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Bioquímica Lehninger CAPITULO 02

Bioquímica Lehninger CAPITULO 02

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CAPiTULO

TABLA 2-1. Calores de vaporizaci6n de algunos liquidos corrientes en sus puntos de ebullici6n (1.0 atm}.

Liquido sn.;
cal 9-1
Agua 540
Metanol 263
Etanol 204
n-Propanol 164
Acetona 125
Benceno 94
Cloroformo 59 2

EI agua

El agua no solamente constituye del 70 al 90 por ciento del peso de la mayor parte de las formas vivas, sino que repre~ senta la fase continua de los organismos. A causa de su abundancia y ubicuidad el agua es considerada, con Irecuencia, UI]. liquido inerte. meramente destinado a Ilenar espacios en los organism os vivos. Pero, en realidad, el agua es una sustancia de gran reaccionabilidad. con propiedades poco Irecuentes, que la diferencian mucho, tanto Iisica como quimicamente, de la mayoria de los liquidos corrientes. Sabemos ahora que el agua y los productos de su ionizacion, los iones hidrogeno e hidroxilo, son factores iraportantes en la determinacion de la estructura y las propiedades bioloqicas de las proteinas, de los acidos nucleicos, asi como de las membranas, de los ribosomas y de otros muchos componentes celulares.

Propiedades fisicas y enlace de hidroqeno en el agua

El agua posee un punto de fusion, un punto de ebullicion, el calor de vaporizacion y el de fusion y la tension superficial. mas elevados que otros hidruros comparables, tales como el H2S 0 el NH3, 0 para el caso, que la mayor parte de los liquidos corrientes. Todas estas propiedades indican que en el agua las Iuerzas de atraccion entre las moleculas y, por tanto, su cohesion interna, son relativamente elevadas. Por ejemplo, la tabla 2~1 muestra que e1 calor de vaporizacion del agua es considerablemente mayor que el de cualquier otro de los liquidos corrientes de la lista. El calor de vaporizacion

. es una medida directa de la cantidad de energia necesaria para superar las Iuerzas de atraccion entre las moleculas adyacentes en un liquido, de modo que las moleculas individuales puedan separarse unas de otras y pasar al estado gaseoso.

Las potentes fuerzas intermoleculares en el agua Iiquida estan originadas por la distribucion especifica de los electrones en la molecula de agua (fig. 2~1). El atomo de oxigeno com parte un par de electrones con cada uno de los atomos de hidroqeno, por superposicion de los orbitales Is de los atomos de hidroqeno con los orbitales hibridos Sp3 del atomo de oxigeno. Mediante analisis espectroscopico y de rayos X se ha determinado el anqulo de enlace H~O-H, que es de 104,50 y la distancia interatomica media H~O que es

41

PARTE 1 COMPONENTES MOLECULARES DE LAS CELULAS

0.0965 nm (fig. 2~1). Esta disposicion de electrones en la molecula del agua le comunica asimetria electrica, El atomo de oxiqeno, mas electronegative. tiende a atraer los electrones no compartidos del atomo de hidroqeno, y deja desnudos los nucleos de hidroqeno. El resultado es que cada uno de los dos atomos de hidrogeno posee una carga local parcial positiva (designada por 8+). El atomo de oxiqeno, a su vez, posee una carga local parcial negativa (designada por 8-). situada en la zona de los orbitales no compartidos. Asi. aunque la molecula de agua no posee una carga neta, es un dipolo electrico.

Cuando dos moleculas de agua se aproximan mucho, se establece una atraccion electrostatica entre la carga parcial negativa situ ada sobre e1 atomo de oxigeno de la molecula de agua y la carga parcial positiva situada sobre un atomo de hidroqeno de una molecule de agua adyacente. Ello va acompafiado por una redlstribucion de las cargas electronicas en ambas moleculas, 10 cual exalta en gran medida su interaccion. Una union electrostatica compleja de esta clase se llama enlace de hidroqeno, Debido a la ordenacion casi tetraedrica de los electrones alrededor del atomo de oxiqeno, cada molecula de agua es potencialmente capaz de unirse mediante enlaces de hidroqeno con cuatro moleculas de agua vecinas (fig. 2~2). Esta propiedad es la responsable de la elevada cohesion interna del agua liquida.

Los enlaces de hidroqeno son relativamente debiles comparados con los enlaces covalentes. Se calcula que los enlaces de hidroqeno en el agua liquida poseen solamente una energia de enlace de unas 4.5 kcal mol:', en comparacion con las' 110 kcal mol! de los enlacesjcovalentes H-O de la molecula de agua (tenqase en cuenta que la energia de enlace es la energia necesaria para rom per un enlace). Otra propiedad importante de los enlaces de hidroqeno es que su fortaleza

FIGURA 2-2

(Abajo) Enlace tetreedrico de hidroqeno elrededor de una molecule de agua en

el hielo. Las molecules 1 y 2 y la molecule central se hallan en el plano del papel; la molecule 3 se halla

pot encima de el, y la molecule 4, detres del plano. (Derecha) Dteqreme esquemetico del teticulo de molecules de agua en el hielo,

42

FIGURA 2-1

Molecula de agua. El bosquejo del modelo espacial represenie el confin en

el que las etrecciones de van del' Waals esten equilibredes pot las [uerzes de repulsion. Se muestra mas abajo

un modelo cristalografico, 0 de bolas

y verilles, de la molecule de agua con el angulo de valencia y le longitud.

Radio de van der

Waals del atomo de hidroqeno = 0.12 nm -Longitud del enlace

covalente = 0.0965 nm

Radio de van der . Waals del atomo de oxigeno = 0.14 nm

Dlreccion del momenta dipolar

FIGURA 2-3

Caracrer direccionel de. los enlaces de hidroqeno, (Arriba) Cuando el enlace O-H es lineal respecto al Momo eceptor, el enlace de hidroqeno [ormedo tendre

la maxima estabilidad. (Abajo) Cuando

el oxigeno aceptor no se halla sobre el vector electrico del enlace O-H, se forma uri enlace de hidtoqeno mas debil.

H" ° I

!

/0"

° 7/ "H

/0"

Capitulo 2 EI agua

es maxima cuando los dos grupos que interaccionan se hallan orientados de modo que proporcionen el maximo de atraccion electrostatica (fig. 2~3). Tambien los enlaces de hidroqeno poseen una longitud de enlace caracteristica, la cual difiere de un tipo de enlace de hidroqeno a otro, que depende de la geometria estructural y de la distribucion electronica en las moleculas unidas. En el hielo, por ejemplo, todas las moleculas de agua se hallan unidas mediante enlaces de hidroqeno: la longitud del mencionado enlace es de 0,177 nm (fig. 2~2).

