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validacion de metodos

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VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS

Pablo Richter

Introducción

La validación de un método analítico tiene como objetivo establecer por medio de estudios científicos, que un método tiene las características de desempeño que son adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analíticas pretendidas. Una vez validada una metodología analítica, el laboratorio de ensayo deberá fijar los intervalos de aceptabilidad para el control de calidad de cada una de las propiedades analíticas del método. Una metodología, aún cuando tenga el carácter de método estándar u oficial, debería ser validada antes de ser utilizada en forma rutinaria.

Introducción

Las propiedades analíticas que necesariamente deberán ser documentadas en un proceso de validación, son la siguientes: Precisión al nivel de replicabilidad y repetibilidad Exactitud Incertidumbre Intervalo de linealidad Límite de detección del método

     

Límite de cuantificación del método

Campo de Aplicación

El presente documento corresponde a una guía técnica que define los términos y los procedimientos relativos a la validación de un método de análisis. En todas las actividades de laboratorio es esencial uniformar las definiciones y los métodos de cálculo para los diferentes términos. En este documento se establecen las definiciones relativas a propiedades de métodos analíticos que se utilizarán en los laboratorios de rutina del país.

Definiciones
 CURVA DE CALIBRACIÓN: Representación gráfica bidimensional, que muestra la variación de la señal analítica con la concentración del analito. Esta última se obtiene al graficar el valor obtenido de la señal analítica (valor absoluto, altura, área, etc.) versus las concentraciones de los estándares respectivos.  SENSIBILIDAD: Propiedad analítica que se define como la capacidad de un método para discriminar entre concentraciones (cantidades) semejantes de analito. La sensibilidad de un método analítico corresponde a la pendiente de la curva de calibración. Algunas veces se expresa informando la razón entre el valor de señal obtenida a una concentración dada de estándar.

a) Límite de Detección IUPAC: Concentración de analito que origina una señal que puede diferenciarse estadísticamente de un blanco analítico. basados en el cuociente entre la magnitud de la señal de la medida y el ruido de fondo producido por el instrumento o por el blanco analítico. .Definiciones  LIMITE DE DETECCIÓN: Existen distintas formas de definir los límites de detección de un método de acuerdo a criterios estadísticos.

Límites de detección y cuantificación ¿Cuál es la menor concentración que podemos detectar o cuantificar con este método de análisis? S= Señal Razón señal ruido S/n LD => S/n = 3 n = ruido LC => S/n = 10 .

Esta mínima concentración produce una señal detectable con una fiabilidad definida. un instrumento puede detectar con una fiabilidad definida y que es estadísticamente diferente de la respuesta correspondiente al ruido de fondo obtenido por el instrumento. la cual es tratada siguiendo todas las etapas del método completo. c) .b) Límite de Detección Instrumental (LDI): Corresponde a la concentración mínima de un compuesto analizado que. estadísticamente diferente a la señal producto del blanco obtenido en las mismas condiciones. Límite de Detección del Método (LDM): Corresponde a la concentración mínima de un compuesto que puede ser detectada en una matriz real. incluyendo separaciones y pretratamientos. sin la presencia de la matriz.

incluyendo separaciones y pretratamientos. .Definiciones  LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN DEL MÉTODO (LCM): Corresponde a la concentración mínima de un analito que puede ser cuantificada en una matriz real. Este intervalo esta comprendido entre la concentración correspondiente al del LCM y la concentración máxima que entrega el límite de linealidad.  INTERVALO DE LINEALIDAD O DE DETERMINACIÓN: Corresponde al intervalo de concentración más fiable de medida para la determinación analítica del analito. la cual es tratada siguiendo todas las etapas del método empleado. Esta mínima concentración produce una señal cuantificable con una nivel de confianza definido.

Definiciones  PRECISIÓN: Grado de concordancia de un grupo de resultados entre sí. “within run precision”) Repetibilidad (Intermediate precision. Existen tres formas de plantear un estudio de precisión:    Replicabilidad (Repeatability. “between lab precision”) . “within lab reproducibility”) Reproducibilidad (Reproducibility conditions. Dispersión de estos resultados alrededor de su media.

Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra. Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra.Niveles de Precisión  Replicabilidad: Forma de plantear el estudio de precisión. Sólo es aplicable a ejercicios de intercomparación. y en las siguientes condiciones: diferente analista. en el mismo laboratorio. por el mismo operador y con las mismas herramientas analíticas.   Esta propiedad analítica no se determina de forma rutinaria en un procedimiento de validación. en un corto intervalo de tiempo. instrumento. día. Repetibilidad: Forma de plantear el estudio de precisión. y al menos una de las siguientes condiciones es diferente: analista. para determinar el mismo analito. Reproducibilidad : Forma de plantear el estudio de precisión. para determinar el mismo analito. en el mismo laboratorio. diferente instrumento. igual o diferente día. para determinar el mismo analito. en diferentes laboratorios. Se define como la dispersión de resultados originados por aplicaciones del mismo método a alícuotas de la misma muestra. .

Definiciones  EXACTITUD: Expresa la cercanía entre el valor que es aceptado. La exactitud se expresa en términos de error.  RECUPERACIÓN: Corresponde a la diferencia (en porcentaje) entre la concentración medida de un analito en una muestra fortificada (a la que se le ha agregado una cantidad conocida de estándar) y la concentración medida en la misma muestra sin fortificar. generalmente como error relativo (Ver más adelante SESGO). . dividido por la concentración de sustancia agregada. como un valor de referencia (material de referencia certificado) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de análisis un cierto número de veces.

una media de los mismos y el valor considerado verdadero. a) b)  . SELECTIVIDAD: Capacidad de un método analítico para originar resultados que dependan de forma exclusiva del analito. para su identificación y/o cuantificación. Incertidumbre específica: Intervalo de valores en que puede encontrarse un resultado.Definiciones  INCERTIDUMBRE: Se puede distinguir entre los siguientes conceptos: Incertidumbre genérica: Duda acerca de la composición química de un objeto o una muestra. Es lo contrario a información.

8 mg / Kg Valor certificado: 2.8 mg / Kg .4 mg / Kg Incertidumbre: 0.Error vs Incertidumbre Resultado de un análisis: 2.9 – 2.5 = 0.2 mg / Kg Error: 2.9 ± 0.5 ± 0.

PROCEDIMIENTOS .

dentro del intervalo de concentraciones en que se estima que estarán las muestras a analizar. Posteriormente determinar la señal analítica que origina cada una de las soluciones. Calibración del método 1) Procedimiento para construir una Curva de calibración Preparar una batería de estándares de concentración conocida en el solvente apropiado.I. y .

respectivamente. Realizar una inspección preliminar.05s. obtener la recta de calibración: Y = S C + Yb. Calcular los coeficientes S.  .95s y LS= 1. donde C es la masa o la concentración de la sustancia a ser cuantificada y S e Yb la pendiente y ordenada en el origen de la recta. graficando los puntos experimentales disponibles y verificando visualmente si existe alguna desviación de la linealidad y aproximadamente a partir de qué valor ésta se manifiesta. descartando los puntos preliminarmente eliminados en la etapa anterior. A partir de la curva de calibración estimar la parte lineal. Calcular también los límites inferior (LI) y superior (LS) a partir de los cuales los cuocientes (señal / masa) o (señal / concentración) indiquen que un punto está fuera del intervalo lineal LI = 0. respectivamente. Yb y r (coeficiente de correlación) para la curva de calibración.

si el correspondiente cuociente (señal / masa) o (señal / concentración) es menor que LI o mayor que LS) o si algún punto inicialmente excluido debería de ser considerado para el cálculo de la curva de calibración. . incluyendo o excluyendo los puntos necesarios.  Inclusión o exclusión de nuevos valores en la curva: Si el examen hecho en c) indica que todos los puntos de la curva preliminarmente incluidos (o excluidos) lo han sido correctamente. En caso contrario. el procedimiento está terminado. repetir las etapas de b) a d). Verificar si existe algún punto preliminarmente incluido en la curva de calibración que. por comparación con los límites de corte calculados en b) debería de ser excluido (o sea. hasta que ningún valor sea rechazado o considerado para el cálculo de la curva de calibración.

