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FACULTAD DE CIENCIAS

DE LA SALUD

MANUAL DE PRÁCTICAS

DOCENTE : Mg. Q.F. Luis José Torres Santillán

Toxicología I

Escuela de Farmacia y Bioquímica


Ciclo VIII
Torres Santillán, Luis José. Manual de Prácticas de Toxicología I. Universidad Católica
Los Ángeles de Chimbote. Chimbote, 2010. 127 p.

Universidad Católica Los Ángeles de Chimbote.


Leoncio Prado 453.
Chimbote (Perú) www.uladech.edu.pe
maguilarm@uladech.pe

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ni trasmitir alguna parte de esta publicación, cualquiera sea el medio
empleado – académico, mecánico, fotocopia, grabación, etcétera – sin
el permiso previo correspondiente.
Luis Torres Santillán Manual de Prácticas de Toxicología I

ÍNDICE

Presentación............................................................................................................................ 5
Medidas de seguridad.............................................................................................................. 6

• Práctica N° 1
Aspectos analíticos de la determinación de drogas en fluidos biológicos.................. 8
Riesgo toxicológico N° 1: Toxicología de solventes orgánicos................................... 18
Caso clínico N° 1: Xeroderma pigmentosum.............................................................. 21

• Práctica N° 2
Ensayos preliminares en los análisis toxicológicos.................................................... 24
Métodos para la extracción de drogas de la orina con objetivo de screening........... 30
Taller N° 1: Tratamiento general de intoxicaciones................................................... 38

• Práctica N° 3
Efecto hepatotóxico del tetracloruro de carbono........................................................ 39
Seminario N° 1: Lesiones por radiaciones ionizantes................................................ 46

• Práctica N° 4
Intoxicación experimental por monóxido de carbono................................................. 47
Riesgo toxicológico N° 2: Intoxicación por dioxinas................................................... 56
Caso clínico N° 2: Intoxicación por plomo en niños................................................... 59

• Práctica N° 5
Determinación de cianuro en muestra biológica........................................................ 62
Taller N° 2: Intoxicación por fosgeno y arsina............................................................ 69

• Práctica N° 6
Determinación de mercurio en muestra hidrobiológica.............................................. 72
Seminario N° 2: Contaminación ambiental................................................................. 83

• Práctica N° 7
Determinación de aminas biogénicas en quesos maduros........................................ 84
Riesgo toxicológico N° 3: Uso del anís estrella en lactantes...................................... 91
Caso clínico N° 3: Intoxicación por alimentos............................................................. 92
Taller N° 3: Uso de edulcorantes en tratamiento de enfermedades........................... 94
Seminario N° 3: Uso de aditivos en la industria alimentaria....................................... 95

• Práctica N° 8
Determinación de insecticidas carbamatos en muestras biológicas........................... 96
Caso clínico N° 4: Intoxicación por organofosforados................................................ 106

• Práctica N° 9
Identificación de animales ponzoñosos – shock anafiláctico...................................... 108

Anexo
Tóxicos en ambientes laborales y sus biomarcadores............................................................. 116

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Luis Torres Santillán Manual de Prácticas de Toxicología I

MANUAL DE PRÁCTICAS

PARA: ESTUDIANTES DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

AUTOR:
MG. Q. F. LUIS JOSÉ TORRES SANTILLÁN

ALUMNO.........................................................................

REVISIÓN........................................................................

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PRESENTACIÓN

El Manual de Prácticas de Toxicología I está dirigido a los alumnos del VIII ciclo de Farmacia y
Bioquímica y complementa las actividades académicas teóricas programadas en la asignatura.

Es una herramienta básica para el estudiante, porque guía la ejecución de las prácticas y
ayuda a la mejor comprensión de los métodos analíticos cualitativos y cuantitativos escogidos
en las determinaciones químico-toxicológicas. Así mismo, permite la elaboración de los
informes y el reporte de los resúmenes de los casos clínicos, los riesgos toxicológicos y
seminarios desarrollados en cada unidad.

Espero que la presente guía constituya un valioso instrumento de enseñanza y aprendizaje


que permita a los estudiantes desarrollar las habilidades de análisis y síntesis de los temas de
estudio, los mismos que contribuirán al desarrollo del pensamiento crítico y el pensamiento
superior, e irán consolidando los rasgos del perfil que demanda la carrera profesional de
Farmacia y Bioquímica.

El autor.

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MEDIDAS DE SEGURIDAD EN UN LABORATORIO

1. No efectuar experimentos no autorizados, a menos que estén supervisados por el docente.


2. Notificar inmediatamente de cualquier accidente al docente o al auxiliar del laboratorio.
3. No pipetear los ácidos, puede llegar a ingerirlos.
4. Leer cuidadosamente la etiqueta del frasco hasta estar seguro de que es el reactivo que se
necesita, no utilizar reactivos que estén en frascos sin rotular.
5. Tener la precaución de cerrar bien el frasco, después de utilizar un reactivo.
6. Colocar en una gradilla de alambre o dentro de un vaso de precipitados, los tubos de
ensayo calientes, tengan líquido o no.
7. No apuntar la boca del tubo de ensayo al compañero o a sí mismo, cuando se calientan las
sustancias contenidas en éste, ya que pueden presentarse proyecciones del líquido caliente.
8. NUNCA AÑADIR AGUA AL ÁCIDO, ya que puede formarse vapor con violencia explosiva.
9. No se debe probar ninguna sustancia. Si algún reactivo se ingiere por accidente, se
notificará de inmediato al docente.
10. No se debe oler directamente una sustancia, sino que sus vapores deben abanicarse con
la mano hacia la nariz.
11. De desprenderse gases tóxicos -en una reacción- o se evaporen ácido, mantener bajo
estricto control la operación.
12. Mantener tapados los frascos que contengan los reactivos a emplear en la práctica,
mientras no se usen.
13. No trasladar varios objetos de vidrio al mismo tiempo.
14. No ingerir alimentos dentro del laboratorio.
15. Mantener una adecuada disciplina durante la estancia en el laboratorio.
16. Estar atento a las instrucciones del docente.

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SUSTANCIAS QUE DEBEN USARSE CON PRECAUCIÓN

Todas las que se utilizan en las operaciones y reacciones en el laboratorio son potencialmente
peligrosas por lo que, para evitar accidentes, deberán trabajarse con cautela y normar el
comportamiento en el laboratorio por las exigencias de la seguridad personal y del grupo que
se encuentre realizando una práctica.

Numerosas sustancias orgánicas e inorgánicas son corrosivas o se absorben fácilmente por la


piel, produciendo intoxicaciones o dermatitis, por lo tanto, ha de evitarse su contacto directo.

RECOMENDACIONES PARA EL MANEJO DE ALGUNAS


SUSTANCIAS ESPECÍFICAS

Ácido Fluorhídrico (HF)


Causa quemaduras de acción retardada en la piel; en contacto con las uñas, causa fuertes
dolores, y sólo si se atiende a tiempo se puede evitar la destrucción de los tejidos, incluso los
que conforman el sistema óseo.

Ácido Nítrico (HNO3)


Este ácido daña permanentemente los ojos en unos cuantos segundos y es sumamente
corrosivo en contacto con la piel, produce quemaduras, y mancha las manos con un tono
amarillo por su acción sobre las proteínas.

Ácidos Sulfúrico (H2SO4), Fosfórico (H3PO4) y Clorhídrico (HCl)


Las soluciones concentradas de estos ácidos lesionan rápidamente la piel y los tejidos
internos. Sus quemaduras tardan en sanar y pueden dejar cicatrices. Los accidentes más
frecuentes se producen por salpicaduras y quemaduras al pipetearlos directamente con la
boca.

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PRÁCTICA N° 1

I.- TÍTULO

ASPECTOS ANALÍTICOS DE LA DETERMINACIÓN DE DROGAS EN FLUÍDOS


BIOLÓGICOS

II.- INTRODUCCIÓN

Hoy en día, la detección de xenobióticos en matrices biológicas es una tarea difícil, no solo
porque se necesitan equipamientos relativamente caros, sino debido a que la transformación
parcial o total de los mismos en el organismo da lugar a la aparición de entidades químicas
diferentes, lo que conlleva a una buena preparación por partes de los toxicólogos, así como el
desarrollo de técnicas de laboratorio lo suficientemente sensibles y específicas, además de
contar con los patrones de referencia de las drogas y sus posibles metabolitos.

Debido a esta amplia variedad de sustancias que pueden estar presentes en un determinado
fluido, se hace casi imposible diseñar un esquema único para el aislamiento y la
determinación de las mismas.

El grupo más numeroso es el de las drogas, (entre ellas, medicamentos) con alrededor de
1000 compuestos diferentes, lo que le da una importancia singular, además de tener la mayor
incidencia en casi todo el mundo, ya sea como drogas de abuso o como medicamentos de
manera general.

Las drogas son todas aquellas sustancias naturales o sintéticas que, introducidas en el
organismo, modifican, alteran, o reparan una de las funciones normales del organismo vivo.

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En Química Forense, la identificación y cuantificación de xenobióticos en fluidos biológicos es


de mucha utilidad; los tóxicos se clasifican en seis grupos de acuerdo con los métodos que se
utilizan para aislarlos de los mismos.

Clasificación Químico-Forense de los Tóxicos

Grupo Método de aislamiento Ejemplo


Clorato, Fluoruro, Hipoclorito,
Aniones Diálisis
Persulfito, Nitrato, Fluoroacetato.
Arsénico, Antimonio, Plomo,
Metales Incineración
Litio, Mercurio, Talio.

Monóxido de Carbono, Cianuro,


Gases Difusión Metano,
Gases Anestésicos, Óxido Nitroso.

Etanol, Metanol, Hidrato de Cloral,


Volátiles Destilación
Aldehidos, Tolueno, Acetona.
Extracción líquido - líquido sólido –
Pesticidas Fosforados, Clorados, Carbamatos.
líquido
Extracción líquido - líquido sólido –
Drogas Psicofármacos, No Psicofármacos.
líquido

Todos los compuestos extraños o xenobióticos pueden ser determinados en matrices


biológicas y no biológicas, de manera directa e indirecta. Por lo tanto tenemos cuatro
modalidades de análisis en química forense que podemos resumir de la manera siguiente:

1. ANÁLISIS DIRECTO EN FLUIDOS BIOLÓGICOS: Esta modalidad implica la aplicación de


procedimientos de extracción y determinación específicas para una determinada sustancia
que se quiere buscar. Se realiza cuando los antecedentes del caso apuntan hacia la misma
o si se quieren hacer determinaciones cuantitativas.

2.- ANÁLISIS INDIRECTO EN FLUIDOS BIOLÓGICOS: Esta modalidad implica la aplicación


de un “screening” para descartar el mayor número de tóxicos posibles e incluir un número
reducido de ellos, hasta lograr la identificación, pudiendo -posteriormente- aplicar una

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técnica directa para aumentar la eficiencia de los análisis. Este procedimiento de screening
puede variar algo, dependiendo de la muestra biológica de que se trate.

3.- ANÁLISIS DIRECTO EN MUESTRAS NO BIOLÓGICAS: Como en el primer caso, la


determinación se lleva a cabo mediante una técnica ya probada, utilizando como patrones
de referencia las sustancias sospechosas, debido a que los antecedentes del caso así lo
requieren.

4.- ANÁLISIS INDIRECTO EN MUESTRAS NO BIOLÓGICAS: Como las muestras pueden


ser tan diversas, existen varios procedimientos de "screening" dependiendo del estado físico
de la sustancia, solubilidad, y de la naturaleza químico-física de la muestra en cuestión.

Nosotros abordaremos el análisis de drogas en fluidos biológicos, pero bien, independiente


de la modalidad de los análisis, generalmente tendremos cinco pasos fundamentales, cuya
comprensión es de extrema importancia para obtener buenos resultados, y cada uno de
ellos representa prácticamente un campo dentro de la toxicología analítica:

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ETAPAS

1.- Preparación de la muestra: Este paso es crucial en los análisis. Generalmente involucra
la homogenización de las muestras, ajustes de pH, procedimientos de hidrólisis (ácida, básica
o enzimática), precipitación, centrifugación, etc. Debido a la complejidad de las muestras
biológicas, este paso adquiere especial significación.

2.- Aislamiento del analito: El método de aislamiento dependerá de la naturaleza del tóxico
que se quiere buscar. En el caso de las drogas la tendencia ha sido desde la extracción con
cloruro de n-butilo, que fue uno de los primeros solventes declarados como extractores
selectivos de drogas, después las extracciones con sales y con solventes, hasta la cada vez
más empleada extracción en fase sólida, la cual presenta muchas ventajas con respecto a
todas las anteriores, como son mayor selectividad, ahorro de solventes y de tiempo, extractos
más limpios y mayor recobrado de los analitos, etc. Existen muchos trabajos que comparan la
extracción líquido-líquido con la extracción en fase sólida, demostrándose cada vez más sus
ventajas, pero no obstante a ello la extracción líquido-líquido se sigue utilizando, dependiendo
de los recursos con que cuenta cada laboratorio.

3.- Concentración del extracto: El objetivo de este paso es colocar el analito en el menor
volumen posible para, de esta manera, aumentar la sensibilidad de los análisis. En el caso de
las drogas, es importante conocer que la concentración de los extractos debe realizarse en
condiciones controladas, aunque las condiciones ideales son concentrar a temperatura
ambiente y en corriente de nitrógeno o de aire.

