A N A L I T I C O S

M E T O D O S

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A L I M E N T A R I A
D E A N A L I S I S

O F I C I A L E S

Productos derivados de la uva, aguardientes y sidras

PANREAC QUIMICA, S.A. publica una nueva edición de sus folletos de Métodos Analíticos en Alimentaria, en la que podrán apreciar a simple vista un cambio de formato respecto a las anteriores.
M E T O D O S A N A L I T I C O S E N A L I M E N T A R I A

Esta nueva imagen, pretende ser una expresión de los cambios que con el tiempo hemos experimentado en nuestros campos de actividad, puesto que si continuamos manteniendo una importante implantación en el sector alimentario como fabricantes de reactivos para análisis PANREAC y de los aditivos alimentarios ADITIO, actualmente hemos aumentado nuestra aportación de productos para el análisis alimentario con nuestras líneas de Cromatografía en Capa Fina PANREAC-TLC y Medios de Cultivo Deshidratados para Microbiología CULTIMED. La colección Métodos Analíticos en Alimentaria se compone de 6 folletos monográficos, por campos de alimentos, que recogen una transcripción íntegra de los métodos oficiales de análisis en España, que a su vez son publicados en los correspondientes B.O.E. mencionados en el índice de cada monografía incorporando los reactivos y productos auxiliares PANREAC en la calidad considerada más idónea, así como los medios de cultivo CULTIMED.

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Los títulos de las 6 monografías son:

Aceites y grasas Aguas potables de consumo público y aguas de bebida envasadas Carne y productos cárnicos Cereales, derivados de cereales y cerveza Leche y productos lácteos Productos derivados de la uva, aguardientes y sidras
Obviamente esta edición ha sido actualizada con las disposiciones publicadas hasta el momento, que establecen nuevos procedimientos o que modifican notablemente características anteriormente establecidas. Por último, comentarles que están a su disposición además de esta colección, nuestros: Catálogo General de Reactivos PANREAC Catálogo ADITIO de Aditivos Alimentarios Catálogo CULTIMED de Medios de Cultivo Deshidratados Catálogo PANREAC-TLC de Placas, Folios y Accesorios para Cromatografía en Capa Fina.

I N D I C E

Productos derivados de la uva: Vinos
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 22-7-1977, 23-7-1977, 25-7-1977, 26-7-1977, 27-7-1977, 30-8-1979 Y 14-10-1981) 123a3b4a4b5a5b67a7b7c8910a10b1112131415161718192021222324a24b2526Examen organoléptico (B.O.E. 22-7-1977) ............................ Ensayos previos de conservación ....... Color (B.O.E. 14-10-1981) .................. Color de los vinos (aplicable a vinos tintos y rosados (B.O.E. 22-7-1977) ... Masa volúmica y densidad relativa (método picnométrico) ........................ Masa volúmica y densidad relativa (método areométrico) ......................... Título alcohométrico (método picnométrico)...................................... Título alcohométrico (método areométrico) (B.O.E. 23-7-1977) ......... Extracto seco total ............................. Azúcares reductores (defecación plúmbica) (provisional) ........................ Azúcares reductores (defecación mercúrica) (provisional) ....................... Azúcares reductores (valoración) (B.O.E. 30-8-1979) ............................. Glicerol (Glicerina) (B.O.E. 23-7-1977).. 2,3-Butanodiol ................................... Sacarosa (método cualitativo colorimétrico)...................................... Sacarosa (método cuantitativo) ........... Cenizas ............................................. Alcalinidad de cenizas ........................ Fosfatos ............................................. Calcio (método complexométrico) ....... Magnesio ........................................... Hierro (método colorimétrico del sulfocianuro) ....................................... Cobre ................................................ Potasio (fotometría de llama) .............. Sodio (fotometría de llama) ................. Acidez total ........................................ Acidez volátil ...................................... Acido Sórbico en el destilado para acidez volátil ...................................... Acidez fija (B.O.E. 25-7-1977) ............ Acido Tartárico total (método del calcio racemato)........................................... Acido Tartárico total (método complexométrico) ............................... Acido Láctico ..................................... Acido Cítrico ...................................... 9 9 10 14 14 15 22 29 31 34 36 37 38 40 42 43 43 44 44 45 46 47 48 49 49 50 51 52 53 53 54 54 56

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2728a28b293031323334Sulfatos (B.O.E. 26-7-1977) ............... Anhídrido Sulfuroso (método Paul) ......... Anhídrido Sulfuroso (método Ripper doble) Acido Sórbico .................................... Cloruros (B.O.E. 30-8-1979) ............... Acido Benzoico (B.O.E. 26-7-1977) .... Bromo total ....................................... Bromo orgánico ................................. Acidos Monobromoacético y Monocloroacético de origen orgánico (método cualitativo) (provisional) ......... Indice de Permanganato (B.O.E. 27-7-1977) ............................ Determinación de presencia de vino procedente de “híbridos productores directos” (método cualitativo) ............. Determinación de presencia de vino procedente de “híbridos productores directos” (provisional) ........................ Metanol (Alcohol metílico) (método del ácido cromotrópico) .......................... Nitrógeno (método Kjeldhal) .............. Flúor (provisional) .............................. Flúor (B.O.E. 30-8-1979) ................... Hidroximetilfurfural (provisional) (B.O.E. 27-7-1977) ............................ Determinación cualitativa de Acido Sórbico, Benzoico, p-Clorobenzoico, Salicílico, p-Hidroxibenzoico y su éster etílico ................................................ Investigación de derivados monohalogenados del Acido Acético (B.O.E. 30-8-1979) ............................ Grado alcohólico en potencia ............ Grado alcohólico total ....................... Colorantes sintéticos ......................... Mercurio ............................................ Plomo ................................................ Relación P/ ..................................... Anhídrido Carbónico (método aprobado pero no publicado en el B.O.E.) ......... Etanal (método aprobado pero no publicado en el B.O.E.) ...................... Presión del Anhídrido Carbónico (B.O.E. 14-10-1981) .......................... Antisépticos y Antifermentos (método microbiológico) .................................. 58 59 60 61 62 63 64 65 7891011121314151617181920212223242526272829Azúcares totales y reductores ............ Acido Ascórbico ................................ Relación glucosa/fructosa ................. Nitrógeno total .................................. Etanol ............................................... Indice de formol ................................ Prolina .............................................. Acido Sórbico .................................... Acido Benzoico ................................. Hidroximetilfurfural ............................. Cenizas ............................................. Material mineral insoluble en Acido Clorhídrico al 10% ............................ Fósforo total ...................................... Sulfatos ............................................. Anhídrido Sulfuroso ........................... Potasio .............................................. Sodio ................................................ Arsénico ............................................ Hierro ................................................ Plomo ............................................... Estaño ............................................... Cobre ............................................... Zinc ................................................... 103 104 105 105 106 107 107 108 108 109 109 110 110 111 112 112 113 113 114 115 115 116 116

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Vinagres
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 27-7-1977, 30-8-1979 Y 14-10-1981) 12345678910a10b11121314151617Extracto total (B.O.E. 27-7-1977) ....... Acidez total (grado acético) ................ Acidez fija ......................................... Acidez volátil ..................................... Sulfatos ............................................. Acetilmetilcarbinol (Acetoína) (B.O.E. 30-8-1979) ............................ Cenizas (B.O.E. 27-7-1977) ............... Indice de oxidación ........................... Metanol (Alcohol Metílico), método del Acido Cromotrópico (B.O.E. 30-8-1979). Acido Tartárico (método cualitativo) .... Acido Tartárico (método cuantitativo) .. Cobre ............................................... Cloruros ............................................ Grado alcohólico ................................ Arsénico ............................................ Zinc ................................................... Prolina .............................................. Acido Acético de síntesis (B.O.E. 14-10-1981) .......................... 119 119 119 120 120 121 121 122 123 123 124 125 126 126 127 128 129 129

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Zumos de Uva
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 7-5-1988) 123456Grado Brix ........................................ Densidad .......................................... pH .................................................... Acidez total ...................................... Acidez volátil ..................................... Sólidos solubles ................................. 89 98 99 99 100 101

Orujos, Heces y Lías
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 30-8-1979) 1Contenido alcohólico en orujos, heces y lías ................................................. 133

Aguardientes compuestos: Whisky
METODOS DE ANALISIS (Anexo I de la Orden 3-4-1985, B.O.E. 13-4-1985) 1234567891011121314Obtención del destilado ..................... Furfurol ............................................. Extracto seco .................................... Esteres .............................................. Alcoholes superiores .......................... Metanol ............................................. Grado alcohólico ............................... Aldehídos .......................................... Acidez volátil ...................................... Cenizas (materia mineral total) ............ Plomo ................................................ Zinc ................................................... Cobre ................................................ Arsénico ............................................ 135 135 136 136 137 138 138 139 140 140 141 142 142 142

8Sacarosa ........................................... 9Acidez total ....................................... 10- Materias reductoras (Azúcares reductores) ........................ 11- Plomo ................................................ 12- Zinc ................................................... 13- Cobre ................................................ 14- Arsénico ............................................

160 161 161 163 163 164 164

Anís
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 13-5-1987) 1234567891011121314Obtención del destilado ..................... Peso específico del aceite esencial natural (en materia prima) ................... Punto de fusión del aceite esencial natural (en materia prima) ................... Grado alcohólico ............................... Azúcares totales ............................... Anetol ............................................... Metanol ............................................. Bases nitrogenadas ........................... Aceites esenciales ............................. Hidroximetilfurfural y furfural ............... Arsénico ............................................ Plomo ............................................... Zinc ................................................... Cobre ................................................ 167 167 168 169 169 170 171 172 173 174 174 176 176 177

Ron
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 24-10-1985) 123456789101112131415Obtención del destilado ...................... Furfurol (Furfuraldehído) ...................... Extracto seco reducido ...................... Esteres .............................................. Alcoholes superiores .......................... Metanol (Alcohol Metílico) .................. Grado alcohólico ............................... Aldehídos .......................................... Acidez volátil ..................................... Azúcares reductores .......................... Plomo ............................................... Zinc ................................................... Cobre ................................................ Arsénico ............................................ Sacarosa .......................................... 145 145 146 147 148 148 149 149 150 150 153 153 154 154 155

Sidras: Sidra y otras bebidas derivadas de la manzana
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 28-7-1980) 1Eliminación del Anhídrido Carbónico .......................................... 2Grado alcohólico adquirido ................ 3Azúcares reductores .......................... 4Anhídrido Sulfuroso ............................ 5Metanol (Alcohol Metílico) .................. 6Acidez volátil ..................................... 7Extrato seco total .............................. 8Cenizas ............................................. 9Hierro ................................................ 10- Etanal ................................................ 11- Anhídrido Carbónico ..........................

Ginebra
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 25-10-1985) 1234567Obtención del destilado ..................... Furfurol (Furfuraldehído) ..................... Extracto seco .................................... Bases nitrogenadas ........................... Alcoholes superiores .......................... Metanol (Alcohol Metílico) .................. Grado alcohólico ............................... 157 157 158 158 158 159 160

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Relación de reactivos y productos auxiliares que se utilizan en los métodos analíticos, Productos derivados de la Uva, Aguardientes y Sidras ....................................... 184 Aditivos y coadyuvantes tecnológicos para uso alimentario industrial .................................

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Productos derivados de la uva: Vinos

NOTA: Se han consignado todos los métodos oficiales de análisis de vinos publicados en el B.O.E., pero no los prescritos por el Reglamento 2676/90 de la C.E., por no estar suficientemente extendidos en nuestro país y, por tanto, no tener una aplicación generalizada.

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METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 22-7-1977, 23-7-1977, 25-7-1977, 26-7-1977, 27-7-1977, 30-8-1979 Y 14-10-1981) 1. EXAMEN ORGANOLEPTICO 1.1. Examen del color. Determinar mediante apreciación visual las características, bien definidas, del color del vino. Observar el vino colocado en copas de cristal fino e incoloro, o bien en tazas de plata o de fondo plateado, el cual presentará diferentes formas convexas o abolladas, para apreciar el vino en diferentes espesores y sobre fondo brillante. Utilizar las siguientes calificaciones del color para vinos tintos: rojo rubí, rojo violáceo o morado, viraje a tono cebolla o amarillento. Según la intensidad del color, el vino tinto puede calificarse en: vino tinto, rosado, clarete, y si tiene mucho o poco color dentro de estos tipos, se dirá que tiene mucha o poca capa. En vinos blancos, utilizar las calificaciones de tono verdoso, casi incoloro, amarillo, amarillo-oro, ambarino, pajizo claro u oscuro (rancia), etc., y en todos los tipos, si el color es blanco, o si azulea, pardea o ennegrece. 1.2. Formación de espuma. Observar el aspecto de la espuma que se forma al agitar el vino en la copa y determinar si es o no abundante, si desaparece rápidamente o, en caso de vinos tintos, si persiste unos momentos el color más o menos intenso. El vino de mucha capa o el vino enyesado produce espuma que tarda mucho en desaparecer. 1.3. Presencia de gas carbónico. Verter vino en una copa. La formación de burbujas indica la presencia de gas carbónico en el vino. Este gas carbónico debe eliminarse para continuar el examen de la muestra, agitando o en la forma que se indica en los métodos analíticos. 1.4. Limpieza. Apreciar en copa o en taza de plata, al mismo tiempo que el color, si el vino está turbio, claro o brillante. Observar también si hay depósito y si al agitar tiene aspecto cristalino o pulverulento que enturbie el vino. 1.5. Degustación o cata. Proceder a la degustación recién destapada la botella, consignando datos, referentes a la calidad, origen, edad y posibles alteraciones del vino. Coger una copa de cristal ovoide por su platillo con los dedos pulgar, índice y central de la mano derecha, quedando la copa libre para examinar el vino. Llenar con vino sólo 1/3 o 1/4 de la copa, para poder agitar bien y tener un espacio vacío donde se concentren los aromas. Agitar haciendo girar el vino y apreciar el aroma. Apreciar y caracterizar el olor a “vinoso”, que acusa vino nuevo, el “afrutado”, el del vino que comenzó la “crianza”, la riqueza alcohólica, olores ácidos volátiles, olores que acusen defectos de elaboración, etc., y la presencia de enfermedades y alteraciones. En degustación de más precisión, como será la necesaria para definir características de un tipo de vino y que han de servir de referencia, es necesario reunir un grupo determinado de buenos catadores, y realizar un nú-mero de catas suficientes para obtener resultados satisfactorios estadísticamente según las normas específicas existentes. 1.6. Referencia. 1.6.1. Amerine, M.A., y Feduchy, E.: “Los resultados de la cata del vino y del análisis químico”. Boletín I.N.I.A., 31, 353-375, 1956. 2. ENSAYOS PREVIOS DE CONSERVACION 2.1. Prueba del aire. 2.1.1. “Quiebras” tánico-férricas o fosfatoférricas.- Dejar el vino en contacto con el aire (en una copa mediada), en sitio fresco y al resguardo de la luz. Observar al cabo de 12 o más horas. El enturbiamiento o el ennegrecimiento pone de manifiesto la posibilidad de “quiebras” tánico-férricas o fosfato-férricas. 2.1.2. “Quiebra oxidásica”.- Proceder como en 2.1.1., utilizando dos muestras de vino, una pasterizada, para destruir la oxidasa, y la otra sin pasterizar. La formación de color pardo y precipitado pulverulento oscuro son señales características de la “quiebra oxidásica”. 2.1.3. “Quiebra cuprosa”.- Poner la muestra en botella cerrada, calentar en baño de agua a 35 , y exponer a la luz. Si la riqueza en cobre es suficiente, aparece enturbiamiento característico de la “quiebra cuprosa”. 2.2. Prueba del frío. Enfriar el vino a la temperatura que normalmente se suponga va a estar expuesto, y comprobar si se produce precipitación de bitartrato. 2.3. Prueba de la estufa. Mantener una muestra de vino en estufa a 22-25 durante 3-4 días. Examinar al microscopio el posible desarrollo microbiano distinguiendo si se trata de levaduras o de bacterias. Si es necesario, proceder al conteo y la identificación de los microorganismos. 2.4. Examen microscópico. Realizar el examen microscópico sobre preparación del poso de la muestra, que puede aparecer después de reposo en estufa o a temperatura ambiente.

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Si el vino se presenta turbio en el envase original, hacer una preparación directamente del vino o del poso obtenido por centrifugación de ese vino. Si no se presenta depósito y el vino está poco turbio, hacer una preparación del poso obtenido por centrifugación. Determinar en el examen microscópico si el depósito es microbiano, distinguiendo levaduras y bacterias.

X x = ————— X+Y+Z

Y y = ————— X+Y+Z

X = 0,42 T625 + 0,35 T550 + 0,21 T445 Y = 0,20 T625 + 0,63 T550 + 0,17 T495 Z = 0,24 T495 + 0,94 T445 Los valores triestimulares X, Y, Z, expresan las proporciones de colores rojos, verdes y azules que dan por mezcla el color del vino. Cuando el espesor b de la cubeta sea inferior a 1 cm, referir la transmitancia a 1 cm en la siguiente forma T = T’1/b y si la transmitancia viene expresada en porcentaje. T’ T = ————–— 1/b -1 100 ( ) T = transmitancia referida a 1 cm de espesor de cubeta. T’ = transmitancia obtenida para b cm de espesor de cubeta. b = espesor en cm de la cubeta utilizada. Como los espectrofotómetros están generalmente graduados tanto en transmitancia T como en absorbancia A, se puede también calcular la transmitancia en 1 cm de espesor del vino a partir de la absorbancia observada en el espesor b, si la medida se ha hecho en cubeta de espesor inferior a 1 cm, teniendo en cuenta que: 1 A = log ——— T Con este fin, se calculan las absorbancias A en un cm de espesor multiplicando respectivamente por 2,5 y 10 las absorbancias leídas en un espesor b de 0,5; 0,2 y 0,1 cm. Se obtienen después los valores correspondientes de transmitancia bien por aplicación de la relación anterior, bien refiriéndose a la tabla calculada a partir de esa misma relación. 3(a).4.2. Luminosidad relativa.- Es el valor de Y, expresado en porcentaje (siendo el negro y = 0 y el incoloro y = 100). 3(a).4.3. Cromaticidad.- Para expresar la cromaticidad (longitud de onda dominante y pureza) se recurre al diagrama de cromaticidad, que representa el “locus” de todos los colores del espectro, considerando que a 400 nm, corresponde el azul, a 520 nm corresponde el verde y a 700 nm el rojo. El punto 0 corresponde a la fuente luminosa utilizada, que, en este caso, es el iluminante estándar Q, que representa la luz
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3(a). COLOR 3.(a).1. Principio. El color de los vinos se determina por transparencia como se percibe por la vista, pero por un procedimiento independiente de la apreciación personal, valiéndose de métodos espectrofométricos triestimulares de ordenadas seleccionadas de Hardy, fundado en el sistema de la Commisión Internationale de l’Echairage (C.I.E.), con relación a la luz producida por un cielo nublado (fuente C). 3(a).2.1. Espectrofotómetro para medida en el espectro visible. Los valores de transmitancia correspondientes a una misma muestra, no deben acusar diferencias superiores a 0,005 y cuando la escala del aparato esté graduada en valores de transmitancia multiplicados por 100, no debe haber diferencias superiores a 0,5. Las cubetas de cuarzo o de vidrio de índice de refracción máximo 1,5, de paredes paralelas y espesor interno b que se expresa en centímetros y con una aproximación de ± 0,002.b. Conviene disponer de cuatro pares de cubetas en las que los espesores b, sean de 0,1 cm; 0,2 cm; 0,5 cm y 1 cm. Según la intensidad del color se escogerán un par de cubetas de tal forma que la absorbancia A quede comprendida entre 0,3-0,7 (transmitancia 0,5-0,2). 3(a).3. Procedimiento. Si el vino no está limpio centrifugar previamente. Eliminar el gas carbónico, si es necesario, por agitación con vacío parcial. Medir directamente con el espectrofotómetro las transmitancias del vino a las cuatro longitudes de onda = 625, 550, 495 y 445 mm, empleando la cubeta de espesor conveniente, según intensidad del color del vino. 3(a).4. Cálculo. Utilizar 131074 Agua PA-ACS como líquido de referencia. 3(a).4.1. Calcular las coordenadas (x, y) del punto representativo del color del vino en el diagrama tricromático de la C.I.E.

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de un día medianamente claro y cuyas coordenadas son: xo = 0,3101 e y o = 0,3163 esta longitud de onda prolongando la recta en la dirección de C hacia 0 para que ella corte el “Spectrum Locus” como hemos visto antes. Este color complementario en el caso de vinos de tono rojo púrpura se sitúa en el verde. Se anota el valor de esta longitud de onda seguida de c (complementario), por ejemplo 495 c. 3(a).4.5. Pureza. La pureza se calcula determinando la distancia relativa del punto C que representa el color del vino examinado y del punto S que corresponde al “Spectrum Locus” al punto 0 que representa al iluminante. Se expresa la pureza en porcentaje por la relación: Distancia del punto C al punto 0 100 x —————————————––——— Distancia del punto 0 al punto S

3(a).4.4. Longitud de onda dominante. Conocidas las coordenadas x e y del color, se une el punto de esas coordenadas C al punto 0. En el punto en el que esta recta corta al “Spectrum Locus” se encuentra la longitud de onda dominante que corresponde al matiz de este color. Así en el caso de vinos de tono teja, la longitud de onda dominante se sitúa entre 585 y 598 nm aproximadamente. Para los vinos de un color tinto franco, se sitúa entre 599 y 650 nm, mientras que para los vinos de tono rojo púrpura está caracterizada por la longitud de onda dominante del color complementario. Se obtiene el valor de

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Figura 3(a).I. Diagrama de cromaticidad de la C.I.E.

3(a).5. Observaciones. 3(a).5.1. El color de un vino queda completamente definido por la luminosidad relativa Y en porcentaje y las coordenadas tricromáticas x e y. Se pueden preveer las características cromáticas de una mezcla de varios vinos cuando se

conocen las características cromáticas de las mismas. Los valores triestimulares X, Y, Z de la mezcla se obtienen por la suma de esos valores multiplicando por su proporción para cada constituyente.

TABLA DE TRANSFORMACION DE ABSORBANCIAS EN TRANSMITANCIAS % trans 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 ,0 ,1 3,00 1,96 1,68 1,51 1,39 1,29 1,21 1,15 1,09 1,04 1,00 0,95 0,92 0,88 0,85 0,82 0,79 0,77 0,74 0,72 0,70 0,68 0,66 0,64 0,62 0,60 0,58 0,57 0,55 0,54 0,52 0,51 0,49 0,48 0,47 0,45 0,44 0,43 0,42 0,41 0,40 0,39 0,38 0,37 0,36 ,2 2,70 1,92 1,66 1,50 1,38 1,28 1,21 1,14 1,09 1,04 0,99 0,95 0,91 0,88 0,85 0,82 0,79 0,76 0,74 0,72 0,69 0,67 0,65 0,63 0,62 0,60 0,58 0,57 0,55 0,53 0,52 0,51 0,49 0,48 0,47 0,45 0,44 0,43 0,42 0,41 0,40 0,39 0,38 0,37 0,35 ,3 2,52 1,89 1,64 1,48 1,37 1,28 1,20 1,14 1,08 1,03 0,99 0,95 0,91 0,88 0,84 0,82 0,79 0,76 0,74 0,71 0,69 0,67 0,65 0,63 0,61 0,60 0,58 0,57 0,55 0,53 0,52 0,50 0,49 0,48 0,46 0,45 0,44 0,43 0,42 0,41 0,40 0,38 0,37 0,36 0,35 ,4 2,40 1,85 1,62 1,47 1,36 1,27 1,19 1,13 1,08 1,03 0,98 0,94 0,91 0,87 0,84 0,81 0,78 0,76 0,73 0,71 0,69 0,67 0,65 0,63 0,61 0,59 0,58 0,56 0,55 0,53 0,52 0,50 0,49 0,48 0,46 0,45 0,44 0,43 0,42 0,40 0,39 0,38 0,37 0,36 0,35 ,5 2,30 1,82 1,60 1,46 1,35 1,26 1,19 1,13 1,07 1,02 0,98 0,94 0,90 0,87 0,84 0,81 0,78 0,76 0,73 0,71 0,69 0,67 0,65 0,63 0,61 0,59 0,58 0,56 0,54 0,53 0,52 0,50 0,49 0,47 0,46 0,45 0,44 0,43 0,41 0,40 0,39 0,38 0,37 0,36 0,35 ,6 2,22 1,80 1,59 1,44 1,34 1,25 1,18 1,12 1,07 1,02 0,97 0,93 0,90 0,87 0,84 0,81 0,78 0,75 0,73 0,71 0,69 0,67 0,65 0,63 0,61 0,59 0,57 0,56 0,54 0,53 0,51 0,50 0,49 0,47 0,46 0,45 0,44 0,42 0,41 0,40 0,39 0,38 0,37 0,36 0,35 ,7 2,15 1,77 1,57 1,43 1,33 1,24 1,17 1,11 1,06 1,01 0,97 0,93 0,90 0,86 0,83 0,80 0,78 0,75 0,73 0,71 0,68 0,66 0,64 0,63 0,61 0,59 0,57 0,56 0,54 0,53 0,51 0,50 0,49 0,47 0,46 0,45 0,44 0,42 0,41 0,40 0,39 0,38 0,37 0,36 0,35 ,8 2,10 1,74 1,55 1,42 1,32 1,24 1,17 1,11 1,06 1,01 0,97 0,93 0,89 0,86 0,83 0,80 0,77 0,75 0,73 0,70 0,68 0,66 0,64 0,62 0,60 0,59 0,57 0,56 0,54 0,53 0,51 0,50 0,48 0,47 0,46 0,45 0,43 0,42 0,41 0,40 0,39 0,38 0,37 0,36 0,35 ,9 2,05 1,72 1,54 1,41 1,31 1,23 1,16 1,10 1,05 1.00 0,96 0,92 0,89 0,86 0,83 0,80 0,77 0,75 0,72 0,70 0,68 0,66 0,64 0,62 0,60 0,59 0,57 0,56 0,54 0,52 0,51 0,50 0,48 0,47 0,46 0,44 0,43 0,42 0,41 0,40 0,39 0,38 0,37 0,36 0,35

12

2,00 1,70 1,52 1,40 1,30 1,22 1,15 1,10 1,05 1,00 0,96 0,92 0,89 0,85 0,82 0,80 0,77 0,74 0,72 0,70 0,68 0,66 0,64 0,62 0,60 0,58 0,57 0,55 0,54 0,52 0,51 0,49 0,48 0,47 0,46 0,44 0,43 0,42 0,41 0,40 0,39 0,38 0,37 0,36

M
TABLA DE TRANSFORMACION DE ABSORBANCIAS EN TRANSMITANCIAS % trans 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 ,0 0,35 0,34 0,33 0,32 0,31 0,30 0,29 0,28 0,28 0,27 0,26 0,25 0,24 0,24 0,23 0,22 0,21 0,21 0,20 0,19 0,19 0,18 0,17 0,17 0,16 0,15 0,15 0,14 0,14 0,13 0,12 0,12 0,11 0,11 0,10 0,10 0,09 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,01 0,01 0,00 0,00 ,1 0,35 0,34 0,33 0,32 0,31 0,30 0,29 0,28 0,28 0,27 0,26 0,25 0,24 0,24 0,23 0,22 0,21 0,21 0,20 0,19 0,19 0,18 0,17 0,17 0,16 0,15 0,15 0,14 0,14 0,13 0,12 0,12 0,11 0,11 0,10 0,10 0,09 0,09 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,01 0,01 0,00 0,00 ,2 0,34 0,33 0,33 0,32 0,31 0,30 0,29 0,28 0,27 0,27 0,26 0,25 0,24 0,24 0,23 0,22 0,21 0,21 0,20 0,19 0,19 0,18 0,17 0,17 0,16 0,15 0,15 0,14 0,14 0,13 0,12 0,12 0,11 0,11 0,10 0,10 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,01 0,01 0,00 0,00 ,3 0,34 0,33 0,32 0,32 0,31 0,30 0,29 0,28 0,27 0,27 0,26 0,25 0,24 0,23 0,23 0,22 0,21 0,21 0,20 0,19 0,19 0,18 0,17 0,17 0,16 0,15 0,15 0,14 0,13 0,13 0,12 0,12 0,11 0,11 0,10 0,10 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,03 0,03 0,03 0,02 0,02 0,01 0,01 0,00 0,00 ,4 0,34 0,33 0,32 0,32 0,31 0,30 0,29 0,28 0,27 0,26 0,26 0,25 0,24 0,23 0,23 0,22 0,21 0,20 0,20 0,19 0,18 0,18 0,17 0,16 0,16 0,15 0,15 0,14 0,13 0,13 0,12 0,12 0,11 0,11 0,10 0,09 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,02 0,01 0,01 0,00 0,00 ,5 0,34 0,33 0,32 0,31 0,31 0,30 0,29 0,28 0,27 0,26 0,25 0,25 0,24 0,23 0,23 0,22 0,21 0,20 0,20 0,19 0,18 0,18 0,17 0,16 0,16 0,15 0,15 0,14 0,13 0,13 0,12 0,12 0,11 0,10 0,10 0,09 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,02 0,01 0,01 0,00 0,00 ,6 0,34 0,33 0,32 0,31 0,30 0,29 0,29 0,28 0,27 0,26 0,25 0,25 0,24 0,23 0,22 0,22 0,21 0,20 0,20 0,19 0,18 0,18 0,17 0,16 0,16 0,15 0,14 0,14 0,13 0,13 0,12 0,12 0,11 0,10 0,10 0,09 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,01 0,01 0,01 0,00 0,00 ,7 0,34 0,33 0,32 0,31 0,30 0,29 0,29 0,28 0,27 0,26 0,25 0,25 0,24 0,23 0,22 0,22 0,21 0,20 0,20 0,19 0,18 0,18 0,17 0,16 0,16 0,15 0,14 0,14 0,13 0,13 0,12 0,11 0,11 0,10 0,10 0,09 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,01 0,01 0,01 0,00 0,00 ,8 0,34 0,33 0,32 0,31 0,30 0,29 0,29 0,28 0,27 0,26 0,25 0,25 0,24 0,23 0,22 0,22 0,21 0,20 0,19 0,19 0,18 0,17 0,17 0,16 0,16 0,15 0,14 0,14 0,13 0,13 0,12 0,11 0,11 0,10 0,10 0,09 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,01 0,01 0,01 0,00 0,00 ,9 0,34 0,33 0,32 0,31 0,30 0,29 0,28 0,28 0,27 0,26 0,25 0,24 0,24 0,23 0,22 0,22 0,21 0,20 0,19 0,19 0,18 0,17 0,17 0,16 0,16 0,15 0,14 0,14 0,13 0,13 0,12 0,11 0,11 0,10 0,10 0,09 0,09 0,08 0,08 0,07 0,07 0,06 0,06 0,05 0,05 0,04 0.04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,01 0,01 0,00 0,00 0,00

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3(b). COLOR DE LOS VINOS (Aplicable a vinos tintos y rosados) 3(b).1. Principio. La intensidad de color se mide por la suma de las absorbancias del vino para un espesor de 1 cm correspondientes a las longitudes de onda de absorbancia mínima (420 nm) del vino tinto. La tonalidad se expresa por el ángulo que forma con el eje de longitudes de onda la cuerda que une los puntos de la curva espectrofotométrica representativos de las absorbancias correspondientes a las longitudes de onda de 420 y 520 nm. 3(b).2. Material y aparatos. Como en 3(a).2. 3(b).3. Procedimiento. Como en 3(a).3, excepto que las longitudes de onda utilizadas serán de 420 nm y 520 nm. 3(b).4. Cálculo. Calcular la intensidad colorante y la tonalidad. 3(b).4.1. Intensidad colorante: 1 I = (A420 + A520) ––––– b A420 = absorbancia a 420 nm. A520 = absorbancia a 520 nm. b = espesor en cm de la cubeta. 3(b).4.2. Tonalidad.- La tonalidad se mide por el ángulo cuya tangente es igual a la diferencia del valor numérico de las dos absorbancias A 520-A420. Conocido este valor, se puede determinar el valor del ángulo por tablas expresadas en grados sexagesimales. 3(b).5. Observaciones. Con este método no se determina el color, sino la intensidad y la tonalidad del color, que son características cromáticas convencionales. Por su rapidez y sencillez, es muy práctico para comprobar la evolución de la materia colorante durante su “crianza” o añejamiento. 3(b).6. Referencias. 3(b).6.1. Determinación triestimular del color de los vinos, método simplificado por C.Stella. Comunicación al O.I.V. núm. 282 (2 febrero 1968). 3(b).6.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. AO, 1-14. 1969.

