Biología Molecular:

Replicación del ADN

Estructura de Genes, Transcripción
y Procesamiento del ARNhn

Pedro A. Moreno

Escuela de Ingeniería de Sistemas y Computación

Facultad de Ingenierías
Universidad del Valle
Cali, COLOMBIA
REPLICACION DEL ADN
Fisión Binaria Ciclo Celular
en Procariotes en Eucariótes
Maquinarias Moleculares Asociadas
Experimento de
Meselson y Stahl
Experimento de Meselson y Stahl
 Características Generales de la Replicación

1. Orígen de replicación
2. Bidireccional
3. Hebra continua Hebra discontinua
4. Semiconservativa
5. Dirección 5’ 3’
6. DNA polimerasa I / II / II : procariotas
7. DNA polimerasa α / β / δ: eucariotas
8. Una batería de moléculas accesorias
9. Fases: Iniciación, Elongación, Terminación
 Sitio de Iniciación en Virus y Bacterias
1) Ori (Origen de replicación): O
2) Term (Sitio de terminación): T
Ori

Ori
Virus
y
Bacterias

Ter

Sitio de Iniciación en Eucariótes

Telómero Telómero

T O T O T O T O T
Eucariotas
Replicón R R
Sitio de Iniciación en Eucariótes
Sobrevisión de la Replicación
 Iniciación de la Replicación del ADN Bacteriano
A

1. Iniciación

1) Dna A (Relaja)

B Helicasa (abre )
C

DNA B + C
SSB
J
K SSB SSB B+C

SSB: Proteínas de unión a cadena SSB

sencilla (Single strand binding)
 Elongación de la Replicación del ADN Bacteriano

J
Primasa
K 5’ 3’ Dna G
(ARN pol)
B+C 3’ 5’

Ojal de Replicación

2. Elongación

5’ 3’
GIRASA
5’ 3’ 5’
Topoisomerasa I
5’ 3’ Girasa
GIRASA
3’ 5’
 Elongación de la Hebra Continua

DNA pol III + Dna G + Girasa

(Primasa) o ARN - pol DNA
Dirigido o Iniciador (Primer)
+
Topoisomerasa I
Replisoma
3’
5’

3’ 3’

5’

5’
 SSB Hebra continua
3’
DNA POL - III
5’
3’

5’ RNA RNA RNA

5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’
3’
5’
1000-2000 pb 1000-2000 pb

Hebra discontinua
 DNA Pol III
RNA
(Nick translation)
Corta y cambia:RNA
por DNA
DNA POL - I
 Terminación de la Replicación del ADN Bacteriano

3. Terminación

DNA LIGASA
Dependiente de ATP
ESTRUCTURA DEL GEN
PROCARIOTE
 Estructura del Gen Procariote

Un gen Procariote yace en una región que se llama la

UT (Unidad de Transcripción. La que se transcribe)

Tiene 2 regiones
Región codificante: Donde se codifica el gen
Región Promotora: sitio a partir del cual se
transcribe y se regula el gen

SIT: +1 Sitio de Inicio de la Transcripción. Punto

limitante entre la región codificante y la región
promotora (Start point = sp)
 Estructura del Gen Procariote

3’ 5’

5’ 3’ Convenciones:

UT: Unidad de transcripción

SIT: Sitio de iniciación de
la transcripción

Región UT Región
UTR: Región no traducida
( 5´o 3´)
Promotora Terminadora CI: Codón de iniciación
CT: Codon de terminación
( RP ) Región Codificante ( RT ) STT: Sitio de terminación de
( RC ) la transcripción
TTS: Transcription termina-
tion site.
5’ UTR 3’ UTR
3’ 5’
Región no traducida
5’ 3’
+1 CI (ATG) CT STT ≈ TTS
SIT
 Estructura del Promotor Procarióte

• Región O (operadora): Se pega al

7-8 nucleot. Represor (Impide que
3’ se abra el ADN, se una la RNA pol
y por ende, que se Transcriba el
5’ gen)
+1
Control SP • + 1SP: “Punto de arranque”
Caja
positivo Pribnow También se llama sitio SIT
(Sitio de Inicio de la
Caja Caja
CAT Control negativo Transcripción): Sitio en el cual
CRP
entra el primer nucleotido en el
Región O RNAm.
• Se abre el ojal de transcripción
-65 -35 -10 -2 -1 + 1 para la transcripción del gen.

