Manual de Lab Oratorio de Micologia

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Que el alumno realice tinciones comunes de hongos y se entere
de los métodos especiales que existen para tinciones de los mismos.
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V
Existen sobre la tierra, aproximadamente, 2 millones de seres
vivos, y entre 80, 000 y 100, 000 constituyen el grupo formado por los
hongos. La mayoría de ellos son tan pequeños que pasan inadvertidos,
pero poseen una capacidad extraordinaria de vivir a expensas de los
otros seres; en algunos casos forman verdaderas simbiosis y en otros
los parasitan definitivamente.
El hombre no está excluido del ataque de los hongos. Estos lo

perjudican directamente cuando le causan una enfermedad e
indirectamente cuando atacan plantas ú tiles o cultivos, objetos o
artefactos costosos, arruinándolos definitivamente en muchos casos.
La agricultura se ve seriamente comprometida si no se combaten

las micosis de las plantas, como el tizón del trigo y las papas, o no se
impide la proliferación de diferentes tipos de hongos en sitios de
almacenamiento por ejemplo silos trigueros, etc.
Muchos productos manufacturados, tales como telas, cueros,

muebles y productos alimenticios, son atacados por los hongos que
proliferan rápidamente, inutilizándolos parcial o totalmente. No existen
productos biológicos y a veces minerales que no sean invadidos por los
hongos. ¿Quién no ha observado soluciones salinas en los laboratorios
que han sido invadidas por mohos? Especialmente las soluciones ácidas
presentan crecimientos fúngicos en su superficie, no así las alcalinas.
La ganadería también tiene problemas de micosis que pueden ser

superficiales como las tiñas o profundas como la histoplasmosis.
También los animales faenados presentan buen sustrato para los
hongos; ya que existe un extenso capítulo en la literatura micológica
dedicado a las micosis de las carnes.
El hombre se ve afectado por los hongos cuando estos le provocan

enfermedades que pueden ser leves como las dermatomicosis o graves
como las paracoccidioidomicosis.
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Xasta ahora hemos considerado el aspecto negativo de la actividad

fúngica respecto del hombre, pero este también sabe utilizarla para su
provecho como en la industria de los medicamentos y ciertos alimentos.
¿Quién no conoce el extraordinario aporte a la medicina con el
advenimiento de los antibióticos? ¿Quién no gusta de un buen vino o
cerveza o un sabroso queso Roquefort o Camemebert?
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V Todos son heterótrofos (quimioorganotróficos) por lo que

tienen que alimentarse de materia orgánica preformada que utilizan
como fuente de energía y de carbono.
V Yon eucariotas, es decir, presentan un núcleo diferenciado
con membrana bien organizada.
V Tiene una pared celular formada por quitina; esta pared es
rígida, por lo que no pueden fagocitar alimentos sino que absorben
nutrientes simples y solubles que obtienen al desintegrar polímeros
mediante enzimas extracelulares llamadas despolimerasas.
V La estructura fúngica consta de un complejo llamado talo o
micelio (fig.1), que a su vez está constituido por múltiples filamentos
o hifas (r r o mohos) o, menos a menudo, por estructuras
unicelulares o levaduras (
); estas últimas se
reproducen por gemación (
r

) y muy rara vez
por fisión binaria ( r
r
), también son una
excepción los Chytriomycetes, formados por células redondas
grandes con rizoides, y los mohos mucilaginosos, que carecen de
pared celular y pueden alimentarse por fagocitosis (Fig. 1).
Fig 1. Estructura del talo o micelio de mohos y levaduras y de dos

formas poco frecuentes.
V
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Está constituido por

dos partes: a) talo
vegetativo que asegura el
desarrollo, nutrición,
fijación y edificación de la
parte reproductora y b)
talo reproductor donde se
forman los órganos de
reproducción. Puede estar
representado por hifas,
levaduras o pseudohifas
(blastosporas que no se
separan) (fig. 2).
Fig. 2. Fase micelial y de levadura con talo reproductor y

vegetativo.
Yi el talo está disociado, se produce n colonias de levaduras de

crecimiento rápido, consistencia cremosa y que se resiembra como las
bacterias en puntos o estrías. Yi el talo es filamentoso da lugar a
colonias de mohos de crecimiento centrífugo, con filamentos aéreos
entremezclados, mas o men os largos, o agrupados de manera compacta,
con superficie glabra recubierta de vello fino, el crecimiento es lento
salvo en hongos oportunistas.
Los hongos que tienen una fase parasitaria levaduriforme y una

saprofítica micelial, y que en respuesta a camb ios ambientales pasan de
una fase de 20 a 25ªC a la fase de levadura a 37ªC o viceversa, se
llaman dimorfos (fig. 1).
V V V
Los hongos presentan diferencia en su forma y constitución,

importantes para diferenciarlos: dilataciones o vesí culas; órganos de
resistencia o clamidosporas; órganos de fijación como rizoides y
apressorium, hifas en espiral o tirabuzón; órganos nodulares formados
por hifas torcidas en forma de nudo; hifas en raqueta, con un
ensanchamiento en un extremo; candelabros fávicos (hifas en cuerno o
asta) que estan dados por varias ramificaciones al final de una hifa;
hifas pectinadas o en forma de peine; hifas peridiales, que son
ensanchadas y multiseptadas con terminación en espiral (fig. 3) y
acumulación de muchas hifas (esclerotre o esclerocio), cuyo objetivo es
almacenar sustancias de reserva. Otras agregaciones miceliales son los
coremios y sinemas (con órganos de fructificación y sin ellos,
respectivamente) o estromas redondeados fértiles y asexuados como los
°
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picnidios, o sexuados como el apotecio (aspecto de copa), peritecio y

cleistotecio (con ostiolo y sin él respectivamente.)
Fig. 3. Modificaciones microscópicas del talo
,V
Para comprender los mecanismos biológicos de adaptación y de

invasión de los hongos cuando producen una enfermedad al hombre, es
necesario describir someramente los fundamentos de la biología de los
mismos.
A los hongos se les considera como plantas por que poseen

membrana celulósica pero carecen de la función clorofílica que es l a
condición fundamental para ser incluidas dentro de los vegetales. Yu
nutrición es parecida a la de los animales, siendo heterotróficos como
ellos, se reproducen mediante esporos y por eso se parecen a ciertos
vegetales autotróficos como los helechos. Por lo tanto, participan de las
características de los vegetales y de los animales.
Por su carácter de heterotróficos se ven obligados a alimentarse de

sustancias orgánicas preformadas, viviendo muchos de ellos como
saprofitos en el suelo, sobre las plantas, en aguas, etc., son los
principales mineralizadores de sustancias orgánicas.
Otros son parásitos de plantas y animales, entre ellos el hombre;

su adaptación al parasitismo obligatorio es la causa de muchas
enfermedades leves o graves de dichos seres.
Algunos pueden vivir como parásitos y como saprofitos; entre ellos

están algunos hongos que causan enfermedades al hombre por ejemplo
°
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los Dermatofitos, que han sido aislados del suelo en todas partes del
mundo.
) V
Un esporo o un trozo de micelio ge rmina y origina una

prolongación que va creciendo apicalmente y forma ramificaciones. Este
crecimiento se denomina micelio o cuerpo del hongo.
Cada célula de micelio consta de una pared, que encierra

protoplasma y uno o varios núcleos (fig. 4). Dicho mic elio mide algunos
micrones, de 5 a 20a de diámetro. En cada una de las células que
constituyen el micelio se producen enzimas que difunden hacia el medio
externo
simplificando el
sustrato sobre el
cual se encuentra
el hongo y estas
sustancias
simplificadas
difunden hacia al
anterior de la
célula donde
participan en los
procesos
metabólicos del
hongo.
Fig. 4. Esquema estructural de los hongos
La célula fúngica tiene las características típ icas de las eucariotas:

un núcleo con cromosoma, una membrana nuclear y organelos
citoplasmáticos, como las mitocondrias y el retículo endoplásmico (fig.
4). Normalmente, los hongos se encuentran en estado haploide aunque
pueden formarse núcleos diploides por fusión nuclear, durante el
proceso de la reproducción sexual. La estructura de la célula consiste
en la pared celular (rígida) y la membrana citoplásmica, en la que
predomina el ergosterol. Por el contrario, en las membranas de los
mamíferos el esteroide predominante es el colesterol. La estructura
química y antigénica de la pared celular es muy distinta a la de las
células bacterianas ya que no contiene péptidoglucano ni ácidos
teicoicos derivados del glicerol ni del ribitol, ni tampoco
lipopolisacáridos. En su lugar se encuentra péptidomanano, glucano y
quitina, asociados, muy estrechamente entre sí y a las proteínas
estructurales.
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Reproducción sexuada de una levadura perfecta con formación de

un asco con ascosporos en su interior. A, levaduras de polaridad
opuesta. B, emisión de mamelón copulativo. C, formación del tubo
copulativo. D, plasmogamia y cariogamia. E, mitosis y formación de dos
núcleos sexuados. F, formación de cuatro núcleos. G, formación de
cuatro ascosporos.
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Existen hongos que en determinado momento de su ciclo biológico

se reproducen sexuadamente mediante la conjunc ión de micelios de
distinta polaridad (plus + y minus -) o mediante verdaderos gametos
diferenciados, tales como el anteridio y el oogonio, dando lugar a la
formación de huevos o cigotos o esporos asexuados.
Como se ha enunciado anteriormente, la activida d biológica y la

morfología que caracteriza a un hongo a lo largo de su ciclo biológico,
son las bases sobre las cuales se asienta el reconocimiento o
identificación de la especie.
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Yolución aclarante :
a.V MOX (del 10 al 30%)
b.V NaOX (del 10 al 30%)
Función:
Con la utilización de la solución aclarante las proteínas, grasas y

muchos polisacáridos del sustrato son solubilizados (hidrolizados) y los
tejidos aparecen óptimamente claros. Las paredes celulares de la mayor
parte de los hongos permanec en intactas a causa de la resistencia a los
álcalis de los glucanos.
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Portaobjetos
Cubreobjetos
Asa de platino o micromel
Porta asa
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Mechero bunsen
Microscopio
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Cualquier alimento u objeto que tenga hongos
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1.V Flamear y enfriar el asa

2.V Poner una gota de solución aclarante sobre un portaobjetos
3.V Tomar una asada de su muestra biológica y depositarla sobre la
gota de solución aclarante
4.V Cubrir la preparación con un cubreobjetos
5.V Flamear el asa
6.V Observar al microscopio la preparación con seco débil y seco
fuerte
7.V Anotar sus observaciones macroscópicas y microscópicas
8.V De la misma forma montar las preparaciones necesarias hasta
tener 50 observaciones.
03& No olvide limpiar su mesa de trabajo antes y después de la

práctica, así como también su microscopio y no depositar la basura en
los lavabos. V
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V : levaduras, candida, etc.
V ' : onjunto de filamentos o hifas que se desarrolla a

partir de un esporo y que constituye el cuerpo del hongo. Puede ser
filamento continuo o tabicado.
-6 cada filamento que constituye el talo pluricelular o micelio
6 sinónimo de talo
6 crecimiento que caracteriza a ciertas especies de

hongos levaduriformes cuando se desarrollan en condiciones
determinadas.
V
': órganos de reproducción del hongo: pieden der sexuados o
asexuados.
': cuando se originan dentro de un ór gano de reproducción,

ejemplo: esporangio.
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' 6 cuerpo de fructificación del micelio reproductivo de los

°r en el cual se originan esporos asexuados internos:
endosporos.

'6 órganos de reproducción llamados también conidias, que
se originan fuera de los cuerpos de fructificación o directamente en el
micelio con o sin conidióforos.
. Parte del micelio de reproducción especializado para

producir u originar las conidias.
: exoesporos
: exoesporos pequeños de 3 a 6 micras, de forma variada.
6 exoesporos grandes tabicados de 50 a 80 micras.
Tamaño comparativo entre macro y microconidias
V V ' V V ' : hifas enrolladas como si fuera un

resorte.
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R. Arenas; Ed. Interamericana Mc Graw Xill.
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ù. C. Yherris; Ed. Doyma.

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B. D. Davis, R. Bulbecco, X. N. Eisen, X. Y.
Ginisberg; Ed. Yalvat.
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Vo. Bo.
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Que el alumno realice tinciones comunes de hongos y se entere
de los métodos especiales que existen para tinciones de los mismos.
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V
373.&0 2V
Los colorantes han sido utilizados desde los tiempos más

remotos, empleándose como tales diversas materias coloreadas
procedentes de los reinos vegetal y animal, así como distintos
minerales; pero desde mediados del siglo XIX, se han obtenido
colorantes derivados del alquitrán de hulla, habiendo desplazado casi
totalmente a las materias colorantes naturales.
El uso de los colorantes ha contribuido notab lemente al progreso

de la investigación y las técnicas de coloración se han ido
perfeccionando a tal grado que hoy en día, además del estudio
meramente morfológico de las estructuras biológicas, permite un
examen más útil de la composición química de las m ismas, así como el
análisis de algunos importantes procesos funcionales de las células;
todo esto ha sido posible gracias al conocimiento de la estructura
química de las sustancias colorantes y de la afinidad de estas con
determinados sustratos.
El estudio morfológico, microscópico, de los tejidos naturales y de

las células que los constituyen, necesita casi siempre de la coloración,
pues la observación de las imágenes por difracción que dan las
preparaciones incoloras, sobre todo cuando, como ocurre en aq uellas,
que tienen sus partes constitutivas el mismo índice de refracción.
Yea por unión de grupos atómicos de afinidad química manifiesta,

sea por transposición de ciertos átomos que originan transformaciones
tautómeras, el hecho es que una coloración se verifica cuando la
sustancia en cuestión absorbe tal intensidad, que no se decolora ya
luego por un lavado con el disolvente que sirvió para preparar el
reactivo tintóreo. A veces actúa el colorante directamente, otras,
frecuentemente, precisan en cambio la acción previa o simultánea de
otra sustancia llamada mordiente, que facilita la tinción de la materia
en cuestión, formando con el colorante una combinación estable que se
llama laca.
Xay partidarios de una teoría química de la coloración, para los
cuales se produce una verdadera sal por combinación del colorante con
las sustancias que se tiñen; otros, creen en una teoría física, y no
°
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admiten en el proceso más que una fijación mecánica de las moléculas

del colorante, como consecuencia de una serie de fen ómenos de
adsorción. Y, entre ambas concepciones, extremas y radicales, va
tomando cuerpo una opinión, ya sustentada por UIT, y razonada por los
investigadores de Van·t Xoff, en la que se admite que en el proceso de
una coloración existe una selección sóli da entre las sustancia por teñir
y la materia colorante, es decir, que el color y las propiedades tintóreas
están relacionadas con la presencia, en la molécula, de dos
agrupaciones características llamadas V yV
Los
primeros confieren a la molécula de la sustancia que los contienen,
llamada , la capacidad real o potencial de mostrarse
coloreada, pues la presencia de un cromógeno provoca un efecto
batocromo que no conduce siempre a la aparición de un color.
El aunque sea coloreado, no es capaz de teñir;

adquiere esta propiedad cuando se introducen en la molécula los
grupos

Por si solos los auxócromos no están coloreados, pero cuando se

hallan en presencia de cromóforos provocan efecto batocrómico que
convierten a la sustancia coloreada en colorante.
Modernamente se ha podido comprobar que la adsorción de la luz

de un determinado color por parte de un compuesto químico, y la
cuantía de esta absorción, están íntimamente ligadas con el estado en
que se encuentran los electrones que alcanzan entre sí los átomos que
componen las moléculas.
Los grupos cromóforos poseen la capacidad de absorber la luz

visible y los auxócromos son capaces de acentuar el color.
De acuerdo con esta exposición, se puede considerar como

cromóforos a grupos que por sí solos resultan incoloros, la única
condición es que su absorción de luz se desplace hacia el visible
mediante la adición de un grupo intensificador conveniente.
Los colorantes atendiendo a su afinidad en la función tintórea

pueden clasificar en básicos, ácidos, neutros e indiferentes, como se
muestra en la tabla #1, que contiene los principales colorantes usados
en las técnicas microscópicas.
Los colorantes básicos pueden clasificarse como sales cuya base

posee color y el ácido es incoloro; en los colorantes ácidos ocurre al
contrario, es la parte ácida la coloreada. Los colorantes básicos poseen
afinidad por el núcleo de las células, y por eso fueron llamados también
nucleares. Los colorantes ácidos, en cambio, se llaman c itoplásmicos y
se fijan preferentemente sobre el citoplasma.
°
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En número menor, existen unos colorantes llamados neutros, en

los cuales la base y el ácido son coloreados; estos colorantes, tienen
gran importancia en hematología y entran en la categoría de l os
colorantes compuestos.
Finalmente se ha constituido el grupo de los colorantes

indiferentes, que no son ácidos ni bases ni poseen grupos capaces de
formar sales; son insolubles en agua y hay que usarlos en solución
alcohólica o etérea.
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VV V V V<VVV V V