4(a). MASA VOLUMICA Y DENSIDAD RELATIVA (Método picnométrico) 4(a).1. Principio. La masa volúmica es el cociente de la masa de un cierto volumen de vino o de mosto por este volumen, Se expresa en g por ml y su símbolo es r20. La densidad relativa es el cociente de la masa volúmica del vino por la masa volúmica del agua. Su símbolo es d ó simplemente d, cuando no haya posibilidad de confusión. La masa volúmica y la densidad relativa de un vino se determinan a 20°C. El método picnométrico consiste en la determinación ponderal del contenido en alcohol de un destilado por medio de un picnómetro. 4(a).2. Material y aparatos. 4(a).2.1. Picnómetro de vidrio de 50 ml de capacidad, de cuello con diámetro interior de 3,5 mm. Embudo y sifón para picnómetros. 4(a).2.2. Termómetro contrastado dividido en 1/5-1/10 de grado Celsius graduado de 10 a 30 C. 4(a).2.3. Termostato regulado a 20 C ± 0,2 . 4(a).2.4. Balanza con aproximación de 0,1 mg.
20

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4(a).3. Procedimiento. Lavar bien el picnómetro y enjuagarlo después con 131085 Etanol 96% v/v PA y luego con Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PAACS-ISO, escurrir bien y secar cuidadosamente con paño de hilo o papel filtro el exterior, y con corriente de aire seco el interior, tapar, dejar en reposo en la caja de la balanza durante 30 minutos aproximadamente, y pesar. Llenar después con agua a 20 recién destilada, con cuidado de evitar burbujas de aire en el interior del picnómetro. Sumergir en el agua a la temperatura comprobada de 20 . Mantener el picnómetro en el termostato durante 30 minutos, y enrasar el nivel del agua con la marca del cuello. Tapar el picnómetro, secar exteriormente con las precauciones expuestas, dejar nuevamente 30 minutos en la caja de la balanza y después pesar. Vaciar el picnómetro, enjuagar nuevamente, primero con agua y después con Etanol 96% v/v PA y Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO, y secar como anteriormente, llenar con el vino a temperatura de 20 C, aproximadamente, cuidando que no quede ninguna burbuja de aire (en caso de que el vino tenga gas carbónico, se eliminará previamente como luego se indica). Dejar el picnómetro con el vino en el termostato a 20 C ± 0,2 durante 30 minutos, llenar hasta volumen con el vino y pesar.

M
4(a).4. Cálculo. 4(a).4.1. Cálculo de la densidad relativa a 20 C. d20 20 P” - P = –––––––– P’ - P un volumen de unos 250 ml del vino, en matraz de 1.000 ml. Si el vino está turbio, se filtrará por papel de filtración rápida, de pliegues y procurando airear lo menos posible, tapando también el embudo con vidrio de reloj. Si el enturbiamiento es por suspensión de levadura, la filtración corriente aludida no lo aclarará, siendo conveniente en este caso, dejar decantar el vino en probeta tapada, durante dos o tres días en sitio fresco. 4(a).6. Referencia. 4(a).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V., A1, 11-26. 1969. 4(b). MASA VOLUMICA Y DENSIDAD RELATIVA (Método areométrico) 4(b).1. Principio. Determinación de la masa volúmica a partir de la lectura del areómetro que flota introducido en el vino. 4(b).2. Material y aparatos. 4(b).2.1. Areómetro. Los areómetros empleados deben responder a las siguientes normas (I.S.O.): Parte cilíndrica sumergible y tallo de sección circular de 3 mm de diámetro como mínimo. Para

P = peso en g del picnómetro vacío. P’ = peso en g del picnómetro más agua a 20 C. P” = peso en g del picnómetro más vino a 20 C. 4(a).4.2. Cálculo de la masa volúmica r20. r20 = 0,998203 d20 20 o bien r20 = d20 20 c - –––––––– 1.000

El valor de c se encuentra en las tablas 4(a).I y 4(a).II. La aproximación de los resultados será de 0,0003. Para mayor precisión, se tendrá en cuenta el empuje del aire como en 5(a).5. 4(a).5. Observaciones. Si el vino contiene cantidad sensible de gas carbónico, se eliminará todo lo posible agitando

TABLA 4(a). I Cálculo de la masa volúmica (r20) a partir de la densidad relativa 20/20 y recíprocamente Densidades Correcciones c Densidades Correcciones c Densidades Correcciones c 0,960 1,73 1,120 2,02 0,980 1,76 1,140 2,05 1,280 2,30 1,000 1,80 1,160 2,09 1,300 2,34 1,020 1,84 1,180 2,12 1,320 2,38 1,040 1,87 1,200 2,16 1,340 2,41 1,060 1,91 1,220 2,20 1,360 2,45 1,080 1,94 1,240 2,23 1,380 2,48 1,100 1,98 1,260 2,27 1,400 2,52

TABLA 4(a). II Cálculo de la masa volúmica (r15) a partir de la densidad relativa 15/15 y recíprocamente Densidades Correcciones c Densidades Correcciones c Densidades Correcciones c 0,960 0,86 1,120 1,01 0,980 0,88 1,140 1,03 1,280 1,15 1,000 0,90 1,160 1,04 1,300 1,17 1,020 0,92 1,180 1,06 1,320 1,19 1,040 0,94 1,200 1,08 1,340 1,21 1,060 0,95 1,220 1,10 1,360 1,22 1,080 0,97 1,240 1,12 1,380 1,24 1,100 0,99 1,260 1,13 1,400 1,25

15

vinos secos, la graduación será de 0,983 a 1,003 en milésimas y 0,2 milésimas. Las divisiones de milésimas deben ser de 5 mm como mínimo. Para vinos desalcoholizados y vinos dulces, y eventualmente para mostos, se recomienda un juego de 5 areómetros graduados de 1,000-1,030; 1,0301,060; 1,060-1,090; 1,090-1,120; 1,120-1,150. Estos aparatos estarán graduados en masas volúmicas a 20 C, en milésimas y 0,5 milésimas por lo menos. Cada división de una milésima será de 3mm como mínimo. En los aparatos se indicará que las lecturas deben hacerse por la parte superior del menisco. 4(b).2.2. Termómetro contrastado, graduado por lo menos en 1/2 grados. 4(b).2.3. Probeta cilíndrica de 36 mm de diámetro interior y 320 mm de altura. 4(b).2.4. Plataforma con tornillos de nivelación, para mantener vertical la probeta sobre ella colocada. 4(b).3. Procedimiento. Colocar en la probeta descrita 250 ml del vino e introducir el areómetro y el termómetro. El areómetro y especialmente el tallo graduado deberán estar limpios y desengrasados. Agitar para uniformar la temperatura. Un minuto después, hacer la lectura del termómetro. Retirar el termómetro y hacer la lectura de la masa aparente sobre el tallo del areómetro, después de un minuto de reposo. 4(b).4. Cálculo. Calcular la masa volúmica referida a 20 C. c (_ si t es inferior a 20 C) r20 = rt ± –––––– 1.000 (+ si t es superior a 20 C) r20= masa volúmica referida a 20 .

r = lectura del tallo graduado del areómetro. c = valor de la corrección correspondiente a la temperatura del vino en el momento de la lectura. Este valor se encuentra en las tablas 4(b). I y 4(b). II. t = temperatura del vino en el momento de la lectura. Los resultados se obtendrán con una precisión de 0,0003.
t

4(b).5. Observaciones. Si se utilizan areómetros que den d15 o d20 , 4 20 hay que corregir la lectura en las tablas correspondientes, y después expresar los resultados en d 20 o r 20, empleando las fórmulas y tablas si20 guientes: C d20 = d15 + –––––– ;valores de C en la tabla 4(b). III. 20 4 1.000 C d20 = d15 + –––––– ;valores de C en la tabla 4(b). IV. 20 15 1.000 C r20 = d15 + ––––– ;valores de C en la tabla 4(b). V. 20 4 1.000 C r20 = d15 + ––––– ;valores de C en la tabla 4(b). VI. 20 15 1.000 4(b).6. Referencias. 4(b).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. A1, 11-26. 4(b).6.2. P. Jaulmes, S. Brun: “Tables de correspondance entre les diverses tables Alcoométriques”. Société Pharmacie Montpellier, 26: 2, 111-141, 1966.

TABLA 4(b). I Correcciones para referir la masa volúmica de los vinos secos a 20
Temperaturas 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º GRADOS ALCOHOLICOS 0 1,45 1,35 1,24 1,12 0,99 0,86 0,71 0,55 5 1,51 1,40 1,28 1,16 1,03 0,89 0,73 0,57 6 1,55 1,43 1,31 1,18 1,05 0,90 0,74 0,57 7 1,58 1,47 1,34 1,21 1,07 0,92 0,76 0,59 8 1,64 1,52 1,39 1,25 1,11 0,95 0,78 0,60 9 1,70 1,58 1,44 1,30 1,14 0,98 0,81 0,62 10 1,78 1,65 1,50 1,35 1,19 1,02 0,84 0,65 11 1,88 1,73 1,58 1,42 1,24 1,07 0,87 0,67 12 1,98 1,83 1,66 1,49 1,31 1,12 0,91 0,70 13 2,09 1,93 1,75 1,56 1,37 1,17 0,93 0,74 14 2,21 2,03 1,84 1,64 1,44 1,23 0,99 0,77 15 2,34 2,15 1,94 1,73 1,52 1,29 1,05 0,81

16

M
TABLA 4(b). I Correcciones para referir la masa volúmica de los vinos secos a 20
Temperaturas 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 0,21 0,43 0,67 0,91 1.16 1,42 1,69 1,97 2,26 2,56 0,22 0,45 0,69 0,93 1,19 1,46 1,74 2,03 2,33 2,64 0,22 0,45 0,70 0,95 1,21 1,49 1,77 2,06 2,37 2,67 0,23 0,46 0,71 0,97 1,23 1,51 1,80 2,09 2,40 2,72 0,23 0,47 0,72 0,99 1,26 1,54 1,83 2,14 2,45 2,77 0,24 0,49 0,74 1,01 1,29 1,58 1,88 2,19 2,50 2,83 0,25 0,50 0,77 1,04 1,33 1,62 1,93 2,24 2,57 2,90 0,25 0,52 0,79 1,07 1,37 1,67 1,98 2,31 2,64 2,98 0,26 0,54 0,82 1,11 1,42 1,73 2,05 2,38 2,73 3,08 0,27 0,56 0,85 1,15 1,47 1,79 2,12 2,46 2,82 3,18 0,29 0,58 0,88 1,20 1,52 1,85 2,20 2,55 2,91 3,28 0,29 0,60 0,91 1,24 1,57 1,92 2,27 2,63 2,99 3,38 GRADOS ALCOHOLICOS 0 0,38 0,19 5 0,39 0,20 6 0,39 0,20 7 0,40 0,21 8 0,41 0,21 9 0,43 0,22 10 0,44 0,23 11 0,46 0,24 12 0,48 0,25 13 0,50 0,26 14 0,52 0,27 15 0,55 0,28

Temperaturas 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º

GRADOS ALCOHOLICOS 16 2,47 2,26 2,04 1,82 1,59 1,35 1,10 0,84 0,57 0,29 17 2,60 2,38 2,15 1,91 1,67 1,42 1,15 0,88 0,60 0,30 18 2,75 2,51 2,26 2,01 1,75 1,49 1,21 0,92 0,62 0,32 19 2,90 2,65 2,38 2,11 1,84 1,56 1,27 0,96 0,65 0,33 20 3,06 2,78 2,51 2,22 1,93 1,63 1,33 1,01 0,68 0,35 21 3,22 2,93 2,63 2,33 2,03 1,71 1,39 1,05 0,71 0,36 22 3,39 3,08 2,77 2,45 2,13 1,80 1,45 1,11 0,74 0,38 23 3,57 3,24 2,91 2,57 2,23 1,88 1,52 1,15 0,78 0,39 24 3,75 3,40 3,05 2,69 2,33 1,96 1,59 1,20 0,81 0,41 25 3,93 3,57 3,19 2,81 2,44 2,05 1,66 1,26 0,85 0,43 26 4,12 3,73 3,34 2,95 2,55 2,14 1,73 1,31 0,88 0,44 27 4,31 3,90 3,49 3,07 2,66 2,23 1,80 1,36 0,91 0,46

0,31 0,63 0,95 1,29 1,63 1,99 2,35 2,73 3,11 3,40

0,32 0,65 0,99 1,34 1,70 2,07 2,44 2,83 3,22 3,62

0,34 0,68 1,03 1,39 1,76 2,14 2,53 2,93 3,34 3,75

0,35 0,71 1,07 1,45 1,83 2,22 2,63 3,03 3,45 3,88

0,36 0,73 1,12 1,50 1,90 2,31 2,72 3,14 3,58 4,02

0,38 0,77 1,16 1,56 1,97 2,40 2,82 3,26 3,70 4,16

0,39 0,80 1,21 1,62 2,05 2,49 2,93 3,38 3,84 4,30

0,41 0,83 1,25 1,69 2,13 2,58 3,04 3,50 3,97 4,46

0,43 0,86 1,30 1,76 2,21 2,67 3,14 3,62 4,11 4,61

0,44 0,89 1,35 1,82 2,29 2,77 3,25 3,75 4,25 4,76

0,46 0,93 1,40 1,88 2,37 2,86 3,37 3,85 4,39 4,92

0,48 0,96 1,45 1,95 2,45 2,96 3,48 4,00 4,54 5,07

17

TABLA 4(b). II Correcciones para referir la masa volúmica de los vinos dulces a 20
Temperaturas 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 0,29 0,57 0,89 1,22 1,61 1,87 2,21 2,56 2,93 3,31 0,32 0,64 0,98 1,34 1,68 2,05 2,42 2,80 3,19 3,57 0,35 0,70 1,08 1,44 1,83 2,22 2,60 3,02 3,43 3,86 0,39 0,76 1,17 1,56 1,98 2,40 2,80 3,25 3,66 4,15 0,42 0,82 1,26 1,68 2,12 2,56 3,00 3,47 3,91 4,41 0,45 0,88 1,34 1,79 2,26 2,71 3,18 3,67 4,14 4,66 0,47 0,93 1,43 1,90 2,40 2,87 3,35 3,89 4,37 4,92 MASAS VOLUMICAS VINOS DE 13 1,000 2,24 2,06 1,87 1,69 1,49 1,25 1,03 0,80 0,54 0,29 1,020 2,58 2,37 2,14 1,93 1,70 1,42 1,17 0,90 0,61 0,33 1,040 2,93 2,69 2,42 2,14 1,90 1,59 1,30 1,00 0,68 0,36 1,060 3,27 2,97 2,67 2,37 2,09 1,75 1,43 1,09 0,75 0,39 1,080 3,59 3,26 2,94 2,59 2,27 1,90 1,55 1,17 0,81 0,42 1,100 3,89 3,53 3,17 2,80 2,44 2,05 1,67 1,27 0,86 0,45 1,120 4,18 3,78 3,40 3,00 2,61 2,19 1,78 1,36 0,92 0,48

TABLA 4(b). II Correcciones para referir la masa volúmica de los vinos dulces a 20
Temperaturas 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 0,32 0,63 0,97 1,32 1,66 2,02 2,39 2,75 3,16 3,55 0,35 0,69 1,06 1,44 1,81 2,20 2,59 2,89 3,41 3,81 0,38 0,75 1,16 1.54 1,96 2,37 2,78 3,22 3,65 4,10 0,42 0,81 1,25 1,66 2,11 2,54 2,98 3,44 3,89 4,38 0,45 0,87 1,34 1,78 2,25 2,70 3,17 3,66 4,13 4,66 0,48 0,93 1,42 1,89 2,39 2,85 3,35 3,86 4,36 4,90 0,50 0,98 1,51 2,00 2,52 3,01 3,52 4,07 4,59 5,16 MASAS VOLUMICAS VINOS DE 15 1,000 2,51 2,31 2,09 1,88 1,67 1,39 1,06 0,87 0,60 0,32 1,020 2,85 2,61 2,36 2,12 1,86 1,56 1,27 0,98 0,66 0,36 1,040 3,20 2,93 2,64 2,34 2,06 1,72 1,40 1,08 0,73 0,39 1,060 3,54 3,21 2,90 2,56 2,25 1,88 1,53 1,17 0,80 0,42 1,080 3,86 3,51 3,16 2,78 2,45 2,03 1,65 1,26 0,86 0,45 1,100 4,02 3,64 3,27 2,88 2,51 2,11 1,77 1,35 0,91 0,48 1,120 4,46 4,02 3,61 3,19 2,77 2,32 1,88 1,44 0,97 0,51

18

M
TABLA 4(b). II Correcciones para referir la masa volúmica de los vinos dulces a 20
Temperaturas 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 0,34 0,68 1,06 1,43 1,80 2,18 2,58 2,97 3,40 3,82 0,38 0,75 1,15 1,55 1,94 2,36 2,78 3,21 3,66 4,08 0,41 0,81 1,25 1,65 2,09 2,53 2,97 3,44 3,89 4,37 0,44 0,87 1,34 1,77 2,24 2,71 3,17 3,66 4,13 4,65 0,47 0,93 1,42 1,89 2,39 2,86 3,36 3,88 4,38 4,93 0,50 0,99 1,51 2,00 2,52 3,02 3,54 4,09 4,61 5,17 0,53 1,04 1,59 2,11 2,66 3,17 3,71 4,30 4,82 5,42 MASAS VOLUMICAS VINOS DE 17 1,000 2,81 2,57 2,32 2,09 1,83 1,54 1,25 0,96 0,66 0,35 1,020 3,15 2,89 2,60 2,33 2,03 1,71 1,39 1,06 0,72 0,38 1,040 3,50 3,20 2,87 2,55 2,23 1,87 1,52 1,16 0,79 0,41 1,060 3,84 3,49 3,13 2,77 2,42 2,03 1,65 1,26 0,86 0,45 1,080 4,15 3,77 3,39 2,98 2,61 2,18 1,77 1,35 0,92 0,48 1,100 4,45 4,03 3,63 3,19 2,77 2,32 1,89 1,44 0,97 0,51 1,120 4,74 4,28 3,84 3,39 2,94 2,47 2,00 1,52 1,03 0,53

TABLA 4(b). II Correcciones para referir la masa volúmica de los vinos dulces a 20
Temperaturas 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 0,37 0,75 1,15 1,55 1,95 2,36 2,79 3,20 3,66 4,11 0,41 0,81 1,30 1,67 2,09 2,54 2,99 3,44 3,92 4,37 0,44 0,87 1,34 1,77 2,24 2,71 3,18 3,66 4,15 4,66 0,47 0,93 1,43 1,89 2,39 2,89 3,38 3,89 4,40 4,94 0,50 0,99 1,51 2,00 2,53 3,04 3,57 4,11 4,64 5,22 0,53 1,04 1,60 2,11 2,67 3,20 3,75 4,32 4,87 5,46 0,56 1,10 1,68 2,23 2,71 3,35 3,92 4,53 5,08 5,71 MASAS VOLUMICAS VINOS DE 19 1,000 3,14 2,87 2,58 2,31 2,03 1,69 1,38 1,06 0,73 0,38 1,020 3,48 3,18 2,86 2,55 2,23 1,86 1,52 1,16 0,79 0,41 1,040 3,83 3,49 3,13 2,77 2,43 2,02 1,65 1,26 0,85 0,44 1,060 4,17 3,78 3,39 2,99 2,61 2,18 1,78 1,35 0,92 0,48 1,080 4,48 4,06 3,65 3,20 2,80 2,33 1,90 1,44 0,98 0,51 1,100 4,78 4,32 3,88 3,41 2,96 2,48 2,02 1,53 1,03 0,52 1,120 5,07 4,57 4,10 3,61 3,13 2,62 2,13 1,62 1,09 0,56

19

TABLA 4(b). II Correcciones para referir la masa volúmica de los vinos dulces a 20
Temperaturas 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 0,41 0,81 1,25 1,68 2,11 2,55 3,01 3,46 3,95 4,42 0,44 0,88 1,34 1,80 2,25 2,73 3,20 3,69 4,20 4,68 0,47 0,94 1,44 1,90 2,40 2,90 3,40 3,93 4,43 4,97 0,51 1,00 1,53 2,02 2,55 3,07 3,59 4,15 4,68 5,25 0,54 1,06 1,61 2,13 2,69 3,22 3,78 4,36 4,92 5,53 0,57 1,10 1,70 2,25 2,83 3,38 3,96 4,58 5,15 5,77 0,59 1,17 1,78 2,36 2,97 3,54 4,13 4,77 5,36 6,02 MASAS VOLUMICAS VINOS DE 21 1,000 3,50 3,18 2,86 2,56 2,23 1,86 1,51 1,15 0,79 0,41 1,020 3,84 3,49 3,13 2,79 2,43 2,03 1,65 1,25 0,85 0,44 1,040 4,19 3,80 3,41 3,01 2,63 2,19 1,78 1,35 0,92 0,47 1,060 4,52 4,09 3,67 3,23 2,81 2,35 1,91 1,45 0,98 0,51 1,080 4,83 4,34 3,92 3,44 3,00 2,50 2,03 1,54 1,05 0,54 1,100 5,12 4,63 4,15 3,65 3,16 2,65 2,15 1,63 1,10 0,57 1,120 5,41 4,88 4,37 3,85 3,33 2,80 2,26 1,71 1,15 0,59

TABLA 4(b). III Cálculo de la densidad 20/20 a partir de la densidad 15/4 Vinos secos (d15 comprendida entre 0,97 y 1,03) 4 Grados alcohólicos Correcciones c Grados alcohólicos Correcciones c Grados alcohólicos Correcciones c 5,1 0,9 12,1 0,6 19,1 0,2 6,1 0,8 13,1 0,6 20,1 0,1 7,1 0,8 14,1 0,5 21,1 0,0 8,1 0,8 15,1 0,5 22,1 0,0 9,1 0,7 16,1 0,4 23,1 -0,1 10,1 0,7 17,1 0,3 24,1 -0,2 11,1 0,7 18,1 0,3 25,1 -0,3

Vinos dulces Densidades 1,000 1,020 0,5 0,4 0,2 0,1 -0,1 -0,2 1,040 0,3 0,2 0,0 -0,1 -0,3 -0,4 1,060 0,1 0,0 -0,2 -0,3 -0,5 -0,6 1,080 0,0 -0,1 -0,3 -0,4 -0,6 -0,7 1,100 -0,2 -0,3 -0,5 -0,6 -0,8 -0,9 1,120 -0,3 -0,4 -0,6 -0,7 -0,9 -1,0

20
Grados Alcohólicos

{

10 13 15 17 19 21

0,7 0,6 0,5 0,4 0,2 0,0

M
TABLA 4(b). IV Cálculo de la densidad 20/20 a partir de la densidad 15/15 Vinos secos Grados alcohólicos Correcciones c Grados alcohólicos Correcciones c Grados alcohólicos Correcciones c 5,1 0,1 12,1 0,3 19,1 0,9 6,1 0,1 13,1 0,4 20,1 0,9 7,1 0,1 14,1 0,4 21,1 1,0 8,1 0,2 15,1 0,5 22,1 1,0 9,1 0,2 16,1 0,6 23,1 1,1 10,1 0,2 17,1 0,6 24,1 1,2 11,1 0,3 18,1 0,7 25,1 1,2

Vinos dulces Densidades 1,000 1,020 0,4 0,5 0,7 0,8 1,0 1,1 1,040 0,5 0,6 0,8 0,9 1,1 1,2 1,060 0,7 0,8 1,0 1,1 1,3 1,4 1,080 0,8 0,9 1,1 1,2 1,4 1,5 1,100 1,0 1,1 1,3 1,4 1,6 1,7 1,120 1,1 1,2 1,4 1,5 1,7 1,8

Grados Alcohólicos

{

10 13 15 17 19 21

0,2 0,3 0,5 0,6 0,8 1,0

TABLA 4(b). V Cálculo de la masa volúmica a 20 C ( r20 ) a partir de la densidad 15/4 Vinos secos Grados alcohólicos Correcciones c Grados alcohólicos Correcciones c Grados alcohólicos Correcciones c 5,1 0,9 12,1 1,2 19,1 1,6 6,1 1,0 13,1 1,2 20,1 1,7 7,1 1,0 14,1 1,3 21,1 1,8 8,1 1,0 15,1 1,3 22,1 1,8 9,1 1,1 16,1 1,4 23,1 1,9 10,1 1,1 17,1 1,5 24,1 2,0 11,1 1,1 18,1 1,5 25,1 2,1

Vinos dulces Densidades 1,000 1,020 1,3 1,4 1,6 1,7 1,9 2,0 1,040 1,5 1,6 1,8 1,9 2,1 2,2 1,060 1,7 1,8 2,0 2,1 2,3 2,4 1,080 1,8 1,9 2,1 2,2 2,4 2,5 1,100 2,0 2,1 2,3 2,4 2,6 2,7 1,120 2,1 2,2 2,4 2,5 2,7 2,8

Grados Alcohólicos

{

10 13 15 17 19 21

1,1 1,2 1,3 1,4 1,6 1,8

21

TABLA 4(b). VI Cálculo de la masa volúmica a 20 C ( r20 ) a partir de la densidad 15/15 Vinos secos (d 15 comprendida entre 0,97 y 1,03) Grados alcohólicos Correcciones c Grados alcohólicos Correcciones c Grados alcohólicos Correcciones c 5,11 1,81 12,11 2,11 19,11 2,65 6,1 1,9 13,1 2,1 20,1 2,6 7,1 1,9 14,1 2,2 21,1 2,7 8,1 1,9 15,1 2,2 22,1 2,7 9,1 2,0 16,1 2,3 23,1 2,8 10,1 2,0 17,1 2,4 24,1 2,9 11,1 2,0 18,1 2,4 25,1 3,0
15

Vinos dulces Densidades 1,000 1,020 2,2 2,3 2,5 2,6 2,8 2,9 1,040 2,4 2,5 2,7 2,8 3,0 3,1 1,060 2,6 2,7 2,9 3,0 3,2 3,3 1,080 2,7 2,8 3,0 3,1 3,3 3,4 1,100 2,9 3,1 3,3 3,4 3,6 3,7 1,120 3,1 3,2 3,4 3,5 3,7 3,8

Grados Alcohólicos

{

10 13 15 17 19 21

2,0 2,1 2,2 2,3 2,5 2,7

5(a). TITULO ALCOHOMETRICO (1) (Método picnométrico) 5(a).1. Principio. El título alcohométrico es igual al número de litros de etanol contenidos en 100 l de vino, medidos ambos volúmenes a 20 C, y se expresa en grados alcohólicos volumétricos, con una precisión de 0,1 C. Se determina por destilación simple de líquido alcalinizado y medida de la densidad del destilado por picnometría. 5(a).2. Material y aparatos. 5(a).2.1. Aparato de destilación.- Consta de las siguientes partes: 5(a).2.1.1. Matraz de destilación de 1.000 ml con rodaje esmerilado. 5(a).2.1.2. Columna rectificadora de 20 cm de largo. 5(a).2.1.3. Disco metálico o de amianto con un orificio de 8 cm de diámetro. 5(a).2.1.4. Refrigerante de West de 40 cm de longitud, con circulación rápida de agua y dispuesto verticalmente.

5(a).2.2. Picnómetro.- Como en 4(a).2.1, de vidrio pyrex. 5(a).2.3. Tara del picnómetro.- Recipiente de vidrio del mismo volumen exterior que el picnómetro. Se llena casi por completo con una solución de sodio cloruro, de densidad tal que la masa de esta tara sea igual a la masa del picnómetro lleno de un líquido de densidad 1,01. Este recipiente cierra a la llama. Su capacidad exterior debe ser igual a la del picnómetro lleno, con una aproximación de 1 ml de diferencia. 5(a).2.4. Termostato y accesorios, descritos en 4(a).2. 5(a).2.5. Balanza analítica de 0,1 mg y 100 g de carga. 5(a).3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 211234 Calcio Oxido natural, escoriforme QP 131325 Fenolftaleína PA-ACS 211835 Piedra Pómez gránulos QP 5(a).3.1. Lechada de cal. Solución de 120 g de Calcio Oxido natural escoriforme QP en 1.000 ml de Agua PA-ACS.

22

(1).- Denominación adoptada para el grado alcohólico por la Oficina Internacional del Vino (O.I.V.).

M
5(a).4. Procedimiento. Para vinos jóvenes o espumosos, eliminar previamente el gas carbónico. Agitar 250 ml de vino en un matraz de 500 ml previamente siliconado el interior del matraz por tres gotas de solución al 1%, de silicona soluble en agua, y después de bien seco, añadir el vino. 5(a).4.1. Destilación.- Medir 250 ml de vino en un matraz aforado con cuello de 12 mm de diámetro interior como máximo, y anotar la temperatura. Introducir el vino en un matraz de destilación que contenga una docena de fragmentos de materia porosa Piedra Pómez gránulos QP. Lavar el matraz cuatro veces con 5 ml de Agua PA-ACS. Añadir 10 ml de la Lechada de cal. La materia colorante del vino debe virar a la alcalinidad. En el caso de vinos muy ácidos, puede comprobarse por toques externos el viraje de la Fenolftaleína PA-ACS. Recoger el destilado en el mismo matraz de 250 ml, conteniendo unos 10 ml de Agua PA-ACS, en la que debe sumergirse el pico del tubo afilado, prolongación del refrigerante. Destilar por lo menos 200 ml. Después agitar y llenar hasta volumen con Agua PA-ACS, a la misma temperatura que se midió el vino inicialmente. 5(a).4.2. Tarado del picnómetro vacío.- Poner en un platillo de la balanza la tara y en el otro el picnómetro vacío, limpio y seco, y a su lado, las masas necesarias p, para entre ambos equlibrar la balanza. La masa equivalente a la de la tara será: Masa del picnómetro + m + p m = 0,0012 V. m = masa en g del aire contenido en el picnómetro vacío. V = volumen en ml del picnómetro. 0,0012 g/ml = masa volúmica del aire. El volumen del picnómetro se considera, con suficiente aproximación, que es numéricamente igual a la masa de Agua PA-ACS que llene el picnómetro. Para calcular esta masa, colocar el picnómetro lleno de Agua PA-ACS en el platillo de la balanza, si p’ es la masa que hay que colocar a su lado para equilibrar la de la tara, la masa m será: m = (p - p’) . 0,0012 Operar siempre a 20 exactamente para realizar el enrase, utilizando el termostato. Si se opera a t , para conocer el volumen del picnómetro a 20 , hay que multiplicar (p - p’) por un factor F, que da la tabla 5 (a). I para picnómetro del vidrio pyrex. Repetir estas operaciones de tara tres veces seguidas. Al cabo de un año, volver a comprobar la tara del picnómetro. Con balanza monoplato, proceder análogamente. Primero poner la tara, hacer la lectura correspondiente en la escala de pesos y después poner el picnómetro vacío. Anotar los pesos p que hay que añadir hasta marcar la pesada que alcanzó la tara. Tara = picnómetro + aire + p 5(a).4.3. Determinación picnométrica.- Llenar el picnómetro lavado y seco con las precauciones expuestas en 4(a). 3 con el destilado alcohólico a la temperatura ambiente, llevar después al termostato, agitar el líquido haciendo girar el picnómetro por dos o tres veces, hasta que la temperatura que marca el termómetro del picnómetro sea constante. Enrasar con el borde superior del tubo lateral, secar éste, colocarlo sobre el tapón receptor (para pequeños rebordes) y anotar la temperatura tº utilizando una lupa. Secar con el mismo cuidado el exterior del picnómetro y llevarlo al platillo de la balanza. Equilibrar la tara del picnómetro colocada en el otro platillo. 5(a).5. Cálculo. Calcular el título alcohométrico expresado en grados alcohólicos volumétricos. 5(a).5.1. Cálculo de la masa volúmica aparente. p + m - p’ r t = —————————————— volumen del picnómetro a 20º r t = masa volúmica aparente. m = masa del aire contenido en el picnómetro vacío. p = diferencia de masa entre la tara y el picnómetro lleno con destilado alcohólico. 5(a).5.2. Cálculo de grado alcohométrico. Calcular el grado alcohólico internacional O.I.V. a 20 C utilizando la tabla 5(a). I de masa volúmicas a t corregidas del empuje del aire. Buscar sobre la línea horizontal correspondiente a la cifra de la parte entera de la temperatura, t, la cifra de la masa volumen inmediatamente superior a rt. El grado alcohólico que encabeza la columna donde se encuentra esta cifra será la parte entera del grado alcohólico a 20 C. Determinar la masa volúmica r correspondiente a la parte entera de la temperatura, t, utilizando la diferencia tabular que se lee por debajo de la masa volúmica inmediatamente superior a rt antes encontrada, y la cifra decimal t, r = rt + (diferencia tabular x parte decimal de t) 10-5. Hallar la parte decimal del grado alcohólico a 20 , buscando en las tablas sobre la línea horizontal que comienza con la cifra de los enteros de la temperatura, t, la masa volúmica r‘ que sea inmediatamente superior a r, y dividiendo la diferencia r‘ - r por la diferencia tabular que está a la derecha de la cifra de la masa volúmica r‘. 5(a).6. Referencias. 5(a).6.1 Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. A2,1-25. 1969. 5(a).6.2. P. Jaulmes, S. Brun: “Tables de correspondance entre les diverses tables alcoométriques”. Société Pharmacie Montpellier, 26: 2, 111-141. 1966.

