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INDICE

BIOMEDICINA

Caracterización molecular de cepas y vectores de Trypanosoma cruzi del Estado de Veracruz. ................. 85

Clonación de un fragmento del gene que codifica para la proteína NS3 de los 4 serotipos del virus dengue
............................................................................................................................................................... 54

Confirmacion diagnostica de Virus Del Papiloma Humano (VPH) en biopsias de cervix, mediante reacción
en Cadena de la Polimerasa (PCR). ........................................................................................................ 20

Detección de Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae en especímenes genitourinarios mediante


PCR Múltiple .......................................................................................................................................... 49

Detección de clonas de Staphylococcus aureus meticilino resistentes (MRSA) en el Hospital Regional de


Alta Especialidad de Veracruz (HRV) ...................................................................................................... 26

Diagnóstico molecular de dengue .............................................................................................................. 32

Efecto del extracto polar de moussonia deppeana sobre la proliferación y la viabilidad de la línea celular
de cáncer de próstata lncaP. .................................................................................................................. 74

Efectos bioclínicos de la obesidad y la inducción de la diabetes en la rata Wistar hembra ......................... 79

Evaluacion de la eficiencia del metodo de conservacion de microorganismos en papel filtro .................... 11

Evaluación del efecto de catequina y epicatequina de theobroma cacao sobre las líneas mda-mb 231 y bt-
474 de cáncer de mama ........................................................................................................................ 45

Evaluación del efecto de oxiesteroles dietarios sobre el perfil de lípidos de la membrana plasmática en
hepatocitos de rata wistar. .................................................................................................................... 15

Evaluación del efecto del Ácido Linoleico Conjugado (CLA) dietario sobre el estrés oxidativo en ratas con
síndrome metabólico e hígado graso. ...................................................................................................... 3

Evaluación del potencial adyuvante de un toxoide derivado de Listeriolisina O sobre células presentadoras
de antígeno humanas............................................................................................................................. 94

Identificación de receptores de Angiotensina II y caveolina-1 en cordón umbilical y células endoteliales de


cordón umbilical (HUVECs) de pacientes preeclámpticas ....................................................................... 40

Identificación de una zona con alta seroprevalencia de infección por Trypanosoma cruzi en la zona centro
del Estado de Veracruz ........................................................................................................................... 89

Inmunopatogenia en 200 pacientes con dengue ...................................................................................... 36

Interleucina 17A e IL-17F, nuevos mediadores inflamatorios en la infección por virus del Dengue .............. 7

Mutaciones en genes asociados a resistencia a RIfampicina y Etambutol, en cepas de pacientes con


Tuberculosis Drogorresistente ............................................................................................................... 63

1
Numero de eosinofilos en mucosa esofógica de pacientes con esofagitis eosinofilica, esofagitis erosiva,
enfermedad por reflujo no erosivo y controles asintomático. Un estudio en pacientes mexicanos. ...... 69

Patron de susceptibilidad de microorganismos aislados en urocultivos en la unidad de servicios analiticos


de salud bioanalisis (usasb). Enero 2007, dicembre 2009 Xalapa Veracruz ............................................. 98

Variación de la respuesta a un estimulo doloroso en ratas Wistar con ansiedad inducida bajo un estimulo
externo. ................................................................................................................................................. 59

2
EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL ÁCIDO LINOLEICO
CONJUGADO (CLA) DIETARIO SOBRE EL ESTRÉS
OXIDATIVO EN RATAS CON SÍNDROME METABÓLICO E
HÍGADO GRASO

Yohevet Romero Sarmiento


Alfonso Alexander Aguilera.
Ida Soto Rodríguez
Agustín Arzaba Villalba
Hugo Sergio García Galindo

Marco teórico: segundo evento celular en su progresión a


esteatosis, esteatohepatitis y fibrosis, el cual
El hígado graso no alcohólico (HGNA) se se define como la exposición inadecuada a
define como la acumulación de grasa especies reactivas de oxígeno (ROS) y el
macrovesicular en el hígado que excede 5 al resultado del desequilibrio entre compuestos
10% del mismo que puede asociarse a grados prooxidantes y antioxidantes que conduce al
variables de inflamación lobulillar con o sin daño por muerte celular y tisular. En la
fibrosis(1). Esta condición puede actualidad no existe tratamiento específico y
desencadenar a una cirrosis hepática. El han sido utilizados aquellos que revierten el
síndrome metabólico y sus manifestaciones estado de resistencia a la insulina. El
clínicas como la obesidad y la diabetes son tratamiento dietoterapéutico juega un papel
los dos factores de riesgo más importantes fundamental. El ácido linoleico conjugado
para desarrollar hígado graso. (CLA) es una mezcla de isómeros del ácido
Aproximadamente un 80% de las personas linoleico (cis-9, cis-12-octodecadienoico) que
obesas tienen hígado graso, en la gran poseen sus dobles enlaces en posición
mayoría asociada a síndrome metabólico. La conjugada (principalmente 9, 11 ó 10, 12), ha
resistencia a la insulina es el mecanismo sido considerado recientemente como
fisiopatológico de estas alteraciones y que compuestos nutracéuticos, en los cuales el
determina que la grasa se acumule fuera del CLA ha mostrado un amplio rango de efectos
tejido adiposo. El estrés oxidativo es el otro y


Estudiante de Maestría Unidad de Investigación y Desarrollo en Alimentos Instituto Tecnológico de
Veracruz yohevet_romero@hotmail.com

3
biológicos: anticancerígenos, anti- ratas con hígado graso, que muestre el
ateroscleróticos y antioxidantes. potencial dietoterapéutico en esta
Actualmente no se conoce el efecto dietario enfermedad en un modelo animal.
que el CLA tiene sobre la inhibición del
desarrollo de hígado graso específicamente Metodología:
sobre el estrés oxidativo hepático(5,6,7).
Se realizó un estudio experimental en dos
Planteamiento del problema: etapas, primero se llevó a cabo la inducción
del síndrome metabólico e hígado graso en
El CLA ha sido utilizado para evaluar su ratas wistar macho recién destetadas,
efecto dietoterapéutico sobre la utilizando sacarosa al 30% en agua para
fisiopatología del síndrome metabólico en beber (ad libitum) durante 9 semanas;
modelos animales y humanos; aunque posterior al tratamiento experimental se
existen estudios sobre el efecto que tiene en determinaron los marcadores de daño
el mecanismo de resistencia a la insulina, se hepático (AST y ALT) y análisis histológico
desconocen los efectos sobre los marcadores para el diagnóstico de esteatosis. La segunda
celulares de estrés oxidativo como base etapa consistió en la evaluación del efecto
fisiopatológica del desarrollo del hígado del CLA bajo un diseño experimental
graso no alcohólico, en el cual participan las completamente al azar, formado por 4
enzimas alanin-aminotransferasa (ALT) y grupos: testigo (T), experimental
apartato-aminotranferasa (AST) como (CLA)reciebiendo el aporte del compuesto en
indicadoras de daño hepático y la superóxido estudio, Hígado graso (HG)recibend aporte
dismutasa (SOD), glutatión peroxidasa (GSH- de aceite vegetal el cual es incapaz de
PX) y compuestos reactantes al ácido revertir a la normalidad a estos roedores y
tiobarbituricos (TBARS) como indicadores de en donde se mantienen las condiciones de
la presencia de compuestos prooxidantes daño hepático y el grupo ingesta previa de
hepáticos. En base a lo antes expuesto, el IP-CLA (el cual recibió CLA desde el inicio
planteamiento del problema se basa en el ingesta de sacarosa simultáneamente al
siguiente cuestionamiento ¿cuál es el efecto tratamiento experimentación CLA). Se
del CLA dietario sobre los marcadores de determinaron los marcadores de estrés
estrés oxidativo en ratas con hígado graso oxidativo (SOD, GSH-PX y TBARS) en suero y
no alcohólico, como agente nutracéutico con en homogenizado de hígado bajo el efecto
potencial dietoterapéutico?. del CLA dietario para evaluar los efectos
sobre este mecanismo del hepatocito.
Objetivo General:
Resultados:
Evaluar el efecto del ácido linoleico
conjugado (CLA) dietario sobre los Se obtuvo la inducción de hígado graso en el
marcadores de estrés oxidativo a nivel modelo utilizado caracterizado por el
tisular: superóxido dismutasa (SOD), aumento del peso corporal de los roedores y
glutatión peroxidasa (GSH-PX) y compuestos los parametros metabólicos que caracterizan
reactantes al ácido tiobarbiturico (TBARS) en al síndrome metabólico; se presentaron

4
alteraciones en los marcadores de daño posterior catabolismo en mitocondrias por
hepático tanto en suero como en el beta oxidación, todo ello genera especies
homogenizado de tejido hepático. La AST y reactivas de oxigeno (ROS) como indicador
AST mostraron concentraciones mayores en de estrés oxidativo celular, a la vez de una
el grupo Higado Graso (HG) (78.67 ± 3.62 U/L marcada disminución de las enzimas
vs 20.16 ± 1.81 U/L; p<0.05 y 68.11 ± 3.62 antioxidantes como la SOD y GSH-PX; sin
U/L vs 35.00 ± 0.81 U/L; p<0.05), asociado a embargo algunos estudios muestran, que
alteraciones histológicas hepáticas algunos ácidos grasos dietarios como los
compatibles con hepatomegalia y esteatosis omega 3 influyen sobre la expresión de
caracterizada por un aumento de vesiculas genes que codifican para algunas enzimas y
de grasa y alteraciones del parenquima receptores celulares(2,3,4). El CLA es un
hepatico como destrucción de los sinusoides regulador de la expresión de algunos genes
y la arquitectura del lobulillo hepático. El de resistencia a la insulina y pudiera estar
efecto del CLA durante 7 semanas de regulando la expresión de las enzimas de
tratamiento experimental, mostró que las estrés oxidativo, dado el aumento
enzimas antioxidantes aumentaron en el encontrado de las mismas en los roedores
grupo recibiendo el aporte del CLA con recibiéndolo como aporte de CLA dietario,
respecto al grupo Higado Graso (HG) que se con respecto al grupo que desarrolló hígado
mostraron disminuidos; para GSH-PX(11.915 graso y que mantiene niveles muy bajos de
± 0.463 U/mg prot. vs 8.930 ± 0.625 U/mg SOD y GSH-PX y aumento de especies
prot; p<0.05)y para SOD(78.77 ± 6.56 U/mg reactivas de oxígeno tanto en suero como en
prot. vs 43.36 ± 17.5 U/mg prot; p<0.05). Los el tejido hepático.
niveles de éstas enzimas se mantuvieron
normales en el grupo que recibió una ingesta Conclusión:
previa de CLA con respecto al grupo Testigo
El CLA dietario mostró un efecto benéfico
Sano, para GSH-PX(16.264 ±1.691 vs 17.983
sobre los niveles de marcadores de hígado
± 1.150)y para SOD (80.09 ± 8.02 vs 92.00 ±
graso (AST y ALT) y estrés oxidativo (SOD y
4.14). Los compuestos reactantes al acido
GSH-PX,) caracterizado por reversión a
tiobarbíturico (TBARS) como indicador de
concentraciones normales tanto en suero
estrés oxidativo en suero e hígado fueron
como en tejido hepático de las enzimas con
normales en los roedores del grupo
actividad antioxidante estudiadas;
recibiendo el aporte del CLA, mientras que
mostrando de esta forma, su potencial
fueron significativamente mayores en el
dietoterapéutico como auxiliar en el
grupo de roedores con hígado graso.
tratamiento de hígado graso en este modelo
Discusión: animal de la enfermedad.

La acumulación de grasa en el hígado cambia Referencias Bibliográficas:


sus condiciones fisiológicas y metabólicas,
1. Evan S.S, Mrak A.R. Imaging of
aumenta el acortamiento de las cadenas de
Hepatic Steatosis. Sem. Liv. Dis.
ácidos grasos en peroxisomas para su
2001; 1:71-80.

5
2. Foschini , et al. Identificaction of 5. Morales SA, Arrese JM. Hígado graso
mitocondria in liver biopsies. no alcohólico: Patogenia y
Virchows Arch. 1998; 267-273. tratamiento. 2008; 19(2):96-100.

3. Harrison SA, Di Bisceglie AM. 6. Prieto I, et al. Tumor Necrosis Factor


Avances en la comprensión y el alpha, interleukin-1 beta and nitric
tratamiento del hígado graso no oxide: induction of liver
alcoholico. 2003; Drugs 63(22): 2379- megamitochondria in prehepatic
2394. portal hypertensive rats. World J
Surg. 2005; 29:903-908.
4. Kumar NS, et al. Oxidative stress in
experimental liver microvesicular 7. Valera JMM. Enfermedad por hígado
steatosis: Role of mitochondria and graso no alcoholic, opciones
peroxisomes. Hepatology. 2006; terapéuticas. 2006. Gastr. Latinoam.
1240-1249. 17(2):191-193.

6
INTERLEUCINA 17A E IL-17F, NUEVOS MEDIADORES
INFLAMATORIOS EN LA INFECCIÓN POR VIRUS DEL
DENGUE
Fatima del Rocío Sánchez Vega
César Iván Berzunza Huerta
José Zarrabal Meza
Maria Teresa Martinez Cázares
Aurora Parissi Crivelli
Héctor Vivanco Cid

Marco teórico: por Dengue y su forma más grave, el Dengue


Hemorrágico (DH). La enfermedad es
Los Flavivirus son un grupo de patógenos con transmitida a humanos a través de la
un alto impacto en la salud pública mundial, picadura del mosquito Aedes aegypti, que es
debido a su amplia distribución y su el principal vector. Otras especies de Aedes
capacidad para causar enfermedades con tales como A. albopictus y A. polynesiensis
tasas elevadas de morbilidad y mortalidad también han sido implicados en la
en humanos. Más de 75 diferentes Flavivirus transmisión. Pueden distinguirse cuatro
han sido identificados a la fecha y serotipos antigénicamente relacionados del
aproximadamente la mitad de los mismos virus Dengue denominados como Dengue 1,
son capaces de causar enfermedad en seres 2, 3 y 4. La infección primaria se presenta en
humanos (1). Dentro de este género se ubica un individuo no sensibilizado previamente o
el virus del Dengue, el cual es considerado un bien en aquellos que ya han estado
patógeno re-emergente debido a que en las expuestos al contacto previo con algún
últimas dos décadas, la incidencia de serotipo y que contraen una nueva infección
enfermedades provocadas por este, han (infección secundaria) con otro serotipo
aumentado a un ritmo alarmante. Más de diferente. La infección en el humano causa
2500 millones de personas, es decir, más de un espectro de manifestaciones que van
dos quintas partes de la población mundial desde sudoración, desarrollo de un cuadro
viven en zonas de riesgo para Dengue y más febril, el cual de manera relevante se asocia
de 100 países han informado de la presencia con viremia, dolor de cabeza intenso,
de esta enfermedad en su territorio (2). La mialgias, artralgias, exantema, hasta cuadros
Región de las Américas ha sido una de las más severos tales como DH o el síndrome de
más afectadas por la forma clásica o fiebre choque por Dengue (SCHD), las cuales


Estudiante de Licenciatura INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MEDICO BIOLOGICAS UNIVERSIDAD
VERACRUZANA vivacid@hotmail.com

7
constituyen las complicaciones más severas La familia de citocinas IL-17, incluye a seis
(3,4). El DH y el SCHD son definidos por un miembros descritos a la fecha denominados
conjunto de manifestaciones clínico- como IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E
patológicas que comprenden: fiebre (también conocida como IL-25) e IL-17F,
continua durante 2 a 7 días, petequias, siendo IL-17A el miembro mejor
prueba de torniquete positiva, equimosis, caracterizado y más ampliamente estudiado
tendencia a hemorragias que pueden ser de a la fecha (91-92). IL-17A, es una citocina
leves a severas, trombocitopenia (100,000 altamente proinflamatoria con diversas
células por mm3 o menos), aumento en la funciones biológicas y secretada por
permeabilidad vascular, hemoconcentración, diferentes poblaciones de linfocitos T
culminando en choque hipovolémico y la activados incluyendo a linfocitos T CD8+,
muerte del paciente (5). linfocitos T CD4+ (células Th17), células T ; ;
y células T asesinas naturales (NKT),
Planteamiento del problema: eosinófilos, neutrófilos y monocitos (93-100).
Todos los miembros están relacionados
La alarmante situación epidemiológica del
entre un 16-50% en su secuencia de
dengue en el mundo, aunado a la carencia de
aminoácidos con IL-17A (101-104), siendo IL-
una vacuna efectiva en contra del agente
17F la de más alta homología. En infección,
etiológico de la enfermedad hacen necesario
se ha demostrado la participación de estas
enfocar los esfuerzos en investigación para
citocinas en mediar una respuesta inmune
conocer más acerca de los mecanismos
protectora contra patógenos intracelulares
inmunopatológicos implicados en la
típicos como Candida albicans, Listeria
infección e investigar sobre nuevos
monocytogenes, Salmonella entérica, así
biomarcadores y blancos terapéuticos que
como Mycobacterium tuberculosis.
permitan establecer nuevas estrategias de
Recientemente se ha demostrado su
seguimiento y control de las formas severas
participación en infecciones virales como
de la enfermedad. Desde el punto de vista
Hepatitis C y la mediada por el Virus de la
inmunológico la infección por dengue en el
Inmunodeficiencia Humana (VIH) (57,58). A
humano cursa con liberación de una cascada
la fecha no existen evidencias científicas en
de mediadores inflamatorios producidos por
la literatura que hayan estudiado la
elementos tanto de inmunidad innata como
participación de esta citocina en el contexto
por elementos de inmunidad adquirida. En el
de la infección por virus dengue tanto clásico
presente trabajo se estudio por primera vez
como hemorrágico.
la participación de dos isoformas de la
familia de citocinas conocidas como Objetivo General:
Iinterleucina 17: IL-17A e IL-17F. La función
de estas dos citocinas ha comenzado a Determinar la participación de las citocinas
estudiarse y clarificarse en el contexto de inflamatorias IL-17A, IL-17F en el contexto de
una gran variedad de patologías que van la infección por virus del Dengue (dengue
desde procesos autoinmunes, alergias, clásico y dengue hemorrágico).
cáncer y por supuesto, procesos infecciosos.
Metodología:

8
Tipo de estudio: Observacional, prospectivo, sanos registraron un valor promedio de 153
transversal. Se analizaron muestra de suero pg/ml, mientras que para IL-17F, la
de pacientes con diagnóstico confirmado de concentración promedio fue de 126 pg/ml.
Dengue, las cuales se obtuvieron del De esta forma una elevación clara de ambas
Laboratorio Estatal de Salud Pública durante isoformas de IL-17 es detectada durante la
el periodo de Mayo a Noviembre del 2009. infección activa por dengue.
Sueros de pacientes cursando Dengue
clásico (n=939), Dengue Hemorrágico Discusión:
(n=292) o sujetos controles sanos (n=359),
Los resultados obtenidos en el presente
fueron analizadas para determinar los
trabajo han permitido describir por primera
niveles séricos de citocinas como IL-17A, IL-
vez la participación de las citocinas
17F; Las citocinas fueron determinadas por
inflamatorias IL-17A e IL-17F en el contexto
técnica convencional de ELISA (usando kits
de la infección por dengue. Un aumento
comerciales de las marcas Peprotech y E-
significativo en la concentración de ambas
bioscience). El Análisis estadístico de los
citocinas, de entre 5 a 6 veces sobre los
datos obtenidos entre los diferentes grupos
niveles basales detectados en sujetos sanos
de estudio fue realizado con el programa
de la misma área endémica, pero sin datos
GraphPad Prism versión 5, empleando test
clínicos de infección reciente, fue evidente
no paramétrico de MannWhitney.
en el curso de la infección activa por virus
Resultados: dengue. El presente trabajo abre nuevas
preguntas sobre la participación de esos
Del total de las muestras con diagnostico mediadores inflamatorios en protección o en
confirmado de dengue analizadas, 697 (74%) la inmunopatogénesis de la enfermedad.
dieron resultados positivos para ambas: IL-
17A e IL-17F, de las cuales, 454 Conclusión:
correspondieron a dengue clásico y 243 a
Durante la infección por virus del dengue en
dengue hemorrágico. Los resultados
humanos es posible detectar niveles
cuantitativos mostraron una media de 728
elevados tanto de IL-17A como de IL-17F, lo
pg/ml de IL-17A y 630 pg/ml de IL-17F para
cual sugiere la participación de estos
el grupo de pacientes con diagnóstico clínico
mediadores durante la inmunopatología de
de dengue clásico, valores que no fueron
la enfermedad.
muy diferentes a los encontrados en el grupo
de pacientes con dengue hemorrágico: 815
pg/ml para IL-17A y 654 pg/ml de IL-17F.
Ambos grupos de pacientes con dengue, Referencias Bibliográficas:
mostraron niveles de IL-17A e IL-17F
1. Mukhopadhyay A. Structural
aumentados significativamente con respecto perspective of the flavivirus life
a sujetos control sanos, sin evidencia de cycle. Nat Rev Microbiol. 2005. 3,
infección aguda reciente o crónica (p= 13–22.
0.0055). Los niveles de IL-17A en sujetos 2. Guzmán MG, Kourí G. Dengue: an
update. Lancet Infect Dis. 2002.

9
2:33(42). 25. social and economic problem in the
3. William JH McBride, Helle Bielefeldt- 21st century. TRENDS in
Ohmann. Dengue viral infections; Microbiology. 2002. 10 (2).
pathogenesis and epidemiology. 5. Green S, Rothman A.
Microbes and Infection. 2000, 1041- Immunopathological mechanisms in
1050. dengue and dengue hemorrhagic
4. Gubler DJ. Epidemic dengue/dengue fever. Curr Opin Infect Dis. 2006. 19
hemorrhagic fever as a public health, (5):429-36.

10
EVALUACION DE LA EFICIENCIA DEL METODO DE
CONSERVACION DE MICROORGANISMOS EN PAPEL
FILTRO

Vanesa Lopez Rosaldo

Marco teórico: microorganismos, células superiores o


diversos materiales biológicos,
A lo largo del siglo XX la tradición suministrándolos previa solicitud a
institucional de la investigación laboratorios de docencia e investigación. Las
microbiológica ha estado centrada en primeras colecciones de cultivo que
brindar soluciones a problemas en los aparecieron en el mundo fueron:
campos de la salud dejando un invaluable
legado y un conjunto de colecciones de La de Praga en el siglo siglo XIX (KRAL) fue la
microorganismos que constituyen la base de primera colección que contó con un catálogo
futuras investigaciones. Es importante de microorganismos.
entender que para el mantenimiento de los
La más antigua es la de Lobaina en Bélgica
cultivos deben permanecer puros y
dedicada a la conservación de hongos.
homogéneos bajo condiciones que aseguren
la estabilidad microscópica, mascrocòpica, La American Type Culture Collection (ATCC)
bioquímica, fisiológica y genética. Hay gran fue fundada en 1925.Actualmente existen
número de métodos descritos para la todavía varias colecciones de cepas
preservación microbiana. Los criterios a ser utilizables para el control de calidad. Algunos
considerados para la selección del método ejemplos son:
son la viabilidad, pureza, costos del proceso,
cantidad de cultivo (para la producción de -
microorganismos) y frecuencia de uso. Las Rockville, USA
colecciones de cultivo son organizaciones
que se ocupan de conservar
Bacteria- Survey, Inglaterra
convenientemente cepas de


Docente y Profesional de la salud Universidad Veracruzana Facultad de Bioanalisis
rosaldo04@hotmail.com

11
: Japanese Federation of Culture escrita del propietario, aunque no figure en
Collection of Microorganism- Japón el catálogo; Organización de Cursos,
Investigación y Asesoria.
CCTM: Colección Nacional – Lille,
Francia RIA: USSR Reseach Institute for Planteamiento del problema:
Antibiotics- Moscú, Rusia.
¿Cual es la eficiencia o porcentaje de
NCIB: Colección Nacional industrial – recuperación que ofrece el método de
Aberdeen, Escocia conservación de microorganismos en papel
filtro a 10 años de su realización en especies
DSM: Deutsche Sammlung von
bacterianas que forman el cepario
Mikroorganismen – Gottinger, Alemania
bacteriano de la facultad de Bioanálisis?
Servicios que prestan las colecciones de
cultivos: Recolección: Es el servicio Objetivo General:
mas típico de una Colecciones de Cultivo. Las
colecciones reúnen cepas que les llegan a Evaluar la eficiencia o porcentaje de
través de distintos conductos, las conservan recuperación del método de conservación de
convenientemente y las suministra previa papel filtro de los microorganismos
petición. Conservación: Es el trabajo conservados en el cepario microbiano de la
medular de las colecciones microbianas, las facultad de Bioanalisis desde hace 10 años.
cuales mantienen conservadas a los
microorganismos bajo diferentes métodos Metodología:
entre ellos la liofilización como preservación El trabajo metodológico se fundamenta en la
a largo plazo. Suministro de cepas capacidad de los microorganismos
microbianas: Se hace por correo de conservados en papel filtro de reactivar su
superficie, aéreo o mensajería, pero siempre metabolismo en caldo nutritivo y permitir su
empaquetado correctamente aislamiento e identificación morfológica y
considerándolo como material bioquímica que a la ves de conocer la
“potencialmente patógeno” Depósito de eficiencia de conservación del metodo,
cepas microbianas.1.- Depósito público: verificar que el nombre encontrado a la cepa
Cualquier microbiólogo puede depositar una es el correcto. Se partió de un acervo de
cepa, que considere interesante, en la viales que se tienen en el cepario de la
colección. Esta cepa se incorpora en el facultad de Bioanalisis las cuales se
catálogo y puede suministrársela a cualquier seleccionaron con el requisito que tuvieran
otro microbiólogo que la solicite.2.- Depósito como mínimo 10 años de conservación,
no público: Algunas Colección de Cultivo después se propagaron en caldos nutritivos,
reciben el nombramiento de Autoridad se inocularon en medios de cultivo por estría
Internacional de Depósito para fines de cruzada en donde se obtuvo la morfología
patentes, de esta manera se garantiza la colonial, enseguida se les hizo la prueba
descripción total y reproducción del proceso bioquímica en donde se obtuvo la
patentado. Una vez conseguida la patente, la identificación taxonómica y se determino la
cepa puede suministrarse previa autorización eficiencia en % de la