4- Identificación del analito: En la identificación del analito existen diferentes niveles de


complejidad, dependiendo de las técnicas que se utilicen para la detección de las mismas. Así
tenemos un nivel primario que utiliza técnicas de identificación como la cromatografía en capa
delgada y la espectrofotometría UV, además de reacciones de coloración para la orientación,
etc. Un nivel secundario involucra técnicas tales como la cromatografía de gases y la líquida
de alta resolución ya sea para screening como para la determinación directa y un nivel terciario
que utiliza la espectrometría de masas acoplada con una cromatografía separativa tal como la
cromatografía de gases y la líquida de alta resolución.

5- Cuantificación del analito: Una vez identificado el analito, la cuantificación del mismo se
puede realizar por una técnica directa, bien ajustada y utilizando patrones de referencia puros

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para análisis. Esta técnica directa generalmente es una técnica cromatográfica gas-líquida o
líquida-líquida y la espectrometría acoplada a estas dos anteriores.

ASPECTOS LEGALES RELACIONADOS CON LA TOMA Y LA CONSERVACIÓN DE


MUESTRAS PARA ANÁLISIS DE DROGAS EN FLUIDOS BIOLÓGICOS.

1. El personal que tome la muestra es responsable de que se rotule, de su conservación


antes de que llegue al laboratorio y de su transporte, además de facilitar los
documentos necesarios con todos los datos requeridos (solicitud de peritaje).
2. La toma de la muestra debe ser supervisada con el objetivo de que no sea adulterada
o sustituida, lo que conlleva a la invalidación de la misma.
3. El grupo de expertos de Bruselas recomienda la orina como muestra idónea para el
análisis de drogas de abuso, de modo que dicha muestra debe tomarse por duplicado
en frascos de 50 ml de capacidad, que deben llenarse en sus 2/3 partes. Deben
evitarse los frascos plásticos siempre que sea posible debido a que las drogas pueden
absorberse en la superficie de los frascos y se afecta considerablemente los
recobrados.
4. Inmediatamente después de la colección debe medirse la temperatura (que debe estar
entre 32 y 38 C° dentro de los 4 minutos después de su colección) y el pH. Si se
sospecha, cualquier adulteración se debe notificar al laboratorio. La orina debe
chequearse si tiene algún precipitado, su color, si tiene espuma, etc. Se recomienda

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también la determinación de creatinina (180 ± 80 mg / dL: normal; 10 - 30 mg / dL; y la


determinación del peso específico: 1.007 - 1.035 "normal").
5. Es importante mantener las muestras en frío y en un lugar oscuro, en el período de
tiempo, entre su toma y el análisis de las mismas.
6. Cuando la muestra llega al laboratorio se debe revisar y chequear contra las
solicitudes de peritaje para asegurarnos que los datos coincidan plenamente,
guardándose una de las muestras para reiteración de los análisis si fuese necesario.
7. Las solicitudes de peritaje deben contener:
o Órgano que solicita el peritaje y antecedentes del caso.
o Nombre y apellidos del implicado, edad y peso.
o Fecha, hora y tipo de muestra que se colecta.
o Tiempo aproximado del último consumo.
o Sustancias consumidas en las últimas horas o días.
o Patrón de consumo.
o Temperatura y pH de la muestra en el momento de su colección.
8. Los casos se deben inscribir en un registro de entrada, dándole a la misma un número
consecutivo que será escrito en los frascos y en solicitud de peritaje por la persona
que la reciba, anotando también la cantidad de muestra recibida, hora de recepción,
etc.
9. Si los análisis no se comienzan en el momento de la recepción, las muestras deben
guardarse en congelación.
10. Es importante mantener una completa seguridad y confidencialidad en todo momento.
Cualquier información relacionada con el caso debe considerarse secreta y colocarse
en un lugar seguro.
11. Al concluir el caso debe realizarse un informe pericial dirigido al órgano de instrucción
que lo solicitó, el cual debe reflejar no solo los resultados de los análisis, sino todos los
procedimientos que se utilizaron para arribar a los mismos.
12. En el caso de cadáveres, las muestras pueden ser muy variables pero la orina sigue
siendo la muestra más importante para la determinación de drogas de abuso.

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MUESTREO EN EL CASO DE CADÁVERES

Muestra Cantidad Droga a Investigar


Estómago y su contenido Todo Cualquier droga ingerida
Hígado 250 gr. Todas las drogas
Bilis Toda Opiáceos
Orina Toda Idónea para drogas de abuso
Cerebro 100 gr. parte media y central Solventes, cocaína
Sangre 2 muestras de 5 ml. y 30 ml. Una para etanol, otra para drogas
Pelos Drogas de abuso (alta tecnología)

13. Todas las muestras deben guardarse en congelación antes y después de terminados
los análisis y las muestras de sangre; para determinación de etanol, deben conservarse
con fluoruro de sodio al 2 %.

De manera general, los análisis de drogas en fluidos biológicos, por parte de los laboratorios
forenses, tienen esencialmente dos objetivos fundamentales:

• Diagnóstico del consumo de una droga de abuso en el marco de un proceso judicial.


• Diagnóstico clínico en toxicología clínica y en tratamientos de rehabilitación.

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III.- CUESTIONARIO

1.- Haga una clasificación general de las principales sustancias relacionadas con intoxicaciones
en seres humanos.

2.- Fundamente qué aspectos se deben considerar prioritariamente en la investigación de una


probable intoxicación.

3.- Defina:

- Muestra:

- Contra muestra

- Análisis Químico-Toxicológico

- Medicina forense

4.- Describa el fundamento de:

- Cromatografía de gases

- Absorción atómica

- Cromatografía de capa fina

- HPLC

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IV.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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RIESGO TOXICOLÓGICO Nº 1

Toxicología de Solventes Orgánicos y Sustancias Corrosivas

Introducción

Los solventes orgánicos son productos químicos industriales de origen natural, como aceites,
grasas, breas y tinturas, y diversos productos químicos sintéticos como pinturas, herbicidas,
insecticidas, etc.

Las intoxicaciones por solventes orgánicos y sus vapores se producen generalmente en el


ámbito laboral, donde se manipulan estas sustancias, y donde son más frecuentes las
exposiciones prolongadas a las concentraciones tóxicas, aunque pueden presentarse
intoxicaciones domésticas, por accidente, o voluntarias, al ser utilizadas como agente de
autolisis o como drogas de abuso.

Los solventes orgánicos son sustancias que a temperatura ambiente se encuentran en estado
líquido y pueden desprender vapores, por lo que la vía de intoxicación más frecuente es la
inhalatoria, aunque también se puede producir por vía digestiva y cutánea.

Todos los disolventes orgánicos son tóxicos, aunque su toxicidad varía de unos productos a
otros.

PARA DISCUSIÓN

Origen y química

Fuentes de exposición

Toxicocinética y toxicodinamia

Efectos tóxicos

Prevención y tratamiento

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TAREA:

Hacer un mapa conceptual respecto de la intoxicación con solventes orgánicos.

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CASO CLÍNICO 01

XERODERMA PIGMENTOSUM (XP)

Paciente masculino de 5 años de edad, de condición socio económica paupérrima, presenta


desde los primeros meses de vida escoriaciones cutáneas severas como consecuencia de la
exposición a la luz solar, es evaluado al año de edad, presentando múltiples carcinomas
basocelulares en la cara, que se resuelven con crioterapia.

A pesar de los consejos que se brindan a su madre sobre el daño solar, el paciente empeora y
cada 4 ó 5 meses se determina en consulta, nuevas y deformantes lesiones que corresponden
a carcinomas basocelulares y carcinomas epidermoides, que en forma paliativa se resuelven
quirúrgicamente.

Como antecedente de importancia tiene 1 hermana fallecida con la misma enfermedad.

PARA DISCUSIÓN:

1.- ¿Cuál es el defecto molecular de XP y cómo se relaciona con una predisposición al cáncer?

2.- Describa los sistemas enzimáticos que participan en la reparación del ADN, dañado por la
luz ultravioleta.

3.- ¿Qué es un dímero de timina?

4.- Fundamente el tratamiento para pacientes con XP.

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TAREA:

Hacer un mapa conceptual de la patología Xerodermia Pigmentosum (XP)

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PRÁCTICA N° 2

I.- TEMA
ENSAYOS PRELIMINARES EN LOS ANÁLISIS TOXICOLÓGICOS

II.- INTRODUCCIÓN
La parte de la muestra destinada para los ensayos preliminares, van a permitirnos orientar el
análisis toxicológico, que por medio de ellos vamos a ir desechando a cierto grupo de posibles
tóxicos así como, inducirnos a sospechar de la causalidad de otros.

Comprenden procesos físicos y químicos, estos últimos consideran el uso de REACCIONES


DE COLORACIÓN, EMPLEO DE PAPELES SENSIBLES Y LÁMINAS METÁLICAS.

Los papeles sensibles, o también llamados papeles reactivos, van a dar una información de la
presencia de tóxicos volátiles y gaseosos. Las láminas metálicas permitirán detectar la
presencia de tóxicos metálicos y no metálicos.

Por otro lado, los ensayos biológicos son herramientas de diagnóstico adecuadas para
determinar el efecto de agentes físicos y químicos sobre organismos de prueba bajo
condiciones experimentales específicas y controladas. Estos efectos pueden ser tanto de
inhibición como de magnificación, evaluados por la reacción de los organismos, tales como
muerte, crecimiento, proliferación, multiplicación, cambios morfológicos, fisiológicos o
histológicos.

Los efectos pueden manifestarse a diferentes niveles, desde estructuras subcelulares o


sistemas de enzimas, hasta organismos completos, poblaciones o comunidades. Por tanto, la
toxicidad será la capacidad de una sustancia para ejercer un efecto nocivo sobre un

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organismo o la biocenosis, y dependerá tanto de las propiedades químicas del compuesto


como de su concentración, según sea la duración y frecuencia de la exposición al tóxico, y su
relación con el ciclo de vida del organismo; las pruebas podrán ser de tipo agudo o crónico.

De manera general, los ensayos, también llamados pruebas de toxicidad, pueden ser
definidos de acuerdo con:

• Su duración: corto, mediano o largo plazo.

• El propósito para el cual son utilizados: control de calidad de vertidos, evaluación de


compuestos específicos, toxicidad relativa, sensibilidad relativa, etcétera.

Métodos de Screening

La aplicación de estos métodos es de carácter exploratorio y tienen como objetivo identificar la


presencia de una o varias drogas en una muestra sospecha. Las ventajas de estos métodos
son el requerimiento de una mínima extracción y procedimiento de limpieza, además de que
son relativamente económicos y de fácil aplicación a gran escala. Su principal desventaja es
tener origen en la esencia u objetivo del método, esto es: presentar un rango amplio, y no
específico de espectro de sensibilidad y especificidad.

Investigaciones previas determinan que los falsos-negativos son poco probables en este tipo
de pruebas, pues se ha demostrado una buena correlación entre resultados positivos-
positivos durante su aplicación en muestras con niveles residuales muy por encima del
correspondiente LMR permitido.

Sin embargo, su aplicación en muestras con niveles cercanos, o por debajo del LMR
establecido para la droga en estudio, dan como resultado un gran número de falsos-positivos.

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III.- MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES:
Por cada mesa de práctica.

Material Biológico:

- 50 g de hígado de pollo
- 10 ml de orina problema
- 10 ml de orina testigo

Material de Laboratorio:

- 2 Placas petri
- 6 Tubos de ensayo y su gradilla

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- 2 Gradillas
- 4 Pipetas 1 ml, 2 ml, 5 ml y 10 ml. y su gradilla
- 2 Vasos de precipitación
- 2 Fiolas de 50 ml
- 4 Papel filtro
- 4 Alfileres
- 4 Recipientes vacíos de frasco-ampolla de penicilina
- 1 Cinta para pegar
- 1 Pipeteador

REACTIVOS:

- 5 ml Nitrato de plata 5%
- 5 ml Acetato de plomo 10%
- 5 ml Sulfato ferroso 2%
- 5 ml Ácido clorhídrico 10%
- 5 ml Carbonato de Sodio
- 5 ml Ácido Pícrico 1%
- 5 ml Tricloruro férrico 20%
- 5 ml o-cresol 0,1%
- 5 ml NH3 2 M
- 2 tab. de 500 mg de Ácido acetil salicílico
- 10 ml de Yoduro de potasio 10%
- 10 ml Ácido sulfhídrico 70%
- 10 g Cianuro de potasio sólido
- 10 ml Formaldehído 70%
- 10 ml Ácido cianhídrico 50%
- 6 ml Ácido sulfúrico q.p.
- 30 ml de agua destilada
- 30 ml de SSF

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Equipos:

- Balanza analítica
- Baño María
- Estufa
- 1 Equipo de disección

IV.- PROCEDIMIENTO

PREPARACIÓN DE LOS PAPELES SENSIBLES

- Cortar el papel de filtro en tiras uniformes.


- Embeber estas tiras en sus respectivos reactivos.
- Eliminar el exceso a temperatura ambiente o a estufa a 80° C por unos 10'.
- Guardarlos hasta el momento de usarlos.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA (ÓRGANOS)

- Efectuar picadillos o papillas, si las muestras son vísceras (lo más rápido posible). Si es una
solución, homogenizar.
- Transferir al frasco de experimentación, agregar cantidad suficiente de agua destilada hasta
que se forme una masa fluida y homogénea.

