analisis toxicologico

Cátedra de Toxicología Facultad de Ciencias Químicas UNA Prof. Dra.

Stella Presentado de Núñez

“Es la aplicación de los métodos y técnicas del análisis químico para detectar, identificar y cuantificar la presencia de sustancias, que en determinadas circunstancias pueden originar, o han producido, daños a los seres vivos.”“Menéndez M. y cols. Tendencias en Toxicología
Analítica”; M. Repetto (ed)Postgrado de Toxicología. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Sevilla. CD-ROM. 2008”.

 Permite

en la intoxicaciones:

› diagnosticar y/o confirmar los tóxicos

responsables; › establecer un correcto pronóstico del problema.

Adquiere función de Vigilancia de: -La eficacia de ciertos tratamiento o técnicas de eliminación; -Drogas susceptibles de abuso; -Drogas terapéuticas; -Exposición laboral; -Exposición medioambiental a sustancias químicas.

.evaluando su contribución en la causa de muerte o lesión sobre seres humanos.Además: En toxicología forense. . comprende el uso de la toxicología para los propósitos de la ley determinando: . En colaboración con centros de información toxicología puede desarrollar investigaciones sobre la toxicocinética y los mecanismos de toxicidad .la presencia de drogas o sus metabolitos en fluidos o tejidos humanos .

Ejemplo: técnicas inmunocromatográficas . de dos pasos:  Análisis preliminar.El análisis toxicológicos es una sistemática de trabajo. detectan varias sustancias a la vez . identifica al tóxico durante los primeros minutos del análisis. generales u orientación: Sensibles.

 Confirmación de identidad y cuantificación del tóxico: por principios físico-químicos diferentes más específicos y sensibles. Ejemplo. CG-EM .

así como la naturaleza de la matriz.La gran cantidad de tóxicos constituye una gran limitación .  El pedido de análisis deber ser lo mas cerca de la situación real del paciente. por lo cual la historia clínica y toxicológica del paciente es fundamental.  . .

vómitos. orina. sangre. heces.TIPOS DE MUESTRA  A-Relacionadas con el intoxicado: Ej. etc. . productos químicos encontrados. alimentos. faneras. vísceras.  B-Muestras en caso de fallecimiento: contenido estomacal. lavado y raspado de dedos .  C-Posibles productos causantes de la intoxicación: medicamentos. ropas.

. Plomo en sangre total. Es fundamental para que el resultado tenga significado clínico  Ej. Intoxicaciones por Hg: orina en agudas. pelo en crónicas.

50-100 mL  Producto supuesto causante de la intoxicación lo que se encuentre .con y sin anticoagulante.  Orina: 50-100mL  Vómitos o líquido del lavado gástrico.CANTIDAD DE LAS MUESTRAS  Sangre: (5 a 15 mL en adultos y 1 a 3 mL en niños).

que sean necesarios agregar. . -La cantidad y espécimen colectado deberán ser suficientes para permitir re-análisis o muchos análisis posteriores. pues la mayor parte de los tóxicos de determina en plasma o suero. -Se debe evitar tapones porosos -Conviene centrifugar para evitar hemólisis.Observaciones: --Las muestras que puedan contener tóxicos volátiles deben remitirse herméticamente cerradas y con una mínima cámara de aire.

de boca ancha y tapa rosca.  . De vidrio( para fluidos corporales) tomando precauciones para prever roturas.RESPECTO A LOS ENVASES: Recipiente primario: es el que contiene el material a transportar. Todos los componentes del contenedor que estén en contacto con la muestra deberán estar libres de sustancias que puedan interferir en el análisis laboratorial y su resultado. Puede ser  De polipropileno o poliestireno (órganos) cerrado herméticamente a fin de evitar pérdidas.

Recipiente secundario: es el que contiene el o los recipientes primarios. provisto de tapa con cierre hermético y de volumen adecuado que permita introducir el recipiente primario.    . Debe : -Ser de un material irrompible. -Contener un material absorbente: papel. algodón o paño capaz de absorber el fluido contenido en el recipiente primario en el caso de que éste se dañe.