12
recuperación.1)SELECCIONAR CEPAS que fueron reactivas posterior a su
CONSERVADAS EN PAPEL FILTRO(10 AÑOS conservación durante 10 años fue la
DE CONSERVACION)2)PROPAGACION EN siguiente el 30% correspondió a bacteria
CALDOS DE CULTIVO.3)PRUEBAS DE Gram positivas, mientras que el 70% fueron
IDENTIFICACION.3.1)MORFOLOGIA Gram negativas y en donde el 28.57% fueron
COLONIAL Y 3.2) BIOQUIMICAS. 4) Gram positivas que no tuvieron desarrollo y
IDENTIFICACION el 71.42% son Gram negativas sin desarrollo.
TAXONOMICA.5)DETERMINACION DE LA
EFICIENCIA EN % DE RECUPERACION Discusión:
EN:5.1)PAPEL FILTRO. 5.2) ACEITE
Los resultados obtenidos muestran una
MINERAL.5.3) CONGELACION EN GLICEROL.
buena eficiencia del método de conservación
Resultados: de microorganismos en papel filtro ya que
esta correspondió al 58.82%, no permitiendo
A continuación se detallan los resultados la recuperación del 41.17% de los viales
obtenidos del estudio de “evaluación de la estudiados. Sin embargo, es importante
eficiencia del método de conservación de considerar que este método de conservación
microorganismos en papel filtro”, el cual se es considerado a mediano o sea presentan
realizó hace 10 años para la creación del efectividad para aproximadamente 5 años
cepario microbiano de la facultad de aproximadamente, por lo tanto el encontrar
Bioanálisis. Se partió de un grupo de 85 una eficiencia de recuperación en
viales conservados los cuales fueron aproximadamente un poco mas de la mitad
propagados para el aislamiento e de los cultivos muestra ciertas ventajas de
identificación de los microorganismos este método de conservación. Como se
conservados. VIALES CONSERVADOS QUE puede observar este método mostró una
FUERON REACTIVADOS Y MOSTRARON mayor eficiencia de conservación para
CRECIMIENTO EN CALDO NUTRITIVO:N= 85. bacterias Gram negativas y para un número
41.17% SIN DESARROLLO Y 58.82% CON considerable de especies principalmente de
DESARROLLO.TIEMPO DE RECUPERACION DE la familia Enterobacteriaceae. Los resultados
LOS MICROORGANISMOS CONSERVADOS EN de esta evaluación de la eficiencia del
PAPEL FILTRO: Durante la etapa de método de conservación en papel filtro
recuperación de los microorganismos muestra su factibilidad de aplicación técnica
conservados se observó que el 48% de ellos y económica para la conservación de
mostró desarrollo en caldo de cultivo a las 24 microorganismos en el cepario microbiano;
horas de incubación, seguido del 38% que aunado a lo anterior se pone de manifiesto
mostró desarrollo a las 48 horas, finalmente que hace 10 años de haber realizado el
el 14% se reactivó mostrando crecimiento a método se cumplió con los objetivos
las 72 horas. DESARROLLO MICROBIANO propuestos en el trabajo que antecede al que
APARTIR DE LOS VIALES CONSERVADOS, a la fecha realizado.
CLASIFICADOS DE ACUERDO A LA TINCION
DE GRAM: En relación al tipo de bacterias Conclusión:

13
El método de conservación de cultivo de bacterias” (Fecha de
microorganismos en papel filtro demostró ingreso 30 de agosto del 2007)
que SI es posible recuperar bacterias tanto disponible en:
http://med.unne.edu.ar/revista138.
Gram positivas como Gram negativas
htm
después de 10 años de conservación. Los 2. García F. “MB-5000 BACTERIOLOGIA
resultados obtenidos en la evaluación de MEDICA 5000 BACTERIOLOGIA
este método nos sugiere que es útil para las MEDICA 1 CICLO LECTIVO” (fecha de
necesidades e infraestructura con que ingreso 14 de agosto del 2007)
cuenta la facultad de Bioanalisis, para poder disponible en:
seguir utilizándolo en la conservación de http://netropica.org/pdfs%20b%20m
edica.pdf
microorganismos para el apoyo académico y
3. Ferradiz Santos Juan, Amador
del proceso enseñanza-aprendizaje de la Romero Javier “MANUAL DE
licenciatura en Química Clínica. MICROBIOLOGIA” Unidad de calidad.
Dirección área 11. INSALUD.MADRID
1999.
Referencias Bibliográficas:

1. Hernandez CH. F. “Experiencia en el

14
EVALUACIÓN DEL EFECTO DE OXIESTEROLES DIETARIOS
SOBRE EL PERFIL DE LÍPIDOS DE LA MEMBRANA
PLASMÁTICA EN HEPATOCITOS DE RATA WISTAR.
Rosa Isela Villaraus Cirilo
Ida Soto Rodríguez
Alfonso Alexander Aguilera
Guillermo Hernández Díaz
Hugo Sergio García Galindo

Marco teórico: insaturado en la posición ∆;5-6 del núcleo del


esterol, por lo tanto es propenso para la
El colesterol (colest-5-en-ßol) es un oxidación4. La molécula sufre una auto-
metabolito esencial requerido en las oxidación por el mecanismo de radicales
principales funciones biológicas, proporciona libres generando la formación de
la fuente bioquímica para la síntesis de hidroperóxidos y posteriormente oxidación
hormonas esteroides y para la biosíntesis de de varios productos, denominado
la bilis y de las sales ácidas de ésta1. Los oxiesteroles. Estos productos de la oxidación
organismos obtienen el colesterol a través de son un grupo de esteroles similares en
la biosíntesis y de la dieta. La biosíntesis del estructura al colesterol, pero contienen un
colesterol es un proceso que ocurre oxígeno funcional adicional como un grupo
principalmente en el hígado, glándulas hidroxilo, grupo epóxido o grupo cetona en
suprarrenales, ovarios y testículos de el núcleo del esterol o al extremo de la
mamíferos, los cuales muestran mayor cadena de la molécula5. Los oxiesteroles se
actividad biosintética. El colesterol también han asociado con la génesis de
es requerido en la formación de la estructura enfermedades crónico degenerativas como
de la membrana celular, junto con las la aterosclerosis. Esta se caracteriza por daño
moléculas de los fosfolípidos forman la parte histológico de la estructura arterial por
integral de la capa bilipídica2, éste se inserta acumulación de lípidos que contienen
dentro de la bicapa de la membrana con su colesterol oxidado como la LDL oxidada.
eje largo perpendicular al plano de la Asimismo, se han relacionado con procesos
membrana, previniendo la cristalización de mutagénicos y recientemente, con la
las cadenas acil de las grasas al ajustarse apoptosis o muerte celular programada6.
entre ellas y modificando la actividad de las
enzimas enlazadas a la membrana3. El consumo de oxiesteroles a través de la
dieta, es un factor asociado al desarrollo de
El colesterol es una molécula con un enlace

Docente y Profesional de la salud Facultad de Bioanálisis Campus Veracruz UNIVERSIDAD VERACRUZANA
rosy_isevi@hotmail.com

15
diversas patologías, por lo que se han elaboración de croquetas. Al grupo testigo se
desarrollado trabajos experimentales en le administraron croquetas “placebo”. Todos
modelos “in vitro”, principalmente en líneas los animales recibieron su respectiva dieta
celulares puras de células conjuntivas, “ad libitum” durante ocho semanas. Se
musculares y nerviosas, en las cuales se ha registró el peso corporal y la presión arterial
medido el efecto citotóxico del 7- (PA) de los animales al inicio y al término del
hidroxicolesterol y del 25-hidroxicolesterol5; experimento. Al sacrificio de los animales se
sin embargo, poco se sabe sobre su efecto obtuvieron muestras de hígado para extraer
en modelos “in vivo”. las membranas plasmáticas por medio de
gradiente de Percoll así como muestras de
Planteamiento del problema: suero el cual, fue analizado utilizando
estuches de diagnóstico para colesterol,
¿Los oxiesteroles dietarios modifican el perfil
glucosa, triglicéridos y LDL. Los lípidos de las
de lípidos de la membrana plasmática de los
membranas plasmáticas de los hepatocitos
hepatocitos?
se obtuvieron por el método de Folch7 para
Objetivo General: su identificación y cuantificación por CG
previa metilación.
Evaluar el efecto de oxiesteroles dietarios
sobre el perfil de lípidos de la membrana Resultados:
plasmática en hepatocitos de rata Wistar.
El análisis de cromatografía de gases
Metodología: realizado a la mezcla de oxiesteroles
formados por calentamiento para su
Para analizar el efecto de los oxiesteroles se administración en las dietas de las ratas
diseñó un modelo experimental formando Wistar mostró la presencia de los siguientes
por cuatro grupos con seis ratas Wistar oxiesteroles: 4β-hidroxicolesterol (3 464.67
machos cada uno de cinco semanas de edad, ppm), 3,6-dione (7 555.99 ppm) 7β-
alojadas individualmente con un ciclo de hidroxicolesterol (3 768.57 ppm), 7α–
luz/obscuridad de 12 h a 25°C: a) grupo 1 hidroxicolesterol (25 327.27 ppm); 20-
(testigo), b) grupo 2 (POC´s+colesterol 1%), c) hidroxicolesterol (4 475.64 ppm),
grupo 3 (POC´s+colesterol 2%) y d) grupo 4 colestanotriol (6 909.38 ppm), 7-
(colesterol 1%). Para la dieta experimental se cetocolesterol (8 928.22 ppm), 25-
adquirió 1 Kg de colesterol puro. De esta hidroxicolesterol (3 919.52 ppm),
cantidad, 500 g se calentaron durante 90 oxiesteroles no identificados (13 308.00
días a 90°C, y se obtuvo una mezcla de ppm) y colesterol (16 490.00 ppm). En
oxiesteroles (POC´s), la cual fue analizada por cuanto al peso corporal registrado de los
cromatografía de gases (CG) para su animales no hubo cambio significativo entre
identificación y cuantificación. Para los los grupos experimentales y el testigo. Con
grupos experimentales se incorporó la respecto a la presión arterial (PA), al inicio
mezcla de POC´s 1% y 2% ó colesterol puro al del experimento los cuatro grupos de
1% al alimento de mantenimiento molido animales mostraron la misma PA: grupo
hasta formar una pasta homogénea para la

16
testigo (166±6 mm/Hg), grupo 1% y 2% además de disminuir los niveles de
POC´s+colesterol 1% (167±4mm/Hg), grupo 3 colesterol, se identificó el 7 ceto-colesterol
POC´s+colesterol 2% (165±3mm/Hg), y grupo en las membranas de los hepatocitos, lo que
colesterol 1% (159±4mm/Hg); sin embargo, permite suponer que los oxiesteroles son
al final de la administración de las diferentes capaces de incorporarse a la membrana
dietas la PA de los grupos mostró diferencia plasmática.
significativa entre los grupos experimentales:
grupo testigo (170±6 mm/Hg), grupo Discusión:
POC´s+colesterol 1% (206±3mm/Hg), grupo 3
El aumento significativo de la PA en los
POC´s+colesterol 2% (210±4mm/Hg), y grupo
animales experimentales y de manera
colesterol 1% (196±4mm/Hg). Al final del
particular en los alimentados con las dietas
experimento el perfil bioquímico de la
POC´s±colesterol 1 y 2% obedece a que el
glucosa y de los triglicéridos no presentaron
consumo dietario de oxiesteroles inhibe la
cambios significativos entre los animales
enzima óxido nítrico sintasa (ONS) encargada
alimentados con colesterol, POC´s+colesterol
de regular los niveles de óxido nítrico a nivel
1% y POC´s+colesterol 2% (93±4mg/dl) pero
del endotelio8. Los valores del colesterol
si en relación con el grupo testigo.
sérico disminuidos en los grupos
Los parámetros de colesterol fueron POC´s±colesterol 1 y 2% pudo deberse a que
significativamente distintos entre los los oxiesteroles inhiben la formación de la
animales alimentados con colesterol hidroximetilglutaril CoA reductasa encargada
(151±4mg/dl), POC´s+colesterol 1% de regular el metabolismo del colesterol
(97±2mg/dl) y POC´s+colesterol 2% endógeno9. Los niveles elevados de
(99±3mg/dl) en relación con el grupo testigo triglicéridos en el grupos de animales
(126±7mg/dl) y en los niveles de LDL también alimentados con POC´s+colesterol supone la
hubo cambios significativos en los grupos posibilidad que pueden tener los oxiesteroles
experimentales de colesterol, dietarios en la activación de enzimas que
POC´s+colesterol 1% y 2%: (105±5mg/dl; promuevan la formación de ácidos grasos
54±3mg/dl; 52±2mg/dl) respetivamente, libres lo que dar lugar a una dislipidemia
comparados con el grupo testigo (SEO,2004)10. En ratas Wistar alimentadas
(61±1mg/dl). Con respecto al perfil de lípidos con oxiesteroles se ha observado trastornos
en la membrana plasmática del tejido en el metabolismo de los quilomicrones
hepático, la concentración y composición de plasmáticos particularmente, el transporte
ácidos grasos saturados, monosaturados y de LDL, debido a que alteran la fracción de
polinsaturados no mostró diferencias apolipoproteína de la LDL, facilitando la
significativas, entre los grupos oxidación de la LDL11. En el presente trabajo
experimentales. Sin embargo, la la diferencia de los niveles de LDL en los
concentración del colesterol fue grupos POC´s+colesterol 1 y 2%, pudo
significativamente mayor en el grupo de deberse al mismo efecto. En cuanto a la
animales alimentados con colesterol. Cabe composición de lípidos de la membrana
señalar que en los grupos POC´s+colesterol plasmática, los oxiesteroles no modifican la

17
cantidad y el tipo de ácidos grasos; sin Chisolm MG. 2001. Oxidized LDL-
embargo, su incorporación puede afectar las induced injury and apoptosis in
propiedades biofísicas de la membrana como atherosclerosis. Potential role for
oxysterols. Trends Cardiovasc. Med.
la permeabilidad a la glucosa en los
11:131-138.
liposomas o un aumento en la transferencia 7. Folch, J., Lees, M. y Sloane, S.G.H.
de albúmina en el endotelio por lo que se les 1957. A simple method for the
considera pro-aterogénicos. Asimismo isolation and purification of total
pueden modificar las proteínas embebidas lipids from animal tissues. J. Biol.
en la membrana y alterar su función como Chem. 226: 497-509.
receptores a biomoléculas específicas12. 8. Kanhal Al, M.A., Ahmad, A.A.,
Othman Al, A.A., Arif, Z. and
Conclusión: Murshed Al, K.S. 2002. Effect of pure
oxidized cholesterol-rich diets on
Conclusión: Los oxiesteroles se incorporan a some biochemical parameters in
rats. Inter. J. Food Sci. Nutr. 53: 381-
la membrana plasmática del hepatocito
388.
promoviendo cambios en sus propiedades 9. Osada, K., Kodama, T., Yamada, K.,
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6. Colles MS, Maxson MJ, Carlson GS,

18
CONFIRMACION DIAGNÓSTICA DE VIRUS DEL
PAPILOMA HUMANO (VPH) EN BIOPSIAS DE CERVIX,
MEDIANTE REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR).
Salvador Contreras Huerta
Ivone Gomez Gonzalez
Guadalupe Alcantar Garcia
Armando Mendez Perez
Marco teórico: desarrollo de las técnicas de biología
molecular y su amplio uso en estudios
El Virus del Papiloma Humano (VPH) es uno epidemiológicos ha permitido estimar que
de los virus que se transmite con mayor entre un 2 y un 20 % de la población
frecuencia por vía sexual. Al menos la mitad femenina mundial es portadora oculta del
de los hombres y mujeres sexualmente VPH en el cuello uterino. En la última década
activos contraerán el VPH en algún se ha confirmado la relación etiológica entre
momento de sus vidas. Este virus es la infección por ciertos genotipos del VPH y
considerado inductor de neoplasias malignas el cáncer de cuello uterino. En el campo de la
de tipo escamoso en el cervix uterino y esta investigación básica, este hallazgo constituye
vinculado de forma directa con el cáncer un nuevo modelo para estudiar el
cervicouterino y de pene. Después del mecanismo viral de la oncogénesis y en el
cáncer de mama, el cáncer de cervix ocupa terreno de la epidemiología, la
el segundo lugar con una incidencia del carcinogénesis cervical es de gran
87% y es considerado por la Organización trascendencia. Aunque las pruebas de
Mundial de la Salud (OMS) como una de las histopatología aporten datos de lesión
principales causas de muerte en el mundo, indirecta, es necesario realizar el diagnostico
cálculos estadísticos prevén en 40 años certero y oportuno de la presencia viral y la
pudiera alcanzar la cifra de un millón de tipificación del mismo, con la finalidad de
casos. En la actualidad se cuenta con ayudar a disminuir el numero de infecciones
diversas metodologías capaces de y por consiguiente el de casos mortales por
diagnosticar este padecimiento, siendo las CaCu al impedir el desarrollo de la neoplasia.
de mayor relevancia aquellas que involucran
al ADN viral; una de estas pruebas es la Planteamiento del problema:
denominada Reacción en Cadena de la
Polimerasa (PCR) la cual cuenta con un grado Se desconoce el porcentaje de casos
de sensibilidad y especificidad alto. El realmente positivos para VPH diagnosticados


Docente y Profesional de la salud Facultad De Medicina. Uv Xalapa Departamento De Patologia
Experimental qcpatoex@hotmail.com

19
por histopatología en biopsias de cérvix y la analizados por electroforesis en geles de
identificación de los subtipos virales agarosa al 1.5% con solución buffer TBE 1X.
circulantes en la región. Todos los productos amplificados por PCR y
digeridos por RFLP se visualizaran en un
Objetivo General: transiluminador con luz ultravioleta.
Confirmar la presencia de VPH en biopsias ANALISIS DE LA INFORMACION: se
cervicales mediante la técnica de PCR. emplearan para la base de datos los
Software Office 2007 Excel y Statistica
Metodología:
versión 6.0, en primera instancia se realizara
DISEÑO: Prospectivo, Transversal, un análisis estadístico univariado aplicando
Comparativo y Observacional. UNIVERSO DE tablas de frecuencias, gráficas circulares, de
ESTUDIO: Se estudiaran un total de 80 barras, así como diagramas de cajas y
biopsias de cérvix con diagnóstico alambres. Posteriormente efectuaremos un
histopatológico de lesión intraepitelial o análisis divariado que consistirá en hallar las
tumor infiltrante inducidos por el virus del posibles correlaciones del padecimiento.
papiloma humano y un total de 20 biopsias
Resultados:
de cérvix sin lesion.
Para la realización de este estudio se
VARIABLES: Virus de papiloma humano
utilizaron 80 muestras de biopsia de cérvix
Subtipos viralesAmbas variables serán
provenientes de pacientes diagnosticados
medidas en escala nominal considerando
con lesión viral por papiloma con edad
presencia o ausencia.
variable de 14 a 55 años y 20 muestras de
PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION: Se pacientes que se consideraron sanas con un
utilizarán biopsias de cérvix en bloques de rango de edad de 20 a 41 años. En la
parafina tomadas previamente y amplificación por PCR de la región L1 del
diagnosticadas por histopatología con lesión virus del papiloma, el grupo de casos tuvo
intraepitelial de alto grado o carcinoma amplificación solo en el 77.5% (62 muestras),
escamoso invasor, se aislara el ADN para el 22.5% (18 muestras) no amplifico. El grupo
realizar posteriormente amplificación por control no tuvo amplificación tal y como se
PCR de la región L1 del papiloma virus con el esperaba. En la identificación del subtipo
fin de obtener un segmento de 450 pares de viral por RFLP en las 62 muestras (100%) que
bases al someterse a electroforesis en gel de si amplificaron a la región L1, se observaron
agarosa 1 % en buffer de TBE 1X, 6 expresiones virales las cuales se ordenaron
posteriormente y si las muestras son por frecuencia de la siguiente manera: el
positivas se realizara la tipificación subtipo 6 fue el de mayor frecuencia con
empleando enzimas de digestión según la 26% (16 casos), seguido del subtipo 11 con
técnica de “polimorfismos en la longitud de 23% (14 casos), subtipo 42 con 18% (11
los fragmentos de restricción”(RFLP) casos), subtipo 16 con 16% (10 casos),
utilizando las enzimas RsaI, PstI, BamHI, subtipo 33 con 9% (6 casos) y el subtipo 54
HaeIII e HinFI y los productos serán fue el de menor frecuencia con 8% (5 casos).

20
Al clasificarlos de acuerdo al grado de claro también que existen errores humanos
oncogenicidad se obtuvo que el 25% (16 que pudieran alterar un resultado y por
casos) corresponde a subtipos de alto grado consiguiente su tratamiento, razón que
(VPH16 y 33) y el siguiente 75% (46 casos) a motivó a la realización de este trabajo; con la
los clasificados como de bajo grado (VPH6, finalidad de corroborar los diagnósticos
11, 42 y 54). Al analizar su distribución por obtenidos por las técnicas antes
grupos de edades se encontró que los VPH mencionadas junto con los reportados por
16 y 33 tienen mayor relevancia en el grupo métodos moleculares como es el caso de
de edad de 21-27 años y nula presencia en el PCR. Tras comparar los resultados obtenidos
grupo de 14-20 años, por su parte los VPH por ambos métodos (histopatología/PCR), se
6,11 y 42 tuvieron también mayor expresión muestra que el primer estudio tiene una
en el grupo de 21-27 años con cuatro casos sensibilidad del 77% con margen de error del
cada uno, en el grupo de 14-20 el VPH 11 23% tal y como se manifiesta en estudios
mantuvo su expresión al igual que el VPH 6 realizados por el Depto. de Anatomía
en el grupo de 35-41 años. Al efectuar el Patológica de la Universidad de la frontera
comparativo entre ambos métodos en Chile y por el Servicio de Anatomía
(histopatológico/PCR) se notaron marcadas Patológica del Policlinico de España en sus
diferencias, en primer lugar que de el total artículos titulados “Detection of human
(80 muestras) solo un 77.5% fue realmente papilloma virus in cytologic samples or
portador de VPH, segundo que el 43.75% (35 biopsies of the cervix y Correlación
casos) considerados como de alto grado, diagnostica entre las displasias de cérvix y
disminuyo a un 20% por PCR y el 56.25% (45 detección por PCR del papiloma virus
casos) catalogado como de bajo grado humano, mostrando gran diferencia de las
aumento a un 57.5% por PCR al demostrarse pruebas realizadas por PCR que implican la
por RFLP que 1 caso considerado de alto amplificación de un gen tardio (L1) del VPH
grado no lo era; finalmente un 22.5% resulto empleando ADN, que tienen una excelente
no ser portador de virus y mucho menos ser sensibilidad para detectar alteraciones
de alto grado. celulares no captadas por otros métodos
convencionales.
Discusión:
Conclusión:
El desconocimiento de este agente viral, la
poca atención de la gente a campañas de Después de haber realizado el presente
prevención y diagnostico oportuno, aunado trabajo, de analizar los resultados y llevar
al inicio temprano de la vida sexual, la acabo el comparativo de los mismos en los
promiscuidad y no practicar el sexo seguro; procedimientos que aquí se describieron
ha incrementado el numero de infecciones y anteriormente, se concluye que:
por consiguiente el numero de casos de
CaCu.Si bien es cierto la mayoría de estos • La prueba de Reacción en Cadena de
diagnósticos son efectuados por gente la Polimerasa (PCR) conjuntamente con la
especializada en citología e histopatología, es amplificación del gen tardío L1, constituye
una metodología útil y muy sensible para la

21
detección del Virus del Papiloma Humano, and philogenetic algorithms J of
además de confirmar el diagnóstico infect Dis. 1994; 170:1077-1085.
citológico, colposcópico e histopatologico; 2. Barasso R, Bergeron C, Veaudenon S.
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particularmente en lesiones intraepiteliales o
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con atipias. neoplasia: Great diversity and
distinct distribution in low and high
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grade lesion. Am J Surg Pathol. 1992;
polimorfismo en la longitud de los 16:641-649.
fragmentos de restricción (RFLP) facilita la 3. Bedel MA, Hudson JB, Lalmina LA,
identificación de los subtipos virales NicCance DJ. Immortalization and
causantes de las lesiones en el cérvix, ayuda alteration of Different of human
también a que el medico brinde de acuerdo a keratinocytes in vitro by the E6 y E7
sus conocimientos el tratamiento adecuado y open reading frames of human
Papilloma virus type 18. J Virol. 1990;
permita la detección temprana de
64: 519-596.
precursores graves del cáncer. 4. Bergen S, Waller J, et al, Wilczynski
SP. Human papilloma virus and
• Se espera que los estudios por ADN
cervical cancer: Analysis of
de VPH con sus respectivos oligonucleótidos histopathologic features associated
(MY09/MY11) constituyan un método with different viral types. Hum
racional para complementar el frotis de Pathol. 1988; 19: 697-704.
Papanicolaou, la colposcopia y la 5. Borregaard N., Elsbach P., Ganz T.,
histopatología en nuestra entidad y ofrecer Garred P, Svejgaard A. Innate
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diagnostico y valoración del riesgo 6. Bosch FX, Lorincz A, Muñoz N, Meijer
carcinógeno. CJLM, Shah KV. The causal relation
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• Finalmente se pone a consideración cervical cancer. J Clin Pathol 2002;
de las Instituciones de Salud y de sus 55(4): 244- 265.
profesionales involucrados en este tema, el 7. Camarena A, García A, Granados J,
uso de técnicas avanzadas como es el PCR- Navarro C, Zuñiga RJ, Olvera R, Pérez
RFLP para incorporarlos a sus laboratorios LE, Quiróz V, Selman LM, Vargas AG.
Aspectos inmunogenéticos de la
como una herramienta más de apoyo
tuberculosis pulmonar. Rev Inst Enf
diagnostico y por consiguiente se sugiere la
Resp Mex. 2000; 13(4):240-247.
preparación adecuada de su personal para 8. Cancer DJ, Camolon SP, Carkson,
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30. Zur Hausen H. Papillomaviruses

24
DETECCIÓN DE CLONAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS
METICILINO RESISTENTES (MRSA) EN EL HOSPITAL
REGIONAL DE ALTA ESPECIALIDAD DE VERACRUZ
(HRV)
Miguel Ángel Ortiz Gil
María Elena Velázquez Meza
Javier Paul Mora Domínguez
Irma Gabriela Echániz Avilés
María Noemí Carnalla Barajas
Elsa Lilia Mendiola Del Moral
circulan en diversos hospitales de la
república mexicana ( Hospitales del Distrito
Marco teórico: Federal, Guadalajara, Chihuahua, Monterrey
y San Luis Potosí) y se ha documentado la
Antes del uso de antibióticos una presencia de la clona EMRSA-16(7) y la clona
bacteriemia causada por S. aureus producía internacional multiresistente Nueva
una mortalidad de aproximadamente el 82%. York/Japón(8),(9). Las 6 clonas pandémicas
Aun ahora este porcentaje sigue siendo de MRSA posen características distintas en
elevado entre el 25-63%.(1) S. aureus cuanto a sus factores de virulencia y
produce exoproteinas que contribuyen a resistencia antimicrobiana. La clona más
colonizar y causar enfermedad en el predominante en este momento en México
humano.(2) S. aureus meticilino resistente es la clona Nueva York/Japón que tiene la
(MRSA), posee un elemento genético móvil capacidad de propagarse, causar brotes y
llamado, casete cromosomal estafilocócico reemplazar las clonas existentes,(10) esto se
mec (SCCmec), que incluye al gen mecA,(3) el debe a su alta capacidad de virulencia; entre
cual codifica para la proteína de unión a los genes que posee se encuentran algunas
penicilina 2a (PBP2a) y determina la enterotoxinas, las cuales le permiten causar
resistencia a todos los β-lactámicos.(4). entre otras cosas fascitis necrotizante.(11).
Existen múltiples linajes clónales de MRSA También posee la toxina del síndrome de
como consecuencia de la transferencia choque tóxico 1, que causa una gran
horizontal del mecA.(5) Seis tipos de clonas variedad de síndromes clínicos, incluyendo el
pandémicas de MRSA han sido reportadas: síndrome de choque tóxico e infecciones
Ibérica, Brasileña, Húngara, Nueva supurativas(12) y a esto se suma que es
York/Japón, Pediátrica y EMRSA-16.(6). resistente a β- lactámicos y a una amplia
En México en el Instituto Nacional de Salud gama de otros antibióticos.(13)
Pública, se han realizado estudios
encaminados a conocer las clonas que


