Cátedra de Toxicología Facultad de Ciencias Químicas UNA Prof. Dra.

Stella Presentado de Núñez

“Es la aplicación de los métodos y técnicas del análisis químico para detectar, identificar y cuantificar la presencia de sustancias, que en determinadas circunstancias pueden originar, o han producido, daños a los seres vivos.”“Menéndez M. y cols. Tendencias en Toxicología
Analítica”; M. Repetto (ed)Postgrado de Toxicología. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Sevilla. CD-ROM. 2008”.

 Permite

en la intoxicaciones:

› diagnosticar y/o confirmar los tóxicos

responsables; › establecer un correcto pronóstico del problema.

Adquiere función de Vigilancia de: -La eficacia de ciertos tratamiento o técnicas de eliminación; -Drogas susceptibles de abuso; -Drogas terapéuticas; -Exposición laboral; -Exposición medioambiental a sustancias químicas.

En colaboración con centros de información toxicología puede desarrollar investigaciones sobre la toxicocinética y los mecanismos de toxicidad . comprende el uso de la toxicología para los propósitos de la ley determinando: .evaluando su contribución en la causa de muerte o lesión sobre seres humanos.la presencia de drogas o sus metabolitos en fluidos o tejidos humanos .Además: En toxicología forense. . .

de dos pasos:  Análisis preliminar. Ejemplo: técnicas inmunocromatográficas . identifica al tóxico durante los primeros minutos del análisis.El análisis toxicológicos es una sistemática de trabajo. detectan varias sustancias a la vez . generales u orientación: Sensibles.

Ejemplo. Confirmación de identidad y cuantificación del tóxico: por principios físico-químicos diferentes más específicos y sensibles. CG-EM .

.La gran cantidad de tóxicos constituye una gran limitación . por lo cual la historia clínica y toxicológica del paciente es fundamental.  El pedido de análisis deber ser lo mas cerca de la situación real del paciente.  .así como la naturaleza de la matriz.

productos químicos encontrados. vísceras. lavado y raspado de dedos . etc. heces.  C-Posibles productos causantes de la intoxicación: medicamentos. sangre. . vómitos.TIPOS DE MUESTRA  A-Relacionadas con el intoxicado: Ej. alimentos. faneras. orina. ropas.  B-Muestras en caso de fallecimiento: contenido estomacal.

Plomo en sangre total. pelo en crónicas. Intoxicaciones por Hg: orina en agudas. Es fundamental para que el resultado tenga significado clínico  Ej. .

50-100 mL  Producto supuesto causante de la intoxicación lo que se encuentre .con y sin anticoagulante.  Orina: 50-100mL  Vómitos o líquido del lavado gástrico.CANTIDAD DE LAS MUESTRAS  Sangre: (5 a 15 mL en adultos y 1 a 3 mL en niños).

Observaciones: --Las muestras que puedan contener tóxicos volátiles deben remitirse herméticamente cerradas y con una mínima cámara de aire. pues la mayor parte de los tóxicos de determina en plasma o suero. que sean necesarios agregar. . -La cantidad y espécimen colectado deberán ser suficientes para permitir re-análisis o muchos análisis posteriores. -Se debe evitar tapones porosos -Conviene centrifugar para evitar hemólisis.

Todos los componentes del contenedor que estén en contacto con la muestra deberán estar libres de sustancias que puedan interferir en el análisis laboratorial y su resultado. de boca ancha y tapa rosca. Puede ser  De polipropileno o poliestireno (órganos) cerrado herméticamente a fin de evitar pérdidas.  . De vidrio( para fluidos corporales) tomando precauciones para prever roturas.RESPECTO A LOS ENVASES: Recipiente primario: es el que contiene el material a transportar.

provisto de tapa con cierre hermético y de volumen adecuado que permita introducir el recipiente primario.Recipiente secundario: es el que contiene el o los recipientes primarios. algodón o paño capaz de absorber el fluido contenido en el recipiente primario en el caso de que éste se dañe. Debe : -Ser de un material irrompible. -Contener un material absorbente: papel.    .

fecha de recolección.   .: Paciente. tipo de muestra.*Todos los rótulos y etiquetas deben efectuarse con elementos de escritura indelebles para evitar que se borren por efecto de la humedad o rotura de los contenidos.  *Todos los datos de identificación del material deben constar en el envase secundario.

