Cátedra de Toxicología Facultad de Ciencias Químicas UNA Prof. Dra.

Stella Presentado de Núñez

“Es la aplicación de los métodos y técnicas del análisis químico para detectar, identificar y cuantificar la presencia de sustancias, que en determinadas circunstancias pueden originar, o han producido, daños a los seres vivos.”“Menéndez M. y cols. Tendencias en Toxicología
Analítica”; M. Repetto (ed)Postgrado de Toxicología. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Sevilla. CD-ROM. 2008”.

 Permite

en la intoxicaciones:

› diagnosticar y/o confirmar los tóxicos

responsables; › establecer un correcto pronóstico del problema.

Adquiere función de Vigilancia de: -La eficacia de ciertos tratamiento o técnicas de eliminación; -Drogas susceptibles de abuso; -Drogas terapéuticas; -Exposición laboral; -Exposición medioambiental a sustancias químicas.

evaluando su contribución en la causa de muerte o lesión sobre seres humanos. . . En colaboración con centros de información toxicología puede desarrollar investigaciones sobre la toxicocinética y los mecanismos de toxicidad . comprende el uso de la toxicología para los propósitos de la ley determinando: .Además: En toxicología forense.la presencia de drogas o sus metabolitos en fluidos o tejidos humanos .

El análisis toxicológicos es una sistemática de trabajo. de dos pasos:  Análisis preliminar. detectan varias sustancias a la vez . Ejemplo: técnicas inmunocromatográficas . generales u orientación: Sensibles. identifica al tóxico durante los primeros minutos del análisis.

 Confirmación de identidad y cuantificación del tóxico: por principios físico-químicos diferentes más específicos y sensibles. CG-EM . Ejemplo.

por lo cual la historia clínica y toxicológica del paciente es fundamental.La gran cantidad de tóxicos constituye una gran limitación .así como la naturaleza de la matriz.  .  El pedido de análisis deber ser lo mas cerca de la situación real del paciente. .

etc.TIPOS DE MUESTRA  A-Relacionadas con el intoxicado: Ej. sangre. heces. faneras.  B-Muestras en caso de fallecimiento: contenido estomacal. . alimentos. productos químicos encontrados. ropas. orina. vísceras. vómitos.  C-Posibles productos causantes de la intoxicación: medicamentos. lavado y raspado de dedos .

. Es fundamental para que el resultado tenga significado clínico  Ej. Plomo en sangre total. pelo en crónicas. Intoxicaciones por Hg: orina en agudas.

CANTIDAD DE LAS MUESTRAS  Sangre: (5 a 15 mL en adultos y 1 a 3 mL en niños).con y sin anticoagulante. 50-100 mL  Producto supuesto causante de la intoxicación lo que se encuentre .  Orina: 50-100mL  Vómitos o líquido del lavado gástrico.

-Se debe evitar tapones porosos -Conviene centrifugar para evitar hemólisis. . -La cantidad y espécimen colectado deberán ser suficientes para permitir re-análisis o muchos análisis posteriores. que sean necesarios agregar.Observaciones: --Las muestras que puedan contener tóxicos volátiles deben remitirse herméticamente cerradas y con una mínima cámara de aire. pues la mayor parte de los tóxicos de determina en plasma o suero.

Puede ser  De polipropileno o poliestireno (órganos) cerrado herméticamente a fin de evitar pérdidas.  . De vidrio( para fluidos corporales) tomando precauciones para prever roturas. de boca ancha y tapa rosca. Todos los componentes del contenedor que estén en contacto con la muestra deberán estar libres de sustancias que puedan interferir en el análisis laboratorial y su resultado.RESPECTO A LOS ENVASES: Recipiente primario: es el que contiene el material a transportar.

algodón o paño capaz de absorber el fluido contenido en el recipiente primario en el caso de que éste se dañe.Recipiente secundario: es el que contiene el o los recipientes primarios. provisto de tapa con cierre hermético y de volumen adecuado que permita introducir el recipiente primario.    . -Contener un material absorbente: papel. Debe : -Ser de un material irrompible.

tipo de muestra.   .: Paciente.*Todos los rótulos y etiquetas deben efectuarse con elementos de escritura indelebles para evitar que se borren por efecto de la humedad o rotura de los contenidos.  *Todos los datos de identificación del material deben constar en el envase secundario. fecha de recolección.

deben ser enviados y empacados separadamente de las muestras biológicas.  Toma de muestra: Ej. Cuidados para alcoholemia  . como solventes orgánicos. para evitar las contaminaciones cruzadas.CUIDADOS PARA EVITAR LA CONTAMINACIÓN: RECIPIENTES Remisión de muestras: Los recipientes con materiales volátiles.  Tipo de envases: No utilizar envases plastificante tipo ftalato. ni tapones porosos.