5 4.42 27. Calcule la precisión de esta determinación.03 32.00 44.1.5 5.8 y 10.5 9.00 2.5 3. MVK. Calcule la concentración de MVK en la muestra.02 9.EJEMPLO – Curva calibrado     Los siguientes datos son las áreas máximas relativas en cromatogramas de disoluciones patrón de metil vinil cetona (MVK): Determine la recta por el método de los mínimos cuadrados Una muestra dio una señal para MVK con un área relativa de 10.5 Área relativa 3. Conc.03 21.5 15.3.20 . mM 0.00 50.97 39.20 47.5 1.5 7.5 8.5 6. 10. Dos evaluaciones adicionales de la muestra dieron como resultado las siguientes áreas.

luego enriquecer con estándar a diferentes niveles de concentración.I. utilizar el método de la adición estándar de acuerdo a los siguientes procedimientos alternativos. en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra sintética y se agregan cantidades variables del estándar. Calibración del método 2) Adición de estándares Cuando en el proceso de calibración del método. (curva en presencia de matriz) . se determine que hay interferencia de la matriz. a) Con muestra sintética: Utilizar una mezcla preparada en el laboratorio de todos los componentes de la matriz de la muestra sin el principio activo a determinar. Para preparar las soluciones.

00 Conc. Oxolínico en Matriz 5000000 4000000 3000000 2000000 1000000 0 0.00 400.00 150.00 Conc: (ng/ml) 50. (ng/g) .00 200.00 y = 19162x + 4564.00 300.9036.4 R2 = 0.Ácido oxolínico  Curva de Calibración de Estándar de ácido Oxolínico  Curva de Calibración de ácido Oxolínico en matriz Curva Oxolínico 15000000 y = 42084x .00 100.7 R2 = 0.9982 Área 10000000 5000000 0 0.00 200.9997 Área Curva Calibración Ác.00 100.

La ICH (International Conference Harmonization). con el método a validar. proceder a enriquecer las muestras con estándar a diferentes niveles de concentración. Calibración del método 2) Adición de estándares b) Con muestra: Cuando no es posible contar con una muestra sintética (o matriz blanco). una vez conocida la señal promedio. Para preparar las soluciones. Determinar por duplicado la señal promedio del analito en la muestra. en este caso se mantiene constante la cantidad de muestra tomada y se agregan cantidades variables del estándar. recomienda preparar muestras independientes por triplicado a cada nivel de concentración.  .I. trabajar directamente con una muestra real.

15 7. 2 y 3 ml de solución estándar del analito de 10 µg/l.99 µA y 10. 6. Enseguida en tres matraces de aforo de 10 ml se agrega una alícuta de 5 ml de muestra y respectivamente se agrega un volumen de 1. Las señales respectivamente obtenidas son: 4.05 µA.15 µA.11 µA. Determinar la concentración de cobre en la muestra. Cu. Una alícuota de 5 ml de muestra es diluida en un matraz de 10 ml con agua destilada. µg/l 0 1 2 3 Señal.99 10. 7.EJEMPLO – Adición estándar  En una muestra de agua de mar se determina cobre por voltamperometría de redisolución anódica (ASV).xls .1 6. µA 4.05 ejemplo adicion estándar.

completamente resuelto de cualquier otra sustancia presente. particularmente en cromatografía. un homólogo del analito.  . idealmente.I. puesto que esto minimiza los errores debidos a la adsorción en superficies. a las pérdidas durante la evaporación del solvente. debe emplearse un estándar interno (explicar diferencia con estándar subrrogate). Los estándares internos deben ser. Si esto no es posible. se elegirá un compuesto que posea propiedades físicoquímicas similares a las del analito. y la irreproducibilidad debida a las técnicas de transferencia y de inyección. Las propiedades cromatográficas del estándar interno deben ser tales que eluya muy cerca del analito pero aún así. a la pérdida durante la extracción. o durante los procedimientos de derivatización.  Calibración del método 3) Uso de estándar interno Siempre que sea posible.