Estructura del agua liquida

El establecimiento de puentes de hidroqeno entre las moleculas de agua no sucede solamente en estado liquido, sino tarnbien en el hielo y en la fase de vapor. En la forma cristalina mas corriente del hielo, conocida como hielo I, cada molecula de agua se halla unida mediante enlaces de hidroqeno a exactamente las cuatro moleculas de agua mas proximas, constituyendo una red regular, y la distancia media oxiqeno-oxiqeno es de 0,276 nm. En el agua liquida cada molecula de agua a 0 °C se halla unida en cualquier momento dado, por termine medic, a otras 3,6 moleculas de agua; la distancia media oxiqeno-oxiqeno es solo ligeramente mayor que en el hielo, cerca de 0,29 nm a 15°C y 0,305 nm a 83°C. Se ha calculado, a partir del calor de fusion del hielo, que cuando este se funde para producir agua a 0 °C solamente se rompen el 10;% de los enlaces de hidroqeno del hielo. Asi el agua uquida presenta una ordenacion considerable en un radio pe~ queiio aunque esta estructuracion no se extiende a gran distancia. El agua liquida esta aun altamente ligada por puentes de hidroqeno a 100 "C, como se desprende de sus altos calor de vaporizacion y constante dielectrica.

La pequefia diferencia que existe entre el agua liquida y el hielo en cuanto a la proporcion de enlaces de hidroqeno puede parecer sorprendente si se considera la rigidez del hielo y la fluidez del agua. Parte de la explicacion reside en la muy elevada velocidad con que se forman y se escinden los enlaces de hidroqeno en el agua liquida. Aunque en un instante dado la mayor parte de las moleculas del agua liquida se hallan unidas mediante enlaces de hidroqeno, la vida media de cada uno de los enlaces de hidroqeno es solamente de 10-11 S. La estructura de corto radio del agua liquida es, por tanto, estadistica, ya que es promediada tanto en el espacio como en el tiempo. Por consiguiente el agua liquida, a la vez que es fluida, se halla tambien altamente dotada de enlaces de hidroqeno.

Se han propuesto muchos modelos para la estructura del agua liquida, aunque ninguno de ellos ha sido comprobado experimentalmente. Los modelos mas sencillos sugieren que el agua liquida esta constituida por agrupaciones de moleculas de agua semejantes al hielo, en equilibrio labil con moleculas de agua libres. Otros modelos proponen que el agua liquida contiene tres 0 mas tipos de componentes unidos por enlaces de hidroqeno. Un nuevo tipo, el modelo continuo, suqiere que aunque la gran mayoria de los enlaces de hidroqeno existentes entre las moleculas de aguaen el hielo a 0 °C permanecen sin romperse cuando se funde el hielo, experimentan, sin embargo, distorsiones; es decir, propenden a diferentes anqulos desde la confiquracion lineal mas estable mostrada en la fi-

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PARTE 1 COMPONENTES MOLECULARES DE LAS CELULAS

gura 2~3. Cuanto mayor es la temperatura del agua Iiquida, mayor es la dis torsion y la inestabilidad. En este modele, las propiedades individuales de vida corta de las moleculas de agua, aunque poseen estas gran proporcion de enlaces de hidroqeno, se desvian siqnificativamente de la estructura reticular cristalina del hielo. Esta claro que la prosecucion de las investigaciones acerca de la estructura del agua liquida sera del mayor Significado para la bioquimica y la biologia molecular.

Otras propiedades de los enlaces de hidroqeno

Los enlaces de hidroqeno no se presentan solamente en el agua. Tienden a formarse entre cualquier atomo electronegativo como el oxigeno, el nitroqeno 0 el fluor, y un atomo de hidroqeno unido covalentemente a otro atomo electroneqativo. Los enlaces de hidroqeno pueden formarse entre dos moleculas 0 entre dos partes de una misma molecula. En la figura 2A aparecen algunos ejemplos de enlaces de hidroqeno biologicamente importantes.

Cuando dos moleculas estan unidas por un solo enlace de hidroqeno, el enlace sera muy debil en un sistema acuoso porque las moleculas de agua circundantes competiran para formar enlaces de hidroqeno con las moleculas de soluto. No obstante, cuando resulta posible el establecimiento de dos 0 mas enlaces de hidroqeno entre dos moleculas de soluto, por razones geometricas el establecimiento del primer enlace de hidroqeno incrementa grandemente la posibilidad de que se forme el segundo. Una vez se ha establecido este, se incre-menta la probabilidad de que se forme un tercero, y asi sucesivamente, conduciendo a una" asociacion muy fuerte entre las dos moleculas de soluto, las cuales pueden superar los efectos de competencia de las moleculas del agua. La intensificacion de la Iuerza de at rae cion entre dos moleculas por la cooperacion de muchos enlaces debiles se llama cooperetioided.

El enlace de hidroqeno cooperative es una caracteristica exhibida tanto por las proteinas (pag. 132) como por los acidos nucleicos (pag. 877), cuyas moleculas pueden contener docenas, centenares y aun millares de enlaces de hidrogeno cooperativos. La cooperatividad del enlace de hidroqeno en las macromolecules bioloqicas depende de las posiciones relativas de los grupos funcionales capaces de Iormar enlaces de hidrogeno. Es algo parecido a la construccion de una escalera. Una vez se han colocado uno 0 dos travesaiios en su lugar, de modo que las guias laterales se hallen alineadas, el resto de los travesaiios puede fijarse rapidamente.

Los enlaces de hidroqeno se forman y se rompen mucho mas rapidamente en los sistemas acuosos que la mayor parte de los enlaces covalentes. Este hecho, junto con su especificidad geometrica y su caracter direccional, proporciona a los enlaces de hidroqeno una gran ventaja bioloqica sobre los enlaces covalentes en los Ienomenos biomoleculares que deben producirse a velocidades muy elevadas, tales como el pleqamiento de las proteinas en sus con formaciones nativas (paginas 146 y 147).

Propiedades disolventes del agua

El agua es un disolvente mucho mejor que la mayor parte de los Iiquidos corrientes. Muchas sales cristalizadas y otros

FIGURA 2-4

Algunos enlaces de hidr6geno de importancia biol6gica.

Entre un grupo hldroxilo y H20

Entre un grupo carbonilo y H20

Entre dos cadenas peptidicas

R" /R' C

II

o

Ii

I

0"

H

R R

I I

~CH" /C~ C H

II

o

I'I

I

»<. H /N" »<.

C C

I II

R 0

Entre pares

de bases H

compiementarias I

en el DNA <, /C"'" /CH.

N C

I I

C C

0-:::" 'N./ ""0

I H

Timina

H

: I

H" ./N"" ./N-H C """c

II I

N" -:::"C,

C N

\ 1/

N-CH

/

Adenina

TABLA 2-2. Constantes dlelectricas de algunos liquidos a 20°C.

Liquido D
Agua 80
Metanol 33
Etanol 24
Acetona 21.4
Benceno 2.3
Hexano 1.9 FIGURA 2-5

Formecion de una micela de jab6n en agua. Las cadenas no poleres del oleato sodico se oculten al agua, mienires que los grupos cerboxilo, cerqedos neqetivemente, se hal/an expuestos.