V Tionina.
V Cristal violeta.
V Violeta de genciana.
V Violeta de cresil.
V Violeta de metilo.
V Azul de toluidina.
V Azul de metileno.
V Azur de metileno.
V
Verde brillante.
Verde de metileno.
Verde malaquita.
Azul Nilo.
Azul de cresil.
Fascina básica.
Yafranina.
Rojo neutro.
Vesubina (Pardo bismarck)
V Ácido pícrico.
V Amarillo victoria.
@V Amarillo naftol.
Amarillo martines.
Eosina.
Fascina ácida.
0V Picrato azul de metileno.
Eosinato de azul de metileno.
Eosinato de azur de metileno.
Picrato de verde de metilo.
Verde Diazina.
+ V Yudán III
Rojo escarlata.
Por lo que respecta a procedimientos de tinción, tenemos
tinciones simples, negativas y diferenciales.
°
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En la técnica de tinción simple, el teñido de las bacterias se lleva

a cabo aplicando exclusivamente una solución colorante. Los colorantes
más comúnmente usados son la fucsina fenicada, azul de metileno,
violeta de genciana o cristal violeta y la safranina.
La tinción en negativo es otro procedimiento que permite observar

las células, no coloreadas destacándose bien perceptibles sobre el fondo
de la extensión bien teñida en negro. La ventaja que presenta este
procedimiento para el estudio de la morfología es que las células no
reciben tratamiento físico o químico enérgico. Es muy apropiado para
los organismos capsulados.
Los procedimientos de coloración que ponen de manifiesto

diferencias entre las células bacterianas o entre partes de una misma
célula, se denominan técnicas de tinción diferencial. Yon algo más
complicadas que las de tinción simple por cuanto se expone la
preparación a más de una solución colorante, o se emplean ciertos
reactivos complemen tarios para la tinción. Las dos coloraciones más
importantes son la de Gram y la de gérmenes ácido resistentes.
La tinción de Gram se basa en los constituyentes y permeabilidad

de las paredes celulares de las bacterias para retener o no el cristal
violeta, clasificándolas en gram negativas y gram positivas.
Ye inicia con la aplicación de un colorante básico, posteriormente

se aplica una solución de lugol. En este momento, todas las bacterias se
tiñen de morado. A continuación, se trata con un agente decol orante
(alcohol-acetona) y por último con el colorante de contraste; las células
gram positivas retienen el colorante cristal violeta -yodo, permaneciendo
color morado; por otra parte, las células gram negativas previamente
decoloradas toman el colorante de contraste; esto se basa en el elevado
contenido graso de las paredes celulares de los organismo gram
negativos.
Las muestras experimentales muestran que, durante la práctica

del procedimiento, el tratamiento alcohólico extrae las grasas
aumentando la permeabilidad o la porosidad de la pared celular de los
microbios gram negativos. El complejo cristal violeta -yodo se extrae así
por el organismo gram negativo se decolora. Las paredes celulares de
las bacterias gram positivas, a causa de su diferente composi ción, se
deshidratan por el alcohol, el tamaño de los poros disminuye, se reduce
la permeabilidad y el complejo cristal violeta -yodo no se extrae.
Existen muchos métodos para teñir los hongos, algunos de los

cuales son:
-

°
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La hematoxilina tiñe prácticamente todos los hongos; pero en

muchos casos, el contraste en los cortes no es muy satisfactorio.
VV%
Antes del descubrimiento de otros métodos, el de Gram era el

más difundido. Los cuerpos centrales de los hongos encapsulados com o
Criptococos y blastomices son fuertemente gram positivos. Las cápsulas
de casi todos los hongos son gram positivos, pero pierden fácilmente su
color si se utiliza acetona. El método de Gram permite encontrar casi
todos los hongos en los tejidos (cándida, aspergilio, criptococos,
histoplasmas, blastomices, actinomices.) Los micelios son gram
positivos; las esporas son gram negativas y también gram negativos es
Actinobacillus, Actinomycetem Comitans, que los acompañan con
frecuencia.
VV%
La solución de Giemsa es excelente para Xistoplasma

capsulatum, y también puede emplearse para Criptococcus.
VVA B0
Tiñe algunas especies de Nocardia y microorganismos

acidorresistentes, como N. Asteroides y N. Brasillensis. El micelio de A.
Israelí no es ácido resistente, pero las esporas resisten a la decoloración
con ácido al 1% hasta durante 30 segundos en la técnica de ziehl -
Neelsen.
VV V'
Las cápsulas de Criptococcus Neoformans y de los Blastomices

muestran tinciones metacromáticas (de rosa a violeta) con azul de
toluidina (o tionina.)
V
V'
Las cápsulas y las paredes de los hongos son ricas en

polisacáridos, lo que permite aplicar varios métodos muy elegantes.
V &2VV-CB
Es utilizada para cortes y frotis, por ejemplo de raspado de piel.

Ye puede emplear como colorante de contraste hematoxilina de Xarris o
PTAX de Mallory, durante 30 segundos a un minuto. N. B. Actinomyces
°
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y Nocardia se tiñen mal o no se tiñen con las técnicas de PAY, de

Gridley y de Grocott; es preferible estudiarlos por el método de Gram.
VVB1
La gran cantidad de grupos aldehído en las paredes de quitina

celulosa de los hongos permite aplicarles ácido crómico que destruye
grupos aldehidógenos de muchos otros elementos de manera que
disminuye la intensidad de fondo al aplicar la tinción de Ychiff.
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El azul anciano tiene gran afinidad por los carbohidratos ácidos,

y se puede aprovechar para teñir las cápsulas de las bacterias y hongos;
también puede combinarse con la técnica de PAY.
VV% EV'V V
Es una modificación del método del ácido crómico -Ychiff; en

realidad constituye una combinación del método de Bauer -Ychiff, que
tiñe los conidios y esporas y del aldehído-fucsina de Gomori, que tiñe
las hifas. Es excelente para estudiar las paredes del hongo. Y pueden
emplear cortes en parafina de cualquier tejido bien fijado.
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Reactivos:
1.- MOX al 10%: MOX 10 grs. Agua destilada 90 ml.

Uso: como solución aclarante para exámenes directos. Ye puede
preparar al 20%.
2.- MOX glicerinado: MOX 10 grs. Glicerina 10 ml, agua destilada 80 ml.
Uso como solución aclarante para exámenes directos; la ventaja de esta
solución radica en que se evapora en menor proporción.
3.- NaOX-AzurParker: NaOX al 10% 90 ml. Tinta azul de Parker 10 ml.
Uso: Como colorante para exámenes directos de pitiriasis versicolor e
infecciones por Pytirosporum sp.
4.- Lugol: MI 1 gr. Cristales de yodo (1°) 1.5 grs. Agua 100 ml.
Uso: solución de contraste, para exámenes en fresco de exudados y
secreciones.
Colorantes:
5.- Azul algodón acético: Azul de algodón 0.5 grs. Ácido acético 3 ml.
Agua destilada 97 ml.
Uso: Como colorante de microcultivos.
°
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6.- Azul de lacto-fenol: Azul de algodón (de anilina) 0.05 grs. Glicerol 40
ml. Fenol (cristales) 20 grs. Ácido láctico 20 ml. Agua destilada 20 ml.
Preparación: Disolver el fenol en ácido láctico, posteriormente se agrega
agua y glicerol, calentando ligeramente; por último se adiciona el azul
de algodón.
Uso: Para exámenes directos de las cepas.
7.- Azul de metileno: Azul de metileno 0.3 grs. Alcohol etílico (95%) 30
ml. Agua destilada 70 ml.
Uso: como colorante de contraste en tinciones de AAR, o para exámenes
directos de cepas.
8.- Azul de tripano: azul de tripano 1 g. Agua destilada 100 ml.
Uso: colorante de microcultivos.
9.- Alcohol ácido (modificado Ziehl -Neelsen): ácido sulfúrico 0.5 ml.
Agua destilada 99.5 ml.
Uso: para tinción de ácido alcohol resistencia de actinomicetes
(Nocardia)
10.- Yolución de cristal violeta: Yolución A :Cristal violeta 2 g. Alcohol
etílico 95% 20 ml. Yolución B: oxalato de amonio 0.9 g. Agua destilada
80 ml.
Preparación: mezclar solución A y B y dejar reposar por 24 horas; filtrar
Uso: Colorante de Gram.
11.- Eritrocina: eritrosina 1 g. Alcohol etílico 1 ml. Agua destilada 98
ml.
Preparación: disolver el colorante en alcohol etílico, posteriormente
agregar el agua destilada.
Uso: como colorante de micro cultivos.
12.- Fucsina básica o carbón fucsina: Yolución A: solución básica 4 g.
Alcohol etílico 20 ml. Yolución B: fenol (cristales) 8 ml. Agua destilada
100 ml.
Preparación: obtenga solución A, deje reposar 24 horas, posteriormente
agregue solución B y filtre en papel.
Uso: para tinción de AAR de microbacterias y Nocardia.
13.- Yolución de Giemsa: Giemsa 1 g. Glicerol 66 ml. Metanol absoluto
66 ml.
Preparación: disolver el colorante en glicerol, calentar durante una hora
a 60°C, posteriormente agregar el metanol y filtrar.
Uso: para diversas tinciones.
14.- Yafranina: Yolución A: safranina 0.25 g. Etanol 100 ml. Yolución B:
10 ml de solución A. Agua destilada 90 ml.
Uso: como colorante de Gram.
15. - Colorante de Wright: colorante de Wright 0.30 g. Glicer ol 3 ml.
Metanol absoluto 97 ml.
Preparación: mezclar el colorante en glicerol, y posteriormente agregar
el metanol.
Uso: para tinciones diversas.
++V =0+&2VGV+0+30 2V
°
à
à

à
1.- Examen directo con cinta adhesiva o Ycotch
iV Esterilizar a la flama el asa micoló gica y dejar enfriar.

iV Pegar al asa micológica un fragmento de cinta adhesiva
transparente.
iV Introducir el asa con la cinta en tubos y cajas Petri, hasta
tocar la colonia a investigar por la parte adhesiva de la
cinta.
iV Desprender el fragmento de la cinta adhesiva, con la ayuda
de una aguja de disección, sobre un portaobjetos con una
gota de colorante (azul de lactofeno o lugol)
iV Colocar una gota del mismo colorante sobre la cinta y
posteriormente poner un cubreobjetos.
iV Yi se quiere sellar la preparación, se coloca alrededor del
cubreobjetos barniz de uñas.
2.- Yiembra de microcultivos.
Material: cajas Petri estériles con 2 portaobjetos y triángulo de

vidrio cada uno; medio de cultivo en caja Petri (Yaboraud. PZ o
papa dextrosa agar)
iV Fragmentar con la ayuda de un bisturí el medio de cultivo
en cuadros de aproximadamente 1.5 X 1.5 cm.
iV Colocar 1 o 2 cubos del medio fragmentado sobre uno de
los portaobjetos.
iV Yembrar el hongo a estudiar por los cuatro lados del medio
de cultivo.
iV Colocar el segundo portaobjetos sobre el medio de cultivo.
iV Agregar a la caja Petri de 10 a 15 ml de agua glicerinada
estéril (5%).
iV Yellar la caja Petri con cinta adhesiva.
iV Incubar dependiendo el hongo a estudiar.
iV Realizar tinción especial para el microcultivo.
3.- Tinción de microcultivos con azul de algodón acético.
iV Retirar el exceso de agar con la ayuda de un bisturí.

iV Fijar la preparación con metanol hasta evaporación.
iV Teñir con azul de algodón ácido por 15 min.
iV Lavar ligeramente con agua destilada.
iV Lavado con alcohol al 96%.
iV Lavado con alcohol absoluto.
iV Baño de xilol durante 5 minutos.
iV Montar la laminilla con bálsamo de Canadá.
4.- Tinción de microcultivos con eritrocina.
°
à
à

à
iV Retirar el exceso de agar con ayuda de un bisturí.

iV Fijar la preparación con etanol hasta evaporación.
iV Teñir con eritrosina durante 10 a 15 minutos en emisiones
de baño de agua o por calentamiento directo a la flama.
iV Retirar el exceso de colorante con etanol.
iV Baño en acetona durante 10 minutos.
iV Baño en xilol-acetona (1:2) durante 10 minutos.
iV Baño en xilol durante 10 minutos.
iV Montar la laminilla con bálsamo de Canadá.
5.- Tinción de Ziehl-Neelsen (para actinomicetos).
iV Fijar el frotis directamente a la llama

iV Teñir con fucsina básica en vapores de agua durante 10
minutos
iV Decolorar con alcohol ácido modificado (formula 1-9)
iV Lavar ligeramente con agua destilada
iV Teñir de contraste con azul de metileno durante 5 minutos
iV Lavar ligeramente con agua y dejar secar
6.- Tinción de Gram.

iV Fijar el frotis directamente a la llama
iV Teñir con cristal violeta durante 1 minuto
iV Decolorar con alcohol -cetona
iV Cubrir la preparación con lugol durante 1 minuto
iV Lavar ligeramente con agua
iV Teñir de contraste con safranina durante 1 minuto
iV Lavar ligeramente con agua y dejar secar
7.- Tinción de tinta china para Cryptococcus sp.

iV Fijar el frotis directamente a la planta
iV Teñir con fucsina básica durante un minuto
iV Xacer un frontis con tinta china o nigrosina (como frotis de
sangre)
iV Dejar secar
COLORACIÓN DE XONGOY EN TEùIDOY.
iV Colocar la muestra extraída o biopsia o punción, etc., en

frasco con formol al 10.pasar a alcohol de 70° durante 24
horas (puede disminuirse en tiempo a 2 horas).
iV Chocar a continuación en alcohol de 95° durante 24 horas
(puede dejarse 2 horas)
°
à
à

à
iV La siguiente etapa consiste en sumergir la pieza anatómica

en alcohol abs. Durante 24 hora (puede disminuirse el
tiempo a 2 horas)
iV Pasar luego la pieza por xilol durante 6 horas (si se siguió la
técnica de las dos horas se puede dejar de 6 a 7 minutos.
iV Incluir luego en parafina (tacos) y realizar cortes
histológicos con microtomo.
iV Pasar los cortes histológicos obtenidos por xilol y luego por
alcohol absoluto para eliminar este y por alcohol de 95°
para hidratar
iV En este omento los cortes están listos para real izar las
distintas coloraciones. Ye fijan con albúmina sobre un
porta objetos limpio y se trata con alcohol de 95°.
MÉTODO DE GRIDLEY
iV Oxidar con ácido crómico al 4% durante 1 hora

iV Lavar con agua corriente durante 5 minutos
iV Colocar durante 15 minutos e siguiente colorante:
VFucsina básica 1g y agua destilada hirviente 200ml
VEnfriar y agregar 2 gramos de metabisulfito de
potasio y 10 ml de XCl
VDejar reposar 24 horas
VAgregar 0.5 g de carbón activado
VAgitar durante un minuto
VFiltrar con papel
iV Colocar en solución de:
VMetabisulfito de potasio al 10% 6 ml
VXCL 5ml
VAgua destilada c.b.p. 100ml
Durante dos minutos cambiando la solución 3 veces.
iV Chocar los cortes en fucsina aldehídica de 15 -20 minutos:
Fucsina básica 1g
Alcohol de 70° 200 ml
Paraldehído 2ml
XCl
iV A temperatura ambiente durante 3 días hasta que se vuelva

azul oscuro
iV Guardar el refrigerador
iV Lavar con alcohol de 95°
iV Lavar con agua corriente
iV Contracolorear durante 2-5 minutos en:
V Amarillo de metano 0.25g
V Agua estilada 100ml.
V Ácido acético glacial 0.25ml
iV Lavar con agua y pasar con xilol
°
à
à

à
iV Montar con bálsamo de Canadá, colocando un cubre

objetos y observar a microscopio
NOTA:
Los hongos aparecen de una coloración púrpura, el tejido
conectivo, adquiere una tona lidad amarilla, y el tejido elástico y la
mucina color azul
MÉTODO DE GOMORI
iV Desparafinar los cortes y pasarlos con alcohol absoluto y luego

alcohol de 95°
iV Tratar con albúmina y fijarlos con alcohol de 95°
iV Yumergir os cortes en ácido crómico al 5 % durante 1 hora
iV Colocar en solución de bisulfito de sodio 1% durante 1 minuto
iV Lavar con agua corriente durante 5 minutos y pasar luego por
agua destilada 3 veces. Es mejor sumergirlos en agua destilada
durante horas
iV Colocar os preparados en solución argéntica durante 2 horas,
manteniendo la temperatura a 45 -50°C
VYolución argéntica
VNitrato de plata 5% 5 ml
VUrotropina 3% 10 ml
VAgitar hasta disolución del precipitado
VConservar en el refrigerador
iV Lavar con agua destilado 2 o 3 veces
iV Yumergir en cloruro de oro al 0.1% durante 5 -10 minutos
iV Tratar con solución de hiposulfito de sodio al 2% durante 2
minutos
iV Lavar con agua rápidamente
iV Deshidratar y montar con bálamo de Canadá, y observar al
microscopio
NOTA:
Los hongos se observan teñidos en negro sobre el fondo rojo
MÉTODO DE McMANUY-XOTCXMIYY:
iV Desparafinar con xilol y pasar por alcohol abs. Y de 95°

iV Colocar el corte en ácido periódico al 1% durante 10min.
iV Chocar el reactivo de Ychiff 10 min
V Fucsina básica 0.1 g
V Alcohol de 95° 5 ml
V Agua 95ml
iV Yumergir el portaobjetos en solución de:
V Xidrosulfito de zinc 1gr
°
à
à

à
V Ácido tartárico 0.5gr

V Agua 100ml
Durante 30 min.
iV Lavar con agua corriente durante 1 m inuto
iV Diferenciar con ácido pícrico en solución acuosa saturada
durante 2 minutos.
iV Deshidratar y montar con bálsamo de Canadá y observar a
microscopio
NOTA:
Los hongos aparecen coloreados de un tono violáceo.
=0+&:
Realizar una tinción simple, una de Gram y una de Ziehl-

Neelsen, utilizando los colorantes y procedimientos adecuados.
32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV
307=2+>06V
°
à
à