23

24
GRADOS ALCOHOLICOS 2 1 43 1 44 1 44 1 44 1 43 1 44 1 43 1 44 1 44 1 44 1 44 1 44 1 44 1 45 1 44 1 45 1 45 1 45 1 45 1 46 1 46 1 41 1 42 1 42 1 42 1 42 1 43 1 42 1 43 1 41 1 41 1 40 1 41 1 41 1 36 1 37 1 37 1 37 1 38 1 38 1 38 1 38 1 39 1 39 1 39 1 39 1 39 1 40 1 36 1 40 1 36 1 40 1 35 1 40 1 35 1 39 1 35 1 31 1 31 1 31 1 32 1 32 1 32 1 32 1 33 1 33 1 33 1 33 1 34 1 34 1 34 1 35 1 35 1 36 1 36 1 39 1 35 1 30 1 39 1 35 1 29 1 39 1 34 1 30 3 4 5 6 1 25 1 26 1 26 1 26 1 26 1 27 1 27 1 28 1 28 1 29 1 29 1 30 1 30 1 31 1 31 1 31 1 32 1 32 1 33 1 33 1 34 996 65 8 996 57 10 996 47 11 996 36 13 996 23 13 996 10 15 995 95 15 995 80 17 995 63 18 995 45 20 995 25 20 995 05 21 994 84 22 994 62 24 994 38 24 994 14 25 993 89 27 993 62 27 993 35 28 993 07 29 992 78 995 22 9 995 13 10 995 03 11 994 92 12 994 80 14 994 66 14 994 52 16 994 36 17 994 19 18 994 01 20 993 81 20 993 61 21 993 40 23 993 17 23 992 94 25 992 69 25 992 44 27 992 17 27 991 90 29 991 61 29 991 32 993 83 9 993 74 10 993 64 11 993 53 13 993 40 14 993 26 14 993 12 16 992 96 18 992 78 18 992 60 19 992 41 21 992 20 21 991 99 23 991 76 24 991 52 25 991 27 25 991 02 27 990 75 28 990 47 28 990 19 30 989 89 992 49 10 992 39 10 992 29 11 992 18 13 992 05 14 991 91 15 991 76 16 991 60 18 991 42 19 991 23 19 991 04 21 990 83 22 990 61 23 990 38 24 990 14 25 989 89 26 989 63 27 989 36 28 989 08 28 988 80 30 988 50 991 19 9 991 10 1 990 99 12 990 87 13 990 74 14 990 60 16 990 44 16 990 28 18 990 10 19 989 91 20 989 71 21 989 50 22 989 28 23 989 05 25 988 80 25 988 55 26 988 29 28 988 01 28 987 73 29 987 44 30 987 14

TABLA 5 (a). I Masas volúmicas aparentes de mezclas hidroalcohólicas (picnómetro Pyrex)

Temperaturas

0

1

10º

1 50

1 46

11º

1 49

1 46

12º

1 49

1 46

13º

1 49

1 46

14º

1 49

1 47

15º

1 49

1 46

16º

1 49

1 47

17º

1 49

1 46

18º

1 49

1 46

19º

1 49

1 46

20º

1 49

1 47

21º

1 49

1 47

22º

1 49

1 47

23º

1 49

1 47

24º

1 49

1 47

25º

1 49

1 47

26º

1 49

1 47

27º

1 49

1 48

28º

1 50

1 47

29º

1 50

1 47

30º

999 61 9 999 52 10 999 42 11 999 31 12 999 19 14 999 05 14 998 91 16 998 75 17 998 58 18 998 40 19 998 21 20 998 01 21 997 80 22 997 58 24 997 34 24 997 10 25 996 85 26 996 59 27 966 32 28 996 04 29 995 75

1 50

998 11 8 998 03 10 997 93 11 997 82 12 997 70 14 997 56 14 997 42 16 997 26 17 997 09 18 996 91 19 996 72 20 996 52 21 996 31 22 996 09 24 995 85 24 995 61 25 995 36 26 995 10 28 994 82 28 994 54 29 994 25

1 47

TABLA 5 (a). I (Continuación) GRADOS ALCOHOLICOS 9 1 16 1 16 1 16 1 18 1 19 1 19 1 20 1 20 1 21 1 22 1 23 1 23 1 24 1 24 1 25 1 26 1 26 1 26 1 27 1 28 1 28 1 26 1 27 1 27 1 28 1 26 1 24 1 24 1 23 1 22 1 22 1 21 1 23 1 23 1 23 1 25 1 25 1 27 1 27 1 28 1 29 1 21 1 20 1 20 1 20 1 20 1 19 1 19 1 18 1 18 1 17 1 17 1 16 1 13 1 14 1 15 1 16 1 17 1 18 1 19 1 20 1 21 1 22 1 23 1 24 1 24 1 26 1 27 1 28 1 16 1 15 1 12 1 16 1 14 1 11 1 15 1 14 1 09 1 14 1 12 1 08 1 13 1 11 1 08 1 04 1 05 1 07 1 07 1 09 1 10 1 11 1 12 1 13 1 14 1 16 1 17 1 17 1 18 1 20 1 20 1 21 1 23 1 23 1 24 1 25 10 11 12

Temperaturas

7

8

10º

989

1 19

11º

989

1 20

12º

989

1 21

13º

989

1 21

14º

989

1 22

15º

989

1 23

16º

989

1 23

17º

989

1 24

18º

988

1 24

19º

988

1 24

20º

988

1 25

21º

988

1 25

22º

987

1 26

23º

987

1 27

24º

987

1 27

25º

987

1 28

26º

986

1 28

27º

986

1 29

28º

986

1 29

29º

986

1 30

M

30º

985

94 10 84 11 73 12 61 13 48 15 33 16 17 17 00 18 82 20 62 20 42 22 20 22 98 24 74 25 49 25 24 27 97 28 96 29 40 29 11 31 80

1 30

988 75 11 988 64 12 988 52 12 988 40 14 988 26 16 988 10 16 987 94 18 987 76 18 987 58 20 987 38 21 987 17 22 986 95 23 986 72 25 986 47 25 986 22 26 985 96 27 985 69 29 985 40 29 985 11 30 984 81 31 984 50

987 59 11 987 48 12 987 36 14 987 22 15 987 07 16 986 91 17 986 74 18 986 56 19 986 37 21 986 16 22 985 94 22 985 72 24 985 48 25 985 23 26 984 97 27 984 70 27 984 43 29 984 14 30 983 84 31 983 53 31 983 22

986 46 12 986 34 13 986 21 15 986 06 15 985 91 17 985 74 18 985 56 19 985 37 20 985 17 21 984 96 23 984 73 23 984 50 24 984 26 16 984 00 27 983 73 27 983 46 29 983 15 29 982 88 31 982 57 31 982 26 32 981 94

985 35 13 985 22 15 985 07 15 984 92 16 984 76 18 984 58 19 984 39 20 984 19 21 983 98 22 983 76 23 983 53 24 983 29 26 983 03 26 982 77 27 982 50 29 982 21 29 981 92 31 981 61 31 981 30 32 980 98 33 980 65

984 27 14 984 13 15 983 98 17 983 81 17 983 64 19 983 45 20 983 25 21 983 04 22 982 82 23 982 59 34 982 35 25 982 10 27 981 23 27 981 56 28 981 28 30 980 98 30 980 68 31 980 37 33 980 04 33 979 71 34 979 37

25

26
TABLA 5 (a). I (Continuación) GRADOS ALCOHOLICOS 15 99 1 01 1 02 1 03 1 05 1 05 1 07 1 08 1 10 1 11 1 12 1 13 1 14 1 15 1 17 1 17 1 19 1 20 1 20 1 21 1 22 1 17 1 19 1 20 1 21 1 22 1 17 1 15 1 14 1 13 1 12 1 10 1 09 1 10 1 11 1 13 1 14 1 14 1 16 1 17 1 18 1 20 1 21 1 10 1 07 1 08 1 06 1 07 1 05 1 05 1 04 1 05 1 02 1 03 1 01 99 1 00 1 02 1 03 1 05 1 06 1 08 1 09 1 10 1 11 1 13 1 15 1 16 1 17 1 18 1 19 1 20 1 02 99 98 1 00 98 96 99 96 95 98 94 94 16 17 18 91 93 95 96 97 97 1 00 1 02 1 03 1 05 1 06 1 08 1 09 1 11 1 11 1 13 1 14 1 15 1 17 1 18 1 20 981 22 18 981 04 19 980 85 20 980 65 21 980 44 22 980 22 24 979 98 24 979 74 26 979 48 26 979 22 28 978 94 28 978 66 30 978 36 30 978 06 32 977 74 32 977 42 34 977 08 34 976 74 35 976 39 36 976 03 37 975 66 980 24 19 980 05 20 979 85 22 979 63 22 979 41 24 979 17 24 978 93 26 978 67 27 978 40 28 978 12 28 977 84 30 977 54 31 977 23 31 976 92 33 976 59 34 976 25 34 975 91 36 975 55 36 975 19 37 974 82 38 974 44 979 30 21 979 09 22 978 87 23 978 64 24 978 40 25 978 15 26 977 89 27 977 62 28 977 34 29 977 05 30 976 75 31 976 44 32 976 12 33 975 79 34 975 45 34 975 11 36 974 75 37 974 38 37 974 01 39 973 62 39 973 23 978 36 22 978 14 23 977 91 25 977 66 25 977 41 26 977 15 28 976 87 28 976 59 30 976 29 30 975 99 32 975 67 32 975 35 33 975 02 33 974 68 36 974 32 36 973 96 37 973 59 38 973 21 38 972 83 40 972 43 40 972 03

Temperaturas

13

14

10º

983

1 02

11º

983

1 03

12º

982

1 04

13º

982

1 06

14º

982

1 06

15º

982

1 08

16º

982

1 09

17º

981

1 10

18º

981

1 11

19º

981

1 12

20º

981

1 13

21º

980

1 14

22º

980

1 16

23º

980

1 17

24º

980

1 17

25º

979

1 19

26º

979

1 20

27º

979

1 20

28º

978

1 22

29º

978

1 23

30º

978

23 15 08 17 91 17 74 19 55 20 35 21 14 22 92 23 69 24 45 26 19 26 93 27 66 28 38 30 08 30 78 31 47 33 14 33 81 34 47 35 12

1 24

982 21 16 982 05 18 981 87 19 981 68 19 981 49 22 981 27 22 981 05 23 980 82 24 980 58 25 980 33 27 980 06 27 979 79 29 979 50 29 979 21 30 978 91 32 978 59 32 978 27 33 977 94 35 977 59 35 977 24 36 976 88

TABLA 5 (a). I (Continuación) GRADOS ALCOHOLICOS 21 90 92 93 96 97 99 1 00 1 02 1 04 1 05 1 07 1 08 1 10 1 11 1 13 1 14 1 15 1 17 1 18 1 19 1 21 1 18 1 20 1 21 1 23 1 17 1 15 1 14 1 13 1 11 1 10 1 11 1 13 1 14 1 15 1 18 1 19 1 20 1 22 1 23 1 24 1 08 1 09 1 06 1 08 1 05 1 06 1 03 1 04 1 01 1 03 1 00 1 01 1 02 1 04 1 06 1 08 1 09 1 11 1 12 1 14 1 16 1 18 1 19 1 20 1 22 1 23 1 25 1 26 98 99 1 00 96 97 99 95 95 97 93 94 94 91 91 94 94 97 98 1 00 1 02 1 04 1 06 1 08 1 09 1 11 1 13 1 15 1 16 1 17 1 19 1 20 1 22 1 24 1 25 1 26 1 28 22 23 24

Temperaturas

19

20

10º

89

11º

90

12º

92

13º

93

14º

96

15º

97

16º

99

17º

1 00

18º

1 01

19º

1 03

20º

1 04

21º

1 05

22º

1 07

23º

1 08

24º

1 10

25º

1 11

26º

1 13

27º

1 14

28º

1 15

29º

M

30º

977 45 24 977 21 25 976 96 26 976 70 26 976 44 28 976 16 29 975 87 30 975 57 31 975 26 32 974 94 33 974 61 34 974 27 34 973 93 36 973 57 36 973 21 38 972 83 38 972 45 39 972 06 40 971 66 41 971 25 42 970 83

1 17

1 17

976 56 25 976 31 27 976 04 27 975 77 29 975 48 29 975 19 31 974 88 31 974 57 32 974 25 34 973 91 34 973 57 35 973 22 36 972 86 37 972 49 38 972 11 39 971 72 40 971 32 40 970 92 41 970 51 43 970 08 42 969 66

975 66 27 975 39 28 975 11 30 974 81 30 974 50 31 974 20 32 973 88 33 973 55 34 973 21 35 972 86 36 972 50 36 972 14 38 971 76 38 971 38 40 970 98 40 970 58 41 970 17 42 969 75 42 969 33 44 968 89 44 968 45

974 75 29 974 46 30 974 16 31 973 85 32 973 53 33 973 20 33 972 87 35 972 52 36 972 16 36 971 80 38 971 42 38 971 04 39 970 65 40 970 25 41 969 84 41 969 43 43 969 00 43 968 57 44 968 13 45 967 68 45 967 22

973 84 32 973 52 31 973 21 33 972 88 34 972 54 35 972 19 35 971 84 36 971 48 38 971 10 38 970 72 39 970 33 40 969 93 41 969 52 41 969 11 42 968 69 44 968 25 44 967 81 44 967 37 46 966 91 46 966 45 47 965 98

972 90 32 972 58 34 972 24 35 971 89 35 971 54 37 971 17 37 970 80 38 970 42 40 970 02 39 969 623 41 969 22 41 968 81 43 968 38 43 967 95 44 967 51 45 967 06 45 966 61 46 966 15 47 965 68 48 965 20 48 964 72

27

28
TABLA 5 (a). I (Continuación) GRADOS ALCOHOLICOS 27 97 99 1 01 1 03 1 05 1 07 1 09 1 10 1 13 1 14 1 16 1 17 1 19 1 20 1 22 1 24 1 26 1 27 1 29 1 30 1 32 1 27 1 29 1 30 1 32 1 33 1 26 1 25 1 23 1 22 1 20 1 18 1 19 1 21 1 22 1 25 1 26 1 27 1 29 1 31 1 32 1 33 1 35 1 16 1 18 1 14 1 16 1 13 1 14 1 10 1 13 1 09 1 11 1 07 1 09 1 10 1 12 1 14 1 16 1 18 1 19 1 21 1 23 1 25 1 26 1 27 1 30 1 31 1 32 1 34 1 36 1 37 1 05 1 07 1 09 1 03 1 05 1 07 1 01 1 03 1 05 99 1 01 1 03 28 29 30 1 08 1 09 1 12 1 14 1 16 1 17 1 20 1 20 1 23 1 25 1 26 1 27 1 29 1 31 1 32 1 33 1 36 1 36 1 38 1 40 1 40 970 05 39 969 66 40 969 26 40 968 86 42 968 44 42 968 02 43 967 59 43 967 16 45 966 71 45 966 26 46 965 80 46 965 34 47 964 87 48 964 39 49 963 90 50 963 40 50 962 90 50 962 40 52 961 88 52 961 36 53 960 83 969 06 41 968 65 42 968 23 42 967 81 44 967 37 44 966 93 44 966 49 46 966 03 46 965 57 47 965 10 48 964 62 48 964 14 49 963 65 49 963 16 51 962 65 51 962 14 51 961 63 52 961 11 53 960 58 54 960 04 54 959 50 968 05 43 967 62 44 967 18 44 966 74 46 966 28 46 965 82 46 965 36 47 964 89 48 964 41 49 965 92 49 963 43 50 962 93 50 962 43 52 961 91 52 961 39 52 960 87 53 960 34 54 959 80 54 959 26 55 958 71 56 958 15 967 02 45 966 57 46 966 11 46 965 65 47 965 18 48 964 70 48 964 22 49 963 73 50 963 23 50 962 73 51 962 22 52 961 70 52 961 18 53 960 65 53 960 12 55 959 57 54 959 03 55 959 58 56 957 92 57 957 35 57 956 78

Temperaturas

25

26

10º

971

94

11º

971

96

12º

971

99

13º

970

1 00

14º

970

1 03

15º

970

1 04

16º

969

1 06

17º

969

1 08

18º

968

1 09

19º

968

1 12

20º

968

1 13

21º

967

1 15

22º

967

1 16

23º

966

1 19

24º

966

1 20

25º

965

1 22

26º

965

1 23

27º

964

1 24

28º

964

1 26

29º

963

1 28

30º

963

96 35 61 35 26 37 89 37 52 39 13 39 74 40 34 41 93 41 52 43 09 43 66 44 22 44 78 46 32 46 86 47 39 48 91 48 43 49 94 50 44

1 29

971 02 37 970 65 38 970 27 38 969 89 40 969 49 40 969 09 41 968 68 42 968 26 42 967 84 44 967 40 44 966 96 45 966 51 45 966 06 47 965 59 47 965 12 48 964 64 48 964 16 49 963 67 50 963 17 51 962 66 51 962 15

M
5(b). TITULO ALCOHOMETRICO (Método areométrico) 5(b). 1.Principio. Como en 5(a).1. 5(b).2. Material y aparatos. 5(b).2.1. Aparatos de destilación.- Como en 5(a).2.1. 5(b).2.2. Aparatos de areometría. 5(b).2.2.1. Alcohómetro. 5(b).2.2.2. Termómetro. 5(b).2.2.3. Probeta. 5(b).3. Reactivos. Como en 5(a).3. 5(b).4. Procedimiento. Las generalidades como en 5(a).4. 5(b).4.1. Destilación.- Como en 5(a).4.1. 5(b).4.2. Determinación areométrica.- Como en 4(b).3, teniendo en cuenta que se utiliza destilado en vez de vino, y que el tallo del areómetro viene graduado en grados alcohólicos aparentes. Hacer al menos tres lecturas del grado alcohólico aparente, sirviéndose si es preciso de una lupa. 5(b).5. Cálculo. Calcular el grado alcohólico internacional O.I.V. a 20 C, utilizando la tabla 5(b).I, añadiendo o restando al grado alcohólico aparente a t la corrección correspondiente. 5(b).6. Referencias. 5(b).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. A2, 1-25. 1969. 5(b).6.2. P. Jaulmes, S. Brun: “Tables de correspondance entre les diverses tables alcoométriques”. Société Pharmacie Montpellier, 26: 2, 111, 141, 1966.

TABLA 5 (b). I Correcciones a efectuar sobre el grado alcohólico aparente para corregir la acción de la temperatura Temperaturas 0 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 0,84 0,80 0,74 0,67 0,60 0,51 0,42 0,32 0,23 0,11 1 0,87 0,81 0,76 0,69 0,61 0,52 0,43 0,33 0,24 0,12 0,13 0,26 0,41 0,56 0,71 0,86 2 0,88 0,83 0,78 0,70 0,62 0,54 0,45 0,34 0,24 0,12 0,13 0,27 0,42 0,57 0,72 0,88 1,05 1,22 1,40 1,59 Grados alcohólicos aparentes 3 0,92 0,86 0,80 0,73 0,65 0,56 0,46 0,35 0,25 0,13 0,13 0,28 0,43 0,58 0,73 0,91 1,08 1,25 1,44 1,62 4 0,96 0,90 0,84 0,76 0,68 0,58 0,48 0,37 0,26 0,13 0,14 0,28 0,44 0,59 0,75 0,93 1,10 1,28 1,48 1,66 5 1,01 0,96 0,88 0,80 0,71 0,61 0,50 0,39 0,27 0,13 0,14 0,29 0,45 0,61 0,78 0,96 1,14 1,33 1,52 1,71 6 1,08 1,01 0,94 0,85 0,75 0,64 0,53 0,41 0,28 0,14 0,15 0,30 0,47 0,64 0,81 1,00 1,18 1,38 1,58 1,77 7 1,16 1,08 1,00 0,90 0,79 0,68 0,55 0,43 0,30 0,15 0,15 0,32 0,49 0,67 0,84 1,04 1,23 1,44 1,64 1,85 8 1,24 1,16 1,07 0,95 0,85 0,72 0,58 0,46 0,31 0,16 0,16 0,34 0,51 0,70 0,89 1,09 1,28 1,50 1,71 1,93

SUMAR

RESTAR

-

29

TABLA 5 (b). I (continuación) Temperaturas 9 1,34 1,44 1,34 1,23 1,10 0,96 0,82 0,66 0,51 0,34 0,17 0,18 0,37 0,56 0,77 0,98 1,19 1,40 1,62 1,85 2,07 2,15 2,23 2,33 2,45 2,55 2,67 2,79 1,24 1,46 1,68 1,92 1,30 1,53 1,75 2,00 1,36 1,60 1,83 2,08 1,43 1,68 1,92 2,17 1,51 1,76 2,02 2,28 1,57 1,85 2,11 2,39 1,65 1,93 2,21 2,50 1,02 1,07 1,12 1,18 1,24 1,32 1,38 0,19 0,40 0,60 0,81 0,20 0,42 0,63 0,85 0,21 0,44 0,67 0,89 0,23 0,46 0,71 0,94 0,24 0,48 0,74 0,99 0,26 0,51 0,78 1,04 0,28 0,54 0,82 1,09 0,71 0,55 0,36 0,18 0,76 0,58 0,39 0,20 0,82 0,63 0,42 0,21 0,88 0,67 0,45 0,23 0,94 0,71 0,47 0,24 1,01 0,76 0,50 0,26 1,08 0,81 0,53 0,28 0,87 0,94 1,01 1,09 1,17 1,26 1,34 1,46 1,32 1,18 1,03 1,59 1,43 1,28 1,11 1,73 1,55 1,38 1,19 1,88 1,68 1,48 1,28 2,04 1,82 1,60 1,39 2,21 1,97 1,72 1,49 2,38 2,13 1,85 1,59 1,58 1,73 1,89 2,06 2,24 2,43 2,63 10 11 12 13 14 15 16 17 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 2,00 0,93 0,17 0,35 0,54 0,73 0,62 0,48 0,33 0,16 0,77 Grados alcohólicos aparentes

SUMAR
1,25 1,15 1,02 0,90

RESTAR
1,14 1,34 1,56 1,78

TABLA 5 (b). I (continuación) Temperaturas 18 2,84 3,01 2,71 2,40 2,11 1,81 1,51 1,20 0,90 0,60 0,30 0,31 0,60 0,90 1,21 1,51 1,82 2,12 2,43 2,73 2,91 3,04 0,32 0,62 0,94 1,27 1,60 1,90 2,22 2,54 2,85 3,16 0,33 0,65 0,98 1,31 1,65 1,97 2,30 2,63 2,96 3,28 1,26 0,95 0,63 0,31 1,31 0,99 0,65 0,32 1,58 1,64 1,71 1,36 1,02 0,68 0,33 0,34 0,67 1,00 1,35 1,69 2,02 2,36 2,70 3,05 3,38 2,84 2,51 2,20 1,89 2,95 2,63 2,29 1,96 3,08 2,73 2,38 2,03 3,21 2,84 2,47 2,11 1,77 1,40 1,06 0,70 0,34 0,35 0,69 1,03 1,38 1,72 2,06 2,42 2,76 3,11 3,38 3,15 3,29 3,44 3,58 19 20 21 22 23 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º 26º 27º 28º 29º 30º 1,44 0,30 0,57 0,86 1,14 1,15 0,85 0,56 0,29 1,44 Grados alcohólicos aparentes 24 3,70 3,32 2,93 2,57 2,19 1,82 1,45 1,09 0,72 0,35 0,36 0,71 1,06 1,42 1,76 2,12 2,47 2,83 3,18 3,46 25 3,82 3,42 3,02 2,64 2,25 1,87 1,49 1,12 0,75 0,36 0,37 0,73 1,08 1,46 1,81 2,18 2,53 2,90 3,25 3,54 26 3,93 3,52 3,10 2,71 2,30 1,91 1,53 1,15 0,76 0,37 0,38 0,74 1,11 1,50 1,86 2,23 2,59 2,96 3,32 3,61

SUMAR
2,56 2,27 1,99 1,71

RESTAR
1,73 2,02 2,31 2,62

30

M
TABLA 5 (b). I (continuación) Temperaturas 10º 11º 12º 13º 14º 15º 16º 17º 18º 19º 20º 21º 22º 23º 24º 25º Grados alcohólicos aparentes 27 4,04 3,61 3,18 2,78 2,36 1,96 1,56 1,17 0,77 0,38 0,38 0,76 1,14 1,53 1,90 28 4,14 3,69 3,25 2,84 2,42 2,01 1,59 1,19 0,79 0,40 0,39 0,78 1,16 1,56 1,94 2,31 2,70 3,07 3,45 3,83 29 4,24 3,78 3,32 2,89 2,47 2,05 1,62 1,21 0,81 0,41 0,39 0,79 1,19 1,58 1,97 2,35 2,74 3,12 3,51 3,89 30 4,43 3,86 3,39 2,94 2,52 2,09 1,64 1,23 0,82 0,42 0,40 0,81 1,21 1,60 2,00 2,39 2,78 3,16 3,56 3,95

30º

RESTAR

26º 27º 28º 29º

SUMAR

2,28 2,64 3,02 3,39 3,76

6. EXTRACTO SECO TOTAL 6.1. Principio. El extracto seco total o materias secas totales es el conjunto de todas las sustancias que, en condiciones físicas determinadas, no se volatilizan. Estas condiciones físicas deben fijarse de tal manera que las sustancias componentes de este extracto sufran el mínimo de alteración. El extracto seco total se calcula indirectamente conociendo la densidad del “residuo sin alcohol”, que es el vino cuyo alcohol ha sido evaporado y después se ha restablecido el volumen primitivo por adición de agua. 6.2. Procedimiento. Llevar el residuo de la destilación del alcohol del vino (sin previa neutralización) al matraz en donde se midió el vino. Lavar el matraz en donde se destiló el vino con varias porciones de agua, y llenar con estas aguas hasta volumen, el matraz con el residuo de la destilación, a la misma temperatura a la que se enrasó el vino. Mezclar bien, verter en una probeta y determinar la densidad como en 4(a).

6.3. Cálculo. Calcular el extracto seco expresado en g/l a partir de la densidad del residuo sin alcohol utilizando la tabla 6.I. 6.3.1. Determinar la densidad del residuo sin alcohol como en 6.2. 6.3.2. Calcular la densidad 20/20 del residuo sin alcohol según la fórmula de Tabarié: dr = dv - da +1 d = densidad 20/20 del residuo sin alcohol. dv = densidad del vino a 20 . da = densidad a 20 de la mezcla hidroalcohólica del mismo grado que el vino. 6.3.3. Calcular la densidad del residuo sin alcohol a partir de las masas volúmicas.
r

dr = 1,0018 (rv - ra) + 1 rv = masa volúmica del vino a 20º. ra = masa volúmica a 20 de la mezcla hidroalcohólica del mismo grado que el vino. Para valores de rv menores a 1,05 puede tomarse 1 en vez de 1,0018.

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6.4. Observaciones. El extracto seco se expresa por la cantidad de sacarosa que, disuelta en agua hasta 1 l, da una solución de la misma densidad que el residuo sin alcohol. En la tabla 6. I se encuentra la equivalencia de esta densidad, en extracto, expresada en sacarosa.

6.5. Referencia. 6.5.1. Recueil des Méthodes Internationales d’ Analyse des Vins. O.I.V. A3, 1-6. 1969.

TABLA 6. I Contenido en extracto seco (g/l) Densidad con dos decimales Tercer decimal de la densidad 0 1 2 3 4 5

Gramos de extracto por litro 1,00 1,01 1,02 1,03 1,04 1,05 1,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,17 1,18 1,19 1,20 0 25,8 51,7 77,7 103,7 129,8 155,9 182,1 208,4 234,7 261,0 287,4 313,9 340,4 366,9 393,6 420,3 447,1 473,9 500,9 527,8 2,6 28,4 54,3 80,3 106,3 132,4 158,6 184,8 211,0 237,3 263,6 290,0 316,5 343,0 369,6 396,2 423,0 449,8 476,6 503,5 5,1 31,0 56,9 82,9 109,0 135,0 161,2 187,4 213,6 239,9 266,3 292,7 319,2 345,7 372,3 398,9 425,7 452,4 479,3 506,2 7,7 33,6 59,5 85,5 111,6 137,6 163,8 190,0 216,2 242,5 268,9 295,3 321,8 348,3 375,0 401,6 428,3 455,2 482,0 508,9 10,3 36,2 62,1 88,1 114,2 140,3 166,4 192,6 218,9 245,2 271,5 298,0 324,5 351,0 377,6 404,3 431,0 457,8 484,7 511,6 12,9 38,8 64,7 90,7 116,8 142,9 169,0 195,2 221,5 247,8 274,2 300,6 327,1 353,7 380,3 406,9 433,7 460,5 487,4 514,3 -

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M
TABLA 6. I (Continuación) Densidad con dos decimales Tercer decimal de la densidad 6 7 8 9

Gramos de extracto por litro 1,00 1,01 1,02 1,03 1,04 1,05 1,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,17 1,18 1,19 1,20 15,4 41,3 67,3 93,3 119,4 145,5 171,6 197,8 224,1 250,4 276,8 303,3 329,8 356,3 382,9 409,6 436,4 463,2 490,1 517,0 18,0 43,9 69,9 95,9 122,0 148,1 174,3 200,5 226,8 253,1 279,5 305,9 332,4 359,0 385,6 412,3 439,0 465,9 492,8 519,7 20,6 46,5 72,5 98,5 124,6 150,7 176,9 203,1 229,4 255,7 282,1 308,6 335,1 361,6 388,3 415,0 441,7 468,6 495,5 522,4 23,2 49,1 75,1 101,1 127,2 153,3 179,5 205,8 232,0 258,4 284,8 311,2 337,8 364,3 390,9 417,6 444,4 471,3 498,2 525,1 -

TABLA INTERCALAR 4º decimal de la densidad 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Extracto g/l 0,3 0,5 0,8 1,0 1,3 1,6 1,8 2,1 2,3

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7 (a). AZUCARES REDUCTORES (Defecación plúmbica) (Provisional) 7(a).1. Principio. Eliminación previa de todas las materias reductoras distintas de los azúcares por defecación con plomo acetato neutro, y valoración basada en la acción reductora sobre solución cupro-alcalina. Aplicable a vinos blancos y tintos de color no muy intenso. 7(a).2. Material y aparatos. 7(a).2.1. Erlenmeyer de 300 ml con refrigerante de reflujo. 7(a).2.2. Filtro de vidrio G3 con capa fina de amianto de fibra fina y lavado con agua hirviendo. 7(a).2.3. Kitasatos de 500 ml con frasco de seguridad intermedio. 7(a).3. Reactivos. 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 121212 Calcio Carbonato precipitado PA 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 171321 1,10-Fenantrolina 1-hidrato RE-ACS 121793 Hierro II Sulfato 2-hidrato PA 121360 Hierro III Sulfato x-hidrato PA 131466 Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO 181529 Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV (o preparar con 131527 Potasio Permanganato PA-ACS-ISO) 131729 Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PA-ACS-ISO 131687 Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO 182415 Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 131706 di-Sodio Oxalato PA-ACS 7(a).3.1. Solución de Plomo II Acetato (aproximadamente saturada). Añadir a 250 g de Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO, Agua PA-ACS caliente hasta 0,5 l y agitar hasta disolución completa. 7(a). 3.2. Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 7(a).3.3. Calcio Carbonato precipitado PA 7(a).3.4. Solución Cúprica A. Mezclar 40 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO con 2 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y añadir Agua PA-ACS hasta 1 l. 7(a).3.5. Solución Tartrato-Alcalina B. Mezclar 200 g de Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PA-ACSISO con 150 g de Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO y añadir Agua PA-ACS hasta 1 l. 7(a).3.6. Solución de Hierro III C. Mezclar 50 g de Hierro III Sulfato x-hidrato PA con 20 g de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y añadir Agua PA-

ACS hasta 1.000 ml. Comprobar esta solución poniendo en un vaso de vidrio 30 ml de solución C, 100 ml de Agua PA-ACS y una gota de Hierro II-1, 10 Fenantrolina. La coloración amarillo-verdosa de esta mezcla debe virar a verde puro con una sola gota de Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV. En caso contrario, añadir Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV a la solución hasta conseguir el viraje descrito. Generalmente es necesario añadir 1-3 ml de Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV por l de solución C. 7(a).3.7. Solución de Hierro II-1,10 Fenantrolina. Mezclar 0,695 g de Hierro II Sulfato 2-hidrato PA , 100 ml de Agua PA-ACS y 1,485 g de 1,10-Fenantrolina 1-hidrato RE-ACS. 7(a).3.8. Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV. En su defecto preparar disolviendo 3,16 g de Potasio Permanganato PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS hasta 1 l. Comprobar esta solución por valoración con una solución de di-Sodio Oxalato PA-ACS 7(a).4. Procedimiento. 7(a).4.1. Vinos secos.- Llevar 100 ml de vino a un matraz aforado de 125 ml, añadir (V-0,5) ml de Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV, siendo V el volumen de solución N/10 utilizada para valorar la acidez total de 10 ml de vino, como en 20.4. Añadir agitando 5 ml de solución saturada de Plomo II Acetato y 1g de Calcio Carbonato precipitado PA, agitar varias veces y dejar sedimentar por lo menos 15 minutos, enrasar con Agua PA-ACS, añadir 0,6 ml más de Agua PA-ACS y filtrar. 7(a).4.2. Vinos dulces.- En un matraz aforado de 100 ml colocar un volumen de vino variable según su riqueza en azúcar. Para vinos dulces con masa volúmica comprendida entre 1,005 y 1,038, tomar 20 ml de líquido a analizar, diluido al 20%. Para vinos abocados con masa volúmica entre 0,997 y 1,006, tomar 20 ml de vino no diluido. Añadir 0,5 g. de Calcio Carbonato precipitado PA, unos 60 ml de Agua PA-ACS y cantidad (0,52,0 ml) de solución saturada de Plomo II Acetato hasta el límite del enturbiamiento, agitar y dejar reposar durante 15 minutos por lo menos, agitando de cuando en cuando. Enrasar, añadir 0,2 ml más de Agua PA-ACS y filtrar. Un ml del filtrado corresponde a 0,04 ml de vino dulce y 0,20 ml de vino abocado. En el Erlenmeyer de 300 ml, poner 20 ml de solución Cúprica A, 20 ml de solución TartratoAlcalina B, 20 ml de solución azucarada conteniendo de 10 a 100 mg de azúcar reductor. Hacer hervir con reflujo (o con la boca del matraz tapada con un pequeño embudo) durante 3 minutos, enfriar inmediatamente bajo una corriente de Agua PA-ACS hasta refrigeración completa, dejar posar el Cobre I Oxido (inclinando el Erlenmeyer en un cristalizador con algodón y descansando el

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M
cuello en el borde), filtrar después por el filtro G3 con la capa de amianto, ayudando la filtración con la trompa de vacío. Tener la precaución de que, en lo posible, haya una capa de líquido sobre el precipitado adherido al fondo, tanto en el filtro como en el Erlenmeyer, para evitar que se oxide. Lavar el precipitado del Erlenmeyer con Agua PA-ACS hirviendo y verter en el filtro, repitiendo tres veces la operación, agitar cada vez con precacución de operar rápidamente para no dejar al descubierto el precipitado de Cobre I Oxido. Cambiar el Kitasato y proceder a la disolución del Cobre I Oxido, añadiendo primero al Erlenmeyer unos 10 ml de solución C de Hierro III Sulfato, que disuelve rápidamente el precipitado y verter la solución en el filtro. Disolver el precipitado que queda en el filtro, agitando con varilla de vidrio para facilitar la disolución. Repetir tres veces estas adiciones y lavar Erlenmeyer y filtro cinco veces con unos 20 ml de Agua PA-ACS fría cada vez. Valorar el Hierro II Sulfato formado, que se encuentra en el líquido del Kitasato, con Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV, añadiendo previamente una gota de solución de Hierro II1,10-Fenantrolina. Dar por terminada la valoración cuando el color pase de verde-naranja a verde franco. 7(a).5. Cálculo. La cantidad de azúcar contenida en la solución azucarada utilizada se obtiene en la tabla 7(a).I. 7(a).6. Referencias. 7(a).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. A4, 8-10, 1969. 7(a).6.2. Jaulmes, P. “Analyse des vins”, págs. 170-171, 1951.

