de intercambio iónico.
Cuando la fase estacionaria es un líquido que reencuentra soportado sobre un
polímero se produce un mecanismo de distribución o extrusión, dependiendo
de los tamaños de las partículas de esa fase estacionaria.
Es fundamental el tamaño de las partículas de la fase estacionaria

Cuando surgió la cromatografía liquida de alta resolución (HPLC o CLARA). Al

fase móvil es un liquido y la estacionaria es un solido. Se trabaja a elevada
presión (característica fundamental). La fase móvil se hace fluir trabajando a
elevadas presiones. En la convencional la fase móvil fluye por gravedad o
haciendo vacío. Luego apareció la cromatografía liquida de alta presión. Al
aumenta así la velocidad de la fase móvil mejoraron las columnas que se
utilizan. Son columnas de diámetros muy chiquitos (8 -10 ȝm) y una longitud de
20-25 cms. Esto hace que el relleno sean partículas de diámetro muy pequeño
y esto mejora la eficacia de la columna para que tenga una buena resolución.


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Componentes de un cromatógrafo HPLC .

Tubos o recipientes donde se encuentra la fase móv il: son de materiales inerte,
generalmente vidrio. Los solventes mas utilizados suele ser metanol,
acetonitrilo, cloroformo o mezclas de ellos. Deben ser de muy buena calidad y
no deben interaccionar con la muestra.

Válvulas: permitir y regular la entrada de estos reactivos. La fase móvil debe

fluir en forma continua.

Bombas: generalmente un par, de presión, cuya función es impulsar la fase ovil

en forma controlada hacia una cámara de mezclado (nº4). Allí se mezcla y se
homogeneiza la fase móvil donde llega a una válvulas o sistema de inyección.
Allí convergen la fase móvil y la muestra. Se inyectan pequeños volúmenes de
muestra, que deben ser controlados, debido a que se busca una buena
reproducibilidad. Esa válvula de inyección es semejante a las válv ulas
rotatorias vistas en cromatografía gaseosa. Algunos equipos requieren una
precolumna para reconcentrar la muestra. Esas columnas (ver fotocopia) de
HPLC son bastante distintas a las de cromatografía liquida convencional. Una
vez que se va produciendo la separación va llegando a un detector. Estos
detectores tienen la característica de tener una microcubeta, de volumen muy
pequeño, que va generando una señal eléctrica a medida que va pasando la
muestra. Puede ser cualquier detector , de cualquier tipo ( común, arreglo de
diodos, conductimetrico, etc). La señal de la microcubeta es registrada por el
PLC o la computadora y se genera un cromatograma , que es igual al de
cromatografía gaseosa (señal versus tiempo).

Colector de fracciones: se utiliza cuando s e empela la cromatografía de forma

cualitativa, para separar pero no cuantificar. En este tipo de cromatografía la
temperatura es un parámetro no muy importante. Se trabaja, generalmente, a
temperatura ambiente.

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Son muy amplias, mucho mas que las gaseosas. Se usa mucho en análisis
farmacéutico, para control de calidad de principios activos, en el campo de
bioquímica y medio ambiente , alimentos, etc. Es una técnica cara por las
columnas y el mantenimiento.

   

Esta técnica se basa en separar especies cargadas en función de las distintas
velocidades de migración cuando están bajo la influencia de un campo
eléctrico. Para que se pueda llevar a cabo la electroforesis es necesario contar
con un medio de separación o medio electroforetico que tiene la función de
actuar como conductor de la corriente y controlar la carga eléctrica de los
analitos a determinar . generalmente se utiliza como medio electroforetico
soluciones reguladoras o soluciones tampones. Las especies a determinar van
a una determinada velocidad de migración cuando son sometidas a un campo
eléctrico.


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Quiere decir que esta velocidad de migración va a depender de la viscosidad

del medio electroforetico. Ambos dependerán de la magnitud de campo
eléctrico que uno aplique. También dependerá de la carga neta de cada
molécula. A mayor carga mas rápido se moverán hacia los electrodos y va a
depender también del tamaño de esas moléculas (mas pesadas, mas lentas).
Siempre se debe conocer el compuesto con el que se trabaja . originalmente ,
en 1930, aparecieron las primera características de electroforesis y se dividen
en electroforesis libre y de zona.
La libre se basa en utilizar tubos en forma de U y que tenían electrodos
conectados en los extremos. Esos tubos se los rellenaba con una solución
reguladora y se les inyectaba una solución de la muestra, se aplicaba un
campo eléctrico y comenzaban a separarse los componentes de tal manera
que el que tenia mayor velocidad era el primero que uno recogía y separaba.
Este tipo de electroforesis era muy limitada (pocas muestras, proteínas).
Luego apareció la electroforesis de zona, en este caso la movilidad de las
partículas se realiza a través de un compuesto solido impregnado de una
solución tampón que contiene a la m uestra. Como soporte solido se utilizaba
acetato de celulosa, laminas de papel de filtro , algodón , lana de vidrio y allí ,
sobre ese soporte, se aplicaba un campo eléctrico lográndose la separación de
los analitos.
Ese campo eléctrico tiene que ser cont rolado. Si es muy elevado genera un
movimiento de convección en la superficie. Al aumentar la temperatura en esa
zona no se logra separar la especie correctamente y hace que la señal sean
bandas muy anchas.
Por eso estos tipos de electroforesis fueron dej ando de usarse por ser lenta s y
tener muchas desventajas . Así es que surge la electroforesis capilar.