à
V
+7+3%.&1>&6V

V Ô

÷

, Tesis de Avendaño Moreno
Consuelo; (1985)
V p
Ô Amadeo D´Alessandro; edit. Panamericana

V Ô
Ô

A. Bonifaz; edit. Méndez Cervantes.

V Ô

Lynch; et al; edit. Interamericana; México
1965.
Xalapa, Ver., a _____________________________________
Vo. Bo.
______________________________
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
V
°
à
à

à
V
.&+&VV
=3)3V) V ..+V
34 +536V
V
Que el alumno aprenda a utilizar el método de Burri, y lo utilice
en el laboratorio en el diagnóstico de Cryptococosis.
% 0 .&7+)&) 26V
V
El m
es un hongo tipo levadura que causa
Cryptococosis. Ye presenta como cuerpo en forma de levadura de 5 a 20
micras de diámetro, que muestran gemación simple (o casionalmente
múltiple) y están rodeadas de una cápsula ancha de material
gelatinoso. Esta cápsula esta constituida por polisacáridos como xilosa,
manosa y ácido glucorónico, que determina su virulencia por medio de
deterioro de la fagocitosis. En líquido cefalorraquídeo, estas estructuras
no deben confundirse con glóbulos rojos o linfocitos; no tienen el índice
de refracción de los primeros, y se distinguen de los segundos por la
presencia de yemas.
La enfermedad se encuentra en el mundo entero y casi si empre

ataca las meninges y el cerebro, aunque también se conocen lesiones
del pulmón, la piel y los huesos. El microorganismo puede cultivarse del
suelo, y se piensa que generalmente penetra al organismo por las vías
respiratorias.
La clasificación clínic a de la cryptococosis se divide como sigue:
V Pulmonar (25%)
V Diseminada (visceral) (15%)
V Del YNC (45%)
V Ósea (5%)
V Cutánea (10%)
V
La cryptococosis pulmonar se inicia por la inhalación de las

levaduras, estas llegan hasta los alvéolos atravesando las vías
respiratorias, generando así el primer contacto pulmonar, que la
mayoría de veces cursa de manera subclínica o asintomático, no genera
una respuesta inflamatoria tan intensa como lo hacen otros hongos o
mico bacterias. C. neoformans, prolifera rápidamente si no existe una
adecuada defensa celular, en especial células mononucleares (linfocitos,
°
à
à

à
histiositos, etc.), esto explica porque los pacientes linfoma tozos son
altamente susceptibles a la enfermedad. Yi el proceso infeccioso no se
detiene, los microorganismos fácilmente se diseminan por vía linfática y
hematógena; con gran predilección hacia el YNC, en donde el LCR es
además deficiente en un factor fungicida denominado factor
anticriptococósico; en este sistema las lesiones se desarrollan en las
meninges y afectan los nervio craneales, tallo cerebral y cerebelo; el
cuadro que provoca es generalmente de una meningitis crónica. A
partir de este foco puede diseminarse hacia otros órganos como
vísceras, piel y huesos.
Las levaduras del C. neoforman s pueden penetrar por vía

cutánea, dando una cryptococosis primaria cutánea, que se inicia por la
formación de un complejo primario similar al de la esporotricosis, es
decir, se forma un chancro o lesión inicial, constituido por linfagitis y
adenitis, éste puede involucrar por completo o formar una lesión
granulo matosa, ulcerada o de aspecto acneiforme.
Todos los criptococos producen ureasa, pero no es el caso de las

especies de Cándida. Los medios que contienen actidiona (ciclo
heximida) inhiben el criptococos, pero carecen de efecto sobre el
desarrollo de la Cándida.
Los criptococos no patógenos no crecen a 37ºC; un criptococo no

patógeno frecuente, Rhodotorula, produce una colonia roja anaranjada
pálida. Los ratones son sensibles a la infección de C. neoformans; la
inoculación puede hacerse por vía intraperitonal o cerebral.
Frente a un caso sospechoso, siempre debe recurrirse a

inoculación al animal.
) VV7<V
VV6
Dependerá del tipo de tryptococosis, por lo que se puede manejar

expectoración, lavado bronquial, LCR, exudados, biopsias, etc.

V6
Es de poca utilidad, por que mediante esta técnica V no se hace

evidente la cápsula; por lo tanto las levaduras fácilmente se confunden
con m

u otros hongos levaduriformes.
16
°
à
à

à
A partir de las muestras LCR, esputo, etc., se realiza un frotis, se

fija al calor y se agrega extendiendo una gota de tinta china o nigrosina.
=3)3V) V?..+6VV
V
Por refringencia con el microscopio se puede observar fácilmente
el cuerpo de la levadura y el halo de la cápsula. En nuestra experiencia
ponemos una gota de fucsina básica (de Zielhl -Neelsen) por minuto y
posteriormente teñimos de contraste con tinta china; los resultados
son buenos, obteniendo el cuerpo de la levadura de color rojo rosa, un
halo blanco de la cápsula y el fondo de la preparación negro. Algunos
autores reportan excelentes resultados con tinción de mucicarmín de
Mayer, este colorante tiñe la cápsula en fracciones.
!6VV
V
Los medios de cultivos más útiles son Yaboraud, extracto de
levadura y BXI agar; nunca debe sembrarse en micosel, porque la ciclo
eximida (actidione) inhibe a C. neoformans. El desarrollo se obtiene en
dos a tres días a temperaturas ambiente de 0 a 37ºC.
Las colonias so n limitada, mucoides, convexas, de color blanco

amarillento y dan un aspecto de leche condensada, raras veces toman
un color rosa pálido. Al microscopio se observan células levaduriformes
de aproximadamente 4 a 8 micras de diámetro con blastosporas de la
mitad de su tamaño, ambas con todo y la cápsula llegan a medir hasta
20 micras de diámetro.
Un medio de cultivo selectivo para C. neoformans, es a base de

semillas de @negroµ o @alpiste negroµ, de donde genera colonias con
pigmentos café-marrón, que se distinguen de otros géneros y especies. V
=0+&:
Realizar una tinción simple, una de Gram y una de Ziehl -Neelsen,

utilizando los colorantes y procedimientos adecuados.
V Este método se utiliza especialmente para la observación en

fresco de m

(neoformans).
V Emplear como medio de contraste tinta china que debe ser de

muy buena calidad y no debe hallarse contaminada por hongos
levaduriformes.
1.V Colocar una gota de tinta china sobre el portaobjetos.
°
à
à

à
2.V Agregar una gota de material por investi gar, que

generalmente es líquido cefalorraquídeo o esputo, y
mezclas con el asa.
3.V Colocar el cubreobjetos y observar.
V Yi el material fuera muy espeso, conviene diluir la tinta
china con una gota de agua.
V
. &+532V
Tinta china
V< V
Colonia de hongos
V
Asa de platino o nicromel

Mechero bunsen
Porta y cubreobjetos
;'V
Microscopio
32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV
°
à
à

à
V V V V
V
V
307A2+B06V
+7+3%.&1>&6V

V Ô
Ô

Bonifaz A.; 2ª reimpresión; Edit. Méndez;
México 1994.
V Ô

Lynch y col.
p
Ô ; Amadeo D· Alessandro; Edit. Panamericana.
Xalapa, Ver., a ______________________________________
Vo. Bo.
__________________________________

V
V
°
à
à

à
.&+&VV
7+53V) V-30%32V
34 +536V
V
Que el alumno aprenda a cultivar hongos de interés clínico.
% 0 .&7+)&) 26V
V
V
EXTRACCIÓN DE MATERIALEY DE LA LEYIÓN.
Los materiales necesarios son: pinzas, agujas, bisturí, espátulas,

tijeras, portaobjetos, cajas de Petri, etc.
Realizar siempre una limpieza previa de la lesión con alcohol

(nunca con alcohol yodado), porque los pacientes generalmente llegan
hasta el analista ya medicados con cremas, ungüentos, etc.
OBTENCIÓN DE MUEYTRAY DE MICOYIY YUPERFICIALEY.
iV Lesiones en piel (tiña, pedis, cruris y corporis): se hace un

raspado cuidadoso de la lesión con el fin de retirar el mayor
número de escamas y recibirlas en una caja Petri; es
importante que el raspado se haga con cierta presión pero
sin llegar a sangrar, ya que esto interfiere con la calidad de
la muestra.
iV Lesiones en cabeza (tiña capitis): se hace una toma similar a
la anterior pero un poco más persistente y enérgica con el
fin de desprender suficiente escamas. Posteriormente se
localizan los pelos parasitazos los cuales son cortos y están
rodeados de un material blanquecino; con la ayuda de las
pinzas de depilar son arrancados y depositados en la caja
Petri.
iV Lesiones en uña (tiña unguis): las uñas aumentadas de
volumen y deformadas tienen un aspec to blanquecino y
pulverulento, por lo que la toma de este material es
relativamente fácil, basta raspar con el bisturí la parte
inferior de la uña y colectar la escamas en la caja Petri.
OBTENCIÓN DE MUEYTRAY DE MICOYIY YUBCUTÁNEAY.
°
à
à

à
Las enfermedades de este tipo incluyen la cromomicosis,

micetoma o (maduromicosis), esporotricosis y rinosporodiosis, etc. Los
especimenes mejor colectados de este grupo incluyen costras y sus
provenientes de abscesos abiertos; del exudado de las lesiones; de
fluidos aspirados de tractos séricos cerrados o abscesos por medio de
jeringa; y tejido proveniente de la biopsia.
El organismo Rhinosporidium seeberi que causa la

rinosporidiosis, no ha podido ser cultivado hasta ahora; sin embargo los
raspados provenientes de raspad os o biopsias deben ser examinados
directamente o fijados para el examen histológico.
El material de esta micosis debe ser puesto en tubo o en frascos

estériles adicionados de penicilina y estreptomicina y enviados
enseguida al laboratorio para ser examin ados al microscopio y
sembrados en medio de cultivo adecuados según el tipo de micosis que
se trate.
OBTENCIÓN DE MUEYTRAY DE MICOYIY YIYTEMÁTICAY

PROFUNDAY.
La micosis sistemática o profunda puede diagnosticarse en el

laboratorio a partir de un examen de la pus o del exudado; del fluido
espinal; de la saliva; de la médula ósea o sangre; o del material
proveniente de abscesos, biopsias o autopsias. El examen directo, los
cultivos y en algunos casos la inoculación animal deben hacerse a
partir del material colectado.
ROTULO DE LAY MUEYTRAY.
Todas las muestras que se obtienen para el diagnostico clínico

deben contener la siguiente información:
1.V Nombre, edad y sexo del paciente.

2.V Número de identificación asignado al paciente o espécimen.
3.V Nombre del médico que manda a realizar el examen.
4.V Nombre de la institución donde se obtiene la muestra, si la
muestra se envía a otra.
5.V Tipo de material presentado y colectado.
6.V Enfermedad sospechada o alguna otra información pertinente.
7.V Resultados de cualquier prueba serológ ica o dérmica hecha.
PROCEYAMIENTO DE LAY MUEYTRAY.
En todos los casos se practicará un examen microscópico directo

de los materiales extraídos. Para ello, los pelos y escamas de piel o de
°
à
à

à
uñas se colocarán sobre un portaobjetos limpio con una gota de

hidróxido de sodio o potasio al 20 -30%, se cubrirán con un
cubreobjetos y se calentarán sobre la llama suave de un mechero,
apretando suavemente con el dedo, tratando de disgregar el material.
Luego se mirará al microscopio con el objetivo de 10 diámetros d e
aumento y después con el de 40.
YIEMBRAY.
Ye utilizarán medios de cultivo de Yabouraud con y sin

antibióticos.
Ye siembran los trozos de pelos o escamas de piel (lo más

pequeños posibles) y los medios de cultivos, utilizando para ellos dos
tubos de Yabouraud glucosado con antibiótico.
Ye esterilizará el gancho o asa, enfriándolo luego en el medio de

cultivo, apoyándolo sobre la superficie del mismo. Luego se tocarán las
escamas o pelos que, de esta manera quedarán adheridos. Ye ubicarán
estos trocitos sobre la superficie del agar, tratando de presionar
suavemente con el asa para que penetren en el medio de cultivo. Ye
siembran de esta manera en la superficie del medio 5 o 6 trocitos del
material quedando separados por un pequeño espacio. Ye incubarán a
25°C durante 20 a 30 días. Yi no se dispone de una estufa graduada a
esta temperatura, se puede ubicar sobre la de 37°C, tapándolos con
una caja de plástico o de vidrio para que pueda penetrar la luz ya que la
pigmentación de algunos hongos puede verse i nterferida en su
ausencia.
Todos los días se observará el posible desarrollo fúngico. No debe

informarse como negativo un cultivo antes de los 30 días.
MEDIOY DE CULTIVO.
Los medios de cultivo más utilizados o clásicos son el medio

glucosado de Yabouraud y el medio de Yabouraud con antibióticos. Los
medios de cultivo pueden ser de tres tipos: ,V VyV
.
Los están elaborados con leche, huevo, granos de

cereales, levadura de cerveza y otros compuestos. Los ,
como el Yabouraud, aportan una fuente de carbono y nitrógeno. Los
tienen una composición química bien definida y se usan en
investigación, no son de uso sistemático.
Ye preparan fácilmente, los ingredientes se disuelven por

separado en agua y se mezclan en un matraz erlenmeyer, se calientan
15 minutos a baño María y 5 a 6 minutos en el mechero, la solución se
°
à
à

à
coloca en tubos y se procesa en autoclave a 110°C durante 15 a 20

minutos al sacarlos se colocan en posición inclinada para aumentar la
superficie de cultivo. Pueden utilizarse cajas Petri, que deben llenarse
después de esterilizar el medio.
Yi se usa tapón de rosca no debe tapar herméticamente para

facilitar la llegada de oxígeno o se pueden utilizar los tapones de
algodón.
Todas las manipulaciones han de realizarse en el área esterilizada

de la llama de un mechero Bunsen o en una campana de flujo laminar.
c23V )+32V) Vc7+53V

Identificación de m
Medio de alpiste negro agar.
Medio de agar dextrosa urea.
Medio de Ytaib.
Esporulación de dermatofitos. Arroz agar.
Producción de ascosporas (género Agar para producción de
saccharomices). ascosporas.
Transporte y revitalización. Yabouraud caldo.
Medio selectivo de Biggy agar.
primoaislamiento para diversas Medio de coco.
levaduras Medio V8 agar.
Primoaislamiento, conservación y Medio Borelli.
producción de pigmentos de DTM agar.
dermatofitos. Para esporulación de PZ + dextrosa al 1%.
hongos dermatiáceos.
Investigación de hidrólisis de Medio de caseína (actinomicetes).
caseína en actinomicetos. Medio para hidrólisis de caseína
(Nocardia).
Investigación de carbohidratos. Medio para investigación de
carbohidratos (zimogramas)
Primoaislamiento y conservación Yabouraud caldo.
de diversos hongos. Yabouraud dextrosa agar.
Papa peptona agar.
Infusión de cerebro corazón agar.
(M. mycetomatis y A. madurae)
Xarina de maíz agar.
Extracto de levadura agar.
Papa dextrosa agar.
Medio de conservación.
Para estimulación de pigmento de Medio de coco.
A. pelletieri y T. violaceum.
Investigación de licuefacción de Gelatina.
gelatina.
Esporulación de diversos hongos. Xarina de maíz agar.
Papa dextrosa agar.
°
à
à

à
Papa zanahoria agar.