En implicancias médico legales ( ejemplo cuando no está identificado el tóxico o el paciente fallece) las muestras remanentes deben ser mantenidas preferentemente a –20ºC hasta que la investigación haya concluido. fijadores.    En general: No deben mezclarse con conservantes. heparina). . ni otras sustancias que podrían interferir. Casos particulares Ejemplo: etanol y los metales pesados se determinan en sangre total ( EDTA. se debe informar el anticoagulante utilizado. Todas las muestras biológicas deben mantenerse a 4°C antes del análisis y si es posible las muestras remanentes deben mantenerse a 4°C durante 3 a 4 semanas para futuros análisis requeridos.

IV-Datos clínicos más relevantes: pupilas puntiformes. euforia. -Tratamiento instaurado. -Resultados bioquímicos y hematológicos realizados.Remitir datos al laboratorio como: I-Tóxico sospechoso para confirmarlo o descartarlo. . mediante declaración de familiares y allegados II. etc. .Dosis probable permite suponer la concentración plasmática y permite seleccionar el procedimiento analítico III-Tiempo transcurrido entre la absorción y la recogida de la muestra. -Datos anatomopatológicos de la autopsia si hubieren.Obtener anamnesis del paciente incluyendo cualquier evidencia circunstancial del tóxico.

 Es un factor de cuidado  Permite obtener muestras: › limpias ( aumenta selectividad. . identificación y cuantificación. precisión) › Mas concentradas (aumenta sensibilidad).Procesos de extracción:  Se realizan antes de llegar al análisis instrumental. para la detección.

. que se caracteriza por el tipo de sustancia :  1-Gases y vapores  2-Tóxicos orgánicos  3-Tóxicos inorgánicos Desafío: separar el tóxico con pureza y cantidad suficientes para identificarlo y cuantificarlo.Cuando se desconoce el tóxico Se utiliza un método sistemático y estandarizado para identificar las sustancias tóxicas mas frecuentes.

1Extracción por espacio en cabeza: En general se incuba la muestra a una temperatura predeterminada en recipiente cerrado.2Micro extracción en fase sólida (SPME): El analito volátil se adsorbe sobre fases estacionarias. Ej determinación de anfetaminas y sus metabolitos . de acuerdo al Tóxico a analizar. para luego inyectar en el GC Ej determinación de alcoholemia. 1. el gas liberado se recolecta sobre el espacio superior .1-Extracción de compuestos volátiles ( en forma de gas o vapor)   1. que posteriormente se inyecta a CG o HPLC. Se debe elegir acertadamente la fase estacionaria que recubre la fibra de sílice fundida. unidas químicamente a fibras muy finas de sílice fundidas insertadas en la aguja de una jeringa.

. 1.Difusión en cámara de Conway (según Feldstein y Klendshoj).4Micro difusión: Ej: por el método de Conway en el se utilizan 2 placas concéntricas. Ejemplo hidrocarburos de bajo PE.  1.Ejemplo alcoholemia. La muestra se colocan en el compartimiento externo y el absorbente en el interior. 1. luego el destilado se extrae con disolventes de los que se separan por evaporación. son arrastrados en corriente de vapor. se cierra y el tóxico se distribuye. Fig.3Destilación con arrastre:. el procedimiento clásico Ej: los tóxicos que volatilizan a menos de 100ºC. cloroformo en orina.

.

liberación de conjugados Se utilizan técnicas como: -2. Las polaridades favorecen la extracción.2-Separación de tóxicos orgánicos fijos Pueden ser: Sin tratamiento de la muestra Desproteinización .1Extracción líquido-líquido (LLE): los tóxicos son extraídos de la matrices biológicas por partición entre dos disolventes inmiscibles (ajustando el pH). .