Cabeza [-0 0

polar "C-f'

/ CH,

"CH / ' CH,

"CH / '

C~,

/CH2 CH, "CH II /CH CH, "CH / 2

CH,

"CH / ' CH,

-,

/CH,

CH2

"CH3

no polar

Simbolismo

r Cabeza

Cadena

Cadena

Oleato sodico

Micela de oleato sodico

Capitulo 2 El agua

compuestos ionicos se disuelven con facilidad en el agua, mientras son casi insolubles en los liquidos no polares, tales como el cloroformo 0 el benceno. Puesto que la red cristalina de las sales, por ejemplo el cloruro sodico, se mantiene unida mediante fuertes atracciones electrostaticas entre iones positivos e iones negativos alternantes, se necesita de una energia considerable para separar a estos iones unos de otros. El agua disuelve, no obstante, el cloruro sodico cristalizado, gracias a las fuertes atracciones electrostaticas entre los dipolos del agua y los iones Na' y Cl, que forman los iones hidratados correspondientes, muy estables, y superan con ello la tendencia de los iones Nat y Cl- a atraerse mutuamente.

El agua tiende tambien a oponerse a la atraccion electrostatica entre los iones positivos y negativos. Esta tendencia. viene expresada por la constante dielectrice, D, definida por la relacion

en laque F es la fuerza de atraccion entre dos iones de carga opuesta, el Y ~ son las cargas de los iones y t es la distancia entre ellos. Como puede verse en la tabla 2~2. el agua posee una con stante dielectrica relativamente alta y la correspondiente al benceno es muy pequefia. Las fuerzas de atraccion en el agua entre los iones Nat y Cl': a una determinada distan cia, son solamente un catorceavo de las que mostrarian en el benceno; es un factor que favorece mucho la disolucion de la red cristalina por el agua.

Una amplia segunda clase d,,:! sustancias que se disuelven en el agua con Iacilidad, comprende compuestos no ionicos pero de caracter polar, tales como los azucares, los alcoholes sencillos, los aldehidos y las cetonas. Su solubilidad se debe a la tendencia de las moleculas de agua a establecer enlaces de hidrogeno con grupos funcionales polares, tales como los grupos hidroxilo de los azucares y de los alcoholes y el atomo de oxigeno del grupo carbonilo de los aldehidos y de las cetonas (fig. 2~4).

Interacciones hidrof6bicas

El agua tambien dispersa 0 solubiliza forman do micelas a muchos compuestos que contienen grupos simultaneos, Iuertemente no polares y grupos fuertemente polares. Tales moleculas reciben eI nombre de an[ipitticas.

Un ejemplo sencillo de biomolecula anfipatica que tiende a formar micelas es la sal sodica del itcido oleico, acido graso de cadena larga. Esta molecula posee un solo grupo carboxilo, que es polar y tiende por ello a hidratarse con Iacilidad, y una larga cola hidrocarbonada, que es no polar e intrinsecamente insoluble en el agua. Debido a su larga cola hidrofobica. el oleato sodico (un jabon ) tiene muy poca tendencia a disolverse en eI agua en forma de una disolucion molecular verdadera. Se dispersa en ella con facilidad, sin embargo, con formacion de micelas en las que los grupos carboxilo neqativamente cargados se haIIan expuestos a la fase acuosa y los grupos no polares permanecen ocultos dentro de la estructura micelar (fig. 2~5). Las micelas de jabon poseen una carga negativa neta y permanecen en suspension debido a sus mu-

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PARTE 1 COMPONENTES MOLECULARES DE LAS CELULAS

tuas repulsiones de naturaleza electrostatica. Tales micelas, que pueden contener centenares y aun millares de moleculas de jabon, se forman espontaneamente ya que el agua «pre~ Here» al agua (y tamhien a los grupos carboxilo) mas que a las estructuras no polares. En el interior de las micelas las interacciones de Van der Waals' aport an fuerzas de atraccion adicionales entre las estructuras hidrocarbonadas adyacentes.

Debe resaltarse que no existe un enlace estequiometrico verdadero entre los grupos hidrocarbonados de una micela. Por dicha razon resulta mas apropiado emplear el termino interaccion hidrofobica que el de «enlace hidrojobico», para reterlrse a Ia asociacion de las porciones hidrofobicas de las moleculas anfipaticas. En comparaci6n con los enlaces de hidr6geno, las interacciones hidrofobicas poseen poco caracter direccional, pero tienden a producir sistemas de e1evada estabilidad.

Como veremos mas adelante, otros muchos componentes celulares son tambien anfipaticos y tienden a Iormar estructuras en las que las partes no polares, hidrofobicas, se hallan ocultas al agua, especialmente en las proteinas y en los acidos nucleicos (pag. 145) y en los lipidos polares (pag. 294).

Efecto de los solutos sobre las propiedades del agua

La presencia de solutos disue1tos provoca cambios en la estructura y en las propiedades del agua liquida. Por ejemplo, cuando una sal tal como NaCl se disuelve en el agua, los iones Na+ y Cl, se hallan redeados de una cap a de dipolo del agua. Estos iones hidratados poseen una geometria algo diferente de las agrupaciones de moleculas de agua unidas mediante enlaces de hidr6geno; su ordenacion superior y de estructura es mas regular. La tabla 2~3 muestra las distancias interi6nicas medias en disoluciones acuosas de NaCl en funci6n de la concentracion de la sal. Observamos que cuando la concentraci6n de NaCl es 0,15 M, que es la concentraci6n aproximada del NaCI en el plasma sanguineo (y la de sales de K+ en el citoplasma celular ) los iones Nat y CI- tienen por termino medio una separaci6n de 1,9 nm solamente. Puesto que cada ion Na" y Cl hidratado posee un diametro de 0,5 a 0,7 nm y un agrupamiento tetraedrico de cinco moleculas de agua tiene un diametro de aproximadamente 0,5 nm, esta claro que debe haber un cambio considerable en la estructura tridimensional y en las propiedades del agua liquida cuando se disuelve NaCI en ella a la con centra cion aproximada con que se encuentra en los fluidos biol6gicos. Las sales disueltas tienden, por tanto, a «romper» la estructura normal del agua liquida.

EI efecto de un soluto sobre el disolvente se maniflesta en otro conjunto de propiedades, a saber, las propiedades coli~ gativas de las disoluciones, las cuales dependen del numero de particulas del soluto por unidad de volumen del disolvente. Los solutos producen efectos caracteristicos en el disolvente tales como el descenso del punto de conqelacion, la elevaci6n del punto de ebullici6n y la disminuci6n de la presi6n de vapor. Confieren tarnbien a la disoluci6n la propiedad de la presion osmotica. EI peso molecular gramo de un soluto ideal, no asociado ni disociado, no volatil disuelto en 1000 9 de

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TABLA 2-3. Distancias interi6nicas medias en disoluciones de NaCI.

