Cátedra de Toxicología Facultad de Ciencias Químicas UNA Prof. Dra.

Stella Presentado de Núñez

“Es la aplicación de los métodos y técnicas del análisis químico para detectar, identificar y cuantificar la presencia de sustancias, que en determinadas circunstancias pueden originar, o han producido, daños a los seres vivos.”“Menéndez M. y cols. Tendencias en Toxicología
Analítica”; M. Repetto (ed)Postgrado de Toxicología. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Sevilla. CD-ROM. 2008”.

 Permite

en la intoxicaciones:

› diagnosticar y/o confirmar los tóxicos

responsables; › establecer un correcto pronóstico del problema.

Adquiere función de Vigilancia de: -La eficacia de ciertos tratamiento o técnicas de eliminación; -Drogas susceptibles de abuso; -Drogas terapéuticas; -Exposición laboral; -Exposición medioambiental a sustancias químicas.

. .evaluando su contribución en la causa de muerte o lesión sobre seres humanos. comprende el uso de la toxicología para los propósitos de la ley determinando: . En colaboración con centros de información toxicología puede desarrollar investigaciones sobre la toxicocinética y los mecanismos de toxicidad .Además: En toxicología forense.la presencia de drogas o sus metabolitos en fluidos o tejidos humanos .

Ejemplo: técnicas inmunocromatográficas .El análisis toxicológicos es una sistemática de trabajo. de dos pasos:  Análisis preliminar. detectan varias sustancias a la vez . identifica al tóxico durante los primeros minutos del análisis. generales u orientación: Sensibles.

Ejemplo. CG-EM . Confirmación de identidad y cuantificación del tóxico: por principios físico-químicos diferentes más específicos y sensibles.

 El pedido de análisis deber ser lo mas cerca de la situación real del paciente.así como la naturaleza de la matriz.La gran cantidad de tóxicos constituye una gran limitación .  . . por lo cual la historia clínica y toxicológica del paciente es fundamental.

faneras.TIPOS DE MUESTRA  A-Relacionadas con el intoxicado: Ej. alimentos. vísceras. .  C-Posibles productos causantes de la intoxicación: medicamentos.  B-Muestras en caso de fallecimiento: contenido estomacal. sangre. ropas. etc. lavado y raspado de dedos . productos químicos encontrados. vómitos. heces. orina.

 Es fundamental para que el resultado tenga significado clínico  Ej. Plomo en sangre total. pelo en crónicas. Intoxicaciones por Hg: orina en agudas. .

con y sin anticoagulante.CANTIDAD DE LAS MUESTRAS  Sangre: (5 a 15 mL en adultos y 1 a 3 mL en niños).  Orina: 50-100mL  Vómitos o líquido del lavado gástrico. 50-100 mL  Producto supuesto causante de la intoxicación lo que se encuentre .

Observaciones: --Las muestras que puedan contener tóxicos volátiles deben remitirse herméticamente cerradas y con una mínima cámara de aire. . pues la mayor parte de los tóxicos de determina en plasma o suero. -Se debe evitar tapones porosos -Conviene centrifugar para evitar hemólisis. que sean necesarios agregar. -La cantidad y espécimen colectado deberán ser suficientes para permitir re-análisis o muchos análisis posteriores.

de boca ancha y tapa rosca. De vidrio( para fluidos corporales) tomando precauciones para prever roturas. Puede ser  De polipropileno o poliestireno (órganos) cerrado herméticamente a fin de evitar pérdidas.  .RESPECTO A LOS ENVASES: Recipiente primario: es el que contiene el material a transportar. Todos los componentes del contenedor que estén en contacto con la muestra deberán estar libres de sustancias que puedan interferir en el análisis laboratorial y su resultado.

Debe : -Ser de un material irrompible. provisto de tapa con cierre hermético y de volumen adecuado que permita introducir el recipiente primario. -Contener un material absorbente: papel. algodón o paño capaz de absorber el fluido contenido en el recipiente primario en el caso de que éste se dañe.Recipiente secundario: es el que contiene el o los recipientes primarios.    .

fecha de recolección.: Paciente. tipo de muestra.*Todos los rótulos y etiquetas deben efectuarse con elementos de escritura indelebles para evitar que se borren por efecto de la humedad o rotura de los contenidos.   .  *Todos los datos de identificación del material deben constar en el envase secundario.