.

mejora el límite de detección y cuantificación. . polares o de resinas iónicas. buena recuperación o extracción de analitos. Ventajas: rapidez. THC. Ej columnas de inmunofinidad para BZD.2Extracción sólido -líquido(SPE) pequeñas columnas rellenas de gránulos de fases sólidas apolares. micotoxinas.-2.

las especies cargadas emigran a distinta velocidad a través del capilar por el que circula una fase móvil. .3Mediante fluidos súper críticos (SFE): El más usado es CO .4Separación por electroforesis capilar :Al aplicar un voltaje considerable entre dos electrodos unidos por un capilar. -2. Ej. 2 por su densidad y poder de solvatación (asociación de moléculas de un disolvente con moléculas o iones de un soluto) similar a un líquido y capacidad de difusión y viscosidad similar a un gas. hasta alcanzar el detector separadas. tóxicos del carbón activado.-2. control antidoping. se establece una diferencia de potencial. Medicamentos y sus metabolitos. drogas de abuso. Usos para extraer pesticidas de suelo.

*Químicos: quelantes. etc.3-Extracción de tóxicos minerales o inorgánicos 1º Preparación de la muestra *Métodos con destrucción de materia orgánica: La mineralización se hace por calor (vía seca). Para la separación y determinación de aniones se utilizan técnicas como cromatografía iónica.Esto deja a los metales para ser identificados y cuantificados en el residuo inorgánico. 2º Métodos de enriquecimiento de la muestra: ejemplos *Físicos: evaporación. o por ataque con ácidos ( vía húmeda). . desproteinización. Otros métodos utilizan ultra filtración.

 Vía de entrada.  Tiempo transcurrido desde la exposición.-Crítico en intoxicaciones agudas. es necesario conocer en el menor tiempo posible mediante los análisis de orientación.  Cantidad. además son mas específicos y sensibles. . -Los análisis confirmatorios llevan mas tiempo. En ambos casos depende de:  Sustancias causantes. . esto limita el número de sustancias químicas que puedan medirse.

FPIA. . RIA.Son micro ensayos químicos que de forma presuntiva y rápida dan información cualitativa sobre la presencia de tóxicos individuales o de grupos y familias de medicamentos y drogas. ELISA. Así se tienen:  Inmunoensayos. Inmunocromatografia de fase lateral. Deben ser confirmados por otras técnicas de mayor  capacidad identificadora.:Ej. Aplicaciones: Drogas de abuso y monitoreo de drogas terapéuticas. que permitan su cuantificación (GC-EM). utilizan como principio analítico las reacciones Ag/Ac (el tóxico es el Ag).

La elección depende de:  La determinación analítica requerida  Posibilidades del laboratorio  Tipo de muestra  Cantidad de muestra  Naturaleza del tóxico .

Bi. Zn) De cámara de grafito o electrotérmica: la más sensible (Pb. Se. Cd). Por vapor frío: Hg . K. Por formación de hidruros volátiles: para As. › Espectrofotometría de absorción atómica (AAS):  De llama: poco sensible. I-Espectrofotométricas: permiten detectar trazas de elementos. Te. en muestras biológicas. Sb. como metales pesados. sirve p/elementos en alta concentración ( Na.

buena precisión y exactitud › Espectrofotometría de fluorescencia atómica por láser (LEAFS): poder de detección de partes por cuatrillón.› Espectrometría de plasma acoplado por inducción (ICP) capacidad alta de análisis multielemental.  ICP-AES: Limitado con elementos de transición ICP-MS: Alto grado de selectividad . con bajos límites de detección. . tanto para análisis cuali como cuantitativo.

basados en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los componentes a través de medios porosos arrastradas por un disolvente en movimiento. plaguicidas.: técnicas HPLC.II-Cromatográficas: técnicas de separación de una mezcla de solutos. HPLC/MS/MS. etc. . CG/MS/MS. CL/ICP-MS. HPLC/MS. permiten identificar drogas de abuso. Acoplamientos: CG/MS. Ej. medicamentos. GC.

sangre y orina). Hg) › Conductimetría (iones en agua potable). › Reacciones sobre electrodos con medidas de potenciales: potenciometría ( compuestos orgánicos). . voltametría de gota desnuda (Pb en hueso. Sb.polarografía (talio en orina). III-Técnicas eléctricas o electrométricas : › -Electrogravimetría como electrodeposición (As.