Concenirecion, M Distencie, nm

0.001 9,4

0.010 4.4

0.10 2,0

0.150 1,9

1.00 0,94

FIGURA 2-6

Forma hidratada del ion hidronio (H,O.+). La capa de hidretecion es estable a 100°C.

Tj\BLA 2-4. Movilidad electrica de algunos cationes a diluci6n infinita (25°C).

Ion Movilidad. em' V-I S-I

H+ Na+ K+ NH.+ Mg'+ Li+

36,3 X 10-' 5,2 X 10-4 7,6 X 10-' 7,6 X 10-4 5,4 X 10-4 4,0 X 10-'

FIGURA 2-7

Saltos ptotonicos. Las [leches curvadas muestran el camino seguido por los protones en saltos sucesivos desde un ion hidronio a una molecule de agua.

En el agua liquide los saltos se producen al azar en el espacio; en el hielo se producen junto a los enlaces de hidroqeno, La ultima molecule H20 (en color) se transform a en lin ion hidronio al final

de la serie de saltos.

Capitulo 2 El agua

agua a la presion de 760 mm de mercurio, provoca un descenso del punto de conqelacion de 1,86 °C y eleva el punto de ebullicion en 0,543 °C. Tal disolucion muestra tambien una presion osmotica de 22,4 atmosferas en un aparato apropiado (cap. 7). Puesto que las disoluciones acuosas se desvian habitualmente de modo considerable del comportamiento ideal, las relaciones mencionadas solo son cuantitativas a dilucion infinita; es decir, por extrapolacion a con centra cion cero del soluto.

Ionizaci6n del agua

A causa de la pequefia masa del atomo de hidroqeno, y dado que su iinico electron se halla fuertemente retenido por el atomo de oxigeno, hay una tendencia limitada del ion de hidroqeno a disociarse del atomo de oxigeno al que se halla unido covalentemente en una molecula de agua y a «saltar» al atomo de oxigeno de la molecula de agua adyacente a la cual se halla unido por enlace de hidroqeno, supuesto que la energia interna de cada molecula sea favorable

En esta reaccion se producen el ion hidronio (H30+) y el ion hidroxilo (OH-). En un litro de agua pura, a 25oC, en un momenta dado existen solamente 1,0 X 10-7 mol de iones H30+ y una cantidad igual de iones OH-, sequn muestran las medidas de conductividad electrica.

Aunque par convene ion , se emplea el simbolo H+, con objeto de abreviar, debe recalcarse que en el agua no existen protones «desnudos» 0 iones hidroqeno, en cantidad siqnificativa; se hallan solamente en forma hidratada. El propio ion hidronio, H30+, se hidrata posteriormente, por Iormacion de enlaces de hidroqeno adicionales con e1 agua para formar H904+, asi como formasde hidratacion mas elevada (fig. 2~6). El ion hidroxilo se halla tambien hidratado en el agua liquida.

Vemos en la tabla 2A que la velocidad de emiqracion aparente de los iones H30+ en un campo electrico es muchas veces superior a la de los cationes univalentes Na+ 0 K+. Esta anomalia es debida a que un proton puede saltar muy rapidamente desde un ion hidronio hasta una molecula de agua vecina, a la que se une par enlace de hidr6geno. Asi, una carga electrica positiva puede desplazarse una determinada distancia desde una molecula de agua a otra con poco movimiento de las propias moleculas de agua. Una serie de tales saltos protonicos tiene el efecto de translocalizar los protones a una velocidad que es mucho mayor que la velocidad de difusi6n, a movimiento global de los iones H30+ por si mismos (fig. 2~7). Los saltos protonicos a 10 largo de las moleculas de agua inmovilizadas en la red cristalina del hielo son los responsables de que el hielo, a pesar de su rigida estructura, posea casi la misma conductividad electrica que el agua liquida. La conducci6n de protones a traves de las moleculas de agua unidas por enlace de hidroqeno, llamada efecta timet puede ser un Ienomeno importante en los sistemas bioloqicos.

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PARTE 1 COMPONENTES MOLECULARES DE LAS CELULAS

Producto i6nico del agua: escala de pH

La disolucion ionic a del agua es un proceso de equilibrio:

para el cual podemos escribir la constante de equilibrio

en las que los corchetes indican las concentraciones en moles por litro. La magnitud de esta constante de equilibrio, a cualquier temperatura dada, puede calcularse a partir de las medidas de conductividad del agua destilada. Puesto que la concentracion del agua, en el agua pura, es muy elevada (es igual al mimero de gram os de agua en un litro divididos por el peso molecular gramo, 0 sea 1000/18 = 55,5 M) y la concentra cion de iones H+ y OH- es muy pequefia (1 X 10-7 M a 25°C) la concentracion molar del agua no cambia siqnificativamente por su ligerisima ionizacion. La constante de equilibro puede simplificarse a la ex presion siguiente:

y el termino 55,5 X Keq puede sustituirse por una constante «global» Kw, Hamada producto i6nico del agua,

El valor de K; a 15°C es de 1,0 X 10-14• En una disolucion acida ila con centra cion H+ es relativamente elevada y la de OH- correspondiente baja; en una disolucion basica la situacion se invierte.

El producto ionico del agua, Kw, constituye la base para la escala de pH (tabla 2~5), que es un medio de designar la concentracion real de iones H+ (y por tanto de iones OH-) en cualquier disolucion acuosa en el intervalo de acidez entre las concentraciones 1,0 M de H+ y 1,0 M de OH-. La escala de pH fue ideada por el bioquimico danes S. P. L. Serensen como medio de evitar mimeros engorrosos tales como 0,0000001 0 1.0 X 10-7 para expresar las bajas concentraciones de ion hidroqeno de los fluidos bioloqicos. Definio el termino pH como

En una disolucion neutra a 25°C

[W] = [OH-] = 1,0 X 10-7 M

El pH de tal disolucion es

1

pH= log 1 X 10-7 = 7,0

El valor de 7,0 para el pH de una disolucion exactamente neutra no es, por tanto, una cifra escogida de manera arbitraria; deriva del valor absoluto del producto ionico del agua a 25°C. Resulta muy importante observar que la escala de

48

TABLA 2-5. Escala de pH.
[H+] [OH-]
(M) pH (M)
1.0 0 10-14
0,1 I 10-13
0,01 2 10-12
0,001 3 10-11
0,0001 4 10-1•
0,00001 5 10-'
10-' 6 10-'
10-7 7 10-7
10-' 8 10'"
10-' 9 10-'
10-1• 10 10""
10-11 II 0,001
10-12 12 0,01
10-13 13 0,1
10-14 14 1.0 TABLA 2-6. pH de algunos Iluidos.