TABLA 7 (a). I KMn04 N/10 ml
4,0 4,2 4,4 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 8,2 8,4 8,6 8,8 9,0 9,2 9,4 9,6 9,8 10,0 10,2 10,4 10,6 10,8 11,0 11,2 11,4 11,6 11,8

Azúcar invertido mg
12,4 13,0 13,6 14,3 14,9 15,5 16,2 16,8 17,5 18,1 18,8 19,4 20,1 20,7 21,4 22,0 22,7 23,4 24,1 24,7 25,5 26,1 26,8 27,5 28,1 28,8 29,5 30,1 30,8 31,5 32,2 32,9 33,6 34,3 35,0 35,6 36,4 37,0 37,7 38,4

KMn04 N/10 ml
12,0 12,2 12,4 12,6 12,8 13,0 13,2 13,4 13,6 13,8 14,0 14,2 14,4 14,6 14,8 15,0 15,2 15,4 15,6 15,8 16,0 16,2 16,4 16,6 16,8 17,0 17,2 17,4 17,6 17,8 18,0 18,2 18,4 18,6 18,8 19,0 19,2 19,4 19,6 19,8

Azúcar invertido mg
39,1 39,7 40,5 41,2 42,0 42,6 43,3 44,1 44,7 45,5 46,3 47,0 47,6 48,4 49,1 49,8 50,5 51,3 52,1 52,7 53,5 54,2 55,0 55,7 56,4 57,2 57,9 58,7 59,4 60,1 61,0 61,6 62,4 63,2 64,0 64,8 65,4 66,2 67,1 67,8

KMn04 N/10 ml
20,0 20,2 20,4 20,6 20,8 21,0 21,2 21,4 21,6 21,8 22,0 22,2 22,4 22,6 22,8 23,0 23,2 23,4 23,6 23,8 24,0 24,2 24,4 24,6 24,8 25,0 25,2 25,4 25,6 25,8 26,0 26,2 26,4 26,6 26,8 27,0 27,2 27,4 27,6 27,8

Azúcar invertido mg
68,7 69,3 70,1 70,9 71,6 72,4 73,2 74,1 74,9 75,6 76,4 77,2 78,0 78,7 79,5 80,3 81,1 81,9 82,7 83,5 84,4 85,2 86,0 86,7 87,5 88,4 89,2 90,0 90,9 91,6 92,5 93,3 94,1 95,0 95,8 96,6 97,3 98,2 99,1 99,9

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7(b). AZUCARES REDUCTORES (Defecación mercúrica) (Provisional) 7(b).1. Principio. Eliminación previa de todas las materias reductoras distintas de los azúcares por defecación con mercurio II acetato, y valoración por la acción reductora de los azúcares sobre la solución cupro-alcalina. Aplicable a vinos jóvenes, de color intenso y ricos en azúcar, o cuando se va a realizar una valoración polarimétrica. Este método proporciona la menor pérdida de azúcares reductores. 7(b).2. Material y aparatos. 7(b).2.1. Aparato generador de ácido sulfhídrico. Filtrar el gas producido por la acción del ácido clorhídrico diluido sobre el hierro II sulfuro por paso a través de lana de vidrio y lavado en un frasco lavador con agua. 7(b).2.2. Dispositivo para eliminar el exceso de ácido sulfhídrico. Eliminar el ácido sulfhídrico en exceso después de la precipitación del exceso de mercurio, mediante aspiración conectada al tubo lateral de un Kitasato, en el que se encuentra el líquido a tratar. Tapar el matraz con un tapón atravesado por un tubo que se sumerge en el líquido. Humedecer el aire aspirado que entra en el tubo por borboteo en un matraz de un litro lleno hasta la mitad de agua. 7(b).3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 171321 1,10 -Fenantrolina 1-hidrato RE-ACS 131325 Fenolftaleína PA-ACS 121793 Hierro II Sulfato 2-hidrato PA 131426 Mercurio II Oxido amarillo PA-ACS 181529 Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV (o preparar con 131527 Potasio Permanganato PA-ACS-ISO 131729 Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PA-ACS-ISO 131687 Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO 181694 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV 182415 Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 182159 Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV 131706 di-Sodio Oxalato PA-ACS 141783 Zinc metal, polvo PRS 7(b).3.1. Solución de Mercurio II. Mezclar 240 g de Mercurio II Oxido amarillo PA-ACS con 240 ml de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO y añadir Agua PA-ACS hasta 1 litro. Hervir hasta disolución

completa, enfriar y añadir Agua PA-ACS hasta 1 litro. 7(b).3.2. Solución de Sodio Hidróxido 4N aproximadamente. Tomar Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV y diluir convenientemente. Esta solución debe poder neutralizar exactamente un volumen igual al suyo, de la solución de Mercurio II en presencia de Fenolftaleína PA-ACS. Se debe comprobar esta correspondencia antes de su empleo, en particular si se observa un depósito en la solución de Mercurio II y si es necesario diluir la solución sódica. 7(b).3.3. Zinc metal, polvo PRS. Para eliminar el exceso de Mercurio. 7(b).3 (4,5,6,7,y 8). Como 7 (a). 3 (4,5,6,7 y 8). 7(b).4. Procedimiento. 7(b).4.1. Vinos secos y dulces, en los que se propone determinar el azúcar y la desviación polarimétrica. Colocar 100 ml de vino en una cápsula de 10-12 cm de diámetro y adicionar (V-0,5) ml de Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV, siendo V el volumen de Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV empleado para valorar la acidez total de 10 ml de vino, como en 20.4. Evaporar en baño de agua hirviendo con corriente de aire caliente sobre la superficie del líquido, hasta reducir el volumen a 50 ml, aproximadamente. Llevar a un matraz de 100 ml, lavar tres veces la cápsula con Agua PAACS, añadir 5 ml de solución de Mercurio II y, agitando, 5 ml de solución de Sodio Hidróxido que se corresponde, volumen a volumen, con la de Mercurio II (solución de Sodio Hidróxido 4N aproximadamente), dejar reaccionar 5 minutos por lo menos; añadir 2 ml de solución de Mercurio II Acetato y enrasar a 100 ml. Filtrar y recoger el filtrado en un Kitasato de 500 ml. Tratar el filtrado con una corriente de Acido Sulfhídrico para precipitar el Mercurio en forma de Sulfuro negro (este tratamiento puede detenerse cuando el precipitado tome color negro). Después se hace barbotar aire (previamente saturado de vapor de agua) a través del líquido, hasta que haya perdido todo su olor a Acido Sulfhídrico (5-10 minutos) y se filtra. Un ml del filtrado corresponde a 1 ml de vino. Este líquido se emplea sin dilución cuando se trata de vino seco o con unos 5 g/l de azúcar. Con vino más rico en azúcar conviene diluir después del examen polarimétrico y antes del análisis químico. 7(b).4.2. Vinos secos y dulces en los que solamente se va a realizar el análisis del azúcar por el método químico y no por polarografía. Tomar 20 ml de vino sin diluir o diluido según norma anterior, añadir 20 ml de Agua PA-ACS y 1 ml de solución de Mercurio II Acetato y añadir, agitando, 1 ml de la solución sódica. Dejar actuar 5 minutos por lo menos, añadir

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1 ml de solución de Mercurio II, enrasar con agua y filtrar. Tratar con Acido Sulfhídrico y aire húmedo barbotando en la forma antes expuesta, y filtrar. Continuar como en 7(a). 4 después de la defecación. 7(b).5. Observaciones. En los análisis de azúcar por el método químico, para vinos no muy ricos en azúcar, en vez de eliminar el exceso de mercurio por el ácido sulfhídrico, es más práctico eliminarlo mediante la adición de Zinc metal, polvo PRS, de la siguiente forma: Añadir 1 g de Zinc metal, polvo PRS al líquido filtrado, agitar durante 2 horas de cuando en cuando, y filtrar. 7(b).6. Referencias. 7(b).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. A4, 6-8. 1969. 7(b).6.2. Jaulmes, P. “Analyse des vins”, pág. 176, 1951. 7(c). AZUCARES REDUCTORES (Valoración) 7(c).1. Principio. Eliminación de las materias reductoras distintas de los azúcares reductores por defecación, y posterior valoración basada en la acción reductora de los azúcares sobre una solución cupro-alcalina. 7(c).2. Material y aparatos. 7(c).2.1. Erlenmeyer de 300 ml con refrigerante de reflujo. 7(c).2.2. Material necesario para volumetría. 7(c).2.3. Baño de agua. 7(c).3. Reactivos. 131808 Acido Cítrico anhidro PA-ACS 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 211835 Piedra Pómez gránulos QP 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 131647 Sodio Carbonato 10-hidrato PA-ISO 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO 181723 Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV 7(c).3.1. Solución Cupro-Alcalina: Disolver por separado: 25 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO en 100 ml de Agua PAACS; 50 g de Acido Cítrico anhidro PA-ACS en 300 ml de Agua PA-ACS y 388 g de Sodio Carbonato 10-hidrato PA-ISO en 300-400 ml de Agua

TABLA 7(c).I Azúcares reductores, expresados en mg ml sodio tiosulfato 0,1N 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Primera cifra decimal 0 0,0 3,2 6,4 9,7 13,0 16,4 19,8 23,2 26,6 30,0 33,4 36,8 40,3 43,8 47,3 50,8 54,3 58,0 61,8 65,5 69,4 73,3 77,2 81,2 85,2 89,2 1 0,3 3,5 6,7 10,0 13,3 16,7 20,1 23,5 26,9 30,3 33,7 37,2 40,7 44,2 47,7 51,2 54,7 58,4 62,2 65,9 69,8 73,7 77,6 81,6 85,6 89,6 2 0,6 3,8 7,1 10,4 13,7 17,1 20,5 23,9 27,3 30,7 34,1 37,5 41,0 44,5 48,0 51,5 55,0 58,8 62,5 66,3 70,2 74,1 78,0 82,0 86,0 90,0 3 1,0 4,2 7,4 10,7 14,0 17,4 20,8 24,2 27,6 31,0 34,4 37,9 41,4 44,9 48,4 51,9 55,4 59,1 62,9 66,7 70,6 74,5 78,4 82,4 86,4 90,4 4 1,3 4,5 7,7 11,0 14,4 17,8 21,2 24,6 28,0 31,3 34,8 38,2 41,7 45,2 48,7 52,2 55,8 59,5 63,3 67,1 71,0 74,9 78,8 82,8 86,8 90,8 5 1,6 4,8 8,1 11,4 14,7 18,1 21,5 24,9 28,3 31,7 35,1 38,6 42,1 45,6 49,1 52,6 56,2 59,9 63,7 67,5 71,4 75,3 79,2 83,2 87,2 91,2 6 1,9 5,1 8,4 11,7 15,0 18,4 21,8 25,2 28,6 32,0 35,4 38,9 42,4 45,9 49,4 52,9 56,5 60,3 64,0 67,8 71,7 75,6 79,6 83,6 87,6 91,6 7 2,2 5,4 8,7 12,0 15,4 18,8 22,2 25,6 29,0 32,4 35,8 39,3 42,8 46,3 49,8 53,3 56,9 60,7 64,4 68,2 72,1 76,0 80,0 84,0 88,0 92,0 8 2,6 5,7 9,0 12,3 15,7 19,1 22,5 25,9 29,3 32,7 36,1 39,6 43,1 46,6 50,1 53,6 57,3 61,0 64,8 68,6 72,5 76,4 80,4 84,4 88,4 92,4 9 2,9 6,1 9,4 12,7 16,1 19,5 22,9 26,3 29,7 33,0 36,5 40,0 43,5 47,0 50,5 54,0 57,6 61,4 65,1 69,0 72,9 76,8 80,8 84,8 88,8 92,8

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PA-ACS caliente. Mezclar la solución de Acido Cítrico y la de Sodio Carbonato. Añadir a continuación la solución de Cobre II Sulfato y completar el volumen con Agua PA-ACS hasta un litro. 7(c).3.2. Solución de Potasio Yoduro al 30%. Conservar en frasco topacio. 7(c).3.3. Solución de Acido Sulfúrico al 25% en volumen. 7(c).3.4. Solución de Engrudo de Almidón de 5 g/l; contendrá 200 g/l de Sodio Cloruro PAACS-ISO para asegurar su conservación. Esta solución debe ser mantenida diez minutos en ebullición en el momento de su preparación. 7(c).3.5. Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV. 7(c).4. Procedimiento. Poner en el Erlenmeyer de 300 ml, 25 ml de la solución Cupro-Alcalina y 25 ml del vino previamente defecado según 7(a) o 7(b). Este volumen añadido no debe contener más de 60 mg de azúcares reductores. Añadir algunos granos de Piedra Pómez gránulos QP, y llevar a ebullición, que debe ser alcanzada en dos minutos, adaptando el Erlenmeyer al refrigerante de reflujo y mantener exactamente durante diez minutos la ebullición. Enfriar inmediatamente bajo corriente de agua fría. Añadir 10 ml de la solución de Potasio Yoduro al 30%, 25 ml de la solución de Acido Sulfúrico al 25% y 2 ml de Engrudo de Almidón. A continuación, valorar con Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV. Efectuar una prueba en blanco, sustituyendo los 25 ml del vino previamente defecados por igual volumen de Agua PA-ACS y tratar como se ha indicado antes para la muestra. 7(c).5. Cálculo. La cantidad de azúcar, expresada en azúcar invertido contenida en la muestra analizada, se obtiene en la tabla 7(c).1 en función del n’ - n de ml de tiosulfato utilizado. Siendo: n = Volumen, en ml, de sodio tiosulfato 0,1 N utilizados en la valoración de la muestra. n’ = Volumen, en ml, de sodio tiosulfato 0,1 N utilizados en la prueba en blanco. Expresar el contenido del vino en g de azúcar invertido por litro, teniendo en cuenta las diluciones efectuadas en el curso de la defecación del volumen de la muestra analizada.

8. GLICEROL (Glicerina) 8.1. Principio. La glicerina separada del vino, previa defecación, por extracción con acetona, se oxida con ácido peryódico a formaldehído. La reacción coloreada del formaldehído con la fluoroglucina permite la determinación espectrofotométrica a 480 nm. La presencia de sorbitol y de manitol son causa de error en la determinación de glicerina. 8.2. Material y aparatos. 8.2.1. Aparato de destilación. Compuesto de las siguientes partes: 8.2.1.1. Matraz esférico de 500 ml. 8.2.1.2. Columna rectificadora. 8.2.1.3. Columna Widmer con camisa de aislamiento. 8.2.1.4. Termómetro con escala de 0-110 C. 8.2.1.5. Refrigerante. 8.2.2. Frascos con tapón esmerilado de 1 l y de 60 ml. 8.2.3. Matraz aforado de 50 ml. 8.2.4. Matraz aforado de 200 ml. 8.2.5. Matraces con tapón esmerilado de 60 ml. 8.2.6. Matraces aforados de 100 ml. 8.2.7. Kitasato o recipiente para vacío de 250 ml. 8.2.8. Filtro de porosidad número 4. 8.2.9. Filtros de papel Schleicher et Schull 1574 de 12,5 cm de diámetro o similar. 8.2.10 Espectrofotómetro con cubetas de 1 cm de espesor interior. 8.3. Reactivos. 131007 Acetona PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 181059 Acido Sulfúrico 0,5 mol/l (1N) SV 131074 Agua PA-ACS 211160 Arena de Mar lavada, grano fino QP 131188 Bario Hidróxido 8-hidrato PA-ISO Fluoroglucina 0,2% 141339 Glicerina (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX 211456 Piedra Pómez gránulos QP 121523 Potasio meta-Peryodato PA 181691 Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 8.3.1. Bario Hidróxido 8-hidrato PA-ISO. 8.3.2. Arena de Mar lavada, grano fino QP 8.3.3. Acetona PA-ACS-ISO 8.3.4. Sodio Hidróxido 1N SV. 8.3.5. Piedra Pómez gránulos QP 8.3.6. Acido Sulfúrico 0,5 mol/l (IN) SV 8.3.7. Solución 0,05 M de Acido Peryódico. En un matraz aforado de 1 l, introducir 11,5 g de Potasio meta-Peryodato (KIO4) y aproximadamente unos 800 a 850 ml de Agua PA-ACS. Si la sal utilizada es K2H3IO6 se pesan 15,2 g. Añadir en seguida 15 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y calentar muy ligeramen-

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7(c).6. Referencia. 7(c).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V. A 4e 29-31.

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te en baño de agua hasta disolución completa. Enfriar a la temperatura ordinaria y llenar hasta volumen. 8.3.8. Solución de Fluoroglucina 0,2%. Esta solución debe ser renovada cada 15 días. 8.3.9. Solución madre de Glicerina. Diluir unos 20 ml de Glicerina PRS-CODEX a 100 ml. Determinar después la concentración exacta de esta solución midiendo su índice de refracción, y después, por diluciones convenientes y sucesivas, llevar su concentración a 0,1 g por l. 8.4. Procedimiento. Extraer los polioles y valorar la glicerina. 8.4.1. Separación de polioles.- Introducir en un matraz de 100 ml, de tapón esmerilado, 5 g de Bario Hidróxido 8-hidrato PA-ISO (no pulverizar), 5 g de Arena de Mar lavada, grano fino QP y 10 ml de vino, que se deja deslizar por la pared del matraz. Si el vino contiene más de 120 g de azúcar por litro, se opera sólo con 5 ml. Agitar enérgicamente durante 30 segundos y dejar en reposo, agitando de cuando en cuando. Añadir después 50 ml de Acetona PA-ACS-ISO y agitar otra vez durante 30 segundos. Llevar el matraz a un termostato a 45ºC durante 5 minutos, agitando enérgicamente cada minuto. Filtrar la solución caliente por un crisol filtrante de porosidad número 4 dispuesto sobre Kitasato de vidrio en el que se han puesto 40 ml de Agua PAACS y 5 ml de Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV. Lavar el residuo tres veces con Acetona PA-ACSISO, removiendo el precipitado con una espátula. Escurrir después el precipitado lo más posible. Trasvasar después este precipitado al matraz del aparato destilador, enjuagando bien el Kitasato con Acetona PA-ACS-ISO. Destilar la Acetona con llama fuerte, hasta que el termómetro marque 100ºC, y destilar después 20 ml más de Agua PA-ACS. Añadir al residuo de la destilación aún caliente, 5 ml de Acido Sulfúrico 0,5 mol/l (1N) SV, dejar enfriar y trasvasar a matraz aforado de 50 ml. Se enrasa con las aguas de lavado del matraz, agitar y filtrar por filtro de papel. 8.4.2. Valoración de la glicerina.- Esta operación hay que realizarla antes de las 2 o 3 horas siguientes a la separación de los polioles. Llevar una alícuota de 5 ml del filtrado anterior a matraz aforado de 100 ml y enrasar con Agua PAACS. Introducir 20 ml de esta dilución en un matraz de 60 ml con tapón esmerilado. Añadir 10 ml de solución de Acido Peryódico 0,05 M. Agitar y dejar en reposo 5 minutos. Añadir después sucesiva y rápidamente, deslizando a lo largo de la pared, las siguientes soluciones: 10 ml de Sodio Hidróxido 1mol/l (1N) SV y 10 ml de solución de Fluoroglucina. Agitar después de la adición de cada una de las soluciones. Llevar rápidamente la mezcla de soluciones a la cubeta del espectrofotómetro y medir la absorbancia a 480 nm en un minuto, porque la coloración violeta que se obtiene es muy fugaz. Ajustar el espectrofotómetro de forma que la solución obtenida, al sustituir en las operaciones anteriores los 5 ml de filtrado por 5 ml de Agua PAACS, dé una densidad óptica 0. 8.4.3. Obtención de la curva patrón. Diluir 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 ml de solución inicial de glicerina de 0,1 g por l, a 200 ml. Tomar después 20 ml de cada una de estas diluciones y 20 ml de la solución inicial, y llevar a fras-

TABLA 8.I FACTORES DE CORRECCION PARA EL CONTENIDO EN GLICERINA DE VINOS QUE CONTENGAN AZUCARES Contenido en azúcar g/l 5 10 20 30 40 50 60 70 Contenido en azúcar g/l 80 90 100 110 120 130 140 150

Factor 1,020 1,030 1,045 1,060 1,073 1,086 1,099 1,111

Factor 1,123 1,134 1,145 1,156 1,168 1,180 1,191 1,202

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cos de 60 ml con tapón esmerilado y tratar como en 8.4.2 para los 20 ml de la dilución del filtrado. Medir después las densidades ópticas correspondientes, ajustando el espectrofotómetro como en 8.4.2. Esta escala corresponde a riquezas en glicerina en 0,2 ml de vino, que varían de 0 a 2 mg 8.5. Cálculo. Calcular el contenido en glicerina expresado en g/l. P Glicerina = 50 —— f g/l V P = peso en g de glicerina obtenido de la curva patrón. V = volumen en ml de la muestra de vino. f = 1 para contenido de azúcar en vinos inferiores a 5 g/l. f = valor del factor de corrección según la tabla 8.I para contenidos de azúcar en vinos superiores a 5 g/l. 8.6. Referencia. 8.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A21, 1-9, 1969. 9. 2,3-BUTANODIOL 9.1. Principio. El 2,3-butanodiol separado del vino, previa defecación, por extracción con acetona, se oxida con ácido peryódico a acetaldehído. La reacción coloreada del acetaldehído con el sodio nitroprusiato y la piperidina permite la determinación espectrofotométrica a 570 nm. 9.2. Material y aparatos. 9.2. (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10), como 8.2. (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10). 9.3. Reactivos. 131007 Acetona PA-ACS-ISO Acido Peryodico 0,05 M 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 181059 Acido Sulfúrico 0,5 mol/l (1N) SV 131074 Agua PA-ACS 211160 Arena de Mar lavada, grano fino QP 121188 Bario Hidróxido 8-hidrato PA 124551 2,3-Butanodiol PA 211456 Piedra pómez granulos QP 162377 Piperidina PS 121523 Potasio meta-Peryodato PA 131633 Sodio Acetato anhidro PA-ACS 181691 Sodio Hidroxido 1 mol/l (1N) SV 121705 Sodio Nitroprusiano 2-hidrato PA 9.3. (1; 2; 3; 4; 5; 6 y 7), como 8.3. (1; 2; 3; 4; 5; 6 y 7). 9.3.8. Solución de Sodio Acetato al 27%.

9.3.9. Solución de Sodio Nitroprusiato al 2%. Conservar en la oscuridad y renovar semanalmente. 9.3.10. Solución de Piperidina al 10%. Renovar cada 15 días. 9.3.11. Solución madre de 2,3-Butanodiol. Utilizar 2,3-Butanodiol rectificado, desechando el primero y el último tercio. Pesar con exactitud 2 g y disolverlos en 1.000 ml. Diluir esta solución hasta 1/10. 9.4. Procedimiento. Extraer los polioles y valorar el 2,3-Butanodiol. 9.4.1. Separación de polioles. Como en 8.4.1. 9.4.2. Valoración del 2,3-Butanodiol. Esta operación hay que realizarla antes de las 2 o 3 horas siguientes a la separación de los polioles. Llevar a un matraz de 60 ml con tapón esmerilado 5 ml del filtrado, 5 ml de solución de Sodio Acetato al 27% y 10 ml de solución de Acido Peryódico 0,05M. Agitar y dejar 2 minutos en contacto. Añadir deslizando por las paredes del frasco: 5 ml de solución de Sodio Nitroprusiato al 2% y 5 ml de la solución de Piperidina al 10%. Agitar después de la adición de cada una de las soluciones. Llevar inmediatamente la solución a la cubeta de 1 cm y hacer la lectura en el espectrofotómetro a 570 nm. La coloración violeta que se obtiene con la reacción alcanza el máximo de intensidad a los 30-40 segundos y después disminuye rápidamente. Ajustar el espectrofotómetro de forma que la solución obtenida al sustituir en las operaciones anteriores los 5 ml de filtrado por 5 ml de Agua PAACS dé una densidad óptica 0. 9.4.3. Obtención de la curva patrón. Diluir 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70 ml de la solución inicial hasta 100 ml. Tomar 5 ml de cada una de estas diluciones y tratarlas como en 9.4.2 para los 5 ml del filtrado inicial. Determinar inmediatamente las densidades ópticas máximas correspondientes, ajustando el espectrofotómetro como en 8.4.2. Esta curva proporciona valores de contenido en 2,3-Butanodiol en 5 ml de vino que varían de 0 a 0,7 mg. 9.5. Cálculo. 9.5.1. Vinos con contenido en azúcar inferior a 5 g/l. La cantidad de 2,3-butanodiol en g/l de vino es igual a la cantidad de 2,3-butanodiol en mg contenido en 5 ml del filtrado. 9.5.2. Vinos cuyo contenido en azúcar está comprendido entre 5 y 120 g/l. La cantidad calculada según 9.5.1 se corrige sumando o restando el factor encontrado en la tabla 9.I. 9.5.3. Vinos con contenidos en azúcar superiores a 120 g/l.- (La defecación se realiza sobre 5 ml de vino). La cantidad calculada según 9.5.1 se corri-

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M
ge como en 9.5.2, utilizando sólo la mitad del contenido en azúcar. El resultado multiplicado por 2 es el contenido en 2,3-butanodiol en g/l de vino. 9.6. Referencia. 9.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A21, 1-9. 1969.

TABLA 9.I Correcciones a realizar para expresar el contenido en 2,3-butanodiol de vinos con azúcares Contenido en azúcar, g/l
10 -0,035 -0,03 -0,03 -0,03 -0,03 -0,03 -0,03 -0,02 -0,02 -0,01 -0,01 -0,01 0,00 0,00 +0,01 +0,01 +0,02 +0,02 +0,02 20 -0,035 -0,03 -0,03 -0,03 -0,03 -0,02 -0,02 -0,02 -0,01 -0,01 -0,01 0,00 +0,01 +0,01 +0,02 +0,03 +0,03 +0,04 +0,05 30 -0,035 -0,03 -0,03 -0,03 -0,02 -0,02 -0,02 -0,01 0,00 0,00 0,00 +0,01 +0,02 +0,02 +0,03 +0,04 +0,05 +0,06 +0,07 40 -0,035 -0,03 -0,03 -0,03 -0,02 -0,02 -0,01 -0,01 0,00 0,00 +0,01 +0,02 +0,03 +0,04 +0,05 +0,06 +0,07 +0,08 +0,10 50 -0,035 -0,03 -0,03 -0,02 -0,02 -0,01 -0,01 0,00 +0,01 +0,01 +0,02 +0,03 +0,04 +0,05 +0,06 +0,07 +0,09 +0,10 +0,12 60 -0,035 -0,03 -0,03 -0,02 -0,02 -0,01 -0,01 0,00 +0,01 +0,02 +0,03 +0,04 +0,05 +0,06 +0,07 +0,09 +0,10 +0,12 +0,14 70 -0,035 -0,03 -0,03 -0,02 -0,02 -0,01 0,00 +0,01 +0,01 +0,02 +0,03 +0,05 +0,06 +0,07 +0,09 +0,10 +0,12 +0,14 +0,15 80 -0,035 -0,03 -0,03 -0,02 -0,02 -0,01 0,00 +0,01 +0,02 +0,03 +0,04 +0,05 +0,07 +0,08 +0,10 +0,12 +0,13 +0,15 +0,17

Butanodiol g/l

0- 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2,0

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TABLA 9.I Correcciones a realizar para expresar el contenido en 2,3-butanodiol de vinos con azúcares Contenido en azúcar, g/l
Butanodiol g/l 0 - 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2,0 90 -0,035 -0,03 -0,03 -0,02 -0,01 -0,01 0,00 +0,01 +0,02 +0,04 +0,05 +0,06 +0,08 +0,09 +0,11 +0,13 +0,15 +0,17 +0,19 100 -0,035 -0,03 -0,02 -0,02 -0,01 -0,01 0,00 +0,01 +0,03 +0,04 +0,05 +0,07 +0,09 +0,10 +0,12 +0,14 +0,16 +0,18 +0,20 110 -0,035 -0,03 -0,02 -0,02 -0,01 0,00 0,00 +0,01 +0,03 +0,04 +0,05 +0,07 +0,09 +0,11 +0,13 +0,15 +0,18 +0,20 +0,22 120 -0,035 -0,03 -0,02 -0,01 0,00 0,00 +0,01 +0,02 +0,03 +0,05 +0,06 +0,08 +0,10 +0,12 +0,14 +0,16 +0,19 +0,21 +0,24 130 -0,035 -0,03 -0,02 -0,01 0,00 0,00 +0,01 +0,02 +0,03 +0,05 +0,07 +0,09 +0,11 +0,13 +0,15 +0,17 +0,20 +0,23 +0,26 140 -0,035 -0,03 -0,02 -0,02 0,00 0,00 +0,01 +0,03 +0,04 +0,06 +0,07 +0,09 +0,11 +0,13 +0,16 +0,18 +0,21 +0,24 +0,27 150 -0,035 -0,03 -0,02 -0,01 0,00 +0,01 +0,02 +0,03 +0,05 +0,07 +0,08 +0,10 +0,12 +0,14 +0 17 +0 19 +0,22 +0,25 +0,28

10(a). SACAROSA (Método cualitativo colorimétrico) 10(a).1. Principio. El vino se defeca por plomo acetato, magnesio y potasio permanganato a pH = 8-9. Se trata el defecado a 100°C con difenilamina en medio clorhídrico y acético. El producto de condensación obtenido en presencia de sacarosa se extrae por cloroformo que se colorea de azul. 10(a).2. Material y aparatos. 10(a).2.1. Baño de agua con temperatura controlada. 10(a).3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 121828 Difenilamina PA

121086 211276 131466 131527 131716 131252

Etanol absoluto PA Magnesio Oxido QP Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO Potasio Permanganato PA-ACS-ISO Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO

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10(a).3.1. Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACSISO. 10(a).3.2. Magnesio Oxido QP. 10(a).3.3. Potasio Permanganato al 2%. 10(a).3.4. Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO. 10(a).3.5. Reactivo de Difenilamina. A 10 ml de solución de Difenilamina PA al 10% en Etanol absoluto PA, añadir 20 ml de Acido Acético glacial PA-ACSISO y 70 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO.