 Posibilidad de variación individual por factores fisiológicos o patológico. Si es un medicamento.Comparar el nivel del tóxico detectado con valores tóxicos y letales encontrados en la literatura.  .  Relacionar con las circunstancias implicadas Ej: cifras de etanol en sangre y los síntomas producidos. con su rango terapéutico.

 Defecto del método utilizado.Otros factores:  Posibilidad de no detectar el tóxico responsable. tanto para el muestreo. como para determinación misma.  Biotransformación del tóxico.  Eliminación del tóxico . pre tratamiento.

electrolitos. perfil hepático y otras pruebas dependiendo del tóxico en particular. perfil renal. respiratoria. orina simple.En las intoxicaciones aparte de las valoraciones neurológica. glucemia. vascular y de temperatura deben hacerse:  Hemograma. cardiaca . .

en diuresis forzada alcalina  En todos los casos de tratamiento por eliminación renal: electrolitos.  Intoxicación por derivados de hidro cumarína (raticidas): Tiempo de protrombina  Intoxicados por etilenglicol: Calcemia  Pacientes en terapia: Gases en sangre .Ejemplos  Intoxicación por barbitúricos: pH de orina simple.

 A ellas se deberían añadir la Toxicología Laboral y la Toxicología Ambiental que. acaban incidiendo en el ámbito judicial ( derechos de los trabajadores. etc.Se tienen tres clases o actividades:  1. Toxicología postmortem  2. delito ecológico. con frecuencia. . Toxicología Conductual. 2003).) (Repetto. Determinación y valoración de drogas de abuso en medios biológicos  3.

 Sangre Arterial (cardiaca): 25 ml.  Sangre Periférica: 10 ml.  Hígado: 100 g.  Orina: Todo lo obtenido. cada caso será tratado específicamente .  Bilis: Todo lo obtenido.Los tejidos no deben ser conservados en formol . con órganos parenquimatosos y fluidos biológicos:  Cerebro: 100 g.  Humor Vitreo: Todo lo obtenido.  Riñón: 50 g.1-En toxicología forense post mortem Muestras relacionadas con la puerta de entrada.  Contenidos gástricos: Todo lo obtenido.  Ciertos tóxicos pueden necesitar además: pulmón e intestino.

orina.2-Detección e interpretación de drogas en medios biológicos El uso de drogas y el abuso de fármacos acarrea una serie importante de problemas en el ámbito social y médico En los últimos años. Así es preciso afrontar y definir un nuevo término : “Sumisión química” Muestras:saliva. con especial repercusión en esta parte de la Toxicología Forense. sangre . sudor. la administración de sustancias químicas psicoactivas a personas con fines delictivos ha adquirido una especial relevancia en el ámbito de la Ciencias Forenses.pelo.

. así como el exceso del alcohol. consumo de fármacos.3-Toxicología Conductual  Esta parte de la Toxicología Forense se orienta sobre las siguientes facetas: el tráfico rodado y los centros de trabajo. Donde se resalta el uso de drogas ilícitas.

.

aire espirado o aliento.El aire alveolar. expresado en miligramos de alcohol por litro de aire espirado (mg/La) (Repetto. expresado en gramos por litro de sangre(g/Ls) equivale a la mitad de dicho valor. 1995). tiene su máximo de alcohol a los pocos minutos de ingerido éste. aunque por debajo de ella al llevar menor concentración de alcohol. y resulta muy útil a efectos analíticos.  . establece hacia los 20 minutos una curva paralela a la de alcoholemia.  Aproximadamente un valor numérico de alcoholemia.

pelo.TLVs® and BEIs® Based on the Documentation of the Threshold Limits Values for Chemical Sustances and Physical Agents & Biological Exposure Indices. Detección de alcohol. sudor.orina. sangre . drogas de abuso.  Muestras: saliva.

catalíticos. Tipos de sensores.  . con alarmas óptica y acústica. electroquímico.  Detectores estacionarios con sensores.Detectores portátiles de fotoionización para contaminantes orgánicos en el aire ambiente. convertidores de medio y alarmas. IR.