Fluido

pH

Agua de mar (dlversas] Plasma sanguineo Fluido intersticial Fluidos intracelulares

Musculo Higado

J ugo gastrico Jugo pancreiitico Saliva

Leche de vaca Orlna

Zumo de tomate Zumo de pomelo Refresco a base de cola Zumo de limon

7,0-7,5 7,4

7,4

6,1

6,9 1.2-3,0 7,8-8,0 6,35-6,85 6,6

5,8

4,3

3,2

2,8

2,3

FIGURA 2-8

Pares conjugados ecido-besicos del ecido ecetico, del ion amenia y del agua.

Dador de protones

Aceptor de protones

Capitulo 2 El agua

pH es logaritmica. Decir que dos disoluciones difieren en su pH en una unidad siqnifica que una disoluci6n posee una concentraci6n de iones hidr6geno diez veces superior a la de la otra. La tabla 2~6 muestra el pH de algunos fluidos.

Medida del pH

La determinacion del pH es uno de los procedimientos analiticos mas importantes y mas utilizados en bioquimica, ya que el pH determina much as caracteristicas notables de la estructura y la actividad de las macromoleculas bioloqicas v, por tanto, de la conducta de las celulas y de los organismos. El patron primario para la medida de las concentraciones del ion hidrogeno (y por tanto del pH) es el electrodo de hidroqeno. Es este un electro do de platino tratado especialmente y que se sumerge en la disolucion cuyo pH se va a medir. La disolucion se hall a en equilibrio con el hidroqeno gaseoso a una presion y una temperatura conocidas. La Iuerza electromotriz en el electrode responde al equilibrio

H2 :;:==:: 2H+ + 2e-

Se mide la diferencia de potencial entre el electrode de hidrogeno y un electrode de referencia de conocida fern (p. ej., un electrode de. calomelanos}, y se utiliza para calcular la concentracion de ion H+.

El electrode de hidroqeno resulta demasiado engorroso para un empleo general y se ha sustituido por el electrode de oidrio, que es directamente sensible a la concentracion de ion H+, en ausencia de hidroqeno gaseoso. "La respuesta del electro do de vidrio debe calibrarse frente a tampones de pH conocido con precision. Otro metodo de medir el pH se basa en el empleo de indicadores acido-basicos (vease mas adelante).

Acidos y bases

Las definiciones mas generales y concisas de acidos y bases, aplicables a disolventes no acuosos y tambien a los sistemas acuosos, son las de G. N. Lewis. Un acido de Lewis es un aceptor de pares electronicos potencial, y una base de Lewis es una sustancia que puede actuar como dadora de pares elec~ tronicos. El formalismo introducido por J. N. Bronstecl y T. M. Lowry es utilizado mas ampliamente en la descripcion de las reacciones acido-basicas en sistemas acuosos diluidos. De acuerdo con los conceptos de Bronsted-Lowry, un acido es un dador de protones y una base un aceptor de proto~ nes (fig. 2~8). Una reaccion acido-basica comprencle siempre un par ecido-besico conjaqedo, constituido por un dador de protones y el correspondiente aceptor de protones. Por ejemplo, el acido acetico (CHyCOOH) y el anion acetate (CH3~COO-) forman un par conjugado acido-basico.

La ecuacion para la disociacion 0 ionizacion de un acido (HA) en disolucion acuosa diluida implica la transferencia de un proton desde el acido al agua, la cual puede actuar como aceptor del proton y forma el acido H30+:

Cada base conjugada posee una afinidad caracteristica para su proton; los que muestran una afinidad elevada por el pro-

49

PARTE 1 COMPONENTES MOLECULARES DE LAS CELULAS

ton son acidos debiles y solo se disocian muy ligeramente; los que muestran una afinidad pequefia son acidos fuertes y pierden iones H+ con facilidad. La tendencia de cualqUler acido a disociarse viene dada por su constante de disociacion. Para el acido HA la constante de clisociacion a una temperatura determinada es

_ [W][A-] K - [HA][H20]

en la que los corchetes indican las concentraciones expresadas en moles por litro. Es una convencion el simplificar la expresion eliminando el agua que se precis a para la hid rata cion del proton:

[WJ[A-l K= [HAl

Constituye tambien una convencion, en bioquimica, emplear las constantes de disociacion basadas en la medida analitica de las concentraciones de los reactivos y de los productos, en unas determinadas condiciones experimentales: es decir, para una con centra cion total y fuerza ionica determinadas y especificando los demas solutos. Esta constante recibe el nombre de constante de disociacion aparente y se designa por K', para distinguirla de la verdadera constante de disociacicn K, 0 constante de disodacion termodinamica empleada por los quimico~£isicos, la cual esta corregida para la desviacion del sistema de la conducta ideal provocada por factores tales como la concentracion y la fuerza ionica.

Las constantes de disociacion aparentes de algunos acidos y bases figuran en la tabla 2~7. Observese que, en la Formulacion de Bronsted-Lowry, los acidos y las bases son tratados de modo semejante, es decir, unicamente representando la tendencia de los protones a disociarse de las especies dadoras de protones. (Las llamadas constantes basicas de disociacion, tales como Ki, para la disociacion del NH40H ~ NHt + OH-, no se emplean. En realidad, seqiin la Iorrnulacion de Bronsted-Lowry, el NH40H no es ni un acido ni una base.) La tabla 2~7 contiene tambien los valores

TABLA 2-7. Constante de disociaci6n aparente y p1{' de algunos acidos (25°C).

Acido K'
(dador de ptotones] (M) pK'
HCOOH 1.78 X 10-' 3,75
CH,COOH 1.74 X 10-5 4.76
CH,CH,COOH 1.35 X 10-5 4,87
[acido propi6nico)
CH,CHOHCOOH 1.38 X 10-4 3.86
[acido Iactlco)
COOHCH,CH,COOH 6,16 X 10-5 4.21
(actdo succinico)
COOHCH,CH,COO- 2.34 X 10-' 5.63
H,PO, 7.25 X 10-3 2.14
H,PO,- 6.31 X 10-' 7,20
HPO/- 3.98 X 10-13 12.4
H,C03 1,70 X 10-' 3.77
HC03- 6.31 X 10-11 10,2
NH/ 5.62 X 10-1• 9,25
CH3NH,+ 2.46 X 10-11 10.6
50 Capitulo 2 El agua

para la expresion pK', que es una transformacion logaritmica de K', del mismo modo que el termino pH es una transfermacion logaritmica de [H+]:

pK' = log ~, = -log K'

Los valores de pK' son menos engorrosos de manipulacion que los valores de K', 10 mismo que ocurre con los valores de pH y las molaridades reales del ion hidroqeno. Los acidos Iuertes poseen valores bajos de pK' y las bases fuertes muestran valores elevados de pK'. Observese que el agua misma puede considerarse como un acido muy debil cuyo pK' es de alrededor de 14; su base conjugada, el ion hidroxilo, es obviamente una base muy fuerte que muestra una afinidad elevada por el proton.