Estudiante de Maestría Instituto Nacional de Salud Publica Hospital Regional de Alta
Especialidad de Veracruz (SSAVER) maog86@gmail.com

25
Planteamiento del problema: similitud con el programa (NTSys).(19)

La prevalencia de MRSA en México ha Resultados:


aumentado de forma progresiva en las tres
últimas décadas, provocando la diseminación En el periodo de estudio se colectaron un
de cepas multiresistentes y altamente total de 99 cepas, las cuales fueron
virulentas. Dada la importancia que obtenidas de 8 diferentes servicios médicos,
representa este patógeno para la salud siendo el de mayor frecuencia medicina
pública y debido a los cambios interna (53%) y el sitio de aislamiento más
epidemiológicos y moleculares que se han predominante fue el hemocultivo (35%). Los
venido produciendo, se ha planteado realizar resultados fenotípicos mostraron que el
un análisis de las clonas de MRSA que 100% de las cepas fueron catalasa positiva,
circulan en el Hospital Regional de Alta 92.6% fueron coagulasa positiva y 97%
Especialidad de Veracruz (HRV) y su perfil de mostraron resistencia a cefoxitina. El 90% de
resistencia antimicrobiana. La presencia de las cepas fueron identificadas como MRSA,
cepas de MRSA descendientes de clonas siendo estas sensibles a rifampicina,
epidémicas favorece con frecuencia el teicoplanina, trimetroprim/sulfametoxazol y
desarrollo de brotes dentro de los hospitales, vancomicina y resistentes al resto de los
por lo cual se plantea la siguiente pregunta antimicrobianos probados. El análisis
de investigación:¿Cuáles son las clonas de S. genotípico por PFGE mostró la presencia de
aureus meticilino resistente que circulan en los subtipos clónales (C28, C31 y C35) los
el Hospital Regional de Alta Especialidad de cuales se encuentran relacionados con la
Veracruz? clona Nueva York-Japón y el patrón (Ib) es un
subtipo de la clona Ibérica.
Objetivo General:
Discusión:
Objetivo General: Identificar las clonas de S.
aureus meticilino resistente que circulan en En México, la incidencia de infecciones
el Hospital Regional de Alta Especialidad de nosocomiales oscila entre 3.8 y 26.1 casos
Veracruz. por cada 100 egresos; la mortalidad asociada
con infecciones intrahospitalarias en
Metodología: promedio es 5% y para el 2001 ocupó la
séptima causa de muerte.(20) Los recursos
Estudio transversal prospectivo, se para el control de las infecciones por MRSA
recolectaron cepas del HRV en un periodo siguen siendo limitados y los MRSA son una
comprendido de septiembre 2009 a julio de las principales causas de infección
2010.Se realizó las pruebas de coagulasa, nosocomial en nuestro país, sin embargo, la
catalasa y cefoxitina.(14) La identificación de magnitud del problema no se entiende
especie y susceptibilidad antimicrobiana se completamente, ya que los datos tienden a
hizo por Sensititre®(15), (16). Para el análisis provenir de grandes hospitales, mientras que
genotípico se utilizó la técnica de gran parte de la población es atendida en
electroforesis de campos pulsados centros comunitarios de salud que no
(PFGE).(17) Los resultados fenotípicos se cuentan con amplias instalaciones para
analizaron con Excel 2010, mientras que los realizar vigilancia microbiológica.
resultados del PFGE se analizaron de acuerdo En México los estudios demuestran un
a los criterios de Tenover 1995(18) y se aumento en la prevalencia de los MRSA
realizó un dendrograma de coeficiente de durante los últimos años, la Organización

26
Panamericana de la Salud (OPS) en el 2004 Conclusión:
reportó una prevalencia de MRSA del 52%, la
Asociación Panamericana de Enfermedades La clona Nueva York/Japón ha sido
Infecciosas para 2006 reportó una tasa de identificada previamente en otros hospitales
MRSA de 32% y datos más recientes del en México (norte y centro). Este es el primer
2008 procedentes del estudio TEST reporte de esta clona al sur de México, lo
muestran una prevalencia del 48% de que demuestra claramente su gran
MRSA.(21) Por lo cual este estudio permitió capacidad de expansión geográfica,
establecer una vigilancia epidemiológica de multiresistencia y virulencia. Además por
las infecciones nosocomiales por MRSA en el primera vez se evidencia la presencia de la
HRV, mostrando que el 93% de los aislados clona Ibérica en México. La vigilancia
fueron S. aureus con una prevalencia de epidemiológica molecular de las clonas de
resistencia a meticilina del 97%. Esta MRSA permiten tener un mayor
información difiere mucho con lo reportado entendimiento de la dinámica de distribución
por el Instituto Nacional de Ciencias Médicas de las clonas responsables de infecciones en
y Nutrición “Salvador Zubirán” (INCMNSZ) el HRV; conocimiento indispensable para la
durante 1981 a 1992, donde encontraron prevención, control y posible erradicación
que el 8% de los aislados fueron S. aureus de este microorganismo.
con una prevalencia de resistencia a
meticilina menor a 20%. Sin embargo, Referencias Bibliográficas:
estudios recientes muestran prevalencias
muy similares entre el HRV y el INCMNSZ (1) Howe RA, Brown NM, Spencer RC.
(2004 – 2005), donde indican una The new threats of Gram positive
prevalencia de S. aureus superior a 50% en pathogens: re-emergence of things
aislados con una tasa de resistencia a past. J Clin Pathol 1996; 49:444-9.
meticilina del 100%.(22). Estas prevalencias y (2) Dinges MM, Orwin PM, Schlievert
resistencias antimicrobianas varían en cada PM. Exotoxins of Staphylococcus
hospital y dependen del control en el uso de aureus. Clin Microbiol Rev 2000;
antimicrobianos y del programa de vigilancia 13:16-34.
de infecciones nosocomiales. Este estudio (3) Catarina Milheirico, Duarte C.
evidencio la presencia de dos clonas MRSA Oliveira and Herminia de Lencastre.
pandémicas en el HRV, estableciendo que los Update to the multiplex PCR strategy
patrones C28, C31 y C35 son subtipos de la for assignment of mec element types
clona Nueva York/Japón y el patrón Ib es un in Staphylococcus aureus.
subtipo de la clona Ibérica. La importancia de Antimicrob Agents and Chemother,
este hallazgo radica en que la primera cepa Sept. 2007, Vol. 51, No. 9. p. 3374–
de MRSA resistente a vancomicina (VRSA) 3377.
perteneció al linaje Nueva York- (4) Henry F. Chambers. Methicillin
Japón.(23),(24) Mientras que la clona Ibérica resistance in staphylococci:
se disemino ampliamente en Europa(25),(26) molecular and biochemical basis and
y EEUU(27) y fue causante de severos brotes clinical implications. Clinical
hospitalarios en estas regiones(28) y fue la Microbiology Reviews. Oct. 1997,
primera cepa de S. aureus con resistencia Vol. 10, No. 4. p. 781–791.
intermedia a vancomicina (5) Ad C. Fluit, Franz-Josef Schmitz.
(VISA)(29),(30),(31) y sensibilidad reducida a MRSA: current perspectives. EEUU,
la teicoplanina.(32) Edit. Horizon Scientific Press, 2003.

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Staphylococcus aureus isolates with

30
DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE DENGUE
Armando Mendez Perez
: Salvador Contreras Huerta
Mercedes Tepetla Peredo
Dolores Carranza Gonzalez

Marco teórico: con otros serotipos. Esta generalmente


aceptado que una infección secundaria por
A principios de 1990 el Dengue se convirtió este flavivirus implica una respuesta Th2
en uno de los 5 mayores problemas de salud importante que propicia incremento
que aquejan a los países centroamericanos y notable en la formación de complejos
una de su variantes; el Dengue clásico es inmunes los cuales juegan un papel critico
una enfermedad viral que afecta las en la patogenia de dengue hemorrágico y
regiones tropicales y subtropicales en el shock. La infección por virus del dengue
mundo, predominantemente en áreas implica un amplio espectro clínico desde
urbanas y suburbanas, puede evolucionar inaparente infección, resfriado común, fiebre
hacia sus formas graves de dengue indeterminada, dengue clásico hasta la
hemorrágico y shock asociado a dengue. Se expresión clínica mas grave correspondiente
estima que existen anualmente 50 a 100 a dengue hemorrágico o shock. El
millones de nuevos casos infectados por diagnostico de certeza, inmediato y de
virus del dengue en el mundo y de los diferenciación del subtipo resulta
cuales resultan 250,000 a 500,000 casos de fundamental para el estudio etiológico,
dengue hemorrágico y 24 muertes cada año clínico y control epidemiológico. La amenaza
por lo cual se ha considerado un problema del Dengue no se debe, ni se puede
serio de salud publica. El Dengue es un virus enfrentar aisladamente en las actuales
RNA encapsulado y el mas prevalente de condiciones mundiales. Los países
los arbovirus en regiones subtropicales y centroamericanos y en especial el nuestro
tropicales, genómicamente está constituido deben actuar de manera conjunta y
por 11 kb y esta subdividido en 3 genes coordinada para solucionar este problema.
que codifican proteínas estructurales (C,M En el campo clínico el diagnostico por
y E) y 7 genes que codifican proteínas no laboratorio debe ser apoyado por las nuevas
estructurales. Hay 4 subtipos que inducen tecnologías que permitan no solo detectar la
inmunoprotección para el mismo subtipo presencia del agente causal, sino mejor aun
pero parcialmente en subsecuente infección

Investigador Departamento de Patologia Experimental Facultad de Medicina. UV Xalapa
.qcpatoex@hotmail.com

31
tener una respuesta pronta en los sitios escala nominal considerando presencia o
donde se estén presentando los primeros ausenciaDengue hemorrágico: medida en
brotes. escala nominal considerando presencia o
ausenciaSubtipos 1, 2,3 y 4: medida en
Planteamiento del problema: escala nominal considerando presencia o
ausencia. PROCEDIMIENTO DE
Se desconoce cuales son los subtipos virus
RECOLECCION: Se obtuvo de cada uno de los
del Dengue presentes en una población y
pacientes 7 c.c. de sangre, se centrifugó a
cuales son los que propician el tipo
3500 rpm, se separó el plasma y se
hemorrágico.
almacenó en tubos de eppendorff a -70°C.
Objetivo General: Se eliminaron eritrocitos mediante solución
de lisis y se separaron leucocitos. Del suero
Confirmar la presencia del virus dengue por y leucocitos se aisló RNA con método
medio de RT-PCR en 200 pacientes tradicional. La transcripción en reversa se
clínicamente catalogados e identificar los realizó utilizando el amplicón D2-D1
subtipos mediante Nested PCR. especifico correspondiente a la región
génica Pre-M del virus. Se incluyó
Metodologia: transcriptasa inversa AMV ( avian
DISEÑO Prospectivo, Transversal, mieloblastosis virus). La cadena resultante
Comparativo y Observacional. se sometió a PCR anidado mediante los
primers TS1, TS2, TS3y TS4 de los cuales se
UNIVERSO DE ESTUDIO: Se muestrearon 200 esperaba obtener amplicones de 482, 119,
pacientes con diagnostico clínico de dengue 290 y 392 pb. Respectivamente.
procedentes del Hospital Civil de Martínez
de la Torre, Casa de Salud de la UV en ANALISIS DE LA INFORMACION: Las variables
Veracruz, Ver. Y Centro de Salud Carranza estudiadas fueron Dengue clásico, Dengue
de la SSA ubicado en la Colonia el Manglar hemorrágico y subtipos 1, 2, 3 y 4, en
de Boca del Rio, con el consentimiento primera instancia se realizo un análisis
aprobado. Los pacientes presentaron un estadístico univariado aplicando tablas de
cuadro nosológico caracterizado por fiebre frecuencias, gráficas circular, de barras, así
de 39.2°C cefalalgia frontal, mialgias, como diagramas de cajas y alambres.
artralgias, dolor retroorbitario, anorexia y Posteriormente se efectuó un análisis
eritema parcial. De estos 200 pacientes 17 divariado que consistió en hallar las posibles
cursaron con trombocitopenia, petequias, correlaciones del padecimiento.
hemorragia mucocutánea y tres de estos
pacientes con un cuadro de shock
progresivo. También se seleccionaron 100 Resultados:
muestras aparentemente sanas como
testigos. En la Amplificación de la región D1-D2 por
RT-PCR, se observo que el 100% de las
VARIABLES: Dengue clásico: medida en muestras del grupo de casos fue positivo

32
para Virus dengue, en la determinación de anti viral durante meses no permite
los subtipos virales para por NESTED PCR se diferenciar con certeza si la infección
observaron las siguientes expresiones corresponde a un brote primario o
medidas en porcentajes: subtipo viral T1 secundario y con el inconveniente de
(0%) T2 (30%) T3 (15%) T4 (12.5% ) y en presentar reacción cruzada a antígenos
combinaciones por reinfección T2-T1(2.5%) homólogos y heterólogos , por lo tanto no
T2-T3 (37.5%) Y T2-T4 (2.5%). Con ello se es posible identificar si se trata de una
logro identificar que el 42.5 % correspondió infección por algún otro de los 4 subtipos
a dengue hemorrágico y el 57.5 % para virales o reacción cruzada a otro flavivirus.
dengue clásico.
Referencias Bibliográficas:
Discusión:
1. Acosta C. Gómez I Biología y
El diagnostico molecular de dengue por métodos diagnósticos dengue,
medio de RT-PCR y PCR anidado múltiple es dengue. Rev. Biomed. Vol. 16:113-
un análisis sumamente confiable en el 137, 2005
diagnostico de la enfermedad y
clasificación del subtipo viral. Este método 2. Balmaceda A. Manual de
conduce a un diagnostico del dengue en su procedimientos de técnicas para el
fase aguda desde el primer día de diagnóstico del Dengue. Programa
evolución aislando RNA viral del suero de de Reconstrucción Pos-Huracanes
George y Mitch. Organización
los pacientes en fase aguda o convalecientes,
para identificación de los 4 subtipos virales Panamericana de la Salud, Oficina
; además de contribuir al diagnostico Regional de la Organización Mundial
etiológico también lo hace de la Salud, 2002.
significativamente en el control clínico y 3. Carrillo, Sergio. (1994). Programa de
diferenciación entre una entidad clínica prevención y control de Dengue
primaria o secundaria otorgando además Hemorrágico. Maracay. Estado
especificidad diagnostica del 98%. Aragua. Tesis de Grado.

Conclusión: 4. Chungue, E.; Cassar, O.; Drouet,


M.T.; Guzmán, M.G. y col. Molecular
Entre las técnicas serológicas mas
epidemiology of Dengue-1 and
comúnmente utilizadas es la captura de IgG
Dengue-4 viruses. J. Gen. Virol. 76:
e IgM, por método de ELISA IgM es
1877-1884, 1995.
detectable entre el día 3 y 5 en el 50% de
los pacientes en la fase aguda de la 5. Crespo MP. El diagnóstico viral por el
enfermedad primaria o secundaria y laboratorio. Colombia Médica 2000;
alcanza su pico durante 2 semanas y 31:135-50.
declina hasta hacerse imperceptible a los 2
o 3 meses de evolución. El serodiagnóstico 6. Cuzzubbo AJ, Vaughn DW, Nisalak A,
de infección por dengue identificando IgG Suntayakorn S, Aaskov J, Devine PL.

33
Detection of specific antibodies in Información para los Médicos.
saliva during Dengue infection. J Clin Centro para el Control y Prevención
Microbiol 1998; 36:3737-9. de las Enfermedades de los Estados
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Guzmán MG. Predicción del serotipo disponible en.
del virus del dengue mediante la http://geosalud.com/enfermedades
respuesta de anticuerpos IgM. Rev. _infecciosas/dengue_hemorragico.ht
Cubana Med Trop 2002; 54:113-117. m
8. Dengue: Manual Práctico. Grupo de 11. Dengue aspectos clínicos y de salud
consenso nacional para la publica, sección de enfermedades
prevención y control del dengue en infecciosas transmitidas por
Venezuela. [En línea] 2001 [fecha vectores.Disponible en
acceso 20 febrero 2004] URL
http://www.cdc.gov/ncidad/dubod/
disponible en dengue/slideset/spanish.setl/i/slide0
http://www.reinaldogodoyeditor.co 8.htm.12 - Fields, B.N.; Knipe, D.M.
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9. Dengue en las Américas 1990.
http://www.paho.org/spanish/hcp/..
../arias-denge.htm.

10. Dengue y Dengue Hemorrágico

34
INMUNOPATOGENIA EN 200 PACIENTES CON
DENGUE
Armando Mendez Perez
Salvador Contreras Huerta
Mercedes Tepetla Peredo
Dolores Carranza Gonzalez

Marco teórico: abdominal. Los síntomas respiratorios (tos,


rinitis, faringitis) son frecuentes y se pueden
La infección por virus del dengue causa una presentar erupciones cutánea maculo-
significativa morbilidad y mortalidad en los papular que aparece al comienzo de la fiebre
países tropicales. Aunque inicialmente se o coincide con un segundo pico febril a los 3-
describió predominantemente en la infancia, 5 días. Pueden observarse poliadenopatías,
esta enfermedad se ha diseminado granulocitopenia, linfocitosis relativa y
actualmente en todos los grupos de edad, trombopenia En los casos severos de la
con el primer reporte de pandemia en 1950 enfermedad (DH) Dengue hemorrágico
con este primer brote en el sureste (SCHD) Síndrome de choque por dengue)
asiático. El virus del dengue pertenece al además del cuadro anterior se presenta
género de flavivirus y se divide en 4 abruptamente hipotensión, déficit en la
serotipos cada uno de ellos es capaz de de perfusión tisular periférica y manifestaciones
ocasionar un espectro de expresión con un hemorrágicas a distintos niveles siendo leves
rango amplio desde portadores en algunos casos o evolucionando
asintomáticos a una enfermedad febril con rápidamente hasta llegar a sufusiones en
cifras altas de temperatura, hasta una piel, tubo digestivo, sistema nervioso,
discrasia hemorrágica con frecuencia aparato urinario y serosas con derrame
fatal.Las primeras manifestaciones clínicas pleural siendo letal un 10-40 por ciento de
son entre 5 y 8 días post-inoculación, el los casos. En el Dengue hemorrágico hay un
huésped desarrolla una viremia que dura descenso del nivel de plaquetas por debajo
aproximadamente cinco días. Los síntomas de 100.000/mm3 y un aumento del
más frecuentes son: fiebre elevada 39-40ºC hematocrito (hemoconcentración) En los
intermitente bifásica, cefalea, mialgias, casos benignos o moderados, luego del
artralgias, con dolor cervical y lumbar, dolor descenso de la fiebre, el resto de los
retrocular, náuseas y/o vómito, dolor síntomas y signos retroceden recuperándose


Investigador Departamento de Patologia Experimental Facultad de Medicina. UV Xalapa.

qcpatoex@hotmail.com

35
espontanèamente pero en los casos severos UNIVERSO DE ESTUDIOSe estudiaron 200
después de un descenso de la fiebre entre el muestras de suero con diagnostico clínico de
3º y el 7º día, el estado del paciente dengue confirmado por RT-PCR de pacientes
empeora repentinamente, presentándose del Hospital Civil de Martínez de la Torre,
cianosis, taquipnea, hipotensión, Casa de Salud de la UV en Veracruz, Ver. Y
hepatomegalia, hemorragias múltiples y falla Centro de Salud Carranza de la SSA ubicado
circulatoria. La situación es de corta en Colonia el manglar en Boca del Rio. Los
duración, pudiendo llevar a la muerte en 12 pacientes cursaron con fiebre de 39.2°C,
a 24 horas (1 a 10% de los casos) o a la cefalalgia frontal, dolor retroorbitario,
rápida recuperación luego del tratamiento artralgias, mialgias y eritema cutáneo.
antishock. Existe aumento de la De estos 200 casos 17 cursaron con dengue
permeabilidad vascular, hemoconcentración, hemorrágico caracterizado por hemorragias
trombocitopenia, y deplección del puntiformes en mucosa oral, pinguéculas,
fibrinógeno (y del factor VIII, factor XII, etc.) púrpura e hipotensión. Como grupo control
con concentración elevada de sus productos se usaron 40 sueros de individuos
de degradación. considerados sanos.

A pesar de los avances en el estudio de la VARIABLES: Virus Dengue: medida en escala


respuesta inmunitaria del huésped a los nominal considerando presencia o
antígenos virales la patogénesis no es ausenciaIL4, IL 9, CCL 18 y CCL 2 : medición
exacta, aunque son varios los mecanismos cuantitativa en picogramos (pg).
involucrados simultáneamente. Este trabajo
se inclina hacia el estudio de la función PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION: Se
polarizada y dominante de linfocitos CD4 obtuvieron 2 c.c. de suero de cada paciente
estos se conservaron a menos 70°C e
en particular su variante Th2.
identificaron correctamente. Se llevo a
Planteamiento del problema: efecto la cuantificación de IL 4, IL 9, CCL 18
y CCL 2 mediante método de ELISA con
Se desconoce el comportamiento de la anticuerpos monoclonales recombinantes
cinética inmunitaria en los 200 pacientes marca R&D Systems. Para cada una de las
con virus Dengue. interleucinas se coloco una curva estándar,
terminada la reacción y formación de
Objetivo General:
complejos se realizo lectura de las muestras
Realizar la cuantificación de las interleucinas a 450nm en lector de microplacas y se
IL4, IL 9, CCL 18 y CCL 2 mediante método obtuvieron lecturas derivadas de las
de ELISA con anticuerpos monoclonales absorvancias mismas que fueron utilizadas
recombinantes. para hacer los cálculos expresados en
picogramos.
Metodología:
ANALISIS DE LA INFORMACION: Para la base
DISEÑO Prospectivo, Transversal, de datos se empleo el Software Office 2007
Comparativo y Observacional. Excel donde se realizo un análisis estadístico

36
para cada interleucina por separado propiciando disfunción endotelial,
obteniendo la media y realizando una esfacelación y trombocitopenia, previa
comparación con el grupo control, aplicando fijación y activación del complemento.
gráficas de barras, así como diagramas de
cajas y alambres. Conclusión:

Resultados: DISCUSION Y CONCLUSION: El primer


contacto del virus con el sistema inmune se
Se observaron cifras elevadas en pacientes produce cuando se internaliza en células
con dengue clásico de IL 4 28pg/ml (en dendríticas a nivel tisular. Estas células
testigos 3.6 pg/ml), CCL 18 arrojo cifras de procesadoras y presentadoras de antígenos
1348 pg/ml en pacientes ( testigos alojan las partículas virales en retículo
789pg/ml,) IL 9 en pacientes mostro cifras endoplásmico y endosomas donde RNA
de 265pg/ml (en controles 24 pg/ml.) y viral interactúa con Toll 4 y se activa el
CCL2 60pg/ml (testigos 79.3 pg/ml). sistema inmunocompetente . Una vez que
estas líneas de células se activan liberan IL
Discusión: 4. Este mediador propicia por vía paracrina
transducción y transcripción en células
DISCUSION Y CONCLUSION: El primer
procesadoras y presentadoras de antígenos
contacto del virus con el sistema inmune se
de CCL 18, esta proteína es quimiotactico
produce cuando se internaliza en células
de Linfocitos Th2 los cuales al activarse
dendríticas a nivel tisular. Estas células
sintetizan IL 9. CD 40L es expresado en
procesadoras y presentadoras de antígenos
linfocitos TH2 y a través de este ligando
alojan las partículas virales en retículo
con CD40 en linfocitos B transcriben la
endoplásmico y endosomas donde RNA
síntesis de IgM e IgG. Estas
viral interactúa con Toll 4 y se activa el
inmunoglobulinas identifican antígenos
sistema inmunocompetente . Una vez que
virales que forman complejos y dibujan un
estas líneas de células se activan liberan IL
tipo de lesión humoral mediada por
4. Este mediador propicia por vía paracrina
anticuerpos al unirse al RII gamma de
transducción y transcripción en células
inmunoglobulina en plaquetas y endotelio
procesadoras y presentadoras de antígenos
propiciando disfunción endotelial,
de CCL 18, esta proteína es quimiotactico
esfacelación y trombocitopenia, previa
de Linfocitos Th2 los cuales al activarse
fijación y activación del complemento.
sintetizan IL 9. CD 40L es expresado en
linfocitos TH2 y a través de este ligando Referencias Bibliográficas:
con CD40 en linfocitos B transcriben la
síntesis de IgM e IgG. Estas 1. Acosta C. Gómez I Biología y
inmunoglobulinas identifican antígenos métodos diagnósticos dengue,
virales que forman complejos y dibujan un dengue. Rev. Biomed. Vol. 16:113-
tipo de lesión humoral mediada por 137, 2005
anticuerpos al unirse al RII gamma de
inmunoglobulina en plaquetas y endotelio 2. Balmaceda A. Manual de

37
procedimientos de técnicas para el prevención y control del dengue en
diagnóstico del Dengue. Programa Venezuela. [En línea] 2001 [fecha
de Reconstrucción Pos-Huracanes acceso 20 febrero 2004] URL
George y Mitch. Organización disponible en
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Aragua. Tesis de Grado.
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4. Chungue, E.; Cassar, O.; Drouet, Centro para el Control y Prevención
M.T.; Guzmán, M.G. y col. Molecular de las Enfermedades de los Estados
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8. Dengue: Manual Práctico. Grupo de


consenso nacional para la

38
IDENTIFICACIÓN DE RECEPTORES DE ANGIOTENSINA II
Y CAVEOLINA-1 EN CORDÓN UMBILICAL Y CÉLULAS
ENDOTELIALES DE CORDÓN UMBILICAL (HUVECS) DE
PACIENTES PREECLÁMPTICAS
José Arnold Gonzalez Garrido
Aracely Lopez Monteon
Ángel Ramos Ligonio
José Rubén García Sánchez
Guillermo Manuel Ceballos Reyes
Enrique Méndez Bolaina

