Ciclo Celular

To Divide or not
to divide, that is
the question

Biología Celular 2005-06

The Nobel Prize in Physiology or

Medicine 2001

"for their discoveries of key regulators of

the cell cycle "

Leland H. Hartwell R. Timothy (Tim) Hunt Sir Paul M. Nurse

1/3 of the prize 1/3 of the prize 1/3 of the prize

USA United Kingdom United Kingdom
Fred Hutchinson Cancer Research Center Imperial Cancer Research Fund Imperial Cancer Research Fund
Seattle, WA, USA London, United Kingdom London, United Kingdom
b. 1939 b. 193 b. 1949

Biología Celular 2005-06

1
http://www.nobel.se/medicine

The Nobel Prize in

Physiology or Medicine
2001
The Nobel Assembly at Karolinska
Institutet has awarded the Nobel Prize in
Physiology or Medicine jointly to Leland
Hartwell, Tim Hunt and Paul Nurse for
their discoveries of "key regulators of the
cell cycle". Using genetic and biochemical
methods, they identified the molecules
CDK and cyclin that control the cell cycle
in eukaryotic organisms. These
fundamental discoveries have a profound
impact on many aspects of biology and
medicine.

CDK and cyclin are key molecules that control and coordinate
DNA-synthesis, chromosome separation and cell division.
CDK and cyclin together drive the cell from one cell cycle
phase to the next.

Biología Celular 2005-06

The Nobel Prize in Physiology or

Medicine 2002

for their discoveries concerning genetic

"

regulation of organ development and

programmed cell death"
Sydney Brenner H. Robert Horvitz John E. Sulston
1/3 of the prize 1/3 of the prize 1/3 of the prize
United Kingdom USA United Kingdom
The Molecular Sciences Institute Massachusetts Institute of Technology The Wellcome Trust Sanger Institute
Berkeley, CA, USA (MIT) Cambridge, United Kingdom
Cambridge, MA, USA
b. 1927 b. 1947 b. 1942
(in Union of South Africa)

Biología Celular 2005-06

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 Ciclo Celular

1858 – Rudolf Virchow – Doctrina celular

Objetivos:
-Estudiar los mecanismos que controlan y coordinan la proliferación celular.
-Estudiar el ciclo celular.

Ciclo celular: Sucesos

celulares que se
producen de modo
repetido y que dan lugar
a la proliferación
celular, es decir a la
formación de dos células
hijas.

Crecimiento celular / División en células hijas

Control de la maquinaria necesaria

Biología Celular 2005-06

Clasificación de las células en función de su capacidad

proliferativa

1- Células con especialización estructural extrema, como las células

nerviosas, células musculares o eritrocitos que han perdido la capacidad de
dividirse. Una vez diferenciadas, permanecen en este estado hasta su muerte.

2- Células que normalmente no se dividen, pero que pueden iniciar la

síntesis de DNA cuando se enfrentan a un estímulo apropiado (hepatocitos
y linfocitos)

3- Células que normalmente poseen un nivel relativamente alto de actividad

mitótica, (las células madre, (stem cells).

Biología Celular 2005-06

3
 2.1 Tipos
2.A Tipos celulares
celulares // Biología
Biología del
del cultivo
cultivo

¿qué podemos cultivar? Mantener en cultivo : casi todo

Cultivar : solo lo que prolifera

Biología Celular 2005-06

Células madre (Stem cells)

Propiedades: - No está totalmente diferenciada

- Se puede dividir sin límites
- Cuando se divide, cada célula hija puede
permanecer como célula madre o puede iniciar
una vía que conduce irreversiblemente hacia la
diferenciación terminal.

Obtención: tejidos adultos

embriones

Biología Celular 2005-06

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 Sistemas Experimentales

-Cultivos celulares.
-Saccharomyces cerevisae.
-Shizosaccharomyces pombe.
-Xenopus laevis

Biología Celular 2005-06

Longitud de ciclo :
• levadura unicelular : 90-120 min
• fibroblasto en cultivo 24-32 h Interfase versus mitosis
• hepatocito humano ‘in situ’ : 1 año

1h

Embriogenesis Caenorhabditis, Lodish 5th edit

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 Fases del ciclo celular

13.1 The cell cycle is an ordered series of

events leading to the replication of cells

M: Comprende la mitosis y la
citocinesis

G0: Detenimiento
G2: Entre S y M,
del ciclo.
tiempo adicional
para el crecimiento.

G1: Entre M y S,
tiempo adicional para
S: Duplicación del DNA el crecimiento.
Figure 13-1
Copyright (c) by W. H. Freeman and Company

Biología Celular 2005-06

G0 Resting phase
G1
INTERPHASE

S DNA Synthesis
G2
M Mitosis- cell division
Biología Celular 2005-06

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 Interfase G1
-Primera fase de crecimiento
-Los orgánulos se replican
-Se incrementa la síntesis de proteínas y RNA (no DNA)
-En función de factores ambientales y las condiciones de desarrollo la célula
entra en fase Go o se empieza a dividir (G1).

G1, la decisión de dividirse.......

-Está determinada por factores de crecimiento (PDGF, FGF)
-Puede inhibirse por el contacto célula-célula, la densidad celular, la perdida de
adhesión y los niveles de nutrientes.
-Funcionalmente está controlado por la activacion de Cdk.