Papa peptona agar.
Formación de pseudomiceliso y Xarina de maíz + Tween 80.
clamidospora en el género Papa zanahoria + Bilis de buey.
m

Medio de cereal.
Agar para clamidosporas.
Medio selectivo para hongos Micosel o micobiotic agar.
patógenos. Medio kurung (en su forma
parasitaria)
Medio de producción de pigmento PZ + dextroza al 1%.
de ÷ !.
Primoaislamiento de actinomycetos Tioglicolato caldo.
anaeróbicos y microaerófilos.
Pruebas fisiológicas de Medio para la investigación de
actinomycetos. xantina, hipoxantina y tirosina.
Medio Bennett.
Rehidratar cultivos desecados. Yabouraud caldo.
Identificación de Aspergillus y Medio Czapek.
Penicillium.
Para cultivar Pytirosporum. Medio de Yabouraud con aceite de
oliva.
Medio para Pytirosporum con bilis
de buey.
Medio con ácido oleico y vitamina
A.
Estimula la fructificación. Extracto de malta o cerveza.
Para observar órganos perforadores Medio para penetración de pelos in
presentes en ÷ Ô
r vitro.
Medio de agar dextrosa urea.
Observar producción de ureasa. Medio de agar dextrosa urea.
Para el transporte de hongos. Medio de Ytuarts.
Identificación de micobacterias y Medio de Lowestein -ùensen
actinomadura.
Para la obtención de antígenos. Medio de Ymith.
&V'V 'V Fosfato monopotásico 1g

Azul de trípano 0.1 g
Fórmula. Polisacárido purificado 1g
Agar 1g
Yulfato de amonio 1g Biotina 1g
°
à
à

à
Agua destilada 1000 ml &DVV
Ye suspenden 37 g del polvo Fórmula

deshidratado de la fórmula en el
agua destilada y se deja remojar Arroz blanco molido 8g
durante 15 minutos, se hierve Agua destilada 25 ml
durante 1 minuto agitando
frecuentemente; se distribuye en Poner los ingredientes en matraz
los tubos y se esteriliza a 121°C erlenmeyer y esterilizar en
durante 20 min. autoclave a 121°C durante 15
minutos.
Uso: estimula clamidosporas en
m

Uso: para esporulación de
dermatofitos.
&V'V' VV
'V EVV
Fórmula Fórmula
Acetato de potasio 10 g Citrato de bismuto 5g

Extracto de levadura 2.5 g Amoniaco sulfito de sodio 3g
Dextrosa 1g Dextrosa 10 g
Agar 20 g Extracto de levadura 1g
Agua 1000 ml Glicina 10 g
Cloranfenicol 0.5 g
Esterilizar en autoclave a 121°C Agar 10 g
durante 15 minutos. Agua destilada 1000 ml
Uso: producción de ascosporas Xervir el medio 5 min y repartir

(género saccharomyces). en cajas Petri o tubos. No se
debe esterilizar en autoclave.
&V2<V
V
Uso: medio selectivoo de
Fórmula primoaislamiento para diversas
Yabouraud glucosado 1000 cm 3 levaduras.
Cloranfenicol 500 mg
Cicloheximida 500 mg )VVH)VV
IV
Disolver la cicloheximida o
actidiona en 10 cm 3 de acetona, Fórmula
el cloranfenicol en 10 cm 3 de
alcohol. Agregar el medio ya Fitona 10 g
fundido y esterilizar a ¾ de atm Dextrosa 10 g
durante 20 minutos. Gentamicina 0.1 g
Cloranfenicol 0.1 g
Uso: primoaislamiento y Rojo de fenol 4 ml
conservación de diversos hongos Agar bacteriológico 20 g
Agua destilada 980 ml
°
à
à

à
Los carbohidratos pueden ser: Uso: estimula la fructificación.

glucosa, maltosa, lactosa,
sacarosa, galactosa, etc. % V
Esterilizar en autoclave a 121 °C
durante 15 minutos. Fórmula
Uso: primoaislamiento de Gelatina 4g

dermatofitos. Agua destilada 1000 ml
Preparación del indicador: se Esterilizar en autoclave a 121°C

mezcla rojo de fenol 0.5 g; NaOX durante 15 min.
(0.1N) 15 ml; agua destilada 100
ml. Uso: para investigación de
licuefacción de gelatina en

VV !VV actinomycetos y hongos negros.
Fórmula
- VV,DVVH V
Extracto de levadura 1 g VIV
Agar bacteriológico 20 g V
Agua destilada 1000 ml Fórmula
Ph 6
Xarina de maíz 40 g
Esterilizar en autoclave a 121°C Agar bacteriológico 20 g
durante 15 min. Agua destilada 1000 ml
Uso: primoaislamiento de Esterilizar en autoclave a 121°C

diversos hongos. de 10 a 15 min.

VV VV!DV Uso: medio de esporulación y
conservación de diversos hongos
Fórmula
Xarina de malta 200 mg
Agua destilada 1000 ml - VV,DVJVK V(V
Ye coloca a 45°C luego se Fórmula

intenta elevar un °C por minuto
hasta 70°C 10 min. Ye verifica Medio de harina de maíz 990 ml
mediante coloración con yodo si Tween 80 10 ml
ha desaparecido el almidón. Es
necesario 70°C hasta q ue Esterilizar en autoclave a 121°C
desaparezca todo el almidón. A 15 min.
continuación se filtra la mezcla y
se agrega clara de huevo (1 por 2 Uso: para formación de
lt). Ye esteriliza a 125°C durante pseudomicelios y clamidosporas
45 min. Ye afora a un lt y se en el género m

esteriliza a 110°C.
°
à
à

à
Nota: se le puede adicionar 1 ml Rojo fenol 0.012 g

de azul de trípano al 1% Agua destilada 1000 ml
+ VV<VD V Ye disuelven. Filtran y

VH-+IV esterilizan los ingredientes, se
disuelven por separado 15 ml de
Fórmula agar en 900 ml de agua
destilada y se esterilizan.
Infusión de cerebro de ternero Después de enfriar se añade la
200 g solución de urea.
Infusión de corazón de res 250 g
Peptona 10 g Uso: para observar la
Dextrosa 2g producción de ureasa, por
Cloruro de sodio 5g ejemplo en ÷ Ô
r y
Fosfato disódico 2.5 g m

Agar bacteriológico 20 g
Agua 1000 ml VV 'V VV
Ph 7.4
Fórmula
Esterilizar en autoclave a 121°C
15 min. *Alpiste negro o Níger
pulverizado 70 g
Uso: primoaislamiento de Cloranfenicol 50 g
diversos hongos, en especial Ô Agar bacteriológico 20 g

y "

V VV VEV Remojar el alpiste negro en 1 lt

! V&V de agua. Xervir 30 min.;
posteriormente filtrar en gasa y
Fórmula papel filtro. Aforar a 1 lt de
agua. Esterilizar en autoclave a
Yabouraud simple 6.5 g 110°C por 15 minutos.
Tween 80 1 ml Uso: medio de identificación de
Ácido oleico 10 g m
.
Vitamina A 10 gotas
Cloramfenicol 0.5 g *Yemilla de Guizotia abyssinica.
VV V
Uso: se usa para pytirosporum.
Fórmula
VV
VV
Extracto de levadura 19 g
Fórmula Extracto de carne 18 g
NZ amida A 2g
Dextrosa 1g Caseína para digestión 1g
Peptona 1g Glucosa 10 g
Fosfato monopotásico 2g Gelosa 15 g
Urea 20 g Agua destilada 1000 ml
°
à
à

à
Uso: se utiliza para *Cerelac 14 g

actinomycetos. Agar 10 g
VV VH IV
*Producto comercial que
Fórmula contiene harina de maíz, trigo,
arroz, cebada, avena y extracto
Xarina de trigo 14 g de malta.
Leche en polvo 14 g
Miel 7g Uso: estimula clamidosporas en
Agar 20 g m

.
VVV
Esterilizar en autoclave a 110°C
por 10 minutos. Fórmula
Uso: primoaislamiento, Agua de coco filtrada 100 ml

conservación y producción de Peptona 1g
pigmentos de dermatofitos. Para Agar bacteriológico 2g
esporulación de hongos Ph 5
dematiáceos. Esterilizar en autoclave a 121°C
15 min.
VV, V
Uso: aislamiento de diversos
Fórmula hongos levduriformes. Medio
para estimulación de pigmento
Yolución A de " y ÷
.
Dextrosa 1g V
Agar bacteriológico 2g VV ! V
Yolución B Fórmula
Leche descremada 1.5 g
Agua destilada 50 ml Peptona granulada 30-40 g
Agar agar 20 g
Esterilizar en autoclave por Agua destilada 1000 ml
separado a 110°C o 10 lb de
presión por 10 min. Una vez Uso: no contiene azúcares; se
estéril se deben mezclar a una utiliza para evitar eñ fenómeno
temperatura próxima a 45°C, de pleomorfismo. Es
repartiendo en cajas Petri. recomendable sobre todo en
dermatofitos.
Uso: investigación de hidrólisis
de caseína en actinomicetos. VVD'CV
VV V Fórmula
Fórmula Nitrato de sodio 3g
°
à
à

à
Yacarosa 30 g Yulfato de magnesio 0.24 g

Fosfato dipotásico 1g Citrato de magnesio 0.6 g
Cloruro de potasio 0.5 g Asparagina 3.6 g
Yulfato de magnesio 0.5 g Glicerina 12 ml
Yulfato de hierro 0.01 g Agua destilada 600 ml
Agar 15 g Fécula de papa 30 ml
Agua destilada 1000 ml Xuevos frescos 1000 ml
Yol. verde de malaquita 20 ml
Uso: sirve para estudiar
" y ° . Las sales se disuelven por
calentamiento y esta solución se
VVL V distribuye en frascos que se
esterilizan 30 min. a 110°C.
Fórmula
En un recipiente de 3 lt con
Fécula de papa 1g perlas de vidrio se ponen los 30
Agua destilada 100 ml g de fécula de papa que se
Mezcla de huevo 150 ml esterilizó 30 min a 120°C, y la
El agua con la fécula de papa solución previamente preparada.
(patata) se calienta en el Enseguida se coloca el recipiente
mechero de Bunsen hasta que la a baño María a 100°C y se agita
mezcla gelifica, entonces se continuamente hasta que el
esteriliza a 115°C por 15 min. líquidose trona translúcido en
alrededor de 15-20 min. Ye deja
Ye agita la mezcla de huevo (que 1 hr en alcohol de 90°, a
contiene 100 ml de yemas y 40 continuación se rompe uno tras
ml de huevos enteros) en otro en un vaso de pp y se
presencia de perlas de vidrio y se vierten en una probeta de 1 lt; se
agrega bajo técnica estéril a la homogenizan con un agitador
fécula de papa. El medio se mecánico o varilla de cidrio y se
reparte en tubos y se deja filtran en una gasa.
coagular inclinando a 90°C 1 hr.
Un litro de huevos se mezclan
Xoy se ha simplificado la con un frasco de fécula y se le
preparación de los medios de agregan 20 ml de verde de
cultivo al utilizar medios malaquita. La mezcla se deja en
deshidratados a los que hay que reposo una hora antes de
añadir el volumen correcto de distribuirse en los tubos o en las
agua y esterilizar. cajas de Legroux. El medio se
coagula con un solo
Uso: para conservar hongos calentamiento de 40 min a 85°C.
patógenos en su forma
parasitaria. Uso: se emplea para
V actinomycetos, micobacterias y
VV7MK B4 V Actinomadura.
Fórmula VV2<V VV

Fosfato monopotásico 2. 4 g V !V
°
à
à

à
120°C por 20 min. El pX final

El medio de Yabouraud con debe ser de 5.5.
antibióticos se le agrega aceite
de oliva al 10%. El aceite se Uso: sirve para identificar m
esteriliza por separado y se le
, ya que adquiere un
agrega al medio cuando se color café (marrón) oscuro en
encuentra a 50°C y se vierte en este medio.
los tubos o las cajas Petri.
VV2V
Uso: para cultivar pityrosporum.
Fórmula
VV2V
V Tioglicolato de sodio 1g
Fórmula Glicerofosfato de sodio 10 g
Cloruro de calcio 100 mg
Cloruro de amonio 7g Azul de metileno 0.02 mg
Asparagina 7g Agua destilada 1000 ml
Fosfato dipotásico 1.31 g PX 7.3
Citrato de sodio 0.90 g
Yulfato de magnesio 1.50 g Uso: medio de transporte de
Citrato férrico 0.30 g hongos.
Glucosa 10 g
Glicerina 25 cm 3 V'V VV
Agua 1000 cm 3 , V
Distribuir y esterilizar a ¾ de
atm durante 20 min. Fórmula 1
Leche entera en polvo 4g
Uso: para la obtención de Agua destilada 500 ml
antígenos. Yig. A
V
VV2<V Agar 20 g
Fórmula Yig. B
Guizotia abyssinica o ác. Cafeico Ye esterilizan ambas

50 g preparaciones. En una caja Petri
glucosa 1g se mezclan dos tubos de agar
creatinina 1g con uno de leche, se deja
MX2PO4 1g solidificar y se siembra la
Agar 15 g colonia problema.
Ye hierve el polvo de las semillas Fórmula 2

de G. Abyssinica (alpiste negro) Dextrosa 1g
en 1000 ml de agua destilada Agar bacteriológico 1.5 g
durante 30 min., se filtra, y se Agua destilada 50 ml
afora el volumen a 1 lt con agua Yig. A
destilada. Ye añaden los otros
componentes, se esteriliza a Leche descremada 1.5 g
°
à
à

à
Agua destilada 50 ml En una caja Petri se colocan

Yig. B pelos rubios de niño prepúber,
de 1 cm de long. esterilizados; se
Ye esterilizan por separado A y B agrega la solución preparada, se
a 10 libras por 10 min; se dejan inoculan las colonias para
enfriar a 45°C, se vacían en estudiar y se dejan transcurrir
cajas Petri y se mezclan. de 3-4 semanas.
V
V'V ! VV Uso: sirve para observar órganos
<HDIV perforadores, que están
presentes en T. mentagrophytes
Fórmula mas no en T. rubrum.
Peptona 10 g V'V'E'V V

NaCl 5g < VV<EVH
V
NaOX 1N 1 ml IV
Carbohidrato 20 g
Agua destilada 1000 ml Fórmula
Indicador 1-2 gotas Agar extracto de malta 50-60 g
V Bilis de buey 20 g
V'V ! VV Tween 40 10 ml
FV'
VEV V Glicerina 2.5 ml
Fórmula
Ye mezclan los componentes y se
Agar nutritivo 23 g disuelven a baño María; se
Xantina o hipoxantina 4g vierten en tubos y se esterilizan
Agua destilada 1000 ml 20 min a 120°C. Ye pueden
añadir antibióticos bacterianos.
Ye esteriliza en autoclave a
121°C por 15 min. V5(VV
Uso: para investigación de Fórmula

pruebas fisiológicas de
actinomicetos. Filtrado de jugo V8 500 ml
Extracto de levadura 10 g
Nota: cuando se investiga Agar bacteriológico 20 g
tirosina se debe agregar 5 g de Agua destilada 500 ml
xantina o hipoxantina.
V Ye esterilizan en autoclave a
V'V' VV 121°C por 15 min.
' V V!V
Uso: medio de aislamiento e
Fórmula identificación de levaduras.
Agua destilada 20 ml VV<VV

Extracto d levadura 10% 2-3 ml H2<VJV <IV
°
à
à

à
Fórmula Agar bacteriológico 20 g

Medio de Yabouraud 100 ml
Actidione(cicloheximida) 400 mg Ye esterilizan en autoclave a
Cloranfenicol 500 mg 121°C por 15 min.
PX 6.5
Uso: medio de esporulación y
Los antibióticos se adicionan de conservación de diversos
la siguiente manera: el actidione hongos.
en 1 ml de acetona y el
cloranfenicol en 1 ml de alcohol
etílico, ambos se agregan 'VD VVH BAVIV
cuando el medio ha hervido por
1-2 min. Ye esterilizan en
autoclave a 121°C por 15 min. Fórmula
Uso: medio selectivo para Pulpa de zanahoria 20 g

hongos patógenos. Pulpa de papa 20 g
Nota: se le adiciona 10 -15% de Agua destilada 1000 ml
aceite de oliva o ácido oleico, se
puede utilizar para el Las pulpas maceradas se
primoaislamiento de hongos hierven a fuego lento por 1 hr.
lipofílicos (P. ovale y P. Posteriormente se filtran en gasa
orbiculare) y se le adiciona al filtrado la
cantidad respectiva de agua para
'V
VH )&IV completar a 1 lt. Ye esterilizan
en autoclave a 121°C durante 15
Fórmula min.
Pulpa de papa 20 g Uso: medio de conservación y de

Dextosa 20 g esporulación.
Agua destilada 1000 ml 'VD V< VV<EV
V
Ye esterilizan en autoclave a Al medio anterior se le agrega
121°C por 15 min. 15% de bilis de buey.
Uso: para primocultivo, Uso: estimula clamidosporas en

conservación y esporulación de m

diversos hongos.
AVJV
V VNV
'V'' VV
Fórmula
Fórmula PZ 990 ml
Pulpa de papa 20 g Dextrosa 10 g
Peptona 10 g PX 5.6
°
à
à

à
Fosfato monobásico de M 2g
Ye esteriliza en autoclave a Tioglicolato de sodio 1g
121°C por 15 min. Agua destilada 1000 ml
Uso: medio de esporulación y Ye esteriliza en autoclave a

conservación de dermatofitos. 121°C durante 15 min.
Medio de producción de Uso: para el primoaislamiento de
pigmento de T. rubrum. actinomicetos anaeróbicos y
microaerófilos.
V
2<V
VV
Fórmula
Dextrosa 20 g
Peptona 10 g
PX 6.5
Ye esteriliza en autoclave a
121°C durante 15 min.
Uso: medio rutinario para el

primoaislamiento y conservación
de diversos hongos.
2<V V
Fórmula
Dextrosa 20 g
Peptona 10 g
PX 6.5
Ye esterilizan en autoclave a
121°C durante 15 min.
Uso: primoaislamiento,
transporte y revitalización de
diversas cepas.
V V
Fórmula
Tripticase 20 g
Cloruro de sodio 5g
°
à
à

à
. &+532V
Yolución salina
Yolución de MOX al 30%
V< V
Colonia de hongos
V

Mechero bunsen
;'V
Microscopio
=0+&6V
V
Ye ejemplifica en el siguiente diagrama:
POYITIVO
EXAMEN
EN FREYCO
NEGATIVO
MUEYTRA MUEYTRA
YIEMBRA MACROCOLONIA REYIEMBRA
TINCIONEY EXAMEN
EN FREYCO
MACROCOLONIA ZIMOGRAMA REPORTE
EXAMEN
EN FREYCO
Nota: en algunas ocasiones se realizan pruebas especiales.
V
°
à
à

à
32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV

V
307c2+C06V
+7+3%.&1>&6V
V p
Ô ; Amadeo D· Alessandro; Edit. Panamericana.
V Ô
Ô

, R. Arenas; Ed. Interamerica Mc Graw Xill.
V Ô
Ô

Bonifaz A.; 2ª reimpresión; Edit. Méndez.
V

m Martha P. Díaz Resendiz; IMYY México 1978.
V Ô

Ô
Ô
Cristina Gamboa León; UV. Xalapa, Ver,
1988.
Xalapa, Ver., a ____________________________________________
Vo. Bo.
°
à
à