La figura 2~9 muestra las curvas de valoracion de algunos acidos debiles valorados con hidroxido sodico. EI pH resultante despues de cada incremento de NaOH, durante la valo-

FIGURA 2-9

(Derecha) Curves de la valoraci6n acido-basica mostrendo las ptincipeles especies ionices en el comienzo, en el punta medio y al final de la valoraci6n. (Abajo) Capacidad relativa de tamponamiento expresada [rente al pH. La cepecided maxima de tamponamiento tiene lugar cuando pH = pK', donde

se produce una veriecion minima del pH el siiedir una cantidad detetminede

de ecido 0 de base.

9

Punto medic de lavaloraci6n

8

::r:: 7 0.

6

5

4

3

2

1

0,5 Equlvalentes deOH-------i>-

1,0

Acetato

Fosfato

Amonio

Capacidad reI at iva

de tamponamiento

51

PARTE 1 COMPONENTES MOLECULARES DE LAS CELULAS

racion de un acido, se expresa frente a los equivalentes de OH- afiadidos. Las form as de tales curvas de valoraci6n son muy semejantes para todos los acidos: la diferencia importante es que las curvas se hallan desplazadas verticalmente a 10 largo de la escala de pH. El valor del pH en el punto medio de la valoraci6n es numericamente igual al valor del pIC del acido valorado. En el punto medio se hallan presentes concentraciones equimolares de la especie dadora de protones (HA) y de la aceptora de protones (A-). El pK' de un acido puede calcularse, en realidad, a partir del pH en cualquier punto de la curva de valoraci6n del acido, siempre que se conozcan las concentraciones de las especies dadoras y acep~ toras de protones en dlcho punto. La forma de la curva de valoraci6n puede expresarse por la ecuaci6n de HendersonHesselbelch, que es una transformaci6n logaritmica de la expresi6n para la constante de disociaci6n. Se obtiene como se indica a continuaci6n:

, _ [WJ[A-] K - [HA]

Despejando [H+]:

y tomando el logaritmo negativo de ambos miembros

[HA] -log[W] =-llilgK'-log [A-]

Sustituyendo -log [H+] par pH y -log K' por pK'

PH = pK' - log [HA] [A-]

Si cambiamos ahora los signos, obtenemos la ecuaci6n de Henderson-Hasselbalch :

pH = pK' + log [A-] [HA]

cuya forma mas general es la siguiente

I [aceptor de prot ones ]

pH= pK' + og ]

[dador de protones

Esta ecuaci6n permite el calculo del valor del pK' de cualquier acido, conociendo la relaci6n molar de las especies dadoras y aceptoras de protones, a un pH determinado; permite tambien el calculo del pH de un par conjugado acido-basico que posea un determinado pK' y una relaci6n molar dada asimismo permite el calculo de la relaci6n molar del acido y su base conjugada si se conocen los correspondientes valores de pH y pK'. Observese que cuando las concentraciones del dador y del aceptor de protones son iguales, el pH observado es numericamente igual al pK'. La ecuaci6n de Henderson-Hasselbalch es fundamental para el tratamiento cuantitativo de todos los equilibrios acido-base en los sistemas biol6gicos.

52

Capitulo 2 El agua

Indicadores acido- basicos

El pH de una disolucion puede determinarse mediante el empleo de colorantes indicadores, la mayor parte de los cuales son acidos debiles (se designan como HInd). Tales indicadores se disocian de acuerdo con el equilibrio

HInd ~ H+ + Ind :

Supongamos que la especie HInd es incolora y que la especie Ind es coloreada. La posicion de equilibrio de esta disociacion y, por tanto, la cantidad de luz absorbida por la especie Ind a su longitud de onda caracteristica, es determinada por la concentracion de hidroqeno del medio. En una disolucion fuertemente acida, el equilibrio se desplaza hacia la izquierda y se absorbera poca luz a la longitud de onda del maximo de absorcion de Ind. En una disolucion basica, la especie Ind= se halla favorecida, ya que el exceso de iones OH- reacciona con los iones H+ para formar agua, impulsando el equilibrio hacia Ind. En este caso se absorbera mucha luz.

Tampones

Puede observarse en la Figura 2~9 que la curva de val ora cion de cada acido presenta una zona relativamente llana que se extiende alrededor de una unidad de pH a cada lado de su punto medio. En esta zona el pH del sistema cambia relativamente poco cuando se ana den cantidades mas bien pequefias de iones H+ 0 OH-. Esta ~s la zona en que el par conjugado acido-base actua como famp6n; es decir, un sistema que tiende a impedir el cambio de pH cuando se afiaden iones H+ 0 OH-. Para valores de pH fuera de esta zona hay menos capacidad para resistir los cambios de pH. La capacidad de tamponamiento es maxima en el mismo punto medio de la curva de valoracion, es decir, cuando la concentracion de aceptor de protones se iguala con la de dador de protones, en la cual se cum ple que pH = pK' (fig. 2~9). La capacidad de tamponamiento disminuye a medida que aumenta el pH o desciende, respecto a dicho pun to, como consecuencia directa del cambio en la relacion entre las especies aceptora y dadora de protones. Cada par conjugado acido-basico posee un pH caracteristico en el cual su capacidad de tamponamiento es maxima, a saber, el punto en que pH = pK'.

Los fluidos intracelulares y extracelulares de los orqanismos vivos contienen pares conjugados acido-basicos, los cuales actuan como tamp ones al pH normal de dichos fluidos. EI tampon intracelular mas importante es el par conjugado acidobasico H2P04- ~HPOi- (pK' ~ 7,2). Los fosfatos orqanicos, tales como la glucosa-6-fosfato y el ATP, contribuyen tarnbien a Ia capacidad de tamponamiento en Ia celula. EI principal tampon extracelular en la sangre y en los fluidos intersticiales de los vertebrados es el sistema tampon del bicarbonato. La extraordinaria capacidad de tamponamiento del plasrna sanguineo puede mostrarse por la siguiente comparacion. Si se afiade 1 ml de HCI10 N all de suero Hsioloqico neutro (aproximadamente 0,15 M en NaCI), el pH de la disolucion salina descenders hasta pH 2, ya que las disoluciones de NaCl no poseen capacidad de tamponamiento. Sin embargo,

53

PARTE 1 COMPONENTES MOLECULARES DE LAS CELULAS

si se afiade 1 ml de HCl 10 N all de plasma sanguineo, el pH solo descendera un poco, desde 7,4 a, aproximadamente, 7,2.