CUIDADOS PARA EVITAR LA CONTAMINACIÓN: RECIPIENTES Remisión de muestras: Los recipientes con materiales volátiles.  Toma de muestra: Ej. para evitar las contaminaciones cruzadas.  Tipo de envases: No utilizar envases plastificante tipo ftalato. ni tapones porosos. Cuidados para alcoholemia  . como solventes orgánicos. deben ser enviados y empacados separadamente de las muestras biológicas.

Todas las muestras biológicas deben mantenerse a 4°C antes del análisis y si es posible las muestras remanentes deben mantenerse a 4°C durante 3 a 4 semanas para futuros análisis requeridos. .    En general: No deben mezclarse con conservantes. ni otras sustancias que podrían interferir. heparina). fijadores. En implicancias médico legales ( ejemplo cuando no está identificado el tóxico o el paciente fallece) las muestras remanentes deben ser mantenidas preferentemente a –20ºC hasta que la investigación haya concluido. Casos particulares Ejemplo: etanol y los metales pesados se determinan en sangre total ( EDTA. se debe informar el anticoagulante utilizado.

Remitir datos al laboratorio como: I-Tóxico sospechoso para confirmarlo o descartarlo. IV-Datos clínicos más relevantes: pupilas puntiformes. -Tratamiento instaurado.Obtener anamnesis del paciente incluyendo cualquier evidencia circunstancial del tóxico.Dosis probable permite suponer la concentración plasmática y permite seleccionar el procedimiento analítico III-Tiempo transcurrido entre la absorción y la recogida de la muestra. -Datos anatomopatológicos de la autopsia si hubieren. mediante declaración de familiares y allegados II. -Resultados bioquímicos y hematológicos realizados. etc. . . euforia.

. para la detección.Procesos de extracción:  Se realizan antes de llegar al análisis instrumental.  Es un factor de cuidado  Permite obtener muestras: › limpias ( aumenta selectividad. identificación y cuantificación. precisión) › Mas concentradas (aumenta sensibilidad).

que se caracteriza por el tipo de sustancia :  1-Gases y vapores  2-Tóxicos orgánicos  3-Tóxicos inorgánicos Desafío: separar el tóxico con pureza y cantidad suficientes para identificarlo y cuantificarlo.Cuando se desconoce el tóxico Se utiliza un método sistemático y estandarizado para identificar las sustancias tóxicas mas frecuentes. .

Se debe elegir acertadamente la fase estacionaria que recubre la fibra de sílice fundida.1Extracción por espacio en cabeza: En general se incuba la muestra a una temperatura predeterminada en recipiente cerrado. unidas químicamente a fibras muy finas de sílice fundidas insertadas en la aguja de una jeringa. que posteriormente se inyecta a CG o HPLC. el gas liberado se recolecta sobre el espacio superior . de acuerdo al Tóxico a analizar. Ej determinación de anfetaminas y sus metabolitos . 1.2Micro extracción en fase sólida (SPME): El analito volátil se adsorbe sobre fases estacionarias. para luego inyectar en el GC Ej determinación de alcoholemia.1-Extracción de compuestos volátiles ( en forma de gas o vapor)   1.

Ejemplo hidrocarburos de bajo PE. 1. son arrastrados en corriente de vapor.4Micro difusión: Ej: por el método de Conway en el se utilizan 2 placas concéntricas. el procedimiento clásico Ej: los tóxicos que volatilizan a menos de 100ºC. Fig. . luego el destilado se extrae con disolventes de los que se separan por evaporación. 1. La muestra se colocan en el compartimiento externo y el absorbente en el interior. se cierra y el tóxico se distribuye.  1.Difusión en cámara de Conway (según Feldstein y Klendshoj).Ejemplo alcoholemia. cloroformo en orina.3Destilación con arrastre:.

.

liberación de conjugados Se utilizan técnicas como: -2.1Extracción líquido-líquido (LLE): los tóxicos son extraídos de la matrices biológicas por partición entre dos disolventes inmiscibles (ajustando el pH). . Las polaridades favorecen la extracción.2-Separación de tóxicos orgánicos fijos Pueden ser: Sin tratamiento de la muestra Desproteinización .