65 1.5 1.41 6. Construya la curva de calibrado correspondiente.0 5. ppm Area BP Area estándar interno Area relativa 0.48 13.01 .EJEMPLO – Estándar Interno Los siguientes datos de calibración han sido obtenidos en una determinación de benzopireno (BP) por GC-MS. Conc. BP. Como estándar interno se utilizó pireno (C13).1 0.13 0.0 10.0 1100 5200 18000 59000 95000 8600 8000 12800 9100 7300 0.

00 400.00 100. determinar la pendiente de la curva (S).00 Conc.7 R2 = 0. Procedimiento para determinar la sensibilidad Una vez establecida la curva de calibración de acuerdo al procedimiento anterior.00 y = 19162x + 4564.9036.9997 Área Curva Calibración Ác.00 200.00 200.II. Oxolínico en Matriz 5000000 4000000 3000000 2000000 1000000 0 0.00 300.00 Conc: (ng/ml) 50.9982 Área 10000000 5000000 0 0. lo cual define la sensibilidad del método.00 100.4 R2 = 0.  Curva Oxolínico 15000000 y = 42084x .00 150. (ng/g) .

el límite de detección es: YLD = YB + 3 σB  A una señal YLD le corresponde una concentración CLD. Procedimiento para determinar el límite de detección IUPAC  Medir la respuesta de al menos 10 blancos analíticos independientes. lo que se consigue por extrapolación gráfica en la curva de calibrado.III. de los que se deduce la media YB y la desviación estándar σB. YLD Curva de Calibrado CLD El límite de detección debe expresarse en unidades de concentración . De acuerdo a la IUPAC.

0 2.70.xls .74.71. En otra serie de experimentos.81 Determinar la sensibilidad y límite de detección del método ejemplo Limite deteccion quinina.73.52 4. 0.0 6. 0. 0.71 8.60 6.69 y 0. En la primera.EJEMPLO – LD  Para estudiar la sensibilidad de un método de determinación de quínina en agua tónica se han realizado dos series de experimentos.0 16.70. 0.73. 0.71. 0.0 4.51 2.0 8. obteniéndose los siguientes resultados: Quinina. ug/L Intensidad de Fluorescencia 1.68 10. al agua tónica sin quinina. 0.74.75.72. se realizan 11 medidas repetidas del blanco (agua tónica en ausencia de quinina suministrada por el fabricante) y se obtiene los siguientes datos de intensidad de fluorescencia: 0. 0.0 12. 0.0 20.60 3. se le añaden cantidades crecientes de quinina para preparar 7 muestras artificiales.

promedio)2/n-1)1/2  La expresión para calcular el límite de detección instrumental es la siguiente: YLD = 3 σB n ≥10 Después utilizando la curva de calibrado se obtiene la concentración en el límite de detección. razón señal / ruido. Someter esta solución a medición (n replicas independientes de la solución) en el sistema instrumental. catálogo del equipo. . Se determina la señal analítica Yb y su desviación estándar (σB) de acuerdo a la siguiente expresión: σB = ( (Xi. de manera de obtener una concentración correspondiente a 2-10 veces el LDI estimado (obtener el límite estimado alternativamente de valores reportados en literatura.IV.).  Procedimiento para la determinación del Límite de Detección Instrumental (LDI) Agregar una alícuota de solución estándar de analito en “agua pura” o en el solvente adecuado. etc.

según el siguiente procedimiento 1) Si la concentración del compuesto analizado se sitúa entre 2 y 10 veces la concentración del límite de detección estimado. ajustar mediante la adición de un estándar la concentración del compuesto de interés. . cambiar de muestra. Si por el contrario la concentración es demasiado elevada.V.  Procedimiento para la determinación del Límite de Detección del Método (LDM) Determinar el límite de detección del método en una muestra real. Si la concentración es demasiado baja. 2) Separar a lo menos 10 alícuotas de la muestra utilizada para evaluar el LDM y realizar todas las etapas implicadas en el método analítico. para situarla entre 2 y 10 veces el límite de detección estimado. pasar a la etapa siguiente.

V. Procedimiento para la determinación del Límite de Detección del Método (LDM) A partir de los resultados obtenidos. calcular la media y la desviación estándar (σB) de las replicas: La expresión para calcular el límite de detección del método es la misma anterior. 3) .

