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TALLER Nº 1 completo

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TALLER Nº 1 Aminoácidos y péptidos

1. ¿Qué es un aminoácido? ¿Por qué los aminoácidos presentan actividad óptica?

Un aminoácido es una molécula que contiene un grupo carboxilo (-COOH)

y un grupo amino (NH2-) libres. Pueden expresarse en general por NH2 CHR-COOH, siendo R un radical característico para cada ácido. Químicamente son muy variados. Los hay que forman proteínas (proteicos), mientras otros nunca se encuentran en ellas. Todos los aminoácidos que componen proteínas presentan un carbono asimétrico denominado alfa.
La actividad óptica se manifiesta por la capacidad de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolución de aminoácidos, y es debida a la asimetría del carbono , ya que se halla unido (excepto en la glicina) a cuatro radicales diferentes. Esta propiedad hace clasificar a los aminoácidos en Dextrogiros (+) si desvían el plano de luz polarizada hacia la derecha, y Levógiros (-) si lo desvían hacia la izquierda.

2. Dibuje el aminoácido Alanina ¿Cuál es la forma de este aminoácido que predomina a pH neutro?
NOMBRE: Alanina ácido L-2-aminopropiónico SÍMBOLOS: Ala; A NÚMERO CAS: 56-41-7 FAMILIA: aminoácidos con sustituyentes no polares (hidrofóbicos) FÓRMULA MOLECULAR: C 3H7 O2N MASA MOLECULAR: 89 PUNTO ISOELÉCTRICO: 6,00

Punto isoeléctrico: a pH neutro, la alanina existe predominantemente en la forma dipolar II en la cual los grupos amino y carboxilo están ionizados, pero la carga neta es cero. El punto isoeléctrico (pl) es el pH al cual un aminoácido es eléctricamente neutro, esto es, donde la suma de las cargas positivas iguala la suma de las cargas negativas. Nota: para un aminoácido como la alanina el cual sólo tiene dos hidrógenos disociables (uno del grupo carboxilo alfa y otro

pero a pH 7 menos del 10 % de las moléculas poseen carga positiva. P. a sus grupos amídicos y de la cistina a la presencia del grupo sulfhidrilo (-SH). la fenilalanina. Cys Aminoácidos con grupos R cargados positivamente. Polares con carga: Lys. la prolina. M Polares sin carga: S.1 /2 =5. Thr. Asn. W. la arginina y la histidina. Pro. la isoleucina. Q. neutros que pueden establecer enlaces de hidrógeno con el agua. D. la valina. y en donde existen también iguales cantidades de la forma I (carga neta de +1) y de la forma III (carga neta de ±1). Gln. R. (a) Complete la siguiente lista utilizando el código de tres letras. Aquí se encuentran la lisina.3 + 9. La cistina y la tirosina poseen las funciones mas polares de esta clase de aminoácidos. Estos aminoácidos son menos solubles en el agua que los aminoácidos con grupos R polares. Esta última tiene propiedades límite. la leucina. Existen 8 aminoácidos que contienen grupos R no polares o hidrofóbicos. la treonina y la tirosina se debe a sus grupos hidroxilos. Asp. El menos hidrófobo de esta clase de aminoácidos es la alanina. N. a veces se clasifica como una aminoácido no polar. F. Sus grupos R contienen grupos funcionales polares. cada uno de los cuales posee un segundo grupo carboxilo que se halla completamente ionizado y por tanto cargado negativamente a pH 6 y 7. Aquí se encuentran la alanina.del grupo amino alfa). Los aminoácidos en los que los grupos R poseen carga positiva neta a PH 7. la cual se halla casi en la línea fronteriza entre los aminoácidos no polares y los que poseen grupos: No polares: Ala. Los aminoácidos pueden clasificarse según la polaridad de los grupos R. Y. I. Arg. Val. 3. A pH 6 más del 50 % de las moléculas de la histidina. T. poseen un grupo R cargado positivamente. Met Aminoácidos con grupos R polares sin carga: Estos aminoácidos son relativamente más solubles en el agua que los aminoácidos anteriores. sus grupos tilo e hidroxilo fenólico tienden a perder mucho más fácilmente protones por ionización que los grupos R de otros aminoácidos de esta clase. Ile. L. Glu (b) Lo mismo. Phe. La polaridad de la serina. el pl es el promedio de pK1 y pK2: pl= [2. La glicola. C Polares con carga: K. E . Trp.7. poseen todos seis átomos de carbono. la de la aspargina y la glutamina. H. Polares sin carga: Ser. El pl es el punto medio entre pK1 y pK2 este p unto corresponde al pH donde la estructura II (carga neta de cero) predomina. utilizando el código d e una letra: No polares: A. Tyr. Leu. Los dos miembros de esta clase son los ácidos aspártico y glutámico. Aminoácidos con grupos R cargados negativamente. His. el triptófano y la metionina. V.