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2Extracción sólido -líquido(SPE) pequeñas columnas rellenas de gránulos de fases sólidas apolares. polares o de resinas iónicas. micotoxinas. Ventajas: rapidez.-2. THC. mejora el límite de detección y cuantificación. Ej columnas de inmunofinidad para BZD. buena recuperación o extracción de analitos. .

hasta alcanzar el detector separadas.4Separación por electroforesis capilar :Al aplicar un voltaje considerable entre dos electrodos unidos por un capilar. . se establece una diferencia de potencial. drogas de abuso. -2.3Mediante fluidos súper críticos (SFE): El más usado es CO . Ej. Usos para extraer pesticidas de suelo. control antidoping. 2 por su densidad y poder de solvatación (asociación de moléculas de un disolvente con moléculas o iones de un soluto) similar a un líquido y capacidad de difusión y viscosidad similar a un gas. las especies cargadas emigran a distinta velocidad a través del capilar por el que circula una fase móvil. tóxicos del carbón activado.-2. Medicamentos y sus metabolitos.

Para la separación y determinación de aniones se utilizan técnicas como cromatografía iónica. desproteinización. Otros métodos utilizan ultra filtración. etc. . *Químicos: quelantes.3-Extracción de tóxicos minerales o inorgánicos 1º Preparación de la muestra *Métodos con destrucción de materia orgánica: La mineralización se hace por calor (vía seca). 2º Métodos de enriquecimiento de la muestra: ejemplos *Físicos: evaporación. o por ataque con ácidos ( vía húmeda).Esto deja a los metales para ser identificados y cuantificados en el residuo inorgánico.

 Tiempo transcurrido desde la exposición.-Crítico en intoxicaciones agudas.  Vía de entrada. . -Los análisis confirmatorios llevan mas tiempo. es necesario conocer en el menor tiempo posible mediante los análisis de orientación. además son mas específicos y sensibles. . En ambos casos depende de:  Sustancias causantes. esto limita el número de sustancias químicas que puedan medirse.  Cantidad.

Son micro ensayos químicos que de forma presuntiva y rápida dan información cualitativa sobre la presencia de tóxicos individuales o de grupos y familias de medicamentos y drogas.:Ej. utilizan como principio analítico las reacciones Ag/Ac (el tóxico es el Ag). ELISA. Aplicaciones: Drogas de abuso y monitoreo de drogas terapéuticas. Deben ser confirmados por otras técnicas de mayor  capacidad identificadora. que permitan su cuantificación (GC-EM). RIA. FPIA. Inmunocromatografia de fase lateral. . Así se tienen:  Inmunoensayos.

La elección depende de:  La determinación analítica requerida  Posibilidades del laboratorio  Tipo de muestra  Cantidad de muestra  Naturaleza del tóxico .

sirve p/elementos en alta concentración ( Na. en muestras biológicas. I-Espectrofotométricas: permiten detectar trazas de elementos. como metales pesados. Por vapor frío: Hg . Por formación de hidruros volátiles: para As. Zn) De cámara de grafito o electrotérmica: la más sensible (Pb. Se. Sb. Cd). K. Bi. Te. › Espectrofotometría de absorción atómica (AAS):  De llama: poco sensible.

 ICP-AES: Limitado con elementos de transición ICP-MS: Alto grado de selectividad . con bajos límites de detección. . tanto para análisis cuali como cuantitativo. buena precisión y exactitud › Espectrofotometría de fluorescencia atómica por láser (LEAFS): poder de detección de partes por cuatrillón.› Espectrometría de plasma acoplado por inducción (ICP) capacidad alta de análisis multielemental.

plaguicidas. Ej. Acoplamientos: CG/MS. etc. HPLC/MS. HPLC/MS/MS. medicamentos. . GC. permiten identificar drogas de abuso. CG/MS/MS. basados en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los componentes a través de medios porosos arrastradas por un disolvente en movimiento.: técnicas HPLC.II-Cromatográficas: técnicas de separación de una mezcla de solutos. CL/ICP-MS.