Cuidados para alcoholemia  . ni tapones porosos.  Tipo de envases: No utilizar envases plastificante tipo ftalato. como solventes orgánicos. para evitar las contaminaciones cruzadas.CUIDADOS PARA EVITAR LA CONTAMINACIÓN: RECIPIENTES Remisión de muestras: Los recipientes con materiales volátiles.  Toma de muestra: Ej. deben ser enviados y empacados separadamente de las muestras biológicas.

ni otras sustancias que podrían interferir. se debe informar el anticoagulante utilizado. Todas las muestras biológicas deben mantenerse a 4°C antes del análisis y si es posible las muestras remanentes deben mantenerse a 4°C durante 3 a 4 semanas para futuros análisis requeridos. heparina).    En general: No deben mezclarse con conservantes. . En implicancias médico legales ( ejemplo cuando no está identificado el tóxico o el paciente fallece) las muestras remanentes deben ser mantenidas preferentemente a –20ºC hasta que la investigación haya concluido. Casos particulares Ejemplo: etanol y los metales pesados se determinan en sangre total ( EDTA. fijadores.

IV-Datos clínicos más relevantes: pupilas puntiformes. etc. .Remitir datos al laboratorio como: I-Tóxico sospechoso para confirmarlo o descartarlo. . -Datos anatomopatológicos de la autopsia si hubieren.Obtener anamnesis del paciente incluyendo cualquier evidencia circunstancial del tóxico. mediante declaración de familiares y allegados II.Dosis probable permite suponer la concentración plasmática y permite seleccionar el procedimiento analítico III-Tiempo transcurrido entre la absorción y la recogida de la muestra. -Resultados bioquímicos y hematológicos realizados. -Tratamiento instaurado. euforia.

 Es un factor de cuidado  Permite obtener muestras: › limpias ( aumenta selectividad. para la detección. .Procesos de extracción:  Se realizan antes de llegar al análisis instrumental. precisión) › Mas concentradas (aumenta sensibilidad). identificación y cuantificación.

que se caracteriza por el tipo de sustancia :  1-Gases y vapores  2-Tóxicos orgánicos  3-Tóxicos inorgánicos Desafío: separar el tóxico con pureza y cantidad suficientes para identificarlo y cuantificarlo. .Cuando se desconoce el tóxico Se utiliza un método sistemático y estandarizado para identificar las sustancias tóxicas mas frecuentes.

el gas liberado se recolecta sobre el espacio superior . para luego inyectar en el GC Ej determinación de alcoholemia. que posteriormente se inyecta a CG o HPLC.1-Extracción de compuestos volátiles ( en forma de gas o vapor)   1.2Micro extracción en fase sólida (SPME): El analito volátil se adsorbe sobre fases estacionarias. Se debe elegir acertadamente la fase estacionaria que recubre la fibra de sílice fundida.1Extracción por espacio en cabeza: En general se incuba la muestra a una temperatura predeterminada en recipiente cerrado. 1. de acuerdo al Tóxico a analizar. Ej determinación de anfetaminas y sus metabolitos . unidas químicamente a fibras muy finas de sílice fundidas insertadas en la aguja de una jeringa.

Ejemplo hidrocarburos de bajo PE.  1. se cierra y el tóxico se distribuye. el procedimiento clásico Ej: los tóxicos que volatilizan a menos de 100ºC. son arrastrados en corriente de vapor.3Destilación con arrastre:.Difusión en cámara de Conway (según Feldstein y Klendshoj). luego el destilado se extrae con disolventes de los que se separan por evaporación. Fig. La muestra se colocan en el compartimiento externo y el absorbente en el interior. 1.Ejemplo alcoholemia.4Micro difusión: Ej: por el método de Conway en el se utilizan 2 placas concéntricas. . 1. cloroformo en orina.

.

liberación de conjugados Se utilizan técnicas como: -2. Las polaridades favorecen la extracción. .2-Separación de tóxicos orgánicos fijos Pueden ser: Sin tratamiento de la muestra Desproteinización .1Extracción líquido-líquido (LLE): los tóxicos son extraídos de la matrices biológicas por partición entre dos disolventes inmiscibles (ajustando el pH).