à
.&+&V"V
+.3c7+53V
34 +536V
V
Que el alumno aprenda a realizar microcultivos, y los sepa emplear
en la diferenciación de los hongos.
% 0 .&7+)&) 26V
V
Las micosis son las enfermedades causadas por distintas especies de
hongos. Estas afecciones pueden ser superficiales y profundas.
Las micosis o dermatomicosis son procesos infectocontagiosos

producidos por distintos agentes micóticos que fundamentalmente invaden
piel y/o sus anexos. No tienen carácter maligno y, en la mayoría de los
casos, solo afecta la estética.
Por lo general no hay repercusión sistémica y las lesiones aparecen

como procesos inflamatorios superficiales ante los cuales el organismo
puede responder, entre otras maneras, con la formación de anticuerpos
reagínicos o células específicamente sensibilizadas, revelables mediante
reacciones de hipersensibilidad cutánea. Generalmente no se evidencian
anticuerpos fijadores de complemento ni precipitinas o aglutininas. El
grado de inflamación va desde una reacción nula, como en el caso de la
pitiriasis versicolor, hasta reacciones graves como el querion.
Las micosis profundas pueden localizarse en dermis, músculos,

huesos, pulmones, hígado, cerebro, mucosas, etc. Ye observan lesiones
inflamatorias y destructivas con la consiguiente difusión de los parásito a
través del sistema hemático o linfático o por continuidad. En este caso el
organismo infectado responde a la agresión originando anticuerpos
específicos, fijadores del complemento, precipitinas, aglutininas, etc.
La mayoría de las micosis profundas revisten de tal gravedad que en

muchos casos llevan al paciente a la muerte.
CLAYIFICACIÓN DE LOY EUMYCETEY.
Diferentes autores han trabajado arduamente tratando de ordenar

sistemáticamente las distintas especies de hongos. A continuación se
°
à
à

à
transcribirá una clasificación tentativa del ordenamiento lógico de los

hongos.
7&2 2V 2c7&2 2V D.) 0 2V %=0 .32V
V
EV Archimycetes Chytridiales Chytridium
Micelio continuo.
Los unicelulares no Oomycetes Peronosporales Peronospora
se reproducen por
brotación. Zigomycetes Mucorales Mucor
Esporos asexuados
en esporangios.
V
&EV Xemiascomycetes Endomycetales Yaccharomyces
Micelio tabicado.
Los unicelulares se Euascomycetes Eurotiales Aspergillus
reproducen por
brotación o
esquizogonia.
Esporos sexuados
internos en ascos.
V
EV Xeterobasidiomycetes Ustilanginales Ustilago
(carbón)
Micelio tabicado.
Esporos sexuados Xomobasidiomycetes Agaricales Agaricus
externos sobre
ábsides.
) c .3G 2V Mycelia fructignea Moniliales Fusarium
Micelio tabicado.
Los unicelulares se Mycelia sterilia Mycelia sterilia Yclerotium
reproducen por
brotación o
esquizogonia.
No se conoce
reproducción
sexuada.
TERMINOLOGÍA DE LAY MICOYIY.
La denominación de las micosis varía según el criterio adoptado para

clasificarlas: localización del proceso, hongo que se aísla de la lesión y la
designación que utiliza la literatura médica.
°
à
à

à
De acuerdo con la localización del proceso, la enfermedad micótica

puede denominarse: dermatomicosis, micosis pulmonares o
neumomicosis, onicomicosis, otomicosis, etc.
De acuerdo al nombre del hongo responsable de la lesión se

denomina: aspergilosis, tricofitosis, coccidioidomicosis, candidiasis, etc.,
cuando los agentes son " ÷rr m y m

respetivamente.
En el caso de la terminología médica se emplean las siguientes

denominaciones: tiñas, pie de atleta, querion, piedras, etc.
MICROCULTIVOY.
Ye realizan para estudiar los detalles de la estructura de los hongos

que debido a las observaciones comunes se destrozan y desaparecen por
acción de los ganchos y de las agujas.
=0+&:
1.V Ye preparan placas de Petri con un papel secante en su interior.

2.V Ye coloca un porta y un cubreobjetos y se esteriliza.
3.V Ye prepara una caja Petri con Yabouraud y una vez coagulado y frío
se cortan pequeños trozos cuadrangulares que se colocan
asépticamente sobre el portaobjetos dentro de la placa.
4.V Ye toma el hongo en estudio con un gancho y se siembra sobre el
trocito de agar Yabouraud y también en los costados del mismo.
5.V Ye coloca el cubreobjetos con una pinza previamente flameada,
sobre la superficie del agar.
6.V Ye humedece con agua estéril el papel secante y se incuba a 28°C.
7.V Una vez desarrollado el hongo se saca el cubreobjetos que lleva
adherido el crecimiento fúngico, se coloca sobre un portaobjeto con
una gota de colorante Gueguen o Lactofenol y se saca el trocito de
Yabouraud con una pinza colocando luego una gota de colorante y
un cubreobjeto nuevo, obteniendo así dos preparaciones listas para
estudiar. Pueden bordearse con esmalte de uñas, conservándose un
largo tiempo.
d
b a
c
c
°
à
à

à
a)V Portaobjetos.
b)V Cubreobjetos.
c)V Zonas de siembra.
d)V Medio de cultivo.
A partir de un alimento que contenga hongos, realizar un

microcultivo, después de la observación de crecimiento:
a)V
Observar el microcultivo completo.
b)V
Quitar el cubreobjetos y colocarlo sobre un porta limpio y
observar, y
c)V Quitar el cuadrito de agar y sobre el portaobjetos colocar un
cubreobjeto limpio y observar.
7@+0&VV
Técnica de microcultivo.
A.V Uso de tubo de prueba estéril para obtener bloques de agar

para la técnica de microcultivo.
B.V Preparación de una cámara húmeda estéril usando una
placa de Petri que contiene agar simple al 2% sobre un
portaobjetos estéril.
C.V Método alternativo de preparar un microcultivo. Ye colocan
discos de papel filtro en el fondo de la caja Petri y el
portaobjetos se apoya en varillas de vidrio. Los discos de
papel filtro se mantienen húmedos con agua estéril durante
el periodo de incubación.
D.V Colocación del bloque de agar en la preparación de un
microcultivo. Obsérvese que se han inoculado pequeñas
porciones del cultivo con un gancho en cuatro cuadrantes
del bloque de agar.
E.V Inoculación de la superficie de un bloque de agar en la
preparación de un microcultivo. Obsérvese que se han
inoculado pequeñas porciones del cultivo con un gancho en
cuatro cuadrantes del bloque de agar.
F.V Colocación de un portaobjetos estéril sobre la superficie del
bloque de agar inoculando antes de la incubación.
G.V Aspecto de un microcultivo típico luego del periodo de
incubación apropiado. Obsérvese el crecimiento micelial
por debajo de la superficie de los cubreobjetos.
X.V Colocación del cubreobjetos recogido del bloque de agar
microcultivado en un agota de lactofenol-azul de anilina en
un portaobjetos para examen microscópico.
°
à
à

à
7@+0&VV
°
à
à

à
. &+532V
V< V
Colonia de hongos
V

Mechero bunsen
;'V
Microscopio
32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV
V
307c2+E06V
°
à
à

à
+7+3%.&1>&6V

V Ô
°

Moneman Roberts; Edit. Médica
Panamericana.
V p
Ô Amadeo D· Alessandro; Edit. Panamericana.
Xalapa, Ver., a ________________________________________
Vo. Bo.
______________________________________

°
à
à

à

.&+&V$V
%=0 .3V@0)+)&V
34 +536V
V
Que el alumno se familiarice con las especies del género Cándida,
comprenda a este género como Xongos Oportunistas y sea capaz de
diagnosticar candidiasis en el laboratorio de análisis clínicos.
% 0 .&7+)&) 26V
V
V
XONGOY OPORTUNIYTAY.
Ye denomina así a ciertos hongos saprófitos que en algunas

oportunidades invaden el organismo humano o de otros animales, gracias
a determinados factores predisponentes del huésped. Los saprófitos que se
aíslan de ciertas enfermedades son: Ô "
!r "
mr
etc.
Los que viven saprofiticamente y además cohabitan en mucosas o

piel como m

m r son aislados,
frecuentemente; en ciertos pacientes que ofrecen condiciones favorables
para su proliferación, tales como los tratados con drogas antineoplásicas,
corticoides, antibióticos y los que presentan disproteinemia o debilidad
orgánica generalizada.
Para realizar un diagnóstico correcto de una micosis producida por

un hongo oportunista hay que extremar todos los cuidados posibles, pues
podría tratarse de una contaminación accidental de los materiales o
muestras extraídas y procesadas; por lo tanto deben tenerse muy en
cuenta:
a)V Xallazgo del mismo tipo de parásito en muestras extraídas con

varios días de intervalo.
b)V Desarrollo del mismo hongo en todos los sembrados.
c)V Pruebas serológicas positivas.
°
à
à

à
d)V Estudio de las causas predisponentes.

e)V Mejoría o curación con el tratamiento adecuado.
CANDIDOYIY.
DEFINICIÓN
Micosis primaria o secundaria ocasionada por levaduras endógenas

y oportunistas del género m
, especialmente m

. Las
manifestaciones clínicas son localizadas, diseminadas o sistémicas;
pueden afectar piel, mucosas, estructuras profundas y órganos internos.
Las alteraciones histopatológicas varían desde inflamación mínima hasta
supuración o granuloma. La evolución es aguda, subaguda o crónica.
ETIOPATOGENIA
Los agentes causales son las levaduras anascosporadas. Ye han

descrito 81 especies, de las cuales al menos siete causan enfermedades en
seres humanos. El género m

, en sentido amplio, es dimorfo. Las
especies más comunes son:
m

m

m

m

#
m

m

m

m

se ha dividido en varios biotipos, y por sus
características antigénicas, en los grupos (serotipos) A y B.
Estos hongos se encuentran ampliamente distribuidos en la

naturaleza, pero m

solo se encuentra como endosaprófito del tubo
digestivo de mamíferos y aves. En seres humanos son comensales de la
cavidad bucal, tubo digestivo y mucosa vaginal. La mayor parte de las
levaduras también s encuentran en la piel sana, excepto m

y m

que se llegan a aislar de región perianal, peribucal y dedos.
Xay resistencia natural a la infección, pero no está bien definida,

quizás depende de factores inhibidores, concentraciones séricas elevadas
de hierro, potenciales de óxido-reducción y competencia entre levaduras
por nutrimentos. Es probable que los neutrófilos sirvan como defensa
primaria contra invasión y diseminación. La infección ocurre a partir de un
°
à
à

à
foco endógeno y en pocas ocasiones, del medio externo. Los hongos actúan
como oportunistas y se convierten en patógenos cuando hay alteraciones
de inmunidad celular, como inmunodeprimidos; a consecuencia de
cambios fisiológicos de la flora normal. La forma congénita puede ocurrir
por invasión ascendente con afección de la membrana corioalantoidea. En
la candidosis mucocutánea crónica los linfocitos T pierden su capacidad
para reaccionar contra el estímulo antigénico general o contra antígenos
específicos de m

La candidosis puede ser enfermedad ocupacional o transmitirse por

contacto sexual. Los factores predisponentes son múltiples y muchas
veces combinarse.
F
1&3. 2V c V . )+2 30 0V&V&0)+)32+2V
EYTADOY FIYOLÓGICO. ENFERMEDADEY DEBILITANTEY
Infancia y vejez. Neoplasias.
Embarazo. Infecciones.
Infección por VIX.
FACTOREY LOCALEY. MEDICAMENTOY Y OTROY
TRATAMIENTOY
Xumedad. Anticonceptivos.
Oclusión cutánea. Antibióticos de amplio espectro.
Prótesis. Glucocorticoides.
Xeridas y quemaduras. Inmunosupresores.
Xemostasis. Citotóxicos.
Radioterapia.
ENDOCRINOPATÍAY Y INTERVENCIONEY QUIRÚRGICAY
ENFERMEDADEY METABÓLICAY
Diabetes. Cirugía.
Obesidad. Xiperalimentación parenteral.
Xiperuricemia. Cateterismo.
Insuficiencia tiroidea. Traqueostomía.
Deficiencia de hierro. Drogas por vía IV.
Poliendocrinopatía.
La gravedad de la infección depende sobretodo de las alteraciones

primarias del huésped más que de las propiedades patógenas del hongo. El
microorganismo causal más frecuente y virulento es m

, son
menos patógenas m

y m
. En pacientes con YIDA se
°
à
à

à
encuentra con mayor frecuencia m

serotipo B, pero al parecer no
son cepas en particular virulentas.

m

es una levadura con la capacidad para producir filamentos.
La fase de levadura está relacionada con la fase saprofítica y con la
iniciación de lesiones clínicas; en cambio, la fase micelial se relaciona con
la forma parasitaria e invasora , a la inversa de casi todos los hongos
dimorfos.
Las levaduras se adhieren, por medio de mananas, al epitelio antes

de invadirlo; se ha encontrado en la pared celular una glicoproteína ácida
que es el componente antigénico de mayor importancia; también se ha
encontrado una candidotoxina que es tóxica para células animales
e produce eritema.
Las anormalidades de los linfocitos T se acompañan de deficiencia

de linfocinas activadoras de macrófagos y por consiguiente, de fagocitosis
inadecuada.
En la patogénesis de candidosis vaginal se ha señalado la

posibilidad de mutaciones fenotípicas hacia sepas de mayor virulencia. Los
factores de virulencia incluyen: mayor capacidad de adherencia,
producción de proteasas y formación de tubos germinativos.
CUADRO CLÍNICO
Ye desconoce el periodo de incubación. En la boca (muguet o

algodoncillo) puede ser difusa y limitarse a una sola región y afectar el velo
del paladar, carrillos y encías; hay enrojecimiento y placas mucosas
blanquecinas y adherentes que dan el aspecto de natas de leche, son
asintomáticas o se acompañan de sensación de quemadura, sequedad de
boca y sabor metálico. La evolución es aguda o crónica.
Yegún el aspecto, se han descrito diferentes formas clínicas:

a) seudomembranosa; b) lengua negra vellosa; c) atrófica aguda o crónica;
d) hiperplasia romboidal media; e) erosiva o dolorosa.
La queilitis angular afecta las comisuras bucales, se manifiesta por

un triángulo de base externa, constituido por eritema y fisuras, hay
descamación fina o grandes escamas blanquecinas de aspecto micáceo.
°
à
à

à
En la vaginitis se presenta inflamación, leucorrea blanquecina,

espesa y grumosa; prurito intenso, sobre todo premenstrual y extensión de
las lesiones a vulva y periné. La mucosa vaginal muestra placas
blanquecinas, amarillentas o seudomembranosas.
Los intertrigos son primarios o por extensión de una localización en

mucosas; afectan pliegues, como los axilares, submamarios, inguinales,
surco interglúteo, espacios interdigitales de manos y pies. Ye caracterizan
por eritema, descamación y piel macerada, bordes marcados por un
collarete de escamas y lesiones satélite papulares, vesiculares o
pustulosas, prurito y dolor. La forma neonatal se presenta como muguet o
con lesiones vesiculares o pustulosas diseminadas que afectan sobre todo
el tronco, aparecen desde el nacimiento y curan solas en una a cuatro
semanas; en ocasiones persisten varios meses.
En adictos a drogas predominan las lesiones foliculares en cabeza y

cara; también hay formas secundarias grandes en quemados.
La paroniquia es una inflamación periungueal dolorosa, a veces con

salida de pus a la presión; después sobreviene la afección ungueal. Xay
onicólisis, o engrosamiento y deformación de la uña, presencia de estrías
transversales y cambios de color que van del blanco amarillento al verde,
café (marrón) o negro.
La candidosis mucocutánea crónica se inicia en la lactancia o la

niñez; se relaciona con anormalidades genéticas: agenesia o displasia del
timo, con agammaglobulinemia o sin ella y la consecuente disfunción
linfocitaria, defectos de la función de leucocitos, endocrinopatías. Puede
ser idiopática o acompañar a una deficiencia de zinc. Cuando se presenta
en adultos afecta a mayores de 35 años de edad y se relaciona con
enfermedades malignas internas.
m

puede afectar cualquier tejido, incluso huesos y
articulaciones. Las manifestaciones clínicas dependen del órgano afectado.
La froma sistémica es grave y puede afectar aparato urinario y

riñones, endocardio, meninges e incluso produce queratitis.
Las formas alérgicas no están bien estudiadas; pueden ser

candídides, que a veces son lesiones vesiculares en manos, o se
manifiestan por urticaria, eccema, asma y gastritis.
°
à
à

à
CLAYIFICACIÓN DE LAY CANDIDOYIY.
Bucal.
Digestiva.
Mucocutánea Vaginitis y balanitis.
Bronquial y pulmonar.
Localizada
Intertrigos.
Cutánea Paroniquia y onicomicosis.
Vesiculopustular y folicular.
Candidosis mucocutánea crónica (CMCC)

Diseminada y profunda
Granuloma candidósico.
Aparato genitourinario y riñones.