Proteína Secuencia • Caja Pribnow: tetranucleotido

CRP CRS Represora del Represora del rico en AT.
Catabolito Catabolito
 Estructura de la Región 5´UTR

5’UTR

+1 CI (AUG)

20 - 60 pb 5’ UTR 3’UTR
CI “Se transcribe pero no se traduce”
* Espacios conectores
* *
10 pb
+1
RBS ARNr + proteína
Sitio de Unión al Ribosoma
Ribosoma
Poly - Purinas A - G
S/D RBS: (Del inglés Ribosomal
Secuencia Shine/Dalgarne Binding Protein)

Se une al 3’ARNr 16s (subunidad menor)

 Estructura de un Policistrón (OPERON)

Promotor CI CT

Tres Genes
1 2 3
CI CT CI CT CI CT

RNAm
5’
Región Intercistrónica larga:
3’
diferentes ribosomas traducen

ARNm
5’
3’
> 1 gen: - Policistrónico Región intergénica corta
- Un operón E. Coli: tiende a tener promotores
con 3 genes en promedio
 Estructura de la Región Terminal
Región Terminal
CT STT

5’ 3’ UTR 3’

SDR: Señal de degradación

del RNA m = Ribonucleasa o RNasa

Se descompone en sus partes

Factor de terminación de la transcripción:

STT: ρ dependiente GC: ρ independiente Terminales

intrínsecos
STT: ρ independiente GC: ρ dependiente

Fígura hexaménica de proteínas

TRANSCRIPCION
EN PROCARIOTES
Características Generales de la Transcripción
en Procariótes

1. Unidad de transcripción: Secuencia promotor

y región codificante.
3. ARN polimerasa core
4. Moléculas accesorias:
- Subunidad sigma, subunidad rho
4. Hebra codificadora Hebra no codificadora
5. Es simultánea en procariótes junto con la
Traducción
6. Síntesis del ARN en la dirección 5’ 3’
7. Fases: Iniciación, Elongación, Terminación
La ARN Polimerasa Bacteriana
Subunida P.M. Función
d (kDa)
β 150 Toma la hebra
codificante o
β' 160 templado
Toma los
ribonucleótidos
2α 2(40) Unión al promotor

σ 32-90 Iniciación

ρ 6(46) Terminación ρ
dependiente
A

B
REGULACION DE LA
TRANSCRIPCION EN
PROCARIOTE
 1) + Glucosa Operón
- Lactosa apagado
ARN polimerasa no puede unirse

Promotor Represor se une al operador

Gen
Plac Operador
z
o DNA
Represor activo

Inductor
2) - Glucosa Operón (Lactosa)
+ Lactosa encendid o

Unió n de la ARN polimerasa Inductor se une al represor

Represor no puede unirse
Plac
o z
Transcrip ció n
Transcrito de ARNm
Plac
o z
ESTRUCTURA DEL GEN
EUCARIOTE
 Estructura del gen Eucariote:
Tres Tipos de Genes

Existen 3 clases de genes transcritos por 3 ARN pol

diferentes: ARN pol I, II y II

Genes
ARN pol I: Nucleolo ARNr Clase I

ARN pol II Nucleoplasma ARNm ClaseII

ARN pol III Nucleoplasma ARNr 5S (excepción)Clase III

ARNnp
ARNt
 Estructura del Gen Eucarióte:
Clase I
UT
RP RT
RC
+1
CI CT IRE ARE
5’

3’
5’ UTR 3’ UTR 3’ DFR
5’ UFR DCR
UCR SP DCE
UCE CI
+1 AAUAAA

SI + 10 cap Secuencia Líder:

IRE ARE
Proteínas que atraviesan la
membrana y aa hidrofóbico
7 metil guanosina
Elemento rico
50 pb Rico en AU
en hierro
Elemento rico en AU
Asa 5’ Depende del hierro
Paradegradadar el RNAm Secuencia consenso
Desestabiliza el poly A
 Estructura Básica del Promotor - Clase II
5’ 3’

3’ 5’ RP = Región Promotora
+1
sp
RR = Región Reguladora
Caja TATA
-65 -35
Hexapleta rica en AT
Elementos de Caja Caja Caja Se regulan lo genes caseros
respuesta CAAT TATA GC (“House Keeping genes”)