.

Ej columnas de inmunofinidad para BZD. THC. micotoxinas.2Extracción sólido -líquido(SPE) pequeñas columnas rellenas de gránulos de fases sólidas apolares.-2. Ventajas: rapidez. polares o de resinas iónicas. mejora el límite de detección y cuantificación. buena recuperación o extracción de analitos. .

Medicamentos y sus metabolitos. las especies cargadas emigran a distinta velocidad a través del capilar por el que circula una fase móvil. tóxicos del carbón activado. se establece una diferencia de potencial. -2. hasta alcanzar el detector separadas.-2.3Mediante fluidos súper críticos (SFE): El más usado es CO . Usos para extraer pesticidas de suelo. Ej. control antidoping. drogas de abuso. 2 por su densidad y poder de solvatación (asociación de moléculas de un disolvente con moléculas o iones de un soluto) similar a un líquido y capacidad de difusión y viscosidad similar a un gas.4Separación por electroforesis capilar :Al aplicar un voltaje considerable entre dos electrodos unidos por un capilar. .

desproteinización.3-Extracción de tóxicos minerales o inorgánicos 1º Preparación de la muestra *Métodos con destrucción de materia orgánica: La mineralización se hace por calor (vía seca). Para la separación y determinación de aniones se utilizan técnicas como cromatografía iónica. etc. . 2º Métodos de enriquecimiento de la muestra: ejemplos *Físicos: evaporación.Esto deja a los metales para ser identificados y cuantificados en el residuo inorgánico. o por ataque con ácidos ( vía húmeda). *Químicos: quelantes. Otros métodos utilizan ultra filtración.

esto limita el número de sustancias químicas que puedan medirse.  Cantidad.-Crítico en intoxicaciones agudas. es necesario conocer en el menor tiempo posible mediante los análisis de orientación.  Tiempo transcurrido desde la exposición. además son mas específicos y sensibles. -Los análisis confirmatorios llevan mas tiempo.  Vía de entrada. . En ambos casos depende de:  Sustancias causantes. .

FPIA.:Ej. ELISA. Así se tienen:  Inmunoensayos. utilizan como principio analítico las reacciones Ag/Ac (el tóxico es el Ag). .Son micro ensayos químicos que de forma presuntiva y rápida dan información cualitativa sobre la presencia de tóxicos individuales o de grupos y familias de medicamentos y drogas. Inmunocromatografia de fase lateral. Deben ser confirmados por otras técnicas de mayor  capacidad identificadora. Aplicaciones: Drogas de abuso y monitoreo de drogas terapéuticas. que permitan su cuantificación (GC-EM). RIA.

La elección depende de:  La determinación analítica requerida  Posibilidades del laboratorio  Tipo de muestra  Cantidad de muestra  Naturaleza del tóxico .

Cd). Te. K. Se. sirve p/elementos en alta concentración ( Na. como metales pesados. Sb. Zn) De cámara de grafito o electrotérmica: la más sensible (Pb. Por formación de hidruros volátiles: para As. I-Espectrofotométricas: permiten detectar trazas de elementos. Bi. en muestras biológicas. › Espectrofotometría de absorción atómica (AAS):  De llama: poco sensible. Por vapor frío: Hg .

tanto para análisis cuali como cuantitativo. .› Espectrometría de plasma acoplado por inducción (ICP) capacidad alta de análisis multielemental. con bajos límites de detección. buena precisión y exactitud › Espectrofotometría de fluorescencia atómica por láser (LEAFS): poder de detección de partes por cuatrillón.  ICP-AES: Limitado con elementos de transición ICP-MS: Alto grado de selectividad .

plaguicidas. GC. HPLC/MS/MS.II-Cromatográficas: técnicas de separación de una mezcla de solutos.: técnicas HPLC. medicamentos. HPLC/MS. basados en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los componentes a través de medios porosos arrastradas por un disolvente en movimiento. CG/MS/MS. CL/ICP-MS. . Ej. Acoplamientos: CG/MS. etc. permiten identificar drogas de abuso.