  . fecha de recolección. tipo de muestra.  *Todos los datos de identificación del material deben constar en el envase secundario.: Paciente.*Todos los rótulos y etiquetas deben efectuarse con elementos de escritura indelebles para evitar que se borren por efecto de la humedad o rotura de los contenidos.

para evitar las contaminaciones cruzadas.  Tipo de envases: No utilizar envases plastificante tipo ftalato.  Toma de muestra: Ej. como solventes orgánicos. deben ser enviados y empacados separadamente de las muestras biológicas. Cuidados para alcoholemia  .CUIDADOS PARA EVITAR LA CONTAMINACIÓN: RECIPIENTES Remisión de muestras: Los recipientes con materiales volátiles. ni tapones porosos.

En implicancias médico legales ( ejemplo cuando no está identificado el tóxico o el paciente fallece) las muestras remanentes deben ser mantenidas preferentemente a –20ºC hasta que la investigación haya concluido. Todas las muestras biológicas deben mantenerse a 4°C antes del análisis y si es posible las muestras remanentes deben mantenerse a 4°C durante 3 a 4 semanas para futuros análisis requeridos.    En general: No deben mezclarse con conservantes. Casos particulares Ejemplo: etanol y los metales pesados se determinan en sangre total ( EDTA. fijadores. . heparina). ni otras sustancias que podrían interferir. se debe informar el anticoagulante utilizado.

mediante declaración de familiares y allegados II. -Tratamiento instaurado. IV-Datos clínicos más relevantes: pupilas puntiformes. etc.Dosis probable permite suponer la concentración plasmática y permite seleccionar el procedimiento analítico III-Tiempo transcurrido entre la absorción y la recogida de la muestra. -Datos anatomopatológicos de la autopsia si hubieren. . .Remitir datos al laboratorio como: I-Tóxico sospechoso para confirmarlo o descartarlo. euforia.Obtener anamnesis del paciente incluyendo cualquier evidencia circunstancial del tóxico. -Resultados bioquímicos y hematológicos realizados.

. precisión) › Mas concentradas (aumenta sensibilidad).  Es un factor de cuidado  Permite obtener muestras: › limpias ( aumenta selectividad.Procesos de extracción:  Se realizan antes de llegar al análisis instrumental. para la detección. identificación y cuantificación.

que se caracteriza por el tipo de sustancia :  1-Gases y vapores  2-Tóxicos orgánicos  3-Tóxicos inorgánicos Desafío: separar el tóxico con pureza y cantidad suficientes para identificarlo y cuantificarlo.Cuando se desconoce el tóxico Se utiliza un método sistemático y estandarizado para identificar las sustancias tóxicas mas frecuentes. .

1-Extracción de compuestos volátiles ( en forma de gas o vapor)   1. Ej determinación de anfetaminas y sus metabolitos . que posteriormente se inyecta a CG o HPLC. el gas liberado se recolecta sobre el espacio superior .2Micro extracción en fase sólida (SPME): El analito volátil se adsorbe sobre fases estacionarias. unidas químicamente a fibras muy finas de sílice fundidas insertadas en la aguja de una jeringa. Se debe elegir acertadamente la fase estacionaria que recubre la fibra de sílice fundida. de acuerdo al Tóxico a analizar. 1. para luego inyectar en el GC Ej determinación de alcoholemia.1Extracción por espacio en cabeza: En general se incuba la muestra a una temperatura predeterminada en recipiente cerrado.

se cierra y el tóxico se distribuye. Fig.  1. 1. son arrastrados en corriente de vapor.4Micro difusión: Ej: por el método de Conway en el se utilizan 2 placas concéntricas. Ejemplo hidrocarburos de bajo PE.3Destilación con arrastre:.Ejemplo alcoholemia. .Difusión en cámara de Conway (según Feldstein y Klendshoj). 1. La muestra se colocan en el compartimiento externo y el absorbente en el interior. luego el destilado se extrae con disolventes de los que se separan por evaporación. el procedimiento clásico Ej: los tóxicos que volatilizan a menos de 100ºC. cloroformo en orina.

.

.1Extracción líquido-líquido (LLE): los tóxicos son extraídos de la matrices biológicas por partición entre dos disolventes inmiscibles (ajustando el pH). Las polaridades favorecen la extracción. liberación de conjugados Se utilizan técnicas como: -2.2-Separación de tóxicos orgánicos fijos Pueden ser: Sin tratamiento de la muestra Desproteinización .