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USO DE LOS PAPELES SENSIBLES

- Cuidadosamente, suspender los papeles sensibles en el ambiente del recipiente, sin rozarse
entre ellos ni en el seno del líquido.
- Mantener en reposo en estas condiciones, al mismo tiempo, observar detenidamente los
cambios de coloración en dichos papeles.

Los papeles sensibles a utilizar son:


1. P.S. de Nitrato de plata al 5 %
2. P.S. de Acetato de plomo al 10 %
3. P. S. Picrosado (grignard): Ac. pícrico 1% + bicarbonato de sodio
4. P. S. Alcalino: bicarbonato de sodio al 2% + sulfato ferroso 2 % + ácido clorhídrico 10%

REACCIONES DE COLORACIÓN EN LA ORINA

Muestra Reactivo Respuesta


Tricloruro férrico 20%, 5
5 ml de orina Violeta: posibles salicilatos
gotas
Rojo-Violeta: posibles hidrocarburos
0,5 ml de orina Fujiwara (*)
halogenados

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MÉTODOS PARA LA EXTRACCIÓN DE LAS DROGAS DE LA ORINA CON

OBJETIVO DE SCREENING

 10 ml de orina se ajusta a pH - 3 con ácido fosfórico o tartárico se extrae dos veces con 30
ml de éter etílico y se combinan los extractos, se lava con 5 ml de agua, el lavado se
adiciona a la muestra y se retiene para posterior extracción. El extracto etéreo se reextrae
con 5 ml de solución saturada de bicarbonato de sodio, y dicha solución después de
separada se conserva para el análisis de posibles salicilatos. En el extracto etéreo, se
pueden encontrar drogas neutras y ácidas.

La muestra inicial retenida se ajusta a pH - 8 con amoníaco diluído y se extrae dos veces
con 10 ml de cloroformo, se reúnen los extractos y se le añade unas gotas de ácido
clorhídrico al 1% en etanol, para evitar la pérdida de drogas volátiles. Este extracto puede
contener las drogas básicas. La muestra inicial que resultó del paso anterior se somete a
hidrólisis ácida (con ácido clorhídrico y se calienta a 100° C por 30 minutos) y se extrae con
dos porciones de 10 ml de éter etílico, se combinan los extractos y se lavan con 5 ml de
NaOH 1M. El extracto etéreo pude contener benzofenonas. La fase acuosa se ajusta a pH
- 9 y se extrae con una mezcla de acetato de etilo: isopropanol 9:1. Este extracto orgánico
puede contener opiáceos que, después de la hidrólisis, quedaron libres.

 A 20 ml de orina se le divide en dos partes iguales, a una se le pone el pH ácido con 1 ó 2


ml de ácido sulfúrico concentrado y a la otra se le añade suficiente bicarbonato de sodio
como para saturar la solución. En ambos casos se extrae con una mezcla de cloroformo:
isopropanol 9:1. Se concentran los extractos y se disponen para el screening por
cromatografía en capa delgada.

En el screening por cromatografía en capa delgada se utilizan placas de silica gel 60 F-


254 nm (con indicador fluorescente), y lo que variará serán las fases móviles y los
sistemas de revelado. Estos procedimientos se llevan a cabo siempre después de la
hidrólisis, debido a que la mayoría de las drogas se excretan conjugadas en la orina.

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SCREENING DE DROGAS EN ORINA Y CABELLOS, UTILIZANDO HIDRÓLISIS


ENZIMÁTICA, ÁCIDA Y ALCALINA SEGUIDA DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA

En el caso de los pelos, debemos recortarlos en pequeños pedacitos, se lavan bien con agua
destilada para que suelten toda la grasa y, por último, se realiza un lavado con metanol.

Se toma 5 ml de orina o de 50 a 100 mg de cabello y se procede a realizar uno de los


procedimientos de hidrólisis siguientes:

Hidrólisis enzimática: Se le añade a la muestra 60 ul de una mezcla de glucuronidasa /


arilsulfatasa y 1 ml de buffer fosfato de pH-6 y se encuba 14 horas a 37°C.

Hidrólisis alcalina: Se le añade a la muestra 1 ml de NaOH 0,1 M y se coloca 24 horas a 60°


C. Posteriormente, se lleva a pH-6 con buffer fosfato.

Hidrólisis ácida: Se añade 1 ml de H2SO4 0.05 N y se encuba 12 horas a 37°C. Luego, se


lleva a pH-6 con buffer fosfato.

USO DE LAS LÁMINAS METÁLICAS

- Ciertos compuestos como el mercurio, arsénico, bismuto, antimonio, platino, hierro, plomo.
son revelados fácilmente, empleando láminas metálicas de cobre.

TÉCNICA OPERATORIA

1. Lavar las tiras de cobre con HNO3 2.5 N y enjuagar con etanol 95 %, luego secar.
2. Medir 10 ml de orina o una alicuota de lavado gástrico, vómitos. Si fuera polvo, tabletas o
residuo, disolverlo o suspenderlo en 10 ml de agua. Si son vísceras, pesar aproximadamente
2 g, añadir 20 ml de agua destilada, efectuar papillas.
COMPONENTES Vasos de 50 ml
I II III
_____________________________________________
Muestra Problema A 10 ml - -
Muestra Problema B - 10 ml -
Muestra Problema C - - 10 ml
Adicionar HCL cc. 1 ml 1 ml 1 ml

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Introducir a cada tubo las tiras de cobre recientemente lavadas. Calentar suavemente de 20' a
1 hora. Retirar la tira de cobre. Observar e interpretar.

V.- RESULTADOS

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VI.- DISCUSIÓN

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VII.- CUESTIONARIO
1.- Describa las características físico-químicas del:
- Nitrato de plata
- Cianuro de potasio
- Acetato de plomo
- Nitroprusiato de sodio
- Yoduro de potasio
- O-cresol
- Tricloruro férrico
- Amoniaco
2.- Describa dos distintas a las ya referidas, que permitan realizar ensayos preliminares en las
determinaciones químico-toxicológicas.
3.- Fundamente el por qué las vísceras deben estar en forma de papilla para realizar los
análisis toxicológicos.
4.- ¿Cómo se prepara el reactivo de Fujiwara?

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VIII.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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TALLER Nº 1: TRATAMIENTO GENERAL DE LAS INTOXICACIONES


Haga un resumen del tratamiento general de las intoxicaciones. Considere tanto las
intoxicaciones agudas como las crónicas.

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PRÁCTICA N° 3
I.- TÍTULO
EFECTO HEPATOTÓXICO DEL TETRACLORURO DE CARBONO

II.- INTRODUCCIÓN
El tetracloruro de carbono es una de las sustancias que causan efectos tóxicos considerables
en el hígado; si bien es cierto que la mayoría de sustancias son metabolizadas a nivel de este
órgano, que por su constitución está encargado de transformar las sustancias que llegan a él,
ya sea de origen externo o de los tejidos extrahepáticos como producto de su metabolismo;
también es cierto que muchas de estas sustancias tienen afinidad por el hígado, causando
serios problemas patológicos: como el caso del tetracloruro de carbono. También puede
ocasionar:

RIESGO DE INHALACIÓN
Por evaporación de esta sustancia a 20°C, se puede alcanzar muy rápidamente una
concentración nociva en el aire.

EFECTOS DE EXPOSICIÓN DE CORTA DURACIÓN


La sustancia irrita los ojos.
La sustancia puede causar efectos en el sistema nervioso central, dando lugar a la pérdida del
conocimiento.
La sustancia puede causar efectos en el hígado y el riñón. Se recomienda vigilancia médica.

EFECTOS DE EXPOSICIÓN PROLONGADA O REPETIDA


El contacto prolongado o repetido con la piel puede producir dermatitis. Esta sustancia es
posiblemente carcinógena para los seres humanos.
Los métodos que pueden utilizarse para evidenciar los efectos tóxicos son:
- Químicos cualitativos y cuantitativos.
- Bioquímicos.
- Histopatológicos.

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III.- MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES:
Por cada mesa de práctica
Material biológico:
-Cobayos machos con un peso aproximado de 600 - 800 g, aparentemente
sanos (2 ejemplares).

Material de laboratorio:
- 4 Tubos de ensayo
- 1 Gradilla porta tubos
- 2 Jeringas de 5 ml
- 2 Placas petri
- 3 Pipetas de 1, 5 y 10 ml
- Gradilla portapipetas
- 2 Sondas delgadas
- 2 Vasos de precipitación
- 1 Par de guantes
- 1 Balanza

REACTIVOS:
- 2 ml Tetracloruro de carbono q.p.
- 5 ml Aceite vegetal 100 % puro
- 30 ml Solución salina fisiológica
- 30 ml Agua destilada

EQUIPOS
- 1 Equipo de disección

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IV.- PROCEDIMIENTO

- Administración del tóxico


Cada grupo de trabajo deberá contar con dos animales de experimentación, a uno
de ellos se le administrará, por vía oral, una mezcla de tetracloruro de carbono en
aceite vegetal a dilución de 1/5 (v/v), y a una dosis de 0.4 ml de tetracloruro puro
por kilogramo de peso corporal a los 24, 48, 72 y 96 horas antes de la realización
de la práctica. Al otro animal (control) se le administrará, por vía oral, el mismo
volumen total a administrar al animal problema, pero solo de aceite vegetal y en los
mismos intervalos de tiempo.
En ambos casos se emplea una sonda delgada:
- Extraer sangre del animal antes de ser sacrificado.
- Observación macroscópica del hígado.
- Aislar el hígado y vesícula biliar.
- Lavar con solución salina fisiológica.

DURANTE LA PRÁCTICA
1.- Se extraerán muestras de sangre de ambos ejemplares, aproximadamente 3 ml, que
servirán para determinar el tiempo de coagulación, EMPLEANDO tubos de ensayo.
2.- Luego, los ejemplares serán sacrificados por decapitación y se obtendrán los hígados para
las observaciones macroscópicas directas y la comparación respectiva.

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE COAGULACIÓN


Método de Lee y White
1. Tómese, aproximadamente, 3 ml de sangre. Ésta debe extraerse, evitando hasta donde sea
posible la estasis. Se empieza a contar el tiempo en el momento en que la sangre penetra en
la jeringa.
2. Se preparan dos tubos de 11 mm de diámetro interior, previamente enjuagados con solución
salina normal y en cada uno se coloca 1 ml de sangre.
3. Colóquese los tubos en una gradilla y después de 3 minutos inclínese el primer tubo para
observar el estado de fluidez. Esta observación se repite cada 30 segundos. El punto final es
el momento en que el coágulo es suficiente.

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V.- RESULTADOS

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VI.- DISCUSIÓN

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VII.- CUESTIONARIO

1.- Explicar el mecanismo de formación de hígado graso por intoxicación con tetracloruro de
carbono y describa las alteraciones bioquímicas que se presentan.
2.- Describa las características físico-químicas del tetracloruro de carbono y de otras dos
sustancias que sean consideradas como hepatotóxicas.
3.- Refiera algunas medidas de tratamiento en casos humanos de hígado graso.

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VIII.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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SEMINARIO Nº 1

LESIONES POR RADIACIONES IONIZANTES

REFIERA LOS ASPECTOS MÁS RELEVANTES DEL SEMINARIO: LESIONES POR


RADIACIONES IONIZANTES.

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PRÁCTICA N° 4

I.- TÍTULO:
INTOXICACIÓN EXPERIMENTAL POR MONÓXIDO DE CARBONO

II.- INTRODUCCIÓN
El monóxido de carbono es un gas que se caracteriza por ser menos denso que el aire,
incoloro, inodoro y sin sabor, que no tiene características irritantes, pues su mecanismo de
acción es asfixiante. Se origina en la combustión incompleta de materiales que contienen
carbono en su composición.

El monóxido de carbono es un gas letal que aparece como resultado de la combustión


incompleta de sustancias que contienen carbono, y su peligro está en que no se huele, por lo
que no se detecta. Una concentración peligrosa de monóxido de carbono puede producirse en
el interior de una casa con calefacción sin ventilación adecuada, en una cochera en la que se
ha puesto en marcha el vehículo. También en un edificio en llamas, en el que la concentración
de monóxido de carbono llega a tener un nivel letal en tanto disminuye el oxígeno del aire.

Los síntomas vendrán dados por irritación de mucosas, tos, ronquera, dificultad respiratoria,
intranquilidad, ansiedad, confusión, desorientación, trastornos de la capacidad de juicio,
coloración cutánea azulada, etc.

El monóxido de carbono es rápidamente absorbido por los alvéolos, pasando a la sangre


donde se une a la hemoglobina. La absorción pulmonar es directamente proporcional a la
concentración de CO en el ambiente, al tiempo de exposición, y a la velocidad de ventilación
alveolar, que a su vez depende del ejercicio realizado durante el tiempo de exposición. Así por
ejemplo, en un incendio, un bombero, dada la alta concentración de monóxido respirado y la
frecuencia respiratoria secundaria al ejercicio, alcanza niveles tóxicos de carboxihemoglobina
en muy poco tiempo.

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Una vez en la sangre, el CO se une con la hemoglobina con una afinidad unas 210-270 veces
superior a la del oxígeno, formando un compuesto denominado carboxihemoglobina.