CDK and cyclin are key molecules that control and coordinate DNA-synthesis,
chromosome separation and cell division. CDK and cyclin together drive the cell from
one cell cycle phase to the next.

Biología Celular 2005-06

Fase S

- Se dobla la cantidad de DNA en la célula.

- Todos los cromosomas se replican.
Los orígenes de replicación en los cromosomas eucariotas

Número elevado
Activación en bloques : tempranos / medios / tardios
Relacionado con el grado de compactación de la cromatina

Secuencias cortas de DNA : (A/T)TTTAT(A/G)TTT(A/T) 11 bp repetidas

¿cómo se evita la re-activación de un origen de replicación ya replicado?

Las secuencias ya replicadas contienen nucleosomas con histonas de

nueva síntesis, reconocidas por CAF-I (Chromatin Assembly Factor I). Las
histonas de nueva síntesis son acetiladas en dos lisinas, y deacetiladas por
acción de CAT al final de G2, antes de la entrada en mitosis.

Biología Celular 2005-06

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 Fase G2

-Continua el crecimiento celular, por lo que se requiere

de síntesis de proteínas y RNA.
-Al final de esta fase las células poseen:
-Núcleo con envoltura nuclear
-nucleolos presentes en el núcleo
-cromosomas duplicado
-dos pares de centriolos (animales)
- altos niveles de MPF (factor promotor de la maduración.

M: Mitosis

To divide or not to divide that is the question?

Biología Celular 2005-06

Root tip of
onion has cells
in various
phases of cell
division

Biología Celular 2005-06

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 Biología Celular 2005-06

¿Cuáles son los mecanismos de control del ciclo celular?

Modelos de estudio :
Células de mamífero en cultivo
Levaduras de fusión (Shizosacaromices pombe)
Levaduras de gemación (Sacaromices cerevisiae)
Huevos de anfibio (Xenopus laevis)
Experimentos de fusión celular con células de mamífero cultivadas

-G1, S o G2 + M Ædesintegración envoltura nuclear y condensación de cromosomas

Complejos ciclina-CDK de fase M

-G1 + S Æ sintentizan DNA tanto G1 como S

-G2 + S Æ sintetiza DNa solo S

Complejos ciclina-CDK de fase S

Biología Celular 2005-06

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 Identificación de los genes críticos de control de ciclo en levaduras : clonaje por
complementación funcional. IDENTIFICACIÓN DE cdc28 (homólogo a CDK1)

Los genes humanos complementan en levaduras : gran conservación evolutiva

Biología Celular 2005-06

Control del ciclo celular

Cdks (quinasas dependientes de ciclinas): Enzimas claves para la progresión del ciclo
celular, catalizan la transferencia de un fosfato γ del ATP al grupo hidroxilo de serinas y
treoninas de diferentes proteínas. Presentes a lo largo de todo el ciclo celular, se activan
temporalmente por acción de las ciclinas.

Levaduras:
Cdc28 Saccharomyces cerevisae
Cdc2 Shizosaccharomyces pombe
Mamíferos: Cdks1-10

Regulación del ciclo en levaduras

Biología Celular 2005-06

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 Biología Celular 2005-06

Modelo de oocitos de Xenopus y ensayo de actividad MPF (Maturing Promoting Factor)

8 meses

5%

MPF de células de mamífero detenidas en

metafase (colchicina) actúan sobre la
maduración de oocitos de Xenopus

MPF es el factor difusible que induce a la

entrada en M en las fusiones celulares

Biología Celular 2005-06

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 Identificación de la ciclina B
en huevos de erizo de mar
(divisiones sincrónicas)

Marcaje con S35-metionina de

huevos de erizo de mar
fecundados sincrónicamente y
analizados por autoradiografía
cada 10 min y observación de
mitosis.

Máximo entre 66 y 76 min y

después con un máximo a 106 y
desaparición a 126)

Biología Celular 2005-06

Ciclinas

- Constituyen una familia de proteínas

que se unen y activan de manera
específica a las diferentes Cdks.
- Sus concentraciones se elevan y
descienden siguiendo un patrón
predecible conforme la fase del ciclo
celular.
- Cada ciclina tiene un único patrón de
expresión durante el ciclo celular.

Ciclina B1 en HeLa (Lodish 5th edit)

Biología Celular 2005-06

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 Variaciones sincrónicas de actividad MPF y ciclina B en las mitosis sincrónicas en
un huevo de Xenopus fertilizado

Extractos de huevos de Xenopus no fertilizados + núcleos de espermatozoides

Ciclina B1 en HeLa (Lodish 5th edit)

La entrada en mitosis precisa la acumulación de ciclina B, y su salida requiere de la
desaparición de la ciclina B. Por analogía se propone que es necesaria una elevada
actividad MPF para entrar en mitosis y que desaparezca MPF para salir de mitosis.
Familia de ciclinas B : 2 ciclinas B; ciclina A Biología Celular 2005-06

Regulación de los niveles de ciclina mitótica en las células embrionarias tempranas de

Xenopus. APC : complejo promotor de la anafase
Ciechanover and Saadon (2004) N-terminal ubiquitination :

N-ter, ciclin
more protein substrates join in TCB 14: 103-106

destruction box
recognition ans catalysis by ubiquitin ligases” TCB 10: 429-439
Jackson et al. (2000) “The lore of the RINGs :substrate

Factor de especificidad

Biología Celular 2005-06

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