Introducción

El proceso digestivo es necesario para que el cuerpo pueda utilizar los nutrientes. Tiene lugar en el tracto buco-gastro-intestinal y es posible gracias a la actuación de enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la dieta. La primera de ellas es la α amilasa salival, que degrada el almidón a una mezcla de hidratos de carbono más sencillos (según el nivel de actividad y el tiempo de actuación, pueden llegar a maltosa e incluso glucosa libre) y un resto, inatacable por ella, llamado dextrina límite. El contenido en α amilasa en saliva es variable, y puede ir desde 0 a 3 mg/ml, puesto que algunas personas no poseen esta actividad, sin que ello suponga ningún problema para ellos si disponen de niveles adecuados de α amilasa pancreática. La saliva es una mezcla derivada de la secreción de 3 pares de glándulas, las parótidas, submaxilar y sublingual, como también de pequeñas glándulas mucosas ubicadas difusamente sobre la mucosa de la boca. La cantidad normal secretada en una persona adulta es de 1 a 1,5 Iitros en 24 horas. La composición de la saliva es un 99,5% H2O y 0,5 % de sólidos orgánicos e inorgánicos, el pH oscila entre 6,2 y 7,4. Los principales componentes orgánicos son las glicoproteínas, proteínas (albúmina, globulinas) y carbohidratos. Los componentes inorgánicos principales son calcio, sodio, potasio, magnesio y fósforo. La enzima a-amilasa, presente en la saliva, inicia la degradación del almidón, la principal fuente de carbohidratos de la dieta humana. Esta enzima hidroliza al azar los enlaces a (14) que unen residuos de glucosa en el almidón, a excepción de los enlaces cercanos a los extremos y a los puntos de ramificación de las cadenas. La alta concentración de protones del estómago inactiva la a-amilasa

. De la mezcla de enzimas que llegan a él. nosotros estudiaremos en esta práctica la lipasa pancreática. el proceso digestivo propiamente dicho tiene lugar en el intestino delgado.salival. La digestión del almidón continúa en el intestino delgado por la acción de la a-amilasa pancreática. No obstante. que consigue la hidrólisis de triacilgliceroles (TAG) a ácidos grasos (AG). formando parte del llamado jugo pancreático.

determinando.01M ♦ Lugol ♦ Agua destilada ♦ . Fundamento El método se basa en la hidrólisis del almidón (sustrato). la presencia de almidón (sustrato residual) y la presencia de carbohidratos reductores (productos de reacción).Objetivos • Determinar la presencia o ausencia de la actividad enzimática de las enzimas de amilasa de acuerdo a las diferentes propiedades que presentan los reactantes y productos de las reacciones catalizadas. • Demostrar la actividad catalítica de la amilasa salival. por acción de una amilasa presente en la saliva. no evidenciables con el reactivo de Lugol (pero sí con Fehling). Materiales y Métodos MATERIAL BIOLÓGICO – REACTIVOS ♦ ♦ Preparado de Amilasa ♦ Almidón al 1% ♦ Cloruro de Sodio 0. Los productos de reacción son polisacáridos de menor peso molecular hasta llegar a disacáridos (maltosa).0025M ♦ Buffer fosfato 0. en condiciones de pH y temperatura fisiológicos.

MATERIAL DE LABORATORIO ♦ Tubos de Ensayo ♦ Vaso de precipitación ♦ Balones ♦ Algodón ♦ Gradilla ♦ Pipetas graduadas ♦ .

♦ Vaciar en un vaso de precipitación.0025 M (ml) Buffer fosfato 0.75 2. ♦ Mantenerla en hielo hasta el momento de usar.10 1.75 1.25 Tubo 3 0.0 0.225 Tubo 2 0. ♦ Filtrar esta solución por Lana de Vidrio.050 1. manteniendo en la boca unos 40ml de agua destilada tibia durante 2minutos.Procedimiento PREPARACIÓN DE LA AMILASA SALIVAL ♦ Enjuagarse la boca con agua de caño.025 1.01M Tubo 1 0.75 Tubo 4 0.7 2.0 0.4 Incubar a temperatura ambiente durante 13 minutos Detener la reacción agregando 2 gotas de solución de Lugol .0 0.0 0.5 2. ENSAYO DE LA ACTIVIDAD DE LA PREPARACIÓN DE AMILASA SALIVAL REACTIVOS Preparado de amilasa Almidón al 1% NaCl 0.5 1.

♦ La mayor degradación del almidón hace que el color azul o violeta desparezca casi por completo.Resultados Conclusiones dddddd REACTIVOS USADOS PARA ESTA PRÁCTICA TUBOS MOSTRANDO LAS DIFERENTES COLORACIONES A LOS REACTIVOS POR ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE ELLOS ♦ En los tubos donde hay menos coloración azul indica que hay una alta actividad enzimática. indica que hay mayor amilasa y por tanto mayor degradación del almidón. indicando así. actividad está reducida o Referencias Bibliográficas . por parte de la amilasa. ♦ El color es un factor muy importante por ello la utilización del Lugol para lograrlas. la menor presencia de color. pero donde el color azul es más prominente se entiende que la ausente. la mayor actividad enzimática que existe en el medio estudiado o experimentado.

BIOLOGÍA DE LOS MICROORGANISMOS. MADIGAN. 1997. y M. 8va. España . Edición. Editorial Prentice Hall. T. BROCK.