.

buena recuperación o extracción de analitos.2Extracción sólido -líquido(SPE) pequeñas columnas rellenas de gránulos de fases sólidas apolares. . micotoxinas. Ventajas: rapidez. Ej columnas de inmunofinidad para BZD. polares o de resinas iónicas.-2. THC. mejora el límite de detección y cuantificación.

hasta alcanzar el detector separadas. tóxicos del carbón activado. Ej. control antidoping. . -2. 2 por su densidad y poder de solvatación (asociación de moléculas de un disolvente con moléculas o iones de un soluto) similar a un líquido y capacidad de difusión y viscosidad similar a un gas. Usos para extraer pesticidas de suelo. las especies cargadas emigran a distinta velocidad a través del capilar por el que circula una fase móvil.-2.3Mediante fluidos súper críticos (SFE): El más usado es CO .4Separación por electroforesis capilar :Al aplicar un voltaje considerable entre dos electrodos unidos por un capilar. Medicamentos y sus metabolitos. drogas de abuso. se establece una diferencia de potencial.

Otros métodos utilizan ultra filtración.3-Extracción de tóxicos minerales o inorgánicos 1º Preparación de la muestra *Métodos con destrucción de materia orgánica: La mineralización se hace por calor (vía seca). desproteinización. etc. Para la separación y determinación de aniones se utilizan técnicas como cromatografía iónica. *Químicos: quelantes.Esto deja a los metales para ser identificados y cuantificados en el residuo inorgánico. . o por ataque con ácidos ( vía húmeda). 2º Métodos de enriquecimiento de la muestra: ejemplos *Físicos: evaporación.

es necesario conocer en el menor tiempo posible mediante los análisis de orientación. además son mas específicos y sensibles.  Vía de entrada. . -Los análisis confirmatorios llevan mas tiempo. En ambos casos depende de:  Sustancias causantes.-Crítico en intoxicaciones agudas. .  Cantidad. esto limita el número de sustancias químicas que puedan medirse.  Tiempo transcurrido desde la exposición.

:Ej. utilizan como principio analítico las reacciones Ag/Ac (el tóxico es el Ag). FPIA. que permitan su cuantificación (GC-EM). Así se tienen:  Inmunoensayos. ELISA. Deben ser confirmados por otras técnicas de mayor  capacidad identificadora. RIA.Son micro ensayos químicos que de forma presuntiva y rápida dan información cualitativa sobre la presencia de tóxicos individuales o de grupos y familias de medicamentos y drogas. Aplicaciones: Drogas de abuso y monitoreo de drogas terapéuticas. . Inmunocromatografia de fase lateral.

La elección depende de:  La determinación analítica requerida  Posibilidades del laboratorio  Tipo de muestra  Cantidad de muestra  Naturaleza del tóxico .

Sb. Por formación de hidruros volátiles: para As. Se. Te. › Espectrofotometría de absorción atómica (AAS):  De llama: poco sensible. como metales pesados. Zn) De cámara de grafito o electrotérmica: la más sensible (Pb. Por vapor frío: Hg . Bi. en muestras biológicas. K. I-Espectrofotométricas: permiten detectar trazas de elementos. sirve p/elementos en alta concentración ( Na. Cd).

. con bajos límites de detección. buena precisión y exactitud › Espectrofotometría de fluorescencia atómica por láser (LEAFS): poder de detección de partes por cuatrillón.› Espectrometría de plasma acoplado por inducción (ICP) capacidad alta de análisis multielemental. tanto para análisis cuali como cuantitativo.  ICP-AES: Limitado con elementos de transición ICP-MS: Alto grado de selectividad .

etc. Ej. plaguicidas. CL/ICP-MS. Acoplamientos: CG/MS. .II-Cromatográficas: técnicas de separación de una mezcla de solutos. basados en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los componentes a través de medios porosos arrastradas por un disolvente en movimiento. HPLC/MS/MS. medicamentos.: técnicas HPLC. permiten identificar drogas de abuso. CG/MS/MS. GC. HPLC/MS.