Procedimiento para la determinación del límite de detección de un método analítico. en un intervalo de concentraciones cercano al cero (lo más bajo que pueda ser detectado) (n ≥ 4) .VI. a través de la construcción de una curva de calibración Construir curva de calibración. determinar: a) b) Ordenada en el origen de la línea de regresión: YB Desviación estándar de la regresión (se obtiene con cualquier programa estadístico): σy/x σy/x (yi n ˆ 2 yi) 2 1) 2) Donde: yi: Valor observado del punto en la ordenada ŷi: Valor teórico del punto obtenido por la predicción del modelo de regresión n: Número de puntos de la curva de calibración (n ≥ 4) c) Pendiente de la curva de calibración: S . sobre matriz de muestra. A partir de la curva.

VI. Procedimiento para la determinación del límite de detección de un método analítico. a través de la construcción de una curva de calibración 3) Calcular Límite de detección: Señal del Límite de detección: yLD = yB + 3 sy/x Concentración del Límite de detección se calcula haciendo uso de la ecuación de la curva de calibración. .

.VII. Procedimiento para la determinación del Límite de Cuantificación del Método (LCM)  El límite de cuantificación del método se determina siguiendo el mismo procedimiento que el usado para el LDM pero finalmente en la expresiones respectivas el factor 3 se sustituye por 10.

se determina siguiendo el mismo procedimiento que el usado para el LDM. a través de la construcción de una curva de calibración  El límite de cuantificación del método.VIII. pero finalmente la expresión que debe considerarse es: Señal del Límite de cuantificación: yLCM = yB + 10 sy/x Concentración del límite de cuantificación a través de la curva de calibración . a través de una curva de calibración. Ej: Procedimiento para la determinación del límite de cuantificación de un método analítico.

IX.  . La replicabilidad se expresa como la desviación estándar relativa o coeficiente de variación (CV). mismo instrumento y mismo día. Procedimiento para calcular replicabilidad (Precisión) la  Dentro del intervalo de 2 a 10 veces el límite de cuantificación del método. respetando las siguientes condiciones: mismo analista. Para realizar los cálculos que requiere el método e informar los resultados. utilizar las unidades apropiadas y el número de cifras significativas necesarias. separar 10 alícuotas de una muestra y aplicarles el método completo.

utilizar las unidades apropiadas y el número de cifras significativas necesarias. Los resultados se expresan como desviación estándar relativa o coeficiente de variación (CV). Para realizar los cálculos que requiere el método e informar los resultados. separar 10 alícuotas de una muestra y aplicarles el método completo. cambiando al menos una de las siguientes condiciones: el analista.  .X. el instrumento o el día. Procedimiento para calcular repetibilidad (Precisión) la  Dentro del intervalo de 2 a 10 veces el límite de cuantificación del método.

aplique la siguiente ecuación: E(%) (Vo Vc) 100 Vc  Vc = Valor certificado. Vo = media de los valores obtenidos aplicado el método.  Además. Para determinar el error relativo del método (E. utilizando el test de varianzas homogéneas . aplicar el método analítico completo “n” veces (n = 3-10 replicas) a una muestra en la cual el parámetro a medir esté certificado por un organismo reconocido (material de referencia certificado).  Procedimiento para determinar la exactitud Dentro del intervalo de determinación. puede ser necesario hacer el cálculo estadístico para la equivalencia con el material de referencia. %).XI.

Recuperación en una matriz real con 2 niveles de concentración distintos. la determinación de la exactitud puede llevarse a cabo de acuerdo a una de las siguientes posibilidades. y en siguiente orden de prioridad: 1) Comparación del método en la misma muestra. Los niveles de concentración deben estar. Procedimiento para determinar la exactitud Si no existe o no está disponible el material de referencia. Intercomparación entre metodologías validadas.XI. en un caso entre 2 y 10 veces el LCM y en el otro. a lo menos 2 laboratorios que utilicen 2) 3) 4) . con un método absoluto Comparar el método con un método independiente. entre 20 y 30 veces el LCM. ya sea éste de referencia o validado previamente.