El resultado de la unión del CO a la hemoglobina es el desplazamiento de la unión del oxígeno


con ésta. En condiciones normales, la cantidad de oxígeno que transporta la sangre es de 20
ml/100 ml de sangre completa, de los cuales el 18 vol% va unido a la hemoglobina y el resto
va disuelto en el plasma. Para una función celular normal, es necesaria la liberación a nivel
periférico de 5 vol%, lo cual constituye la diferencia arteriovenosa de oxígeno.

El monóxido de carbono unido a la hemoglobina provoca una desviación a la izquierda de la


curva de disociación de la hemoglobina, respecto del oxígeno, que permanece unido a esta
molécula, por lo tanto, para que este oxígeno sea cedido, la cantidad de oxígeno tisular ha de
ser mucho menor que en condiciones normales. Así, en una persona normal la PO2 necesaria
para liberar 5 vol% de O2 es de 40 mmHg, mientras que cuando existen niveles de
carboxihemoglobina del 50%, para que se libere la misma cantidad de oxígeno, es necesario
una pO2 de 14 mmHg.

De forma resumida, una vez en contacto con el CO, éste es absorbido hacia la sangre y se
une con la hemoglobina desplazando al oxígeno, y, además, el escaso oxígeno transportado
es difícilmente cedido a los tejidos para su utilización, provocando hipoxia.

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III.- MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES:
Por mesa de práctica

Material Biológico
• Mus musculus (ratones albinos)

Material de Laboratorio
• 1 Equipo de disección
• 2 Jeringas de 3 ml
• 15 g de algodón
• 1 Par de guantes
• 2 Placas petri
• 1 Gradillas
• 3 Pipetas de 1, 5 y 10 ml
• 1 Probeta
• 4 Tubos de ensayo
• 1 Matraz de 1 litro
• 2 Láminas portaobjetos
• 2 Lunas de reloj

REACTIVOS:
• 10 ml Ácido acético glacial 1/3
• 10 ml Ferricianuro de potasio 2%
• 30 ml Suero fisiológico
• 30 ml Agua destilada
• Monóxido de carbono
• 5 ml Cloruro de zinc 30%
• 5 ml de NaOH 0.5 N

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IV.- PROCEDIMIENTO

A uno de los especímenes se le coloca en el interior de un matraz y, luego de taparlo con una
torunda de algodón, se lleva a la altura del tubo de escape de un vehículo gasolinero por unos
minutos hasta llegar a producir la muerte.

Se sacrifica también al animal testigo y se procede a establecer diferencias macroscópicas


entre los dos animales de nariz, orejas, patas y cola. Luego, se hace la disección de ambos y
se extraen los pulmones para ser colocados en placas petris y se lava con solución salina
fisiológica. Comparar ambos órganos aislados.

Para la determinación de monóxido de carbono se emplea la reacción de identificación


indirecta de Lehmann y la reacción del cloruro de zinc.

REACCIÓN DE LEHMANN

A 5 cc de ferrocianuro de potasio al 2% y 1 cc acido acético glacial 1/3 se añaden 10 cc de


sangre diluída a 1/5 del animal intoxicado. Luego, se agita suavemente hasta tomar un color
rojo castaño. Se procede de la misma forma con la sangre del animal testigo y en este caso
de aprecia un color gris castaño.

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REACCIÓN DEL CLORURO DE ZINC

Sobre una luna de reloj se colocan II gotas de solución al 10% de cloruro de zinc, luego se
añaden IV gotas muestra de sangre del animal intoxicado. Se procede de la misma manera
con la sangre del testigo. El color rojo-cereza indica reacción positiva en tanto que un color
gris castaño es negativa.

OTRAS DETERMINACIONES:
Se utiliza sangre total entera.
Muestra: problema y testigo.

I Reacción de Orientación
1.- ENSAYO DE DILUCIÓN
En tubos de ensayo debidamente rotulado, se diluye al 10% en agua destilada, la muestra de
sangre normal como la del problema.
A 1 ml de sangre entera, se añade 10 ml de agua destilada. Observar el cambio de color entre
la muestra problema y testigo.
La sangre normal toma una coloración rojo naranja.
La sangre problema se torna de color rojo cereza.

2.- ENSAYO ALCALINO


REACCIÓN DE HOPPER – SEYLER
En un tubo de ensayo, se coloca 1 ml de sangre problema y en otro tubo, 1 ml de sangre
normal; se agregan unas gotas de NaOH 0.1 N a cada tubo.
OBSERVAR
Diferencia y velocidad de cambio de coloración.

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V.- RESULTADOS

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VI.- DISCUSIÓN

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VII.- CUESTIONARIO
1.- Fundamente la reacción de Lehmann.
2.- Refiera las principales manifestaciones clínicas de una intoxicación con monóxido de
carbono.
3.- Describa las características físicas - químicas de:
- Cloruro de zinc.
- Ferricianuro de potasio.
4.- Defina:
- Carbohihemoglobina.
- Oxígeno hiperbárico.

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VIII.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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RIESGO TOXICOLÓGICO Nº 2

INTOXICACIÓN POR DIOXINAS


Introducción

Son hidrocarburos halogenados que pertenecen al grupo denominado policloro bibenceno-p-


dioxinas, y fundamentalmente son disolventes. Como ha ocurrido en esta ocasión, las dioxinas
pueden también producirse como elementos intermedios en el proceso de preparación y
elaboración de herbicidas del género de las fitormonas. De esta forma, el 2,4,5-
triclorofenoxiacético, un herbicida comúnmente utilizado en agricultura, puede dar lugar a la
dioxina (2-3-7-8 tetraclorodibenzo-p-dioxina).

En estos momentos, aún se conoce muy poco sobre estas sustancias. La mayoría de los
trabajos de experimentación se han hecho en trabajadores, tanto en los que producen estos
disolventes como en los que trabajan en la fabricación de herbicidas; además se han
efectuado estudios en animales experimentales. Los efectos sobre la población empezaron a
ser tenidos en cuenta a principios de los años 70 a raíz de un suceso, en el que una nube
tóxica de dioxinas provocó una intoxicación de considerable magnitud en la población de
Seveso, Italia. A partir de entonces, se hicieron estudios para determinar las consecuencias.
Lo que se constató fue el aumento de cánceres en los tejidos blandos, como por ejemplo la
piel, el hígado, el sistema nervioso central o periférico, también se observó un aumento en el
número de abortos y malformaciones en recién nacidos.

Como anécdota, se conoce que este tipo de sustancias se han utilizado en guerras como la
de Vietnam para eliminar la vegetación y tener mayor visibilidad sobre el enemigo. Las
consecuencias de este uso no están totalmente clarificadas pero se ha observado un aumento
de malformaciones en el sistema nervioso y malformaciones congénitas en la población que
habitaba la zona donde se utilizó.

Los herbicidas que potencialmente pueden dar lugar a dioxinas cuando se aplican en
explotaciones agrarias, además de eliminar las malas hierbas, contaminan también otros
productos a los que no van dirigidos. En ocasiones, los animales pueden ingerir directamente
las plantas contaminadas con herbicidas.

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PARA DISCUSIÓN

Origen y química

Toxicocinética y toxicodinamia

Efectos tóxicos

Prevención y tratamiento

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TAREA:

Hacer un esquema que ilustre a la intoxicación con dioxinas.

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CASO CLÍNICO Nº 2

INTOXICACIÓN POR PLOMO EN NIÑOS

Un niño de 18 meses, hijo de peones agrícolas, fue hospitalizado por presentar pérdida de
peso, vómito y dolor abdominal agudo. Se observó que sufría también descoordinación
muscular y debilidad de los músculos de los pies.

El frotis sanguíneo mostraba un incremento moderado pero evidente del número de


reticulocitos. El recuento sanguíneo era de 4 x 106 células por mm3, con un hematocrito de
37%, la orina de 24 horas contenía 6,4 umol (840 ug) de ácido aminolevulínico de plomo y se
instauró tratamiento inmediatamente con penicilamina. Un análisis cuantitativo de plomo en
orina dio como resultado 1.1 umol (0.24 mg) de plomo en la muestra de 24 horas. La
exploración con rayos X de los huesos largos del paciente mostraba depósitos electrodensos
sobre las epífisis.

PARA DISCUSIÓN

1. ¿Cómo ejerce el plomo sus efectos tóxicos sobre las vías metabólicas?
2. La inhibición enzimática producida por el plomo es: ¿Competitiva o no
competitiva?
3. ¿Por qué mecanismo aumenta la excreción urinaria de ácido aminolevulínico y de
coproporfirina III?
4. ¿Por qué se deposita plomo en los huesos?
5. ¿Por qué es la penicilina, el tratamiento lógico en la intoxicación por plomo?

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TAREA: HACER UN MAPA CONCEPTUAL DEL TEMA DEL CASO CLÍNICO

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PRÁCTICA N° 5

I.- TÍTULO

DETERMINACIÓN DE CIANURO EN MUESTRA BIOLÓGICA

II.- INTRODUCCIÓN

El envenenamiento agudo con cianuro (CN -) puede producirse después de la inhalación de


cianuro de hidrógeno (HCN) o después de la ingestión de ácido cianhídrico o cianuro de
potasio o de sodio. Las soluciones complejas de cianuro se usan en galvanoplastía y la
acidificación de tales soluciones a menudo las llevan a la producción de cianuro de hidrógeno.
Los glicosidos cianogenéticos y otros compuestos que contienen nitrilos, como la amigdalina,
que libera cianuro en el organismo ocurre también en varios tejidos de la planta, incluso el
melocotón y los granos del albaricoque, raíz de la yuca y algunos frijoles.

Los insecticidas con tiocianato (tiocianato de etilo, tiocianato del metilo) también se metabolizan
a ion cianuro en el organismo y pueden causar serios problemas de toxicidad. El cianuro
también es un metabolito del nitroprusiato de sodio (usado como vasodilatador) y otros
compuestos que contienen nitrilos, pero los envenenamientos con cianuro en estos casos son
raros.

El tiocianato inorgánico y las sales de ferricianuro y de ferrocianuro no liberan cianuro en el


organismo y es relativamente poco tóxico.

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III.- MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES:

Por cada mesa de prácticas

Material Biológico

50 g de hígado de pollo

Material de vidrio:

4 Tubos de ensayo
1 Embudo
3 Pipeta de 2, 5 y 10 ml
2 Matraces de 100 ml
2 Vasos de precipitación de 50 ml
2 Gradillas portatubos y portapipetas
Equipos:
PH metro
Equipo de disección

REACTIVOS:
5 ml Solución acuosa de hidróxido de sodio 10%
5 ml Solución acuosa de sulfato ferroso 10% recientemente preparada
5 ml Solución acuosa de ácido clorhídrico 10%
30 ml Agua destilada
30 ml de SSF

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IV.- PROCEDIMIENTO

Determinación cualitativa
Se basa en la formación de un complejo azul de ferriferrocianuro (azul de Prusia) con los
iones ferrosos.

Preparar el homogenizado de la muestra, usando una solución salina fisiológica (tanto el


problema como el testigo). Proceder a trabajar en paralelo con ambas muestras.
• Determinar el pH.
• Filtrar.

• Tomar 2 tubos de ensayo, enumerarlos. Igualmente, trabajar en paralelo (luego, uno de


ellos se lleva a la centrífuga y luego se compara).
• Diluir 1 ml de muestra con 2 ml de solución del hidróxido de sodio.
• Agregar 2 ml de solución de sulfato ferroso.
• Agregar ácido clorhídrico suficiente para disolver el precipitado de hidróxido ferroso.

Un color azul indica la presencia de cianuro. No existen fuentes comunes de interferencia.

Sensibilidad
Cianuro, 10 mg/l.

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V.- RESULTADOS

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VI.- DISCUSIÓN

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VII.- CUESTIONARIO
1.- Describa las características físico-químicas del cianuro de sodio y del nitroprusiato de
sodio.
2.- ¿Cuáles son las precauciones que se deben tener en cuenta cuando se manejan
muestras de las cuales, se sospechan, contengan cianuro?
3.- Defina:
- Glicosido cianogenético.
- Metahemoglobinemia.

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VIII.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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TALLER Nº 2

INTOXICACIÓN POR FOSGENO Y ARSINA

INTRODUCCIÓN
Fosgeno es compuesto del producto químico con fórmula Cl2CO. Este gas descolorido ganó
mala fama como arma química durante la Primera Guerra Mundial; es también un valorado
reactivo industrial. En concentraciones bajas, su olor se asemeja al heno o a la hierba del
corte. Además de su producción industrial, unas cantidades pequeñas ocurren naturalmente
en la interrupción de compuestos tratados con cloro y la combustión de clorina, conteniendo
orgánicos compuestos. El magnesio 5000 fue producido aproximadamente en 1989.

PARA DISCUSIÓN

Origen y química

Toxicocinética y toxicodinamia

Efectos tóxicos

Prevención y tratamiento

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TAREA:

Hacer un mapa conceptual, respecto de la intoxicación con ARSINA.

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PRÁCTICA N° 6
I.- TÍTULO

DETERMINACIÓN DE MERCURIO EN MUESTRA HIDROBIOLÓGICA

II.- INTRODUCCIÓN

El mercurio es un metal blanco plateado. Junto con el cadmio y cinc, se ubica en el grupo II B
de la tabla periódica. Su estructura cortical externa es 5d10, 6s2. El mercurio, por sus
características fisicoquímicas: estado líquido a temperatura ambiente y el único conocido en
estado líquido a 0º C., densidad elevada, calor específico, poco elevado, líquido muy poco
compresible, tensión superficial muy alta, capacidad calorífica muy débil, capacidad de
amalgamación con otros metales; posee el don de la ubicuidad. Cualquier producto que se
analice, natural o artificial, contendrá, al menos, trazas de mercurio.