Hg) › Conductimetría (iones en agua potable).polarografía (talio en orina). › Reacciones sobre electrodos con medidas de potenciales: potenciometría ( compuestos orgánicos). sangre y orina). III-Técnicas eléctricas o electrométricas : › -Electrogravimetría como electrodeposición (As. Sb. . voltametría de gota desnuda (Pb en hueso.

 Relacionar con las circunstancias implicadas Ej: cifras de etanol en sangre y los síntomas producidos.  . Si es un medicamento.  Posibilidad de variación individual por factores fisiológicos o patológico.Comparar el nivel del tóxico detectado con valores tóxicos y letales encontrados en la literatura. con su rango terapéutico.

 Defecto del método utilizado. como para determinación misma.Otros factores:  Posibilidad de no detectar el tóxico responsable.  Biotransformación del tóxico. tanto para el muestreo.  Eliminación del tóxico . pre tratamiento.

perfil renal.En las intoxicaciones aparte de las valoraciones neurológica. glucemia. vascular y de temperatura deben hacerse:  Hemograma. orina simple. respiratoria. perfil hepático y otras pruebas dependiendo del tóxico en particular. cardiaca . electrolitos. .

Ejemplos  Intoxicación por barbitúricos: pH de orina simple. en diuresis forzada alcalina  En todos los casos de tratamiento por eliminación renal: electrolitos.  Intoxicación por derivados de hidro cumarína (raticidas): Tiempo de protrombina  Intoxicados por etilenglicol: Calcemia  Pacientes en terapia: Gases en sangre .

Se tienen tres clases o actividades:  1. delito ecológico. Toxicología postmortem  2. Toxicología Conductual.  A ellas se deberían añadir la Toxicología Laboral y la Toxicología Ambiental que. Determinación y valoración de drogas de abuso en medios biológicos  3. con frecuencia. acaban incidiendo en el ámbito judicial ( derechos de los trabajadores. 2003). etc.) (Repetto. .

 Orina: Todo lo obtenido.Los tejidos no deben ser conservados en formol . con órganos parenquimatosos y fluidos biológicos:  Cerebro: 100 g.  Contenidos gástricos: Todo lo obtenido.  Riñón: 50 g.  Sangre Periférica: 10 ml.  Ciertos tóxicos pueden necesitar además: pulmón e intestino.  Hígado: 100 g.1-En toxicología forense post mortem Muestras relacionadas con la puerta de entrada. cada caso será tratado específicamente .  Sangre Arterial (cardiaca): 25 ml.  Bilis: Todo lo obtenido.  Humor Vitreo: Todo lo obtenido.

sangre . Así es preciso afrontar y definir un nuevo término : “Sumisión química” Muestras:saliva. la administración de sustancias químicas psicoactivas a personas con fines delictivos ha adquirido una especial relevancia en el ámbito de la Ciencias Forenses. con especial repercusión en esta parte de la Toxicología Forense.orina.2-Detección e interpretación de drogas en medios biológicos El uso de drogas y el abuso de fármacos acarrea una serie importante de problemas en el ámbito social y médico En los últimos años. sudor.pelo.

. así como el exceso del alcohol.3-Toxicología Conductual  Esta parte de la Toxicología Forense se orienta sobre las siguientes facetas: el tráfico rodado y los centros de trabajo. Donde se resalta el uso de drogas ilícitas. consumo de fármacos.

.

aire espirado o aliento.El aire alveolar. establece hacia los 20 minutos una curva paralela a la de alcoholemia.  Aproximadamente un valor numérico de alcoholemia. expresado en gramos por litro de sangre(g/Ls) equivale a la mitad de dicho valor. tiene su máximo de alcohol a los pocos minutos de ingerido éste. expresado en miligramos de alcohol por litro de aire espirado (mg/La) (Repetto. 1995).  . aunque por debajo de ella al llevar menor concentración de alcohol. y resulta muy útil a efectos analíticos.

TLVs® and BEIs® Based on the Documentation of the Threshold Limits Values for Chemical Sustances and Physical Agents & Biological Exposure Indices.pelo. sangre .orina. drogas de abuso. sudor.  Muestras: saliva. Detección de alcohol.

electroquímico. Tipos de sensores.Detectores portátiles de fotoionización para contaminantes orgánicos en el aire ambiente.  Detectores estacionarios con sensores.  . convertidores de medio y alarmas. con alarmas óptica y acústica. catalíticos. IR.