La concentración final debe estar dentro del rango de determinación del método.XII. Calcular la recuperación de acuerdo a la siguiente expresión: (Cs C) 100 Ca Recuperación (%) Cs = concentración de la muestra fortificada C = concentración en la muestra no fortificada Ca= concentración agregada. Procedimiento para determinar la recuperación  Analizar una muestra real y en paralelo analizar la misma muestra a la que se ha agregado una concentración dada de estándar. .

que en algunos casos esta metodología subestima la incertidumbre de las mediciones. dado que es difícil poder incluir todas las posibles contribuciones de incertidumbre en tal enfoque. • Se ha demostrado. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cuantificación de los componentes de incertidumbre. Este enfoque puede resultar muy útil cuando se estudia o cuantifica componentes de incertidumbres individuales. intermedia) de las mediciones se combina con la estimación del sesgo del método. Así. • Una forma común de presentar las diferentes contribuciones a la incertidumbre de la medición total es usar los diagramas de causa y efecto.XIII. sin embargo. el grupo de expertos en calidad y metrología de “Nordtest (2004)” ha propuesto el modelo para el cálculo de la incertidumbre en el que la repetibilidad (P. . Sesgo: Diferencia entre el valor medio medido a partir de una serie de resultados de ensayo y un valor de referencia aceptado (un valor certificado o nominal). la probabilidad de incluir todas las contribuciones de incertidumbre se maximiza. • En este contexto. usando el control de calidad existente y los datos obtenidos en la validación del método analítico.

participación en rondas interlaboratorios o ensayos de recuperación. La manera más común de estimar los componentes del sesgo son: el uso de material de referencia certificado. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre En este plano. . un laboratorio puede combinar dichos componentes individuales en 2 tipos de incertidumbre: incertidumbre derivada de la repetibilidad (P. Intermedia) del método (urep) y la incertidumbre derivada del sesgo (usesgo).XIII.

95. se deben determinar previamente las dos incertidumbres estándares antes expuestas. Para realizar el cálculo de U. Cálculo de incertidumbre repetibilidad del método (urep): urep = *t (0. . t = Coeficiente de student para un 95% de nivel de confianza. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cálculo de Incertidumbre Expandida (U). n 1) n Donde: = Desviación estándar al nivel de repetibilidad.XIII. n = número de datos.

Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Cálculo de incertidumbre derivada del sesgo (usesgo): usesgo = Donde: (sesgo) 2 (uCER) 2 sesgo = el valor puede ser determinado alternativamente por medio del análisis de un material de referencia certificado. participación en rondas interlaboratorios o ensayos de recuperación . u(CER) = Incertidumbre del material de referencia certificado o del patrón de referencia (valor certificado) utilizado en el ensayo de recuperación .XIII.

se expresa combinando ambas incertidumbres antes mencionadas. . considerando un factor de recubrimiento igual a 2: U= 2 (urep) 2 (usesgo) 2 Incertidumbre Expandida (U): Cantidad que define un intervalo alrededor del resultado de una medición que se espera que abarque una gran parte de la distribución de valores que se podrían atribuir razonablemente al mensurando.XIII. Procedimiento para el cálculo de la incertidumbre Finalmente la incertidumbre expandida (U) del proceso analítico. para un cierto nivel de confianza. Una Incertidumbre expandida (U) se calcula de una incertidumbre estándar combinada (u) y un factor de cobertura k usando: U = k x u.

5 (m+p)-XIL µg/g O 25.2 Tolueno µg/g O 9.0 o-XIL µg/g O 11.0 . El sesgo del método fue determinado a través de un ensayo de recuperación.0 R 11.0 R 11.0 R 11.1 R 11.5%. tolueno. R: valor de referencia): Benceno µg/g O 10. El estándar de calibración corresponde a una solución en metanol que certifica que las concentraciones de los compuestos son las nominales ± 0. o) en una muestra de agua.EJEMPLO – Calculo incertidumbre  Determinación de BTEX Se lleva a cabo una determinación de benceno.9 E-Bz µg/g O 11. con los siguientes datos (O: valor promedio obtenido.0 R 11. etilbenceno y xilenos (m+p.