Sus características fisicoquímicas son las siguientes:


Numero atómico: 80
Peso atómico: 200,61
Punto de fusión: -38,9º C
Punto de ebullición: 356,9º C
Densidad (20º C): 13,5955
Tensión superficial: 480,3 din/cm3

OCUPACIONES QUE PRESENTAN RIESGO POTENCIAL DE EXPOSICIÓN


AL MERCURIO
MERCURIO METÁLICO MERCURIO INORGÁNICOMERCURIO ORGÁNICO
Odontólogos Desinfectantes Bactericidas
Mineros y joyeros Explosivos Fungicidas
Fotógrafos Taxidermistas Farmacéuticos
Ceramistas Laboratoristas Técnicas histológicas
Refinerías de mercurio Fabricantes de vinilos Pesticidas
Fabricantes de pinturas Curtidores Embalsamadores
Procesadores de papel Procesamiento de pieles Recolectores de granos
Fabricantes de amalgamas Fabricantes de tintas Agricultores
Procesamiento de plata Insecticidas
Procesamiento de bronce
Productos con cloro
Termómetros
Aux. Odontología

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A temperatura ambiente, conduce mal la corriente eléctrica, pero se convierte en un excelente


conductor en las proximidades del cero absoluto (superconductor). A elevada temperatura, en
estado de vapor, conduce la electricidad (lámpara de vapor de mercurio, rica en rayos
ultravioleta). Su coeficiente de dilatación térmica es prácticamente uniforme entre 0º C y 300º
C, por lo que se utiliza en la construcción de termómetros. Por su elevada densidad y baja
presión de vapor, se usa también en barómetros y bombas de vacío.

El mercurio disuelve numerosos metales con formación de amalgamas, sin embargo, no lo


hace con el hierro por lo que se comercializa y conserva en frascos de este metal. Se combina
con el azufre y halógenos, pero es realmente inerte, excepto frente al ácido nítrico que es su
mejor disolvente, tanto diluido como concentrado; también es soluble en sulfúrico, pero solo
concentrado y en caliente.

El metilmercurio es un compuesto tóxico que aparece en el ambiente producto de la


contaminación por fuentes naturales o antropogénica. Este compuesto se produce en medio
acuático por vía enzimática y mediante la acción microbiana. El metilmercurio es rápidamente
acumulado por casi toda la biota acuática y se ha demostrado que sus concentraciones más
elevadas se encuentran en el tejido de los peces de mayor edad y tamaño.

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En la mayoría de los países, el pescado y los productos pesqueros presentan niveles de


metilmercurio en su porción comestible que no exceden de 200 a 300 m g/kg. Sin embargo,
en las especies depredadoras como la tuna, el tiburón y el pez espada (aún en áreas no
contaminadas) pueden tener niveles de este contaminante por encima de 1000 m g/kg, así
como en determinados peces de agua dulce. El consumo de pescado contaminado con
metilmercurio representa un riesgo mayor para las mujeres embarazadas que para el hombre
adulto, ya que este contaminante pasa al feto, provocándole daños neurológicos severos, por
ser éste un organismo más susceptible.

El sistema nervioso central es el tejido blanco principal de los efectos del metilmercurio en
adultos, siendo las funciones más afectadas: la sensorial, la auditiva, y la visual, junto con las
áreas del cerebro, y especialmente en el cerebelo las áreas relacionadas con la coordinación.
Los efectos tempranos de la intoxicación son síntomas no específicos como: parestesia,
indisposición ligera y visión borrosa. Existen evidencias de que el metilmercurio afecta el
sistema inmunológico del hombre en exposición crónica. Se ha encontrado una asociación
entre las anormalidades neurológicas y la exposición a metilmercurio, mediante el consumo
de pescado contaminado en hombres y mujeres adultos.

La OMS ha establecido una ingesta diaria tolerable para metilmercurio de 0,48 m g/kg de peso
corporal. Varios países han establecido en sus regulaciones sanitarias límites de mercurio
total en especies de peces depredadores de 1 mg/kg y en otros productos pesqueros 0,5
mg/kg, y Noruega ha propuesto 1 mg/kg para metilmercurio en las mismas especies.

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III.- MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES
Por cada mesa de práctica

Material Biológico
Pescado, molusco langostino, camarones.

Material de laboratorio
• Fiola de 100 ml
• Balón de 250 ml
• Pipeta de 2, 5 y 10 ml
• Vaso de precipitación
• Estufa para encineración
• Gradilla
• Papel milimetrado

REACTIVOS
• Solución de ditizona
• Cloroformo

• H2SO4CC.

• KMNO4

• Hidroxilamina
• Amoniaco cc.
• HCL.0.1N
• Bromato de potasio 40%
• Solución buffer
• Dicloruro de mg. q.p.
• HCL 0.5 N
• Solución estándar agua destilada

EQUIPOS

• Espectrofotómetro
• Equipo de disección

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IV.- PROCEDIMIENTO

Varios métodos analíticos están disponibles para la determinación de mercurio total,


inorgánico y orgánico, en diferentes sustratos.

Todos representan una mejora considerable del método original colorimétrico de la ditizona. El
método de activación neutrónica se considera como el más exacto y sensible, y usualmente
es utilizado como método de referencia. El método de absorción atómica sin llama es el más
ampliamente usado en muestras biológicas y ambientales; aunque no es selectivo, puede
determinar tanto el mercurio total como el mercurio inorgánico y por diferencia el mercurio
orgánico. El método de cromatografía de gas líquido con detector de captura electrónica se
prefiere cuando se requiere medir selectivamente el metilmercurio en tejidos de pescado en
presencia de otros compuestos de mercurio.

“MÉTODO DE LA DITIZONA PARA LA EXTRACCIÓN DE MERCURIO”

Se basa en la propiedad del mercurio divalente de forma con la ditizona, un ceto complejo de
color amarillo naranja, el cual se extrae con cloroformo.

1° En primer lugar, se prepara la muestra: Consiste en separar la parte comestible del


pescado, molusco, langostino, camarón o cualquier otro tipo hidrobiológico. Se lava con agua
destilada tres veces, de manera consecutiva, y luego se procede a picar la muestra de forma
muy fina hasta hacer una papilla más o menos homogénea.

De una papilla se toman 25 gramos para realizar la determinación.

2° Digestión de la muestra: Consiste en un balón de 500 ml, se coloca la muestra y se


añade cuidadosamente 20 ml de HCl CC. Al balón se acopla un refrigerante de reflujo,
suavemente, hasta que empiece la evolución (hervir) añade poco a poco 3 gr. de KMnO4
hasta obtener un color ligeramente púrpura, luego se agrega 2 ml. de clorhidrato de
hidroxilamina al 20%, la solución debe quedar incolora. En algunos casos, es necesario
calentar hasta la decoloración total de la muestra. Luego, se procede a la carbonización de la
muestra, en una mufla, hasta obtener cenizas blancas, se filtra, y el residuo se lava con una
pequeña cantidad de agua bidestilada; en esta condición queda listo para la extracción.

3° Extracción del mercurio: Se enfría la muestra a temperatura ambiente, se transfiere a una


pera de decantación de 250 ml. Se lleva la solución a PH =2, utilizando amoniaco cc., se mide

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el PH y luego se añade 5 ml de ditizona extractiva, se agita por 2 minutos y se aprecia en color


verde oscuro del preparado, el proceso extraído, se repite 3 veces en la forma similar a la
descrita (fase clorofórmica). Los extractos clorofórmicos obtenidos se juntan y se agitan, se
agrega 25 ml de HCl. 0.1N a la fase acuosa, se le agrega 10 ml de cloroformo y se agita,
finalmente se reúne todos los extractos cloroformos unidos.

Esta extracción no es selectiva (puede estar siendo interferida por otros metales que
interfirieron el proceso).

4° Separación de sustancias interferentes: Al embudo que contiene extractos cloroformos


de ditizona, se añade 25 ml de bromuro de K al 40%, se agita por 2 minutos y en estas
condiciones, el mercurio pasa por la fase acuosa, formando el complejo tetrabromuro
mercurato de K, separándose así de la sustancia interferente: cobre, bismuto, plomo, arsénico,
cromo, que permanecen en la capa clorofórmica, la misma que se descarta.

5° Formación y medición especto fotométrica del complejo: La fase acuosa se lava y se


agita con algunos cloroformos Q.P., que luego se deshechan; se agrega 5 ml de buffer para
ajustar el PH 6.4, así se rompe el complejo tetrabromomercurato de K (para que quede libre el
mercurio). Por último, se añade 7.5 ml de ditizona estándar y se agita por 2 minutos. En estas
condiciones se forma el ditizonato de mercurio que es un complejo coloreado, posteriormente
se hace la lectura de la absorbancia 490 Nm en el espectrofotómetro y se dibuja la cc. en la
curva de calibración que previamente se haya preparado. Esto implica preparar una solución
patrón y una solución estándar de Hg.

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PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN PATRÓN


Se disuelve 80.13 gr de dicloruro de Hg Q.P en HCl 0.5N, se afora a 100 ml con el mismo ácido.
Esta nueva solución equivale a 1ml de Hg por 1ml (1ml Hg/1ml), es bastante estable.

PREPARACIÓN ESTÁNDAR I DE MERCURIO

Se prepara transfiriendo 10 ml de la solución patrón a una fiola de 1000 ml, luego se afora con
agua destilada; esto significa que la concentración de Hg será 10 ugr/ml.

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR II DE MERCURIO


Se transfiere 25 ml de la solución estándar I a una fiola de 250 ml y se completa el volumen
con agua destilada, la cc. será de Hg, de esta nueva solución será de 1 ug/ml.

La recomendación tanto de la solución estándar I como de la solución estándar II debe ser


preparada en el momento de emplearse.

CURVA DE CALIBRACIÓN
Se toma 2.5, 5, 7.5 y 10 ml de la solución estándar II, que son leídos en el espectrofotómetro y
se grafica en el papel milimetrado. Luego, en esa gráfica, se incluye la lectura de la muestra
problema.

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V.- RESULTADOS

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VI.- DISCUSIÓN

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VII.- CUESTIONARIO

1.- Describa el probable mecanismo de metilación del mercurio metálico en seres vivos.
2.- ¿Cuáles son las poblaciones de riesgo para una intoxicación con mercurio?
3.- ¿Cuál es el nivel límite permisible de mercurio en carne de peces y moluscos en nuestro
país?
4.- Describa la toxicocinética del mercurio.

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VIII.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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SEMINARIO Nº 2
CONTAMINACIÓN AMBIENTAL

HAGA UN RESUMEN DE LA PRESENTACIÓN DEL SEMINARIO: CONTAMINACIÓN


AMBIENTAL

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PRÁCTICA N° 7

I.- TÍTULO:
DETERMINACIÓN DE AMINAS BIÓGENAS EN QUESOS MADUROS

II.- INTRODUCCIÓN
Durante la maduración de los quesos, ocurren transformaciones en las características físicas,
químicas y sensoriales, generando el sabor, olor, color y textura que le son particulares a
cada tipo de queso madurado. Los cultivos iniciadores hidrolizan las cadenas polipeptídicas,
liberando aminoácidos; sustrato de las enzimas descarboxilasas microbianas para la
producción de aminas biógenas.

Durante este proceso, existen condiciones ambientales y de almacenamiento como son:


temperatura, humedad, grado de acidez y concentración de sales, que afectan la textura del
queso y pueden favorecer el crecimiento de las enterobacterias. Estos microorganismos
podrían estar presentes por una inadecuada manipulación higiénica, y tienen la capacidad de
producir aminas biógenas.

Por otra parte, diversos autores han reportado que los cultivos iniciadores utilizados en la
elaboración de los quesos madurados, se asocian con la producción de aminas biógenas
tales como: histamina, tiramina, triptamina, putrescina, cadaverina, espermina y espermidina.
Los cultivos iniciadores lactobacillus, streptococcus, leuconostoc y pediococcus, que se utilizan
como inóculos en los quesos madurados, han sido identificados como bacterias que poseen
enzimas decarboxilasas de los aminoácidos, con lo cual son potencialmente productoras de
aminas biógenas.

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III.- MATERIALES
Cada mesa de práctica

Material Biológico
• 20 g de queso fresco

Materiales de Laboratorio
• 2 matraces de 100 ml
• 1 embudo de vidrio
• 3 balones aforados de 25 ml
• Papel de filtro
• 2 pipetas de 5 y 10 ml
• 6 pipetas de 2 ml
• 1 micropipeta
• 5 fiolas de 100 ml

Reactivos
• 100 ml de ácido perclórico 0.4 M
• 5 g de tiramina, triptamina, putrescina, cadaverina y espermita estándar
• 5 ml de NaOH 2N
• 5 ml de NaHCO3 saturado
• 10 ml de solución de cloruro de dansilo (10 mg de cloruro de dansilo en 1 ml de
acetona)
• 2 ml de amoniaco puro
• 5 ml de acetonitrilo
• Filtro millipore de 0,22 µm
• 10 ml de acetato de amonio

Equipos
• Homogenizador
• Centrífuga
• Incubadora

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• Cromatógrafo

IV.- PROCEDIMIENTO

Preparación de la muestra
Para la preparación de las muestras, se homogeniza 5 g de queso con 10 ml de ácido
perclórico 0,4 M, usando un homogenizador. Luego se centrifuga por 10 minutos a 3000
rpm. Posteriormente, se filtra, usando y se trasvasa a balones aforados de 25 mL. La
operación se repite tres veces y los sobrenadantes son combinados y ajustados a 25 mL
con ácido perclórico 0,4 M.