› Reacciones sobre electrodos con medidas de potenciales: potenciometría ( compuestos orgánicos). sangre y orina). III-Técnicas eléctricas o electrométricas : › -Electrogravimetría como electrodeposición (As.polarografía (talio en orina). Hg) › Conductimetría (iones en agua potable). Sb. voltametría de gota desnuda (Pb en hueso. .

 . Si es un medicamento.  Posibilidad de variación individual por factores fisiológicos o patológico.  Relacionar con las circunstancias implicadas Ej: cifras de etanol en sangre y los síntomas producidos.Comparar el nivel del tóxico detectado con valores tóxicos y letales encontrados en la literatura. con su rango terapéutico.

tanto para el muestreo.Otros factores:  Posibilidad de no detectar el tóxico responsable.  Defecto del método utilizado.  Biotransformación del tóxico. pre tratamiento. como para determinación misma.  Eliminación del tóxico .

electrolitos. perfil hepático y otras pruebas dependiendo del tóxico en particular. cardiaca .En las intoxicaciones aparte de las valoraciones neurológica. respiratoria. vascular y de temperatura deben hacerse:  Hemograma. . orina simple. glucemia. perfil renal.

en diuresis forzada alcalina  En todos los casos de tratamiento por eliminación renal: electrolitos.Ejemplos  Intoxicación por barbitúricos: pH de orina simple.  Intoxicación por derivados de hidro cumarína (raticidas): Tiempo de protrombina  Intoxicados por etilenglicol: Calcemia  Pacientes en terapia: Gases en sangre .

Toxicología Conductual.) (Repetto. . etc. Determinación y valoración de drogas de abuso en medios biológicos  3. con frecuencia. delito ecológico. Toxicología postmortem  2.  A ellas se deberían añadir la Toxicología Laboral y la Toxicología Ambiental que. 2003). acaban incidiendo en el ámbito judicial ( derechos de los trabajadores.Se tienen tres clases o actividades:  1.

1-En toxicología forense post mortem Muestras relacionadas con la puerta de entrada.  Ciertos tóxicos pueden necesitar además: pulmón e intestino.  Contenidos gástricos: Todo lo obtenido.  Riñón: 50 g.  Orina: Todo lo obtenido.  Hígado: 100 g. cada caso será tratado específicamente . con órganos parenquimatosos y fluidos biológicos:  Cerebro: 100 g.  Humor Vitreo: Todo lo obtenido.  Bilis: Todo lo obtenido.  Sangre Arterial (cardiaca): 25 ml.  Sangre Periférica: 10 ml.Los tejidos no deben ser conservados en formol .

con especial repercusión en esta parte de la Toxicología Forense.2-Detección e interpretación de drogas en medios biológicos El uso de drogas y el abuso de fármacos acarrea una serie importante de problemas en el ámbito social y médico En los últimos años. sudor. la administración de sustancias químicas psicoactivas a personas con fines delictivos ha adquirido una especial relevancia en el ámbito de la Ciencias Forenses.pelo.orina. Así es preciso afrontar y definir un nuevo término : “Sumisión química” Muestras:saliva. sangre .

consumo de fármacos. así como el exceso del alcohol. .3-Toxicología Conductual  Esta parte de la Toxicología Forense se orienta sobre las siguientes facetas: el tráfico rodado y los centros de trabajo. Donde se resalta el uso de drogas ilícitas.

.

aunque por debajo de ella al llevar menor concentración de alcohol. expresado en gramos por litro de sangre(g/Ls) equivale a la mitad de dicho valor.El aire alveolar.  Aproximadamente un valor numérico de alcoholemia. expresado en miligramos de alcohol por litro de aire espirado (mg/La) (Repetto. 1995). establece hacia los 20 minutos una curva paralela a la de alcoholemia. tiene su máximo de alcohol a los pocos minutos de ingerido éste. y resulta muy útil a efectos analíticos.  . aire espirado o aliento.

sudor. sangre . drogas de abuso.  Muestras: saliva.TLVs® and BEIs® Based on the Documentation of the Threshold Limits Values for Chemical Sustances and Physical Agents & Biological Exposure Indices.pelo. Detección de alcohol.orina.

catalíticos. con alarmas óptica y acústica. IR.  . electroquímico.Detectores portátiles de fotoionización para contaminantes orgánicos en el aire ambiente.  Detectores estacionarios con sensores. Tipos de sensores. convertidores de medio y alarmas.

hasta el informe final.  .Es el sistema documental completo. pasando por la parte analítica y post analítica.  Es un procedimiento donde constan datos propios del paciente. a partir de la toma de muestra. sus muestras y los profesionales responsables. donde quedan registrados todos los pasos o procesos que experimentan la muestras a analizar.