5 1.75 5. free base´) y la sal sódica (glicinato de sodio.58 9.0 2. de la siguiente forma: Sobre 50 mL de solución de clorhidrato de glicina se agregó 0.51 V (mL) 7.5 7.0 pH 2.30 2.80 .37 V (mL) 4.72) fue titulada con una solución de NaOH 1M. (a) Dibuje las estructuras de estas tres formas.15 2. luego de mezclar bien la solución.41 2. glicina isoeléctrica (³glycine.82 2.68 10. Los valores experimentales obtenidos están en la tabla siguiente : V (mL) 0.05 8.0 8.24 2.5 6. (b) Una solución de clorhidrato de glicina (cuyo pH inicial era 1.0 1.00 10.0 9.5 3.98 9. se midió el pH con un pH-metro.95 8.5 8. El agregado de NaOH se repitió sucesivamente hasta que el pH registrado fue cercano a 12.5 10.22 9.5 2.5 mL de NaOH 1M.5 pH 1.5 9.96 11.62 9.0 pH 9.0 5.36 2.33 2.0 6.0 4. La glicina puede obtenerse comercialmente en tres formas: clorhidrato de glicina.5 5.4.0 3.

CURVA DE TITULACION Punto Isoeléctrico pH=pI=1/2(pKa1 + pKa2) pH=pI=1/2 (2.4 que se corresponde con un medio acido por lo que la molécula del aa tiene carga neta + osea COOH+NH3+ pKa2 : 9. Ese intervalo amortiguador (+/ .6 que se corresponde con un pH alcalino por lo que la molécula tendrá carga neta + o sea COO.+ NH2.6 hasta 10. uno para cada uno.1) se le tiene que aplicar a ambos pKa del aa y ese será el valor de pH máximo que amortigua la solución.4 + 9. Para la glicina entonces se forma un buffer que va a amortiguar un intervalo de pH desde 1. Un aminoácido tiene al menos un grupo amino (NH2) y un grupo carboxilo (COOH). afuera de eso ya no amortigua nada. . y no de cantidad o volumen de acido o base que podes amortiguar porque eso va a depender de la concentración del acido o de la base a usar. En el caso particular de la glicina (gly) sus valores son: pKa1 : 2.4 para el pKa1 y también se puede usar como buffer de pH desde 8.4 a 3.6 para el pKa2. Igual hay que tener en cuenta que siempre hablamos de unidades de pH.6) pH=pI= 6 Hablamos de 2 intervalos por cada aminoácido . entonces tiene dos pKa.

35 + 9.68 c) Alanina: a pH neutro.87) pH=pI=6.11 Lisina Punto Isoelectrico pH=pI=1/2(pKa1 + pKa2) pH=pI=1/2 (2. la alanina existe predomin antemente en la forma dipolar II en la cual los grupos amino y carboxilo están ionizados.87) pH=pI=6.5.11 ACIDO GLUTAMICO Punto Isoeléctrico pH=pI=1/2(pKa1 + pKa2) pH=pI=1/2 (2. (c) ¿Cuál es la forma que predomina a pH neutro? ALANINA Punto Isoeléctrico pH=pI=1/2(pKa1 + pKa2) pH=pI=1/2 (2.35 + 9. (a) Esquematice las curvas de titulación que esperaría para los aminoácidos Ala. (b) Calcule el punto isoeléctrico de cada uno de ellos.20) pH=pI= 5. Glu y Lys.16 + 9. pero la carga neta es cero Acido Glutámico: El ácido aspártico y el ácido glutámico son donadores de .

