Introducción

El proceso digestivo es necesario para que el cuerpo pueda utilizar los nutrientes. Tiene lugar en el tracto buco-gastro-intestinal y es posible gracias a la actuación de enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la dieta. La primera de ellas es la α amilasa salival, que degrada el almidón a una mezcla de hidratos de carbono más sencillos (según el nivel de actividad y el tiempo de actuación, pueden llegar a maltosa e incluso glucosa libre) y un resto, inatacable por ella, llamado dextrina límite. El contenido en α amilasa en saliva es variable, y puede ir desde 0 a 3 mg/ml, puesto que algunas personas no poseen esta actividad, sin que ello suponga ningún problema para ellos si disponen de niveles adecuados de α amilasa pancreática. La saliva es una mezcla derivada de la secreción de 3 pares de glándulas, las parótidas, submaxilar y sublingual, como también de pequeñas glándulas mucosas ubicadas difusamente sobre la mucosa de la boca. La cantidad normal secretada en una persona adulta es de 1 a 1,5 Iitros en 24 horas. La composición de la saliva es un 99,5% H2O y 0,5 % de sólidos orgánicos e inorgánicos, el pH oscila entre 6,2 y 7,4. Los principales componentes orgánicos son las glicoproteínas, proteínas (albúmina, globulinas) y carbohidratos. Los componentes inorgánicos principales son calcio, sodio, potasio, magnesio y fósforo. La enzima a-amilasa, presente en la saliva, inicia la degradación del almidón, la principal fuente de carbohidratos de la dieta humana. Esta enzima hidroliza al azar los enlaces a (14) que unen residuos de glucosa en el almidón, a excepción de los enlaces cercanos a los extremos y a los puntos de ramificación de las cadenas. La alta concentración de protones del estómago inactiva la a-amilasa

el proceso digestivo propiamente dicho tiene lugar en el intestino delgado. No obstante. . La digestión del almidón continúa en el intestino delgado por la acción de la a-amilasa pancreática. que consigue la hidrólisis de triacilgliceroles (TAG) a ácidos grasos (AG). nosotros estudiaremos en esta práctica la lipasa pancreática. De la mezcla de enzimas que llegan a él.salival. formando parte del llamado jugo pancreático.

determinando. Materiales y Métodos MATERIAL BIOLÓGICO – REACTIVOS ♦ ♦ Preparado de Amilasa ♦ Almidón al 1% ♦ Cloruro de Sodio 0. • Demostrar la actividad catalítica de la amilasa salival. la presencia de almidón (sustrato residual) y la presencia de carbohidratos reductores (productos de reacción).Objetivos • Determinar la presencia o ausencia de la actividad enzimática de las enzimas de amilasa de acuerdo a las diferentes propiedades que presentan los reactantes y productos de las reacciones catalizadas.0025M ♦ Buffer fosfato 0. Fundamento El método se basa en la hidrólisis del almidón (sustrato). por acción de una amilasa presente en la saliva.01M ♦ Lugol ♦ Agua destilada ♦ . Los productos de reacción son polisacáridos de menor peso molecular hasta llegar a disacáridos (maltosa). en condiciones de pH y temperatura fisiológicos. no evidenciables con el reactivo de Lugol (pero sí con Fehling).

MATERIAL DE LABORATORIO ♦ Tubos de Ensayo ♦ Vaso de precipitación ♦ Balones ♦ Algodón ♦ Gradilla ♦ Pipetas graduadas ♦ .

0 0.75 1.0025 M (ml) Buffer fosfato 0. ♦ Filtrar esta solución por Lana de Vidrio.0 0.5 1.4 Incubar a temperatura ambiente durante 13 minutos Detener la reacción agregando 2 gotas de solución de Lugol .225 Tubo 2 0.75 Tubo 4 0.0 0.25 Tubo 3 0. manteniendo en la boca unos 40ml de agua destilada tibia durante 2minutos.5 2.75 2.050 1.01M Tubo 1 0. ENSAYO DE LA ACTIVIDAD DE LA PREPARACIÓN DE AMILASA SALIVAL REACTIVOS Preparado de amilasa Almidón al 1% NaCl 0.025 1. ♦ Vaciar en un vaso de precipitación. ♦ Mantenerla en hielo hasta el momento de usar.Procedimiento PREPARACIÓN DE LA AMILASA SALIVAL ♦ Enjuagarse la boca con agua de caño.0 0.7 2.10 1.

♦ La mayor degradación del almidón hace que el color azul o violeta desparezca casi por completo. indica que hay mayor amilasa y por tanto mayor degradación del almidón. por parte de la amilasa. actividad está reducida o Referencias Bibliográficas . indicando así. la menor presencia de color. pero donde el color azul es más prominente se entiende que la ausente. la mayor actividad enzimática que existe en el medio estudiado o experimentado. ♦ El color es un factor muy importante por ello la utilización del Lugol para lograrlas.Resultados Conclusiones dddddd REACTIVOS USADOS PARA ESTA PRÁCTICA TUBOS MOSTRANDO LAS DIFERENTES COLORACIONES A LOS REACTIVOS POR ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE ELLOS ♦ En los tubos donde hay menos coloración azul indica que hay una alta actividad enzimática.

Editorial Prentice Hall. España . T. BIOLOGÍA DE LOS MICROORGANISMOS. MADIGAN. Edición. y M. BROCK. 8va. 1997.

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