M
Para comprobar la pureza de este reactivo añadir 2 ml de reactivo de Difenilamina y 2 ml de Agua PA-ACS, calentar en baño de agua hirviendo durante 5 minutos. Enfriar la solución bruscamente por inmersión en agua fría y extraer con 1 ml de Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO, no debiendo presentar el líquido extraído coloración azul. 10(a).4. Procedimiento. Disolver en 10 ml de Agua PA-ACS 100 a 200 mg de Magnesio Oxido QP y unos 200 mg de Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO. Llevar al baño de agua que se mantiene a 90-95°C durante 3 a 5 minutos. Añadir 2 ml del vino que debe estar limpio y con una riqueza en azúcar inferior al 1%. Diluir la muestra si la riqueza en azúcar es superior a la indicada como límite. Comprobar si la dosis de Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO es suficiente y no excesiva, lo que disminuiría la sensibilidad de la reacción. Para ello añadir gota a gota, al líquido que sobrenada, una solución concentrada de Plomo II Acetato, hasta que no se acuse enturbiamiento al caer la gota sobre el líquido. Añadir entonces solución saturada de Sodio Sulfato para eliminar el exceso de Plomo. Añadir 0,5 ml de la solución de Potasio Permanganato y mantener la mezcla en el baño de agua a 90-95° durante 10 minutos. Enfriar bruscamente por inmersión en agua fría, y filtrar. Puede aparecer una débil coloración amarilla, pero no influye en la reacción. Poner en un tubo de ensayo 2 ml del líquido filtrado, añadir 2 ml del reactivo de Difenilamina; mantener en baño de agua hirviendo, durante 5 minutos exactamente. Enfriar por inmersión en agua fría, añadir 1 ml de Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO y observar la coloración que se forma. 10(a).5. Expresión de los resultados. Los vinos secos no adicionados con sacarosa pueden dar una coloración gris-azulada muy ligera, pero, en presencia de sacarosa, aparece una franca coloración azul. Los vinos ricos en azúcar dan una coloración amarillo oro en ausencia de sacarosa, pero en presencia de ésta, la coloración es verde franco. Los resultados son sensibles para riquezas de sacarosa desde 0,2 mg. 10(a).6. Referencia. 10(a).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A-S, 1-2. 1969. 10(b). SACAROSA (Método cuantitativo) 10(b).l. Principio. La sacarosa se determina por la diferencia de los poderes reductores antes y después de la hidrólisis clorhídrica del líquido procedente de la defecación del vino. 10(b).2. Reactivos. 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 131687 Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO 10(b).2.1. Acido Clorhídrico 35% PA-ISO. 10(b).3. Procedimiento. Poner en dos matraces Erlenmeyer de 200 ml cada uno el mismo volumen del líquido de defecación, según las normas indicadas para el análisis de azúcares. La defecación se realiza como en 7(b) con eliminación previa del alcohol. Añadir a cada matraz un volumen de Acido Clorhídrico 35% PA-ISO a razón de 0,3 ml por 10 ml de líquido azucarado. En uno de los matraces añadir inmediatamente 0,3 ml de Sodio Hidróxido 12N (disolver Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS y ajustar a la concentración indicada), por cada 10 ml de líquido azucarado procediendo a la valoración de los azúcares reductores. Llevar el otro matraz con el contenido sin neutralizar a baño de agua hirviendo durante 2 minutos. Añadir entonces el mismo volumen de Sodio Hidróxido 12N que al otro matraz y valorar. 10(b).4. Cálculo. La diferencia entre las cantidades de azúcares reductores encontrada en los resultados de estas dos valoraciones, multiplicada por 0,95 da la riqueza en sacarosa de la muestra en estudio. Este resultado se expresa en g por l de vino, teniendo presentes las diluciones efectuadas eventualmente en el curso de la defecación y del volumen de la muestra de vino que se sometió a la defecación. 10(b).5. Referencia. 10(b).5.l. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A5, 4, 1969.-80 11. CENIZAS 11.1. Principio. Se denominan cenizas de un vino, al conjunto de los productos de incineración del residuo de evaporación de un volumen conocido del vino, realizada de manera que se puedan obtener todos los cationes (excepto amonio) en forma de carbonatos y otras sales minerales anhidras.

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11.2. Materiales y aparatos. 11.2.1. Horno eléctrico regulable. 11.2.2. Baño de agua y baño de arena. 11.2.3. Lámpara de infrarrojo. 11.2.4. Cápsula de platino o de cuarzo de 70 mm de diámetro y 25 mm de altura, fondo plano. 11.3. Procedimiento. Colocar 20 ml de vino en una cápsula tarada en balanza que aprecie 1/10 de mg. Evaporar con precaución en baño de agua, después de evaporar hasta consistencia siruposa, continuar el calentamiento sobre baño de arena con moderación y durante una media hora. Es conveniente ayudar a la evaporación con la aplicación de rayos infrarrojos hasta carbonización. Cuando ya no se desprendan vapores, llevar la cápsula al horno eléctrico a 525°C ± 25° y con aireación continua. Después de 5 minutos de carbonización completa, sacar la cápsula del horno, dejar enfriar y añadir 5 ml de agua que se evaporan en baño de agua, y llevar de nuevo al horno a 525°C. Si la combustión de las partes carbonosas no se consigue en 15 minutos, volver a comenzar la operación de adición de agua, evaporación y recalcinación. Cuando se trate de un vino rico en azúcares, se recomienda adicionar unas gotas de aceite puro vegetal al extracto, antes de comenzar la calcinación para impedir el desbordamiento de la masa del contenido. La duración de la primera carbonización deberá ser en este caso 15 minutos. Después de enfriar en el desecador cápsula y cenizas, se pesan. 11.4. Cálculo. Calcular el contenido en cenizas expresado en g/l. Cenizas = 50 P g/l P = peso en g de las cenizas contenidas en 20 ml de vino. Dar los resultados con una aproximación de 0,03 g/l. 11.5. Referencias. 11.5.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A6, 1. 1969. 11.5.2. “Métodos Oficiales de Análisis de Vinos”, pág. 106. Ministerio de Agricultura, 1956.

disolver en el mismo y en caliente, las cenizas, y empleando el anaranjado de metilo como indicador. 12.2. Material y aparatos. 12.2.1. Baño de agua. 12.2.2. Pipeta de 10 ml. 12.2.3. Varilla de vidrio. 12.2.4. Bureta de valoraciones. 12.3. Reactivos. 181061 Acido Sulfúrico 0,05 mol/l (0,1N) SV 171432 Anaranjado de Metilo solución 0,1% RE 181693 Sodio Hidróxido 0,1mol/l (0,1N) SV 12.3.1. Acido Sulfúrico 0,05 mol/l (0,1N) SV. 12.3.2. Anaranjado de Metilo solución 0,1% RE. 12.3.3. Sodio Hidróxido 0,1mol/l (0,1N) SV. 12.4. Procedimiento. Añadir a las cenizas ya pesadas, 10 ml de Acido Sulfúrico 0,05mol/l (0,1N) SV y llevar la cápsula a un baño de agua hirviendo durante un cuarto de hora, frotando varias veces el fondo de la cápsula con una varilla de vidrio para activar la disolución de las partículas difíciles de disolver. Añadir en seguida dos gotas de Anaranjado de Metilo solución 0,1% RE y valorar el exceso de Acido Sulfúrico con Sodio Hidróxido 0,1mol/l (0,1N) SV, hasta que el indicador vire a amarillo. 12.5. Cálculo. Calcular la alcalinidad de las cenizas expresadas en meq/l o en g/l de potasio carbonato. Alcalinidad de las cenizas = 5 (10 - V) meq/l Alcalinidad de las cenizas = 0,345 (10 - V) g/l de potasio carbonato. V = volumen en ml de sodio hidróxido 0,1N utilizados. Dar los resultados con una aproximación de 0,5 g por l en potasio carbonato. 12.6. Referencia. 12.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A7, 1-2, 1969. 13. FOSFATOS 13.1. Principio. Oxidación del vino, evaporación e incineración. Pre-cipitación del ácido fosfórico en ácido nítrico al estado de amonio fosfomolibdato. Esta sal se disuelve por acción de un exceso de sodio hidróxido 0,5N en presencia de formaldehído. Valoración del exceso de sodio hidróxido por ácido clorhídrico 0,5N en presencia de fenolftaleína.

12. ALCALINIDAD DE CENIZAS

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12.1. Principio. Se denomina alcalinidad total de cenizas la suma de los cationes, diferentes del amonio, combinados con los ácidos orgánicos del vino. La valoración se funda en la volumetría con ácido sulfúrico, valorando en retorno después de

M
13.2. Material y aparatos. 13.2.1. Cápsula de sílice de 70 mm de diámetro. 13.2.2. Baño de arena. 13.2.3. Horno de mufla. 13.2.4. Erlenmeyer de 500 ml. 13.2.5. Vasos de precipitados y elementos para volumetría. 13.2.6. Agitador mecánico. 13.3. Reactivos. 181022 Acido Clorhídrico 0,5 mol/l (0,5N) SV 121737 Acido Nítrico 53% PA 131074 Agua PA-ACS 131134 Amonio Molibdato 4-hidrato PA-ACS-ISO 131135 Amonio Nitrato PA-ACS-ISO 171327 Fenolftaleína solución 1% RE 131328 Formaldehído 36,5-38% p/v estabilizado con metanol PA-ACS 181692 Sodio Hidróxido 0,5mol/l (0,5N) SV 13.3.1. Solución de Acido Nítrico al 25% (d 1,153). Añadir a 440 ml de Acido Nítrico 53% PA Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. 13.3.2. Solución de Amonio Nitrato. Añadir, a 340 g de Amonio Nitrato PA-ACS-ISO, Agua PAACS hasta 1.000 ml. 13.3.3. Solución de Amonio Molibdato. Añadir, a 30 g de Amonio Molibdato 4-hidrato PA-ACS-ISO, Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. 13.3.4. Solución de lavado. 50 g de Amonio Nitrato PA-ACS-ISO, 40 ml de Acido Nítrico al 25% y Agua PA-ACS hasta 1 l. 13.4. Procedimiento. Evaporar a sequedad 100 ml de vino en cápsula de cuarzo en sucesivas adiciones. Añadir después 4 ml de Acido Nítrico 53% PA y calentar progresivamente en el baño de arena y después en el horno de mufla. Añadir a las cenizas 2 ml de Acido Nítrico 53% PA y evaporar a sequedad en el baño de agua para insolubilizar la sílice. Añadir 10 ml de Acido Nítrico al 25%; remover y arrastrar las cenizas a un filtro; lavar la cápsula y filtro con 5 ml del mismo ácido y después con 20-30 ml de Agua PA-ACS. Recoger el filtrado en un Erlenmeyer de unos 500 ml, adicionar 25 ml de solución de Amonio Nitrato de 340 g por l y agitar. Después añadir de una vez 80 ml de solución de Amonio Molibdato 3% y agitar mecánicamente durante 12 minutos a razón de 200 sacudidas por minuto. Decantar y filtrar por papel. Lavar luego el precipitado con 75 ml de líquido de lavado dos veces. Cada lavado no debe durar más de 10 minutos. Lavar 8 veces más con Agua PA-ACS. Colocar el filtro y el precipitado en un vaso con 50 ml de Sodio Hidróxido 0,5 mol/l (0,5N) SV. Añadir 12,5 ml de Formaldehído 36,5-38% p/v, estabilizado con metanol PA-ACS neutralizado en presencia de Fenolftaleína solución 1% RE, para disolver el precipitado de Fosfomolibdato. Escurrir el filtro y extender sobre la pared del vaso, por encima del líquido de la solución. Valorar el exceso de sodio hidróxido con Acido Clorhídrico 0,5 mol/l (0,5N) SV, hasta decoloración de la Fenolftaleína, habiendo sumergido al final nuevamente el filtro. 13.5. Cálculo. Calcular el contenido en fosfatos expresado en meq de ácido fosfórico (considerado como triácido), o en g de P 0 por l de vino. Fosfatos = 0,577 (50 - V) meq de ácido fosfórico. Fosfatos = 0,01365 (50 - V) g de P205 por l de vino. V = volumen en ml de solución de ácido clorhídrico 0,5N. Dar los resultados con una aproximación de 0,01 g/l.
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13.6. Referencia. 13.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A16, 1-2 1969. 14. CALCIO (Método complexométrico) 14.1. Principio. Valoración del calcio por complexometría sobre la solución nítrica o clorhídrica de las cenizas del vino. 14.2. Material y aparatos. 14.2. (1, 2, 3 y 4) como 11.2. (1, 2, 3 y 4). 14.2.5. Matraces Erlenmeyer de 1.000 ml. 14.2.6. Matraces Erlenmeyer de 100 ml. 14.3. Reactivos. 182318 Acido Clorhídrico 0,25 mol/l (0,25N) SV 182120 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV (Acido EDTA Na 2) (o preparar con 131669 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO) Acido a-Hidroxi-1-(2-Hidroxi-1-Naftilazo)-4-Naftalensulfónico, Sal Sódica (CALCON) 131074 Agua PA-ACS 182241 Calcio Cloruro 0,05 mol/l (0,05M) SV (o preparar con 121212 Calcio Carbonato precipitado PA) 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO 131687 Sodio Hidróxido 97% lentejas PA-ACS-ISO 14.3.1. Acido Clorhídrico 0,25 mol/l (0,25N) SV. 14.3.2. Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV. En su defecto añadir a 18,61 g de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO Agua PA-ACS hasta 1.000 ml y disolver.

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14.3.3. Lejía de Sodio Hidróxido al 40%. Añadir a 40 g de Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO Agua PA-ACS hasta 100 ml. 14.3.4. Indicador de Calcon. Mezclar 1 g de Acido a-Hidroxi-1-(2-Hidroxi-1-Naftilazo)-4-Naftalensulfónico, Sal Sódica con 100 g de Sodio Cloruro PA. 14.3.5. Calcio Cloruro 0,05 mol/l (0,05M) SV. En su defecto disolver 5,05 g de Calcio Carbonato precipitado PA en la cantidad necesaria de Acido Clorhídrico diluido y completar a 1 litro. Valorar esta solución por medio de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV en presencia de Calcon en la forma que luego se describe. 14.4. Procedimiento. Evaporar a sequedad en baño de agua hirviendo 50 ml de vino colocados en cápsulas preferentemente de platino. Incinerar el residuo como en 11. Disolver las cenizas en 8 ml de Acido Clorhídrico 0,25 mol/l (0,25N) SV, llevar a un matraz aforado de 50 ml; lavar varias veces la cápsula con Agua PA-ACS vertiéndola en el matraz. Enrasar y agitar. Tomar 20 ml de la solución de cenizas y calentar hasta ebullición, en un Erlenmeyer de unos 100 ml. Dejar enfriar y después añadir 0,5 ml de solución de Sodio Hidróxido al 40%, 10 ml de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV y 100 mg aproximadamente de indicador Calcon. Si el color de la mezcla es rojo-vinoso, añadir Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV en exceso hasta aparición de color azul-violeta. Evitar una cantidad de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV en exceso relativamente grande, que enmascara el punto de viraje. Valorar el exceso de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV añadiendo Calcio Cloruro 0,05 mol/l (0,05M) SV. El indicador Calcon virará de azul violeta a rojo-vinoso al final de la reacción. 14.5. Cálculo. Calcular el contenido en calcio como iones Ca en meq/l, o como iones Ca expresados en g/l. Calcio = (10 - V) 5 meq/l de ion Ca. Calcio = (10 - V) 0,1 g/l de ion Ca.

14.6.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A26, 2-3, 1969.

15. MAGNESIO 15.1. Principio. Valoración del magnesio por complexometría sobre la solución nítrica o clorhídrica de las cenizas del vino. 15.2. Material y aparatos. 15.2. (1, 2, 3 y 4), como 11.2. (1, 2, 3 y 4). 15.2. (5 y 6), como en 14.2. (5 y 6). 15.3. Reactivos. 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 182120 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV 181397 Magnesio Cloruro 0,l mol/l (0,1M) SV (diluir o preparar como se indica en 15.3.4) 211276 Magnesio Oxido QP (*) 171439 Negro de Eriocromo T (C.I. 14645) RE-ACS 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO 171730 Solución Tampón pH 10 RE (o preparar con 131121 Amonio Cloruro PA-ACS-ISO, 121129 Amoníaco 25% (en NH3) PA y 131074 Agua PA-ACS) 15.3.1 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV. Como en 14.3.2. 15.3.2. Solución Tampón pH 10 RE. En su defecto preparar disolviendo 50 g de Amonio Cloruro PA-ACS-ISO en 350 g de Amoníaco 25% (en NH3) PA y añadir Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. 15.3.3. Indicador Negro de Eriocromo T. Mezclar 1 g de Negro de Eriocromo T (C.I. 14645) RE-ACS, con 100 g de Sodio Cloruro PA-ACS-ISO. 15.3.4. Solución de Magnesio Cloruro 0,05M. En un matraz aforado de 1 l introducir 500 ml de Magnesio Cloruro 0,1mol/l (0,1M) SV, diluir y enrasar con Agua PA-ACS o preparar disolviendo 2,25 g de Magnesio Oxido QP en la cantidad necesaria de Acido Clorhídrico diluido y llevar después el volumen a 1 litro. Valorar esta solución con Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV (15.3.1) en presencia de Negro de Eriocromo T (15.3.3) como se indica a continuación. 15.4. Procedimiento. Tomar 20 ml de la solución de cenizas antes preparada, llevar a ebullición en un Erlenmeyer de unos 100 ml, dejar enfriar y añadir 10 ml de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV, 5 ml de Solución Tampón pH 10 RE, 50 mg aproximadamente de indicador Negro de Eriocromo T. Valorar después el exceso de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV

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V = volumen en ml de calcio cloruro 0,05M. 14.6. Referencias. 14.6.1. Castino, M. “Determinazione complessometrica del Calcio o del Magnesio nei vini”. Rivista de Viticoltura e di Enologia di Conegliano, 9, 1960.

M
con la solución de Magnesio Cloruro 0,05M. El indicador vira del azul al rojo vinoso. 15.5. Cálculo. Calcular el contenido en magnesio expresado en meq/l o en g/l de iones Mg. Magnesio = (V - V’) x 5 meq/l Magnesio = (V - V’) x 0,06075 g/l de iones Mg. V = volumen en ml de calcio cloruro 0,05M utilizado para valorar el exceso de ácido EDTA Na2 0,05M en la determinación del calcio (14.4). V’ = volumen en ml de solución de magnesio cloruro 0,05M. (*) El magnesio óxido del comercio está generalmente carbonatado, aun puro, por lo que debe calcinarse. Tomar 5 g en cápsulas de platino; llevar al rojo durante más de 30 minutos. Dejar enfriar y pesar los 2,25 g. 15.6. Referencias. 15.6.1. Castino, M. “Determinazione complessometrica del Calcio o del Magnesio nei vini”. Rivista di Viticoltura e di Enologia di Conegliano, 9, 1960. 15.6.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V., A26, 2-3, 1969. 121085 Etanol 96% v/v PA 132770 Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BTH PA-ACS-ISO 141076 Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS 211934 Hierro metal, granulado fino QP 121534 Potasio Tiocianato PA 141699 Sodio metal, barras PRS (o 121237 Carbón Activo polvo PA o 142367 Manganeso IV Oxido 85% precipitado PRS) 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA 16.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 16.3.2. Hidrógeno Peróxido de 10 volúmenes. Usese Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS y diluir convenientemente. 16.3.3. Eter Dietílico. Destilar el Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO antes de su empleo o bien mantenerlo en presencia de Sodio metal, barras PRS o Carbón Activo polvo PA o Manganeso IV Oxido 85% precipitado PRS. 16.3.4. Solución de Potasio Tiocianato. Añadir a 200 g de Potasio Tiocianato PA Agua PA-ACS hasta 1litro, y disolver. 16.3.5. Solución de Hierro III Cloruro de 0,1 g de Hierro metal, granulado fino QP por litro. Disolver 0,1 g de Hierro metal, granulado fino QP en 10 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO y 30 ml de Agua PA-ACS. Añadir 1 ml de Acido Nítrico 60% PA-ISO y hervir. Enfriar y añadir Agua PA-ACS hasta 1 litro. También puede prepararse la siguiente solución de Hierro. Disolver 0,863 g de Amonio Hierro III Sulfato 12-hidrato PA-ACS-ISO, 0,863 g de Amonio Cloruro PAACS-ISO (*) y 10 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACSISO en 100 ml de Agua PA-ACS y diluir hasta 1.000 ml. (*). En el original indica “amonio”, entendemos se trata de Amonio Cloruro. 16.3.6. Etanol de 20º. Usese Etanol 96% v/v PA y diluir convenientemente. 16.4. Procedimiento. 16.4.1. Determinación del hierro total. (Férrico + ferroso). 16.4.1.1. Vinos blancos o poco coloreados. Colocar 10 ml de vino en un tubo de 200 x 20 mm, añadir 1 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO, 5 gotas de Hidrógeno Peróxido y 1 ml de solucion de Potasio Tiocianato. A la aparición del color añadir 20 ml de Eter Dietílico, agitar para mezclar las dos fases sin emulsionar y dejar decantar 5 minutos. Determinar la absorbancia del líquido decantado en espectrofotómetro colorímetro a 508 nm. Ajustar el espectrofotómetro a cero, utilizando como prueba en blanco 10 ml de vino acidulados con 1 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO y diluidos con 1 ml de Agua PA-ACS. De esta forma se compen-

16. HIERRO (Método colorimétrico del sulfocianuro)

16.1. Principio. El hierro oxidado por el agua oxigenada se combina con el ion sulfociánico en medio clorhídrico. El color rojo se compara con escala patrón o se mide por espectrofotometría. Para los vinos tintos, el hierro sulfocianuro se extrae con éter. Para valorar solamente el hierro trivalente, se suprime la adición del agua oxigenada. 16.2. Material y aparatos. 16.2.1. Espectrofotómetro o colorímetro para lectura a 508 nm de longitud de onda. 16.2.2. Tubos de 200 x 20 mm. 16.2.3. Bola de decantación de 50 ml. 16.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131036 Acido Nitrico 60% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 131121 Amonio Cloruro PA-ACS-ISO 131365 Amonio Hierro lll Sulfato 12-hidrato PA-ACS-ISO

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sa la influencia del color del vino y de la posible aparición de color o del reavivado del vino, ambas coloraciones debidas a la acidez añadida al vino. Obtener una curva, procediendo en la forma anteriormente descrita y utilizando en vez de 10 ml de vino mezclas de 5 ml de alcohol de 20° y porciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 ml, completadas hasta 5 ml con Agua PA-ACS. Estas mezclas contendrán, respectivamente, 5,10, 15, 20 y 25 mg/l de hierro. 16.4.1.2. Vinos tintos.- Como en 16.4.1.1, pero utilizando sólo 0,2 ml de Acido Clorhídrico 37% PAACS-ISO. El exceso de acidez dificulta la extracción del hierro sulfocianuro por el éter. 16.4.2. Determinación del hierro trivalente. Como en 16.4.1, pero sin adicionar Hidrógeno Peróxido. 16.5. Cálculo. Calcular el contenido en hierro expresado en mg/l por comparación de la absorbancia con la curva patrón. 16.6. Observaciones. En lugar del éter algunos autores (16.7.2) recomiendan el empleo del etilo acetato, que no tiene el inconveniente de la posible presencia de peróxidos; sin embargo, en algunos vinos de intenso color de nuestro país se ha observado extracción de parte de la materia colorante con el etilo acetato, lo que no sucede con el éter. 16.7. Referencias. 16.7.1. Ribereau-Gayon, J., y Peynaud, E. “Analyse et Controle des Vins”, pág. 194, 1958. 16.7.2. Jaulmes, P.; Brun, S.; Tour, C.; Cabanis, J.C. “Dosage direct du fer dans les vins”. Société Pharmacie Montpellier, 24:2, 1964. 17. COBRE 17.1. Principio. El sodio dietilditiocarbamato reacciona con el cobre (reacción de Delepine), dando la sal correspondiente a este metal y coloración amarilla oro, cuya intensidad se mide por colorimetría o espectrofotometría. Para evitar interferencias debidas a la presencia de hierro y otros cationes polivalentes presentes en el vino se emplea la sal disódica del ácido etilendiaminotetraacético, que forma complejos solubles y muy estables a pH = 8. También puede utilizarse el amonio citrato para evitar la interferencia del hierro. 17.2. Material y aparatos. 17.2.1. Espectrofotómetro o colorímetro con filtro para longitud de onda de 420 nm.

17.2.2. Bola de decantación de unos 100 ml. 17.3. Reactivos. 131669 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO (Acido EDTA Na2 2-hidrato) (o 131120 di-Amonio Hidrógeno Citrato PA-ACS) 131074 Agua PA-ACS 121129 Amoníaco 25% (en NH3) PA 131245 Carbono Tetracloruro PA-ACS-ISO 131091 Metanol PA-ACS-ISO 131668 Sodio Dietilditiocarbamato 3-hidrato PA-ACS 17.3.1. Solución acuosa al 0,1% de Sodio Dietilditiocarbamato. 17.3.2. Suspensión de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica al 20%, o bien solución acuosa de Amonio Citrato al 20%. 17.3.3. Solución amoniacal al 15%. Diluir convenietemente el Amoníaco 25% (en NH3) PA con Agua PA-ACS. 17.3.4. Metanol PA-ACS-ISO. 17.3.5. Carbono Tetracloruro PA-ACS-ISO. 17.3.6. Agua bidestilada en vidrio. Utilizarla también para la preparación de reactivos. 17.4. Procedimiento. Poner en una bola de decantación 10 ml del vino, añadir 5 ml de una suspensión del Acido EDTA Na2 2-hidrato (o 5 ml de soluciónde Amonio Citrato) y llevar a pH 8 con la solución amoniacal. Añadir 1 ml de reactivo de Sodio Dietilditiocarbamato y 5 ml de Metanol PA-ACS-ISO (para evitar emulsión), y agitar durante 1 minuto. Extraer varias veces con Carbono Tetracloruro PA-ACS-ISO (agitando cada vez durante 1 minuto) hasta recoger 20 ml, cuidando que no pasen restos de agua, pues éstos dan enturbiamiento con el Carbono Tetracloruro PA-ACS-ISO. Si pasa alguna gota, filtrar por papel de filtro puro, quedando las trazas de agua en el papel. Determinar la absorbancia en el espectrofotómetro a 420 nm de longitud de onda. Para la prueba en blanco utilizar los mismos reactivos en las mismas proporciones, sustituyendo el volumen de vino por otro igual de Agua bidestilada en aparato de vidrio. La curva que previamente será construida a partir de lecturas correspondientes a escala de diferentes riquezas de cobre es una línea recta, por obedecer a la ley de Lamber-Beer. En el intervalo en que se opera con 1 ml de reactivo pueden valorarse 10 ppm de cobre; para valores superiores, se añadirán 2 ml o se toma menor volumen de muestra. 17.5. Cálculo. El valor obtenido para la absorbancia a 420 nm

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se lleva a la curva patrón y se expresa el correspondiente contenido en cobre en ppm. 17.6. Referencia. 17.6.1. Garoglio, P. G., y Stella, C. “Methodi ufficiali di analisi per i mosti, i vini e gli aceti”, pág. 75, 1958. 18. POTASIO (Fotometría de llama) 18.1. Principio. Se utiliza una solución de referencia con 100 mg de potasio por litro y con diversos aniones, cationes y materia orgánica en proporciones tales que den un compuesto similar a un vino diluido a 1/10 con agua. 18.2. Material y aparatos. 18.2.1. Fotómetro de llama y accesorios. 18.2.2. Pipetas de 10 ml. 18.2.3. Matraces aforados de 1.000 ml. 18.3. Reactivos. 131808 Acido Cítrico anhidro PA-ACS 131066 Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS Alilo Isotiocianato 121221 Calcio Cloruro anhidro 95% polvo PA 121085 Etanol 96% v/v PA 141339 Glicerina (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX 211794 Magnesio Cloruro 50% MgCl2 QP 121486 Potasio Hidrógeno Tartrato PA 131621 Sacarosa PA-ACS 131965 Sodio di-Hidrógeno Fosfato 1-hidrato PA-ACS 141859 Sodio Salicilato (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX 18.3.1. Solución de referencia. Disolver 481,3 mg de Potasio Hidrógeno Tartrato PA en 500 ml de Agua PA-ACS muy caliente y mezclar con una solución de 10 ml de Etanol 96% v/v PA, 700 mg de Aido Cítrico anhidro PA-ACS, 300 mg de Sacarosa PA-ACS, 1.000 mg de Glicerina (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX, 20 mg de Sodio di-Hidrógeno Fosfato 1-hidrato PA-ACS, 10 mg de Calcio Cloruro anhidro 95% polvo PA y 10 mg de Magnesio Cloruro 50% MgCl2 polvo QP en 400 ml de Agua PA-ACS. Completar con Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. Añadir dos gotas de Alilo Isotiocianato para conservación más segura de la solución. 18.3.2. Solución de dilución. Igual que la anterior, cambiando el Potasio Hidrógeno Tartrato PA por 383 mg de Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO. Para preparar la solución de referencia, comenzar por disolver 481,3 mg de Potasio Hidrógeno Tartrato PA en medio litro de Agua PA-ACS muy caliente y mezclar esta solución con los otros componentes, previamente disueltos en 400 ml de Agua PA-ACS; enrasar después a 1 litro exactamente. Para la conservación más segura de esta solución se añaden 2 gotas de Alilo isotiocianato. Con vinos dulces, añadir una cantidad de Sacarosa PA-ACS igual a la décima parte de la que contenga el vino. Añadir a la solución de referencia una cantidad de Sodio di-Hidrógeno Fosfato 1-hidrato PA-ACS equivalente al contenido en sodio del vino cuando este contenido sea superior al equivalente a 20 mg de Sodio di-Hidrógeno Fosfato 1-hidrato PA-ACS. En el caso del fraude por adición de 1 g/l de Sodio Salicilato, añadir 100 mg de Sodio Salicilato (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX por litro de la solución de referencia y de dilución. El Sodio Salicilato tiene una influencia muy marcada en el resultado del análisis. 18.4. Procedimiento. Regular el aparato y establecer una curva de calibración con la solución de referencia pura y con diversas diluciones de la solución de referencia diluida a 1/20, 1/10, 1/5, 1/2, con la solución de dilución. Diluir el vino a 1/10 con agua y hacer la determinación en el fotómetro. Si la lectura no queda comprendida entre los valores 40 y 100 de la escala del galvanómetro, diluir convenientemente el vino con solución de dilución. 18.5. Cálculo. Calcular el contenido en potasio expresado en g/l con una aproximación de ±0,02 g/l. Potasio = 10 L g/l L = valor correspondiente a la lectura de la escala del galvanómetro en la curva de calibración. 18.6. Referencia. 18.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A8, 1-6, 1969. 19. SODIO (Fotometría de llama) 19.1. Principio. Como en 18.1, referido a sodio. 19.2. Material y aparatos. Como en 18.2. 19.3. Reactivos. 131808 Acido Cítrico anhidro PA-ACS 131066 Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS Alilo Isotiocianato

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121221 121085 141339 211794 131621 131659 141859

Calcio Cloruro anhidro 95%, polvo PA Etanol 96% v/v PA Glicerina (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX Magnesio Cloruro 50% MgCl2 QP Sacarosa PA-ACS Sodio Cloruro PA-ACS-ISO Sodio Salicilato (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX

19.3.1. Solución de referencia.- Como en 18.3.1, sustituyendo los 20 mg de Sodio di-Hidrógeno Fosfato 1-hidrato PA-ACS por 50,84 mg de Sodio Cloruro PA-ACS-ISO. 19.3.2. Solución de dilución.- Como en 18.3.2, suprimiendo los 50,84 mg de Sodio Cloruro PAACS-ISO. 19.4. Procedimiento. Como en 18.4. Para la curva de calibración, utilizar la solución de referencia diluida a 1/20, 1/10, 1/2, 3/4. 19.5. Cálculo. Calcular el contenido en sodio expresado en g/l con una aproximación de ± 0,05 g/l. 19.6. Referencia. 19.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A25, 1-2, 1969. 20. ACIDEZ TOTAL 20.1. Principio. La acidez total de un vino se considera como la suma de los ácidos titulables cuando se lleva el vino a pH = 7 por adición de un licor alcalino valorado. El ácido carbónico y el anhídrido sulfuroso libre y combinado no se consideran comprendidos en la acidez total. El gas carbónico se elimina previamente del vino por agitación en frío y con vacío parcial. 20.2. Material y aparatos. 20.2.1. Potenciómetro con electrodo de vidrio. 20.2.2. Agitador magnético. 20.2.3. Puente con solución saturada de ClK para evitar la introducción del electrodo de calomelanos en el vino. 20.2.4. Kitasato de un litro. 20.2.5. Pipeta de 20 ml. 20.2.6. Vaso de 100 ml de capacidad. 20.2.7. Bureta de 50 ml. 20.3. Reactivos. 171495 Potasio Cloruro solución saturada RE 171694 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) RE 20.3.1. Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) RE.

20.4. Procedimiento. Poner 50 ml de vino en un Kitasato de 1l de capacidad, conectar al vacío agitando al mismo tiempo el matraz. El desprendimiento de CO2 se aprecia a los pocos momentos. Observar atentamente el momento en que dejan de desprenderse las burbujas, desconectar del vacío. Tomar 20 ml del vino sin CO2 y llevar a un vaso de unos 100 ml de capacidad, introducir el electrodo de vidrio en el vino y el de calomelanos en vaso lateral con Potasio Cloruro solución saturada RE. Disponer un puente de la misma solución en tubo de vidrio con los extremos uno en cada vaso estableciendo contacto. Poner en marcha el agitador y añadir desde bureta Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) RE al vino hasta que la aguja del potenciómetro marque pH = 7, manteniendo el agitador en marcha durante la operación, que no debe durar más de cinco minutos. 20.5. Cálculo. Calcular la acidez total expresada en meq/l con una aproximación de 0,1 meq/l o en g de ácido tartárico. V Acidez total = 10 —— - 0,35 V - 0,25 V” meq/l 2 V Acidez total = 0,75 ( —— - 0,035 V’ - 0,025 V”) g/l 2 de ácido tartárico. V = volumen en ml de sodio hidróxido 0,1N. V’ = volumen en ml de yodo 0,01N utilizado para la oxidación de anhídrido sulfuroso libre (21.-). V” = volumen en ml de yodo 0,01N utilizado para la oxidación del anhídrido sulfuroso combinado (21.-). 20.6. Referencias. 20.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. A10, 1-3, 1969. 20.6.2. Jaulmes, P. ”La mesure de l’acidité total des vins”. Annal des Falsifications et des Fraudes, 556, 1955. NOTA: Organismos como la American Society of Enologist y la Association of Official Analytical Chemist, aconsejan que el punto de viraje sea a pH 8,2 en lugar de 7,0 por tratarse de una valoración de ácidos débiles con una base fuerte.