pueden tanto ceder protones (ácidos) como captarlos (bases) y. a un determinado pH (en su pI). Los sistemas encargados de evitar grandes variaciones del valor de pH son los denominados ³amortiguadores.35 a 7. es imprescindible el mantenimiento de un pH para la realización de muchas reacciones químico -biológicas. Lisina: A pH neutro. En humanos los valores extremos compatibles con la vida y con el mantenimiento de funciones vitales oscilan entre 6. es un sistema muy eficaz debido a que: 1) La .4). Leucina con pI 6. La acción enzimática y las transformaciones químicas de las células se realizan dentro de unos estrictos márgenes de pH. Los amortiguadores resisten tanto a la adición de ácidos como de bases.7.45 el de normalidad. forma iónica de un aminoácido dibásico. Cuáles de los aminoácidos tienen capacidad reguladora de pH en la zona fisiológica (entre pH 6 y pH 8)? Son Isoleucina con pI 6. es decir.protones.93 7. o tampones´.3. el valor x sea.81 + 6. buffer. Son por lo general soluciones d e ácidos débiles y de sus bases conjugadas o de bases débiles y sus ácidos conjugados. Tampón hemoglobina Es un tampón fisiológico muy eficiente debido tanto al cambio de pK que experimenta al pasar de la forma oxidada a la reducida.8 y 7. ¿Cuál es el punto isoeléctrico de la His? Punto Isoeléctrico de His (Histidina) pH=pI=1/2 (1. tener ambos comportamientos al mismo tiempo. Valina con pI 6. Aunque su valor de pK (6. A pH neutro las cadenas laterales de estos aminoácidos están completamente ionizados.71). Los valores de pK son tales que determinan que en la disociación siguiente. aproximadamente. En un medio muy básico se cargan negativamente. conteniendo un grupo carboxilo cargado negativamente (-COO).05) pI=3.1) está algo alejado del pH fisiológico de la sangre (7. El pH de los medios biológicos es una constante fundamental para el mantenimiento de los procesos vitales. Prolina con pI 6.16) es un ácido más fuerte que la desoxihemoglobina (pK= 7.8. Es por eso que se les denomina aspartato o glutamato para enfatizar que están cargados negativamente a pH fisiológico . La carga depende del pH del medio. mientras que en el fuertemente ácido lo hacen positivamente. e Histidina con pI 7. Desde el punto de vista fisiológico este tipo de amortiguador es resulta de especial interés a nivel tisular. siendo el estrecho margen de 7. Tampones inorgánicos 1. Tampones orgánicos Las proteínas y aminoácidos como tampón Los aminoácidos y proteínas son electrolitos anfóteros. 0. El aminoácido tiene una carga positiva neta 6. La oxihemoglobina (pK= 7. como a la gran abundancia de esta proteína en la sangre (15 % del volumen total sanguíneo). Tampón carbónico/bicarbonato Está constituido por H2CO3 y HCO3 -.6. el alfa-carboxilo disociado (-COO-) y los dos aminos protonados -NH3+ ). También en el trabajo de laboratorio.

Acido Glutámico.5? ¿Y a pH 11? AMINOACIDO LISINA (Lys) pK de amino = 8. Elija aminoácidos que amortigüen a pH 4. Glutamina. Fenilalanina. Isoleucina. His (Histidina) pK1= 1.relación HCO3-/ H2CO3 es muy alta (20/1).9 y SI pK +1 = 9. Acido Glutámico. His.16 el máximo. Aspargina. Arginina. pH 6. Acido Aspártico.9 A pH= 9. 2) es un sistema abierto.99 +/.81 +/-1 sería 0. Leucina.05 +/ -1 sería 5. con lo que el exceso de CO2 puede ser eliminado por ventilación pulmonar de manera rápida.05 máximo. Asp y Lys. mientras que en pk2=6.1 sería 1. Lys (Lisina) pk1=2.5 el grupo -amino estará al 100% protonado Si pK -1 = 7.9 máximo.78 mínimo y máximo respectivamente. 9. Valina con pK R Cisteína. Serina. Tirosina. Y con pK2 = 9.puede ser eliminado por los riñones mediante un sistema de intercambio con solutos. Asp. Para pK2 = 9.05 mínimo y 7. Metionina.9 mínimo y 4. pH6 : con pK R Histidina pH9 : con pK2 Alanina. Gly (Glicina) pK1= 2.20 mínimo y 10.35 y 3.9 sería 2.5 el grupo -amino estará al 100% desprotonado y Si pK +1 = 9. Con pK2 = 3.9 A pH =11 el grupo -amino estará al 100% desprotonado .81 como máximo. Glicina. pH 9 y pH 12 pH pH4: con pK R Acido Aspártico.78 +/ .9 A pH= 11 el grupo -amino estará al 100% desprotonado Si pK -1 = 7.35 +/.1 sería 0. ¿qué fracción estará protonada a pH 9.16 sería el mínimo y 3. Lisina.78 y 10. Indique el o los rangos de amortiguación de los aminoácidos Gly.9 A pH = 9. el HCO3. Para el grupo -amino de la Lys. Triptófano.99 máximo. lo que le proporciona una alta capacidad tampón frente a los ácidos.16 +/-1 1. Lisina pH12 con pK R Arginina 10.1 sería 8.20 sería 8. Histidina.20 máximo. y 3) además.35 el mínimo y el máximo nivel de amortiguación de pH. (Acido Aspártico) pK1 = 1.99 mínimo y 2. 8.81como mínimo y 2.