Endocarditis.
Yistémica Meningitis.
Yepticemia.
Candidemia iantrógena.
Candídides.
Alérgica Eccema.
Asma.
Gastritis.
DIAGNÓYTICO MICOLÓGICO
Materiales:
El estudio se realiza sobre escamas de piel, uñas, esputos, pus, flujo

vaginal.
Examen microscópico directo:
°
à
à

à
Entre porta y cubreobjeto se observan pus, esputo, flujo, etc. Pueden

realizarse coloraciones como la de Gram, ya que las levaduras son gram
positivas.
Los raspados de piel y uñas se colocan sobre el portaobjeto con una

gota de NaOX al 30%, calentando suavemente al mechero para aclarar el
material corneo de la piel. Ye observarán las levaduras brotantes y,
frecuentemente seudomicelio.
Cultivo:
Las siembras se realizarán en Yabouraud glucosado con y sin

antibióticos. Las levaduras ya aparecen formando una colonia
blanquecina y cremosa a las 24-48 horas de incubación a 28° y 37°C.
Reconocimiento de las especies:
La m

es una levadura imperfecta que no produce ascosporos
en el bloque de yeso; sembrada en agar harina de maíz o medios especiales
que se pueden adquirir en el comercio, origina seudomicelio, lo que no
sucede con las levaduras perfectas. En este medio la m

produce
clamidosporas que son característicos de esta especie. Existen medios de
cultivos diferenciales para las distintas especies de m

Incubando a 37°C una suspensión de levaduras en estudio en 0.5

cm3 de suero humano inactivado, después de 2 a 4 horas la m

y
la m

forman filamentos, mientras que las otras especies no lo
hacen.
Otra reacción bioquímica es la reducción de sales de

trifeniltetrazolio, incorporadas al Yabouraud glucosado al 0.10% (previa
esterilización a óV V de atmósfera durante 20 minutos), sembrando por
estrías en el tubo e incubando 24 a 48 horas a 28°C.
La reducción de estas sales por las distintas especies de Candida da

colores que van desde el blanco (m

) hasta el rojo violáceo (m

).
Ye realiza también la prueba bioquímica de fermentación de

azúcares (zimograma). Ye prepara un caldo base con agregado de un
indicador (púrpura de bromocresol en alcohol al 1.6%) al Rº , colocando
campanitas de Durham invertidas en el medio de cultivo. Cuando se
°
à
à

à
carecen de éstas pueden utilizarse las tapitas de ampollas usadas que las
suplen perfectamente y son mucho más económicas.
Los azúcares por utilizar son FVFV VEV V

V N Estos se agregan al medio de cultivo y se esterilizan a de atm
durante 15 minutos. También se pueden esterilizar previmente por
filtración o agregando cloroformo a la solución del azúcar (concentrada). Ye
agita y se deja reposar 24 horas. Luego se agrega asépticamente con pipeta
estéril a cada tubo el volumen de solución madre de cada azúcar que
permita obtener una concentración final de 1% en el medio.
Ye siembran las levaduras en estudio y se incuban a 37°C durante

48-72 horas. La acidificación del medio se revela por el viraje del indicador
del violeta al amarillo, y la fermentación, por el desprendimiento de gas
que se acumula en las campanitas.
CARACTEREY BIOQUÍMICOY DE LAY EYPECIEY DE CANDIDA.
EYPECIEY YEUDO CLAMIDOY FILAMEN TETRA ZIMOGRAMA

MICELIO PORAY TO EN ZOLIO GLU YACA MAL LAC
YUERO COYA ROYA TOYA TOYA
V&7+&02V + + + Blanco AG A AG O
m

+ + + Rosado AG A AG O
m
+ - + Rojo- AG AG AG O
violáceo
m
± - + Rosado AG AG O AG
m + - - Rojo AG AG O O
m # + - - Blanco AG O O O
m

+ - - Blanco AG O O O
AG: ácido y gas.

A: ácido.
O: no hay acidificación ni producción de gas.
Reacción intradérmica:
Ye usa muy poco, ya que la gran mayoría de las personas reaccionan

positivamente a la intradermorreacción de la m

, aun no estando
enfermas. Por lo tanto, no debe utilizarse, pues no ofrece ninguna
seguridad en cuanto al resultado. Puede ser útil en procesos alérgicos
aplicando el antígeno en forma decreciente para desensibilizar.
°
à
à

à
Técnicas inmunológicas:
La aglutinación tiene poco valor. La técnica de fijación del

complemento es más segura, pero presenta el inconveniente de dar
reacciones cruzadas con antígenos de X

y m
Las reacciones de inmunodifusión son las más seguras y

demuestran la presencia de precipitinas séricas en casos de candidiasis
sistémicas.
%732&.+3V
& : Desarrollo incompleto.
: Inflamación del glande del pene o del clítoris.
: Región en donde se unen estructuras tales como labios,

párpados.
+ : Erupción eritematosa de la piel por fricción de partes

adyacentes.
3 : Lento proceso de desprendimiento de uña del lecho ungueal,

comenzando por el borde libre y progresando gradualmente hacia la raíz.
: Alrededor de la uña.
G : Inflamación de los labios.
G: Inflamación de la córnea.
c : Relativo a las uñas.
c: Trastorno cutáneo caracterizado por aparición de ronchas con

prurito intenso y centros elevados, por lo general blancos, con eritema.

°
à
à

à
=0+&:
Realizar un examen en fresco, tinción de Gram y prueba de

filamento en suero a las cepas de las diferentes especies del género
m

que les proporcione el preparador, así como también resembrar
dichas especies para conocer tiempos de crecimiento y características
coloniales.
Nota: si se tiene un paciente con posible Candidiasis, tomar la

muestra y realizar un cultivo.
. &+532V
V< V
Flujo vaginal.
V
Xisopo estéril.
Mechero bunsen
;'V
Microscopio
°
à
à

à
32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV
V
307c2+H06V
+7+3%.&1>&6V

V Ô
Ô
R. Arenas; Ed. Interamericana; Pág. 223-232.
Xalapa, Ver., a ________________________________________
Vo. Bo.
______________________________________
°
à
à

à
.&+&V#V
%=0 .3V&2 .%+77c2V
34 +536V
V
Que el alumno conozca las diferentes especies del género
" , sus colonias, sus estructuras y las micosis que pueden
ocasionar para poder identificarlas en el laboratorio.
% 0 .&7+)&) 26V
V
IDENTIFICACIÓN DE MOXOY XIALINOY DE CRECIMIENTO
RÁPIDO.
Incluyendo cuatro especies de " se tienen 14 especies de

mohos hialinos que abarcan la mayoría de este grupo de hongos que
pueden encontrarse en el laboratorio clínico. Los saprófitos hialinos
pueden dividirse en los siguientes subgrupos, basados en diferencias en el
aspecto microscópico de sus elementos de fructificación:
I
2& . 1+32V-+&7+032V
GÉNEROY. TIPO DE YUBGRUPO AL QUE
PERTENECEN
" Los conidióforos terminan en vesículas
dilatadas; conidias sostenidos en
cadenas (catenulados) acrógenamente
desde las puntas de fiálides que cubren
partes o toda la superficie de la vesícula.
° Conidióforos libremente ramificados;
°
conidios que nacen desde los ápices de

anélidos o fiálides
J que nacen de métulas
que forman un penicilioµ.
" Conidióforos únicos; conidios sostenidos
÷r
en cabezuelas, generalmente en la punta

de conidióforos rectos o ensanchados.
$

mr Conidióforos únicos, sosteniendo cada
uno un conidio solitario.
%Ô&
" %°

r
&
°
à
à

à
El género " que pertenece al subgrupo de los conidióforos

que terminan en vesículas dilatadas es que trataremos a continuación.
Las especies de " son los mohos de crecimiento rápido que

se encuentran mas frecuentemente en laboratorios clínicos y deben
considerarse en la identificación diferencial de cualquier moho hialino de
crecimiento rápido.
Microscópicamente, el género se caracteriza por cadenas de conidios

pequeñas u ovales a esféricas sostenidas en cadenas en las puntas de las
fiálides radialmente ubicadas sobre la superficie del ápice dilatado del
conidióforo denominado vesícula.
Algunas especies de " sobre todo "

y "

, pueden reproducirse sexualmente en medios de cultivos y
pueden verse cleistotecios. También rara vez se ven células de Xülle que
son estructuras hialinas esféricas de origen desconocido.
Afortunadamente el microbiólogo sólo necesita familiarizarse

cabalmente con las características de tres especies que son clínicamente
significativas: "
" ' y "
Una cuarta especie, "
se está recuperando con frecuencia cada vez mayor de muestras
clínicas, ya que basados en diferencias de pigmentación de las colonias,
tamaño y longitud de las cadenas y otros criterios, Raper y Fenel, han
clasificado a los " en 18 grupos.
Las especies de " están amplimente distribuidas en la

naturaleza donde actúan como saprófitos comunes en granos, hojas,
suelos y desperdicios.
Los conidios se dispersan y el hombre más comúnmente se infecta

por inhalación de esporas transportadas por el aire.
Dentro de las patologías que causa su presencia, es común su

diseminación a vísceras y particularmente al YNC de los enfermos de
YIDA, así como la localización del mismo en ganglios linfáticos, senos,
corazón, tiroides y piel.
A continuación se da un resumen de las características de las 4

especies de " de mayor importancia clínica.
°
à
à

à
2 + 2V &.& .>2+&2V &.& .>2+&2V & .+&7V &3%=0 2+2V

&.32K +&2V +.32K +&2V +37K%+3V
Crece en 2-6 días en Las hifas son hialinas Depende del Causa infecciones
"
medio sin y tabicadas. tipo de la oportunistas en el
cicloheximida. La longitud de los lesión. hombre, incluyendo :
La colonia crece con conidióforos es enfermedades
borde evidente, es moderada y tiene una pulmonares
vellosa y blanca célula pie granulomatosas,
durante el crecimiento característica en su broncopulmonares
precoz y luego se hace base. alérgicas diseminadas.
aterciopelada y Las vesículas tienen La forma diseminada
granulosa. forma de cúpula y la se ve en pacientes
Color verde a gris por mitad está cubierta inmunocomprometidos
producción de por fiálides desde las
conidios pigmentados. cuales salen cadenas
El reverso de la de conidias globulosas
colonia tienen un equinuladas de 2-3L
color verde a crema. de diámetro.
El cultivo tolera
temperatura de 45°C.
Comienza como Las hifas son Ye obtiene de Es una causa común
" colonia blanca que se tabicadas y los lesiones de las lesiones
vuelve amarilla y conidióforos son supurativas cavitarias en
desaroolla efecto largos y lisos. costrosas del pulmones o senos
pimienta negra en la Las vesículas son Moído de paranasales.
superficie (se pueden esféricas y dan origen nadadorµ. Ye encuentra en alto
vovlver negras con el a métulas y fiálides porcentaje en casos de
tiempo). que se oscurecen. otomicosis.
El reverso de la
colonia es color
gamuza o crema.
Conidias negras y
rugosas.
Las colonias crecen en Vesículas globosas y Ye obtiene de Es causa común de
"
5 días a 25°C. redondas. esputo o de Aspergilosis pulmonar
Colonias Fiálides solas o con tapones alérgica.
habitualmente métulas. mucosos Causa enfermedad
amarillas. Conidias elípticas a bronquiales. diseminada en
esféricas amarillas huéspedes
con el tiempo de inmunocomprometidos
tornan equinuladas.
Presencia de
numerosos eosinófilos
y cristales de Charcot-
Leyden en esputo.
°
à
à

à
La colonia crece en 5 Vesículas pequeñas de Depende del Es agente causal de

" días a 25°C. 15N en forma de tipo de la casos de endocarditis
Aparece de color cúpula y sostienen lesión. y enfermedad
canela-beige o marrón métulas con una broncopulmonar.
algodonosa con hilera de fiálides. Ye ha informado de
pliegues radiales o Producen casos de osteomielitis
irregulares. aleuriosporas únicas y casusa infección
Produce esporulación en hifas sumergidas. poliponasal, ganglio
y se hace granuloso. Yus conidias miden linfático cervical,
aproximadamente 2- meninges y
3 N de diámetro. enfermedad
diseminada.
Causa oticomicosis en
ùapón y Formosa.
O
2 c &26V
a)V Cabeza con frutos. Esporulación de densos racimos de

conidias oscuras en la superficie de la vesícula (" & .
b)V Cabeza con frutos, muestra métulas y una hilera de fiálides

con conidias en sus puntas (" &
c)V Cabeza con frutos. Obsérvese la vesícula claviforme, una sola

hilera de fiálides con esporulación limitada a la mitad de dos
tercios superiores de la superficie de la vesícula. ("

&
d)V Cabeza con frutos, muestra fiálides que se originasn en dos

tercios superiores de la superficie de la vesícula. ("

&
e)V Cabeza con frutos, muestra métulas y una hilera de fiálides

que produce conidias a partir de la circunferencia de la
superficie de la vesícula % "
&
f)V Cabezas con frutos y aleuriosporas clásicas de la especie "

g)V Vesícula y cleistotecio que muestra forma sexual y asexual de

reproducción de "
h)V Células esféricas de Xülle producidas por "
°
à
à

à

=0+&:
°
à
à

à
a)V Observar las colonias de las diferentes especies de "

que se proporcionen en el laboratorio.
b)V Realizar un examen en fresco a las especies de A que
le proporcionen en el laboratorio.
. &+532V
V< V
Exudado ótico.
V
Xisopo estéril.
Mechero bunsen
;'V
Microscopio
32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV
°
à
à

à
307c2+P06V
NOTA: Recuerde que el género " esporula demasiado,

MUCXO CUIDADO.
+7+3%.&1>&6V

V Ô
°

Moneman Roberts; Ed. Médica
Panameriacana.
Xalapa, Ver., a __________________________________________
Vo. Bo.
_____________________________________

°
à
à

à
V
.&+&V(V
) .&31+32V
34 +536V
V
Que el alumno identifique y aísle un dermatofito, a partir de la
muestra de un paciente del cual se sospeche de la presencia de una
micosis superficial.
% 0 .&7+)&) 26V
Las dermatofitosis o comúnmente llamadas tiñas, son

exclusivamente cutáneas, que afectan tejidos con queratina (cabellos,
uñas, epidermis).
Las dermatofitosis o tiñas se dividen dependiendo de la región

anatómica en donde se presentan:
Tinea capitis Tiña de la cabeza.

Tinea pedis Tiña de los pies.
Tinea cruris Tiña de la ingle.
Tinea unguium Tiña de las uñas.
Tinea corporis Tiña del cuerpo.
Tinea barbae Tiña de la barba.
Tinea manun Tiña de las manos.
Los dermatofitos son un grupo de hongos que se reproducen

asexualmente por macro y microconidios, y están comprendidos en tres
géneros.
1.V '. Ye presentan en pelo, piel y raramente en uñas.

2.V ''E . Ye presenta en piel, raramente en uñas y
nunca en pelo.
3.V 'E . Ye presenta en pelo, piel y uñas.
A continuación se presentan dos tablas para identificación de

dermatofitos:
°

°
°

°
°

°
-30%32V .3)c3. 2V) V+O&2.
%=0 .3V 2 + V &2 3V &2 3V+.32Q +3V 73&7+A&

&.32B +Q0V
Q +3V) V macroconidias microconidias hifas
7&2V
3730+&2V
Ô
Colonia lanosa, En forma de No hay No tienen Cabeza.
algodonosa que nave hasta con característi Cara.
crece sobre tres septos y ca Cuerpo.
toda la únicas, especial. Pies.
superficie del abundantes,
medio y le típicas para su
transmite un identificación.
color naranja.
Otras especies importantes:

Ô

Ô
%=0 .3V 2 + V &2 3V &2 3V+.32R +3V 73&7+A&
&.32B +R0V
R +3V) V macroconidias microconidias hifas
7&2V
3730+&2V
r ( $ Colonia radiada Romas en su No hay No tienen Ingles.
r pegada al medio extremidad característi Pies.
de color verde rectal, con 1-2 ca
limón septos y se especial.
presentan en A veces en
racimos de 2-3 racimos de
Yon plátanos.
abundantes.
%=0 .3V 2 + V &2 3V &2 3V+.32S +3V 73&7+A&

&.32B +S0V
S +3V) V macroconidias microconidias hifas
7&2V
3730+&2V
÷rr
Colonia café No hay. Piriformes que Ye Cabeza.
claro, aspecto crecen en forma bifurcan Cara.
duro, correspondiente, en Cuerpo.
acartonado y una frente a ángulo Pies.
cerebriforme. otra. recto al
filamento
principal
y sobre
estas
están las
esporitas
°

°
%=0 .3V 2 + V &2 3V &2 3V+.32T +3V 73&7+A&

&.32B +T0V
T +3V) V macroconidias microconidias hifas
7&2V
3730+&2V
÷rr Colonias Regularmente Piriformes y No tienen Cuerpo.
algodonosas no hay, solo escasas, ninguna Manos.
que crecen en cuando son prácticamente el característi Pies.
todo el medio. viejas existen no encontrar ca para Ingles.
Primero dan en forma de nada es identificar-
coloración roja salchicha. característico de las
en extremos este hongo.
que después
se difunde al
medio.
%=0 .3V 2 + V &2 3V &2 3V+.32U +3V 73&7+A&

&.32B +U0V
U +3V) V macroconidias microconidias hifas
7&2V
3730+&2V
÷rr Ô
( Colonias Regularmente Redondas, En forma Cuerpo.
r blancas, no hay, pequeñas, en de espiral, Manos.
aspecto cuando son racimos y típica para Pies.
pulverulento viejas existen abundantes. la Ingles.
que crecen escasas en identifica-
invadiendo forma de ción.
todo el medio. salchicha y
lápiz.
=0+&:
c)V Realizar una toma de muestra de un paciente que se sospeche

de micosis superficial.
d)V Aislar el dermatofito e identificarlo.
e)V Realizar un examen en fresco.
. &+532V
V< V
Uñas, pelos, escamas parasitadas.
°

°
V
V
Mechero bunsen
Medio de cultivo: Yabouraud.
MOX del 10-30%.
Yolución salina.
;'V
Microscopio
32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV
307c2+V06V
V
V
V
+7+3%.&1>&6V

V Ô
Ô

A. Bonifaz; Méndez editores, Y.A.; México, D.F.
Xalapa, Ver., a ___________________________________
Vo. Bo.
__________________________________________
V
°