donde quedan registrados todos los pasos o procesos que experimentan la muestras a analizar. a partir de la toma de muestra.Es el sistema documental completo.  Es un procedimiento donde constan datos propios del paciente. hasta el informe final. sus muestras y los profesionales responsables. pasando por la parte analítica y post analítica.  .

debe constar el lugar anatómico de la extracción. Si es sangre.documentar  Fecha del día y hora de la toma de muestra  Identificación de las personas que intervienen  Condiciones del envasado. aditivos necesarios. nombre del paciente.En la toma de muestras. etc  Etiquetado de los envases con el nombre de la muestra. Debe constar quien realizó la toma o bien quien la presenció y asume la responsabilidad de la cadena de custodia  Presencia de precintado. tipo y/o número de precinto  Condiciones ambientales de almacenaje mantenidas hasta su envío al laboratorio  Fecha de remisión al laboratorio  Identificación de la empresa o medio de transporte utilizado  Constancia firmada de todas las personas bajo cuya responsabilidad hayan estado las muestras . contenedores apropiados al tipo de muestra.

el código de registro de entrada de la muestra. .Etapa preanalítica  la documentación de cadena de custodia recoja cualquier transferencia de la muestra y sus alicuotas dentro del laboratorio. pudiendo emplearse para ello formularios en los que consten datos como la fecha del análisis previsto. y la identificación del personal que transfiere la muestra.

las muestras han de ser custodiadas bajo condiciones medioambientales apropiadas. ya que puede ser solicitado un nuevo análisis o un contraperitaje. cómo. según su naturaleza y peligrosidad. su integridad hasta la emisión del correspondiente informe. y estos procesos también deben quedar registrados en los documentos de cadena de custodia. como mínimo.  La documentación de cadena de custodia recogerá la información que responda a dónde.  Pasado el tiempo de conservación. las muestras se destruyen o devuelven al lugar de origen.  En contra de esto.ETAPA POSTANALITICA  Una vez concluidos todos los análisis. las muestras implicadas en procedimientos judiciales han de conservarse durante períodos de tiempo muy superiores (incluso años). y durante cuanto tiempo deben conservarse. para asegurar. . así como la identificación del personal responsable de su custodia.

 Control interno: permite comprobar el buen estado de los reactivos y las condiciones de la prueba.  Control externo consiste en detectar. los resultados se envían al centro de referencia. identificar y cuantificar el/los tóxico/s desconocido/s. .

Peligros:  Sustancias químicas con que se trabaja  Enfermedades relacionadas con muestras biológicas. Reducción del Riesgo para el personal: Educación y seguridad apropiados. .

2008”. Repetto (ed. CD-ROM. Tendencias en Toxicología Analítica”. 2008”.Sevilla. Sevilla. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. Flores I y cols. y cols. Ilustre Colegio oficial de Químicos. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. Sevilla. M. CD-ROM. CD-ROM. 2009.Postgrado de Toxicología. Repetto (ed) Postgrado en Toxicología. "Análisis Toxicológico Inórganico. “La garantía de calidad en Toxicología”.Ilustre Colegio Oficial de Químicos. 2009 .Ilustre Colegio Oficial de Químicos. En M. Repetto (ed.). CD-ROM. "Análisis Toxicológico Orgánico”. 2008. Repetto (ed). Sevilla.    “Menéndez M. M.). M. Menéndez M y col. López Artíguez M.

Repetto (ed) Postgrado de Toxicología. y cols.  Klassen y Watkins III. 2008”.Postgrado de Toxicología. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. M. En M. “Repetto M. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Tendencias en Toxicología Forense”. Repetto (ed). M. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Sevilla.). y cols.   “López Rivadulla. CD-ROM. Sevilla. 2008”. " Toxicología Clínica”. CD-ROM. Desarrollo y Evolución de la Toxicología” . 2009. CD-ROM. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. Repetto (ed. Ferrer A . M. Sevilla. Toxicología .

.com/.jpg ./laboratorio 1%5B1%5D.bp. el ser humano es lo mas valioso de todo el proceso!!!!  2.Recuerda mantener las normas de bioseguridad.blogspot..

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