Esta técnica utiliza para la separación tubos capilares que tiene la función de
actuar como celdas electroforeticas . con el empleo de estos tubos capi lares
disminuye notablemente el efecto del movimiento por conveccion y permite
entonces una buena separación de los componentes, en formas mas eficiente y
rápida. La diferencia con la convencional es que la migración o separación de
especies se realiza cando están sometidas a una campo eléctrico de elevado
voltaje.
En los extremos del capilar se encuentran los electrodos , que son los
encargados de generar ese movimiento de migración dentro del capilar. Esa
velocidad de migración depende de la viscosidad de esa solución que depende
de la relación carga/tamaño, del tampón, etc.
A ese tubo , de pequeño diámetro, se le hace una ventana que se coloca cerca
del detector

La velocidad de migración , que depende de estos parámetros, también esta

relacionada con dos fenómenos que ocurren allí dentro la electromigracion y la
electroósmosis.

  

 ocurre debido a ese campo eléctrico aplicado que hace que
las partículas que están cargadas se muevan a una velocidad que es
proporcional al campo eléctrico apli cado. Se la llama velocidad electroforetica.
El campo depende de la longitud de capilar (Lc) y del potencial que uno aplica
(V)[Lc/V] . estas partículas se van separar , van a tener una determinada


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movilidad electroforetica, y esta movilidad electroforetic a esta relacionada con

la relación carga/tamaño de las partículas . se obtienen , haciendo una
electroforesis, un electroferograma. De este se puede conocer las velocidades
electroforeticas y las movilidades electroforeticas de cada especie que luego
permite la cuantificación de la especie. También se pueden obtener el tiempo
de migración de cada especie para después relacionarlo con velocidad y
movilidad electroforetica.
Se define como tiempo de migración al tiempo que tarda el solido en migrar
desde que se inyecta hasta que llega al detector. Va a estar relacionado con la
Lc , longitud del capilar hacia el detector Vd., con el voltaje aplicado y la
velocidad y movilidad electroforetica

 ! este fenómeno se debe a que la acción de un campo

electroforetico , además de moverse, las especies cargadas también se mueve
la solución tampón (solución reguladora.)
Para que ocurra una buena separación tiene que ocurrir los dos procesos.
Electroósmosis dentro del capilar: generalmente los capilares son de teflón y
vidrio y los mas comunes de sílice fundida. Esos capilares de sílice fundida
tiene silanoles (SiOH). Estos silanoles , dependiendo del pH de esa solución
tampón se ionizan dando compuestos cargados negativamente y
positivamente. A medida que circula la solución tampón esas cargas negativas
atraen a las cargas positivas de la solución tampón y se forma primariamente
una capa fija o una capa de adsorcion, sobre esa capa fija se vuelve a formar
otra capaz mas difusa que es una capa móvil , encargada de que cuando se
aplica el potencial , llevar a los componentes de la muestra. Entre esas dos
capas , una fija y otra difusa, se genera por el propio movimiento de las capaz
un potencial denominado potencial Z. este potencial Z va a depender del
espesor de esa doble capa y a su vez la formación de esa doble capa va a
depender del especies en estudio. Como hay flujo también hay una movilidad
electrosmotica, ȝ EO, y lógicamente una velocidad electrosmotica.

Estos parámetros dependen del potencial que uno este aplicando. Para poder
calcular estos parámetros uno lo hace a través de los gráficos de señal en
función de tiempo (electroferograma). De este se puede sacar información
cualitativa o cuantitativa (la llamada screening es cualitativa.)

En este tipo de técnica uno puede aplicar un voltaje de tal manera que las
especies que están cargadas positivamente vayan hacia el cátodo y las que
están cargadas negativamente hacia el ánodo y uno ten el detector ubicado
cerca del cátodo.

También se puede invertir el pot encial y de esa manera colocar el capilar cerca
del ánodo. Se invierte el voltaje y el flujo de las especies. Las cargadas
positivamente al electrodo positivo y las cargadas negativamente al negativo (lo
normal es al revés). Dependiendo del fin de uso así se logra una separación ,
sobre todo cuando el pH es muy acido.

Convencionalmente el positivo a negativo y viceversa. Esto es a pH>4 y el

potencial aplicado es normal. entonces se aplica un potencial inverso de tal
manera que el positivo vaya al positivo y el negativo al negativo, a pH<4.


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Es fundamental controlar:

x pH de la solución tampón
x La fuerza iónica de la solución tampón (si es muy alta el flujo
electrosmotico disminuye, suelen usarse buffers con fuerza iónica
intermedia).
x Temperatura de trabajo: ge neralmente se trabaja a temperatura
constante, que puede variar entre 15 y 25 ºC

—anteniendo constante la temperatura se evita el efecto joule.

/ : aumento de temperatura en el capilar, que genera un
movimientote conveccion haciendo que aumente el flujo electrosmotico.

El capilar debe ser bien seleccionado

Cuanto menor es el diámetro del capilar favorece la resolución de los picos y
meno es el efecto joule que puede ocurrir adentro
Voltaje: voltajes adecuado, del orden de los Kvolts, generalment e a mayor
voltaje mayor separación.
Generalmente las fuentes de voltaje van de 5 a 30 Kvolts
Introducción de la muestra al capilar: la muestra puede ingresarse de dos
formas:


1!
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 aplicando presión sobre el capilar inyectado un
determinado volumen de muestra o mediante una bomba de vacío, que
provoca un efecto de succión o por simple gravedad.


1!
 
) : aplicar un determinado voltaje durante un t iempo
muy corto. Se programa el equipo para que aplique el voltaje y esto permite el
ingreso de la muestra al capilar.

Una vez que ingreso la muestra al capilar, esta circula dentro del capilar con la
solución buffer, llega al detector donde se registra la señal . el detector puede
ser un detector óptico, cualquiera de los vist os, o un detector electroquímico o
un conductimetrico.