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21. ACIDEZ VOLATIL 21.1. Principio. La acidez volátil está constituida por la parte de ácidos grasos pertenecientes a la serie acética que se encuentra en los vinos, ya sea en estado libre o de sal. Se determina mediante la separación de los ácidos volátiles por arrastre con vapor de agua y rectificación de los vapores. Se debe evitar con precaución la presencia de gas carbónico en el destilado. La acidez del anhídrido sulfuroso libre y combinado arrastrados con el destilado no deben comprenderse en la acidez volátil, por lo que hay que restar la equivalencia de su acidez de la del destilado, así como la del ácido sórbico eventualmente presente. Para estas correcciones se sigue la norma Jaulmes (21.7.2), en la que se considera como completa la influencia de SO2 libre y sólo la mitad de la del combinado. 21.2. Material y aparatos. 21.2.1. Aparato para destilación aislada (fig.21.I). 21.2.1.1. Matraz de generador de vapor de 3.500 ml. El agua condensada en el tubo de unión del matraz con el barbotador se purga por el purgador (c). 21.2.1.2. Barbotador (b).- Tubo cilíndrico de 3 cm de diámetro y 27 cm de altura. Este tubo reposa sobre un disco de amianto de 15 cm de diámetro, con un orificio central de 29 mm. El tubo (d) por el que entra el vapor en el barbotador debe llegar a 1 cm del fondo. 21.2.1.3. Columna rectificadora (e) .- Constituida por un tubo cilíndrico de 20 mm de diámetro y 50 cm de altura, conteniendo una hélice de tela de acero inoxidable número 100 plegada, con 15 mm de paso. 21.2.1.4. Refrigerante de West (f).- De 40 cm de longitud activa, colocado verticalmente. 21.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131066 Acido L (+)-Tartárico PA-ACS-ISO 171073 Agua de Cal solución saturada RE (o 171071 Agua de Barita solución saturada RE) 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 121085 Etanol 96% v/v PA 131325 Fenolftaleína PA-ACS 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 131644 di-Sodio tetra-Borato 10-hidrato PA-ACS-ISO 181694 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV 181969 Yodo 0,01 mol/l (0,02N) SV 21.3.1. Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV. 21.3.2. Solución de Fenolftaleína al 1% en Etanol 96% v/v PA. Usese Fenolftaleína PA-ACS y diluir convenientemente. 21.3.3. Solución de Yodo 0,01N. Diluir Yodo 0,01 mol/l (0,02N) SV con Agua PA-ACS a 1:1 y determinar el factor. 21.3.4. Almidón soluble RE. 21.4. Procedimiento. Alimentar el generador de vapor con Agua de Cal solución saturada RE o Agua de Barita solución saturada RE limpia, manteniéndolo lleno hasta unos 2/3 de su volumen. Poner en el barbotador 20 ml del vino exento de gas carbónico como en 20.4. Añadir al vino unos 0,5 g de Acido L(+)-Tartárico PAACS-ISO, poner en marcha el generador de vapor, manteniendo abierta la salida del tubo purgador del vapor; después de cerrar ésta, calentar el barbotador. Durante la operación se regula el calentamiento de forma que el volumen de líquido en el barbotador no pase sensiblemente de los 20 ml iniciales. Destilar en unos 12-15 minutos 250 ml. Valorar con Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV en presencia de dos gotas de Fenolftaleína como indicador. Valorar el sulfuroso libre en este destilado, añadiendo al terminar la anterior valoración una gota de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO, para acidular nuevamente y valorar el SO2 libre con solución de Yodo 0,01N, añadiendo también 2 ml de Almidón soluble RE como indicador y un cristal de Potasio Yoduro PA-ISO. Para determinar el Acido Sulfuroso combinado con el Acetaldehído, añadir 20 ml de solución saturada de di-Sodio tetra-Borato 10-hidrato PA-ACSISO (el líquido toma un color rosa pálido) y valorar nuevamente con solución de Yodo 0,01N. 21.5. Cálculo. Calcular la acidez volátil expresada en meq/l, con una aproximación de 0,2 ml, o en g/l de ácido sulfúrico o de ácido acético, con una aproximación de 0,1 g/l. Acidez volátil = 5 (V - V’/10 - V”/20) meq/l 0,49 Acidez volátil = ——— (V - V’/10 - V”/20) g/l de 2 ácido sulfúrico. 0,6 Acidez volátil = ——— (V - V’/10 - V”/20) g/l de 2 ácido acético. V = volumen en ml de sodio hidróxido 0,1N. V’= volumen en ml de yodo 0,01N utilizado en la oxidación del anhídrido sulfuroso libre. V”= volumen en ml de yodo 0,01N utilizado en la

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oxidación del anhídrido sulfuroso combinado con el acetaldehído. 21.6. Observaciones. En la destilación del vino para la determinación de la acidez volátil el ácido sórbico pasa casi en su totalidad al destilado, junto con el ácido acético, falseando el resultado del análisis. Para corregir el resultado, determinar el ácido sórbico en el destilado como en 29, procediendo en la siguiente forma simplificada: tomar 0,5 ml del destilado de la acidez volátil, llevar a la cubeta de 1 cm de espesor interno, añadir 1,5 ml de la solución (a), dejar la cubeta al aire durante unos minutos y medir después la absorbancia en el espectrofotómetro a 256 nm. Graduar el espectrofotómetro con 0,5 ml de la solución (b) y 1,5 ml de la solución (a). 21.7. Referencias. 21.7.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V. All, 1-4, 1969. 21.7.2. Jaulmes, P. Analyse des Vins, 2a. ed., 1951.

22. ACIDO SORBICO EN EL DESTILADO PARA ACIDEZ VOLATIL 22.1. Principio. En la destilación del vino para la determinación de la acidez volátil el ácido sórbico pasa casi en su totalidad al destilado junto con el ácido acético, falseando el resultado del analísis. Para valorar este ácido sórbico se parte de una muestra de 0,5 ml de destilado (lo que no supone un error sensible) y se valora por espectrofotometría en el ultravioleta. 22.2. Material y aparatos. 22.2.1. Espectrofotómetro ultravioleta. 22.2.2. Cubetas de cuarzo de 1 cm. 22.2.3. Pipetas de 0,5 ml y 1,5 ml. 22.3. Reactivos. 141055 Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX 131074 Agua PA-ACS 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 121531 Potasio Sorbato PA 121638 Sodio Hidrógeno Carbonato PA

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Figura 21.I.- Aparato para destilación aislada

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22.3.1. Solución a): Mezclar 0,5 g de Sodio Hidrógeno Carbonato PA con 0,001 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO y añadir Agua PAACS hasta un litro. 22.3.2. Solución b): Llevar 20 mg de Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX a matraz de un litro que contenga 900 ml de Agua PA-ACS caliente, agitar, dejar enfriar y enrasar a un litro. En vez de Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX puede emplearse 26,8 g de Potasio Sorbato PA. 22.4. Procedimiento. Tomar 0,5 ml del destilado de la acidez volátil, llevar a la cubeta de 1 cm de espesor interno, añadir 1,5 ml de la solución a), dejar la cubeta al aire durante unos minutos y medir después la absorbancia en el espectrofotómetro a 256 nm. Graduar el espectrofotómetro con 0,5 ml de la solución b) y 1,5 ml de la solución a). 22.5. Cálculo. Un gramo de ácido sórbico corresponde a 8,92 ml de solución normal y a 0,438 g de ácido sulfúrico. Para todo vino adicionado con 200 mg de ácido sórbico por litro la corrección sustractiva que corresponde hacer a la acidez volátil es de 1,7 meq o 0,088 g del ácido sulfúrico o 0,107 g de ácido acético por litro de vino. 22.6. Referencia. 22.6.1.Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. All, 3. 23. ACIDEZ FIJA 23.1. Principio. Se considera convencionalmente como acidez fija la diferencia entre acidez total y acidez volátil, ambas expresadas en ácido tartárico. No es necesario hacer las correcciones por eventual presencia de anhídrido sulfuroso combinado y libre. 24(a). ACIDO TARTARICO TOTAL (Método del calcio racemato) 24(a).1. Principio. Adición al vino de ácido tartárico levógiro que en unión con el ácido tartárico dextrógiro del vino y en presencia de solución de calcio, forman en condiciones determinadas calcio racemato insoluble. En el método adoptado se determinan las condiciones de precipitación del calcio racemato, fijando la solubilidad del calcio tartrato levógiro (que también se forma) y las del calcio racemato en función del pH y de la riqueza en iones de calcio. Con estos datos se ha fijado un pH conveniente para que precipite el calcio racemato y se solubilice el tartrato levógiro. 24(a).2. Material y aparatos. 24(a).2.1. Vaso cilíndrico de 600 ml. 24(a).2.2. Filtros de porosidades números 4 y 2. 24(a).2.3. Kitasato y trompa de agua para vacío. 24(a).2.4. Material accesorio para una volumetría. 24(a).3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131066 Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS Amonio D(-)-Tartrato 121212 Calcio Carbonato precipitado PA 24(a).3.1. Solución de Calcio Acetato de 10 g de Calcio por litro. Mezclar en matraz aforado de 1.000 ml 25 g de Calcio Carbonato precipitado PA con 40 ml de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO y enrasar con Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. 24(a).3.2. Calcio Racemato cristalizado. En un vaso, introducir 20 ml de una solución de Acido L(+)-Tartárico de 5 g por litro, 100 ml de Agua PAACS, 20 ml de una solución de Amonio Tartrato levógiro de 6,126 g por litro y 6 ml de la solución de Calcio Acetato. Dejar precipitar durante dos horas. Recoger el precipitado sobre un filtro de porosidad número 4, lavando y arrastrando cuatro veces. Secar en estufa a 70° hasta peso constante. Se obtienen unos 340 mg de Calcio Racemato cristalizado. Conservar en frasco tapado. 24(a).3.3. Licor de precipitación. Introducir en matraz aforado de 1.000 ml 150 g de Amonio D(-)Tartrato levógiro, 8,8 ml de solución de Calcio de 10 g/l y enrasar con Agua PA-ACS. Por ser el Calcio Racemato ligeramente soluble en este licor, conviene saturarlo antes de su empleo, añadiendo 5 g de Calcio Racemato a un litro de este licor. Agitar durante 12 horas y filtrar. 24(a).4. Procedimiento. 24(a).4.1. Precipitación del Racemato.- En un vaso cilíndrico de 600 ml introducir 500 ml de licor de precipitación y 10 ml de vino. Mezclar y dejar precipitar durante 24 horas. 24(a) 4.2. Valoración gravimétrica.- Filtrar sobre filtro poroso número 2, tarado y puesto sobre el Kitasato, recogiendo el precipitado. Lavar el vaso en el que se ha efectuado la precipitación y arrastrar las últimas partículas de precipitado con el líquido ya filtrado. Secar en estufa a 70° hasta peso constante. 24(a).5. Cálculo. Calcular el ácido tartárico expresado en g/l de vino o en g de potasio bitartrato. Acido tartárico = 28,84 x P g/l

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Acido tartárico = 36,15 x P g de potasio bitartrato. P = peso en g del calcio racemato, cristalizado con cuatro moléculas de agua. 24(a).6. Referencia. 24(a).6.1. Jaulmes, P.; Brum, S.; Cabanis, J. “Comunicación número 304 de Métodos de Análisis de Vinos”. 0. I. V., 1969. 24(b). ACIDO TARTARICO TOTAL (Método complexométrico) 24(b).1. Principio. Como en 24(a).1. 24(b).2. Material y aparatos. 24(b).2. (1, 2, 3, 4) como 24 (a) .2. (1, 2, 3, 4). 24(b).3. Reactivos. 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 182120 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV (Acido EDTA Na2 0,05M SV) (o preparar con 131669 Acido EDTA Na2 2-hidrato PA-ACS-ISO) 131074 Agua PA-ACS 211276 Magnesio Oxido QP 171439 Negro de Eriocromo T (C.I. 14645) RE-ACS 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO 181691 Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 272172 Tampón, Solución pH 9,00 ±0,02 (20ºC) ST (o preparar con 131121 Amonio Cloruro PA-ACS-ISO, 121129 Amoníaco 25% (en NH3) PA y Agua PA-ACS) 24(b).3.1. Solución Tampón pH 9,00 ±0,02 (20ºC) ST, o preparar mezclando 54 g de Amonio Cloruro PA-ACS-ISO, 350 ml de Amoníaco 25% (en NH3) PA y completar con Agua PA-ACS hasta un litro. 24(b).3.2. Indicador de Negro de Eriocromo T. Mezclar 1 g de Negro de Eriocromo T (C.I. 14645) RE-ACS con 100 g de Sodió Cloruro PA-ACS-ISO. 24(b).3.3. Solución de Magnesio 0,05M. Disolver 2,25 g de Magnesio Oxido QP (para asegurar que no esté carbonatado se recomienda calcinar 5 g de Magnesio Oxido QP al rojo en horno eléctrico durante 30 minutos, enfriar y pesar 2,25 g). Hacer la disolución en cantidad necesaria de Acido Clorhídrico diluido (10%) y luego se enrasa a un litro. Valorar esta solución con Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV en presencia de Negro de Eriocromo T. 24(b).3.4. Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV. En su defecto disolver 18,61 g de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO en 1 litro de Agua PA-ACS.

24(b).3.5. Acido Clorhídrico diluido a 1/5 (v/v). Diluir Acido Clorhídrico 35% PA-ISO con Agua PAACS. 24(b).3.6. Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV. 24(b).4. Procedimiento. Disolver en 10 ml de Acido Clorhídrico diluido el precipitado de Racemato recogido sobre el crisol filtrante. Lavar el crisol filtrante con unos 50 ml de Agua PA-ACS. Añadir un volumen de Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV suficiente para neutralizar la solución (unos 20-22 ml). Añadir después 5 ml de Solución Tampón pH = 9, 5 ml de sal de magnesio 0,05M y 50 mg de indicador Negro de Eriocromo T. Valorar con Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 0,05 mol/l (0,05M) SV. 24(b).5. Cálculo. Acido tartárico en g/l de vino = (V - 5) 3,75. Acido tartárico expresado en g/l de potasio bitartrato = (V - 5) 4,70. V = volumen en ml de ácido EDTA Na2 0,05M. La expresión de los resultados será en potasio bitartrato y con una aproximación de 0,5 miliequivalentes por litro, o de 0,05 g / l. 25. ACIDO LACTICO 25.1. Principio. Aislamiento del ácido láctico mediante columna de resinas cambiadoras de aniones, oxidación a acetaldehído y valoración colorimétrica por la reacción coloreada del acetaldehído con la piperidina. 25.2. Material y aparatos. 25.2.1. Espectrofotómetro y accesorios. 25.2.2. Tubo de vidrio o bureta de 10-11 mm de diámetro y 30 cm de longitud con llave en la parte inferior. 25.2.3. Lana de Vidrio, lavada QP. 25.2.4. Resina Lewatit ® MP 600 (*) (aniónica fuerte l) 25.3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131034 Acido L(+)-Lactico 85% PA-ACS 182105 Acido Sulfúrico 1 mol/l (2N) SV 131074 Agua PA-ACS 121248 Cerio IV Sulfato 4-hidrato PA 211376 Lana de Vidrio lavada QP 162377 Piperidina PS Resina Lewatit ® MP 600 (aniónica fuerte I) 131633 Sodio Acetato anhidro PA-ACS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 181691 Sodio Hidróxido 1mol/l (1N) SV 121705 Sodio Nitroprusiano 2-hidrato PA 131716 Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO 141717 Sodio Sulfito anhidro PRS

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25.3.1. Solución de Cerio IV Sulfato 0,1M en Acido Sulfúrico 0,7N. Disolver en frío 40,431 g de Cerio IV Sulfato 4-hidrato PA en 350 ml de Acido Sulfúrico 1 mol/l (2N) SV exactamente valorado. No calentar, pues se formaría un cerio IV óxido insoluble. Llevar la solución a 1.000 ml con Agua PA-ACS. 25.3.2. Solución valorada de Sodio Hidróxido 2,5N. Disolver Sodio Hidróxido lentejas PA-ACSISO en Agua PA-ACS, ajustar a la concentración indicada y determinar el factor. 25.3.3. Solución de Sodio Acetato al 27%. Disolver 270 g de Sodio Acetato anhidro PA-ACS en Agua PA-ACS y completar 1.000 ml. 25.3.4. Acido Sulfúrico 1 mol/l (2N) SV. 25.3.5. Solución de Sodio Nitroprusiato al 2%. Disolver 2 g de Sodio Nitroprusiato 2-hidrato PA en Agua PA-ACS, después completar a 100 ml. Conservar tapado en la oscuridad. La solución no debe tener más de ocho días. 25.3.6. Solución de Piperidina al 10%. Llevar a un matraz de 100 ml, 10 ml de Piperidina PS y enrasar a 100 ml con Agua PA-ACS. (*). En el original indica “resina cambiadora de aniones”. Consideramos apropiada la aniónica fuerte I. 25.4. Procedimiento. 25.4.1. Preparación de la columna de resinas aniónicas. Colocar Lana de Vidrio lavada QP en el fondo del tubo o bureta 25.2.2, formando tapón de 2-3 mm de altura proximadamente, añadir Agua PAACS hasta una altura de unos 5 mm sobre el tapón de Lana de Vidrio, lavada QP. Añadir después la Resina Lewatit ® MP 600, que estará conservada en Acido Acético glacial al 30%, agitar esta suspensión y añadir rápidamente un volumen de unos 10 ml. Dejar sedimentar y después depositar en la superficie un tapón de Lana de Vidrio lavada QP que se conduce a través del líquido sin resinas con una varilla de vidrio. La Resina Lewatit ® MP 600 no sirve más que para una sola vez. 25.4.2. Aislamiento del Acido Láctico. Abrir la llave inferior de la columna y dar salida al Acido Acético diluido hasta unos 2-3 ml por encima del tapón de lana superior. Añadir unos 10 ml de Acido Acético al 0,5%, vaciar hasta igual altura y repetir estos lavados cuatro veces. Después del último lavado, y con llave cerrada, adicionar 10 ml del vino y señalar la altura alcanzada, con lápiz graso. Dejar salir goteando el vino a razón de 1-1,5 gotas por segundo (25-30 ml por minuto). Vaciar hasta el nivel del tapón de Lana de Vidrio lavada QP superior. Llenar de nuevo la columna con Acido Acético al 0,5% hasta la señal de lápiz graso. Dejar salir a la misma velocidad que la vez anterior y lavar después en la misma forma siete veces, cada vez con 10 ml de Agua PA-ACS. Al terminar el último lavado, cerrar la llave cuando el nivel del líquido se encuentre un poco más arriba del tapón de Lana de Vidrio lavada QP superior. Colocar un matraz receptor aforado de 100 ml. Eluir los ácidos fijados en el cambiador de aniones mediante adiciones de solución de Sodio Sulfito 0,5M (prepararlo disolviendo Sodio Sulfito anhidro PRS en Agua PA-ACS), hasta la señal trazada en el tubo. Resulta práctico, para realizar esta operación, colocar un frasco con la solución de Sodio Sulfito unido por el cuello a la columna mediante un manguito de caucho y con unas pinzas para regular la caída del líquido en la bureta o tubo. Puestos así en comunicación los dos aparatos (frasco y bureta o tubo), abrir las pinzas del caucho de unión y la llave inferior, dejando caer el líquído a la bureta hasta unos 10 cm de altura, y sin que queden huecos vacíos. Se regula la salida del líquido a la proporción de 2-3 gotas por segundo, para llenar el matraz receptor hasta el enrase. 25.4.3. Valoración del Acido Láctico. Introducir 10 ml del eluido en un tubo de ensayo de paredes que no sean gruesas y de unos 50 ml de capacidad con tapón. Añadir 10 ml del reactivo de Cerio IV Sulfato. Agitar e introducir el tubo de ensayo en un termostato a 65°C durante 10 minutos exactamente. Inmediatamente después de la inmersión en el líquido, destapar durante unos segundos, para dar salida al aire dilatado. Cerrar rápidamente con el tapón para evitar pérdidas del Acetaldehído formado. Después de 10 minutos, retirar y enfriar el tubo con agua corriente hasta la temperatura de 20°C. Añadir 5 ml de la solución de Sodio Hidróxido 2,5N, mezclar bien y filtrar. Tomar 15 ml del filtrado y verterlos en probeta de tapón esmerilado de 50 ml de capacidad, que contenga 5 ml de solución de Sodio Acetato al 27% y 2 ml de Acido Sulfúrico 1 mol/l (2N) SV. Añadir además 5 ml de solución de Sodio Nitroprusiato y mezclar bien. Añadir después 5 ml de solución de Piperidina, mezclar rápidamente, introducir en seguida en la cubeta del espectrofotómetro de 10 mm de espesor. Medir la coloración producida, que varía, de verde a violeta, con relación al aire a la longitud de onda de 570 nm. Esta coloracion aumenta al principio, pero disminuye en seguida rápidamente. Tomar como valor definitivo el valor máximo de la lectura de absorbancia. Si el eluido es muy rico en Acido Láctico y la densidad óptica es muy elevada, diluir el eluido con solución de Sodio Sulfato al 7,1%. 25.4.4. Curva patrón. Tomar 10 ml de una solución de Acido Láctico 1N exacta, y añadir 10 ml de Sodio Hidróxido 1mol/l (1N) SV y completar a un litro con solución de Sodio Sulfato al 7,1%. Tomar 5, 10, 15, 20 y 25 ml, respectivamente, e introducir cada alícuota en un matraz aforado de 100 ml. Enrasar con solución de Sodio Sulfato al 7,1%.

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Mezclar bien, tomar 10 ml de las soluciones así obtenidas y determinar los valores de las absorbancias respectivas. Las diferentes soluciones corresponden a eluido del vino conteniendo 0,45; 0,90; 1,35; 1,80 y 2,25 g/l de Acido Láctico. La representación gráfica de las absorbancias de estas soluciones en función de la riqueza en Acido Láctico, es una recta. 25.5. Cálculo. Llevar los valores de absorbancia obtenidos a la curva patrón y deducir los correspondientes contenidos en ácido láctico expresados en g/l. 25.6. Observaciones. Si el vino tiene más de 250 mg por litro de sulfuroso total, el resultado puede ser erróneo, por la presencia de ácido aldehído sulfuroso. En determinaciones de precisión, conviene realizar una corrección en la forma siguiente: Tomar 15 ml de eluido y llevar a probeta de tapón esmerilado, en la que se habrá añadido 5 ml de sodio acetato al 27% y 2 ml de ácido sulfúrico 1,55N (77,5 ml de ácido sulfúrico 2N diluidos a 100 ml con agua destilada). Añadir 5 ml de sodio nitroprusiato al 2% y 5 ml de piperidina al 10%. Mezclar y hacer la determinación espectrofotométrica a 570 nm que da el factor de corrección: L = L’ - C x 0,25 L = contenido real de ácido láctico expresado en g/l. L’ = contenido aparente de ácido láctico expresado en g/l. C = factor de corrección en g/l. 25.7. Referencia. 25.7.1. Rebelein, M. “Deutsche Lebens-mittel Rudshan”, 2: 36-41, 1961, y 59: 131, 1963. 26. ACIDO CITRICO 26.1. Principio. El ácido cítrico es fijado junto con los otros ácidos del vino por una resina cambiadora de aniones. Después se procede a la elución, la que se realiza fraccionadamente y separando el ácido citromálico que es causa de error en la valoración del ácido cítrico. El ácido cítrico es transformado por oxidación cuidadosa en acetona, la que se separa por destilación. El etanal arrastrado se oxida a ácido acético y se valora sola la acetona por yodometría.

26.2. Material y aparatos. 26.2.1. Columna cambiadora de aniones. En una bureta de llave de 25 ml de capacidad, colocar un tapón de Lana de Vidrio, lavada QP en el fondo y verter 20 ml de Resina Dowex 1 x 2. Someter la Resina a dos ciclos completos de regeneración con pasos alternos de Acido Clorhídrico 1mol/l (1N) SV y Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV. Lavar después con 50 ml de Agua PA-ACS, agitando la Resina Dowex cuando los primeros ml de Agua PA-ACS pasan por la columna para despegarla del fondo de la bureta. Saturar la Resina de iones acetato, mediante el paso de 250 ml de una solución de Acido Acético 4N. Lavar luego con 100 ml de Agua PA-ACS. 26.2.2. Aparato para la oxidación. Aparato compuesto de matraz de cuello largo, atravesado lateralmente por el tubo afilado de embudo con llave, y en comunicación con refrigerante, según dimensiones y forma del diseño (fig. 26.I). 26.3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 181021 Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV 131032 Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 121793 Hierro II Sulfato 2-hidrato PA 211376 Lana de Vidrio, lavada QP 131413 Manganeso II Sulfato 1-hidrato PA-ACS 211456 Piedra Pómez gránulos QP 131509 Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO 131527 Potasio Permanganato PA-ACS-ISO 182114 Potasio Permanganato 0,01 mol/l (0,05N) SV Resina DOWEX 1 x 2 (50-100 mallas) 181691 Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 182158 Sodio Hidróxido 2 mol/l (2N) SV 182159 Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV 181723 Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV 181969 Yodo 0,01 mol/l (0,02N) SV 26.3.1. Resina Dowex 1 x 2 (50-100 mallas) 26.3.2. Solución de Acido Acético 4N. Diluir Acido Acético glacial PA-ACS-ISO con Agua PAACS a la concentración indicada y determinar el factor. 26.3.3. Solución de Acido Acético 2,5N. Diluir Acido Acético glacial PA-ACS-ISO con Agua PAACS a la concentración indicada y determinar el factor. 26.3.4. Sodio Hidróxido 2 mol/l (2N) SV. 26.3.5. Acido Sulfúrico diluido al 1/5 (v/v). Diluir Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS. 26.3.6. Solución Tampón pH = 3,2-3,4. En un matraz aforado de 1 l introducir 150 g de Potasio diHidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO y 5 ml de Acido

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orto-Fosfórico (d = 1,689) y enrasar con Agua PAACS. (Diluir Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS hasta obtener la densidad indicada) 26.3.7. Solución de Manganeso Sulfato de 50 g/l. Disolver Manganeso II Sulfato 1-hidrato PA-ACS en Agua PA-ACS. 26.3.8. Piedra Pómez gránulos QP. 26.3.9. Potasio Permanganato 0,01 mol/l (0,05N) SV. 26.3.10. Acido Sulfúrico diluido a 1 (v/v). 26.3.11. Solución de Potasio Permanganato 2N. Disolver Potasio Permanganato PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS, ajustar a la concentración indicada y determinar el factor. 26.3.12. Solución de Hierro II Sulfato de 40 g por 100. 26.3.13. Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV. 26.3.14. Yodo 0,01 mol/l (0,02N) SV. 26.3.15. Solución de Sodio Tiosulfato 0,02N. Diluir exactamente 1:5 de Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor. 26.3.16. Almidón soluble RE. 26.4. Procedimiento. 26.4.1. Separación de los ácidos cítrico y citromálico. Hacer pasar 25 ml del vino a través de la columna cambiadora de aniones Dowex 1 x 2 en forma acética a razón de 3 ml cada dos minutos. Lavar la columna con 20 ml de Agua PA-ACS en tres veces. Eluir los ácidos con 200 ml de solución de Acido Acético 2,5N que se hace pasar por la columna a la misma velocidad. En esta fracción de eluido se encuentra, entre otros ácidos, el ácido citromálico que interesa eliminar. Eluir los ácidos cítricos y tartáricos haciendo pasar a través de la columna 100 ml de Sodio Hidróxido 2 mol/l (2N) SV y recoger el eluido en el matraz del aparato de oxidación y destilación descrito 26.4.2. Oxidación. En el matraz que contiene ya el eluido anterior, añadir Acido Sulfúrico diluido al 1/5 (unos 20 ml) para llevar el pH a 3,2-3,8, 25 ml de Solución Tampón pH = 3,2-3,4, 1 ml de solución de Manganeso II Sulfato y algunos gramos de Piedra Pómez gránulos QP. Tapar y conectar el matraz con el refrigerante, calentando hasta ebullición. Separar los primeros 50 ml destilados. Colocar Potasio Permanganato 0,01 mol/l (0,05N) SV en el embudo lateral de llave, y verter en el matraz a razón de una gota por segundo, cayendo en el eluido en ebullición. El destilado se recoge en frasco de 500 ml de tapón esmerilado que contiene unos ml de Agua PA-ACS. Continuar la oxidación hasta que la coloración parda del líquido acuse un exceso de permanganato. 26.4.3. Separación de la acetona. Si el volumen del destilado es inferior a 90 ml, completar con Agua PA-ACS hasta este volumen: añadir después 4,5 ml de Acido Sulfúrico al 1/3 y 5 ml de una solución de Potasio Permanganato 2N. Si el volumen del destilado excede de los 90 ml, completar a 180 ml con Agua PA-ACS y utilizar la dosis doble de reactivos. En estas condiciones (medio Acido Sulfúrico 0,5N y Potasio Permanganato 0,1N), el alcohol etílico es oxidado a ácido acético y la acetona permanece intacta. Tapar el frasco, dejar en reposo durante 45 minutos a la temperatura ambiente. Al cabo de este tiempo se destruye el exceso de permanganato adicionando solución de Hierro II Sulfato. Destilar después y recoger 50 ml aproximadamente de destilado en un frasco de tapón esmerilado que contenga 5 ml de Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV.

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Figura 26.l

26.4.4. Valoración de la acetona, añadir al contenido del frasco 25 ml de Yodo 0,01 mol/l (0,02N) SV, si la dosis de Acido Cítrico es superior a 0,5-0,6 g/l será necesario añadir más solución de Yodo, hasta que quede color amarillento que indicará este exceso. Duplicar o triplicar las dosis de Yodo hasta llegar a este punto, pero si la riqueza en Acido Cítrico es mayor de 1,5 g, comenzar otra vez el análisis con sólo 10 ml de vino. Dejar en contacto el Yodo añadido durante 20 minutos permaneciendo el frasco tapado. Añadir 8 ml de Acido Sulfúrico al 1/5 y valorar el exceso de yodo con Sodio Tiosulfato 0,02N en presencia de Almidón soluble RE. Hacer una valoración en blanco en las mismas condiciones sustituyendo los 50 ml de destilado por 50 ml de Agua PA-ACS. 26.5. Cálculo. Calcular el contenido en ácido cítrico expresado en g/l. V’ - V” Acido cítrico = 0,64 ———— g/l V V = volumen en ml de la muestra de vino. V’ = volumen en ml de sodio tiosulfato 0,02N utilizado en la valoración en blanco. V” = volumen en ml de sodio tiosulfato 0,02N utilizado en la valoración del yodo en exceso. 26.6. Referencia. 26.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V., A29, 1-3, 1969. 27. SULFATOS 27.1. Principio. Precipitación del bario sulfato en el vino, previamente desprovisto de anhídrido sulfuroso por ebullición al abrigo del aire. 27.2. Material y aparatos. 27.2.1. Matraz cónico (Erlenmeyer) de 500 ml, provisto de ampolla con llave de 100 ml y de desprendimiento de vapor, atravesando ambos el tapón. El matraz se coloca sobre disco metálico de 15 cm de diámetro con abertura circular de 8 cm de diámetro. 27.2.2. Vaso cilíndrico de 400 ml. 27.2.3. Baño de agua o plancha caliente a 60°C. 27.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 182108 Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) SV 131074 Agua PA-ACS

131182 Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO 131459 Plata Nitrato PA-ACS-ISO 27.3.1. Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) SV. 27.3.2. Bario Cloruro, 100 g de Bario Cloruro 2hidrato PA-ACS-ISO en 1.000 ml de Agua PA-ACS. 27.3.3. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 27.4. Procedimiento. 27.4.1. Eliminación del anhídrido sulfuroso del vino. Introducir en el Erlenmeyer del aparato descrito 50 ml de Agua PA-ACS y 1 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. Hervir esta solución para eliminar el aire del aparato. Introducir 100 ml del vino por la ampolla de llave evitando que la ebullición se pare durante esta adición. Continuar la ebullición hasta reducir el volumen del líquido a unos 100 ml, eliminando así todo el SO2. 27.4.2. Precipitación de Bario Sulfato. Llevar el residuo de la evaporación anterior a un vaso de 400 ml, enjuagando el matraz con la cantidad de Agua PA-ACS suficiente para llevar el volumen total a 200 ml. Añadir 5 ml de Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) y llevar a ebullición. Adicionar gota a gota 10 ml de solución de Bario Cloruro, con la precaución de no parar la ebullición y dejar reposar en caliente, colocando el vaso sobre placa a 60° durante cuatro horas y en baño de agua hirviendo durante dos horas. En el caso de pequeñas cantidades de precipitado, se recomienda un segundo reposo en frío durante 12 horas. Filtrar por filtro sin cenizas, lavar el vaso y precipitado con Agua PA-ACS caliente hasta que no dé reacción con Plata Nitrato PAACS-ISO, llevar el filtro cuidadosamente plegado a crisol de porcelana tarado, desecar, calcinar y, después de enfriar en un desecador, pesar. 27.5. Cálculo. Calcular el contenido de sulfatos expresado en meq/l o en g/l de potasio sulfato con una aproximación de ± 0,05 g/l. Sulfato = 85,68 P meq/l. Sulfato = 7,465 P g/l de potasio sulfato. P = peso de las cenizas en g. 27.6. Referencias. 27.6.1. Deibner, P.; Bernard, P. “Industries Alimentaires et Agricoles”, 71: 1, 23 y 5, 427,1954. 27.6.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. 0. I. V., A14, 1-4. 1969.