27 48.41 48.15 44.33 43.Determinación de BTEX En la validación del método analizaron separadamente 8 alícuotas de una muestra real obteniéndose las siguientes concentraciones: Nº µg/g BEN µg/g TOL µg/g ET-BEN µg/g (m+p)-XIL µg/g o-XIL 1 2 3 4 5 6 7 8 43.03 14.07 13.56 47.14 32.59 13.15 13.17 42.96 13.70 32.19 12.36 31.20 48.xls .67 45.44 48.41 43.22 44.63 47.29 48.80 Ejemplo incertidumbre.67 43.52 43.57 42.64 44.61 43.91 31.14 31.80 31.68 44.60 43.91 12.06 12.25 44.62 48.17 31.21 31.42 43.

.

015.98. 250. 0. .012. 0.010. 248.89 1. Por otra parte. 10 muestras que contienen sólo la mezcla de excipientes (sin nitrofurantoína) son analizadas independientemente por el método. al no disponer de un material de referencia certificado. 249.010.08 12 15 20 1. 0. Las respuestas instrumental obtenidas son: 0.11 (a)Determine la Sensibilidad del método. talco. 250. En seguida se mide la respuesta instrumental (señal analítica) de cada solución y se obtienen los siguientes datos: CONCENTRACIÓN mg/l 0 0.98. gelatina etc. 10 porciones de una muestra real de tabletas de nitrofurantoína se analizan independientemente por el método analítico y se obtienen los siguientes resultados (mg): 250.015.445 0.5 Respuesta Instrumental 0. 250.009. 250.008. (d) Determine la precisión del método (desviación estándar relativa).35.12 1. 0. colorante. almidon.012.272. 248. 249.1.) y 250 mg de nitrofurantoina pura.058 1 2 4 6 8 10 0. 0. 0. (b) Determine la exactitud del método (error relativo) e indique si hay interferencia por parte de los excipientes de la formulación. (c) Determine el límite de detección del método.44. A la solución resultante se le determina su respuesta instrumental dando un valor de 0.01 0. Para la determinación analítica de nitrofurantoína en formas farmacéuticas se añaden cantidades crecientes de la droga de la droga en dimetilformamida (DMF). 0.00.015.98. se prepara una muestra artificial de tableta que contiene 750 mg de excipientes comunes (estereato de magnesio. 251.11 0.67 0.05.39. 0.99.36. 0. Una porción de 10 mg de muestra artificial se agrega en un matraz de aforo de 1 litro y se afora con DMF.1 1.225 0.010.

La prueba estadística Q se utiliza para decidir si un dato debe retenerse o rechazarse. xq es el valor dudoso. . Primero se calcula un valor de Qexp y se rechaza el dato cuando el valor es mayor que el valor estadístico (Qcrit)  Qexp xq xn xm ax xm in . xn es el valor más cercanoal valor dudoso.Rechazo de datos dudosos   Un dato dudoso difiere excesivamente de la media.

Valores de Qcrit Número de Datos 3 4 5 Qcrit a 90% de probabilidad 0.941 0.642 Qcrit a 95% de probabilidad 0.765 0.710 6 0.625 .829 0.560 0.970 0.

5 2.3 2.1 0.5 Qcrit Qexp Qexp 0.5. 2. 3. aplique la prueba Q para el valor 2. .61 Para las mediciones replicadas que aparecen al lado.5 3.60 3.25 (x2)=48.89 6.61 9.25 9.61 10. se retiene el valor.Ejemplo: Prueba Q Valor (x)  x2 12. Use un Qcrit a 90% de confianza.642 para 5 valores y a 90% de probabilid ad.1 3.1 3.5 Qcrit .5 (x)=15.5 3.

14. cuál es la exactitud y precisión del método que utiliza el laboratorio. 2.09. 1.98.09.99.xls . al final de cada partido.01.21.464)    ejemplo prueba Q. llevan a un par de jugadores para hacer la prueba del doping. 2. Previamente el laboratorio que hizo el análisis validó su método con muestras certificadas de efedrina en orina. Esta tenía un contenido certificado de 2. Al analizar esta muestra diez veces de manera independiente se obtuvieron los siguientes valores en ng/ml: 2. Qcrit (tabla (n=10) 0.08 ng/ml. 1. En la orina se determinan si hay substancias prohibidas (en este caso efedrina). 3.EJEMPLO – Dato dudoso En el mundial de fútbol de Alemania 2006. el analito y la muestra para el análisis. Indique: cuál es el objeto.05 ± 0.91. 2. 2. 2. 2.05.08.