Marco teórico: endoteliales una probable asociación,


proponiendo un incremento en la circulación
La preeclampsia es un desorden específico de los niveles del factor de Von Willebrand,
que afecta al 5% de las enzimas hepáticas Angiotensina II (Ang II), endotelina y
todos los embarazos y es reconocida fibronectina.4 El sistema renina-angiotensina
clínicamente por la presencia de (encargado de la regulación de la presión
hipertensión (HTA), aumento de y un bajo arterial), realiza su función a través de la Ang
conteo de plaquetas (síndrome HELLP), II y sus receptores AT1 y AT2, los cuales
proteinuria (presencia de proteínas en la están implicados en distintos procesos como
orina) y edema, que ocurre después de la el desarrollo y diferenciación celular.5En
vigésima semana.1En algunos casos la 1953 se observo en la membrana celular de
preeclampsia progresa a algo más serio células endoteliales la presencia de
conocido como eclampsia, la cual conlleva al invaginaciones, las cuales se denominaron
coma o la muerte materno-fetal. Cuando la como “caveolas”.6,7 Estudios posteriores
preeclampsia no progresa a eclampsia puede encontraron la presencia de proteínas en las
dejar secuelas tales como fallo renal, ruptura caveolas, denominándolas caveolinas (Cav),
hepática, retardamiento del crecimiento describiéndose tres tipos Cav-1, -2 y -3.
intrauterino y muerte fetal intrauterina2,3. Dentro de las caveolinas destaca la cav-1 por
Las causas de la preeclampsia no son tener funciones importantes para la caveola
conocidas, pero existe evidencia de estar como; direccionar la formación de caveola y
asociada a la activación y disfunción ser un inhibidor inespecífico de proteínas
endotelial, muchas investigaciones han tirosina cinasa (mediante su péptido definido
demostrado mediante marcadores en el aminoácido 82-101, CSP-1), por lo que

Estudiante de Doctorado Centro de Investigaciones Biomédicas Universidad Veracruzana
arngonzalez@uv.mx

39
la cav-1 podría tener un papel importante en obtención, manteniéndose en crecimiento
la disfunción endotelial que se presenta en la hasta confluencia celular. Una vez obtenido
preeclampsia los cultivos se realizaron ensayos de
inmunocitoquímica para caracterizar al
Planteamiento del problema: endotelio a través de la identificación del
factor Von Willebrand, el cual es expresado
Debido a que la preeclampsia es una
solo por células endoteliales y
enfermedad de la que se desconocen sus
megacariocitos.Inmunocitoquímica de
causas de origen, y se asocia a una activación
proteínas AT1, AT2 y Cav-1 en HUVECs Una
y disfunción endotelial, el enfoque de este
vez caracterizado el endotelio se realizaron
trabajo es evidenciar la disfunción a nivel de
los ensayos de inmunocitoquímica indirecta
los receptores de Ang II y observar si existe
para observar la inmunoexpresión de las
un cambio en la expresión de la Cav-1, la cual
proteínas AT1, AT2 y Cav-1, utilizando
es un inhibidor inespecífico de proteínas
anticuerpos contra cada una de las
cinasas.
proteínas, posteriormente se utilizó un
Objetivo General: anticuerpo secundario acoplado a FITC y
TRIC. Se realizo el conteo de pixeles en el
Determinar la expresión de las proteínas programa IPLab 3.6.5 y los datos se
AT1, AT2 y Cav-1 en el cordón umbilical y sometieron a un análisis estadístico. Western
células endoteliales del cordón de mujeres Blot en el cordón umbilical. Se realizó el
embarazadas con preeclampsia. análisis de la expresión de los receptores de
Ang II en el cordón umbilical de embarazos
Metodologia: eutócicos y preeclámpticos. Se realizó la
Tipo de Estudio: Investigación Básica extracción de proteína de los cordones
Recolección de Muestras. Se realizó un umbilicales y se cuantificó la proteína
estudio experimental con cordones mediante el método de lowry. Se realizó el
umbilicales de pacientes eutócicos y Western Blot en condiciones
preeclámpticos donados por el Hospital desnaturalizantes para identificar la
General Córdoba, Veracruz, llevado a cabo presencia de las proteínas AT1, AT2, Cav-1 y
de Agosto de Octubre de 2009 a Marzo de GAPDH mediante el uso del anticuerpo anti-
2010. Se realizaron cultivos de endotelio de AT1 (1:200), AT2 (1:200), Cav-1 (1:500) y
cordón umbilical de pacientes eutócicos y GAPDH (1:3000) (Santa Cruz Biotechnology).
preeclámpticos, se transportaron de 2 a 4 Se realizó el revelado de las membranas por
cordones umbilicales frescos en solución de la reacción de la Diaminobencidina (DAB),
transporte. Los cordones se procesaron en identificándose la presencia de las proteínas.
campana de flujo laminar, se extrajeron las Se realizó un análisis densitométrico de los
células endoteliales, las cuales fueron Blots en el programa Labworks 4.0, estos
resuspendidas en Medio Suplementado y experimentos fueron realizados por
fueron sembradas en caja de cultivo de 75 triplicado y se sometió a un análisis
cm2, se incubaron y se observó su estadístico en el programa Prism 5.0. Para
crecimiento de 5 a 6 días posteriores a su evidenciar las diferencias estadísticas por

40
medio de p 0.05. expresión, debido a una baja participación de
la placenta en la disfunción causada por la
Resultados: preeclampsia,9 por otra parte nosotros
realizamos la evaluación de la expresión de
En el análisis de la expresión de las proteínas
los receptores en el cordón umbilical de
AT1, AT2 y Cav-1 en el cordón umbilical. Se
pacientes con embarazos eutócicos y
encontró que el receptor AT1 está presente
preeclámpticos, donde se observó que los
en una mayor expresión en los cordones de
receptores AT1 y AT2 en el cordón umbilical
preeclampsia en comparación con los
de preeclampsia se encuentra aumentada su
cordones eutócicos. Al analizar su expresión
expresión con respecto al cordón eutócico,
en las HUVECs se encontró AT1 está presente
sin embargo, fue evidente el incremento en
en una mayor expresión en HUVECs de
la expresión del receptor AT2 en
preeclampsia en comparación con las
comparación con el receptor AT1 en ambos
HUVECs eutócicas observándose en el
cordones, donde se ha descrito que la
análisis diferencias estadística de p<0.05. En
expresión del receptor AT2 es importante en
la expresión del receptor AT2 se encontró un
el desarrollo y diferenciación celular,
aumento en la expresión en los cordones de
asociando su aumento en la expresión en
preeclampsia en comparación con los
tejidos neonatales.10 Aunque, a pesar de
cordones eutócicos observándose en el
que el cordón contiene una variedad de
análisis densitométrico una diferencia
células, al evaluar la expresión de estos
estadística de p<0.05. Al analizar su
receptores en el cultivo de endotelio de
expresión en HUVECs se encontró que el
cordón umbilical se encontró que la
receptor AT2 está presente en una mayor
expresión de los receptores de Ang II se
proporción en las HUVECs de preeclampsia
mantiene de la misma forma que en el
en comparación con las HUVECs eutócicas,
cultivo celular. Lo cual nos permite sugerir
encontrándose diferencias significativas. En
que el endotelio mantiene la expresión del
la expresión de Cav-1 no se encontró
tejido al cultivo.La proteína Cav-1 que es
ninguna diferencia en cordones eutócicos o
parte de la caveola, y dentro de este está
preeclámpticos, al analizar la expresión de
contenido el péptido de anclaje de Cav-1
Cav-1 en las HUVECs no se encontró ninguna
definido en el aa 82-101, el cual es un
diferencia en su expresión, tanto en las
inhibidor inespecífico de cinasas y de gran
HUVECs eutócicas o preeclámpticas. En
importancia en el funcionamiento celular.11
ambos análisis no se encontraron diferencias
La expresión de la Cav-1 no mostro
significativas.
diferencias en los cordones eutócicos o
Discusión: preeclámpticos, además de que se realizo su
búsqueda en endotelio en cultivo, en los
Se han realizado estudios que han cuales se mantuvo la misma expresión que
evidenciado en la preeclampsia la en el cordón umbilical. Se ha propuesto que
implicación de los receptores de Ang II en el desarrollo de la hipertensión en la
tejido placentario, mostrando que el preeclampsia resulta del daño endotelial
receptor AT1 se encuentra disminuida su generalizado y/o falta de equilibrio en la

41
producción y/o acción de agentes Referencias Bibliograficas:
vasoactivos, dentro de estos agentes
determinantes se encuentra la Ang II que 1. Serrano, N. C. Diaz, L. A. Paez, M. C.
lleva a cabo su acción a través de sus Mesa, C. M. Cifuentes, R.
receptores AT1 y AT2, de los cuales, el Monterrosa, A. Angiotensin-
receptor AT1 se ha descrito que participa en converting enzyme I/D
la vasoconstricción y que el receptor AT2 es polymorphism and preeclampsia
un antagonista del receptor AT1, el cual se risk: evidence of small-study bias.
une directamente formando un PLoS Med, 2006. 3(12): e520.
heterodímero que inhibe la función de
2. Duda, J. Preeclampsia. Still an
vasoconstricción de receptor AT112, en
enigma. West J Med 1996. 164(4):
nuestros resultados observamos que en el
315-20.
endotelio preeclámptico la expresión de
estos receptores se encuentra aumentada en 3. Duley, L., S. Meher, and E. Abalos,
comparación con el endotelio eutócico, Management of pre-eclampsia. Bmj,
evidenciando la disfunción endotelial en el 2006. 25;332(7539): 463-8.
endotelio preeclámptico. Por otra parte, se
ha descrito que el CSP-1 es un inhibidor 4. Walsh, S.W., What causes
inespecífico de tirosinas cinasas13, al realizar endothelial cell activation in
los ensayos para detectar la presencia de la preeclamptic women? Am J Pathol,
Cav-1 encontramos que no hay cambios en la 2006. 169(4): 1104-6.
expresión de esta proteína tanto en el
5. Touyz, R.M. Recent advances in
endotelio eutócico como preeclámptico, por
intracellular signalling in
lo cual al aumentar “in vitro” el CSP-1 nos
hypertension. Curr Opin Nephrol
permitirá en un futuro próximo evaluar su
Hypertens, 2003. 12(2): 165-74.
desempeño en un endotelio eutócico y
preeclámptico 6. Palade G. Fine structure of blood
capillaries. J. Appl. Phys1953.
Conclusión: 24:1424-36.
De acuerdo a nuestro objetivo general que 7. Yamada E. The fine structure of the
fue determinar la expresión de las proteínas gall bladder epithelium of the
AT1, AT2 y Cav-1 en la preeclampsia mouse. J. Biophys. Biochem. Cytol.
encontramos un aumento en la expresión de 1955.1:445–58.
las proteínas AT1 y AT2 tanto en el cordón
umbilical completo como en las HUVECs. Por 8. Sato, Y., I. Sagami, and T. Shimizu,
otra parte la expresión de Cav-1 no mostró Identification of caveolin-1-
diferencias en su expresión en el cordón interacting sites in neuronal nitric-
umbilical completo ni en las HUVECs de oxide synthase. Molecular
pacientes con embarazos eutócicos y mechanism for inhibition of NO
preeclámpticos. formation. J Biol Chem, 2004.
279(10): 8827-36.

42
9. Li X, Shams M, Zhu J, Khalig A, Wilkes attachment of caveolin-1. The
M, Whittle M, Barnes N, Ahmed caveolin scaffolding domain is both
A.1998.Cellular localization of AT1 necessary and sufficient for
receptor mRNA and protein in membrane binding in vitro. J Biol
normal placenta and its reduced Chem, 1999. 274(32):22660-7.
expression in intrauterine growth
12. AbdAlla, S. Lother, H. Abdel-tawab,
restriction. Angiotensin II stimulates
the release of vasorelaxants. J Clin A. M. Quitterer, U. The Angiotensin II
Invest. 1998 Jan 15;101(2):442-54. AT2 Receptor is an AT1 Receptor
Antagonist. J Biol Chem. 2001. 276
10. Inagami, T., and Y. Kitami. 1994. (43): 39721- 39726.
Angiotensin II receptor: molecular
13. Couet, J., M. Sargiacomo, and M. P.
cloning, functions regulation.
Lisanti, Interaction of a receptor
Hypertens. Res. 17:87–97.
tyrosine kinase, EGF-R, with
11. Schlegel, A. Schwab, R. B. Scherer, P. caveolins. Caveolin binding
E. Lisanti, M. P. A role for the negatively regulates tyrosine and
caveolin scaffolding domain in serine/threonine kinase activities. J
mediating the membrane Biol Chem, 1997. 272(48): 30429-38.

43
EVALUACIÓN DEL EFECTO DE CATEQUINA Y
EPICATEQUINA DE THEOBROMA CACAO SOBRE LAS
LÍNEAS MDA-MB 231 Y BT-474 DE CÁNCER DE
MAMA
Melissa Hernández Martínez
. Ivonne María Olivares Corichi
Guillermo Manuel Ceballos Reyes
José Rubén García Sánchez
José Arnold Gonzalez Garrido

Marco teórico: genéticos, las modificaciones epigenéticas


están emergiendo rápidamente como
A nivel mundial, el cáncer de mama es la alteraciones que ocurren en las primeras
neoplasia más común entre las mujeres, fases de la tumorogenesis y que juegan un
reportándose 411,000 muertes al año a papel importante en el desarrollo y la
causa de esta enfermedad y progresión del tumor [3].
correspondiendo al 10.5% de todos los
nuevos casos de cánceres registrados [1].El Actualmente existe un gran número de
cáncer de mama se define como una evidencias que señalan a la dieta como un
proliferación acelerada, desordenada y no elemento clave en la prevención del cáncer
controlada de las células que forman la de mama [4]; de hecho, efectos quimio
glándula mamaria. En México, se estima que preventivos de los componentes
doce mujeres mueren diariamente a causa fitoquímicos de frutas y hortalizas han sido
de esta neoplasia [2].Hoy en día se sabe que detectados, así como su capacidad de activar
el cáncer de mama es una enfermedad genes silenciados por alteraciones
multifactorial donde genes encargados de la epigenéticas [5] y su posible capacidad de
regulación del ciclo celular, genes supresores modular eventos celulares como son la
de tumor y genes involucrados en el apoptosis, la diferenciación y el ciclo celular
crecimiento y diferenciación celular [6].Uno de los fitoquímicos más
muestran alteraciones. Si bien, es indudable representativos e intrigantes son los
la participación de los mecanismos polifenoles; una familia de compuestos que


Estudiante de Maestría E.S.M. SECCION DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIÓN INSTITUTO
POLITÉCNICO NACIONAL meily_zza@hotmail.com

44
se han propuesto como una posible (FBS) y la línea MDA MB-231(lobulillar)
terapéutica contra el cáncer [7]. Entre estos crecida en DMEN Alto en glucosa y
polifenoles tenemos a los flavonoides, que suplementado con 7.5% de FBS. Ambas
incluyen los monómeros de Catequina y líneas se mantuvieron a 37oC, 5% de CO2 y
Epicatequina, los cuales se les relaciona con 95% de humedad. Ensayos de viabilidad
las propiedades antineoplásicas, sin embargo celular. Las líneas celulares MDA MB-231 y
los mecanismos moleculares involucrados BT-474 (1X103, 5X103 y 1X104) fueron
con estos efectos son poco entendidos. sembradas en cajas de 96 pozos y se
mantuvieron por 24 hrs en condiciones de
Planteamiento del problema: cultivo. Posteriormente las células fueron
incubadas con epicatequina y catequina
Debido a que los flavonoides han sido
(100, 150, 200, 250, 300, 350, 400 y 450 µM)
propuestos como una posible terapia en la
por 72 hrs. La viabilidad celular fue
carcinogénesis, la pregunta a resolver está
determinada empleando el reactivo de MTT
enfocada en determinar si los flavonoides
y de acuerdo al protocolo estándar. Curvas
Catequina y Epicatequina en su forma
dosis respuesta fueron construidas con los
monomérica presentan efectos anti-
resultados obtenidos y la concentración
proliferativos en las líneas celulares MDA
inhibitoria 50 (CI50) fue determinada.Efecto
MB-231 y BT-474 provenientes de cáncer de
de la mezcla Epicatequina-Catequina sobre la
mama.
viabilidad celular. Las líneas celulares MDA
Objetivo General: MB-231 (1x104 células) fueron sembradas en
caja de 96 pozos y se dejaron reposar 24 hrs.
Evaluar el efecto de Catequina y Las células fueron incubadas con la mezcla
Epicatequina sobre la proliferación celular y Epicatequina-Catequina [350 µM de cada
la inducción de apoptosis en las líneas MDA flavonoide] por un periodo de 72 hrs. La
MB-231 y BT-474 provenientes de cáncer de viabilidad celular fue determinada cada 24
mama. hrs empleando el reactivo de MTT y de
acuerdo al protocolo estándar. Como un
Metodologia: control del efecto de cada flavonoide;
Tipo de estudio: Investigación básica. Epicatequina y Catequina fueron empleados
Reactivos: Catequina y Epicatequina se individualmente y sus efectos sobre la
obtuvieron de SIGMA Aldrich. Fueron viabilidad fueron determinados como se
disueltos en metanol a una concentración de menciono anteriormente. Determinación de
10 mM y almacenados a -20oC. MTT (3-[4,5- apoptosis por fragmentación de ADN. Las
Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl- células MDA MB-231 y BT-474 (1x106)
tetrazolium bromide) se disolvió en DMEN fueron sembradas y se mantuvieron por 24
sin rojo de fenol y se almaceno a 4oC. Líneas hrs en condiciones de crecimiento.
celulares: Se emplearon las líneas celulares Posteriormente, se cambio el medio por
provenientes de carcinoma de mama; BT-474 DMEN claro en la presencia de los
(ductal) crecida en DMEN AVANZADO, compuestos fenólicos (350 µM). Cada 24 hrs
suplementado con 10% de suero fetal bovino las células fueron recolectadas y el ADN fue

45
obtenido. Las células fueron lizadas, el DNA sugiere la existencia de diferentes
fue obtenido por precipitación y su análisis mecanismos de acción de estos flavonoides.
se realizó a través de electroforesis en geles Este resultado abrió la posibilidad de
de agarosa al 2%.Análisis estadístico. Los estudiar un posible efecto de esta mezcla en
ensayos de proliferación celular fueron la línea celular BT-474, los ensayos de
realizados por cuadruplicado, se realizaron proliferación celular en la línea BT-474 y la
dos veces y se analizaron con el programa mezcla de flavonoides mostraron un efecto
estadístico GraphPad Prism versión 5. inhibitorio. Para evaluar el posible
mecanismo de acción de estos flavonoides,
Resultados: la línea celular MDA MB-231 se creció en
presencia de epicatequina, catequina y la
Con el objetivo de evaluar el efecto
mezcla (ver material y métodos). El ADN fue
antineoplásico de Catequina y Epicatequina
obtenido y analizado electroforéticamente
sobre las líneas MDA MB-231 y BT-474 se
en geles de agarosa al 2 %. Los resultados
realizaron ensayos de proliferación celular,
obtenidos mostraron que Catequina,
para lo cual, se sembraron diferente número
Epicatequina y la mezcla inducen una
de células de ambas líneas celulares en
fragmentación del ADN indicativa de
presencia de los compuestos fenólicos a
apoptosis. Similares resultados fueron
diferentes concentraciones (ver material y
obtenidos en la línea BT-474 cuando la
métodos).Los ensayos de proliferación
mezcla de flavonoides fue empleada.
celular mostraron que la línea MDA MB-231
presentó un efecto inhibitorio en su Discusión:
proliferación celular con ambos flavonoides,
dicho efecto fue dependiente de la En el presente estudio se demostró la acción
concentración e independiente del número antiproliferativa de los monómeros de
de células. Al evaluar la proliferación de la Catequina y Epicatequina en las líneas
línea celular BT-474 bajo estas condiciones celulares MDA MB-231 y BT-474
no se observó efecto alguno. Con los datos provenientes de cáncer de mama. Si bien, un
obtenidos con Catequina y Epicatequina efecto inhibitorio sobre la proliferación
sobre la proliferación celular en la línea MDA celular de MDA MB-231 fue observado con
MB-231 se calculó la Concentración ambos flavonoides, un mayor efecto fue
Inhibitoria 50 (CI50) obteniendo un valor de: detectado cuando una mezcla de ambos
350 µM para ambos compuestos. Con el flavonoides fue utilizada. Interesantemente,
objetivo de observar si Catequina y el efecto inhibitorio en la línea celular BT-474
Epicatequina administrados en combinación solo fue observado cuando la mezcla de
producían un mayor efecto, se realizaron ambos flavonoides fue empleada. Es
ensayos de proliferación celular con la línea importante señalar, que si bien, hoy en día la
MDA MB-231 (ver material y métodos). Los gran mayoría de los estudios son orientados
resultados obtenidos mostraron un mayor a los polímeros de estos compuestos [8], en
efecto inhibitorio en la presencia de esta este trabajo presentamos las propiedades
mezcla de flavonoides, este resultado antineoplásicas de estos monómeros. Por

46
otro lado, los resultados obtenidos en el México; Vol. 51 supl. 2. 2009. S335-S349.
análisis del ADN bajo estas condiciones,
mostraron una fragmentación característica [3] Sigalotti L, Fratta E, Coral S, Cortini E,
indicadora de la presencia de apoptosis, Covre A, Nicolay HJ, Anzalone L, Pezzani L, Di
sugiriendo como un posible mecanismo de Giacomo AM, Fonsatti E, Colizzi F, Altomonte
acción la inducción de muerte celular M, Calabrò L, Maio M. “Epigenetic drugs as
programada en la célula tumoral por parte pleiotropic agents in cancer treatment:
de estos monómeros. biomolecular aspects and clinical
applications”. Italy. J Cell Physiol. 2007,
Conclusión: 212(2):330-44.

Los ensayos de proliferación celular *4+ Romieu I, Lajous M. “El papel de la


muestran que los monómeros Catequina y obesidad, la actividad física y los factores
Epicatequina tienen un efecto inhibitorio dietéticos en el riesgo de cáncer de mama: la
sobre la proliferación celular independiente experiencia mexicana”, Salud Pública de
del número de células en la línea MDA MB- México; Vol. 51 supl. 2. 2009. S172-S180.
231.La combinación de los compuestos
*5+ Jaroslaw P, Violetta K, Wanda B. “The
fenólicos produjo un mayor efecto en la
effect of dietary polyphenols on the
inhibición del crecimiento de la línea celular
epigenetic regulation of gene expresion in
MDA MB-231.El efecto antineoplásico de
MCF-7 breast cancer cells”. Poland. Ś ;wi ę
Catequina y Epicatequina en la línea celular
;cickiego 4, 2009. 192 (2):119-125.
BT-474 solo fue observado cuando una
mezcla de estos flavonoides fue utilizada.El [6] Hadi S, Asad S, Singh S, Ahmad A.
análisis electroforético del ADN de células “Putative mechanism for anticancer and
MDA MB-231 y BT-474 tratadas con apoptosis-inducing properties of plant-
catequina y epicatequina sugiere a la derived polyphenolic compounds”. India.
apoptosis como un posible mecanismo de IUBMB Life.2000. 50:167–171.
acción de estos flavonoides.
[7] Chen D, Milacic V, Chen MS, Wan SB,
Referencias Bibliográficas: Lam WH, Huo C, Landis-Piwowar KR, Cui QC,
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gallate dose-dependently induces apoptosis
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or necrosis in human MCF-7 cells”. Taiwan.
los resultados de la Encuesta Nacional de
Ann N Y Acad Sci. 2007 .1095:428-40.
Salud Reproductiva”, Salud Pública de

47
DETECCIÓN DE CHLAMYDIA TRACHOMATIS Y NEISSERIA
GONORRHOEAE EN ESPECÍMENES GENITOURINARIOS
MEDIANTE PCR MÚLTIPLE.
Salvador Contreras Huerta
Armando Mendez Perez
Yuritzi Alejandra Sandoval Hernandez
Martha Lucero Mirafuentes Merino
Julio Cesar Baizabal Rebolledo

Marco teórico: agente de mayor importancia es Chlamydia


trachomatis (CT). Este agente infeccioso
Las infecciones de transmisión sexual (ITS) causa cerca de 90 millones de nuevos casos
figuran entre las principales causas de de infección genital por año, seguido de
enfermedad en el mundo. Durante los gonorrea que ocasiona 60 millones de
últimos 20 años su importancia se ha nuevos casos por año. En la mayoría de los
acrecentado debido a su relación con graves individuos de uno u otro sexo la infección
problemas del aparato reproductor. Aunque genital por CT suele ser asintomática. Sin
la magnitud exacta del problema no es bien embargo, en 30% de mujeres que presentan
conocida, en los países industrializados al cervicitis se ha observado desarrollo de
menos 1 de cada 100 personas consulta por salpingitis. Asimismo, se puede aislar CT
una ITS, anualmente. En los países en hasta en 50% de las mujeres con enfermedad
desarrollo las ITS figuran entre los cinco pélvica inflamatoria.6 Esta situación es
motivos más frecuentes de consulta en los preocupante porque la infección tubaria
servicios de salud y cada año más de 333 puede degenerar en obstrucción
millones de personas en el mundo adquieren permanente y a consecuencia de ello
una ITS, la mayoría de las cuales son producir infertilidad, o cuando se ocasiona
previsibles y curables. En muchos casos, obstrucción parcial puede presentarse
estas infecciones permanecen asintomáticas embarazo ectópico.7 La infección por
y sin tratamiento, con riesgo de contagio a Neisseria gonorrhoeae (NG) es también
otros individuos y con la posibilidad de causa de salpingitis e infertilidad. Por otra
ocasionar serios problemas de salud, parte, las úlceras genitales ocasionadas por
incluyendo la infertilidad. Previamente, las infecciones bacterianas constituyen
ITS de mayor relevancia eran sífilis y condiciones de riesgo para la transmisión del
gonorrea, sin embargo en la actualidad el


Docente y Profesional de la salud DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA EXPERIMENTAL FACULTAD DE
MEDICINA. UV XALAPA. qcpatoex@hotmail.com

48
virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y pacientes con edades variables (18-50 años)
del virus del papiloma humano (VPH), y por y de ambos sexos (28 femeninos y 12
lo tanto para el SIDA y el cáncer cérvico- masculinos) con diagnostico presuntivo de
uterino. ITS por clamidia y gonococo. Cada uno de los
pacientes incluidos en este estudio otorgo su
En hombres la uretritis gonocóccica o consentimiento y proporciono información
clamidiásica puede ser asintomática hasta en personal así como de inicio de vida sexual y
30% de los casos. Se ha observado que la numero de parejas. Se incluyeron también
infección subclínica crónica puede degenerar 20 individuos considerados sanos que
en prostatitis, epididimitis, estenosis de sirvieron como grupo control para realizar la
uretra y de los conductos deferentes, con el validación del estudio.
riesgo de esterilidad por azoospermia.En
vista de la importancia que las ITS tienen VARIABLES: Chlamydia trachomatis: medida
para la salud pública y personal es necesario en escala nominal considerando presencia o
conocer su frecuencia y características de ausenciaNeisseria gonorrhoeae: medida en
presentación. En México se ha documentado escala nominal considerando presencia o
que la prevalencia de infección por CT en el ausencia.
tracto genital inferior varía entre 3.3 y
28.4%, y la de gonorrea entre 2.8 y 11.6%, PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION: La
dependiendo de la población muestreada y recolección del material biológico se efectuó
de la metodología utilizada para el de varias formas, en mujeres se obtuvo
diagnóstico. muestras de orina y de secreción vaginal, en
varones fue raspado uretral, secreción
Planteamiento del problema: purulenta y de orina según las condiciones
de cada paciente. Concluida la recolección
No se dispone de información exacta sobre las muestras fueron rotuladas y procesadas
la prevalencia de Chlamydia trachomatis y de inmediato. Para la obtención de ADN se
Neisseria gonorrhoeae identificada por PCR realizaron lavados de las secreciones y
Múltiple en especímenes genitourinarios. centrifugados de las orinas, se obtuvo en
todos los casos un botón celular el cual fue
Objetivo General:
sometido a lisis nuclear, una vez liberado el
Detectar y determinar la prevalencia de ADN se purifico con lavados de etanol
Chlamydia trachomatis y Neisseria absoluto, 96% , 70% y se solubilizo con NaOH
gonorrhoeae mediante PCR Múltiple en 0.8mM.El ADN de cada una de las muestras
especímenes genitourinarios. fue amplificado por PCR Múltiple mediante
el uso de dos pares de iniciadores KL1/KL2 y
Metodología: HO1/HO3 específicos para clamidia y
gonococo respectivamente. Concluida la
DISEÑO Prospectivo, Transversal, amplificación se efectuó electroforesis en
Comparativo y Observacional. geles de agarosa al 1.5% en buffer de TBE 1X
UNIVERSO DE ESTUDIO: Se muestrearon 40 para la identificación de productos.