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28(a). ANHIDRIDO SULFUROSO (Método Paul) 28(a).1. Principio. Liberación de sulfuroso “libre” por acidificación del vino, arrastre por corriente de aire, oxidación por barboteo en agua oxigenada neutra y valoración con sodio hidróxido del ácido sulfúrico formado. Liberación por ebullición moderada del sulfuroso “combinado”, que queda en el vino después de la extracción del sulfuroso “libre”, y análogo tratamiento que en la determinación del sulfuroso “libre”. El sulfuroso “total” es la suma del sulfuroso “libre” y el sulfuroso “combinado”. Puede determinarse acidificando el vino y calentando y procediendo como en los dos casos anteriores. 28(a).2. Material y aparatos. Utilizar el aparato representado en la figura 28(a).I. 28(a).2.1. Matraz de 100 ml o de 250 ml. 28(a).2.2. Tubo barbotador provisto de bola hueca en un extremo con unos 20 orificios de 0,2 mm de diámetro alrededor del círculo máximo horizontal. 28(a).2.3. Refrigerante que condense vapores y deje pasar el gas en recorrido seguro. 28(a).2.4. Frasco con agua y con tapón atravesado por el tubo que comunica con el barbotador para hacer vacío, y otro tubo sumergido en el agua para acusar la intensidad del vacío por la depresión de la columna de agua en el interior del tubo, depresión que debe mantenerse entre 20-30 cm. El gasto de vapor será de 40 l/h. 28(a).2.5. Baño de agua regulable a 10°C. 28(a).3. Reactivos. 131032 Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 251170 Azul de Metileno (C.I. 52015) DC 121085 Etanol 96% v/v PA 141076 Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS 171617 Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS 181693 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV 28(a).3.1. Acido Fosfórico aI 25% (p/v). Diluir convenientemente Acido orto-Fosfórico 85% PAACS-ISO con Agua PA-ACS. 28(a).3.2. Hidrógeno Peróxido de 0,3 volúmenes

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Figura 28(a).I. Las dimensiones están indicadas en mm. Los diámetros interiores de los cuatro tubos concéntricos que constituyen el refrigerante son 45, 34, 27 y 10 mm

por 100. Diluir convenientemente Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS con Agua PA-ACS. 28(a).3.3. Sodio Hidróxido 0,01N. En un matraz aforado diluir a 1:10, Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor de la solución obtenida 0,01N. 28(a).3.4. Indicador. Mezclar 100 mg de Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS, 50 mg de Azul de Metileno (C.I. 52015) DC y 100 ml de Etanol de 50°. Diluir convenientemente Etanol 96% v/v PA con Agua PA-ACS. 28(a).4. Procedimiento. 28(a).4.1. Análisis del anhídrido sulfuroso libre. En el matraz de 100 ml del aparato poner 10 ml del vino y añadir 5 ml de Acido Fosfórico al 25%, colocando acto seguido el matraz en su sitio. Si la riqueza en SO2 del vino es pequeña, se emplea el matraz de 250 ml y se ponen 20-25 ml de vino. Sumergir el matraz en un baño de agua a 10°C. Colocar 2-3 ml de Hidrógeno Peróxido de 0,3 volúmenes y dos gotas del reactivo Indicador en el barbotador y neutralizar el Hidrógeno Peróxido con Sodio Hidróxido 0,01N. Adaptar el barbotador al aparato y hacer barbotar el aire (o nitrógeno) durante 12-15 minutos. Arrastrar el anhídrido sulfuroso libre y después oxidar a H2SO4. Retirar el barbotador y valorar el ácido formado con solución de Sodio Hidróxido 0,01N. 28(a).4.2. Análisis del anhídrido sulfuroso combinado. Después de terminar la valoración del anhídrido sulfuroso libre, colocar en el barbotador ya limpio, los 2-3 ml de Hidrógeno Peróxido neutralizado y con las dos gotas del indicador. Calentar con llama pequeña hasta llevar a la ebullición el vino que quedó en el matraz despojado del anhídrido sulfuroso libre por la determinación anterior. Aplicar el fuego directo sobre el fondo del matraz, que descansará sobre chapa metálica perforada con orificio de 30 mm de diámetro, para evitar la pirogenación de las materias extractivas del vino sobre las paredes del matraz. Mantener el paso del aire o nitrógeno durante la ebullición, que durará 12-15 minutos, tiempo que se considera suficiente para arrastrar todo el sulfuroso combinado, y después oxidarlo. Continuar como en 28(a).4.1 a partir de “Colocar 2-3 ml de Hidrógeno Peróxido...”. 28(a).4.3. Anhídrido sulfuroso total. Puede determinarse por la suma anhídrido sulfuroso libre más anhídrido sulfuroso combinado, pero también puede determinarse directamente, actuando desde un principio con corriente de aire y con calor. 28(a).5. Cálculo. Calcular el contenido en anhídrido sulfuroso expresado en mg/l con una aproximación de 10 mg/l.

Anhídrido sulfuroso = 32 V mg/l. V = volumen en ml de sodio hidróxido 0,01N. 28(a).6. Observaciones. Para vino sensiblemente picado (con más de 2 g/l de acidez acética) puede arrastrarse con el anhídrido sulfuroso, ácidos volátiles, especialmente cuando la corriente de aire es intensa. Corregir determinando la acidez volátil presente en el líquido del barbotador, operando de la siguiente forma: Después de la neutralización con el sodio hidróxido al valorar la acidez, añadir un cristal de 131066 Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO y llevar el contenido del barbotador al aparato de determinación de la acidez volátil por destilación en corriente de vapor. Restar despues del resultado anterior la parte de acidez correspondiente a los ácidos volátiles. 28(a).7. Referencias. 28(a).7.1. Paul, F. “Mitteilungen Klosternenberg”, A: 8, 21, 1958. 28(a).7.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V., A17, 1-8, 1969. 28(b). ANHIDRIDO SULFUROSO (Método Ripper doble) 28(b).1. Principio. Valoración yodométrica del SO2 operando directamente con el vino. Para evitar el error introducido por la recombinacion del sulfuroso liberado de su combinación con los aldehídos, durante la valoración volumétrica, se hace una segunda valoración, después de nueva liberación del SO2 recombinado. 28(b).2. Material y aparatos. 28(b).2.1. Erlenmeyer de 500 ml y material para una volumetría. 28(b).3. Reactivos. Acetaldehído 131669 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO (Acido EDTA Na2 2-hidrato) 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 121428 Mercurio II Yoduro rojo PA 182159 Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV 182160 Sodio Tiosulfato 0,05 mol/l (0,05N) SV 182161 Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV 28(b).3.1. Sodio Hidróxido 4N. En un matraz aforado diluir a 4:5, Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor de la solución 4N obtenida.

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28(b).3.2. Acido Sulfúrico al 1/10 en volumen (180 g/l). Diluir convenientemente Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS. 28(b).3.3. Engrudo de almidón preparado de la siguiente forma: Pesar 2,5 g de Almidón soluble RE y triturarlo en un mortero junto con 10 mg de Mercurio II Yoduro rojo PA. Llevar a un vaso y añadir un volumen de Agua PA-ACS suficiente para poder hervir la suspensión con fluidez. Llevar después ésta a matraz con 1 litro de Agua PA-ACS en ebullición, que se mantiene durante 10 minutos. El líquido obtenido estará limpio y si es necesario se filtra. 28(b).3.4. Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV. 28(b).3.5. Sodio Tiosulfato 0,01N. En un matraz aforado diluir a 1:5, Sodio Tiosulfato 0,05 mol/l (0,05N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor de la solución 0,01N obtenida. 28(b).3.6. Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO. 28(b).4. Procedimiento. Colocar en el Erlenmeyer de 500 ml, 50 ml del vino, 3 ml de Acido Sulfúrico al 1/10, 5 ml de Engrudo de Almidón y 30 mg de Acido Etilendiaminotetraacetico Sal Disodica 2-hidrato PA-ACS-ISO (con el fin de evitar la oxidación del SO2 libre durante la valoración). Homogeneizar la solución y añadir con bureta Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV hasta coloración azul del almidón, que primero será fugaz, y netamente persistente después, durante 10-15 segundos, considerándola entonces aceptable. Sea V el volumen del yodo empleado. Añadir 8ml de solución de Sodio Hidróxido 4N, agitar una sola vez y dejar en contacto durante 5 minutos. Después verter, de un solo golpe y agitando enérgicamente, 10 ml de Acido Sulfúrico a 1/10. Se valora inmediatamente con Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV el SO2 liberado. Sea V’ el volumen en ml de solución de yodo empleado. Se añade después 20 ml de Sodio Hidróxido 4N, se deja en contacto durante 5 minutos después de haber agitado una sola vez. Se diluye con 200 ml de Agua PA-ACS bien fría, agitar después enérgicamente y añadir 30 ml de Acido Sulfúrico al 1/10 y valorar con Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV el SO2 liberado. Sea V” el volumen en ml de la solución de yodo empleado. Con estas valoraciones se corrige el error que puede originarse por la recombinación de parte del SO2 ya liberado de los aldehídos, con el mismo aldehído que estará presente en el líquido que se valora. También es posible causa de error, y especialmente cuando se trate de vinos tintos ricos en color y extractos, el consumo de yodo por estas sustancias; para corregir este error se opera de la manera siguiente: Adicionar a 50 ml del vino, colocados en un Erlenmeyer de 300 ml, un exceso de Acetaldehído para que sea capaz de combinarse con todo el SO2 libre; dicha cantidad puede ser de unos 5 ml de solución de Acetaldehído, de 7 g por litro. Se tapa el matraz y después de un reposo de 30 minutos, como mínimo, se añaden 3 ml de Acido Sulfúrico diluido al 1/10 y después los de Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV necesarios hasta el viraje de almidón. Sea V’’’ el volumen en ml necesarios. La presencia de ácido ascórbico también puede ser causa de error. Descontar el yodo correspondiente, considerando que 1 ml de Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV es consumido por 4,4 mg de ácido ascórbico. 28(b).5. Cálculo. SO2 libre = 32 (V - V’’’) mg/l. SO2 combinado = 32 (V’ + V”) mg/l. SO2 total = 32 (V + V’ + V” - V’’’) mg/l. Con aproximación de 10 mg/l. 28(b).6. Observaciones. Para vinos pobres en SO 2, es conveniente emplear yodo más diluido, solución 0,02N, reemplazando entonces el coeficiente 32 por el de 12,8 en los cálculos. En los vinos tintos es conveniente, para apreciar el viraje, iluminar con luz amarilla el fondo del Erlenmeyer donde está el vino. Hay dispositivos sencillos a base de simple bombilla con filtro preparado con solución de potasio cromato, o bien con luz amarilla de lámpara de vapor de sodio. Cuando haya un interés especial en la determinación del SO2 libre, debe dejarse la muestra en reposo durante 4 días, al abrigo del aire y a temperatura de 20°C. El análisis se realizará también a 20ºC. 28(b).7. Referencias. 28(b).7.1. Jaulmes, P. y Dienziede. “Méthode Ripper double d’analyse de SO2. Bol.”. O. I. V., 274. 52-54, 1959. 28(b).7.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V., A17, 7. 1969.

29. ACIDO SORBICO 29.1. Principio. El ácido sórbico arrastrado por el vapor de agua (constante de volatilidad 0,59), se valora en el destilado por espectrofotometría en el ultravioleta. 29.2. Material y aparatos. 29.2.1. Espectrofotómetro ultravioleta y cubetas de cuarzo de 1 cm de espesor.

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29.2.2. Matraces aforados de 20 ml y de 1 litro. 29.2.3. Pipetas de 0,5 ml y 1,5 ml. 29.3. Reactivos. 141055 Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX (o 121531 Potasio Sorbato PA) 131066 Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 121638 Sodio Hidrógeno Carbonato PA 29.3.1. Solución (a) (destinada a catalizar la oxidación del ácido sulfuroso por el aire). Mezclar 0,5 g de Sodio Hidrógeno Carbonato PA con 0,001 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO y añadir Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. 29.3.2. Solución (b) de Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX de 20 mg/l. Introducir 20 mg de Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX en un matraz aforado de 1 litro que contenga 900 ml de Agua PA-ACS caliente, agitar, dejar enfriar y enrasar a 1 litro. En vez de Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX puede emplearse 26,8 mg de Potasio Sorbato PA. 29.4. Procedimiento. Destilar como en 21.4, 20 ml de vino adicionado de 1-2 g de Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO. Recoger 320-330 ml de destilado para conseguir la más completa extracción del Acido Sórbico (USPNF) PRS-CODEX, que requiere unos 100 ml más que los necesarios para la acidez volátil. Tomar 5 ml del destilado, colocar en un matraz aforado 20 ml y enrasar con la solución (a). Llenar con esta mezcla una cubeta de cuarzo de 1 cm de espesor. Dejar la cubeta al aire durante unos minutos. Determinar la absorbancia a 256 nm. Para la prueba en blanco, sustituir los 5 ml de destilado por 5 ml de Agua PA-ACS. Para obtener la curva patrón, determinar la absorbancia de soluciones que contengan 0,5, 1, 2,5 y 5 mg/l de Acido Sórbico (USP-NF) PRSCODEX obtenidas diluyendo con Agua PA-ACS la solución (b). La gráfica correspondiente a estos valores es una línea recta. 29.5. Cálculo. Calcular el ácido sórbico expresado en mg/l. Acido sórbico = 0,2 . C . V mg/l.

29.6.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V., A30, 1-3, 1969. 30. CLORUROS 30.1. Principio. Determinación directa de cloruros por potenciometría utilizando el electrodo Ag/AgCl. 30.2. Material y aparatos. 30.2.1. pH-metro con escala que permita apreciar 2mV. 30.2.2. Agitador magnético. 30.2.3. Electrodo Ag/AgCl, con una solución saturada de potasio nitrato como electrolito. 30.2.4. Microbureta graduada en 1/100 de ml. 30.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131459 Plata Nitrato PA-ACS-ISO Potasio Cloruro (máx. 0,005% de Br) 30.3.1. Solución patrón de cloruros.- Disolver 2,1027 g de Potasio Cloruro (máx. 0,005% de Br) puro para análisis (máximo 0,005% de bromo) previamente desecado, en Agua PA-ACS hasta 1 litro. 1 ml de esta solución contiene 1 mg de ion Cloro. 30.3.2. Solución de Plata Nitrato.- Disolver 4,7912 g de Plata Nitrato PA-ACS-ISO en una solución al 10% v/v de Etanol 96% v/v PA en Agua PAACS, hasta un litro. 1 ml de esta solución corresponde a 1 mg de ion Cloro. 30.3.3. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. 30.4. Procedimiento. 30.4.1. Determinación del potencial del punto de equivalencia. Introducir 5,0 ml de la solución patrón de cloruros en un vaso de 150 ml. Diluir aproximadamente a 100 ml con Agua PAACS y acidificar con 1,0 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO (30.3.3). Introducir los electrodos. Añadir 10 ml de la solución de Plata Nitrato, agitando moderadamente: adicionar los cuatro primeros ml en fracciones de 1 ml y leer las correspondientes lecturas en milivoltios; los dos siguientes ml, en fracciones de 0,2 ml y continuar adicionando en fracciones de 1 ml hasta que se hayan alcanzado un total de 10 ml. Después de cada adición esperar unos treinta segundos antes de hacer la correspondiente lectura en milivoltios. Llevar los valores así obtenidos sobre un papel milimetrado en función de los correspondientes ml de solución de Plata Nitrato y a partir del punto singular de la curva obtenida determinar el potencial del punto de equivalencia. Para comprobar el potencial del punto de equivalencia, llevar a un vaso de 150 ml, 5,0 ml de la

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C = contenido en mg/l de ácido sórbico determinado por comparación con curva patrón. V = volumen en ml de destilado. 29.6. Referencias. 29.6.1. Jaulmes, P.; Mestres, R. y Mandrou, B. “Annales des Falsifications et de l’Expertise Chimique”, 111, 1961.

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solución patrón de cloruros, 95 ml de Agua PA-ACS y 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. Introducir el electrodo y valorar agitando, justamente hasta el potencial del punto de equivalencia. Repetir esta operación hasta obtener una buena concordancia de resultados. Este control debe efectuarse antes de determinar la concentración de cloruros en cada serie de muestras a analizar. 30.4.2. Determinación. Llevar a un vaso de 150 ml, 50,0 ml de vino. Añadir 50 ml de Agua PA-ACS y 1,0 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. Valorar a continuación siguiendo el procedimiento descrito anteriormente hasta alcanzar el potencial del punto de equivalencia. 30.5. Cálculo. La cantidad de cloruros se determina mediante las expresiones: 0,02 n en g de ion cloro. 0,5633 n en miliequivalentes por litro de ion cloro. 0,0329 n en g de sodio cloruro por litro. Siendo: n = volumen, en ml, de solución de plata nitrato necesario para alcanzar el potencial del punto de equivalencia. 30.6. Referencia. 30.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A 15j. 31. ACIDO BENZOICO 31.1. Principio. Extracción por el éter del ácido benzoico presente en el vino. Tratamiento del extracto por la mezcla nitro-sulfúrica y formación del ácido 3,5dinitrobenzoico, que es extraído con éter y después recogido por la mezcla acetona-alcohol. La adición de sodio hidróxido da origen a una coloración violeta. Esta reacción es sensible, específica y cuantitativa, siempre que se opere en condiciones que aseguren la transformación del ácido benzoico en compuesto coloreado medible en el espectrofotómetro a 570 nm. 31.2. Material y aparatos. 31.2.1. Espectrofotómetro que permita lecturas a 570 nm. 31.2.2. Ampolla de decantación de 250 ml. 31.2.3. Matraces de 100 ml aforados. 31.2.4. Cápsulas. 31.2.5. Baño de agua. 31.2.6. Matraces aforados de 50 ml. 31.2.7. Erlenmeyer de 50 ml. 31.3. Reactivos. 131007 Acetona PA-ACS-ISO 121014 Acido Benzoico PA 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 121086 Etanol absoluto PA 121085 Etanol 96 v/v PA 132770 Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 131524 Potasio Nitrato PA-ISO 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 131716 Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO 31.3.1. Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 31.3.2. Mezcla Acetona-Etanol: Mezclar 1.000 ml de Acetona PA-ACS-ISO con 1.000 ml de Etanol absoluto PA. 31.3.3. Mezcla Nitro-Sulfúrico: Añadir a 10 g de Potasio Nitrato PA-ISO, 100 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 31.3.4. Solución Sodio Hidróxido-Etanol al 5%. Añadir a 5 g de Sodio Hidróxido lentejas PA-ACSISO (sin Na2 CO3) 50 ml de Agua PA-ACS. Después de fría la mezcla se añade Etanol 96% v/v PA hasta 100 ml. La solución debe quedar limpia. 31.4. Procedimiento. Vinos secos o con riqueza en azúcar de 100 g/l. Añadir a 10 ml de vino puestos en ampolla de decantación 2 ml de Acido Sulfúrico al 25% y 25 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO, dos veces seguidas. Decantar y filtrar el Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO, por papel seco, llevarlo a matraz aforado de 50 ml y enrasar. Poner 20 ml de la solución de Eter Dietílico en Erlenmeyer de 50 ml, evaporar aspirando los vapores mediante vacío, permaneciendo el Erlenmeyer sumergido en baño de agua fría. Añadir al residuo 5 ml de la mezcla Nitrosulfúrica cuidando de empapar bien todo el residuo. Llevar después al baño de agua hirviendo durante 35 minutos y agitando de cuando en cuando, sobre todo al principio. Enfriar en agua fría, añadir 5 ml de Agua PAACS, seguir enfriando y verter el contenido en una ampolla de decantación de 250 ml. Enjuagar el Erlenmeyer con 5 ml de Agua PA-ACS, volver a verter el contenido en la ampolla y añadir 30 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACSISO. Agitar cinco minutos. Eliminar la fase acuosa después de cuidadosa decantación y lavar el Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACSISO con 5 ml de Agua PA-ACS. Decantar con cuidado (un lavado más prolongado originaría pérdidas de dinitrobenzoico en la fase acuosa, por lo que es preferible decantar bien, que volver a lavar). Filtrar el Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm

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de BHT PA-ACS-ISO por filtro revestido con Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO, lavar el filtro en seguida con 10 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. Evaporar el filtrado en una pequeña cápsula a 35°, arrastrar con tres adiciones de 5 ml de Acetona-Etanol, cada vez (previamente enfriado en nevera). Recoger todos estos líquidos en un tubo de ensayo de tapón esmerilado y aforado a 15 ml. En un tubo de ensayo de tapón esmerilado y con trazo de aforo a 15 ml, poner de 0,5 a 5 ml de la anterior solución. Este volumen debe variar con la riqueza supuesta, para obtener la reacción coloreada con el ácido dinitrobenzoico originado por 0,1 a 0,5 mg de Acido Benzoico PA. El método es válido entre 0,03 y 1 mg, si se utiliza aparato capaz de medir absorbancias superiores a 1,5. Diluir el volumen de líquido puesto en el tubo, con la mezcla Acetona-Etanol fría, hasta 14,7 ml y añadir después 0,3 m Sodio Hidróxido lentejas PAACS-ISO diluido al 5% en Agua PA-ACS, agitar y sumergir en hielo fundente. Hacer la determinación en cubeta de 1/2-1 cm a 570-580 nm después de 30 minutos y antes de 70 minutos a partir del momento de la mezcla. Utilizar como solución compensadora para comparación una mezcla de 14,5 de Acetona-Etanol con 0,3 ml de Sodio Hidróxido al 5%. Para obtener la curva patrón, preparar una solución valorada de 50 mg de Acido Benzoico PA en 100 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. Diluir esta solución a 1/10 con Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PAACS-ISO y tratar 10 ml de esta solución de 50 mg por litro, como se ha indicado antes para la muestra. La densidad de óptica varía linealmente con la cantidad de Acido Benzoico. 31.5. Cálculo. Llevar la absorbancia obtenida a la curva patrón y expresar el correspondiente contenido de ácido benzoico en mg/l. 31.6. Referencia. 31.6.1. Spanyar, E,; Kerel, E. y Kiszel, M. “Zeitschrift für Lebenmittel Untersuchung und Forschung”, 1958. 32. BROMO TOTAL

32.2. Material y aparatos. 32.2.1. Cápsula de sílice de 7 cm de diámetro. 32.2.2. Baño de agua. 32.2.3. Horno eléctrico, recomendable con regulador automático, para regular a 525°. 32.2.4. Espectrofotómetro o colorímetro capaces para lectura a 584 nm. 32.3. Reactivos. 182119 Acido Acético 2 mol/l (2N) SV 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 211234 Calcio Oxido natural escoriforme QP 142323 Cloramina T 3-hidrato (BP, F. Eur.) PRS-CODEX 121489 Potasio Bromuro PA 171615 Rojo de Fenol RE-ACS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 181693 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV 182158 Sodio Hidróxido 2 mol/l (2N) SV 131721 Sodio Tiosulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 32.3.1. Solución de Sodio Hidróxido al 50%. Disolver Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS. 32.3.2. Lechada de Cal 4N (224 g de Calcio Oxido natural escoriforme QP por litro con Agua PA-ACS). 32.3.3. Solución de Rojo de Fenol. Mezclar 0,24 g de Rojo de Fenol RE-ACS y 24 ml de Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV. Añadir Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. 32.3.4. Solución Tampón pH = 4,65. Mezclar 500 ml de Acido Acético 2 mol/l (2N) SV, 250 ml de Sodio Hidróxido 2 mol/l (2N) SV y 250 mI de Agua PA-ACS. 32.3.5. Solución oxidante. A 2 g de Cloramina T 3-hidrato (BP, F. Eur.) PRS-CODEX añadir Agua PA-ACS hasta un litro. Preparar esta solución 48 horas antes de su empleo y sólo será válida hasta quince días. 32.3.6. Solución reductora. Añadir a 25 g de Sodio Tiosulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO Agua PA-ACS hasta un litro. 32.3.7. Solución valorada de Potasio Bromuro. Añadir a 1,489 g de Potasio Bromuro PA Agua PAACS hasta un litro. Esta solución contiene 1 g de Bromuro por litro. En el momento de su empleo se hacen dos diluciones sucesivas a 1/10 y se tendrá la solución a emplear que contiene 10 microgramos de Bromo por ml. 32.4. Procedimiento. Adicionar 0,5 ml de Sodio Hidróxido al 50% y 1 ml de Lechada de Cal 4N a 50 ml del vino colocados en una cápsula de cuarzo de 7 cm de diámetro. Esta adición proporciona un soporte infusible que permite una buena combustión del carbón. Si el vino es muy ácido conviene añadir antes sodio hidróxido para llevarlo a pH 10 por lo menos.

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32.1. Principio. Saponificación cuidadosa, para evitar pérdidas, de los ésteres del ácido brómico, eventualmente presentes en el vino, transformación del rojo de fenol en azul de bromofenol, y valoración colorimétrica o espectrofotométrica.

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Si el vino contiene compuestos orgánicos de bromo o antisépticos bromados, dejar por lo menos 24 horas la muestra de vino alcalinizada, tapando la cápsula con un vidrio de reloj, con el fin de saturar los ésteres del ácido bromoacético, que son muy volátiles. Evaporar el líquido de la cápsula en baño de agua, calentar el residuo con pequeña llama o en baño de arena para eliminar las últimas trazas de agua. Incinerar hasta cenizas blancas en el horno eléctrico regulado a 525°C, sin pasar de esta temperatura para evitar pérdidas por sublimación. Para facilitar la obtención de cenizas blancas, retirar la cápsula después de 15 minutos de incineración, dejar enfriar y humedecer las cenizas aún grisáceas con unas gotas de Agua PA-ACS, evaporar y volver al horno, repitiendo esta operación las veces necesarias hasta conseguir cenizas blancas. Añadir a las cenizas 5 ml de Agua PA-ACS hirviendo y remover con una varilla, llevar a pH 4,64,5 con Acido Sulfúrico diluido 1:10 y ajustar con Acido Sulfúrico diluido a 1/100 y completar con Agua PA-ACS hasta 10 ml. Para calcular la cantidad de Agua PA-ACS a añadir, tomar el volumen final igual a 10,2 ml, por considerar el aumento de volumen Agua PA-ACS más Acido Sulfúrico, equivalente a 0,2 ml, que habrá sido arrastrado en la precipitación de los 334 mg de Calcio Sulfato hidratado, formado al reaccionar parte del Acido Sulfúrico con la Lechada de Cal 4N añadida. Las restantes causas de pequeña variación de volumen (como las del H2SO4 al pasar a Na2SO4 y K2SO4), se consideran sin sensible influencia. Triturar con varilla de vidrio el calcio sulfato precipitado y remover bien. Diluir, si es necesario, la solución de cenizas hasta un contenido en bromo del vino de 1 mg/l, aproximadamente. Para comprobar cualitativamente si el contenido en bromo del vino es superior o inferior a 1 mg/l, tomar 1 ml de la solución de cenizas del vino, poner en tubo de ensayo y añadir una gota de solución tampón pH 4,65, una gota de solución Rojo de Fenol y una gota de solución Cloramina T. Después de un minuto exactamente, detener la reacción añadiendo una gota de solución de Sodio Tiosulfato. Si la solución es amarilla, amarillo-parda o amarillo-verdosa, el contenido en bromo es aproximadamente inferior a 1 mg/l, y si es azul, violeta o violeta fugaz, el contenido en bromo es superior a 1 mg/l, siendo necesario diluir la solución. Decantar el líquido y trasvasar a un tubo de ensayo. Poner en tubo de ensayo 5 ml de la solución de cenizas y añadir 0,25 ml de Solución Tampón, 0,25 ml de Rojo de Fenol y 0,25 ml de Cloramina T. Después de un minuto exactamente, paralizar la reacción con 0,25 ml de solución de Sodio Tiosulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO. Determinar la absorbancia con fotocolorímetro o espectrofotómetro mediante medida a 584 nm. Para obtener la curva patrón, tomar la solución de Potasio Bromuro con 10 mg de Bromo por litro, alícuotas de 0,25; 0,50; 0,75; 1,00; 1,25; 1,50; 2,00 y 2,50 ml y llevar a 5 ml con Agua PA-ACS. El contenido en bromo de estas soluciones es, respectivamente, 0,5; 1; 1,5; 2,0; 2,5; 3; 4 y 5 mg/l. Tratar cada una de estas soluciones de 5 ml como la solución de cenizas y hacer las correspondientes determinaciones en el espectrofotómetro a 584 nm. 32.5. Cálculo. Calcular el contenido en bromo expresado en mg/l mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuenta el factor de dilución. 32.6. Referencias. 32.6.1. Jaulmes, P., y Bruns, S. “Valoration du brome dans les vins”. Annales des Falsifications et de Fraudes. 1952. 32.6.2. Saldoval, J. A., e Hidalgo, T. “Medida espectrofotométrica de reacciones coloreadas muy fugaces”. Boletín I. N. I. A. 19, 60, 40. 33. BROMO ORGANICO 33.1. Principio. El coeficiente de dilución del ácido monobromoacético entre el éter y el agua acidulada con ácido sulfúrico (que anula la ionización) es próximo a 5. Los ésteres del ácido monobromoacético son menos solubles en el agua que el mismo ácido, por lo que es más fácil su extracción por el éter. Tres lavados con un volumen de éter igual al del vino son suficientes para extraer todo el bromo orgánico. 33.2. Material y aparatos. 33.2. (1; 2; 3 y 4) como 32.2. (1; 2; 3 y 4). 33.2.5. Ampollas de decantación de 50 y 500 ml. 33.3. Reactivos. 182119 Acido Acético 2 mol/l (2N) SV 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 181061 Acido Sulfúrico 0,05 mol/l (0,1N) SV 131074 Agua PA-ACS 211234 Calcio Oxido natural escoriforme QP 142323 Cloramina T 3-hidrato (BP, F. Eur.) PRS-CODEX 132770 Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 121489 Potasio Bromuro PA 171615 Rojo de Fenol RE-ACS 131687 Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO 181693 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV

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182158 Sodio Hidróxido 2 mol/l (2N) SV 131721 Sodio Tiosulfato 5-hidrato PA-ACSISO 33.3. (1; 2; 3; 4; 5; 6 y 7) como 32.3. (1; 2; 3; 4; 5; 6 y 7). 33.3.8. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 33.4. Procedimiento. Colocar en una ampolla de decantación 20-200 ml de vino (según la riqueza supuesta), añadir 5 g de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO por litro de vino, se añade después un volumen de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO igual al volumen de vino, agitar y decantar cuidadosamente el Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. Repetir tres veces esta operación. Filtrar el Eter Dietilico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO, evaporar en frío en cápsula de cuarzo que contenga 0,5 ml de Sodio Hidróxido al 50% y 1 ml de Lechada de Cal 4N. Después de unas 24 horas de saponificación de los ésteres, durante las que permanece la cápsula tapada con un vidrio de reloj, incinerar progresivamente el residuo a la temperatura de 550°C. Arrastrar y disolver las cenizas como en 32, realizando también en igual forma la valoración colorimétrica del bromo. 33.5. Cálculo. Calcular el contenido en bromo expresado en mg/l a partir de la correspondiente curva patrón. 34. ACIDOS MONOBROMOACETICO Y MONOCLOROACETICO DE ORIGEN ORGANICO (Método cualitativo) (Provisional) 34.1. Principio. Siendo fraudulenta la presencia de compuestos orgánicos monohalogenados, es suficiente para investigar el fraude un análisis cualitativo. Extracción de compuestos monohalogenados en medio ácido con éter y transformación por adición de amonio en glicocola y sal de amonio por combinación del halógeno desplazado. Separación cromatográfica y revelado con plata nitrato, obteniéndose una mancha blanca para la plata cloruro y otra negra para la plata bromuro. 34.2. Material y aparatos. 34.2.1. Frascos de tapón esmerilado que ajuste perfectamente, de 500 ml de capacidad. 34.2.2. Ampolla de decantación de 250 ml. 34.2.3. Agitador mecánico de unas 150 agitaciones por minuto. 34.2.4. Papel Watman número 1 para cromatografía. 34.2.5. Pipetas, micropipetas de 0,2 ml capilares divididas en milésimas.