EI sistema tampon del bicarbonato (H2C03- HC03-) posee algunos rasgos distintivos. Mientras actua como tampon, del mismo modo que otros pares conjugados acido-basicos. el pK' del H2COJ, que es un acido relativamente Iuerte, es de 3,8, (tabla 2~7), mucho mas bajo que el intervalo de pH nor", mal de la sangre. Se plantea la cuestion de como un acido con un valor de pK' tan bajo es capaz de desempefiar el papel de tampon fisioloqico a un pH proximo a 7,0. En el sistema tampon del bicarbonato la especie dadora de protones, el acido carbonico se halla en equilibrio reversible con el CO2 disuelto:

Si tal sistema acuoso esta en contacto con una fase gaseosa, entonces el anhidrido carbonico disuelto se hallara, a su vez, en equilibrio entre la fase gaseosa y la acuosa:

Puesto que por la ley de Henry la solubilidad de un gas en' agua es proporcional a su presion parcial, el pH del sistema tampon constituido por el bicarbonato es fun cion de la presion parcial del CO2 en la fase gaseosa situada sobre la disolucion tampon. Si aumenta la presion del CO2 permaneciendo constantes las demas variables, el pH del tampon bicarbonato disminuye, y viceversa. El si'stema tampon del bicarbonato puede regular con eficacia en las proximidades de pH = 7, en el cual la relacion aceptor de protones I dador de protones es muy elevada, dado que una pequefia cantidad del dador, el H2C:OJ se halla en equilibrio inestable con una capacidad de reserva relativamente grande de gas carbonico en los pulmones. Bajo cualesquiera condiciones en que la sangre deba absorber un exceso de iones OH-, el H2C03 empleado y convertido en HC03- es rapidamente reemplazado por el CO2 gaseoso del gran «pool» pulmonar.

El rasgo distintivo del sistema tampon del bicarbonato 10 constituye que el CO2 sea el producto final de la combustion aerobia de las moleculas combustibles en los vertebrados, que se expulsa en ultimo termino por los pulmones. La relacion [HC03-]/[H2C03] en el estado estacionario, en la sangre, constituye un reflejo de la velocidad de produccion de CO2 durante la oxidacion en los tejidos y de la velocidad de perdid a de gas carbonico por espiracion.

El pH del plasma sanguineo en los vertebrados se mantiene a valores notablemente constantes. El plasma sanquineo del hombre suele ser de 7,40. Si fallasen los mecanismos reguladores del pH, como puede ocurrir en las enferrnedades, el pH de la sangre descenderia por debajo de pH = 7 a se elevaria por encima de 7,8 y podrian producirse dafios irreparables, Podemos preguntarnos: [Que mecanismos moleculares existentes en las celulas son tan extraordinariamente sensibles que un cambio en la concentracion de iones H+ tan pequefio como 3 X 10-B M (aproximadamente la diferencia entre que la sangre se halle a pH 7,4 y pH 7) pueda ser letal? Aunque muchos aspectos de la estructura celular y de la fun cion se

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FIGURA 2-10

B/ecto del pH sobre la actividad de alguno& enzima&. Cada enzima posee una curve caracteri&tica de actividad en /uncian del pH. La in/luencia del pH puede meniiesterse no solemente en el grado de ionizacian de los enzima&, sino tembien en el de los coenzimas y en

el de las molecules de sustrato.

Pepsina 100

Ureasa Gllcina-oxidasa

1 Z 3 4 5 6 7 8 9 10 11 pH

Capitulo 2 Bl agua

hallan influidos por el p'H, la actividad catalitica de los enzimas es especialmente sensible. Las curvas tipicas que aparecen en la Figura 2~ 10 muestran que los enzimas ejercen su actividad maxima a un pH caracteristico, llamado pH 6ptimo, y que su actividad desciende de manera notoria a ambos lados de dicho maximo. De este modo. el control bioloqico del pH de las celulas y de los fluidos corporales es de importancia primordial en todos los aspectos del metabolismo intermediario y de la Iuncion celular.

Idoneidad del entorno acuoso para los organismos vivos

Los organismos vivos se han adaptado efectivamente a su entorno acuoso y han desarrollado metodos para aprovechar las inusitadas propiedades del agua. El eleva do calor especifico del agua resulta util para los grandes animales terrestres porque el agua del cuerpo actua como un tampon termico y permite que la temperatura del organismo permanezca relativamente con stante aunque varie la temperatura ambiente. Ade-. mas. el elevado calor de -vaporizacion del agua constituye el medio eficaz por el que los vertebrados pierden calor por evaporacion del sudor. EI elevado grade de cohesion interna del agua liquida, a causa de la existencia de enlaces de hidrogeno. es explotado por las plantas superiores para el transporte de los elementos nutritivos en disolucion, desde las rakes hasta las hojas, durante el proceso de transpiracion. Incluso el hecho de que el hielo tenqa una densidad menor que la del agua liquida y por ello nota. posee importantes consecuencias biol6gicas en la ecologia de los organismos acuaticos. Pero 10 mas fundamental para todos los organismos vivos es el hecho de que muchas propiedades biol6gicas importantes de las macromoleculas celulares, particularrnente de las proteinas y de los acidos nucleicos, derivan de sus interacciones con las moleculas de agua del medic que las rodea, tal como veremos mas adelante,

Resumen

EI agua es el compuesto mas abundante en los organismos vivos. Sus relativamente elevados puntos de fusion. de ebullicion, calor de vaporizaclon y tension superficial, son el resultado de fuertes atracciones intermoleculares en forma de puentes de hidroqeno entre moleculas de agua vecinas. EI agua liquid a posee una considerable ordenacion de corto radio. aunque los enlaces de hidroqeno Individuales poseen una Vida media muy corta.

La polaridad y las propiedades para establecer enlaces de hidroqeno de la rnolecula de agua hacen de ella un disolvente poderoso para muchos compuestos ionicos y moleculas neutras. EI agua tambien dispersa las rnoleculas anfipaticas, tales como los jabones, formando micelas, que son agrupaciones de moleculas en que los grupos hidrofobicos se hallan ocultos, no expuestos al agua, mientras los grupos hidrohlicos 0 polares se sittian sobre la superficie externa y expuestos al agua. La forrnacion de micelas es resultado de la tendencia de las mole cui as de agua del entorno a establecer el numero maximo de enlaces de hidroqeno entre ell as y con los grupos pol ares localizados en el exterior.

EI agua se ioniza muy ligeramente, formando los iones hidronio (H,O+) e hidroxilo (OH-). Los protones pueden saltar con facilldad desde el H,O+ a una molecula de H20 de la vecindad, unida por enlace de hidroqeno. Los saltos de los protones permiten interpretar la elevada movilidad electric a de los protones en el agua y en el hielo. En disoluciones acuosas diluidas las concentraciones de los iones H+ y OH- se

55

PARTE

COMPONENTES MOLECULARES DE LAS CELULAS

hallan relacionadas de modo Inverse. mediante la expresi6n K; = [H+] [OH-j = I X 10-" (25 °C). La concentracion de hidrogeniones de los sistemas bioloqicos se expresa en Funcion del pH. que se define como: pH = -log [H"], EI pH de las disoluciones acuosas se mide por medio del electrodo de vidrio 0 con indicadores.