49
ANALISIS DE LA INFORMACION: Las variables pueden ser comparables con las descritas en
estudiadas fueron Chlamydia trachomatis y la literatura al demostrarse que el grupo
Neisseria gonorrhoeae, en primera instancia femenino es el más comprometido y por
se realizo un análisis estadístico univariado consiguiente el mas afectado.En nuestro
aplicando tablas de frecuencias, gráficas estudio la mayor prevalencia de infección es
circular, de barras, así como diagramas de la descrita para C trachomatis y con un
cajas y alambres. Posteriormente se efectuó porcentaje menor la combinación de ambas
un análisis divariado que consistió en hallar entidades patológicas.
las posibles correlaciones del padecimiento.
Respecto a los varones los resultados indican
Resultados: una menor prevalencia tanto de gonorrea
como de clamidiasis. Como se mencionó en
En la Amplificación por PCR Múltiple con los México no existen datos que revelen la
iniciadores KL1/KL2 y HO1/HO3, se observo estadística de casos diagnosticados por PCR
que de los 40 casos sospechosos para ITS 24 Multiple para C.trachomatis y para N.
(60%) fueron positivos para Chlamydia gonorrhoeae ya que la mayoría de los
trachomatis, 8 (20%) para Neisseria estudios han utilizado como marcador de
gonorrhoeae, 4(10%) para ambas entidades infección la presencia de las bacterias en
y 4(10%) resultaron negativas. Para el grupo secreciones genitales, identificadas a través
control no hubo amplificación tal y como se de diversas técnicas con diferente
esperaba.En la distribución por sexo se sensibilidad y especificidad. Considerando
identifico que el grupo femenino tuvo que esta investigación constituye una de las
amplificación para Chlamydia trachomatis en primeras que se realizan con iniciadores
15 casos (37.5%), 5 casos (12.5%) para específicos para ambas entidades utilizando
Neisseria gonorrhoeae y 4 casos (10%) para como indicador de infección la presencia de
ambas entidades; por su parte el grupo ADN de las mismas.
masculino presento 9 casos (22.5%) para
Chlamydia trachomatis y 3 casos (7.5%) para Conclusión:
Neisseria gonorrhoeae. Por su parte el grupo
de edades con mayor numero de casos para Con lo expuesto anteriormente queda de
ambas patologías fue el de 27 a 36 años con manifiesto que el uso de pruebas especificas
un 45% y de estos el 22% cuenta con mas de y de alta sensibilidad como el PCR Múltiple
una pareja sexual y el 13% no cuenta con una permiten identificar de manera rápida y
efectiva a N gonorrhoeae y C trachomatis,
pareja estable.
generando un diagnostico oportuno que
Discusión: permite prevenir fundamentalmente las
secuelas en el aparato reproductor causando
Los resultados de este estudio demuestran infertilidad en ambos sexos y disminuir la
que la tasa de individuos con riesgo de gravedad de las infecciones. A su vez este
contraer o que cursan cualquiera de estas procedimiento es relevante con fines
dos patologías infecciosas es muy alto. Las diagnósticos, con el propósito de definir la
cifras encontradas en mujeres y hombres epidemiología de las infecciones de

50
transmisión sexual y para determinar la Landis, W. Seidelman, L. Grant, C.
susceptibilidad antimicrobiana. Devlin, and J. Mahony. 1990.
Detectionof Chlamydia trachomatis
Referencias Bibliográficas: antigens in urine as an alternative to
swabs Chlamydia trachomatis DNA
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chain reaction for the detection of 7. Hay, P. E., B. J. Thomas, C. Gilchrist,
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of urine sampling from men with
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nongonococcalurethritis for the
Loeffelholz, S. A. Herman, and W.
detection of Chlamydia trachomatis.
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Genitourin.Med. 67:124–128.
Chlamydia trachomatis urethritis in
men by polymerasechain reaction 8. Ho, B. S. W., W. G. Feng, B. K. C.
assay of first-catch urine. J. Clin. Wong, and S. I. Egglestone.
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the detection of Neisseria
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Clin. Pathol. 45:439–442.
theligase chain reaction for specific
detection of Neisseria gonorrhoeae. 9. Holmes, K. K., P. Mardh, P. F. Sparling,
J. Clin.Microbiol. 30:3089–3094. P. J. Wiesner, W. Cates, S. M.Lemon,
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reaction/enzyme immunoassay. J.Linder. 1994. Evaluation of a
Lancet 338:847–850. nucleic acid based test for
simultaneouslydetecting Chlamydia
5. Cano, R. J., J. C. Palomares, M. J.
trachomatis and Neisseria
Torres, and R. E. Klem. 1992.
gonorrhoeae in
Evaluationof a fluorescent DNA
endocervicalspecimens, abstr. C-
hybridization assay for the detection
517. In Abstracts of the 94th
of N. gonorrhoeae.Eur. J. Clin.
General Meeting of theAmerican
Microbiol. Infect. Dis. 11:602–609
Society for Microbiology 1994.
6. Chernesky, M. A., S. Castriciano, J. American Society for
Sellors, I. Stewart, I. Cunningham,S. Microbiology,Washington, D.C.

51
11. Jaschek, G., C. A. Gaydos, L. E. Welsh, trachomatisin endocervical
and T. C. Quinn. 1993. specimens by polymerase chain
Directdetection of Chlamydia reaction. J. Clin. Microbiol.30:2847–
trachomatis in urine specimens from 2851.
symptomaticand asymptomatic men
by using a rapid polymerase chain 14. Mahony, J. B., K. E. Luinstra, D. Jang, J.
reaction assay. J.Clin. Microbiol. Sellors, and M. A. Chernesky.1992.
31:1209–1212. Chlamydia trachomatis confirmatory
testing of PCR-positive
12. Korch, C., P. Hagblom, H. Oehman, M. genitourinaryspecimens using a
Goeransson, and S. Normark. second set of plasmid primers. Mol.
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gonorrhoeae: complete nucleotide
sequence andgenetic organization. J. 15. Mahony, J. B., K. E. Luinstra, J. W.
Sellors, and M. A. Chernesky.
Bacteriol. 163:430–438.
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13. Loeffelholz, M. J., C. A. Lewinski, S. R. chromosome-based polymerase
Silver, A. P. Purohit, S. A. Herman,D. chain reactionassays for detecting
A. Buonagurio, and E. A. Dragon. Chlamydia trachomatis nucleic acids.
1992. Detection of Chlamydia J. Clin. Microbiol.31:1753–1758

52
CLONACIÓN DE UN FRAGMENTO DEL GENE QUE
CODIFICA PARA LA PROTEÍNA NS3 DE LOS 4 SEROTIPOS
DEL VIRUS DENGUE
Laura Mónica Álvarez Rodríguez
Méndez-Bolaina Enrique
Ramos-Ligonio Angel
Aracely López-Monteon

Marco teórico: El tratamiento para la infección del dengue


solo se basa en aliviar síntomas relacionados
El dengue es un padecimiento infeccioso con la enfermedad, ya que no existen
viral de tipo agudo y de distribución mundial agentes terapéuticos específicos para
causado por cualquiera de los cuatro eliminar al virus (4). Por este motivo, el
serotipos del virus del dengue (DEN1, DEN2, desarrollo de vacunas contra el dengue se ha
DEN3 y DEN4), el cual es transmitido al convertido en una prioridad a nivel mundial,
humano por la picadura de la hembra para prevenir epidemias tanto en países
hematófaga del mosquito del género Aedes endémicos como no endémicos. La
(1). La infección por cualquiera de los 4 Organización Mundial de la Salud (OMS)
serotipos del virus puede provocar cuadros menciona que una vacuna contra el dengue
clínico variados que van desde una forma debe brindar protección de larga duración
asintomática hasta ciertas manifestaciones frente a la infección por cualquiera de los 4
clínicas, y aún causar la muerte. serotipos del dengue (5). Las técnicas de
Básicamente, se reconocen tres cuadros biología molecular han permitido la
clínicos: la fiebre del dengue o dengue clonación de genes que codifican para
clásico (FD), la fiebre hemorrágica por proteínas del virus, esto nos proporciona la
dengue o dengue hemorrágico (FHD) y el oportunidad de evaluar posibles
síndrome de choque por dengue (SCD) (2). inmunógenos que podrian ser buenos
Este virus posee un RNA el cual codifica para candidatos a vacunas. En el ser humano, la
una poliproteína que es procesada por respuesta inmune contra el virus del dengue
proteasas tanto de origen viral como celular ha sido muy variada y está dirigida frente a
dando origen a 10 proteínas, 3 estructurales diversos epitopos de las proteínas víricas.
(C, prM, E) y 7 no estructurales (NS1, NS2A, Estos epitopos, específicos para cada
NS2B, NS3, NS4A, NS4B, y NS5 (3). serotipo, pueden utilizarse para el diseño y


Estudiante de Doctorado Universidad Veracruzana Centro de Investigaciones Biomédicas
laalvarez@uv.mx

53
creación de vacunas tretavalentes que virus dengue (VD) y que posee en su mayoría
protejan hacia los 4 serotipos. Las proteínas epitopes para células T, en el presenta
no estructurales, como NS1 y NS3, se han trabajo se propuso la construcción de una
reportado como buenos inmunógenos, por proteína recombinante de cada serotipo con
lo que las hace buenos candidatos en el la finalidad de utilizarlos como candidatos a
desarrollo de vacunas contra el dengue (6). vacunas.

Planteamiento del problema: Objetivo General:

A pesar de la gran incidencia del dengue en Clonar un fragmento del gene que codifica
el mundo y de su grave situación, no se para la proteína NS3 de los 4 serotipos del
dispone de vacunas preventivas ni fármacos virus dengue.
antivirales específicos para el tratamiento
del dengue. En la actualidad, existen Metodologia:
proyectos en desarrollo que intentan
Es un estudio experimental. Se utilizó la línea
construir vacunas recombinantes que
celular C6/36 de Aedes albopictus infectada
expresen las proteínas externas de todos los
con los cuatro serotipo del virus dengue para
serotipos. La mayoría de las vacunas se han
aislar el RNA viral mediante el método de
preparado utilizando partículas virales
TRizol (7). El RNA fue inmediantamente
inactivas o modificadas. Las vacunas
retrotranscrito a cDNA. El cDNA se empleo
producidas exclusivamente a partir de las
como molde para amplificar un fragmento
proteínas virales externas sintetizadas en
del gen de la proteína NS3 del virus dengue
bacterias son más seguras dado que, sin el
mediante PCR utilizando oligonucleótidos
ácido nucleico viral, no puede ocurrir
serotipo-específicos (8). Los productos de
contaminación de la vacuna por partículas
PCR de cada serotipo se ligaron de manera
infectivas. Sin embargo, las dificultades en
independiente en el vector de clonación pCR
desarrollar una vacuna efectiva se centran en
2.1 TOPO. Con el DNA plasmídico de cada
el requisito indispensable de una vacuna
una de las clonas de cada serotipo se
tetravalente protectora contra los cuatro
realizaron reacciones de restricción con la
serotipos. Se sabe que anticuerpos presentes
enzima Eco RI para identificar la liberación de
en un individuo que ha sufrido FD
los fragmentos de NS3. Con la finalidad de
representan un factor de riesgo para FHD,
expresar los fragmentos de NS3 de cada
facilitando la entrada a la célula del serotipo
serotipo, éstos, se subclonaron en el vector
reinfectante. Por lo tanto, una inmunización
de expresión pGEX-5X-1 el cual fue
parcial con una vacuna monovalente
linearizado con la enzima Eco RI. Las clonas
implicaría un riesgo aumentado en el
obtenidas se crecieron para la extracción del
individuo vacunado de sufrir una forma más
DNA plasmídico por lisis alcalina,
severa de enfermedad ante una infección
posteriormente fueron sometidas a
con alguno de los otros tres serotipos.
reacciones de restricción y los fragmentos
Tomando en cuenta todo lo anterior, y a que
fueron analizados en geles de agarosa al 1%
la proteína NS3 es el principal antígeno del
teñidos con bromuro de etidio. Para

54
identificar la expresión del gen de la proteína expresaron una proteína de 49 kDa (22 kDa
NS3 se utilizaron las clonas positivas al correspondiente al fragmento NS3 y 27 kDa
fragmento de cada serotipo. Brevemente, se correspondientes a la GST). Para comprobar
realizaron cultivos no inducidos e inducidos la expresión de la proteína recombinante se
con IPTG, se realizaron extractos celulares realizo un WB con un anticuerpo policlonal
los cuales se analizaron mediante geles de anti-GST observándose el reconocimiento de
poliacrilamida al 10% y teñidos con azul de la proteína recombinante del peso esperado.
coomassie. Finalmente se comprobó la
expresión del fragmento del gen de la Discusión:
proteína NS3 de los cuatro serotipo
Debido al impacto actual del dengue en todo
mediante Western Blot (WB) utilizando un
el mundo y su diseminación, ha aumentado
Ab policlonal dirigido contra GST.
el interés en el desarrollo de una vacuna
Resultados: contra el dengue que sea segura, eficaz y que
induzca protección de por vida hacia los
De las reacciones de ligación de cada uno de cuatro serotipos. Los avances en las técnicas
los fragmentos de NS3 de cada serotipo del de biología molecular han facilitado el
VD en el vector pCR 2.1 TOPO, se selecciono desarrollo de vacunas recombinantes contra
una clona que mostro la liberación de un diferentes virus, lo que ha permitido la
fragmento de 597, 596, 590 y 598 pb para el producción de proteínas a gran escala. La
serotipo DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4 mayoría de los esfuerzos se han enfocado a
respectivamente. Los fragmentos de cada producir vacunas utilizando la proteína E,
una de estas clonas se subclonaron en el sitio mientras que también se han utilizado las
Eco RI del plásmido pGEX-5X-1 para obtener proteínas no estructurales del virus (NS) (9).
la proteína recombinante. Este plásmido La proteína NS3 se puede considerar como
tiene la característica de que la proteína sale una posible candidato para el diseño de una
fusionada a la GST, lo que facilita su vacuna debido a que constituye la fuente
purificación por afinidad. Se obtuvieron principal de epitopes de células CD4 + y CD8+
varias clonas positivas para cada serotipo, (10, 11). En principio, es factible realizar una
seleccionadas a través de la liberación del vacuna contra el VD ya solo causa infección
fragmento correspondiente, sin embargo, aguda y la replicación del virus es
simultáneamente se realizaron ensayos de efectivamente controlada después de 3 a 7
expresión piloto con IPTG debido a que la días de viremia. Sin embargo los individuos
ligación se realizo con una sola enzima de que se han recuperado de una infección por
restricción se corría el riesgo de que los VD, son inmunes al reto con el mismo
fragmentos estuvieran en orientación serotipo pero no a otros serotipos del VD
contraria y esto diera lugar a la pérdida del (12). Los problemas en el desarrollo de una
marco de lectura abierto. De las clonas vacuna contra el VD son que no se
analizadas, se obtuvó una clona positiva para comprende aun la patogénesis del FHD, así
el serotipo DEN1, DEN2, DEN3 y tres clonas como la ausencia de un modelo animal para
positivas para el serotipo DEN4, todas ellas la enfermedad. Se sabe que los anticuerpos

55
pre-existentes contra el VD son un factor de Figueroa R, Méndez A, Ramos C.
riesgo para desarrollar FHD, por lo tanto, una (2005). Induction of protective
vacuna efectiva deberá ser tetravalente y antibodies against dengue virus by
necesita prevenir la infección provocada por tetravalent DNA immunization of
los cuatro serotipos el VD (13). mice with domain III of the envelope
protein. Vaccine. 23:3469-76.
Conclusión:
6. López Antuñano FJ, Mota J. (2000).
Los resultados nos permiten concluir que Desarrollo de agentes inmunizantes
tenemos las proteínas recombinantes contra el dengue. Rev Panam Salud
correspondientes a la proteína NS3 del VD de Pública. 7(5): 285-292
cada serotipo, lo cual nos permitirá utilizarla
como antígeno tetravalente en el modelo de 7. Houts GE, Miyagi M, Ellis C, Beard A,
ratón, la efectividad del candidato a vacuna and Beard JW. (1979). Reverse
se realizará comparando la respuesta transcriptase from avian
inmune inducida por la vacuna con el perfil myeloblastosis virus. J. Virol. 29(2):
de inmunidad protectora desarrollada en 517–522.
una infección natural.
8. Li J, Lim SP, Beer D, Patel V, Wen D,
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Thongcharoen P, editor. Monograph

57
VARIACIÓN DE LA RESPUESTA A UN ESTIMULO
DOLOROSO EN RATAS WISTAR CON ANSIEDAD
INDUCIDA BAJO UN ESTIMULO EXTERNO.
Victor Manuel Duran Sainz
Rosa María Torres Hernández
Rosa María Alvarez Santaman
Pedro Gutierrez Aguilar
Marco teórico: sensoriales y emociones desagradables y que
frecuentemente está descrito en función de
La ansiedad se define como un estado de la magnitud del daño con el que se asocia. El
malestar caracterizado por intranquilidad, término que involucra al conjunto de
expectación aprehensiva y aumento de la mecanismos por los cuales el estímulo
vigilancia en ausencia de un estimulo nocivo periférico es transmitido al sistema
desencadenante; que se manifiesta también nervioso central (SNC) se denomina
reacciones autonómicas, como la nocicepción.3
sudoración, taquicardia, alteraciones
gastrointestinales, tensión muscular e Cuando un animal se enfrenta a un
insomnio, entre otras. Cuando un individuo depredador, con frecuencia se puede
se enfrenta a una situación de peligro se observar que su primera reacción es escapar
puede observar un conjunto de cambios para evitar que lo captures. Si no puede
conductuales y vegetativos orientado a escapar, entonces la respuesta
contender de manera adecuada con dicha predominante es mantenerse inmóvil, esta
situación. Entonces, la ansiedad puede respuesta es directamente relacionada con la
definirse como uno de los procesos naturaleza del estímulo adverso; cuando
cerebrales directamente involucrados en la éstos se enfrentan a un estímulo
sobrevivencia de diferentes especies perturbador localizado, como un electrodo o
animales, especialmente de aquellas que por una fuente de luz, despliegan un patrón
su naturaleza son víctimas de los conductual especifico dirigido a ocultar este
depredadores. La definición más aceptada estímulo. Esta conducta se conoce como
de dolor la que indica que es una experiencia conducta defensiva de enterramiento, y
subjetiva acompañada de componentes depende de la disponibilidad de material


Estudiante de Licenciatura Facultad de Medicina Veracruz Universidad Veracruzana
manuel_duran10@hotmail.com

58
para enterrarse.4. El tipo de respuestas disminuye el umbral y la tolerancia al dolor;
observada en los animales de laboratorio se ambas se asocian con la magnificación de los
agrupan en tres categorías.A) Músculo- síntomas médicos; la depresión se acompaña
esqueléticas; B) Autonómicas y C) de pobre respuesta al tratamiento. Así
Conductuales (psíquicas) que incluyen: mismo, el malestar emocional se ha asociado
agresividad, vocalización, forcejeo y escape. con la manifestación de síntomas físicos a
Se considera que estas últimas son las más través de la activación autonómica del
útiles desde el punto de vista experimental y estado de alerta o la exacerbación de los
se estima que representan una integración síntomas existentes.7
central del estímulo original.5Teniendo en
cuenta la subjetividad del dolor y la similitud Planteamiento del problema:
de esta experiencia en la mayoría de los
¿ Cual es la respuesta al estimulo doloroso
seres dentro de la filogenia, los estudiosos
en la rata winstar en estado de ansiedad en
del dolor han tratado de determinar
comparación del estado normal?
parámetros comunes de evaluación, de ahí
que numerosas investigaciones se hayan Objetivo General:
enfocado en el examen de las conductas
asociadas al dolor, las que se catalogan como Determinar la respuesta al estimulo doloroso
una serie de comportamientos con los que el en la rata winstar en estado de ansiedad en
animal comunica a su ambiente que está comparación del estado normal
padeciendo una experiencia nociceptiva.En
consecuencia, dentro de los variados
Metodología:
modelos animales que existen para el Se realizó un estudio transversal,
estudio del dolor, existen los que se basan en comparativo, experimental y prospectivo.
la producción controlada de dolor por Con autorización del Comité de Ética e
medios químicos o mecánicos, precisando Investigación de la Facultad de Medicina.
determinadas características de la Criterios de inclusión ser ratas con peso
estimulación nociceptiva, como intensidad, entre 150 a 300 mg (cuadro 1), que no hayan
localización, frecuencia, duración y se recibido medicamentos en un lapso de una
evalúan las respuestas dadas a dicha semana mínimo. De los criterios de no
estimulación. Generalmente se analizan la inclusión abarcara a ratas que estén
latencia de respuesta del retiro o de la huida embarazadas, que no tengan algún miembro,
de la estimulación progresiva que inflinge el o que hayan recibido medicamentos en un
daño; dicha latencia tiene una relación lapso de una semana.Se eligieron al azar las
inversamente proporcional a la intensidad de ratas que formaron parte del grupo A (n =
la estimulación nociceptiva, también se 10) y el grupo B (n = 10). Habiendo elegido al
presentan conductas de huida, saltos o grupo A se inició colocándolas
ataque con el objetivo claro de disminuir las individualmente en un recipiente con agua
fuentes del dolor.6Existen diversas razones hasta una altura de 30 cm, a temperatura
por las que resulta importante identificar la ambiente, durante 10 minutos.
ansiedad y la depresión: la ansiedad Posteriormente se les colocó una pinza de

59
caimán adecuada para el estudio en la base estos a su vez descubrieron una relación
de la cola y se registró la vocalización, entre la ansiedad mesurada bajo el tiempo
forcejeo y si intentaron o no escapar en un que tarda el roedor con la “Conducta
estado basal, a los 10 y 20 minutos; se llevó a defensiva de enterramiento” y la percepción
cabo el procedimiento con la pinza de del dolor nociceptivo.Los datos recaudados
caimán en las ratas del grupo B. Análisis señalan que las ratas del grupo B poco a
estadísticos: La significancia estadística se poco fueron equiparando a las ratas del
determino mediante el análisis de las grupo A con respecto a la vocalización y al
variables ordinales con la prueba de χ2. forcejeo, esto podría darse a interpretar al
dolor como propio mecanismo ansiogénico.
Resultados:
Conclusión:
A la presencia de intento de escape de las
ratas del grupo A (100%) en comparación a Este estudio muestra que un aumento en la
las del grupo B (30%) (p<0.01), La ansiedad aumenta la percepción de la
vocalización en estado basal de las ratas del nocicepción inducida tras un estimulo
grupo A fue predominantemente Alta (70%) doloroso, mostrando una relación entre
mientras que en el grupo B fue de intensidad estos factores.
Media (70%)(NS). El forcejeo en el grupo A
tuvo un predomino de intensidad alta (70%) Referencias Bibliográficas:
y el grupo B (45%) (p<0.01).A los 10 minutos
1. Morales Tania, Alfaro-Ramírez del
después de repetir el estimulo la vocalización
Castillo Olga Isabel, Sánches-Román
de intensidad media en el grupo A el 70% el
Sofía, Guevara-López Uriah, Vázquez-
grupo B el 90%(p<0.01); el forcejeo se vio
Pineda Fernando. Ansiedad y
proporcionalmente equiparado con una
depresión por dolor crónico
intensidad predominantemente media en el
neuropático y nociceptivo. Revista
grupo A con el 90% y el grupo B con 80%. A
Médica del Instituto Mexicano del
los 20 minutos después del estimulo
Seguro Social 2008; Vol. 45: pp 479-
doloroso, la vocalización media del grupo A
484
(70%) mientras que el grupo B (50%),
(p<0.01); el forcejeo en el grupo A fue 2. De la Ossa Susana, Martinez Yuleima,
predominantemente de intensidad media Herazo Edwin, Campo Adalberlto.
(90%) y en el grupo B de (60%), (p<0.01) Estudio de la consistencia interna y
estructura factorial de tres versiones
Discusión: de la escala de Zung para ansiedad.
Los estudios de la Dra. Guadalupe Jiménez- Colombia médica. 2009; Vol. 40. Pp.
Velázquez y colaboradores5 donde su 71-77
población demostró tener un incremento de 3. Medina-López José Raúl, Domínguez-
la nocicepción mediante el registro por el Ramírez Adriana Miriam, López-
modelo PIFIR (del inglés “Pain-Induced Muñoz Francisco Javier, Utilidad de
Functional Impairment Model in the Rat”); las interacciones farmacocinéticas/

60
farmacodinámicas de analgésicos, nocicepción, Revista mexicana de
Revista mexicana de Anestesiología Anestesiología 2007; Vol. 30: pp 14-
2007; Vol. 30: pp 114-121. 19.

4. Banos, J. E. Y Ruiz-Barria, G.. La 6. Gómez Clauda, Saldívar-González J.


evaluación del dolor experimental en Alfredo, Rodríguez Rodolfo, Modelos
el laboratorio: los modelos de dolor animales para el estudio de la
neuropático en animales. Revista ansiedad: Una aproximación crítica,
Social Esp. Dolor. 2006; vol.13, pp. Salud Mental 2002; Vol. 25: 14- 24
542-552.
7. Santacruz María del Pilar, Oyuela
5. Jiménez-Velázquez Guadalupe, Raúl, Brinez José Arturo. Efectos
Fernández-Guasti Alonso, López- sobre la actividad nociceptiva de la
Muñoz Francisco Javier. Efectos de la rata de un péptido nootrópico
ansiedad (inducida sintético. Revista Latinoamericana de
farmacológicamente) sobre la Psicología, 2008; Vol.40, p.97-109.