Si es sangre. nombre del paciente. aditivos necesarios. Debe constar quien realizó la toma o bien quien la presenció y asume la responsabilidad de la cadena de custodia  Presencia de precintado. etc  Etiquetado de los envases con el nombre de la muestra.documentar  Fecha del día y hora de la toma de muestra  Identificación de las personas que intervienen  Condiciones del envasado. tipo y/o número de precinto  Condiciones ambientales de almacenaje mantenidas hasta su envío al laboratorio  Fecha de remisión al laboratorio  Identificación de la empresa o medio de transporte utilizado  Constancia firmada de todas las personas bajo cuya responsabilidad hayan estado las muestras . debe constar el lugar anatómico de la extracción.En la toma de muestras. contenedores apropiados al tipo de muestra.

el código de registro de entrada de la muestra. . y la identificación del personal que transfiere la muestra.Etapa preanalítica  la documentación de cadena de custodia recoja cualquier transferencia de la muestra y sus alicuotas dentro del laboratorio. pudiendo emplearse para ello formularios en los que consten datos como la fecha del análisis previsto.

su integridad hasta la emisión del correspondiente informe. como mínimo. según su naturaleza y peligrosidad. las muestras implicadas en procedimientos judiciales han de conservarse durante períodos de tiempo muy superiores (incluso años). así como la identificación del personal responsable de su custodia.  La documentación de cadena de custodia recogerá la información que responda a dónde. y estos procesos también deben quedar registrados en los documentos de cadena de custodia.ETAPA POSTANALITICA  Una vez concluidos todos los análisis. para asegurar. y durante cuanto tiempo deben conservarse. .  Pasado el tiempo de conservación. las muestras han de ser custodiadas bajo condiciones medioambientales apropiadas. cómo. las muestras se destruyen o devuelven al lugar de origen. ya que puede ser solicitado un nuevo análisis o un contraperitaje.  En contra de esto.

los resultados se envían al centro de referencia. identificar y cuantificar el/los tóxico/s desconocido/s. Control interno: permite comprobar el buen estado de los reactivos y las condiciones de la prueba. .  Control externo consiste en detectar.

Reducción del Riesgo para el personal: Educación y seguridad apropiados. .Peligros:  Sustancias químicas con que se trabaja  Enfermedades relacionadas con muestras biológicas.

En M. M.    “Menéndez M. 2008”. y cols. 2009. Repetto (ed. Flores I y cols. CD-ROM.Sevilla. “La garantía de calidad en Toxicología”. 2008”. Repetto (ed).Postgrado de Toxicología. 2008. 2009 . Tendencias en Toxicología Analítica”. M.Ilustre Colegio Oficial de Químicos. "Análisis Toxicológico Orgánico”.Ilustre Colegio Oficial de Químicos. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. CD-ROM. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. Sevilla. Repetto (ed) Postgrado en Toxicología.).). Sevilla. "Análisis Toxicológico Inórganico. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Ilustre Colegio oficial de Químicos. M. Sevilla. Repetto (ed. CD-ROM. López Artíguez M. CD-ROM. Menéndez M y col.

M. 2008”. 2008”. M. Toxicología . Repetto (ed) Postgrado de Toxicología. En M. En Ampliación de Postgrado en Toxicología -09. y cols. Sevilla. “Repetto M. " Toxicología Clínica”. CD-ROM. 2009. Repetto (ed. M.Postgrado de Toxicología.  Klassen y Watkins III. Sevilla. CD-ROM. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. Desarrollo y Evolución de la Toxicología” . Tendencias en Toxicología Forense”. CD-ROM. Repetto (ed). Ferrer A .).   “López Rivadulla. Ilustre Colegio Oficial de Químicos. y cols. Sevilla.

Recuerda mantener las normas de bioseguridad.jpg .com/.blogspot./laboratorio 1%5B1%5D... el ser humano es lo mas valioso de todo el proceso!!!!  2.bp.

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