Es el sistema documental completo. sus muestras y los profesionales responsables. donde quedan registrados todos los pasos o procesos que experimentan la muestras a analizar. hasta el informe final.  Es un procedimiento donde constan datos propios del paciente. a partir de la toma de muestra.  . pasando por la parte analítica y post analítica.

nombre del paciente. Debe constar quien realizó la toma o bien quien la presenció y asume la responsabilidad de la cadena de custodia  Presencia de precintado.documentar  Fecha del día y hora de la toma de muestra  Identificación de las personas que intervienen  Condiciones del envasado. tipo y/o número de precinto  Condiciones ambientales de almacenaje mantenidas hasta su envío al laboratorio  Fecha de remisión al laboratorio  Identificación de la empresa o medio de transporte utilizado  Constancia firmada de todas las personas bajo cuya responsabilidad hayan estado las muestras . etc  Etiquetado de los envases con el nombre de la muestra. Si es sangre.En la toma de muestras. contenedores apropiados al tipo de muestra. debe constar el lugar anatómico de la extracción. aditivos necesarios.

el código de registro de entrada de la muestra. y la identificación del personal que transfiere la muestra. pudiendo emplearse para ello formularios en los que consten datos como la fecha del análisis previsto.Etapa preanalítica  la documentación de cadena de custodia recoja cualquier transferencia de la muestra y sus alicuotas dentro del laboratorio. .

 En contra de esto.  Pasado el tiempo de conservación. así como la identificación del personal responsable de su custodia. ya que puede ser solicitado un nuevo análisis o un contraperitaje. . como mínimo. las muestras han de ser custodiadas bajo condiciones medioambientales apropiadas. y estos procesos también deben quedar registrados en los documentos de cadena de custodia. y durante cuanto tiempo deben conservarse. su integridad hasta la emisión del correspondiente informe. las muestras se destruyen o devuelven al lugar de origen. las muestras implicadas en procedimientos judiciales han de conservarse durante períodos de tiempo muy superiores (incluso años). según su naturaleza y peligrosidad. para asegurar.  La documentación de cadena de custodia recogerá la información que responda a dónde.ETAPA POSTANALITICA  Una vez concluidos todos los análisis. cómo.

 Control interno: permite comprobar el buen estado de los reactivos y las condiciones de la prueba. .  Control externo consiste en detectar. identificar y cuantificar el/los tóxico/s desconocido/s. los resultados se envían al centro de referencia.

Peligros:  Sustancias químicas con que se trabaja  Enfermedades relacionadas con muestras biológicas. Reducción del Riesgo para el personal: Educación y seguridad apropiados. .

2008. Tendencias en Toxicología Analítica”.Postgrado de Toxicología. CD-ROM.Sevilla.). 2009. Ilustre Colegio oficial de Químicos.    “Menéndez M. En M. López Artíguez M. Sevilla. 2008”. M. M. "Análisis Toxicológico Inórganico. CD-ROM.Ilustre Colegio Oficial de Químicos. 2009 . En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. Menéndez M y col. 2008”. Repetto (ed. y cols.). CD-ROM. Repetto (ed) Postgrado en Toxicología. M. Flores I y cols. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. "Análisis Toxicológico Orgánico”. Sevilla. “La garantía de calidad en Toxicología”. CD-ROM. Sevilla. Repetto (ed). Repetto (ed.Ilustre Colegio Oficial de Químicos.

Sevilla. Tendencias en Toxicología Forense”. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. M. " Toxicología Clínica”. 2008”. 2008”. Ferrer A . En M. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. y cols. CD-ROM. Toxicología . CD-ROM. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. y cols. Repetto (ed.). “Repetto M. M.   “López Rivadulla.  Klassen y Watkins III. Repetto (ed). Repetto (ed) Postgrado de Toxicología. Sevilla. M.Postgrado de Toxicología. 2009. Desarrollo y Evolución de la Toxicología” . Ilustre Colegio Oficial de Químicos. CD-ROM. Sevilla.

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