61
MUTACIONES EN GENES ASOCIADOS A RESISTENCIA A
RIFAMPICINA Y ETAMBUTOL, EN CEPAS DE PACIENTES
CON TUBERCULOSIS DROGORRESISTENTE
Betzaida Cuevas Córdoba
Roberto Zenteno Cuevas
Aremy Cuellar Sánchez
Beatriz Buentello Volante

Marco teórico: resistencia a Rifampicina es de suma


importancia debido a su fuerte asociación
La tuberculosis (TB) es una enfermedad con la resistencia a Isoniacida, por lo cual se
remergente causada por bacterias del considera como marcador de TB-MDR3.
género Mycobacterium. De acuerdo a la
Organización Mundial de la Salud (OMS) en Por otro lado el Etambutol se recomienda
2007 se reportaron 9.27 millones de casos para tratar infecciones especialmente en
nuevos, 13.7 millones de casos prevalentes y personas con VIH, Diabetes Mellitus, o
1.78 millones de defunciones1. Uno de los antecedentes de abandono o recaída6,7; la
factores que han dificultado el manejo y probabilidad de resistencia a este fármaco es
control clínico de la TB a nivel mundial es la más baja que otras drogas, por lo cual se
drogorresistencia (TB-DR), la OMS estima incluye en el tratamiento primario de países
que el 20% de los casos de TB son resistentes con una tasa elevada de resistencia primaria
a un antibiótico y el 5.3% son resistentes a a otro fármaco de primera línea7. Es bien
isoniacida y rifampicina, es decir sabido que los bacilos de Mycobacterium son
multidrogorresistentes (TB-MDR)2. desarrollan resistencia mediante mutaciones
Tradicionalmente, el diagnóstico en genes específicos; aunque dichos
confirmatorio de la TB-DR requiere de 4 a 9 mecanismos moleculares están parcialmente
semanas, favoreciendo su dispersión al descritos, la resistencia a rifampicina (Rifr) y
permitir el contagio a los contactos del etambutol (Etar), se ha asociado a
paciente 3-5. En contraparte, el empleo de mutaciones en los genes rpoB y embB
nuevas técnicas en biología molecular, respectivamente3,6. Sin embargo, el
permiten desarrollar novedosos métodos porcentaje en que se presentan los tipos y
diagnósticos de TB-DR, altamente sensibles localizaciones de dichas mutaciones es
específicos y rápidos. El diagnóstico de variable entre zonas geográficas.


Estudiante de Doctorado Instituto de Salud Pública / Doctorado en Ciencias Biomédica Universidad
Veracruzana betsaida_20@hotmail.com betcuevas@uv.mx

62
Planteamiento del problema: Laboratorio Estatal de Salud Pública del
Estado de Veracruz (LESP), de los cuales 88
Veracruz es uno de los estados que presenta fueron aptos para realizar el estudio. A partir
más casos de TB-DR a nivel nacional. El de los bacilos se realizó: extracción de ADN,
prolongado tiempo de espera para su amplificación por Reacción en Cadena de la
diagnóstico favorece la implementación de Polimerasa (PCR) los genes; rpoB (266pb) y
tratamientos farmacológicos generalizados, embB (260pb), secuenciación por
inespecíficos, poco efectivos y más costosos. electroforesis capilar (Applied Biosystems
Con menor probabilidad de curación y mayor 3500) y análisis de mutaciones (Sequencing
riesgo de contagio, lo cual incrementa la DR Analysis y SeqScape) A nivel molecular se
y hace de este un fuerte problema social, identificó: codón de mutación, tipo de
económico y de salud. En contraposición, los cambio de base y tipo de mutación.
recientes avances tecnológicos del campo Mediante el resumen clínico y el reporte de
molecular permiten la incorporación de perfil de farmacorresistencia proporcionado
nuevas técnicas que proporcionan por el LESP se obtuvieron datos
información sobre las mutaciones que epidemiológicos del paciente portador del
explican la DR en las cepas de bacilo como: resistencia a fármacos, edad,
Mycobacterium del estado; permitiendo el sexo, comorbilidad, toxicomanías, tiempo de
desarrollo a mediano plazo de evolución de de TB y tipo de tratamiento.
procedimientos de diagnóstico molecular Finalmente se realizaron análisis estadísticos
específicos, sensibles y rápidos, así como de asociación entre las mutaciones presentes
evaluar la utilidad, efectividad, validez y en el genoma del bacilo y las variables
seguridad local de emplear métodos epidemiológicas del paciente portador de
diagnósticos aprobados en otros países. TB-DR.

Objetivo General: Resultados:


Realizar una caracterización genética de las Se analizaron 88 cepas del mismo número de
cepas DR de Mycobacterium tuberculosis pacientes, la media de edad fue de 45 años
presentes en Veracruz, identificando (±15) con rango de 15 a 87años. En cuanto al
mediante secuenciación, la frecuencia de género, el 66% fueron hombres y el 34%
mutaciones en regiones de genes rpoB y mujeres, con una razón de masculinidad de
embB, que ocasionan resistencia a H:M 1.96:1. Respecto a la drogorresistencia
Rifampicina y Etambutol respectivamente; el 68.1% (60) fueron Rifr y 58% (51) Etar.
en relación al contexto epidemiológico del Para el análisis de cepas Rifr se secuenciaron
paciente. 60 fragmentos de 266pb del gen rpoB (codón
478-564), incluyendo la región reportada
Metodología:
como portadora del mayor número de
Estudio observacional en el cual se mutaciones asociadas a resistencia a
recolectaron 114 aislados TB-DR entre los Rifampicina (codón 507 al 533). En el 10% de
años 2007-2010 provenientes del los aislados no se encontraron cambios de

63
base en el fragmento analizado; sin encontrando asociación con alta significancia
embargo, el 90% presentaron mutaciones no estadística (p=0.01) entre esta mutación y la
sinónimas en 4 codones (516, 522, 526, 531), mulltirresistencia, específicamente con la
las cuales se explican por 10 cambios de resistencia a Isoniacida (p=0.37). Pese a
base. La mutación encontrada con mayor realizar análisis de asociación de las
frecuencia fue en el codón 531 (70%), con un mutaciones rpoB 531 y embB 306 con
cambio de base en el nucleótido 163 de variables como: sexo, jurisdicción de
C→;T ó G, cambiando de aminoácido de Ser residencia, diabetes, alcoholismo,
a Leu ó Trp. drogadicción y tipo de tratamiento, no se
encontró significancia estadística en ningún
Se realizó análisis estadístico de X2 y Test caso.
exacto de Fisher para buscar asociación
entre la mutación S531L,W del gen rpoB Discusión:
respecto a las otras variables. Se encontró
asociación con alta significancia estadística Un alto porcentaje de cepas presentaron
(p=0.01) entre dicha mutación y la mutaciones en la región caliente del gen
resistencia a Estreptomicina, la cual rpoB (90%), lo cual concuerda con lo
posiblemente se explique por la relación en reportado en otros países6,8-11; sin
el mecanismo de acción de ambos fármacos. embargo, 6 cepas no presentaron
A cerca de las cepas Etar, se secuenciaron 51 mutaciones del codón 478 al 564, lo cual tal
fragmentos de 260pb del gen embB (codón vez sugiere otro mecanismo de resistencia
264-349), incluyendo al codón 306 que es para este fármaco. Según los resultados
donde se reporta el mayor número de obtenidos, una prueba de diagnóstico
mutaciones asociadas a resistencia a molecular con una sensibilidad del 95%
Etambutol, encontrando que en más del 60% requeriría el diseño de 10 sondas distintas, lo
no se identificaron mutaciones en el cual incrementaría su costo. Por otro lado, la
fragmento analizado. Por otro lado, el 40% utilización de la prueba comercial INNO-LiPA
de las cepas analizadas presentaron Rif TB, incluye sondas para las mutaciones:
mutaciones no sinónimas ubicadas en 3 D516V,H526D,Y y S531L12; considerando los
codones (306, 328, 330), las cuales se resultados de este estudio hubiera generado
explican por 6 cambios de base. La mutación una sensibilidad máxima de 75% o menor en
encontrada con mayor frecuencia fue en el función de los cambios de nucleótidos que
codón 306 (31.4%), con cambios de base en originaron el cambio de aminoácido,
los nucleótidos 128 de A→; G, o 130 de generando un alto porcentaje de falsos
G→;C,A ó T, ocasionando el cambio de Met a negativos.
Val o Iso. Tras el análisis estadístico de X2 y
Este hecho resalta la importancia de
Test exacto de Fisher se observó que todas
describir las mutaciones presentes en una
las cepas que presentaron mutación M306V,I
región antes de implementar un sistema de
en gen embB fueron resistentes >3 fármacos
diagnóstico. Respecto a la resistencia a
y ninguna cepa monorresistente o
Etambutol, la mutación del codón 306 se
birresistente presentó dicha mutación,
observó en el 31.4%, a diferencia de lo

64
reportado en otros países como Moroco en 1. World Health Organization. REPORT
Sudáfrica con un 42.3%13 ó China en donde 2009. Global Tuberculosis Control.
esta mutación se presentó en el 62.2% de las Epidemiology Strategy Financing. 1.8
cepas14,; lo cual refleja que la región Sumary pp.32. Disponible en:
secuenciada está poco conservada en http://www.who.int/tb/publications
Veracruz, abriendo la pauta para extender la /global_report/2009/en/index.html
búsqueda de mutaciones buscar río arriba o
en otros genes asociados al operón como 2. Anti-tuberculosis Drug Resistance in
embA y embC, con la finalidad de the world. Fourth Global Report.
incrementar la sensibilidad y especificidad de WHO 2008. Ejecutive Sumary. Result.
futuras pruebas moleculares para el Survey coverage and population-
diagnóstico de resistencia a dicho fármaco. weighted means. Pp 15. disponible
En este sentido, la mutación en el codón 306 en:
de embB parece ser por sí sola, un posible http://www.who.int/entity/tb/public
marcador de resistencia a múltiples ations/2008/drs_report4_26feb08.p
fármacos, lo cual concuerda con lo reportado df
por otros autores que sugieren que 3. Quirós-Roldán E. Airoldi M. Moretti
mutaciones en dicho codón parecer proveer F. Carosi G. Bases moleculares de
a la cepa de ventajas para desarrollar resistencia de Mycobacterium
resistencia ante Isoniacida y Rifampicina, tuberculosis. Rev Diagn Biol. 2001;
siendo más común que desarrollen 50(4): 200-203.
multidrogorresistencia y drogorresistencia
extrema15., o como sugieren otros autores 4. Tapia R. El Manual de Salud Pública.
podría incrementar la habilidad de la cepa Unidad II. Capítulo 6 Tuberculosis.
para la transmisión entre sujetos16. 2ªed. Editorial Intersistemas. México
2006. pp 469-505.
Conclusión:
5. Prisco P. J. et al. Estrategias
El porcentaje de mutaciones identificadas en innovadoras para el diagnóstico y
los aislamientos para rpoB y embB fue seguimiento de los pacientes
menor a lo reportado por otros países (531 tuberculosos. Arch Bronconeumol.
rpoB=40-75%, y 306 embB=40-60%), 2007; 43(4):225-32.
evidenciando la necesidad de realizar este
tipo de estudios para el diseño de 6. Said S. Becerril P. Molina G. Barrios
herramientas de diagnóstico molecular de H. Tuberculosis causada por cepas de
TB-DR altamente sensibles y específicas. Así Mycobacterium tuberculosis
mismo, los resultados encontrados abren la drogorresistentes. Enf Emerg 2005;
posibilidad de utilizar la mutación embB 306 7(1):13-19.
como marcador de MDR, en cepas de TB de
7. WHO. Treatment of tuberculosis:
Veracruz.
Guidelines for National Programmes.
Referencias Bibliográficas: 3 nd Ed. Geneva, Switzerland, 2003.

65
8. Soo-Young K. Yeon-Joon P. Won-Il K. Jordaan A , Lahlou O. Elouad R,
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Mycobacterium tuberculosis isolates Mycobacterium tuberculosis isolates
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of Mutations Associated with mutations of embB gen in
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from China. Clin Microbiol. 2005; from China. Chin. Med. J. 2005;
43(11): 5477–5482. 118(20):1739-1741.

10. Wada T. Maeda S. et al. Dual-Probe 15. Safi H, Sayers B, Hazbón M, Alland D.
Assay for Rapid Detection of Drug- Transfer of embB Codon 306
Resistant Mycobacterium Mutations into Clinical
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resistence in clinical isolates of
Mycobacterium tuberculosis by real- 16. Hazbón M, Bobadilla del Valle M,
time PCR. J Clin Microbiol. 2005; Guerrero M, Varma-Basil M, Filliol I,
43(12):6015-6019. Cavatore M, and col. Role of embB
Codon 306 Mutations in
12. Rossau R, Traore H, Beenhouwer H,
Mycobacterium tuberculosis
Mijs W, Jannes G, Rijk P, Portaels Revisited: a Novel Association with
F.Evaluation of the INNO-LiPA Rif Broad Drug Resistance and IS6110
Assay, a Reverse Hybridización Assay
Clustering Rather than Ethambutol
for the Simultaneous Detecction of Resistance. Antimicrobial Agents
Mycobacterium tuberculosis and Chemotherapy. 2005;
complex and its Resistence to
49(9):3794–3802.
Rifampin. Antimicrobial Agents and
Chemotherapy. 1997;41(10):2093-
2098.

13. Chaoui I , Sabouni R , Kourout M ,

66
NÚMERO DE EOSINOFILOS EN MUCOSA ESOFÓGICA DE
PACIENTES CON ESOFAGITIS EOSINOFÍLICA, ESOFAGITIS
EROSIVA, ENFERMEDAD POR REFLUJO NO EROSIVO Y
CONTROLES ASINTOMÁTICO. UN ESTUDIO EN
PACIENTES MEXICANOS.
Eli De la Cruz Patiño
Maura Torres Aguilera
: Peter Gruber Pagola
Isabel Ruíz Juarez
Federico Roesch Dietlen
José María Remes Troche

Marco teórico: bien definido, e incluso en algunas


poblaciones se sugiere añadir otros
En la última década existen reportes acerca parámetros (hallazgos anatomo patológicos
del incremento de una entidad denominada característicos: formación micro abscesos de
Esofagitis eosinofilica (EEo), la cual se eosinófilos y capas superficiales de
caracteriza por que en población adulta eosinófilos frecuentemente asociados a
afecta a hombres de raza blanca y que zonas desprendimiento de zonas de necrosis
frecuentemente sufren de disfagia y/o de células escamosas) para establecer el
pirosis refractaria. El diagnóstico de esta diagnostico de EEo, esto debido a un amplio
entidad se basa en un incremento en el margen de concentración de eosinófilos en
recuento de eosinófilos que infiltran la las diferentes poblaciones estudiadas . La
mucosa esofágica ( >20 eosinofilos por EEo se ha asociado antecedentes de atopia,
campo de alto poder). Sin embargo, otras sin embargo la fisiopatología aun es
condiciones como la Enfermedad por Reflujo desconocida.
Gastroesofágico (ERGE) también puede
producir un incremento en el número de Planteamiento del problema:
eosinófilos en la mucosa esofágica, aunque
el punto de corte en esta condición no está La EEo es un padecimiento emergente,
ocasiona altos costos a los sujetos


Docente y Profesional de la salud Universidad Veracruzana Instituto de Investigaciones Medico
Biológicas mauri_ta@hotmail.com elihistop@hotmail.com

67
afectados, ya que los síntomas no son eosina. Según los datos clínicos,
específicos por lo que habitualmente suele endoscópicos y anatomo-patológicos se
hacerse el diagnostico con ERGE refractario, clasificaron a los sujetos en los siguientes
la EEo es una de las causas principales de grupos: GRUPO A (GA), sujetos con síntomas
disfagia, y pirosis, ocasionando un impacto de ERGE 3 veces por semana y Esófago
elevado en la calidad de vida. La población normal endoscópicamente (ERNE); GRUPO B
mexicana esta frecuentemente expuesta a (GB), sujetos con síntomas de ERGE 3 veces
enfermedades parasitarias, que ocasionan por semana y Esofagitis Erosiva grado A-o B
un incremento en el número de eosinófilos a de los Ángeles; GRUPO C (GC), sujetos sin
nivel sanguíneo, y es probable que este síntomas de ERGE y Esófago
antecedente sea un factor que ocasione un endoscópicamente normal (Controles
aumento en la concentración de eosinófilos Sanos); GRUPO D: Diagnóstico definido de
en la mucosa del tracto digestivo. Se ignora EEo (sintomatología asociada a >20
si el conteo de eosinófilos en la mucosa Eosinófilos en campo de alto poder, sin
esofágica en nuestro medio es similar a lo respuesta a terapia anti secretora. Las
reportado en otras poblaciones. biopsias fueron analizadas por un patólogo
gastrointestinal cegado. Se realizó el conteo
Objetivo General: de eosinofilos que infiltraron la mucosa
esofágica en 10 campos de alto poder (40x) y
evaluar de forma prospectiva el número de
se realizo el análisis mediante estadística
eosinófilos (a gran aumento) presentes en la
descriptiva.
mucosa esofágica de pacientes con EEo,
Esofagitis Erosiva, Enfermedad por Reflujo Resultados:
No Erosiva (ERNE) y en un grupo de sujetos
considerados como controles asintomáticos Se incluyeron 124 sujetos en el grupo con
ERNE, 35 con Esofagitis Erosiva , 16 controles
Metodología: y 6 casos de EEo. No hubo diferencias en
cuanto al genero y la edad en los grupos A, B
Se trata de un estudio observacional,
y C, pero los pacientes con EEo fueron
transversal, analítico, cegado simple, donde
mayores ( p<0.05). En el Grupo A con 124
se incluyeron sujetos adultos de forma
sujetos (70 femenino), edad promedio 44.8
consecutiva que, previo consentimiento
(13 - 40), presento un media de numero de
informado, y evaluación clínica inicial, fueron
eosinófilos en el esófago próxima de 0 (0-0)
sometidos a endoscopia gastrointestinal alta,
y en el distal de 3.5 (2-5); en el Grupo B se
en el periodo comprendido del entre Agosto
incluyeron a 35 sujetos (14 femenino), con
2008 y Diciembre de 2009, a los cuales se
edad media 49.6 (26-58) con una media de
les realizo toma de biopsia de la mucosa
eosinófilos en esófago proximal de 0 (0-0), y
esofágica de todos los sujetos de estudio (8
5 (3-7) en el distal; En el Grupo C se
fragmentos, 4 de esófago proximal y 4 de la
incluyeron 16 sujetos (5 femenino) edad
porción distal del esófago), las cuales fueron
media 49.2, con 0 (0-0) eosinófilos en la
posteriormente procesados de forma
porción distal y 0 (0-0) en la distal; en el
convencional y teñidos con hematoxilina

68
Grupo D se incluyeron 6 sujetos (1 femenino) ERNE se localiza solo en porción distal del
edad media 60.25, con un conteo de esófago, la cual se encuentra en contacto
eosinófilos de 18 (18-22) en la porción directo con el agresor (reflujo acido y/o no
proximal y de 25 (20-37) en la porción distal acido) responsable de la lesión hística a la
mucosa que conlleva a la infiltración y
Discusión: reacción inmunológica secundaria local y
circunscrita. El promedio de conteo de
En nuestro estudio cabe destacar la ausencia
eosinófilos en la mucosa esofágica de los
de infiltración eosinófilica en el área próxima
pacientes con EEo mexicanos, es menor que
del esófago tanto en el grupo control,
lo reportado en otras poblaciones.
sujetos con ERNE y ERGE erosivo (Grupos A,
B y C), en contraste con los sujetos con EEo Referencias Bibliográficas:
donde la concentración media de eosinófilos
en la porción proximal fue elevada y muy 1. Molina-Infante J, Ferrando-Lamana
similar al conteo de eosinófilos de la L, Fernandez-Bermejo M, Porcel-
porción distal del esófago, este hallazgo es Carreño S.Eosinophilic esophagitis in
similar a lo encontrado en otros países, GERD patients: a clinicopathological
donde incluso han protocolizado las toma de diagnosis using proton pump
biopsias de esófago a diferentes niveles para inhibitors. Am J Gastroenterol. 2009
evitar falsos positivos. Si bien en porción Nov;104(11):2856-7
distal del esófago del grupo con ERNE y con
2. Straumann A, Spichtin HP, Grize L,
ERGE erosiva hubo infiltración eosinófilica,
los rangos se mantuvieron Bucher KA, Beglinger C, Simon HU.
considerablemente inferiores de los rangos Natural history of primary
de sujetos con EEo, diversos estudios eosinophilic esophagitis: a follow-up
realizados en otras poblaciones han of 30 adult patients for up to 11.5
demostrado que la terapia anti secretora years. Gastroenterology. 2003
reduce el conteo de eosinófilos en estos Dec;125(6):1660-9.
sujetos. Cabe destacar que en sujetos sin 3. Almansa C, Krishna M, Buchner AM,
sintomatología (grupo control) no hubo Ghabril MS, Talley N, DeVault KR,
infiltración de eosinófilos en ninguna sección Wolfsen H, Raimondo M, Guarderas
del esófago. JC, Achem SR. Seasonal distribution
in newly diagnosed cases of
Conclusión:
eosinophilic esophagitis in adults.
Este estudio demuestra que normalmente en Am J Gastroenterol. 2009
población mexicana no debe de existir Apr;104(4):828-3
infiltración por eosinofilos en la mucosa
4. Steiner SJ, Gupta SK, Croffie JM,
esofágica. En las variantes de la ERGE, puede
Fitzgerald JF.Correlation between
existir infiltración esoinofilica de bajo grado.
number of eosinophils and reflux
La existencia de infiltración esosinófilica
index on same day esophageal
tanto en sujetos con ERGE erosivo como
biopsy and 24 hour esophageal pH

69
monitoring. Am J Gastroenterol. 10. Yantiss RK, Odze RD . Optimal
2004 May;99(5):801-5 approach to obtaining mucosal
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42.
Thoughts on the complex

70
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gastroesophageal reflux disease and findings in adult eosinophilic
eosinophilic esophagitis. Am J esophagitis: a case series and
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71
EFECTO DEL EXTRACTO POLAR DE MOUSSONIA
DEPPEANA SOBRE LA PROLIFERACIÓN Y LA VIABILIDAD
DE LA LÍNEA CELULAR DE CÁNCER DE PRÓSTATA
LNCAP.
: Cynthia Fernández Pomares
. Miguel Ángel Domínguez Ortiz
. Enrique Juárez Aguilar
. Omar Muñoz Muñiz
Myriam Bravo Ávila
María Elena Hernández Aguilar

Marco teórico: sugiere que el ambiente es un factor más


determinante en el desarrollo del cáncer que
El cáncer es una de las causas más el mismo fondo genético del individuo.5.
importantes de morbilidad y mortalidad Además, estos estudios también indican que
alrededor del mundo.1 En el 2008 la poblaciones que poseen una alimentación
neoplasias malignas fueron la tercera causa rica en frutas y vegetales tienen una menor
de muerte entre la población mexicana, incidencia de cáncer.6
siendo el carcinoma prostático la neoplasia
con mayor incidencia en los hombres2. Esta Planteamiento del problema:
enfermedad se desarrolla debido a
A pesar de todos los avances en la
alteraciones en los genes responsables del
control del ciclo celular, en consecuencia, las investigación sobre el cáncer, actualmente
células cancerosas proliferan no se cuenta con un tratamiento cien por
descontroladamente e invaden otros ciento efectivo, es por ello que se ha
órganos del cuerpo.3. La incidencia del encontrado en la fitoterapia una alternativa
cáncer está fuertemente relacionada con el prometedora para combatir este mal, puesto
estilo de vida y alimentación de cada país. que existen compuestos fitoquímicos
capaces de prevenir y combatir el cáncer,
Datos epidemiológicos muestran que
individuos que migran a otro país, tienen la tales como el licopeno del tomate, el
misma incidencia de cáncer que los resveratrol de la uva, la quercetina de la
guayaba y la curcumina de la cúrcuma.7 Con
habitantes originarios del país al que
emigró;4. Dato sumamente importante que fundamento en lo anterior, el presente


Estudiante de DoctoradoUniversidad Veracruzana Dependencia: Instituto de Neuroetología
chiselv8@yahoo.com chiselv8@hotmail.com

72
estudio evaluó el efecto del extracto de proporcional a la reducción del DPPH.
Moussonia deppeana sobre la proliferación y Contenido total de polifenoles. Se determinó
la viabilidad de la línea celular de cáncer de el contenido total de polifenoles utilizando el
próstata LNCaP. reactivo de Folin-Ciocalteu. Las sales de
molibdeno y tungsteno presentes en el
Objetivo General: reactivo son reducidas por los antioxidantes
del extracto formando óxidos de molibdeno
Evaluar el efecto del extracto polar de
y tungsteno de color azul intenso. La
Moussonia deppeana (H2O/EtOHMd) sobre
absorbancia obtenida en el
la línea celular de carcinoma prostático
espectrofotómetro a 765 nm es
LNCaP.
directamente proporcional al contenido de
Metodologia: polifenoles, el cual es reportado como
miligramos de ácido gálico por gramo de
Obtención del extracto. La planta M. peso del extracto seco (mg GAE/g dw).
deppeana fue recolectada en el mes de Determinación del poder reductor. El poder
noviembre en el Municipio de Coatepec, reductor se evaluó mediante el método de
Veracruz. El extracto polar se obtuvo Oyaizu, 1986.8. La capacidad antioxidante es
mediante maceración de 300 g de la parte determinada por la reducción del ión Fe+3 a
aérea de la planta (hojas y tallos) en una Fe+2, reacción colorimétrica que es
mezcla de etanol: agua 1:1 v/v.Análisis cuantificable en el espectrofotómetro a 700
Fitoquímico. La identificación cualitativa de nm. Cultivo de la línea celular LNCaP. La línea
los metabolitos presentes en el extracto se celular de carcinoma prostático de humano,
realizó mediante cromatografía en capa fina, derivada de metástasis del nodo linfático
utilizando como agentes reveladores luz UV, supraclavicular, fue mantenida en medio
CoCl2, FeCl3 (para flavonoides), ácido RPMI suplementado con suero fetal bovino
perclórico (para esteroles) y solución de al 8%, a 37º C en atmósfera de CO2 al 5%. Es
Dragendorff (Bi(NO3)3/KI/CH3COOHpara productora de fosfatasa ácida prostática
alcaloides). Además, se realizó un análisis en humana y de antígeno prostático específico.
Resonancia Magnética Nuclear de protón (H1 Posee receptores a andrógenos y
RMN) para la identificación la naturaleza estrógenos.Ensayos de Proliferación celular.
química de los compuestos presentes en el Las células fueron sembradas en cajas de 96
extracto.Determinación de la capacidad pozos a una densidad de 5022 cel/pozo,
antioxidante. La capacidad antioxidante del incubándose por 48 horas en las condiciones
extracto se determinó por el método de anteriormente descritas. Posteriormente las
DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidracilo) (Brand- células fueron tratadas con diferentes
Williams modificado por Miliauskas, 2004). El concentraciones del extracto H2O/EtOHMd
DPPH es un radical libre que es estabilizado (62.5, 125, 187.5, 250, 500 y 1000 µg/ml)
por los antioxidantes presentes en el utilizando como vehículo DMSO (Dimetil
extracto. La reacción es evaluada mediante sulfóxido) a un volumen final del 0.25%.
el espectro visible donde se aprecia una
disminución en la absorbancia (517 nm) Finalmente la proliferación de las células fue