Formación de derivados fluorescentes


Para la formación de derivados fluorescentes se toma 1 ml del filtrado, que es mezclado
con 200 µL de hidróxido de sodio 2N y luego tamponado añadiendo 300 µL de bicarbonato
de sodio saturado. Posteriormente, se adicionan 2 mL de solución de cloruro de dansilo
(10 mg de cloruro de dansilo en 1 mL de acetona) y es transferido a una incubadora a
40°C por 45 min. El cloruro de dansilo residual es removido, añadiendo 100 µL de
amoniaco puro, se deja en reposo por 30 min y se ajusta a un volumen de 5 mL con
acetonitrilo. Posteriormente, se centrifuga por 5 minutos a 2500 rpm y el sobrenadante es
filtrado a través de un filtro millipore de 0,22 µm de poro para su inyección en el
cromatógrafo.

Se prepara un estándar de 100 ppm a partir de patrones de tiramina, triptamina,


putrescina, cadaverina, histamina, espermita de alta pureza. La formación de derivados
fluorescentes de los estándares se realiza de la misma manera que la muestra. El
gradiente de elusión se utiliza con una mezcla de acetato de amonio 0,1 M (solvente A) y
acetonitrilo (solvente B), comenzando 80%: 20% respectivamente, incrementando B a
80% en 25 minutos. La corrida se mantiene isocráticamente por 5 minutos.

Para determinar la concentración de las aminas, se compara el tiempo de retención de


cada muestra con los estándares de referencia y la concentración del analito, se calcula
por comparación de las áreas de los picos.

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V.- RESULTADOS

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VI.- DISCUSIÓN

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VII.- CUESTIONARIO

1.- Identifique la relación de las aminas biógenas presentes en alimentos con el cuadro clínico
de una intoxicación alimentaria.
2.- Describa los tipos de intoxicación alimentaria.
3.- Haga un breve comentario de alguna intoxicación alimentaria masiva extraída de un diario.
4.- Haga una lista con sustancias químicas que frecuentemente contaminan alimentos.

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VIII.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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RIESGO TOXICOLÓGICO Nº 3

Riesgo toxicológico del uso del anís estrella en lactantes.

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CASO CLÍNICO Nº 3
INTOXICACIÓN POR ALIMENTOS

Una estudiante de 21 años comenzó con una diarrea acuosa profusa, casi continua, y luego
presentó vómitos. Su estado general se deterioró en una forma abrupta y fue llevada
inmediatamente al servicio de emergencia del hospital.

Al momento de la llegada, se determinó que su estado era cianótico, su piel había perdido
turgencia, su presión arterial era 70/50, su pulso rápido y débil. El médico de turno diagnosticó
CÓLERA. Se tomó una muestra de heces para coprocultivo y comenzó de inmediato el
tratamiento.

TRATAMIENTO:

 Administración IV de una solución preparada en el hospital constituida por 5 g de NaCl, 4


g de NaHCO3 y 1 g de KCl por litro de agua destilada, libre de pirógenos, a razón de 100
ml por kilogramo de peso corporal.
 Administración de tetraciclina.
 Al cabo de 2 días, se suspendió la aplicación endovenosa y se instauró la administración
de sales de rehidratación oral, constituida por 20 g de glucosa, 3.5 g de cloruro de sodio,
2.5 g de carbonato de sodio, 4.5 g de cloruro de potasio por litro de agua.
 Al cuarto día, recibió alimento sólido y al séptimo día se le dio de alta.

DISCUSIÓN:

• Características del agente biológico que produce la enfermedad.


• Mecanismo de producción de la deshidratación.
• Tipos de toxinas.
• Fundamente el tratamiento asignado.
• Refiera medidas de prevención y tratamiento.

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Taller Nº 3

Rol y riesgo del uso de edulcorantes en el tratamiento de enfermedades.

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SEMINARIO Nº 3

Uso de aditivos en la industria alimentaria.


alimentaria.

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PRÁCTICA N° 8

I.- TÍTULO:
DETERMINACIÓN DE INSECTICIDAS CARBAMATOS EN MUESTRAS BIOLÓGICAS

II.- INTRODUCCIÓN
Los plaguicidas incluyen una clasificación general que incluye los insecticidas, los raticidas,
los herbicidas, los fungicidas y las sustancias para fumigación. Estos compuestos fabricados
con el único propósito de destruir alguna forma de vida, se clasifican como plaguicidas porque
actúan contra organismos que el hombre considera como indeseables.

Aunque la toxicidad selectiva de los plaguicidas es efectiva, todos ellos pueden producir por lo
menos algo de toxicidad en el hombre. El uso de insecticidas en la agricultura ha aumentado
enormemente desde la Segunda Guerra Mundial; existe gran potencial de exposición
ocupacional a estos productos químicos en su producción y uso. Sin embargo, la exposición a
los insecticidas no se limita a los accidentes laborales, a menudo, quedan residuos en el
producto y el hombre está expuesto a bajos niveles de estas sustancias en los alimentos.

Los insecticidas organofosforados han reemplazado en gran parte a los hidrocarburos clorados.
Los organofosfatos no persisten mucho tiempo en el ambiente y tienen muy bajo potencial
carcinógeno, pero su toxicidad aguda es mucho mayor en el hombre.

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Estos insecticidas son comúnmente aplicados bajo distintas formas, ya sea en emulsiones, en
polvos o en soluciones para pulverizar, que pueden quedar impregnados fácilmente en los
vestidos y en la piel y causar serios cuadros de intoxicaciones cuando no se percatan los que
manipulan estas sustancias.

CARBAMATOS PESTICIDAS

Estos compuestos tienen en la fórmula general la substitución de azufre por oxígeno, lo cual
hace que tenga la actividad insecticida más baja que los organofosforados.

Los carbamatos son usados ampliamente como insecticidas, herbicidas y fungicidas. Los
insecticidas de carbamatos inhiben la acetilcolinesterasa y así la evidencia de exposición al
producto puede obtenerse midiendo la actividad de la colinesterasa.

Los carbamatos herbicidas y fungicidas, como el ditiocarbamato, no producen inhibición tan


importante de la colinesterasa, por lo que los hacen menos tóxicos en los humanos.

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Interpretación clínica
La exposición a carbamatos puede causar anorexia, dolor abdominal, náuseas, vómitos,
diarrea, lagrimeos, hipersalivación, sudor, ansiedad, ataxia y edema pulmonar agudo. Para la
terapia puede indicarse la atropina, que es un antídoto, la pralidoxima no debe ser usada.

Mecanismo
Los ésteres de carbamato de N-metilo causan carbamilación reversible de la enzima
cetilcolinesterasa, lo que permite la acumulación de acetilcolina, la substancia neuromediadora
en las uniones nueroefectoras parasimpáticas (efectos muscarínicos), en las uniones
mioneurales del músculo esquelético y en los ganglios autónomos (efectos nicotínicos), así
como en el cerebro (efectos en el SNC).

La combinación carbamilo-acetilcolinesterasa se disocia más rápidamente que el complejo


fosforilo-acetilcolinesterasa producido por los compuestos organofosfatados. Esta labilidad
tiene varias consecuencias importantes: (1) tiende a limitar la duración del envenenamiento
con insecticida carbamato N-metilo; (2) es responsable de que el intervalo que existe entre la
dosis que genera los síntomas y la dosis letal sea mayor que la que existe en el caso de la
mayoría de los compuestos organofosfatados; y, (3) con frecuencia invalida la medición de la
actividad de la colinesterasa en la sangre, como indicador diagnóstico del envenenamiento
(vea a continuación).

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Los carbamatos de N-metilo se absorben por inhalación, ingestión y algunos penetran por la
piel, aunque esta última tiende a ser la ruta menos tóxica. Por ejemplo, el carbofurán tiene una
DL50 por vía oral de 5 mg/kg en ratas, comparado con una DL50 dermal de 120 mg/kg, lo cual
hace la ruta oral aproximadamente 24 veces más tóxica cuando es ingerido. Los carbamatos
N-metilo son hidrolizados enzimáticamente por el hígado y los productos de degradación se
excretan por los riñones y el hígado.

En las uniones nerviosas colinérgicas, con músculo liso y células glandulares, la alta
concentración de acetilcolina causa contracciones musculares y secreción, respectivamente.
En las uniones musculares esqueléticas, el exceso de acetilcolina puede producir excitación
(espasmos musculares), pero también puede debilitar o paralizar la célula al despolarizar la
placa terminal. Las concentraciones elevadas de acetilcolina pueden causar alteraciones
sensoriales y conductuales, incoordinación y depresión en la función motora en el cerebro
(aunque raras veces causan convulsiones), a pesar de que los insecticidas de carbamato de
N-metilo no penetran eficazmente al sistema nervioso central. La depresión respiratoria,
combinada con edema pulmonar, es la causa común de muerte en el envenenamiento con
estos compuestos.

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III.- MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES
Por cada mesa de práctica

Material Biológico
• 50 g de hígado de pollo

Material de Laboratorio
• 4 Tubos de ensayo
• 3 Pipetas de 2, 5 y 10 ml
• 2 Matraces de 100 ml
• 2 Vasos de precipitación de 100 ml
• 1 Embudo
• 1 Pera de decantación
• 2 Papeles de filtro

REACTIVOS
• 10 ml de solución de ácido clorhídrico (2 mol/l)
• 10 ml de solución de furfuraldehido (100 ml/l) en metanol
• 5 ml de ácido clorhídrico concentrado (densidad relativa 1.18)
• 10 ml de cloroformo
• 10 ml de metanol
• 30 ml de agua destilada
• 30 ml de solución salina fisiológica
• 5 ml de insecticida carbámico

EQUIPOS
• Centrífuga
• Equipo de disección

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IV.- PROCEDIMIENTO

La prueba está basada en una reacción general del carbamatos con el furfuraldehido, con la
presencia de cloruro de hidrógeno.

Prueba cualitativa
Aplicable al contenido estomacal y los residuos de la escena (papilla de hígado de pollo,
contaminada con carbamato).

Método:
1. Acidificar 1 ml de muestra con 0.5 ml de dilución de ácido clorhídrico, extraer con 4 ml de
cloroformo y mezclar cuidadosamente por 5 minutos.
2. Centrifugar durante 5 minutos, desechar la capa superior acuosa y filtrar el extracto del
cloroformo, a través de un papel de filtro en un tubo limpio.
3. Evaporar el extracto a sequedad, bajo una corriente de aire o nitrógeno a 40°C.
4. Disolver el residuo en 0.1 ml de metanol, aplicar una mancha de la solución en un papel de
filtro, dejar secar.
5. Aplicar 0.1 ml de la solución de furfuraldehido a la mancha, dejar secar y exponer el papel a
los humos del ácido clorhídrico, concentrado por 5 minutos bajo campana.

Los carbamatos dan una mancha negra. El meprobamato y otros carbamatos no


pesticidas interfieren en esta prueba.

Sensibilidad
Carbamato, 100 mg/l.

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V.- RESULTADOS

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VI.- DISCUSIÓN

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VII.- CUESTIONARIO
1.- Describa un caso clínico referido a intoxicación con insecticidas organofosforados o
carbamatos.
2.- Describa el mecanismo toxicológico en una intoxicación con carbamatos.
3.- Haga un listado con 5 productos insecticidas comerciales que contengan carbamatos.

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VIII.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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CASO CLÍNICO Nº 4
INTOXICACIÓN POR ORGANOFOSFORADOS

Paciente masculino de 23 años, 60 kg de peso, procedente de zona rural. Después de una


discusión con su familia ingiere voluntariamente 3 tragos de un insecticida usado en cultivos
de café llamado Furadol®. Media hora después, el paciente muestra episodios convulsivos
sucesivos sin recuperación de la conciencia, por lo cual es llevado al servicio de urgencias de
la unidad local de salud, 10 minutos después. Al ingreso, se encuentra un paciente en malas
condiciones generales, inconsciente, sialorréico, con relajación de esfínteres, en el momento
sin convulsiones. EF: PA=140/90, FC=80/min, FR=18/min, T°=40°C. Isocórico, sin contacto
ocular con el examinador. Sialorréico con lesiones linguales por mordida, cuello sin rigidez de
nuca ni otros signos meníngeos. RsCsRs sin soplos, RsRs con crépitos basales derechos.
Abdomen normal, peristaltismo lento no aumentado. Extremidades hipotónicas. ROT normales.

Previa utilización de 3 ampollas de atropina, el médico toma medidas de descontaminación:


lavado gástrico con 5 litros de agua bicarbonatada, posteriormente administración oral de 40 g
de carbón activado en 500 cc. de SSN. Debido a las altas temperaturas presentadas por el
paciente, se administran 2 g de dipirona IV y, por sospecha de un componente infeccioso, se
administra una antibioticoterapia con penicilina cristalina y gentamicina. Durante estos
procedimientos, el paciente desarrolla un nuevo episodio de convulsiones las cuales se
manejan con dosis de carga de fenitoína. Después de 3 minutos de finalizado el goteo,
presenta movimientos tonicoclónicos generalizados, los cuales desaparecen espontáneamente
sin recuperación de la conciencia, por lo que se decide remitir a un nivel 3. Durante el camino,
el paciente inicia un nuevo episodio convulsivo con una broncoaspiración masiva y fallece.