11. puede emplearse la electroforesis sobre papel. Dado que moléculas diferentes difieren en por lo menos uno de estos aspectos. ¿qué fracción estará en la forma aniónica a pH 5. la fuerza ejercida por el campo eléctrico sobre la molécula cargada.8 el grupo -COOH estará al 100% desanoniado 12. es más frecuente hacerlo sobre un soporte. Este desplazamiento se denomina electroforesis. Si bien la electroforesis como método de separación puede llevarse a cabo de modo libre en una solución. Para moléculas pequeñas. Por otro lado. las fuerzas de fricción que ejerce el entorno sobre la molécula.8? AMINOACIDO ACIDO GLUTAMICO (Glu) pK de carboxilo = 2. Esta velocidad depende de la carga y de las dimensiones de cada especie molecular.0? ¿Y a pH 3. las moléculas de soluto con carga neta positiva se desplazan hacia el cátodo y las moléculas con carga neta negativa se desplazan hacia el ánodo. Cuando se aplica un campo eléctrico a una solución. como los aminoácidos. Para el grupo -carboxilo del Glu. y oponiéndose a este movimiento. la molécula (cargada) se mueve con una velocidad en la que estas fuerzas resultan equilibradas. La velocidad de las moléculas depende de dos factores. . Por un lado. las velocidades diferenciales de desplazamiento en un campo eléctrico permite separarlas. Electroforesis sobre papel. Cuando se aplica el campo eléctrico.1 y A pH=5 el grupo -COOH estará al 100 % anoniado y A pH= 3.

13. se retira el papel y se lo deja secar. Dada una solución que contiene Lys y Tyr. Cys y Arg en un campo eléctrico a pH 7? Gly. cuya reacción con l os aminoácidos da un compuesto de color azul. Ser. Por ejemplo. La ubicación de la zona donde se encuentran las distintas especies moleculares luego de la migración electroforética se revela utilizando diferentes métodos. Se hace una electroforesis sobre papel a pH 3.0. ¿Cómo se comportan Gly.Gly Lys Asp . Ser 14. Leu. Leu. Glu. Para aminoácidos. 17. Luego de un tiempo adecuado (usualmente horas). Asp e His ¿hacia dónde migrará cada uno de ellos? CATODO: Ala. 16. Arg. Aminoácidos con cargas idénticas pueden separarse levemente cuando son sometidos a electroforesis sobre papel. dependiendo del tipo de moléculas.Lys Gly Asp . Glu. y Cys se van al ánodo porque son más ácidos carga negativa mientras que Arg se va al cátodo es básico con carga positiva. Ser.98). ¿a qué pH migran en i gual sentido si son sometidos a un campo eléctrico? ¿y en sentido contrario? A pH 10 migraran hacia el ánodo y a pH 7 migraran en sentido contrario . (a) ¿Cuáles se mueven hacia el cátodo y cuáles hacia el ánodo? ANODO: Glu CATODO: Lys. La solución tampón tiene pH 6. Se separan porque la Glicina (5. Es casi nada pero no es el mismo p H. Lys. Ala. se suele utilizar la ninhidrina. La solución tampón permitirá mantener constante el pH durante el experimento. la glicina se separa de la leucina. Ala.9 de una mezcla de Ala.Los extremos de una tira de papel de filtro se sumergen en dos cubas que contienen una solución tampón y los electrodos. Phe. Sugiera una explicación para este hecho. 18. se desconectan los electrodos. Arg (b) ¿Cuáles permanecen cerca del origen? Gly. y los electrodos se conectan a una fuente de corriente eléctrica continua. Glu. Se hace una electroforesis sobre papel de una mezcla de Gly.97) es ligeramente más ácida que la Leucina (5.Asp Lys Gly . His ANODO: Asp 15. Arg. asi mismo debe influir la velocidad que experimenta cada aminoácido con relación a la solución tampón y los electrodos. Escriba las fórmulas de los siguientes tripéptidos: . Una gota de l a mezcla que se va a analizar se aplica sobre el papel. Phe. Arg y Ser.

.

y calcule el punto isoeléctrico de los tripéptidos del ejercicio anterior. (b) ¿En cada caso. y por lo tanto los pK pueden diferir de los valores observados en los aminoácidos libres.19. los pK de las cadenas laterales están influenciados por el contexto de la molécula de la cual forman parte. . supong a que estos pK son los que se dan en la tabla.5? (b) Dada una mezcla de esos tres tripéptidos. Cuando los aminoácidos están formando cadenas polipeptídicas. proponga un valor de pH en el que se prodría hacer una electroforesis para separarlos. (a) A los fines de este ejercicio. cuál sería la carga de las especies que espera encontrar a pH 6.

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