Cartas de Control  Una vez que ha sido validada una metodología y se comienza con su aplicación en análisis de rutina. EJEMPLO carta control turbiedad. todos los controles de calidad relacionados con las propiedades analíticas deben ser documentadas a través de la construcción de Cartas de Control. de forma tal que el comportamiento del método en el tiempo pueda ser trazable.xls .

GLOSARIO .

 Alícuota: porción bien definida (masa. El blanco analítico es un elemento de control de calidad utilizado en la rutina analítica el que se procesa como una muestra más en un análisis Interferente: Todo compuesto. toda partícula o todo factor que afecte el resultado generado por un método analítico Determinación (cuantificación): proceso para conocer la cantidad /concentración de un analito (o familia) de una muestra que es analizada Detectar: Acción de un instrumento para producir una señal y transducirla en una magnitud física fácilmente medible. que no contiene el analito. todo elemento. a partir de los resultados analíticos  . generalmente artificial. a través de las características químicas o fisicoquímicas del mismo o de su producto de reacción Caracterizar: acción de establecer los aspectos diferenciales de un objeto o sistema. volumen) de la muestra Muestra: es la parte (alícuota) del objeto que contiene los analitos Análisis: someter una muestra a un proceso analítico para conocer información química sobre la misma Blanco analítico: Muestra.        Identificar: proceso analítico cualitativo que implica un reconocimiento del analito. Proceso de medición con fines cualitativos. si lo hace ésta se denomina “señal blanco”. Teóricamente no debería originar señal.

en el cual una o más de sus propiedades están suficientemente bien establecidas. que se emplean para calibración. Implica el empleo de un instrumento Método Analítico: corresponde a la Adaptación específica de una técnica analítica para un propósito de medición seleccionado. Es un conjunto de operaciones especificas para caracterizar cuali y/o cuantitativamente a un analito (o familia) en una determinada muestra. para analizar alícuotas de la misma muestra para determinar los mismos analitos     . asignación de valores a materiales o evaluación de métodos analíticos Material de referencia certificado: son materiales de referencia que tienen certificados uno o varios valores de sus propiedades (con sus incertidumbres específicas) obtenidos por procedimientos especiales (Ejemplo: ejercicio de intercomparación) bajo la responsabilidad de un organismo competente e independiente Ejercicio de intercomparación: conjunto de procesos de medida (método) llevados a acabo por diferentes laboratorios. homogéneas y estables. Técnica: principio científico que se utiliza para extraer información analítica. Implica el empleo de un técnica (instrumento)   Método absoluto: es aquel método de cuantificación calculable que no se basa en el empleo de estándares analíticos Procedimiento: descripción pormenorizada de una metodología analítica Material de referencia: Material o sustancia. bajo la coordinación de un ente competente.

Edition 2000-03-01 . Nordtest Report 537. Editor: H. Ellis Horwood Limited edition. Chichester. Limit of Detection. Teddington: 1998. Spectrochim.C. 1999. England. LGC. Centre d'expertise en analyse environnementale du Québec. 2004. 115-118. Statistic for Analytical Chemistry. Acta 33 B. EURACHEM Guide. Handbook for Calculation of Measurement Uncertainty in Environmental Laboratories. Principios de Química Analítica. Springer-Verlag Ibérica. Protocole pour la validation d'une méthode d'analyse en chimie DR-12-VMC. Guide EURACHEM. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. pag. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics. Miller and J.         Norma ISO 9000: 2000. España. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. IUPAC. Holcombe. 1993. Barcelona.Referencias  J.CITAC Guide: 2000.Miller. 3rd edition. Norma IRAM 301:2000-Norma ISO/IEC 17025: 1999. Valcarcel. 242. 1978. M.N.

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