› Reacciones sobre electrodos con medidas de potenciales: potenciometría ( compuestos orgánicos). . Hg) › Conductimetría (iones en agua potable). voltametría de gota desnuda (Pb en hueso. Sb.polarografía (talio en orina). sangre y orina). III-Técnicas eléctricas o electrométricas : › -Electrogravimetría como electrodeposición (As.

con su rango terapéutico.  .  Relacionar con las circunstancias implicadas Ej: cifras de etanol en sangre y los síntomas producidos.  Posibilidad de variación individual por factores fisiológicos o patológico. Si es un medicamento.Comparar el nivel del tóxico detectado con valores tóxicos y letales encontrados en la literatura.

 Defecto del método utilizado.  Biotransformación del tóxico.Otros factores:  Posibilidad de no detectar el tóxico responsable. tanto para el muestreo. pre tratamiento.  Eliminación del tóxico . como para determinación misma.

perfil hepático y otras pruebas dependiendo del tóxico en particular. orina simple. cardiaca . perfil renal. respiratoria.En las intoxicaciones aparte de las valoraciones neurológica. glucemia. electrolitos. . vascular y de temperatura deben hacerse:  Hemograma.

 Intoxicación por derivados de hidro cumarína (raticidas): Tiempo de protrombina  Intoxicados por etilenglicol: Calcemia  Pacientes en terapia: Gases en sangre .Ejemplos  Intoxicación por barbitúricos: pH de orina simple. en diuresis forzada alcalina  En todos los casos de tratamiento por eliminación renal: electrolitos.

 A ellas se deberían añadir la Toxicología Laboral y la Toxicología Ambiental que. etc.) (Repetto. Determinación y valoración de drogas de abuso en medios biológicos  3.Se tienen tres clases o actividades:  1. acaban incidiendo en el ámbito judicial ( derechos de los trabajadores. Toxicología postmortem  2. . delito ecológico. con frecuencia. 2003). Toxicología Conductual.

 Ciertos tóxicos pueden necesitar además: pulmón e intestino.Los tejidos no deben ser conservados en formol .  Humor Vitreo: Todo lo obtenido.  Orina: Todo lo obtenido.1-En toxicología forense post mortem Muestras relacionadas con la puerta de entrada.  Riñón: 50 g.  Sangre Arterial (cardiaca): 25 ml. cada caso será tratado específicamente .  Hígado: 100 g.  Contenidos gástricos: Todo lo obtenido.  Bilis: Todo lo obtenido.  Sangre Periférica: 10 ml. con órganos parenquimatosos y fluidos biológicos:  Cerebro: 100 g.

con especial repercusión en esta parte de la Toxicología Forense. sudor. Así es preciso afrontar y definir un nuevo término : “Sumisión química” Muestras:saliva.pelo. sangre .2-Detección e interpretación de drogas en medios biológicos El uso de drogas y el abuso de fármacos acarrea una serie importante de problemas en el ámbito social y médico En los últimos años. la administración de sustancias químicas psicoactivas a personas con fines delictivos ha adquirido una especial relevancia en el ámbito de la Ciencias Forenses.orina.

así como el exceso del alcohol. consumo de fármacos.3-Toxicología Conductual  Esta parte de la Toxicología Forense se orienta sobre las siguientes facetas: el tráfico rodado y los centros de trabajo. Donde se resalta el uso de drogas ilícitas. .

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 . expresado en gramos por litro de sangre(g/Ls) equivale a la mitad de dicho valor. expresado en miligramos de alcohol por litro de aire espirado (mg/La) (Repetto. aunque por debajo de ella al llevar menor concentración de alcohol. tiene su máximo de alcohol a los pocos minutos de ingerido éste. aire espirado o aliento. establece hacia los 20 minutos una curva paralela a la de alcoholemia.El aire alveolar. y resulta muy útil a efectos analíticos. 1995).  Aproximadamente un valor numérico de alcoholemia.

TLVs® and BEIs® Based on the Documentation of the Threshold Limits Values for Chemical Sustances and Physical Agents & Biological Exposure Indices. sangre .pelo. drogas de abuso.  Muestras: saliva.orina. Detección de alcohol. sudor.

electroquímico.  Detectores estacionarios con sensores. convertidores de medio y alarmas.  .Detectores portátiles de fotoionización para contaminantes orgánicos en el aire ambiente. Tipos de sensores. catalíticos. con alarmas óptica y acústica. IR.