°
V
.&+&V*V
+0c0373%>&VGV+32+2V
34 +536V
V
Que el alumno adquiera conocimientos acerca de los procesos
inmunológicos que se presentan en una micosis.
+0.3)c+W06V
V
La información que se dispone sobre la respuesta inmunitaria sobre
los hongos productores de micosis es muy limitada. Publicaciones
recientes se concretan a decir que la inmunidad en las micosis es
primordialmente mediada por células y que, aunque se detectan fácilmente
anticuerpos IgM e IgG específicos, estos no tienen ningún papel protector.
El factor huésped desempeña un papel principal en el desarrollo de

la mayoría de las infecciones fúngicas. La existencia de un estado de
inmunocompetencia es esencial para evitar o disminuir el impacto de la
micosis.
Ye conoce la existencia de una inmunidad natural así como el

desarrollo de una respuesta inmune específica frente a los antígenos
fúngicos en la mayoría de las micosis.
% 0 .&7+)&) 26V
V
INMUNIDAD NATURAL O INNATA.
La integridad cutáneo mucosa constituye una primera barrera a la

penetración de hongos patógenos o inicialmente saprobios. La ruptura del
manto cutáneo o mucoso, como sucede en las heridas, quemaduras, etc.,
abren una vía de entrada a los hongos ambientales, principalmente a los
endosaprobios, como m

.
Otros factores de inmunidad natural son la función normal de los

granulocitos y macrófagos, así como de los linfocitos natural killer. El
suero humano normal tienen una conocida actividad funguicida: la
activación de la vía alternativa del complemento y los reactantes de fase
aguda también son mecanismos defensivos de la infección fúngica.
°

°
La respuesta inmediata a una agresión microbiana es la inflamación

aguda, que es consecuencia de alteraciones vasculares con atracción de
leucocitos. Los reactantes de fase aguda comprenden la ferritina y los
componenetes del complemento, la falta de antitripsina, el fibrinógeno y la
haptoglobina, así como la PCR; esta PCR junto con el complemento son las
proteínas de fase aguda que se relacionan directamente con la eliminación
de los microorganismos.
Los mecanismos de inmunidad natural o innnata son eficaces para

proteger frente algunos hongos débilmente patógenos, tales como los
cigomicetos, especies de " etc.
Los leucocitos neutrófilos humanos intervienen activamente para

eliminar los hongos patógenos primarios y también diversos oportunistas.
La actividad de éstos leucocitos sólo es posible si se asocia a otros factores
defensivos del huésped como son los factores defensivos del huésped como
son los factores séricos o reactantes de fase aguda.
Los linfocitos natural killers, han demostrado tener efectos

funguicidas sobre algunos hongos como el m y las m

.
PAPEL DE LOY LEUCOCITOY POLIMORFONUCLEAREY.
El mecanismo mediante el cual los hongos fagocitados por los PMN

llegan a ser destruidos actúa a través de la vía de la mieloperoxidasa que
proporciona la mayor actividad funguicida. Otros mecanismos son las
proteínas cotiónicas y la lisozima.
En la m

los PMN pueden fagocitar y destruir las levaduras
pero no tienen la misma habilidad en el caso de las pseudohifas
difícilmente fagocitables si están muy desarrolladas. Ye han observado
rosetas de PMN y de monocitos alrededor de levaduras con gruesa cápsula.
INMUNIDAD XUMORAL EN LAY MICOYIY.
Los hongos y sus productos extracelulares constituyen una

importante fuente de antígenos capaces de despertar una respuesta
inmunohumoral. Ye ha podido demostrar en numerosas micosis primarias
y oportunistas la presencia de anticuerpos específicos de clase IgG, IgM,
IgE e incluso IgA El predominio de una u otra clase de inmunoglobulinas
depende del antígeno, el estado del huésped, la forma clínica y fase
evolutiva de la micosis. Yin embargo, no se ha podido demostrar su papel
como efectores de una protección frente a la infección.
°

°
Las inmunoglobulinas y el complemento parecen desempeñar un

papel protector pero éste no sería directo ni primordial, sino asociado a la
actividad celular de PMN y macrófagos.
La existencia de complejos inmunes es común en algunas formas

clínicas de micosis cono en la Candidosis mucocutánea crónica. Los
factores bloqueantes (unión anticuerpos-mananos) podrían ser los
responsables de una disminución la blastogénesis de los linfocitos.
Los anticuerpos del tipo IgE se encuentran muy relacionados con las
reacciones de hipersensibilidad inmediata a los hongos.
INMUNIDAD CELULAR EN LAY MICOYIY.
Una de las primeras observaciones sobre la inmunidad en las

micosis fue la existencia de pruebas cutáneas de tipo retardado
(tuberculina) como consecuencia de la inoculación intradérmica de
extractos de micelio o del medio de cultivo de diversos hongos, tricofitina,
candidina, etc.
Este tipo de respuesta cutánea corresponde a una respuesta inmune

de mediación celular, la cual se acentúa o desaparece en los casos de
diseminación de la micosis o bien de estados terminales. Ye acepta que el
papel de la inmunidad celular desempeña un papel importante en los
mecanismos de protección frente a la infección micótica.
La anergia cutánea en las micosis es específica y reversible, y puede

ser explicada por uno o más de los siguientes mecanismos; linfocitaria
(inmunocomplejos linfoquinas de los linfocitos T supresores); aumento de
los linfocitos T supresores o bien de una alteración en la circulación de los
linfocitos.
Ye ha demostrado la importancia de ciertos factores raciales y

genéticos en el desarrollo y evolución de las micosis; las coccidioidomicosis
es un ejemplo de factores genéticos e inmunológicos relacionados con la
evolución de la infección.
INMUNOTERAPIA EYPECÍFICA EN LAY MICOYIY.
El desarrollo de vacunas y su empleo con la finalidad protectora, se

conoce experimentalmente en diversas micosis, en particular, en las
dermatofitosis, candidosis, etc. En la práctica sólo se preparan vacunas
con hongos blastosporados generalmente m

y otros levaduriformes.
°

°
La aplicación de estos tratamientos en el hombre no ha demostrado

ser eficaz, excepto en el caso de algunas alergias respiratorias.
PREPARACIÓN DE ALERGENOY MICÓTICOY.
Para la obtención de alergenos provenientes de hongos atmosféricos

se debe realizar lo siguiente:
1.V Aislar el hongo del medio ambiente y clasificarlos.

2.V Yembrar en el caldo Yabouraud las especies aisladas.
Incubar a 28°C hasta que le crecimiento del hongo forme
una película en la superficie.
3.V Desecar en un desecador de cloruro de calcio.
4.V Pulverizar.
Existen distintas soluciones extractoras que pueden ser utilizadas:
YOLUCIÓN DE COCA.
Cloruro de sodio 0.5 g

Fenol 0.4 g
Bicarbonato de sodio 0.275 g
Agua destilada 100 cm3
Debe hacerse burbujear anhídrido carbónico hasta que no haya

viraje a rojo, utilizando solución de fenolftaleína.
YOLUCIÓN DE YTIER-XOLLIYTER.
Glicerina pura 4.6 g

Cloruro de sodio 0.4 g
Agua destilada c.s.p. 100 cm3
Xacer una extracción cualquiera de las soluciones extractoras

utilizando el hongo pulverizada a razón de 5 g de polvo para 100 cm3 de
solución extractora. Realizar la extracción durante 4-6 días. Pasar luego
por filtro Yeitz.
Deberá valorarse el extracto alergénico dosado el nitrógeno. La

solución para pruebas intradérmicas deberá contener 0.01 mg de
nitrógeno/cm3.
°

°
Cuando son soluciones para el tratamiento de sensibilizantes

deberán hacerse soluciones del alérgeno ¹¼1000 en solución fisiológica.
YUYPENYIONEY DE XONGOY PARA PRUEBAY INTRADÉRMICAY.
Levadurina, blastomicetina.
1.V Cultivar los hongos en agar Yaboraud.

2.V Realizar una suspensión homogénea en solución fisiológica
(turbidez comparada con los tubos 3 o 4 de la escala de Mc
Farland)
3.V Dejar reposar en la heladera para separar los grumos más
gruesos.
4.V Calentar a 60°C durante una hora.
5.V Repetir la operación durante 3 días.
6.V Agregar mertiolate al ¹¼10000.
7.V Controlar la esterilidad.
8.V Distribuir en ampolletas.
Esporotriquina.
1.V Utilizar varias cepas de r r#.

2.V Emplear el medio de Yaboraud glucosado con cistina 50 mg.
3.V Cultivar en estufa a 37°C durante 10 días.
4.V Yuspender el cultivo en solución fisiológica y operar de acuerdo
con la técnica descrita anteriormente.
5.V Verificar la dilución más conveniente para enfermos de
esporotricosis.
Paracoccidioidina II.
1.V Cultivar varias cepas de °

en agar sangre a 37°C
durante 15 días.
2.V Realizar una suspensión en una solución fisiológica fenolada al
0.5%, agitando periódicamente el recipiente que contiene perlas
de vidrio.
3.V Calentar luego la suspensión a 80°C durante media hora por 3
días sucesivos.
4.V La suspensión madre debe diluirse al 5% en solución fisiológica
fenolada para poder ser utilizada en la prueba intradérmica.
°

°
FILTRADOY.
Xistoplasmina, Coccidioidina, Paracoccidioidina, etc.
1.V Cultivar las cepas de los distintos hongos en el medio de Ymith,

sin pepetona durante 2-3 meses, mantenidas a temperatura
ambiente. Ye aconseja utilizar balones o erlenmeyer que ofrezcan
una superficie amplia.
2.V Filtrar por Yeitz.
3.V Agregar mertiolate al ¹¼10000.
4.V Deberá verificarse el poder del antígenno en un lote de cobayos
infectados con el hongo cuyo filtrado se estudia y, basándose en
esto se realizará la dilución conveniente.
5.V También se ensayará el filtrado en enfermos portadores de la
micosis correspondiente.
6.V Deberá recordarse que son reacciones tardías y que la lectura se
realizará a las 24 y 48 horas.
Tricofitina.
1.V Preparar el caldo de Yaboraud glucosado al 2% con 1% de

peptona y 0.5% de extracto de levadura.
2.V Distribuir en frascos que ofrezcan una superficie amplia.
3.V Esterilizar a ¾ de atm durante 20 minutos.
4.V Yembrar los dermatofitos (Ô
÷
r ÷
& en la superficie del líquido.
5.V Cultivar a temperatura ambiente durante 1-2 meses.
6.V Filtrar.
7.V concentrar al décimo al vacío a temperatura 40°C.
8.V Dializar.
9.V Agregar ácido fenólico al 0.2%.
Para preparar las pruebas intradérmicas se utiliza el antígeno

diluido al 1%. Para emplearlo como agente terapéutico o
desensibilizante usarlo diluido al 1%.
ANTÍGENO POLIYACÁRIDO DEL ° !") ') (PARA REACCIÓN

DE FIùACIÓN DEL COMPLEMENTO).
1.V Yembrar el °
en agar Yabouraud enriquecido con
vitaminas, extracto de carne y extracto de levadura.
2.V Cultivar el preparado a 37°C durante 2 meses.
3.V Yuspender el crecimiento fúngico en solución fisiológica.
°

°
4.V Centrifugar la suspensión.

5.V Lavar 3 veces con acetona y 3 veces con éter.
6.V Realizar una suspensión de las células en solución de Veronal
(pX 7.3-7.4) al 15% aproximadamente.
7.V La solución sobrenadante es el antígeno.
8.V Realizar prueba de esterilidad.
9.V Distribuir y mantener en heladera. Ye aconseja conservar el
antígeno en frasco tipo penicilina.
PREPARACIÓN DE VACUNAY.
1.V Aislar E Identificar bien las muestras de los hongos

blastosporados (generalmente m

).
2.V Yembrar en agar Yabouraud glucosado e incubar a temperatura
ambiente a 37°C.
3.V Yuspender el crecimiento fúngico en solución fisiológica estéril
en un frasco que contenga perlas de vidrio, previamente
esterilizado.
4.V Agregar para disgregar los posibles grumos que existan.
5.V Agregar 5 gotas de lugol doble para cada 10 cm3 de suspensión.
6.V Dejar actuar una hora.
7.V Decolorar luego con solución de hiposulfito de sodio al 10%
(bastan algunas gotas).
8.V Diluir la suspensión hasta que sea comparable al tubo 2 o 3 de
la escala de Mc Farland, utilizando solución fisiológica.
9.V Realizar controles de esterilidad para hongos, bacterias aerobias
y anaerobias.
10.V Agregar mertiolate cuya concentración final sea de ¹¼20000, o
tricresol al 0.3%.
11.V Distribuir en frascos con tapón de goma. Ye aconseja preparar
un frasco de vacuna a partir de la vacuna original diluyendo 1
cm3 de esta en 9 cm3 de solución fisiológica para ser usada en
primer término al iniciar la serie vacunante, pues en algunos
casos no se puede usar la vacuna original porque produce
reacciones violentas.
12.V Rotular el frasco No. 1 (dilución ¹¼10) y el número 2 (vacuna que
origina una turbidez parecida a los tubos 2 y 3 de la escala de
Mc Farland).
13.V Iniciar la serie con el frasco 1 inyectando 0.10 cm3por vez hasta
llegar a 1 0.5 cm3. Proseguir con esta medida hasta terminar el
frasco 1 (también se puede llegar a 1 cm3). Ye sigue de la misma
manera con el frasco 2.
14.V La frecuencia de las inyecciones es de 2 por semana.
°

°
TÉCNICAY YEROLÓGICAY.
REACCIONEY DE PRECIPITACIÓN.
Yon de mucha utilidad en algunas afecciones micóticas pues

facilitan la evaluación del curso de la enfermedad, permitiendo con su
ayuda confirmar las mismas y pronosticar con cierta seguridad, en
algunos casos la evolución de la enfermedad.
En todas las técnicas usadas los materiales son: sueros de los

enfermos y antígenos de los agentes patógenos que se investigan.
Los sueros en todos los casos deberán ser frescos, recién extraídos o
conservados en el refrigerador, congelados. Las diluciones de los mismos
se harán siempre en el momento de ser empleadas.
PREPARACIÓN DE LOY ANTÍGENOY.
Los antígenos pueden ser dos tipos:
1.V Antígenos somáticos (celulares):
Provienen de la trituración de los micelios o levaduras. Estas se

obtienen cultivando el hongo en medios líquidos por agitación, incubando
a temperatura ambiente. La duración de la incubación es de 10 días para
"
y 48 horas para m

. En el caso de X

,
°

etc., la duración de la incubación varía pues depende del
crecimiento del hongo ya que aquellos tardan más tiempo en desarrollarse.
Luego se rompen las células mediante procedimientos que dependen

de las disponibilidades del laboratorista. Ye usan recipientes estériles con
perlas de vidrio agitando mecánicamente o a mano por periodos si no se
dispone de un agitador. Lo mejor sería emplear aparato ultrasónicos. Ye
centrifugan los materiales obtenidos y el sobrenadante se dializa,
concentra y liofiliza.
2.V Antígenos metabólicos:
Ye consiguen a partir de filtrados de los cultivos en medios líquidos

que han sido incubados a 27°C durante 30 días. Los líquidos así obtenidos
se separan del crecimiento fúngico por filtración, se les dializa y se
concentran y liofilizan. La concentración del material activo varía de 30 a
100 mg/ml.
°

°
Los antígenos aspergilarios y los de m

se emplean en la
concentración de 50 mg/ml para la reacción de inmunodifusión
(Ouchterlony) y de 100 mg para la inmunoelectroforesis.
Para la técnica de electrosinéresis las concentraciones utilizadas

son: 100, 50 y 25 mg/ml.
TÉCNICA DE LA DOBLE DIFUYIÓN.
La reacción de precipitación se efectúa mediante la utilización de

placas Petri (Ouchterlony) n las cuales se formará una capa gelosa. Yobre
la superficie del medio se depositará una gota de antígeno y un gramo del
suero en estudio que difundirá a través del mismo. Al encontrarse el
antígeno con los anticuerpos de suero se formarán líneas opacas de
precipitación que se pueden observar claramente.
El medio se prepara con gelosa purificada a una concentración de

1% utilizando como solvente una solución buffer de Veronal 0.025 M a pX
8.2. Ye le adiciona mertiolate ¹¼5000 (concentración final) como conservador.
Yi se usa un agar común deberá ser purificado mediante varios

lavados con agua destilada. El espesor de la placa de gelosa deberá ser de
5 mm.
Cuando se utilizan cajas de Petri de 10 cm de diámetro se usarán 15

ml del medio y si las cajas son de 5 cm de diámetro se emplearán 8 ml.
Una vez frío el medio, mediante un sacabocado se practicará una

perforación central de unos 12 mm que se destinarán para contener el
suero del enfermo. Alrededor de la perforación central y una distancia de 1
cm, se excavan otros agujeros de 9 mm de diámetro y en ella se ubicarán
los antígenos. Para placas de 10 cm se pueden practicar hasta 6
excavaciones laterales y 3 para cajas de 5 cm.
Este ensayo puede ser realizado utilizando portaobjeto, cubierto con

una capa de agar del mismo espesor y realizando todas las operaciones ya
descritas. Es conveniente porque permite economizar medio y cajas Petri.
Cuando los antígenos y anticuerpos difunden, si corresponden y

están en relaciones óptimas, originan líneas o bandas bien visibles de
precipitación. Yi las concentraciones son equivalentes, la banda de
precipitación estará situada aproximadamente en la distancia media entre
los dos reservorios. Cuando la banda de precipitación esta más cerca de
°