73
evaluada a diferentes tiempos de incubación Las pruebas cualitativas para la identificación
con el extracto (24, 48, 72 y 96 hrs) por el de metabolitos revelaron la presencia de
ensayo de Metil tiazol tetrazolium (MTT) alcaloides, esteroles y polifenoles en el
descrito por Mossman, 1983.9 Brevemente, extracto polar de M. deppeana. La
los cultivos son incubados con MTT (5 resonancia magnética nuclear (1H RMN)
mg/ml) por 4 hrs a 37oC y 5% de CO2, muestra señales en la región de 6.5 a 8 ppm,
finalmente los cristales de formazán lo que sugiere la existencia de compuestos
obtenidos son disueltos con DMSO y la de tipo aromático. El extracto también
absorbancia de dicha solución es mostró adecuados niveles de activad
cuantificada en un lector de ELISA a 570 nm. antioxidante y poder reductor, además de un
Para diferenciar el efecto antiproliferativo de alto contenido de polifenoles. Por otra parte,
un posible efecto citotóxico en este ensayo, las células tratadas con EH2O/EtOHMd a las
se determinó la viabilidad de los cultivos concentraciones de 250, 500 y 1000 µg/ml
tratados mediante la tinción con azul de tuvieron un porcentaje de proliferación
tripano y el conteo directo en cámara de menor al alcanzado por el cultivo sin
Neubauer.Ensayo de citotoxicidad. Las tratamiento a las 48, 72 y 96 hrs (F(6,83)=
células fueron sembradas a una densidad de 101.15, P < 0.05, r2= 0.96). Sin embargo, la
10000 cel/ pozo en una placa de 96 pozos y observación microscópica reveló una
se incubaron 72 hrs a 37º C y 5% de CO2. diferencia en la densidad y morfología de los
Una vez que el cultivo alcanzó la confluencia, cultivos tratados con el extracto a las
se aplicó el extracto H2O/EtOHMd a concentraciones de 500 y 1000 µg/ml, donde
diferentes concentraciones (62.5, 125, se aprecia a las células redondeadas y con
187.5, 250, 500 y 1000 µg/ml). La viabilidad núcleo picnótico, lo cual indica que el
celular fue evaluada a las 48 hrs post- extracto polar tiene un efecto citotóxico a
tratamiento mediante el ensayo de MTT. esas dosis. Por otro lado, las células tratadas
Finalmente se determinó la concentración con dosis menores (62.5 a 250 µg/ml) no
inhibitoria (IC50).Análisis estadístico. Los muestran diferencia morfológica aparente
datos de los ensayos de proliferación y respecto al cultivo sin tratamiento, sin
citotoxicidad se analizaron con un ANOVA de embargo se puede apreciar una disminución
dos vías con ranqueo de datos y prueba post- en la densidad celular dependiente de la
hoc de Tukey en el programa JMP 6, los dosis y del tiempo de tratamiento. Para
resultados se expresan como el porcentaje corroborar los resultados se evaluó el
promedio de proliferación o viabilidad, porcentaje de viabilidad celular por tinción
respectivamente, en relación con el valor con azul de tripano durante el ensayo de
más alto obtenido por el control en el proliferación celular, donde se aprecia una
tiempo. La determinación de la IC50 se disminución en el porcentaje de viabilidad de
realiza con un ajuste no linear en el las células tratadas solo con las dosis más
programa Sigma Plot 10.0. Cada ensayo se altas del extracto. En el ensayo de
realizó por triplicado. citotoxicidad se apreció una disminución en
el porcentaje de viabilidad de los cultivos
Resultados: tratados con el extracto respecto a las

74
células sin tratamiento de forma dosis PA: Saunders, 2005.
dependiente, donde la dosis inhibitoria del
50% de la población (IC50) fue de 222.667 2. INEGI Estadísticas Vitales, 1998-2008.
µg/ml. El análisis microscópico muestra Bases de datos.
diferencias morfológicas sólo en los cultivos http://www.inegi.org.mx/inegi/contenidos/e
spanol/prensa/Contenidos/estadisticas/2010
tratados con dosis de 500 y 1000 µg/ml.
/cancer0.doc.3. Alberts B, Johnson A, Lewis J,
Discusión: Raff M, Roberts K, Walter P. Molecular
Biology of the Cell. Garland Science. 4th ed.
El extracto polar de M. deppeana posee New York and London: Garland Science;
actividad antiproliferativa y citotóxica sobre 2002. Capítulo 23, Cancer.
la línea celular LNCaP, efectos que son
dependientes de la dosis y del tiempo de 4. Aggarwal BB, Shishodia S. Molecular
tratamiento. El análisis fitoquímico del targets of dietary agents for prevention and
extracto y los ensayos de actividad therapy of cancer. Biochemical
antioxidante, revelan la presencia de Pharmacology. 2006 May 14;71(10):1397-
compuestos polifenólicos, los cuales pueden 421.
ser responsables de los efectos del extracto
5. World Cancer Research Fund / American
sobre la vida y el crecimiento del cultivo,
Institute for Cancer Research. Food,
esto de acuerdo a lo reportado con otros
Nutrition, Physical Activity, and the
compuestos de esta misma naturaleza,
Prevention of Cancer: a Global Perspective.
mismos que podrían actuar a nivel molecular
London: 2008. WCRF/AICR.
regulando la expresión de los genes
implicados en estos procesos.(10-12) 6. Willett WC. Diet and health: what should
we eat?, Science. 1994 Apr
Conclusión:
22;264(5158):532- 7.
Estos resultados nos sugieren un gran
7. Surh YJ. Cancer chemoprevention with
potencial del extracto de M. deppeana como
dietary phytochemicals. Nat Rev Cancer.
agente anticancerígeno, por lo cual es de
2003 Oct;3(10):768-80.
suma importancia evaluar el potencial
antiproliferativo de este extracto sobre otras 8. Oyaizu M Studies on products of browning
líneas celulares, caracterizar el tipo de reaction prepared from glucoseamine. Jpn J
muerte celular, los mecanismos moleculares Nutr 44:307-314.
y los compuestos químicos por medio de los
cuales ejerce su efecto antineoplásico.

Referencias Bibliograficas:

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Molecular Immunology. 4th ed. Philadelphia,

75
. EFECTOS BIOCLÍNICOS DE LA OBESIDAD Y LA INDUCCIÓN
DE LA DIABETES EN LA RATA WISTAR HEMBRA
Areli Olazo Marinero
José Arnold González-Garrido
Octavio Maldonado-Saavedra
Aracely López-Monteon
Guillermo Manuel Ceballos-Reyes
Enrique Méndez-Bolaina

Marco teórico: 2005) la obesidad es la enfermedad


caracterizada por el exceso de tejido adiposo
La obesidad es la enfermedad nutricional en el organismo.3,4Enfermedades
más prevalente en los países industrializados relacionadas con la obesidad Complicaciones
y está experimentando un incremento respiratorias, hepatobiliares, del aparato
significativo en los países en vías de locomotor, enfermedades cardiovasculares,
desarrollo. Numerosos estudios cáncer, DM2 y síndrome metabólico,
epidemiológicos evidencian que la esperanza etc.4,5,6La DM es un de trastorno
de vida en los obesos es reducida y su metabólico, que afecta a diferentes órganos
morbilidad es elevada, siendo un problema y tejidos, se caracteriza por hiperglicemia. La
de Salud Pública. Además de ser un factor de diabetes es una enfermedad crónica que
riesgo para desarrollar diabetes mellitus 2 aparece cuando el páncreas no produce
(DM2), hipertensión arterial y otras insulina suficiente o cuando el organismo no
enfermedades crónicas.1El Índice de Masa utiliza eficazmente la insulina que
Corporal (IMC) es el resultado de dividir el produce.7,8,9Clasificación de la diabetes
peso en kilogramos por el cuadrado de la según la OMSDM1, DM2 y Diabetes
talla en metros (kg/m2), es una indicación gestacional.8La DM2 representa el 90% de
simple de la relación entre el peso y la talla, los casos mundiales y se debe en gran
se utiliza frecuentemente para identificar medida a un peso corporal excesivo, a la
sobrepeso y obesidad.2,3La Organización inactividad física, entre otras.8,9Órgano
Mundial de la Salud (OMS) define el importante para el metabolismo de los
sobrepeso como un IMC>25 kg/m2, y la carbohidratos
obesidad como un IMC>30 kg/m2. Según la
norma oficial mexicana (NOM-043-SSA2-


Docente y Profesional de la salud Universidad Veracruzana Facultad de Ciencias Químicas
(Orizaba, Veracruz) enmendez@uv.mx emendezb@hotmail.com

76
El hígado, es la mayor víscera del ser pancreatomía hasta la utilización de
humano. Pesa aproximadamente 1.5 kg, es productos químicos.19,20,21 La
de color rojo-oscuro, situado en la parte estreptozotocina (STZ) (2-desoxi-2-
superior derecha de la cavidad abdominal, ([metil(nitroso)amino]carbonilamino)- β;-D-
justo debajo del diafragma. Ayuda en el glucopiranosa, sintetizada por la
metabolismo de los carbohidratos, lípidos y Streptomycetes achromogenes, utilizada
triglicéridos.10,11La forma de diagnosticar para inducir la DM1 como la 2, según el
esta enfermedad, es a través de los signos y momento de la inyección, la dosis empleada
síntomas, aunque, en ocasiones es y frecuencia de inyección.22,23
asintomática, por lo que para confirmar o
descartar su presencia se han desarrollado Objetivo General:
pruebas del tipo estímulo-respuesta,11 como
Analizar los efectos de la obesidad y la inducción
la prueba de tolerancia a la glucosa.12,13 de la diabetes en los valores de glucosa,
colesterol y triglicéridos en rata Wistar hembra.
Planteamiento del problema:
Metodologia:
La diabetes espontánea entre los animales es
relativamente común. El primer caso fue Para el desarrollo de este trabajo se
descrito en 1851 en un primate. En la utilizaron ratas Wistar hembra, con un peso
mayoría de los roedores, la diabetes es de de 200 a 220 g, divididas en 3 grupos (n=5):•
origen genético y se acompaña de Grupo control, las cuales se
obesidad.14,15Características generales de mantuvieron con alimento normal y acceso
la rata Wistar. Esta caracterizada anatómica, libre a agua. • Grupo de ratas obesas, a las
fisiológica y genéticamente, se reproduce cuales se les mantuvo con alimento
fácilmente, son animales muy adaptables, hipercalórico y acceso libre a agua.•
fáciles de cuidar y manejar. Es posible Grupo diabético (ratas obesas y/o
producirlas libres de gérmenes y diabéticas), las cuales recibieron STZ, vía ip,
enfermedades, , con lo cual se reduce la (65 mg/kg de peso/0.5 mL de citrato de
principal variable no controlada.16Efectos de sodio-pH 4.5) para alcanzar una
la dieta La abundancia calórica parece concentración de glucosa en plasma de 14
facilitar el desarrollo de la obesidad y la mmol/L o mayor.El valor de glucosa se
diabetes en los seres humanos. En algunos obtuvo utilizando un glucómetro digital
roedores también se ha demostrado que los Bayer Health Care™, mediante punción en la
factores ambientales contribuyen a la pata de la rata, la muestra de sangre se
presentación de este síndrome.17,18 colocó en la tira reactiva (biosensor de
Diabetes inducida La inducción de la diabetes glucosa oxidasa), los valores fueron
se ha logrado por diversos medios. En 1889, reportados en mg/dL. Para determinar los
Von Mering y Minkowski produjeron niveles séricos de colesterol y triglicéridos se
diabetes experimental en perros mediante la realizo una punción cardiaca, las muestras
remoción quirúrgica del páncreas.Existen fueron analizadas en el Laboratorio de
diferentes modelos que van desde la Análisis Clínicos-FCQ-UV. Los datos se

77
presentaron como la media±de. Para la (71.4±3.6) vs. control (36.2±1.9) (p<0.001),
expresión gráfica y el análisis estadístico de comparando obesas diabéticas intermedias
resultados se utilizaron los programas Prism (79.4±2.3) vs. control (36.2±1.9) (p<0.001). Al
3.02 e InStat 3.05, respectivamente; y una comparar a las obesas finales (77±2.7) vs.
ANOVA para establecer diferencias significativas obesas diabéticas finales (82±1.2) y vs.
(p<0.05). control (37.2±2.3) (p<0.001). Al comparar las
dimensiones del hígado de las ratas obesas
Resultados:
diabéticas finales (5.9±0.3) vs. control
Al comparar los pesos de las ratas en (5.1±0.4) (p<0.01), comparando obesas
diferentes tiempos: inicial, intermedio y final, finales (8.7±0.4) vs. control (7.4±1) (p<0.01),
los efectos más significativos fueron a partir al comparar las obesas diabéticas finales
de las ratas obesas intermedias (210.4±8.6) (9.4±0.06) vs. control (7.4±1) (p<0.01), para
vs. control (203±9.2) (p<0.001), al comparar el tamaño y peso del páncreas no se
a las ratas obesas diabéticas intermedias observaron diferencias significativas
(209±6.6) vs. control (203±9.2) (p<0.001), al (p>0.05).
comparar a las obesas finales (229.7±6.6) vs.
Discusión:
control (223.7±10) (p<0.001), comparando
también las obesas finales (229.7±6.6) contra El presente modelo fue diseñado para
las obesas diabéticas finales (190±14) observar los efectos de la diabetes inducida
(p<0.05). Aunque se observo disminuido el por STZ y para encontrar una asociación
peso en las obesas diabéticas debido a los entre la reducción del peso de los animales,
efectos de la diabetes por la STZ, al el peso relativo del hígado y el páncreas en
compararla vs. control (223.7±10) (p<0.001). ratas Wistar hembra. En este estudio, se
En los resultados obtenidos para el valor de utilizó STZ en una dosis de 65 mg/kg.26 Esta
glucosa se observaron cambios significativos reportada la utilización de 90 mg/kg por vía
partir de las muestras intermedias, al ip en ratas. Los niveles de glucosa, colesterol
comparar las ratas obesas intermedias y triglicéridos en sangre, tanto el peso
(129.8±2) vs. control (56±1) y contra las corporal, así como las mediciones al hígado y
obesas diabéticas intermedias (199.6±4.7) páncreas se registraron para poder observar
(p<0.001), al comparar al grupo obeso final los efectos, el cual demostró que la STZ fue
(143.2±2.8) vs. control (56±0.8) y vs. grupo eficaz para producir hiperglucemia
obeso diabético final (251±39.4) grave.25,19,30En los animales tratados con
(p<0.001).En el nivel de colesterol en sangre STZ se observó la pérdida de peso debido a
los cambios se observaron en la semana 8 los efectos deletéreos de STZ que causa la
comparando las ratas obesas (98.2±2.3) vs. alquilación del ADN y produce
control (97.8±1.6) (p>0.05, no significativa), hiperglucemia.26,31El hígado de los
pero al comparar las ratas obesas diabéticas animales tratados con STZ, se observo un
finales (103.6±3) vs. control (97.8±0.8) aumento en su peso(hipertrofia) cuando los
(p<0.05).Para los niveles de triglicéridos animales del grupo obeso diabético fueron
observamos cambios significativos comparados vs. control, a pesar de que el
comparando las obesas intermedias

78
peso de todos los animales del grupo tratado cada uno de los modelos, se vieron afectados
con STZ se observó disminuido. algunos órganos por la selectividad de la STZ.
Probablemente debido a la acumulación de Finalmente, se concluyó que empleando una
triglicéridos que conducen al agrandamiento dosis de 65 mg/kg de STZ en ratas Wistar
del hígado debido a la afluencia cada vez hembra obesas, se indujo en los animales
mayor de ácidos grasos en el hígado inducida diabetes que afecto de forma significativa los
por hipoinsulinemia, así como la obesidad y órganos internos importantes en el
la baja capacidad de excreción de metabolismo (hígado y páncreas) y los
lipoproteínas del hígado como resultado de niveles séricos de triglicéridos, colesterol y
una deficiencia de síntesis de la glucosa, por lo que podría ser empleado
apolipoproteína B.27,28,31El peso del como herramienta para evaluar el efecto de
páncreas en el grupo obeso diabético no la obesidad y la DM2.
mostró ningún cambio respecto al
tratamiento con STZ. La disminución en el Referencias Bibliográficas:
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reducción en el peso corporal se asoció con
4.- Rhys Williams, The metabolic syndrome,
aumento del peso relativo del hígado aunque
Diabetes voice, May 2006-volumen 51,
el peso del páncreas no fue afectado, se
special issue.1-37.
observó una tendencia a la disminución en el
peso y tamaño de este último. 5.- Sorlí Guerola-J.V. (2008). Obesidad y
alteraciones metabólicas: factores genéticos
Conclusión: y ambientales en población mediterránea.
Tesis doctoral, Departamento de medicina
Se evidenció que existe una relación entre la
preventiva y salud pública, Universidad de
dosis de STZ y la inducción de diabetes
Valencia. Valencia España. 523 p.
estable en ratas. Los parámetros evaluados
demostraron una alteración dependiente 6.-
tanto de la STZ, como del peso corporal de www.nlm,nih.gov/medlineplus/spanish/ency

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diabetes mellitus) of Streptozotocin treated
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81
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE CEPAS Y VECTORES
DE TRYPANOSOMA CRUZI DEL ESTADO DE VERACRUZ.
Jesús Torres Montero
Daniel Guzmán Gómez
Aracely López Monteon
Eric Dumonteil
Angel Ramos Ligonio
Marco teórico: transcrito interno (ITS) del DNA ribosomal
(DNAr), donde los ITS-1 diferencia complejos
La enfermedad de Chagas o Tripanosomiasis y los ITS-2 diferencía especies 5. La
Americana es una enfermedad infecciosa identificación taxonómica del vector, se
que se encuentra ampliamente diseminada y realiza mediante el análisis del segundo
es considerada como un problema espaciador del transcrito interno del DNAr
importante de salud pública que afecta a (ITS-2), revelando diferentes haplotipos y
toda América Latina 1. De 16-18 millones de facilitando la taxonomía del vector 6.
individuos son infectados por T. cruzi en
América Central y Sudamérica 2.El agente Planteamiento del problema:
causal de la enfermedad es el protozoario
hemoflagelado Trypanosoma cruzi (T. cruzi), T. cruzi es un parásito protozoario, agente
y su principal mecanismo de transmisión es etiológico de la enfermedad de Chagas,
considerada una enfermedad crónica, el
el vectorial, por insectos de la familia
Reduviidae, siendo el principal género parásito es transmitido por insectos
Triatoma. La prevalencia de esta enfermedad triatominos (chinches) que se distribuyen en
distintas regiones geográficas de América
se relaciona con el subdesarrollo y la
pobreza. Conocer si los vectores contienen al latina. Conocer si los vectores contienen al
parásito, indica el riesgo en el que la parásito, indica el riesgo en el que la
población está expuesta de padecer la población está expuesta de padecer la
infección por T. cruzi por habitar en zonas infección por T. cruzi por habitar en zonas
endémicas en convivencia con el agente endémicas en convivencia con el agente
vector. Con el apoyo de la biología molecular vector. Recientemente se ha clasificado a T.
se ha logrado diagnosticar y clasificar a T. cruzi en líneas filogenéticas, las cuales
cruzi en líneas filogenéticas, incluyendo incluyen distintos linajes. Debido a la gran
distintos linajes 3, 4. De la misma manera la diversidad genética que presenta hoy en día
identificación taxonómica en el vector el parásito es necesario clasificar a T. cruzi y
utilizando el análisis de espaciadores del estudiar los hábitats en donde éste se


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82
localice para proponer estrategias de control Municipio de Tezonapa perteneciente al
del vector y de la misma enfermedad, con el estado de Veracruz a los cuales se les realizó
fin de obtener una correlación entre la lavado intestinal. A partir de la muestra
heterogeneidad de cepas y su tropismo obtenida se diagnosticó el agente infeccioso
tisular (presentación clínica de la T. cruzi mediante la amplificación del kDNA
enfermedad), y por otra parte, el conocer la mediante ensayos de PCR y se caracterizó el
clasificación de los vectores, distribución en linaje (I-II) del parásito a las muestras que
la zona e identificar la presencia de T. cruzi salieron positivos a T. cruzi. Por otro lado, a
en ellos representa un acercamiento de gran partir de las extremidades de los vectores se
alcance epidemiológico para determinar los extrajo DNA y con éste se caracterizó
ciclos de transmisión de las diversas taxonomicamente a T. dimidiata presente en
poblaciones del parásito entre los vectores y la zona; mediante (ITS-2) empleando el
especies mamíferas. metodo de la PCR.

En base a lo anterior es de vital importancia Resultados:


realizar la tipificación molecular de cepas de
T. cruzi aisladas de vectores colectados que Se encontraron 297 vectores, de los cuales
circulan en localidades rurales de la zona 224 (75.42%) se recolectaron en lugares
centro del estado de Veracruz para contar intradomiciliares, 58 (19.52%) en lugares
con una información más certera sobre la peridomiciliares, 3 (1.01 %) en lugares
epidemiología de la enfermedad en la silvestres y 12 (4.05 %) de ellos se desconoce
región; así como herramientas para la su procedencia. Resultaron 41 (13.80%)
predicción y vigilancia entomológica de la vectores positivos de un total de 297
enfermedad que permitan a las autoridades analizados. Los 41 muestras positivas a T.
de salud intervenir de forma más eficiente. cruzi corresponden al linaje I del parásito.
Los 297 vectores pertenecen al grupo 2
Objetivo General: dentro de la clasificación filogenética
utilizando como marcador al ITS-2.
Identificar y caracterizar molecularmente la
(s) cepa (s) del parásito Trypanosoma cruzi y Discusión:
al vector Triatoma dimidiata presentes en
localidades rurales de la zona centro del En base a los análisis y resultados obtenidos,
estado de Veracruz. observamos que el parásito está presente en
la región y por lo consiguiente que el hombre
Metodología: adquiera la enfermedad. El linaje I de T. cruzi
encontrado concuerda con estudios
Es un estudio de tipo experimental. Se generados mediante el análisis de
recolectaron vectores en comunidades marcadores genéticos (RAPD); formando un
rurales, para la identificación y grupo homogéneo para los ciclos domésticos
caracterización de T. cruzi, y para la y selváticos sobre el área geográfica de
clasificación de los vectores. Se recolectaron México. No así el linaje II característico de los
vectores de 13 localidades rurales del ciclos domésticos en Argentina, Brasil, Bolivia

83
y Chile. A pesar de que los vectores Rassi A. Chagas disease (American
analizados pertenecen al grupo 2 (que junto Trypanosomiasis) Its impact on
con el grupo 3 se encuentra presente en transfusion and clinical
México) dentro de la clasificación medicine.1992.
filogenética, no deja de ser importante ya
que se pueden presentar híbridos debido a la 2. Organización Mundial de la Salud.
migración del vector ó al mismo hombre Reporte sobre la enfermedad de
llevando consigo al vector; incluso al Chagas. Grupo de Trabao Científico
parásito, creando nuevos híbridos tanto para TDR/GTC/09. Julio 2007.
el vector como para T. cruzi al adaptarse a 3. Dorn PL, Selgean S, Guillot M.
nuevos habitas y huéspedes. Incluso llegar a Simplified Method for Preservation
infestar lugares si no se tiene el control and Polymerase Chain Reaction-
adecuado de los vectores, lo que provocaría amplification of Trypanosoma cruzi
posibles infecciones. El análisis por PCR es DNA in Human Blood. Mem Inst
costoso sin embargo presenta buenos Oswaldo Cruz 1997; 92(2): 253-255.
resultados a diferencia de la microscopia
óptica. 4. Souto RP, Fernandes O, Macedo AM,
Campbell DA, Zingales B. DNA
Conclusión: markers define two major
phylogenetic lineages of
Se encontró la presencia de Trypanosoma
Trypanosoma cruzi. Molecular and
cruzi en vectores colectados en zonas rurales
Biochemical Parasitology. 1996;
del Municipio de Tezonapa, sugiriendo una
83:141–152.
transmisión vectorial activa del parasito en
estas localidades rurales, El linaje I de T. cruzi 5. BEEBE N, COOPER R, FOLEY D, ELLIS
encontrado concuerda con estudios J. Populations of the south-west
realizados por otros grupos donde se ha Pacific malaria vector Anopheles
observado que es el que predomina en farauti s.s revealed by ribosomal
distintos estados del país. Por otra parte, los DNA transcribed spacer
vectores corresponden al grupo 2 dentro de polymorphisms. Heredity 2000;
la clasificación filogenética. Estos resultados 94:244-253.
sugieren una convivencia estrecha con el
vector representando así un riesgo potencial 6. Bargues MD, Klisiowicz RD, Gonzales-
para la transmisión del parásito, por lo que Candelas F, M. Ramsey JM, Monroy
es necesario implementar nuevos programas C, Ponce Carlos, et al.
de control contra el vector que permitan Phylogeography and Genetic
asegurar la calidad de vida de los habitantes Variation of Triatoma dimidiata, the
de estas comunidades. Main Chagas Disease Vector in
Central America, and Its Position
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84
IDENTIFICACIÓN DE UNA ZONA CON ALTA
SEROPREVALENCIA DE INFECCIÓN POR TRYPANOSOMA
CRUZI EN LA ZONA CENTRO DEL ESTADO DE VERACRUZ
: Daniel Guzmán Gómez
Aracely López Monteon
Eric Dumonteil
Angel Ramos Ligonio

Marco teórico: pallidipenis (4). También la presencia de


infección por T. cruzi ha sido documentada
La enfermedad de chagas o tripanosomosis en varias poblaciones humanas. De acuerdo
americana es causada por el parásito a la encuesta nacional de seroprevalencia en
protozoario Trypanosoma cruzi (T. cruzi). los años 80’s, Veracruz fue uno de los
Esta enfermedad representa un problema de estados en México con alta seroprevalencia
salud pública en América latina, en donde la en la población general (≤; 3.0 %) (5).
organización Mundial de la salud estima que También se ha documentado la infección por
aproximadamente 60 millones de personas T. cruzi en donadores de banco de sangre en
esta en riesgo de adquirir la infección y 9-12 la ciudad de Orizaba, Ver. (6). Y casos de
millones de personas están infectadas (1). En cardiomiopatía chagásica crónica se han
México, la enfermedad de chagas es observado en las jurisdicciones sanitarias de
endémica en varias regiones, pero estos Poza Rica Veracruz (7). Otros estudios de la
datos permanecen subestimados, esta distribución de la infección en diferentes
información limitada no es disponible acerca jurisdicciones sanitarias del estado de
de la epidemiología de la enfermedad (2, Veracruz indican que la infección por T. cruzi
3).El Estado de Veracruz, es una de las puede estar ausente en jurisdicciones tales
regiones donde la endemicidad de la como Coatzacoalcos, Orizaba y Martínez de
infección por T. cruzi es poco establecida, la Torre, y una alta seroprevalencia fue
posee un total de 7 millones de personas y es observada en las jurisdicciones de Tuxpan y
dividido en 11 jurisdicciones sanitarias, varias Pánuco (2.8% y 1.6% respectivamente) y en
especies de Triatominos han sido la jurisdicción de Córdoba (1.3%). Además, la
encontrados en el estado, incluyendo detección de la infección por T. cruzi en
algunos con una alta capacidad vectorial, niños menores de 18 años de edad (1.8-
tales como Triatoma dimidiata o T. 5.2%) sugiere la presencia de una trasmisión