Es el sistema documental completo. pasando por la parte analítica y post analítica. a partir de la toma de muestra. hasta el informe final. sus muestras y los profesionales responsables.  .  Es un procedimiento donde constan datos propios del paciente. donde quedan registrados todos los pasos o procesos que experimentan la muestras a analizar.

Si es sangre.documentar  Fecha del día y hora de la toma de muestra  Identificación de las personas que intervienen  Condiciones del envasado. nombre del paciente. contenedores apropiados al tipo de muestra. debe constar el lugar anatómico de la extracción.En la toma de muestras. tipo y/o número de precinto  Condiciones ambientales de almacenaje mantenidas hasta su envío al laboratorio  Fecha de remisión al laboratorio  Identificación de la empresa o medio de transporte utilizado  Constancia firmada de todas las personas bajo cuya responsabilidad hayan estado las muestras . Debe constar quien realizó la toma o bien quien la presenció y asume la responsabilidad de la cadena de custodia  Presencia de precintado. etc  Etiquetado de los envases con el nombre de la muestra. aditivos necesarios.

pudiendo emplearse para ello formularios en los que consten datos como la fecha del análisis previsto. .Etapa preanalítica  la documentación de cadena de custodia recoja cualquier transferencia de la muestra y sus alicuotas dentro del laboratorio. y la identificación del personal que transfiere la muestra. el código de registro de entrada de la muestra.

como mínimo. las muestras han de ser custodiadas bajo condiciones medioambientales apropiadas. y durante cuanto tiempo deben conservarse.  Pasado el tiempo de conservación. . las muestras implicadas en procedimientos judiciales han de conservarse durante períodos de tiempo muy superiores (incluso años).ETAPA POSTANALITICA  Una vez concluidos todos los análisis.  En contra de esto. así como la identificación del personal responsable de su custodia.  La documentación de cadena de custodia recogerá la información que responda a dónde. su integridad hasta la emisión del correspondiente informe. cómo. para asegurar. según su naturaleza y peligrosidad. y estos procesos también deben quedar registrados en los documentos de cadena de custodia. ya que puede ser solicitado un nuevo análisis o un contraperitaje. las muestras se destruyen o devuelven al lugar de origen.

identificar y cuantificar el/los tóxico/s desconocido/s. los resultados se envían al centro de referencia. Control interno: permite comprobar el buen estado de los reactivos y las condiciones de la prueba. .  Control externo consiste en detectar.

Reducción del Riesgo para el personal: Educación y seguridad apropiados. .Peligros:  Sustancias químicas con que se trabaja  Enfermedades relacionadas con muestras biológicas.

2009 .). López Artíguez M. Ilustre Colegio oficial de Químicos. CD-ROM. Repetto (ed). CD-ROM. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09.Sevilla. y cols. M.    “Menéndez M. 2008. Sevilla.Postgrado de Toxicología. Sevilla. En M.Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Flores I y cols. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. 2009. Repetto (ed. “La garantía de calidad en Toxicología”. M. 2008”. Tendencias en Toxicología Analítica”. CD-ROM. "Análisis Toxicológico Inórganico. Menéndez M y col. Repetto (ed. CD-ROM. Repetto (ed) Postgrado en Toxicología. Sevilla. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. M.Ilustre Colegio Oficial de Químicos.). "Análisis Toxicológico Orgánico”. 2008”.

   “López Rivadulla. Repetto (ed). Tendencias en Toxicología Forense”. Repetto (ed. y cols. Ferrer A . Ilustre Colegio Oficial de Químicos. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. Ilustre Colegio Oficial de Químicos.). Toxicología . CD-ROM. M. y cols. En M. Sevilla. CD-ROM. CD-ROM. Repetto (ed) Postgrado de Toxicología. M. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Sevilla. 2008”. M. “Repetto M. 2008”.  Klassen y Watkins III. 2009.Postgrado de Toxicología. Sevilla. Desarrollo y Evolución de la Toxicología” . " Toxicología Clínica”.

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