• Explique el mecanismo de acción del agente causante de la intoxicación.


• Defina el concepto de “status convulsivo”.
• Explique las posibles causas de la elevación de la temperatura.
• ¿Está usted de acuerdo con la terapia antipirética y antibiótica instauradas? Explique.
• ¿Qué discrepancias tiene con el enfoque y el manejo inicial hechos con este paciente?
• ¿Qué opina de la terapia anticonvulsiva instaurada? Proponga alternativas terapéuticas.
• ¿Qué precauciones tomaría usted para remitir a un paciente de este tipo?

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PRÁCTICA N° 9

I.- TÍTULO:
IDENTIFICACIÓN DE ANIMALES PONZOÑOSOS – SHOCK ANAFILÁCTICO

II.- INTRODUCCIÓN
Los animales ponzoñosos han desarrollado aparatos para la producción de veneno y su
inoculación, produciendo e inyectando sustancias altamente tóxicas para inmovilizar y matar a
sus presas. Entre ellos se ubican: serpientes, arañas, abejas, avispas, hormigas, alacranes,
ciempiés, milpiés, peces, y otros.

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Localización de la picadura / mordedura


La incidencia de accidentes en el pie, seguido de la mano y la pierna cuando se trata de
ofidios, indica claramente dónde se produce la interacción entre animal y persona, si
quisiéramos entrar en mayores detalles diríamos que la parte derecha del cuerpo es afectada
con una mayor incidencia que la parte izquierda. En niños hay alta incidencia en manos y
pies.

En accidentes aracnídicos en adultos, es evidente que no hay una ubicación anatómica


preferencial, pero se relacionan los accidentes aracnídicos con el trabajo que realiza el
accidentado.

III.- MATERIALES
Por cada mesa de práctica

Material Biológico
• Diversas especies de animales ponzoñosos menores (avispas, abejas, arañas,
alacranes, etc.)

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Material de Laboratorio
• 2 Placas petri
• 4 Lunas de reloj
• 2 Vasos de precipitación
• 2 Matraces
• Frasco de vidrio transparente y de boca ancha, uno por cada animal ponzoñoso
• 1 Lupa

Reactivos
• 30 ml SSF
• 30 ml agua destilada

Equipos
• Estereoscopio
• Equipo de disección

IV.- PROCEDIMIENTO
• Con cautela, capturar en sus hábitats, a diversos animales ponzoñosos y trasladar al
laboratorio.
• Con ayuda de lupa y estereoscopio, observar cuidadosamente cada uno de ellos e
identificar sus principales características.
• Identificar el género y la familia a la que pertenecen.
• Reconocer la ponzoña.
• Aislar la ponzoña.
• Investigar el cuadro clínico que produce en el hombre la mordedura y/o picadura de
cada animal ponzoñoso llevado al laboratorio.

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V.- RESULTADOS

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VI.- DISCUSIÓN

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VII.- CUESTIONARIO
1.- Describa el mecanismo de producción de shock anafiláctico por accidente con animales
ponzoñosos.
2.- Describa la sintomatología de un accidente por animal ponzoñoso, en el hombre.
3.- Haga una lista con los animales que posean ponzoña, que habitan en la región.

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VIII.- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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ANEXO
TÓXICOS EN AMBIENTES LABORALES
Y SUS BIOMARCADORES

ACETONA
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ACETONA EN ORINA (ACET-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML
CADA UNA), TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: CONGELADOR INMEDIATAMENTE DESPUÉS DE LA COLECTA.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS (CG).
OBS.: DIABÉTICOS PUEDEN EXCRETAR ALTAS CUANTÍAS DE ACETONA EN ORINA.

BENCENO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO TRANS-TRANS-MUCÓNICO URINARIO (MUCON).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 0,5 MG/G DE CREATININA SE CORRELACIONA CON UNA EXPOSICIÓN OCUPACIONAL A 1
PPM DE BENCENO.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO DESEMPEÑO (HPLC).
OBS.:
1. EL SORBITOL, UN ADITIVO DE ALIMENTOS, PUEDE OCASIONAR UNA DISCRETA INTERFERENCIA,
QUE ES MINIMIZADA, COLECTANDO LA ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO;
2. EL HÁBITO DEL TABAQUISMO TAMBIÉN PUEDE AUMENTAR LA CONCENTRACIÓN DEL ÁCIDO
TRANS-TRANS MUCÓNICO EN ORINA;
3. LOS VALORES DE REFERENCIA HABITUALMENTE YA CONTEMPLAN ESAS INTERFERENCIAS;
4. EL ÁCIDO TRANS-TRANS MUCÓNICO URINARIO ES RECOMENDADO COMO UN INDICADOR
BIOLÓGICO PARA EXPOSICIÓN A BAJAS CONCENTRACIONES DE BENCENO.

DICLOROMETANO (DCM / CLORURO DE METILO)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: CARBOXIHEMOGLOBINA EN SANGRE (COHB).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADO DEL INICIO DE LA JORNADA Y OTRA DEL FINAL
DE LA JORNADA DE TRABAJO (2 ML CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS
SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 1,0 % (NO FUMADORES).
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.

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OBS.: LA MAYOR FUENTE DE INTERFERENCIA DE ESTE I.B.E. ES EL TABAQUISMO. FUMADORES PUEDEN


ATINGIR VALORES DE HASTA 15 %.

DIMETILFORMAMIDA
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: N-METILFORMAMIDA EN ORINA (NMF).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS.
OBS.: ESTE AGENTE QUÍMICO ES FÁCILMENTE ABSORBIDO A TRAVÉS DE LA PIEL.

DISULFURO DE CARBONO (CS2)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO 2-TIO-TIAZOLIDÍN 4-CARBOXÍLICO URINARIO (TTCA).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO DESEMPEÑO (HPLC).
OBS.: ESTE I.B.E. SUBSTITUYE CON VENTAJAS EL TEST DE IÔDO-AZIDA, QUE FUE ABANDONADO. ES
MÁS ESPECÍFICO Y SE CORRELACIONA MEJOR CON LA EXPOSICIÓN.

ESTIRENO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO MANDÉLICO URINARIO (MANDEL).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO DESEMPEÑO (HPLC).
OBS.: DEBE SER EVITADA LA INGESTIÓN DE BEBIDA ALCOHÓLICA EN LAS 24 HORAS QUE PRECEDEN LA
COLECTA.

ESTIRENO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO FENILGLIOXÍLICO URINARIO (GLIOX).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO DESEMPEÑO (HPLC).
OBS.: DEBE SER EVITADA LA INGESTIÓN DE BEBIDA ALCOHÓLICA EN LAS 24 HORAS QUE PRECEDEN LA
COLECTA.

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ETANOL (ALCOHOL ETÍLICO)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ETANOL EN SANGRE (ETOH-S).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADO AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (2 ML).
NO UTILIZAR ALCOHOL EN LA ASEPSIA DEL ANTEBRAZO PARA LA PUNCIÓN VENOSA, UTILIZAR JABÓN
NEUTRO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC EN FRASCO BIEN VEDADO.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS.
OBS.: ESTA DETERMINACIÓN ES REALIZADA PRINCIPALMENTE PARA VERIFICAR EL CONSUMO DE
ALCOHOL, SIENDO LA COLECTA, EN ESTE CASO, REALIZADA EN EL MOMENTO OPORTUNO.
AUNQUE EL I.B.M.P. DE ESTE AGENTE NO ESTÁ ESTABLECIDO, PODEMOS BASAR LA INTERPRETACIÓN
DE LOS RESULTADOS EN LOS VALORES ESTABLECIDOS POR LAS REGLAMENTACIONES DE TRÁNSITO
QUE DEFINEN LÍMITES DE ALCOHOLEMIA PARA LA CONDUCCIÓN DE VEHÍCULOS AUTOMOTRICES CON
SEGURIDAD. EL CÓDIGO DE TRÁNSITO BRASILEÑO (ENERO/98) ADOPTA 0,6 G/L.
LA EXPOSICIÓN (O INGESTIÓN) VOLUNTÁRIA DE ETANOL DEBE SER INVESTIGADA Y DESCARTADA
ANTES DE LA UTILIZACIÓN DE ESTA DETERMINACIÓN CON FINALIDAD DE MONITOREO DE LA
EXPOSICIÓN OCUPACIONAL.
LA DETERMINACIÓN DE ETANOL PUEDE TAMBIÉN SER REALIZADA EN SUERO, PLASMA U ORINA.

ETANOL (ALCOHOL ETÍLICO)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ETANOL URINARIO (ETOH-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML).
CONSERVACIÓN: CONGELADOR, INMEDIATAMENTE DESPUÉS DE LA COLECTA.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS.
OBS.: ESTA DETERMINACIÓN ES REALIZADA PRINCIPALMENTE PARA VERIFICAR EL CONSUMO DE
ALCOHOL, SIENDO LA COLECTA, EN ESTE CASO, REALIZADA EN EL MOMENTO OPORTUNO.
LA EXPOSICIÓN (O INGESTIÓN) VOLUNTÁRIA DE ETANOL DEBE SER INVESTIGADA Y DESCARTADA
ANTES DE LA UTILIZACIÓN DE ESTA DETERMINACIÓN CON FINALIDAD DE MONITOREO DE LA
EXPOSICIÓN OCUPACIONAL.

ETILBENCENO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO MANDÉLICO URINARIO (MANDEL).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA EN EL
ÚLTIMO DÍA DE LA SEMANA DE TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO DESEMPEÑO (HPLC).
OBS.: DEBE EVITARSE LA INGESTIÓN DE BEBIDA ALCOHÓLICA EN LAS 24 HORAS QUE PRECEDEN LA
COLECTA.

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ISOPROPANOL (ALCOHOL ISOPROPÍLICO O 2-PROPANOL)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ACETONA EN ORINA (ACET-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML
CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: CONGELAR INMEDIATAMENTE DESPUÉS DE LA COLECTA.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS (CG).
OBS.: DIABÉTICOS PUEDEN EXCRETAR ALTAS CUANTÍAS DE ACETONA EN ORINA.

METANOL (ALCOHOL METÍLICO)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: METANOL URINARIO (METOH-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML
CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN, COMO MÍNIMO.
CONSERVACIÓN: CONGELAR INMEDIATAMENTE DESPUÉS DE LA COLECTA.
V.R.: HASTA 5 MG/L.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS.

METILETILCETONA (MEK O 2-BUTANONA)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: METILETILCETONA EN ORINA (MEK-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: CONGELAR INMEDIATAMENTE DESPUÉS DE LA COLECTA.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS

METIL N-BUTILCETONA (2-HEXANONA)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: 2,5-HEXANODIONA (ACETONILACETONA) EN ORINA (HEX-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML
CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS.

N-HEXANO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: 2,5-HEXANODIONA (ACETONILACETONA) EN ORINA (HEX-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS.

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NITROBENCENO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: METAHEMOGLOBINA EN SANGRE (MEHB).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADO AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE
TRABAJO (2 ML CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC. ENVIAR AL LABORATORIO EN EL PLAZO MÁXIMO DE 24 HORAS
DESPUÉS DE LA COLECTA.
V.R.: HASTA 2 %.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
OBS.: DESPUÉS DE LA COLECTA, EXISTE UNA TENDENCIA NATURAL DE AUMENTO DE LA
METAHEMOGLOBINA EN LA MUESTRA. POR ESO, ES IMPORTANTE REMITIRLA INMEDIATAMENTE AL
LABORATORIO PARA LA EJECUCIÓN DEL ANÁLISIS.

TETRACLOROETILENO (PERCLOROETILENO O PERCLENE)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO TRICLOROACÉTICO URINARIO (TCA).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA PRE JORNADA (20 ML) TOMADA EN EL ÚLTIMO DÍA DE LA SEMANA
DE TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
OBS.: DE ACUERDO CON LA RECOMENDACIÓN DE LA ACGIH, SE DEBE COLECTAR LA MUESTRA DE
ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DEL ÚLTIMO DÍA DE LA SEMANA DE TRABAJO.

TOLUENO (TOLUOL)
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO HIPÚRICO URINARIO (HIP).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML
CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 1,5 G/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO DESEMPEÑO (HPLC).
OBS.: DIETAS RICAS EN ALIMENTOS QUE CONTIENEN ÁCIDO BENZÓICO (O PRECURSORES DE ESTA
SUBSTANCIA COMO EL ÁCIDO QUÍNICO), PUEDEN ELEVAR LOS VALORES DEL ÁCIDO HIPÚRICO
URINARIO.

TRICLOROETANO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: TRICLOROCOMPUESTOS TOTALES URINARIOS (TCC).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA (20 ML) TOMADA EN EL ÚLTIMO DÍA DE
LA SEMANA DE TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.

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TRICLOROETILENO (TRICLENE O NEUTRI)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: TRICLOROCOMPUESTOS TOTALES URINARIOS (TCC).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA (20 ML) TOMADA EN EL ÚLTIMO DÍA DE
SEMANA DE TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.

XILENO (XILOL)
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO METILHIPÚRICO URINARIO (METHIP).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA (20 ML) TOMADA DESPUÉS DE, AL
MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: N.R.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO DESEMPEÑO (HPLC).