Existen: - Elementos de respuesta a estrógenos, corticoides, glucocorticoide

- Dependientes del tejido
- Se pegan factores inducibles a esta región promotora o fuera de
ella. Puede haber otras cajas dependiendo del tipo de gen y
también los genes especializados como los morfogenes o como
los genes homeóticos (desarrollo) o de diferenciación
 Estructura de la Región Codificante - Clase II

Exón n Intrón Exón n+1

5’BD’ 3’BA’ BD: brazo dador Empalmar

AG BA: brazo aceptor Exones
GT

GU AG GU AG GU AG

Regla GU - AG: SR: Sitio de ramificación

(Branch site)
Secuencia Consenso: al
inicio y al fin del intrón SITIO DE RAMIFICACION

TACTA A C
Se localiza a 2/3 longitud del intron
X: 5 intrones (mamíferos) Siempre presente BS: - Consenso
X: 2 intrones (Otros organismos) - Rica en pirimidina (T y C)
 Amplificadores y Silenciadores
(ENHANCERS – SILENCERS)
RP SP
+1

Amplificador
*
Amplificador
Silenciador

Silencian a los enhancers Regulación temporal y tejido especifica en

los Genes Clase I y Clase II
o amplificadores de expresión

Ejemplo: Amplificador: - Secuencia consenso

*: Hígado : Glucogenasa - Región amplificadora del gen
- Ubicua: Puede estar hasta dentro de los intrones
excepto en los exones
 Estructura del Gen Eucarióte - Clase I

Core del promotor

-110 -40 -10 SP +1
28 S 5.8 S 18 S
-170 GC
Se transcriben en tandem
-70 pb

Región espaciadora entre core promotor y la región UCE (elementos de codificación no traducidos)

Ribonucleasas

En procariotas están organizados los genes para ribosomas de igual manera

que los eucariotas con la excepción de que hay 1000 y 2000 copias en
tandem del mismo gen
Estructura del Gen Eucariote - Clase III

SP
+1
5’ 3’

3’ 5’
Octámero ARNtala ARNt
met

PSE TATA

RP RC
UT

Box A Box C

Se une la RNA pol III

90 pb ≅
Procesamiento del Gen Eucariote - Clase III

ARNt ala ARNr 5S ARNt met

Ribonucleasa
Descubrimiento de los Genes Interrumpidos
 Características Generales de la Transcripción
en Eucariótes de los Genes Clase II
1. Unidad de transcripción: Secuencia promotor
y región codificante.
3. ARN polimerasa II
4. Moléculas accesorias: - Factores de Transcripción
4. Hebra codificadora Hebra no codificadora
5. Es sucesiva respecto a la traducción
6. Síntesis del pre-ARNm en la dirección 5’ 3’
8. Fases: Iniciación, Elongación, Terminación,
Protección del ext. 5´, Poliadenilación del ext. 3´,
Eliminación de Intrones y Empalme de Exones,
Transporte del ARNm al Citoplasma.
Procesamiento del pre-ARNm Clase II
Tipos de Procesamientos de pre-ARN
Secuencias Concenso de un Intrón
Típico Clase II
ARN Polimerasa II de Levadura
 Formación del
Complejo de Iniciación
de la Transcripción
de los Genes Clase II
A

B
Maquinaría Molecular
del Esplaiceosoma
y Procesamiento
del pre-ARNm
Uniones Específicas de las RNPs
Reacciones en el
Esplaiceosoma
de los pre-ARNm
Clase II
Estructura de un Gen Interrumpido
Eucariótico Clase II
Complejo de Terminación
de la Transcripción en
los Genes Clase II
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
DEL ARNhn
El Transcripsoma
Activadores Interactuando con el Complejo
de Iniciación en los Genes Clase II
Flujo de la Información
Genética Intracelular
en Eucariótes
Complejo de Iniciación
de la Transcripción en
los Genes Clase I
Complejo de Iniciación
de la Transcripción en
los Genes Clase III
 BIBLIOGRAFIA

Lodish, H; Baltimore, D; Zipursky, L.; Matsudara, P.; Darrell, J.

Molecular Cell Biology. Third Edition. Scientific American
Books New York, 1997.

Lewin, Benjamin. Genes VII. International Student Edition.

Oxford University. Press, Inc. Nex York, 1999