Los acidos se definen como dadores de protones y las bases como aceptores de protones. Un par conjugado acido-basico esta constituido por un dador de protones (HA) y su correspondiente aceptor (A-). La tendencia de un acido, HA. a ceder protones se expresa por su constante de disociaci6n K' 0 mediante la funcion pK', definida como -log K'. E1 pH de una disolucion de un acido debil se halla relacionado cuantitativamente con su pK' y con la relaci6n de las concentraciones de sus especies dadoras y aceptoras de protones mediante la ecuacion de HendersonHasselbalch. Un par conjugado acido-basico puede actuar como tampon y resistir a los cambios de pH; su capacidad para lograrlo es maxima cuando el valor del pH es numericamente igual al de su pK'. Los pares bioloqicos mas importantes que actuan como tampones biol6gicosson H,COJ-HCOJ- y H,PO,--HPOl-. La actividad catalitica de los enzimas resulta fuertemente influida por el pH.

Bibliografia

En el apendice B Figura una bibliografia general de trabajos en bioquimica y quimica-fisica,

Libros

DAVENPORT. H. W.: ABC of Acid-Base Chemistry, 5." ed. University of Chicago Press. Chicago. 1969.

DAWES. E. A.: Quantitative Problems in Biochemistry, 2." ed .• The Williams & Wilkins Company. Baltimore. 1968. Tratamiento sucinto de aspectos cuantitativos de la bioquimica; resolucion de problemas.

DICK, D. A. T.: Cell Water, Butterworth. Inc .• Washington, D.C., 1966.

Estructura, propiedades, movimiento y control del agua celular.

EDSALL. l- T •• Y ]. WYMAN: Biophysical Chemistry. vol. 1. Academic Press Inc .• Nueva York. 1958. Tratamiento detail ado del agua y de las disoluciones de electrolitos. incluidos los aminoacidos.

EISENBERG. D •• Y W. KAUZMANN: The Structure and Properties of Water, Oxford University Press. Fair Lawn. N. J .. 1969. La monografia mas reciente y autorizada.

HENDERSON. L. ].: The Fitness of the Environment. The Macmillan Company. Nueva York. 1927 (reeditado en 1958). Un ensayo clasico cuya Iectura resulta todavia absorbente.

MOTGOMERY, R •• Y c. A. SWENSON: Quantitative Problems in Biochemical Sciences, W. H. Freeman Co .• San Francisco. 1969. Problemas de la quimica acido-basica y de la accion tampon. asi como de otros muchos aspectos de la bioquimica.

MORRIS. ]. G.: A Bioloqist's Physical Chemistry, Addison-Wesley. Reading.

Mass., 1968. Excelente compendio; los capitulos 5 y 6 son especialmente utiles.

SEGEL. I. H.: Biochemical Calculations, John Wiley & Sons. Nueva York. 1968. Otro libro util sobre aspectos cuantitativos de la bioquimica.

Articulos

NARTEN. A. H •• Y H. A. LEVY: «Observed Diffraction Pattern and Proposed Models of Liquid Water». Science 165: 447-454 (1969). Una discusi6n de las diferentes hipotesis sobre la estructura del agua liquida.

WICKE. E.: «Structure. Formation and Molecular Mobility in Water and Aqueous Solutions». en AngelL'. Chern. Intern. Ed. (Ingles). 5, 106-112. 1966.

Problemas

Con objeto de hacer practica se plantea un gran numero de problemas sobre relaciones acido-base y disoluciones tampon. fundament ales para muchas operaciones de investiqacion bioquimica.

56

Capitulo 2 EI agua

1. Calculese :

a) EI pH del HCI 10-5 N.

b) EI pOH del NaOH 5 X 10-3 N.

c) EI pH del KOH 3 X 10-6 N.

d) EI pH del HCI 10-9 N.

e) EI pOH del HCI 3 X 10-4 N.

f) EI pH del H,S04 7 mM.

2. Calculense las concentraciones siguientes (vease tabla 2-6):

a) [H+] del plasma sanguineo.

b) [H+] del Iluido muscular intracelular.

c) [OH-] del juga de tomate.

d) [W] del juga qastrico (pH 1.4).

e) [OH-] de la saliva (pH 6.5).

f) [H+] del agua del mar.

3. EI pH de una disolucion 0.01 M de un acido, HA. es 3.80. Calculese: a) K'; b) pK' del acido.

4. EI grado de disociacion, a, de un acido HA, est a definido por la relacion

a = [A ] + [HA]

Calculese el grado de disociacion del acido acetico (pK' = 4,76) si su concentracion es a) 0.1 M y b) 0,01 M, suponiendo que HA no disminuye apreciablemente por la disociacion.

5. Dernuestrese que el grado de disociacion puede expresarse tambien por

K'

a= K' + [W]

6. Calculese el grado de disociacion del acido acetico si a) el pH es 3,0, b) pH 4,0 y c) pH 4,76.

7. Las rnedidas de conductividad muestran que la disolucion 0,1 M de acido propionico (CH3CH,COOH) se halla ionizada en 1,16 por ciento a 25 "C. Calculese a) la constante de dlsociacion y b) el pK' del acido propionico.

8. a) Calctilese la relacion [HC03-] / [H,CO'] en el plasma san-

guineo a pH 7,4 [vease tabla 2-7).

b) Calctilese Ia relacion [HPO.'-] ! [H,P04-] en el plasma sanguineo.

c) lCual de ambos pares acido-base conjugados es el tampon mas eficaz en una muestra de sangre contenida en un frasco cerrado sin espacio gaseoso libre alguno?

9. EI pH interne de una celula muscular es 6,8. Calculese la relacion [H,P04-] ! [HPOl-] en la celula. La segunda constante de disociacion del acido fosforico es 6.31 X 10-8 M.

10. a) lQue volumen de HCI O,to N debe afiadirse a 20,0 ml de tampon fosfato 0,04 M de pl-l 6.50, que contiene ureasa, con objeto de disminuir su actividad enztrnatica exactamente en el 50 %, cuando se ensaya en condiciones tales en las que el pH es el factor Iimitante de la velocidad? b) lCual sera la concentracion de ion-hidroqeno en tal disolucion? (Utilicense los datos de la fig. 2-10 y despreciese la capacidad de tamponamiento de Ia ureasa},

11. Calctilese a) el pH y b) la concentracion de iones CO,'- en una disolucion 0,01 M de H,C03•

12. Basandose en la respuesta que se de al problema 11. forrnulese una qeneralizaclon relacionando la concentracion de los iones A'- con el pK', para los acidos del tipo H,A.

13. Se dispone de disolucion 0,1 N de NaOH y disoluciones 0,1 N de acido sulfurico. acido acetlco (pK' = 4,76), acido lactico (pK' = 3,86), acido fosforico (pK' = 7,2) y de c1oruro amonico (pK' = 9,25).

a) Suponiendo que las disoluciones anteriores se emplean sin dilucion por adicion de aqua, lcomo se prepararian 50 ml de un rnedio tamponado que mantuviese el pH esencialmente constante a 5,40, en un experimento enzimatlco en el que se produzca acido?

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