ARSÉNICO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ARSÉNICO URINARIO (AS-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA PRE JORNADA (50 ML) TOMADA EL ÚLTIMO DÍA DE LA SEMANA DE
TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 10 ΜG/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).
OBS.: ALGUNOS FRUTOS DE MAR PUEDEN CONTENER ALTAS CONCENTRACIONES DE COMPUESTOS
ORGANOARSENICALES QUE, CUANDO INGERIDOS, SON RÁPIDAMENTE EXCRETADOS EN ORINA. EL
TRABAJADOR DEBE SER ALERTADO PARA EVITAR INGERIR FRUTOS DE MAR, POR LO MENOS DOS DÍAS
ANTES DE LA COLECTA.

CADMIO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: CADMIO EN SANGRE (CD-S).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADA (10 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES
CRÍTICO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 0,5 ΜG/DL.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).

CADMIO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: CADMIO URINARIO (CD-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA (50 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES CRÍTICO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 2 ΜG/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).

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COBALTO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: COBALTO URINARIO (CO-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML), TOMADA EN EL
ÚLTIMO DÍA DE LA SEMANA DE TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 2,4 ΜG/L (FIOH).
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).

COBRE
LA EXPOSICIÓN OCUPACIONAL AL COBRE PUEDE SER MONITOREADA DETERMINANDO:
 COBRE SÉRICO (CU-S).
 COBRE URINARIO (CU-U).

COBRE
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: COBRE SÉRICO (CU-S).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SUERO (3 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES CRÍTICO. DESPUÉS
DE LA COLECTA DE 10 ML DE SANGRE SIN ANTICOAGULANTE, DEJAR RETRAER EL COÁGULO Y
SEPARAR EL SUERO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: 60 A 140 ΜG/DL.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).
OBS.: DEBIDO A LA BAJA TOXICIDAD DEL COBRE, SU I.B.M.P. NO ESTÁ DETERMINADO.
LA INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO QUEDA A CRITERIO MÉDICO DEPENDIENDO, PRINCIPALMENTE,
DEL HISTÓRICO DE LOS RESULTADOS ANTERIORES.

COBRE
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: COBRE URINARIO (CU-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA (50 ML) TOMADA EN EL ÚLTIMO DÍA DE
LA SEMANA DE TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: 5,1 A 31,8 ΜG/L.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).
OBS.: DEBIDO A LA BAJA TOXICIDAD DEL COBRE, SU I.B.M.P. NO ESTÁ DETERMINADO.

CROMO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: CROMO URINARIO (CR-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA EN EL
ÚLTIMO DÍA DE LA SEMANA DE TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 5 ΜG/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).

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MANGANESO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: MANGANESO URINARIO (MN-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (50 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 8 ΜG/L.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).

MERCURIO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: MERCURIO URINARIO (HG-U).
MUESTREO: SE RECOMIENDA LA COLECTA DE LA PRIMERA ORINA DE LA MAÑANA. SI EL
ACOMPAÑAMIENTO DE LA COLECTA POR EL PERSONAL DEL SERVICIO MÉDICO ES JUZGADA
IMPORTANTE, RECOMENDAMOS LA COLECTA DE ORINA (20 ML) PRE JORNADA.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC V.R.: HASTA 5 ΜG/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).
OBS.: PARA EVITAR LA CONTAMINACIÓN EXÓGENA DE LA MUESTRA, LA COLECTA DEBE SER REALIZADA
EN LOCAL ALEJADO DEL TRABAJO. PARA POSIBILITAR LA INTERPRETACIÓN DE LA EVOLUCIÓN DE LOS
RESULTADOS A LO LARGO DEL TIEMPO, LAS MUESTRAS DEBEN SER TOMADAS SIEMPRE EN EL MISMO
MOMENTO.

NÍQUEL
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: NÍQUEL URINARIO (NI-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA PRE JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA EN EL ÚLTIMO DÍA
DE LA SEMANA DE TRABAJO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 8 ΜG/L (NR-7 REDACCIÓN DE 1978: HASTA 23 ΜG/L).
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).
OBS.: LA EXPOSICIÓN A ESTE AGENTE PREDISPONE AL CÁNCER, ESPECIALMENTE PULMONAR Y
NASAL, CONTINUAMOS RECOMENDANDO SU MONITOREO.

PLOMO:
PARA PLOMO INORGÁNICO EXISTEN VARIOS IBES, DOS DE DOSIS INTERNA:
 PLOMO EN SANGRE (PB-S).
 PLOMO URINARIO (PB-U) Y DIVERSOS INDICADORES DE EFECTO:
 ÁCIDO DELTAMINOLEVULÍNICO URINARIO (ALA-U).
 ZINC-PROTOPORFIRINA ERITROCITARIA (ZPP).
 PROTOPORFIRINA ERITROCITARIA (PROTO / PPE) - ABANDONADO EN PRO DEL ALA-U Y LA ZPP.
 COPROPORFIRINA EN ORINA (COPRO) - ABANDONADO EN PRO DEL ALA-U Y LA ZPP. PARA PLOMO
ORGÁNICO (PLOMO TETRAETILA).
 PLOMO URINARIO (PB-U).

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PLOMO INORGÁNICO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: PLOMO EN SANGRE (PLUMBEMIA / PB-S).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADA (10 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES
CRÍTICO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 40 ΜG/DL.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).

PLOMO INORGÁNICO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ÁCIDO DELTAMINOLEVULÍNICO URINARIO (ALA-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA (20 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES CRÍTICO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC, PROTEGIENDO LA MUESTRA DE LA INCIDENCIA DIRECTA DE LUZ.
V.R.: HASTA 4,5 MG/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
OBS.: EL ALA-U SE ENCUENTRA AUMENTADO EN PACIENTES CON CIERTAS PORFIRIAS (RAROS
DEFECTOS CONGÉNITOS DEL METABOLISMO DEL HEME). LA EXPOSICIÓN PROLONGADA DE LA
MUESTRA A LUZ INTENSA LLEVA A LA DEGRADACIÓN DE ESTE METABOLITO.

PLOMO INORGÁNICO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ZINC-PROTOPORFIRINA ERITROCITARIA (ZPP).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADO (2 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES
CRÍTICO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC, PROTEGIENDO LA MUESTRA DE LA INCIDENCIA DIRECTA DE LUZ.
V.R.: HASTA 40 ΜG/DL.
MÉTODO ANALÍTICO: FOTOFLUORIMETRÍA.
OBS.: NIVELES AUMENTADOS DE ZPP SON TAMBIÉN ENCONTRADOS EN ANEMIAS FERRIPRIVAS Y
CIERTAS PORFIRIAS.

PLOMO INORGÁNICO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: PROTOPORFIRINA LIBRE ERITROCITARIA (PROTO / PPE).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADO (2 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES
CRÍTICO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC, PROTEGIENDO LA MUESTRA DE LA INCIDENCIA DIRECTA DE LUZ.
V.R.: HASTA 60 ΜG/DL.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
OBS.: EL USO DE ESTE INDICADOR FUE ABANDONADO EN FAVOR DE LA ZPP Y DEL ALA-U.

PLOMO INORGÁNICO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: COPROPORFIRINA EN ORINA (COPRO).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA (20 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES CRÍTICO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC, PROTEGIENDO LA MUESTRA DE LA INCIDENCIA DIRECTA DE LUZ.

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V.R.: HASTA 150 ΜG/L.


MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
OBS.: EL USO DE ESTE INDICADOR FUE ABANDONADO EN FAVOR DE LA ZPP Y DEL ALA-U.

PLOMO ORGÁNICO
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: PLOMO EN ORINA (PB-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (75 ML
CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 50 ΜG/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).
OBS.: AUNQUE PRINCIPALMENTE UTILIZADO COMO INDICADOR DE LA EXPOSICIÓN AL PLOMO
ORGÁNICO (PRINCIPALMENTE EL PLOMO TETRAETILA, UN ADITIVO DE LA GASOLINA EN DESUSO).
VARIOS AUTORES SUGIEREN EL USO DE ESTE I.B.E. TAMBIÉN PARA EL MONITOREO DE LA EXPOSICIÓN
AL PLOMO INORGÁNICO. CON ESTA FINALIDAD, EL HORARIO DE LA COLECTA NO ES CRÍTICO Y EL BEI
(LÍMITE BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN) ES DE 50 ΜG/G DE CREATININA.

ZINC:
LA EXPOSICIÓN OCUPACIONAL AL ZINC PUEDE SER MONITOREADA DETERMINANDO:
 ZINC URINARIO (ZN-U).
 ZINC SÉRICO (ZN-S).

ZINC
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ZINC URINARIO (ZN-U).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML) TOMADA
DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: 150 A 700 ΜG/L.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).
OBS.: EL ZINC ES UN METAL ESENCIAL, PRESENTE EN MUCHOS COMPLEJOS MULTIVITAMÍNICOS CON
SALES MINERALES. EL USO DE ÉSTOS ELEVA LOS NIVELES DE ZINC SÉRICO Y URINARIO.

ZINC
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: ZINC SÉRICO (ZN-S).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SUERO (5 ML). EL MOMENTO DE LA COLECTA NO ES CRÍTICO. DESPUÉS
DE LA COLECTA DE 10 ML DE SANGRE SIN ANTICOAGULANTE, DEJAR RETRAER EL COÁGULO Y
SEPARAR EL SUERO.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC V.R.: 59 A 121 ΜG/100 ML.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA (EAA).
OBS.: EL ZINC ES UN METAL ESENCIAL, PRESENTE EN MUCHOS COMPLEJOS MULTIVITAMÍNICOS CON
SALES MINERALES. EL USO DE ÉSTOS ELEVA LOS NIVELES DE ZINC SÉRICO Y URINARIO.

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ANILINAS Y OTROS AGENTES METAHEMOGLOBINIZANTES


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: METAHEMOGLOBINA EN SANGRE (MEHB).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE
TRABAJO (2 ML CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC. ENVIAR AL LABORATORIO EN EL PLAZO MÁXIMO DE 24 HORAS
DESPUÉS DE LA COLECTA.
V.R.: HASTA 2 %.
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
OBS.: DESPUÉS DE LA COLECTA, EXISTE UNA TENDENCIA NATURAL DE AUMENTO DE LA
METAHEMOGLOBINA EN LA MUESTRA. POR ESO ES IMPORTANTE REMITIRLA IMEDIATAMENTE AL
LABORATORIO PARA LA EJECUCIÓN DEL ANÁLISIS.

CIANUROS
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: TIOCIANATO URINARIO (SCN).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML
CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 2,5 MG/G DE CREATININA (NO FUMADORES).
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
OBS.: EL TABAQUISMO ES LA MAYOR FUENTE DE INTERFERENCIA EN LA DETERMINACIÓN DEL
TIOCIANATO URINARIO. DOS FORMAS DE SUPERAR ESTA DIFICULTAD PUEDEN SER UTILIZADAS EN LA
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:
1. ESTABLECER LA DIFERENCIA ENTRE LOS RESULTADOS DE FINAL DE JORNADA Y DE INICIO DE
JORNADA Y UTILIZAR ESTE VALOR PARA COMPARAR COM EL V.R. Y EL I.B.M.P.; Y
2. DESDE QUE NO EXISTA EXPOSICIÓN CONJUNTA A UN AGENTE CARBOXIHEMOGLOBINIZANTE
(EX: MONÓXIDO DE CARBONO, DICLOROMETANO), DETERMINAR TAMBIÉN LA
CARBOXIHEMOGLOBINA EN SANGRE (OTRO INDICADOR INFLUENCIADO POR EL TABAQUISMO).
LA RAZÓN ENTRE LOS VALORES DE SCN Y COHB NO DEBE SER SUPERIOR A 3.

FENOL
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: FENOL URINARIO (FENOL).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE TRABAJO (20 ML
CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: 20 G/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: CROMATOGRAFÍA A GAS.

FLÚOR Y FLUORUROS
INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: FLUORURO URINARIO.
MUESTREO: UNA MUESTRA DE ORINA AL INICIO Y OTRA DEL FINAL DE LA JORNADA (50 ML CADA UNA)
TOMADAS EN EL 4º DÍA DE TRABAJO DE LA SEMANA, EN FRASCOS DE POLIETILENO, CONTENIENDO 0,1
G DE EDTA PARA CADA 50 ML DE ORINA.

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CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.


V.R.: HASTA 0,5 MG/G DE CREATININA.
MÉTODO ANALÍTICO: POTENCIOMETRÍA CON ELECTRODO ION ESPECÍFICO.

MONÓXIDO DE CARBONO (CO)


INDICADOR BIOLÓGICO DE EXPOSICIÓN: CARBOXIHEMOGLOBINA EN SANGRE (COHB).
MUESTREO: UNA MUESTRA DE SANGRE HEPARINIZADA AL INICIO Y OTRA AL FINAL DE LA JORNADA DE
TRABAJO (2 ML CADA UNA) TOMADAS DESPUÉS DE, AL MÍNIMO, DOS DÍAS SEGUIDOS DE EXPOSICIÓN.
CONSERVACIÓN: NEVERA A 4ºC.
V.R.: HASTA 1,0 % (NO FUMADORES).
MÉTODO ANALÍTICO: ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE.
OBS.: LA MAYOR FUENTE DE INTERFERENCIA DE ESTE I.B.E. ES EL TABAQUISMO. FUMADORES PUEDEN
ALCANZAR VALORES DE HASTA 15 %.

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