°
uno de los componentes de la reacción es menor y será justamente aquella

más cercana al reservorio.
TÉCNICA DEL GRADIENTE.
Últimamente se ha adoptado esta técnica que ofrece resultados más

fieles semicuantitativos.
Ye prepara una placa de gelosa de la misma manera descrita

anteriormente. Ye practica un surco central de 3 cm de longitud por 2 mm
de ancho y se hacen perforaciones de 5 mm de diámetro a lo largo del
surco y en ambos lados. Las dos primeras se hacen a una distancia de 2
mm, las segundas a 3 mm, las terceras a 4 mm y las cuartas a 5 mm del
reservorio central, el cual contendrá el suero del enfermo, y los agujeros
laterales los antígenos correspondientes. Las bandas de precipitación
aparecerán más nítidas con algunos de los sueros a una distancia que
varía según la concentración de anticuerpos de cada uno de ellos.
Lectura de resultados.
Las placas se colocan en un recinto de 15-20°C y se les observa

luego de 1, 2, 5 y 7 días.
La precipitación se produce bajo forma de una o varias bandas

opacas en la zona comprendida entre el antígeno y el suero. Las bandas
finas en líneas rectas o ligeramente curvas no presentan problemas de
especificidad sobre todo si hay varias. Las falsas reacciones aparecen bajo
forma de nubes irregulares (banda difusa); ellas pueden deberse
principalmente a contaminaciones del suero, hemólisis o lipemia (anillo
circular alrededor del reservorio del suero). La presencia de sustancia C n
ciertos antígenos fúngicos y de la proteína C de ciertos enfermos, puede
conducir a la formación de bandas de precipitación no específicas que
desaparecen por la acción del citrato de sodio al 5%.
TÉCNICA DE INMUNOELECTROFOREYIY EN GELOYA.
Ye utilizan láminas de vidrio (portaobjetos) de 75 X 25 mm,

formando sobre ella un depósito de gelosa de 2 mm de espesor. La gelosa
purificada se prepara al 1% en un tampón de veronal sódico (pX 8.2) y de
fuerza iónica de 0.05, adicionado de mertiolate a una concentración final
de ¹¼10000.
Ye marca una perforación (canaleta) central a lo largo de la lámina,

de 65 X 2 mm de ancho, sin retirar del agar. A ambos lados de la canaleta
°

°
y a una distancia de 3 a 4 mm se practicarán con un sacabocas dos

perforaciones redondas de 2 mm de diámetro. En estos reservorios se
colocan los antígenos.
Así preparado el portaobjetos se le ubica en el aparato de

electroforesis. Realizando las conexiones pertinentes se efectúa la corrida
electroforética bajo un potencial de 5 voltios por cm en los extremos de la
lámina durante 30 minutos.
Finalizada la operación se coloca el suero del enfermo quitando

previamente el agar de la canaleta central y se ubica al portaobjetos en
una cámara húmeda durante 24 a 48 horas, tiempo necesario para que se
forme el inmunocomplejo y su precipitación.
Al cuarto día la lámina se sumerge en una solución de citrato de

sodio al 5% durante 24 horas para disolver eventuales precipitados no
específicos que se puedan formar entre la sustancia C de ciertos antígenos
fúngicos y la proteína C de los sueros de los enfermos de diversas
afecciones no micóticas. Las lecturas se realizarán al quinto día.
Ye puede fotografiar o colorear con Amidoschwart después de un

lavado con solución fisiológica durante 24 horas, cambiando la solución
cada 12 horas. Luego se enjuaga con agua y se cubre el portaobjetos con
un papel filtro, dejándolo hasta que se seque a temperatura ambiente o a
50°C. Ye sumerge el colorante durante una hora y se decolora con ácido
acético al 2-5% en metanol al 50%. Ye seca y se conserva.
TÉCNICA DE ELECTROYINÉREYIY.
Recientemente el método de electroforesis desarrollado por Bussard,

combina, la electroforesis y la precipitación inmunológica entre el antígeno
fúngico y el suero que contiene los anticuerpos antifúngicos sobre un gel
de agarosa, siendo una técnica más sensible y que permite un rápido
resultado a las 2-4 horas.
En condiciones técnicas elegidas (soportes, tampón) las

gammaglobulinas son dirigidas hacia el cátodo, mientras que el antígenos
hacia el ánodo. El encuentro entre los dos constituyentes de la reacción se
traduce en una precipitación que se obtiene hacia el final de la migración.
El dispositivo experimental consiste en una cámara de electroforesis

y un rectificador de corriente.
°

°
Ye usan portaobjetos (75 X 25mm) individualmente o en grupos de 6

en cuadros de poliestireno. Ye mojan las láminas de gelosa al 1% en agua
destilada, se secan y luego se cubren con gelosa purificada o agarosa al
1% en un tampón de veronal sódico. Esta capa debe tenr alrededor de 2
mm de espesor.
Con sacabocado especial se hacen agujeros. Las tres perforaciones

destinadas a diferentes concentraciones de antígeno están en el lado del
cátodo (-) y las tres destinadas al suero están en el ánodo (+) separadas
por 6 mm de distancia. Miden 2 mm de diámetro y recibirán un volumen
de 20Xl cada una. Los antígenos metabólicos (filtrados de cultivo) y los
antígenos somáticos (triturados de micelio) se utilizan a una concentración
de 100, 50 y 25 mg/ml en agua destilada. El tiempo de migración es de 90
min para una tensión de 5 V/ cm. La lectura se hace inmediatamente pues
en ciertos casos se pueden observar desde la finalización de la migración,
1 o más anticuerpos. En ausencia de bandas de precipitación inmediata en
el preparado es necesario recurrir a la coloración con azul de Coomassie,
procedida de lavados sucesivos de solución fisiológica y agua destilada (24
horas). Yeguidamente se deseca.
REACCIONEY DE INMUNOFLUOREYCENCIA.
Los trabajos de Coombs demuestran que es sumamente importante

el marcado de anticuerpos con isocianato de fluoresceína para ubicar a
los antígenos bacterianos o virales sobre los cortes de tejido. La aplicación
a la micología médica es reciente.
El método directo emplea un suero inmune o inmunológico extraído

de este suero, conjugadas al fluorocromo. El suero se agrega sobre la
lámina donde se halla ubicado el antígeno del (el hongo) que puede estar
preparado bajo la forma de frotis o cortes histológicos. La reacción Ag-Ab
se produce y la localización del hongo sobre el preparado se visualiza a la
luz fluorescente.
Y
Y El método indirecto con la técnica de capas múltiplesµ o en
sándwichµ es la que más se usa.
Para detectar un hongo sobre la lámina se agregaY un suero humano

o animal que, lógicamente debe contener anticuerpos antihongosµ; luego
se adiciona un suero antiglobulinas humanas masrcadas con isotiocianato
de fluoresceína.
Yi la fluoresceína persiste después del lavado, la reacción Ag-Ab se

produjo.
°

°
Técnica:
Preparación del frotis: Ye usan portaobjetos delgados, muy limpios;

con un diamante se trazan círculos de 1 cm de diámetro y distantes
algunos centímetros.
Los frotis de levaruas, m X

etc., se efectúan
con suspensiones estandarizadas (4-5 levaduras por campo). La fijación de
los frotis, después de la desecación, se hace con una o dos inmersiones en
acetona.
Yueros: Los sueros de los enfermos, conservados a ²20°C,

adicionados de mertiolate ¹¼5000 (concentración final), son diluidos en el
momento del uso mediante la siguiente solución: cloruro de sodio 8.5 g,
fosfato disódico con 12 X2O 2.7 g, fosfato monosódico con 2 X2O 0. 4 g,
agua destilada c.s.p. 1000 cm3 (pX 7.2).
Ye utilizan diluciones de suero según la progresión geométrica de la

razón 2. Ye deposita 0.05 ml de cada dilución sobre los círculos del frotis
del portaobjetos. Estos se mantiene en contacto con el suero del paciente
durante 30 minutos dentro de una cámara húmeda (puede ser una caja
Petri). Ye lava el exceso de dilución de suero con la solución tampón ¹¼100
de suero fluorescente antiglobulina humana. Ye coloca en una caja
húmeda durante 30 min. Luego se lavan las láminas con solución tampón.
Ye monta el preparado con una solución de fosfato disódico con 12

X2O 3.222 g, fosfato monosódico con 2 X2O 0.136 g, glicerina 80 ml agua
destilada 20 ml.
El examen se practica con luz UV y, preferentemente, con un

microscopio con fondo oscuro. Cada reacción debe tener un testigo
negativo y uno positivo.
La inmunofluorescencia permite obtener en las micosis humanas

títulos mas elevados de anticuerpos que las reacciones de fijación del
complemento, son del orden Z, 1/8, 1/16 y como máximo 1/64. Estos títulos
pueden, a veces, alcanzar y hasta sobrepasar a aquellos observados con
las reacciones de aglutinación, cuya utilización es posible en algunas
micosis.
V
V
V
V
°

°
V
32 .5&+[06V
V
V
V
V
V
V
V
307c2+[06V
+7+3%.&1>&6V

V p
Amadeo D·Alessandro; Ed. Panameriacana.
V Ô
Ô

A. Bonifaz; Ed. Méndez Cervantes.
Xalapa, Ver., a ____________________________________________
Vo. Bo.
____________________________________________
°

°

.&+&VV
+32+2V .31c0)&2V
\ V
3 &.&+ 0VGV.>+&V) V732V.&&432V23. V+32+2V
.31c0)&2VP+32+2V .31c0)&2VQVGVP+32+2V .31c0)&2V
H%.c 3V(IQV
V
V
V
V
Xalapa, Ver., a ______________________________________________
Vo. Bo.
_________________________________________
V
V
°

°
.&+&VV
V
-+23.+&V7>0+&V
FORMATO DE UNA XIYTORIA CLINICA
+) 0+1+&+]0V) 7V &+ 0 V
0<6V Yilvia Cuevas Irisson

6V 41 años
2
6VV Femenino
) 6V Avenida Puerto de Veracruz ^21, Col. El Pireo, C.P. 92360,
Yan Rafael, Veracruz.
3' 6V Ama de Casa, Costurera.
)&32V) V7&V7 2+]0V

V
!6 Cree que la micosis pudo haber sido originada por haber
hacer el aseo de un criadero de puercos durante mucho tiempo. Yegún el
Dr. F. Becerra López fue debido a una crisis de nervios, lo que hacia que la
señora se rascara de la rodilla para abajo. Ye untaba alcohol.
Ô

* Microrgan 500mg, caja con 14 tabletas., una
cada 12 horas; Daflón 500mg grageas, dos juntas en cada comida;
Neurobion 1000 ampolletas, una caja, vía IM, una cada tres días; Acifur
comprimidos 200mg, una cada 5 horas por 10 días; Alin, tomaba 6
pastillas, al siguiente día 5 y sucesivamente hasta llegar a media pastilla,
descansaba 15 días y comenzaba de nuevo. Dejó estos tratamientos por
presentar mareos intensos y debilidad.
Ye ha sometido a tratamientos alternativos como baños con agua ²

vinagre, agua ² carbonato, baños de sol. Tomó un preparado de
composición desconocida, con lo que aparentemente tuvo una ligera
mejoría.
°

°
÷

* Yporanox 15D, combinada con la pomada
Barmicin compuesto (Betametasona, clotrimazol y gentamicina).
Yuspendió el tratamiento 20 dìas antes de la toma de muestra.
'VV' 6 Un año aproximadamente.
,V V V 6 Micosis comenzada en pie derecho,

que posteriormente comenzó en pie izquierdo. Ye manifiesta como una
resequedad que avanza hasta formársele llagas y grietas con apariencia
llorosa y con pus.
7 D 6 Piel de planta del pie.
)&32V) V7&3.&3.+3V
V
Examen en fresco: 32++53V
Cultivo:
VMedio: Yabouraud
VTemperatura: Ambiente
VTiempo de crecimiento: 10 días
VColonia: Blanca, aterciopelada.
VMicrocultivo: No se realizó
VTinción de Gram: Gram negativo.
VTinción de Zielh-Nelssen No AAR
V
. 2c7&)3V
V
Ye identificó ÷rr
r

1@.&32V. 3 0)&)32V
V
V VV
V
Crema de Miconazol al 2%, crema o loción de clotrimazol al 1%,
crema de ketoconazol al 2%, crema o loción de econazol al 1%, crema de
ciclopitrox al 1%, crema de oxiconazol, crema o gel de naftifina al 1%,
crema de butenafina y de terbinafina al 1%.
El tratamiento debe continuarse 1 ² 2 semanas después de la

remisión clínica.
VV
°

°
V
Griseofulvina 250 o 500 mg dos veces al día, durante 2 ² 4 semanas,
itraconazol en dosis de 200mg al día durante dos semanas o 400mg
diarios por una semana; terbinafina, 250mg al día por 2 ² 4 semanas.
V
&V
V
V
V
V
03. V) 7V&7c03

°

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c 

El hombre no está excluido del ataque de los hongos. Estos lo

La agricultura se ve seriamente comprometida si no se combaten

Muchos productos manufacturados, tales como telas, cueros,

La ganadería también tiene problemas de micosis que pueden ser

El hombre se ve afectado por los hongos cuando estos le provocan

Xasta ahora hemos considerado el aspecto negativo de la actividad

 ,V%  V V V- V

V Todos son heterótrofos (quimioorganotróficos) por lo que

Fig 1. Estructura del talo o micelio de mohos y levaduras y de dos

Está constituido por

Fig. 2. Fase micelial y de levadura con talo reproductor y

Yi el talo está disociado, se produce n colonias de levaduras de

Los hongos que tienen una fase parasitaria levaduriforme y una

 V V V

Los hongos presentan diferencia en su forma y constitución,

picnidios, o sexuados como el apotecio (aspecto de copa), peritecio y

Fig. 3. Modificaciones microscópicas del talo

Para comprender los mecanismos biológicos de adaptación y de

A los hongos se les considera como plantas por que poseen

Por su carácter de heterotróficos se ven obligados a alimentarse de

Otros son parásitos de plantas y animales, entre ellos el hombre;

Algunos pueden vivir como parásitos y como saprofitos; entre ellos

Un esporo o un trozo de micelio ge rmina y origina una

Cada célula de micelio consta de una pared, que encierra

Fig. 4. Esquema estructural de los hongos

La célula fúngica tiene las características típ icas de las eucariotas:

l oo l divi ión di 

i lio on

Reproducción sexuada de una levadura perfecta con formación de

Existen hongos que en determinado momento de su ciclo biológico

Como se ha enunciado anteriormente, la activida d biológica y la

Con la utilización de la solución aclarante las proteínas, grasas y

Cualquier alimento u objeto que tenga hongos

1.V Flamear y enfriar el asa

03& No olvide limpiar su mesa de trabajo antes y después de la

32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV

%732&.+3V) V1+% %.&2V

 V '   : onjunto de filamentos o hifas que se desarrolla a

-6 cada filamento que constituye el talo pluricelular o micelio

 6 sinónimo de talo

   6 crecimiento que caracteriza a ciertas especies de

 ': cuando se originan dentro de un ór gano de reproducción,

' 6 cuerpo de fructificación del micelio reproductivo de los

 . Parte del micelio de reproducción especializado para

 : exoesporos pequeños de 3 a 6 micras, de forma variada.

 6 exoesporos grandes tabicados de 50 a 80 micras.

Tamaño comparativo entre macro y microconidias

 V V ' V V ' : hifas enrolladas como si fuera un

Xalapa, Ver., a ______________________________________

Los colorantes han sido utilizados desde los tiempos más

El uso de los colorantes ha contribuido notab lemente al progreso

El estudio morfológico, microscópico, de los tejidos naturales y de

Yea por unión de grupos atómicos de afinidad química manifiesta,

admiten en el proceso más que una fijación mecánica de las moléculas

El   aunque sea coloreado, no es capaz de teñir;

Por si solos los auxócromos no están coloreados, pero cuando se

Modernamente se ha podido comprobar que la adsorción de la luz

Los grupos cromóforos poseen la capacidad de absorber la luz

De acuerdo con esta exposición, se puede considerar como

Los colorantes atendiendo a su afinidad en la función tintórea

Los colorantes básicos pueden clasificarse como sales cuya base

En número menor, existen unos colorantes llamados neutros, en

Finalmente se ha constituido el grupo de los colorantes

c

,V% VV V- V

V Todos son heterótrofos (quimioorganotróficos) por lo que

V V V

l oo l divi ión di

ilio on

03& No olvide limpiar su mesa de trabajo antes y después de la

32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV

V ' : onjunto de filamentos o hifas que se desarrolla a

-6 cada filamento que constituye el talo pluricelular o micelio

6 sinónimo de talo

6 crecimiento que caracteriza a ciertas especies de

': cuando se originan dentro de un ór gano de reproducción,

' 6 cuerpo de fructificación del micelio reproductivo de los

. Parte del micelio de reproducción especializado para

: exoesporos pequeños de 3 a 6 micras, de forma variada.

6 exoesporos grandes tabicados de 50 a 80 micras.

V V ' V V ' : hifas enrolladas como si fuera un

El aunque sea coloreado, no es capaz de teñir;

VV V V V<VVV V V

VV%

VV V'

VVB1

VV% EV'V V

+V . &+532VGV373.&0 2V

++V =0+&2VGV+0+30 2V

V Ácido tartárico 0.5gr

32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV

) VV7<V

V Este método se utiliza especialmente para la observación en

V Emplear como medio de contraste tinta china que debe ser de

32 .5&+30 2V% 0 .&7 26VV