Estudiante de Doctorado Universidad Veracruzana Centro de Investigaciones
Biomédicasdaguzman@uv.mx angramos@uv.mx

85
activa del parásito en estas mismas total de 654 muestras que se utilizaron para
jurisdicciones (4). la identificación de anticuerpos especificos
para T. cruzi utilizando cuatro diferentes
Planteamiento del problema: ensayos: dos ensayos de ELISA utilizando
extractos crudos del parásito, un ensayo de
Como se detalló, la enfermedad de Chagas
ELISA utilizando una proteína recombinante,
forma parte de las enfermedades infecciosas
un ensayo de inmunofluorescencia (IFI) y un
presente en el estado de Veracruz, pero su
análisis de Western blot (6). Un cuestionario
importancia y dinámica de transmisión
corto fue aplicado a los participantes acerca
permanece desconocido. Dada la
del conocimiento del vector y de aspectos
importancia en salud pública de esta
clínicos generales.
enfermedad en las Américas, es de suma
importancia llevar a cabo un estudio Resultados:
epidemiológico inicial que proporcioné datos
claves y actualizados sobre la magnitud del De los 654 sueros colectados, la mayoría
impacto de la enfermedad de Chagas y los provenía de mujeres (61%). Todas las
riesgos de transmisión en diferentes muestras fueron tamizadas para la presencia
poblaciones y regiones del estado, utilizando de anticuerpos contra T. cruzi, con un total
una metodología rigorosa y pruebas de 110 muestras positivas con al menos dos
diagnosticas bien establecidas. pruebas, con una seroprevlaencia del 16.8%
(IC 95%=14.2-19.9%). Ciento cinco muestras
Objetivo General: dieron resultados positivos a tres pruebas y
44 fueron positivos solo para una prueba
Actualizar los datos seroepidemiológicos de
(IFI). Las dos pruebas de ELISA y la IFI fueron
la infección por T. cruzi en la zona centro del
congruentes con índices kappa de hasta 0.99
Estado de Veracruz.
± 0.005, sin embargo el Western blot mostro
Metodología: una baja sensibilidad (κ;= 0.56 ± 0.05%).
Adicionalmente, los pacientes que fueron
Es un estudio de tipo experimental y positivos mencionaron que identificaban al
observacional. Diecinueve localidades rurales insecto vector (78.5%) al contrario de los
pertenecientes a los municipios de Tezonapa pacientes negativos (66%).Los análisis de
y Amatlán en la jurisdicción de Córdoba y distribución geográfica de la infección por T.
del municipio de Tierra Blanca en la cruzi, mostraron que la infección se
jurisdicción de Cosamaloapan. En cada concentro en 11 de las 13 localidades del
localidad rural se informó acerca de la municipio de Tezonapa con una
enfermedad de Chagas mediante el apoyo de seropositividad del 28.9%. El porcentaje más
las Unidades Medicas Rurales (IMSS- alto de infección se observó en las
Oportunidades), y los participantes localidades de Caxapa (61.5%) y las Josefinas
interesados donaron una muestra de sangre, (40%), mientras que de las 5 localidades del
previo consentimiento informado. A partir municipio de Tierra Blanca, solamente
de las muestras se obtuvo el suero de cada tuvieron casos positivos las localidades de El
uno de los pacientes, se recolectaron un

86
Moral y Amatlán. Las diferencias observadas conjunto con otros estudios, muestran un
pueden ser atribuidas a factores ambientales excelente reconocimiento en ensayos
tales como tipo de vegetación, uso de tierra, basados con una variedad de fuentes de
humedad y posiblemente a la separación antígenos con sueros de pacientes en México
geográfica de las dos áreas por montañas. La (11, 12).Sobre la base de dos o mas ensayos
ausencia de infección por T. cruzi en Tierra positivos, se detectó un promedio de
Blanca fue asociada a la pérdida de seroprevalencia a la infección por T. cruzi de
vegetación y humedad, y la alta infección en 16.8 % (IC95%= 14.2-19.9%) en esta área de
Tezonapa fue asociada con la presencia de estudio, la cual es considerablemente mas
vegetación tropical. alta que en estudios previos. Se han
reportado en esta jurisdicción rangos de
Discusión: seroprevalencia van de 1.3% en la población
general y de 1.8% en niños menores de 18
El proposito de este estudio fue la
años, sin embargo, el tamaño de las
actualización de la información
muestras es mucho mas pequeño y las
epidemiológica por la infección de T. cruzi en
localizaciones geográficas no se han
la región central del estado de Veracruz. Las
especificado y puede haber diferencias por
muestras fueron analizadas con cuatro
este hecho (4, 8). Interesantemente, no se
ensayos diagnósticos. La concordancia entre
han reportado casos en niños en la
las dos ELISAs y la IFI fue alta, lo cual
jurisdicción de Cosamaloapan (4), y nuestros
representa una alta credibilidad de los
datos parecen confirmar esta observación ya
resultados. Por el contrario, el ensayo de
que no se detectaron casos en el municipio
Western blot parece tener una baja
de Tierra blanca perteneciente a la
sensibilidad porque este solo confirma una
jurisdicción de Cosamaloapan. Sin embargo,
limitada proporción de los casos que
se encontró una alta seroprevalencia en la
resultaron ser positivos con los otros
jurisdicción de córdoba, particularmente en
ensayos. Este bajo reconocimiento del
el municipio de Tezonapa, el cual tiene un
Western blot ha sido observado en previos
promedio significativo de elavada infección
estudios en el estado de Morelos, México, en
en niños. Sobre los datos de un rango de
el cual solamente el 20 % de los casos
transmisión vertical ≤; 10% (13), nosotros
positivos por ELISA fueron confirmados (10),
calculamos arriba de 3.4 % de recién nacidos
y en un estudio con muestras de donadores
infectados por via congénita y posiblemente
de sangre en Orizaba, Veracruz (6).
mas casos relacionados a la familia (14).
Este reconocimiento puede ser debido a un Basado a un total de mil nacimientos por
pobre reconocimiento de los antígenos año, esto podría corresponder
desnaturalizados y sugiere que el Western aproximadamente a 35 niños infectados
blot puede ser un método no apropiado para congénitamente en el municipio de
la confirmación de la infección por T. cruzi. Tezonapa. Nuevamente estos resultados son
Por su parte, la alta concordancia entre los muchos mas altos que los reportados en el
ensayos basados sobre las cepas Y y H1, las noreste del estado de Veracruz, donde
cuales pertenecen a diferentes linajes, y ningún caso de infección congénita fue

87
encontrado en donde la seroprevalencia a la contra Trypanosoma cruzi y su
infección por T. cruzi en mujeres asociacion con factores de riesgo en
embarazadas fue de 3.5 % (15). menores de 18 anos de Veracruz,
Mexico . Rev Panam Salud Publica
Conclusión: 22: 75 – 82.
El promedio de seroprevalencia de infección 5. Velasco Castrejon O , Valdespino JL ,
por T. cruzi fue de 16.8 %, y se identificó al Tapia Conyer R , Salvatierra B ,
municipio de Tezonapa como un región Guzman Bracho C , Magos C , Llausas
hiperendemica, con rangos de A , Gutierrez G , Sepulveda J , 1992 .
seroprevalencia mayores del 45% en la Seroepidemiologia de la enfermedad
población infantil. Estos rangos de de Chagas en Mexico . Salud Publica
transmisión elevados pueden asociarse con Mex 34: 186 – 196 .
una transmisión congénita y vectorial, en
donde estudios adicionales tendrán que 6. Ramos-Ligonio A , Ramirez-Sanchez
realizarse para ayudar a identificar estos ME , Gonzalez-Hernandez JC ,
procesos de transmisión. Rosales-Encina JL , Lopez-Monteon A
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89
EVALUACIÓN DEL POTENCIAL ADYUVANTE DE UN
TOXOIDE DERIVADO DE LISTERIOLISINA O SOBRE
CÉLULAS PRESENTADORAS DE ANTÍGENO HUMANAS
: Diana Magali Viveros Luna
: Alfredo Domínguez López
Leonardo Daniel Enríquez-Tenorio
: Roberto Lagunes Torres
Carmen Sofia Silva Cañetas
Héctor Vivanco-Cid.
Marco teórico: por el patógeno intracelular Gram-positivo
Listeria monocytogenes (LM) denominada
Uno de los aspectos clave en vacunación, es Listeriolisina O (LLO), ha cobrado gran interés
la identificación de estrategias para en el campo de investigación enfocado a la
incrementar la inmunogenicidad de identificación de nuevos adyuvantes y
antígenos. El uso de moléculas adyuvantes y moléculas acarreadoras. LLO es una toxina
acarreadores es sin duda, la estrategia más formadora de poros, con la capacidad de
empleada en vacunación para tal fin. Los unirse a membranas celulares a través de
adyuvantes son a menudo necesarios para colesterol (1). Algunas estrategias se han
crear vacunas eficientes al actuar de una utilizado para incluir a LLO en innovadoras
forma no-específica, mediante la activación formulaciones vacunales experimentales. Se
de uno o más componentes del sistema ha utilizado para facilitar el acceso de
inmune innato, promoviendo inflamación de proteínas pasajeras hacia el citosol de células
bajo grado y de esta forma potenciando la presentadoras de antígeno profesionales
respuesta hacia el antígeno de interés. El (APCs), básicamente para inducir respuestas
conocer los mecanismos por los cuales estos de linfocitos CD8 in vivo e in vitro. (2-3).
actúan, así como la evaluación de aspectos Además de esto, LLO ha sido empleada
básicos tales como la seguridad de su también como una molécula acarreador para
empleo en modelos experimentales animales incrementar la inmunogenicidad de
y posteriormente en el humano, son antígenos del virus de inmunodeficiencia
aspectos muy importantes cuando se humana, (4) antígenos tumorales (5) y
estudian nuevas moléculas candidatos a ser antígenos modelo tales como ovoalbúmina
considerados como adyuvantes y/o entre otras (2). En todas estas propuestas la
acarreadores. administración conjunta de LLO en
combinación con el antígeno de interés (ya
En años recientes, una molécula producida


Estudiante de Licenciatura Instituto De Investigaciones Medico Biologicas Universidad Veracruzana
hvivanco@uv.mx vivacid@hotmail.com

90
sea como proteínas de fusión o bien como maduración de células dendríticas a través
formulaciones de liposomas que encapsulan del análisis de la expresión de moléculas
ambos: LLO + antígenos pasajeros) ha coestimuladoras CD80, CD86, CD40 y la
permitido incrementar la inmunogenicidad expresión de MHC clase II, así como evaluar
de los antígenos de interés, con vigorosa el efecto de detoxLLO en la producción de
respuesta celular (CD4 y CD8), así como una mediadores inflamatorios como el Factor de
notable respuesta inmune humoral. Necrosis Tumoral alfa (TNF-α;), IL-1 e IL-6 en
macrófagos humanos.
Planteamiento del problema:
Metodología:
Una de las limitantes del uso de toxinas
bacterianas como moléculas adyuvantes, lo Tipo de estudio: Básico, experimental. El gen
es el potencial riesgo que representa su de Listeriolisina O ha sido clonado dentro del
actividad biológica en la administración a vector de expresión pET29 por reacción en
seres humanos. LLO posee actividad cadena de la polimerasa. El gen de
citotóxica sobre múltiples estirpes celulares Listeriosina fue modificado en su porción
cuando esta es empleada en altas carboxi-terminal por medio de un protocolo
concentraciones. En el modelo murino, la estándar de mutagénesis dirigida por
inyección vía intravenosa de esta toxina, oligonucleótidos y PCR. La porción conocida
produce un efecto letal cardiotóxico en como región de unión a colesterol
ratones (22). Este efecto adverso está (“Cholesterol Binding Domain”) fue
asociado a la propiedad citolítica de la modificada, insertando tres mutaciones en
molécula, la cual provoca una destrucción los codones que codifican para los
masiva de globulos rojos, así como daño aminoácidos Cisteína en posición 484,
sobre tejidos de múltiples órganos blancos Triptofano 491 y Triptofano 492 de la
(corazón, hígado y riñón entre otros). Con la proteína madura. Se procedió a realizar la
finalidad de explorar si en ausencia de la expresión y purificación de la proteína
propiedad citolítica, LLO aún puede ser un detoxLLO y la proteína LLO nativa para ser
adyuvante-acarreador efectivo en usada como control o referencia. La
vacunación, en el presente trabajo se generó expresión de las proteínas se realizó
y evaluó los efectos de una mutante no lítica transformando la cepa BL21 con los vectores.
de LLO (denominada como detoxLLO), sobre Las bacterias fueron crecidas en medio LB
células presentadoras de antígenos humanas con kanamicina, se adicionó IPTG para
(Celulas Dendríticas y macrófagos humanos), promover la expresión de los plásmidos. Las
enfocándose sobre los parámetros de bacterias fueron cosechadas y sonicadas
maduración de células dendríticas y para liberar las proteínas recombinantes. Se
producción de citocinas inflamatorias. realizó la purificación de las proteínas con
una matriz de afinidad de iones níquel (Ni-
Objetivo General: NTA agarose beads, Qiagen). Se aislaron
células mononucleares de sangre periférica
Evaluar los efectos de una mutante no lítica
humana mediante gradiente de densidad
de Listeriolisina O (detoxLLO) en la

91
empleando Ficoll-hypaque y se sembraron proinflamatorias: TNF-alfa, IL-1 e IL-6 por
en botellas de cultivo celular de 75 cm2 técnica de ELISA.
estériles. Mediante adherencia al plástico se
separaron los monocitos de las células no Resultados:
adherentes. Las células dendríticas
Al comparar la proteína nativa LLO y el
inmaduras se obtuvieron al incubar los
toxoide generado (detoxLLO), ambas
monocitos humanos purificados, en
moléculas indujeron significativos niveles de
presencia de GM-CSF 200 ng/mL e IL-4 50
citocinas inflamatorias humanas en
ng/mL durante 7 días a 37OC con 20 mL de
macrófagos humanos con una tendencia de
medio RPMI suplementado suero fetal
detoxLLO a inducir niveles más elevados de
bovino al 10%. Para la obtención de
mediadores inflamatorios. La producción de
macrófagos humanos, los monocitos
TNF-alfa alcanza su pico máximo de
purificados por adherencia fueron incubados
producción (1620 pg/ml de TNF-alfa) a las 24
con medio RPMI 1640 con suero fetal de
horas en macrófagos estimulados con 500
bovino descomplementado al 10% y suero
ng/ml de LLO nativa. La misma concentración
humano al 2%. Las células se incubaron a
de detoxLLO (500 ng/ml) indujó niveles
37°C y 5% CO2 durante 6 días. Células
superiores de TNF-alfa a las 24 horas (1830
dendríticas inmaduras (500,000) fueron
pg/ml de TNF-alfa. La producción de IL-1 a
estimuladas con 500 ng/ml de detoxLLO o
las 24 horas en macrófagos estímulados con
LLO nativa durante 24 horas en placas de
LLO nativa registró un valor promedio de
cultivo de 24 pozos. Las células fueron
1200 pg/ml, niveles inferiores a los
recolectadas y centrifugadas a 1500 rpm
obtenidos para los macrófagos estimulados
durante 5 minutos. Las células se
con detoxLLO (1546 pg/ml). Para IL-6 los
resuspendieron en 100 µl de solución de
valores obtenidos fueron muy similares entre
bloqueo y se incubaron a 4 C durante 1 hora.
ambas proteínas (880 pg/ml para
Posteriormente las células se incubaron con
macrófagos estimulados con LLO nativa, y
los siguientes anticuerpos monoclonales
960 pg/ml de detoxLLO). Al comparar ambas
anti-CD80-FITC, anti-CD86-PE y anti-CD40-
proteínas por su potencial de inducir la
FITC y contra moléculas del MHC clase II en
maduración de células dendríticas humanas,
solución de tinción y analizarlas por medio
se observó un aumento en la expresión de
de citometría de flujo. Determinación de
las moléculas co-estimuladoras CD80, CD86,
citocinas inflamatorias en el sobrenadante
CD40 y MHC clase II para las 24 horas, en
de macrófagos humanos estimulados con
comparación con células dendríticas
detoxLLO: Macrófagos humanos (500,000
humanas sin estimular. La expresión de estos
células) fueron estimulados con 500 ng/ml
marcadores fue mayor en las células
de detoxLLO, LLO nativa o con 100 ng/mL de
estimuladas con detoxLLO que las
LPS de E. coli como control positivo, durante
estimuladas con la preparación de LLO
24 horas en placas de 24 pozos. Al término
nativa, aunque la intensidad media de
de este tiempo se recuperaron los
fluorescencia fue menor a la registrada por
sobrenadantes y fueron congelados a -20 C
células dendríticas humanas estimuladas con
hasta analizar la producción de citocinas

92
100 ng/ml de Lipopolisacarido. antígeno humanas a secretar mediadores
inflamatorios como TNF-alfa, IL-1 e IL-6, así
Discusión: como la expresión de moléculas de
coestimulación como CD80, CD86, CD40 y
Los resultados obtenidos en el presente
MHC clase II, lo cual abre la posibilidad de
trabajo permiten confirmar que la capacidad
utilizar esta molécula como un adyuvante
de inducir la activación de células del sistema
eficaz y seguro en vacunación.
inmune innato humanas de la proteína LLO,
es independiente de su actividad citolítica. El Referencias Bibliográficas:
toxoide generado en el presente trabajo
(detoxLLO), conserva sus propiedades 1. Palmer, M. The family of thiol-
inmunogénicas, con ligera tendencia a activated, cholesterol-binding
promover una mayor cantidad de cytolysins. Toxicon. 2001. 39:1681.
mediadores inflamatorios en macrófagos
humanos estimulados durante 24 horas. De 2. Darji A, Chakraborty T, Wehland J,
igual forma que para los mediares Weiss S. Listeriolysin generates a
inflamatorios, detoxLLO conserva su route for the presentation of
capacidad de inducir la expresión de exogenous antigens by major
marcadores de maduración celular en células histocompatibility complex class I.
dendríticas humanas, uno de los aspectos Eur J Immunol. 1995. 25(10):2967-
claves que se sabe, permiten el inicio de la 71.
inmunidad adquirida. Es probable que las 3. Lee KD, Oh YK, Portnoy DA, Swanson
tendencias observadas de mayor producción JA. Delivery of macromolecules into
de mediadores inflamatorios y una mayor cytosol using liposomes containing
expresión de moléculas de coestimulación, hemolysin from Listeria
se expliquen por su reducción en su monocytogenes. J Biol Chem. 1996.
potencial citotóxico per se, lo cual permitiría 271(13):7249-52.
que un mayor número de células en cultivo,
sobrevivieran por más tiempo en el cultivo y 4. Bu Z, Ye L, Skeen MJ, Ziegler HK,
por tanto siguieran produciendo una mayor Compans RW, Yang C. Enhancement
cantidad de mediadores inflamatorios en el of immune responses to an HIV env
sobrenadante o una mayor expresión de DNA vaccine by a C-terminal
moléculas de coestimulación en las células segment of listeriolysin O. AIDS Res
en cultivo. Hum Retroviruses. 2003. 19(5):409-
20.
Conclusión:
Neeson P, Pan ZK, Paterson Y.
El toxoide generado a partir de la molécula Listeriolysin O is an improved protein
Listeriolisina O nativa, conserva sus carrier for lymphoma
propiedades inmunogénicas, al inducir la immunoglobulin idiotype and
activación de células presentadoras de provides systemic protection against

93
PATRON DE SUSCEPTIBILIDAD DE MICROORGANISMOS
AISLADOS EN UROCULTIVOS EN LA UNIDAD DE
SERVICIOS ANALITICOS DE SALUD BIOANALISIS
(USASB). ENERO 2007, DICEMBRE 2009 XALAPA
VERACRUZ.
Jose de Jesus Daniel López Muñoz
Claudia Belen Ortega Planell
Omar Lagunes Merino
Andy Arceo Rodríguez

microorganismo que estaba presente antes


Marco teórico: de iniciarse el tratamiento, es decir se debe a
la persistencia del microorganismo en el
Las infecciones del tracto urinario se definen tracto urinario. La reinfección es un nuevo
como un grupo de condiciones que tienen en efecto con un microorganismo diferente de
común la presencia de un número la bacteria original, aunque en ocasiones
significativo de bacterias en la orina. Las puede ser el mismo agente bacteriano. El
infecciones agudas de las vías urinarias se uso indiscriminado de antibióticos por parte
pueden subdividir en dos grandes categorías de la población, ha causado el incremento de
anatómicas: la infección de las vías la resistencia de diversos agentes causales de
superiores (uretritis, cistitis y prostatitis) y la IVU. La resistencia bacteriana es un tema
infección de las vías superiores (pielonefritis trascendental en salud pública dado que es
aguda, absceso renal y perinéfrico). En la de vital importancia el conocimiento de los
mayor parte de los casos, el crecimiento de perfiles de susceptibilidad antimicrobiana
101 unidades formadoras de colonias por encaminados a la orientación para la
mililitro (ml), puede ser clínicamente elaboración de esquemas de tratamiento
importante especialmente en niños y en eficaces. La flora de los pacientes
especímenes obtenidos por catéter urinario; hospitalarios es muy distinta a la de la
cualquier crecimiento patógeno es comunidad, esto se debe a la
considerado clínicamente importante si fue multirresistencia presentada por los agentes
obtenido por aspiración supra púbica. La causales de enfermedades en los pacientes
infección del tracto urinario puede ser hospitalizados y a la modificación de la flora
recidivante, que pueden ser recaídas o debido a la colonización por
reinfecciones. La recaída se refiere a la microorganismos propios de la flora
reactivación de la infección con el mismo nosocomial de gran patogenicidad. Los


Docente y Profesional de la salud Universidad Veracruzana Facultad de Bioanálisis
jojedanlm@hotmail.com asiolita@yahoo.com.mx

94
microorganismos que se aíslan con mayor urocultivos en el USASB de agosto del 2008 a
frecuencia son los bacilos Gram negativos y diciembre del 2009.
los estafilococos. De acuerdo a diversos
estudios realizados en nuestro país, las Metodología:
bacterias Gram negativas son las El tipo de estudio fue observacional,
responsables de las IVU y los antimicrobianos descriptivo y transversal. Se llevó a cabo en
evaluados con mayor porcentaje de la Unidad de Servicios Analíticos de Salud
susceptibilidad son el ceftibuten y la
Bioanálisis, durante el periodo de agosto del
netilmicina en cambio, la ciprofloxacina,
trimetoprim-sulfametoxazol, amikacina y la 2008 a diciembre del 2009 una evaluación de
levofloxacina representaron los antibióticos 138 muestras de urocultivos.Se estudiaron
con mayor resistencia (Barriga Angulo y cols. 138 muestras de las cuales 34 fueron
2008). positivas. Los aislamientos fueron
En un estudio llevado a cabo en el Instituto caracterizados a nivel de género y especie
Nacional de Pediatria (2002) no se
con base a las técnicas reco-mendadas por la
encontraron diferencias significativas en la
resistencia de bacterias Gram negativas y el Sociedad Americana de Microbiología. Con
uso de ciprofloxacina, cefepime y respecto a la sensibilidad se utilizaron
ceftriaxona. diferentes antimicrobianos: Cefalotina,
Netilmicina, Nitrofurontoina, Amikacina,
Planteamiento del problema: Ampicilina, Carbenicilina, Meropenem, Acido
Nalidixico, Trimeto/Sulfame,Pefloxacina,
De acuerdo a cifras reportadas por diversos
Cefotoxima, Cefoperaxone, Gentamicina,
estudios, la incidencia anual de infecciones
Nitrofurontoia. Para la determinación de la
en vías urinarias es de 0.5 a 0.7 casos por
paciente. En Norteamérica, cada año se susceptibilidad antimicrobiana, se llevaron a
enferman ocho millones de personas, cabo los procedimientos recomendados por
representando 100, 000 ingresos el Instituto de Estándares de Laboratorios
hospitalarios. En México, la morbilidad Clinicos (CLSI) de Estados Unidos de América,
debido a las IVU se encuentra dentro del utilizando la técnica de difusión con sensi-
tercer lugar, solo por debajo de las
discos (Kyrbi-Bauer) en agar de Müeller
infecciones respiratorias y diarreicas. En
cuanto al ambiente hospitalario, las IVU Hinton.Para el análisis de los datos se
contribuyen la etiología de las infecciones elaboró una base de datos en el programa
nosocomiales y se asocia con las insuficiencia Microsoft Excel 2007® y posteriormente se
renal crónica. Por esta razón, se hace realizó estadística descriptiva para calcular
necesaria la determinación de la frecuencias absolutas y relativas.
susceptibilidad de los agentes causales de
IVU, con la finalidad de conocer el patrón de
resistencia/sensibilidad en la población que Resultados:
acude a la Unidad de Servicios Analíticos de
Salud Bioanálisis (USABS). Fueron un total de 231(100%) muestras de
urocultivos, se obtuvieron 163(70.56%)
Objetivo General: positivas y 68(29.43%) negativas; los
microorganismos que se aislaron con mayor
Determinar la susceptibilidad de diferentes
antibióticos en microorganismos aislados de frecuencia fueron los siguientes: Klebsiella

95
oxytoca, Escherichia coli, Proteus mirabilis, para uso empírico y teniendo en cuenta el
Proteus vulgaris, Pantoea agglomerans, costo-beneficio podrían ser una herramienta
Pseudomonas sp, Staphylococcus útil a la hora de tomar una decisión
terapéutica. La elección de un antibiótico
saprophyticus, Enterococcus faecalis.
para el tratamiento de la infección de vías
urinarias requiere un conocimiento de las
bacterias más frecuentes y su perfil de
Discusión: resistencia bacteriana. La ampicilina debe ser
eliminada como opción terapéutica inicial
Más del 95 % de la IVU son causadas por dada la alta tasa de resistencia que
bacilos gram negativos y entre ellos las presentan los patógenos más frecuentes.
entero bacterias, de las cuales Escherichia
coli es la más frecuente. En este estudio Referencias Bibliográficas:
Escherichia coli es reconocida como el
microorganismo que se aisló con mayor Alfaro F. E. (2005). Pruebas presuntivas del
frecuencia. El porcentaje de aislamiento de analisis de orina en el diagnstico de infeccion
Escherichia coli es similar a los resultados de vias urinarias. [En línea]. Disponible.
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estudio, se corrobora de acuerdo con otros http://www.scribd.com/doc/16795848/Infec
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parte de los casos de IVU es la Escherichia http://www.diariosalud.net/index2.php?opti
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