34.2.6. Secador de aire. 34.2.7. Campana o recipiente para cromatografía y accesorios. 34.2.8. Pulverizador todo de vidrio y pulverización fina. 34.2.9. Campana de luz infrarroja. 34.3. Reactivos. 131007 Acetona PA-ACS-ISO 121050 Acido Pirogálico PA 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 121118 Amonio Bromuro PA 131121 Amonio Cloruro PA-ACS-ISO 121129 Amoníaco 25% (en NH3) PA 121085 Etanol 96% v/v PA 131313 Eter Dietílico estabilizado con de BHT PA-ACS-ISO 131459 Plata Nitrato PA-ACS-ISO

6 ppm

34.3.1. Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 34.3.2. Solución de Acido Sulfúrico: solución en Agua PA-ACS al 1/3 en volumen. 34.3.3. Amoníaco 25% (en NH3) PA (sin cloruros). 34.3.4. Mezcla Acetona PA-ACS-ISO-Agua PA-ACS en la proporción 100/20 en volumen. 34.3.5. Revelador de Plata Nitrato. Mezclar 85 mg de Plata Nitrato PA-ACS-ISO, 1 ml de Agua PA-ACS, 5 ml de Amoníaco 25% (en NH3) PA y Etanol 96% v/v PA hasta 200 ml. 34.3.6. Revelador de Acido Pirogálico. Disolver 13 mg de Acido Pirogálico PA en 200 ml de Etanol 96% v/v PA. La solución puede durar tres días si se conserva fría y al abrigo de la luz. 34.3.7. Solución testigo de Cloro. Disolver 100 mg de Amonio Cloruro PA-ACS-ISO en Agua PAACS y enrasar a 1.000 ml. 34.3.8. Solución testigo de Bromo. Disolver 100 mg de Amonio Bromuro PA en Agua PA-ACS y enrasar a 1.000 ml. 34.4. Procedimiento. 34.4.1. Extracción del compuesto halogenado. Tomar 100 ml de vino, llevar el matraz de 500 ml con tapón esmerilado, añadir 5 ml de Acido Sulfúrico 1/3 y, acto seguido, 100 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. Agitar brevemente hasta formación de ligera emulsión, destapar unos momentos el frasco y observar la facilidad de separación. A veces, como especialmente sucede con vino de prensa, la separación es difícil, siendo necesario nueva adición de Acido Sulfúrico 1/3 y de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. Observar si hay facilidad de separación y llevar el frasco a un agitador mecánico, agitando durante tres horas. Poner en ampolla de decantación de

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250 ml de capacidad con el fin de separar el vino de la fracción etérea; eliminar el Eter Etílico por completo filtrando rápidamente por ligera capa de algodón. Añadir inmediatamente 10 ml de Amoníaco 25% (en NH3) PA, agitar fuertemente durante tres minutos, con el fin de iniciar la formación del aminoácido correspondiente (glicocola) y evitar la de otros compuestos. En este momento se forma la sal de amonio por combinación del halógeno desplazado. Dejar reposar 24 horas para que la reacción sea completa y proceder a la cromatografía. 34.4.2. Análisis cromatográfico.- Depositar con micropipeta sobre papel Whatman número 1 para cromatografía (28 x 15 cm) a lo largo de una línea paralela al borde inferior y situada a 2,5 cm de este borde, 0,02 ml de soluciones testigo de Cl y de Br, y de 0,02 a 0,06 ml, según el contenido en halogenado, de las muestras de vino, separando cada aplicación 2 cm por lo menos. Enrollar el papel y colocar en el fondo de la cubeta con el disolvente y en la cámara o campana de cromatografía. Retirar el papel de la cubeta cuando el frente del líquido ascendente se encuentre a 1 cm del borde superior del papel, y dejar secar. Pulverizar con la solución de Plata Nitrato y, estando húmedo el papel, pulverizar nuevamente con solución de Acido Pirogálico. Para mayor uniformidad del revelado, conviene desecar el papel con lámpara infrarroja. La mancha correspondiente al Cl es de color blanco y tiene un Rf de 0,29, y la mancha correspondiente al Br es de color marrón y tiene un Rf de 0,59. 34.5. Referencia. 34.5.1. Morales, J., y Vega, R. “Comunicación de los Métodos Internacionales de Análisis”. O. I. V., número 245, 1967. 35. INDICE DE PERMANGANATO 35.1. Principio. Valoración con una solución de permanganato del poder reductor en frío de las sustancias polifenólicas del vino. Como todos los componentes fenólicos del vino, a igual concentración no reducen la misma cantidad de permanganato, se trata de una valoración global que da un índice, al que se denomina “índice de permanganato”; I Mn. Constituye una expresión del contenido en sustancias fenólicas que están en relación con los caracteres gustativos de dureza, astringencia o aterciopelado sin que la relación sea absoluta. Es una determinación especial para vinos tintos; en blancos es poco apreciable y se presta a confusiones por consumo de permanganato por otros componentes del vino, que aquí tiene una influencia relativa más marcada. 35.5. Cálculo. Calcular el índice de permanganato o el título de materias oxidables en frío del vino por permanganato expresado en meq/l. Indice de permanganato = 5 (V-V’). Materias oxidables en frío = 5 (V-V’) meq/l. V = volumen en ml de solución de potasio permanganato 0,01N para oxidar el vino. V’ = volumen en ml de solución de potasio permanganato 0,01N gastados en la prueba testigo. 35.6. Referencia. 35.6.1. Ribereau-Gayon et Peynaud. “Analyse et Contrôle des Vins”. página 320, 1958. 35.2. Material y aparatos. Los elementos necesarios para una volumetría. 35.3. Reactivos. 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131066 Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 251246 Carmín de Indigo (C.I. 73015) DC 121085 Etanol 96% v/v PA 121515 Potasio Hidróxido lentejas 85% PA 181529 Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV 35.3.1. Solución de Potasio Permanganato 0,01N. Se conserva mal. Preparar a partir de Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV. En un matraz aforado diluir a 1:10, Potasio Permanganato 0,02 mol/l (0,1N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor de la solución 0,01N obtenida. 35.3.2. Indicador de Indigo. Preparar una solución de 3 g/l de Carmín de Indigo (C.I. 73015) DC. Filtrar, tomar 50 ml de esa solución, añadir 50 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. Mezclar bien. 35.4. Procedimiento. Colocar en un vaso de 50 ml del Indicador de Indigo antes indicado y añadir 2 ml del vino. Inmediatamente adicionar gota a gota la solución de Potasio Permanganato 0,01N, y al final, cada vez más lentamente, hasta desaparición completa del color azul y aparición de amarillo oro. En vinos nuevos, el viraje es menos neto, por lo que conviene tomar sólo 1 ml de muestra. Hacer la prueba testigo para eliminar el permanganato por sustancias no polifenoles, sustituyendo los 2 ml de vino por 2 ml de una solución de Acido L(+)-Tartárico de 5 g/l, neutralizada hasta la mitad con solución de Potasio Hidróxido y encabezada hasta 10° de Etanol 96% v/v PA.

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36(a). DETERMINACION DE PRESENCIA DE VINO PROCEDENTE DE “HIBRIDOS PRODUCTORES DIRECTOS” (Método cualitativo)

36(b). DETERMINACION DE PRESENCIA DE VINO PROCEDENTE DE “HIBRIDOS PRODUCTORES DIRECTOS” (Provisional) 36(b).1. Principio. Determinación de malvina en vinos tintos secos por cromatografía de papel. La fase móvil es la solución Britten-Robinson, en las condiciones del método. Observación del cromatograma a la luz de Wood de 366 nm. Como escala de comparación se emplea una serie de manchas de soluciones de pinacianol, que da fluorescencia similar a la de la malvina, aunque con coloración verdosa en vez de la roja ladrillo de la malvina, pero con intensidades de la fluorescencia proporcionales a las dosis aplicadas, haciendo comparativos los resultados. 36(b).2. Material y aparatos. 36(b).2.1. Fuente de luz de Wood (366 nm). 36(b).2.2. Cámara o campana para cromatografía y accesorios (soporte, pinzas, etc.). 36(b).2.3. Papel Arches para cromatografía. 36(b).3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131015 Acido Bórico PA-ACS-ISO 131032 Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA Pinacianol o Azul de Quinaldina (Yoduro de 1,1’-Dietilcarbocianina) 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 36(b).3.1. Solución Britten-Robinson. Mezclar 3,92 g de Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO, 2,40 g de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO y 4,48 g de Acido Bórico PA-ACS-ISO y añadir Agua PA-ACS hasta 1.000 ml. El pH de esta solución es 1,81. 36(b).3.2. Pinacianol o Azul de Quinaldina (Yoduro de 1,1’-Dietilcarbocianina). 36(b).3.3. Etanol 96% v/v PA neutro. Destilar Etanol 96%v/v PA rectificado en presenia de Sodio Hidróxido lentejas PA (5 g/l). 36(b).4. Procedimiento. Hacer aplicaciones con micropipeta de 50 ul de vino cada una, sobre papel a 2 cm del borde inferior, de tal forma que aparezcan manchas rectangulares de 2 cm de base por 0,5 cm de los bordes. Aplicar 12 gotas de 4 ul en cada punto, secando cada vez con corriente de aire a temperatura no superior a 30°. Llenar la cubeta hasta una altura de 2 cm con la solución Britten-Robinson. Sumergir el papel sólo 1 cm y retirarlo cuando el líquido llegue a 1 cm del

36(a).1. Principio. Transformación de la malvina, por la acción controlada de un oxidante apropiado, en una sustancia que a la luz de Wood acusa viva fluorescencia de color verde muy sensible. 36(a).2. Material y aparatos. 36(a).2.1. Lámpara que emita luz fluorescente de 366 nm de longitud de onda (luz de Wood). 36(a).2.2. Tubos de ensayo. 36(a).3. Reactivos. 181021 Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV 131074 Agua PA-ACS Amoníaco (gas) 121085 Etanol 96% v/v PA 131703 Sodio Nitrito PA-ACS 36(a).3.1. Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV. 36(a).3.2. Sodio Nitrito al 1%. Disolver Sodio Nitrito PA-ACS en Agua PA-ACS y ajustar a la concentración indicada. 36(a).3.3. Etanol 96% v/v PA con el 5% de Amoníaco (gas) 36(a).4. Procedimiento. 36(a).4.1. Vinos tintos.- Para vinos tintos introducir en el tubo de ensayo: 1 ml de vino, una gota de Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV, y 1 ml de Sodio Nitrito al 1%. Agitar y esperar dos minutos, después añadir 6 ml de Etanol 96% v/v PA con el 5% de Amoníaco (gas). Agitar, esperar cinco minutos, filtrar y observar el filtrado a la luz de Wood. Si hay malvina se apreciará la fluorescencia color verde. 36(a).4.2. Vinos rosados o claretes.- Introducir en el tubo de ensayo 5 ml de vino, cinco gotas de Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV y 1 ml de Sodio Nitrito al 1%. Agitar, esperar dos minutos y añadir después Etanol 96% v/v PA con el 5% de Amoníaco (gas). Agitar y observar a la luz de Wood (366 nm). 36(a).5. Cálculo. La intensidad de la fluorescencia verde es muy sensible y puede acusar netamente la presencia de una dosis de 0,2% de híbrido Oberlein en el vino, siendo la tolerancia admitida hasta un 2% de riqueza de híbrido Oberlein. 36(a).6. Referencia. 36(a).6.1. Ribereau-Gayon, J.; Peynaud, E. “Analyse et Contrôle des Vins”, pág. 320, 1958.

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borde superior. Ayudar a la desecación con corriente de aire no superior a 30° y terminar la desecación al ambiente. Para obtener una escala patrón preparar una soIución en Etanol 96% v/v PA neutro de Pinacianol o Azul de Quinaldina (Yoduro de 1,1’-Dietilcarbocianina) de 0,5 g/l y diluir a 1/10. Tomar alícuotas de 0,3; 0,4; 0,6; 0,8; 1,2; 1,7; 2,4; 3,5 y 5 ml y completar con Etanol 96% v/v PA hasta 5 ml. A estas mezclas les corresponde un contenido convencional de híbrido de 3; 4; 6; 8; 12; 17; 24; 35 y 50%, respectivamente. Aplicar cada una de estas mezclas como anteriormente. Secar las manchas, recortar y pegar mediante una cola celulósica (aplicar en pequeñas dosis para que no desborde) a lo largo del borde de una tira de cartulina negra. Renovar la escala cada 30 o 45 días, pues pierde intensidad, por lo que hay que conservarla al abrigo de la luz. Observar las manchas del cromatograma a la luz de Wood (366 nm) en cámara oscura y hacer rápidamente la comparación con la escala. Para comprobar la eficacia de la lámpara se hace el siguiente ensayo: Lavar por capilaridad con Etanol 96% v/v PA el papel Arches de cromatografía. Aplicar solución alcohólica de Pinacianol de 1 mg/l en cantidad tal que la mancha sea visible y la misma cantidad diluida a la mitad de una mancha no visible en las mismas condiciones de observación. Regular la distancia de la lámpara a la hoja para conseguir este efecto. 36(b).5. Cálculo. Si al observar el cromatograma del vino a la luz de Wood en las condiciones expuestas se aprecian manchas de color rojo ladrillo y fluorescentes de un Rf = 0,55 ± 0,09 será clara manifestación de presencia de malvina. Para el análisis cuantitativo, comparar con la escala patrón. La intensidad del color de cada mancha de la escala testigo de solución de pinacianol será valorada por el número de mg de pinacianol por litro de solución alcohólica con que se ha hecho la mancha sobre el papel. Con esta definición convencional de la intensidad del color de las manchas puede establecerse también, por comparación de estas manchas con las correspondientes a las de cromatogramas de vinos con mezcla conocida de “híbrido”, un coeficiente proporcional a la riqueza de éste presente en los mismos. La sensibilidad de las manchas pueden acusar el 1% de híbrido Oberlein (elegido como patrón). La dosis correspondiente al valor 2 de la escala convencional, o sea el 2% de híbrido Oberlein, es la máxima tolerada provisionalmente por la Convención Internacional. 36(b).6. Referencias. 36(b).6.1. Dorier y Verelle. “Comunication a la Société des Experts-Chemistes de France”. 6 enero 1965. 36(b).6.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A18, 1-4, 1969. 37. METANOL (Alcohol Metílíco) (Método del ácido cromotrópico) 37.1. Principio. Oxidación del alcohol metílico a formaldehído por potasio permanganato en presencia de ácido fosfórico y medida espectrofotométrica de la reacción coloreada del formaldehído con ácido cromotrópico. Coloración violeta específica del formaldehído. 37.2. Material y aparatos. 37.2.1. Matraces aforados de 50 ml. 37.2.2. Baño de agua con regulación a 60-75°. 37.2.3. Espectrofotómetro que permita lectura a 575 nm. 37.2.4. Matraz esférico de cuello largo, de 500 ml y refrigerante con alargadera. 37.3. Reactivos. 171024 Acido Cromotrópico Sal Disódica 2-hidrato RE 131032 Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131091 Metanol PA-ACS-ISO 131527 Potasio Permanganato PA-ACS-ISO 131698 Sodio Disulfito PA-ACS 141717 Sodio Sulfito anhidro PRS 37.3.1. Solución de Potasio Permanganato. Disolver 3 g de Potasio Permanganato PA-ACS-ISO y 15 ml de Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO en 100 ml de Agua PA-ACS. Preparar mensualmente. 37.3.2. Solución de Acido Cromotrópico Sal Disódica 2-hidrato. Solución al 5%. Filtrar si no queda clara. Preparar semanalmente. 37.3.3. Solución al 2% p/v de Sodio Sulfito anhidro PRS. 37.4. Procedimiento. Diluir o ajustar la muestra hasta una concentración total de alcohol de 5-6% en volumen. Utilizando 50 ml de muestra, destilar en destilador simple, recogiendo 40 ml de destilado en baño de hielo. Diluir hasta 50 ml con Agua PAACS (si se ha determinado previamente el alcohol, el destilado puede ajustarse a 5-6% de concentra-

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ción de alcohol y utilizarse para esta prueba). Si hay más de 0,05% de metanol por volumen, diluir hasta aproximadamente esa concentración con Etanol 96% v/v PA previamente diluido al 5,5% con Agua PA-ACS. Para muestras que contengan menos de 0,05% de metanol, poner 200 ml de destilador eficiente de fraccionamiento, colocar el sistema de destilación reflujo total durante 15 minutos y luego destilar lentamente a elevada proporción de reflujo (por lo menos 20:1). Recoger 10 ml de destilado y diluir hasta 160 ml con Agua PA-ACS. Pipetear 2 ml de solución de Potasio Permanganato en un matraz aforado de 50 ml. Enfriar en baño de hielo, añadir 1 ml de muestra diluida y fría y dejar 30 minutos en baño de hielo. Decolorar con un poco de Sodio Disulfito PA-ACS seco (*) y añadir 1 ml de solución de Acido Cromotrópico. Añadir lentamente con agitado y en baño de hielo 15 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y colocar 15 minutos en baño de agua caliente (60-75°). Enfriar, añadir una cantidad suficiente de Agua PA-ACS para llevar aproximadamente a la marca de 50 ml, mezclar y diluir hasta volumen con Agua PA-ACS a la temperatura ambiente. Leer la absorbancia a 575 nm utilizando como reactivo en blanco Etanol al 5,5% tratado análogamente a la forma descrita. Tratar solución patrón de Metanol PA-ACS-ISO, que contenga 0,025% por volumen de Metanol PA-ACS-ISO, en Etanol al 5,5% simultáneamente en la misma forma, y leer la absorbancia (la temperatura del patrón y de la muestra no debe diferir en más de 1°, ya que la temperatura afecta a la intensidad del color). 37.5. Cálculo. Calcular el contenido en metanol expresado en porcentaje. A Metanol = 0,025 —— F A’ A = absorbancia de la muestra. A’ = absorbancia de la solución patrón de metanol. F = factor de dilución de la muestra. 37.6. Observaciones. Si el color de la muestra es demasiado intenso, diluir con reactivo en blanco. No diluir más de tres veces porque la relación de ácido cromotrópico a metanol se reduce demasiado. 37.7. Referencia. 37.7.1. “Association of Official Agricultural Chemists”. Official Methods of Analysis, pág.138, 1965. (*). En el original indica NaHSO3 seco. El Sodio Bisulfito como tal fórmula sólo existe en solución acuosa y por tanto debe entenderse Sodio Disulfito, seco, de fórmula Na2S2O5.

38. NITROGENO (Método Kjeldhal) 38.1. Principio. Transformación del nitrógeno orgánico en amonio sulfato por ataque con ácido sulfúrico en ebullición en presencia de sustancias catalizadoras que acortan el tiempo de la mineralización y adición de sal potásica que eleve el punto de ebullición. Destilación por ebullición de vapor recogiendo el destilado en volumen conocido de solución de ácido sulfúrico. Valoración con solución de sodio tiosulfato, del yodo liberado por el ácido sulfúrico al añadir al destilado solución de potasio yoduro-potasio yodato. 38.2. Material y aparatos. 38.2.1. Aparato micro-Kjeldhal. 38.3. Reactivos. 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 182102 Acido Sulfúrico 0,01 mol/l (0,02N) SV 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 122726 Cobre II Sulfato anhidro PA 171327 Fenolftaleína solución 1% RE Papel Tornasol 131532 Potasio Sulfato PA-ACS-ISO 131540 Potasio Yodato PA-ISO 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 141625 Selenio metal, polvo PRS 182415 Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 181723 Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV 38.3.1. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 38.3.2. Catalizador de Selenio. Mezclar bien pulverizados 80 g de Potasio Sulfato PA-ACS-ISO, 20 g de Cobre II Sulfato anhidro PA y 5 g de Selenio metal, polvo PRS. 38.3.3. Fenolftaleína solución 1% RE y Papel Tornasol. 38.3.4. Acido Sulfúrico 0,01 mol/l (0,02N) SV. 38.3.5. Potasio Yoduro solución al 4%. Disolver Potasio Yoduro PA en Agua PA-ACS y ajustar a la concentración indicada. 38.3.6. Potasio Yodato solución al 5%. Disolver Potasio Yodato PA-ISO en Agua PA-ACS y ajustar a la concentración indicada. 38.3.7. Solución de Sodio Tiosulfato 0,02N. En un matraz aforado diluir a 1:5 Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor de la solución 0,02N obtenida. 38.3.8. Solución concentrada de Almidón soluble RE. 38.4. Procedimiento. Poner en el matraz Kjeldhal 50 ml de vino, evaporar a ebullición lenta hasta unos 10 ml, añadir 10 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y 0,6 g de

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la mezcla pulverizada y bien uniformada de Cobre II Sulfato anhidro PA, Selenio metal, polvo PRS y Potasio Sulfato PA-ACS-ISO, continuar calentando primero lentamente y después enérgicamente, hasta decoloración, y proseguir unos minutos más. Si es necesario se van añadiendo nuevas dosis de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO de 5 en 5 ml. Enfriar, pasar el contenido a matraz aforado de 100 ml arrastrando el residuo con pequeñas porciones de Agua PA-ACS para enjuagar varias veces el matraz, comprobando que los últimos lavados no dan trazas de reacción ácida al papel de tornasol. Tomar una alícuota de 20 ml y llevar al matraz del aparato de destilación, adicionando unas gotas de Fenolftaleína solución 1% RE. En un vaso cilíndrico de unos 200 ml, se añaden 10 ml de Acido Sulfúrico 0,01 mol/l (0,02N) SV. Añadir al matraz solución de Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV (4%) en cantidad suficiente para viraje de la Fenolftaleína solución 1% RE y se encaja rápidamente en su sitio. Conectar el aparato de destilación con el generador de vapor de agua y comenzará el arrastre del amoníaco pasando al refrigerante y recogiendo el destilado en la Solución Sulfúrica. Después de 15-20 minutos, comprobar con papel tornasol si una gota del destilado no acusa reacción alcalina. En este caso separar el vaso y proceder a la valoración. Añadir al vaso con el Acido Sulfúrico 0,01 mol/l (0,02N) SV 4 ml de Potasio Yoduro al 4% y 2 ml de Potasio Yodato al 5%. Mezclar con una varilla y después de 20 minutos valorar el yodo liberado con solución de Sodio Tiosulfato 0,02N empleando como indicador 5-10 ml de solución de Almidón. 38.5. Cálculo. Calcular el nitrógeno expresado en meq/l o en mg/l. 10 - V Nitrógeno = ——— x 100 meq/l 50 10 - V Nitrógeno = ——— x 100 x 14 mg/l 50 V = volumen en ml de solución de sodio tiosulfato 0,02N. 39(a). FLUOR (Provisional) 39(a).1. Principio. Incineración de 525° del vino en presencia de un exceso de calcio o magnesio, destilación en corriente de vapor del ácido fluorhídrico a 135140°, valoración del ácido destilado a pH 3,6 por solución de torio nitrato en presencia de alizarina sodio suifonato. 39(a).2. Material y aparatos. 39(a).2.1. Aparato de Truhaut, que consta de generador de vapor, barbotador de pared doble, ampolla para la introducción de la solución sulfúrica de las cenizas magnéticas, refrigerante de retorno y refrigerante de West para la salida del destilado (figura 39.I.). 39(a).2.2. Cápsula de platino o níquel para las cenizas. 39(a).2.3. Horno eléctrico regulable para 525°. 39(a).2.4. Matraz de 250 ml. 39(a).2.5. Dos cápsulas de porcelana iguales, de unos 10 cm de diámetro. 39(a).2.6. Material para volumetría. 39(a).3. Reactivos. 181021 Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV 171024 Acido Cromotrópico Sal Disódica 2-hidrato RE 131057 Acido Sulfanílico PA-ACS 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171168 Azul de Bromotimol solución 0,04% RE 211376 Lana de Vidrio lavada QP 131394 Magnesio Acetato 4-hidrato PA-ACS 211276 Magnesio Oxido QP 141801 Plata Sulfato PRS 171634 Sodio Acetato 1 mol/l (1M) RE 181694 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV Tetracloroetano Torio Nitrato 4-hidrato 39(a).3.1. Solución Tampón de pH = 3,1. Mezclar 100 ml de Sodio Acetato 1 mol/l (1M) RE, 303 ml de Agua PA-ACS y 97 ml de Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV. 39(a).3.2. Solución de Torio Nitrato 0,01N. Disolver 1,3806 g de Torio Nitrato 4-hidrato, en un litro de Agua PA-ACS. 39(a).3.3. Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV. 39(a).3.4. Acido Sulfúrico al 1/10. Diluir convenientemente Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS. 39(a).3.5. Azul de Bromotimol solución 0,04% RE. 39(a).3.6. Magnesio Oxido al 1/10. Suspensión de Magnesio Oxido QP en Agua PA-ACS.

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39(a).3.7. Magnesio Acetato al 1/10. Disolver Magnesio Acetato 4-hidrato PA-ACS en Agua PAACS. 39(a).3.8. Solución Spadns. Añadir a 0,02 g de Spadns, Agua PA-ACS hasta 100 ml. El Spadns resulta de la combinación del Acido Sulfanílico PAACS con el Acido Cromotrópico Sal Disódica 2-hidrato RE. Su proceso de preparación es laborioso. Se encuentra preparado por Eastman-Kodak. 39(a).3.9. Plata Sulfato PRS. 39(a).4. Procedimiento. 39(a).4.1. Incineración.- Poner 20 ml de vino en cápsula de platino o de níquel, añadir 2 ml de suspensión de Magnesio Oxido al 1/10 y 4 ml de Magnesio Acetato al 1/10. Evaporar, desecar y calcinar en el horno a 550°C. 39(a).4.2. Destilación.- Colocar en el barbotador del aparato Truhaut 20 ml de Acido Sulfúrico 96%

PA-ISO diluido al 50% en Agua PA-ACS, 0,5 g de Lana de Vidrio lavada QP y 0,5 g de Plata Sulfato PRS, con el fin de retener el Acido Clorhídrico. Llevar el barbotador a 146°C por ebullición del Tetracloroetano (punto de ebullición 146°) en la doble pared (A) y forzar la corriente de vapor de agua a la velocidad de 5 g por minuto. Conviene calentar previamente el Tetracloroetano en la doble pared del aparato antes de que barbote el vapor en el líquido, por haberse observado que así se evitan la formación de burbujas de espuma, que son un peligro por posible desborde y paso al refrigerante de salida. Se continúa la destilación hasta recoger unos 100 ml de destilado. Con estas operaciones queda el aparato desprovisto de posible presencia de flúor. Disolver las cenizas en el menor volumen posible de Acido Sulfúrico al 1/10 e introducir en el barbota-

REFRIGERANTE LIEBIG-WEST 40 cm, BOCAS 14/23

Figura 39.I. Aparato de Truhaut

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El barbotador (C) tiene una pared doble (A) donde se hierve el tetracloroetano a 146°. El tubo de entrada de vapor de agua rodea (E) la pared interna y penetra en su interior, prolongándose verticalmente hasta casi el fondo. El refrigerante de retorno para condensar los vapores de tetracloroetano se conecta en (B). La ampolla (F), con llave y tapón esmerilado, se ajusta a la boca del barbotador y el tubo penetra hasta la misma altura que el punto de entrada del tubo de vapor de agua. La salida del destilado comunica con refrigerante de West, vertical que se prolonga por alargadera tubular cuyo pico se sumerge en el agua que contiene el matraz receptor.

REFRIGERANTE DE BOLAS DE REFUERZO 30 CM. BOCAS 14 / 23

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dor, enfriando previamente el líquido del barbotador antes de verter en él la solución sulfúrica de cenizas. Proseguir la destilación con el barboteo de vapor, comenzando por calentar previamente, como se ha indicado, el Tetracloroetano contenido en la doble pared. Recoger unos 100 ml de destilado en un matraz de 250 ml que contenga 5 ml de Agua PA-ACS, de forma que quede sumergido el pico de la alargadera del refrigerante. 39(a).4.3. Valoración.- Descarbonatar el destilado por agitación en frío y con vacío neutralizar con Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV en presencia de Azul de Bromotimol solución 0,04% RE como indicador. Llevar después a una cápsula de porcelana blanca bien limpia, siendo recomendable frotar previamente su interior con pasta silícea y enjuagarla con Agua PA-ACS. Añadir a 50 ml del destilado 1 ml de solución acuosa de Spadns y 1 ml de Solución Tampón de pH = 3,1. Añadir con microbureta solución de Torio Nitrato 0,01N hasta viraje a rojo violeta. Para apreciar el punto del viraje se compara la tonalidad del color con la de una valoración testigo hecha en otra cápsula igual y con el mismo volumen de Solución Tampón, 1 ml de Spadns y 0,05 ml de solución de Torio Nitrato. Se ha observado que con 0,1 ml de Torio Nitrato es más clara la comparación de colores. Restar del volumen de Torio Nitrato gastado en el líquido problema los 0,05 y 0,1 ml añadidos al testigo. 39(a).5. Cálculo. Equivalencia: 1 ml de solución de torio nitrato 0,01N < > 0,19 mg de flúor. Expresar los resultados en mg de flúor por litro y con una aproximación de unos 0,5 mg. 39(a).6. Referencia. 39(a).6.1. Fabré, R.; Trumant, A.; Bouquet, A., y Bernuchon, J. (1960-1965), Cont. Rendu Aca. Sciences.1965, 240, pág. 211; 1959, 248, pág. 504. 39(b). FLUOR 39(b).1. Principio. Determinación directa del flúor total por potenciometría utilizando un electrodo iónico específico. Para eliminar las posibles causas de error se le adiciona al vino una solución tampón. 39(b).2. Material y aparatos. 39(b).2.1. pH-metro con escala que permita apreciar 0,1 mV. 39(b).2.2. Electrodo selectivo de flúor. 39(b).2.3. Electrodo de referencia de calomelanos. 39(b).2.4. Microbureta graduada en 1/100 de ml. 39(b).2.5. Recipientes de plástico de 50-100 ml de capacidad para mezclas y matraces en material de plástico para conservar las soluciones patrón. 39(b).2.6. Pipetas de precisión graduadas en microlitros. 39(b).2.7. Agitador magnético. 39(b).3. Reactivos. 131032 Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131675 Sodio Fluoruro PA-ACS-ISO 39(b).3.1. Solución patrón de fluoruros 10–2M – conteniendo 190 mg de F por litro. Pesar 0,4198 g de Sodio Fluoruro PA-ACS-ISO (desecado durante cuatro horas a 106°C antes de su utilización), disolver y enrasar a un volumen de 1.000 ml. 39(b).3.2. Solución Tampón de Acido orto-Fosfórico 0,75 M. Diluir convenientemente Acido ortoFosfórico 85% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS. 39(b).4. Procedimiento. 39(b).4.1. Verificación del electrodo y determinación de su pendiente. A partir de la solución 3.1 preparar, mediante diluciones, soluciones de concentraciones conocidasde 10–3M, 10–4M y 10–5M, que contienen, respectivamente, 19; 1,9 y 0,19 mg de F – por litro. Tomar dos vasos de precipitados; en uno de – ellos colocar 25 ml de la disolución 10–3M de F , adicionar 5 ml de solución Tampón de Acido ortoFosfórico y determinar su potencial agitando de forma moderada mientras dure la medida. En el otro – vaso, poner 25 ml de disolución 10–4M de F , 5 ml de solución Tampón de Acido orto-Fosfórico y determinar su potencial, agitando como anteriormente. La diferencia entre los dos potenciales es la pendiente del electrodo (S) y cuyo valor debe ser, aproximadamente, 59 mV. 39(b).4.2. Determinación. Tomar 25 ml de vino, adicionar 5 ml de la solución Tampón y determinar su potencial (E1). A continuación, y en el mismo vaso, adicionar un ml de – disolución 10–3M de F y determinar su potencial (E2) Si el salto de potencial es pequeño, indica que la – concentración de F es muy alta y hay que diluir la muestra hasta que el salto alcanzado esté comprendido alrededor de 20-40 mV. Los volúmenes de muestra y solución Tampón pueden ser modificados en función de la forma y disposición de los electrodos utilizados. 39(b).5. Cálculo. La cantidad de flúor, expresada en mg/l, nos viene determinada por la fórmula:

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V.C CF- = ——————————— E 25 [(antilog —— ) - 1] S Siendo: – CF- = concentración, en mg/l, de F en el medio. V = volumen, en ml, de solución patrón de fluoruro añadida. C = concentración, en mg/l, de la solución patrón adicionada. S = pendiente del electrodo. E = diferencia de los potenciales E1 y E2 obtenidos en 39(b).4.2. Este valor se deberá multiplicar por el factor de dilución correspondiente, en caso de haber sido necesario efectuarla. 39(b).6. Observaciones. 39(b).6.1. Todas las soluciones deben conservar una temperatura próxima a 25°C ±1°C durante la medida . 39(b).7. Referencias. 39(b).7.1. H. E. Haller y C. H. Junge, 1974, O. I. V. 317/FV/518 y 133/FV/439. 39(b).7.2. Deschreider, A., y Mme. R. Meaux, 1974. Determination des fluor dans les vins et eaux minerales naturelles au moyen d’une electrode ionique specifique. 40. HIDROXIMETILFURFURAL (Provisional) 40.1. Principio. El hidroximetilfurfural se produce al calentar en exceso los mostos para su concentración, desulfitación o pasterización. La presencia de hidroximetilfurfural en ciertos vinos dulces se considera como indicio de la adición de mostos. Este método está basado en la reacción de Winckler (formación de un complejo rojo para la acción del hidroximetilfurfural sobre la p-toluidina y ácido barbitúrico). Se utiliza para los vinos blancos y tintos, previa extracción con éter etílico en los segundos. 40.2. Material y aparatos. 40.2.1. Espectrofotómetro y accesorios (cubeta para 1 cm de espesor del líquido). 40.2.2. Matraces aforados. 40.2.3. Embudo de decantación con tapón esmerilado y de 100 ml de capacidad. 40.2.4. Cápsula de porcelana de unos 10 cm de diámetro. 40.3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO Acido Barbitúrico

131090 2-Propanol PA-ACS-ISO 132770 Eter Dietílico estabilizado con de BHT PA-ACS-ISO 162378 P-Toluidina PS

6 ppm

40.3.1. Reactivo de p-Toluidina. Disolver 10 g de p-Toluidina PS en 50 ml de 2-Propanol PA-ACSISO. Llevar a matraz aforado de 100 ml, añadir 10 ml de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO y completar hasta el enrase con 2-Propanol PA-ACS-ISO. Este reactivo dura 4 días. 40.3.2. Reactivo de Acido Barbitúrico. Se introduce en matraz aforado de 100 ml, 0,5 g de Acido Barbitúrico desecado a 105°C y unos 70 ml de Agua PA-ACS. Se calienta ligeramente en baño de agua, se enfría y enrasa con Agua PA-ACS. 40.4. Procedimiento. Llevar 10 ml del vino a embudo de decantación y añadir 12 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. Agitar durante 3 minutos, decantar el Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO a cápsula de porcelana que contenga 2 ml de Agua PA-ACS, repetir cuatro veces la extracción del residuo del embudo con otros 12 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO cada vez y decantar igualmente a la cápsula. Dejar evaporar el éter en medio ambiente. Al residuo de evaporación añadir Agua PA-ACS hasta 10 ml, agitar y tomar 2 ml para análisis. Mezclar los 2 ml tomados con 5 ml de Reactivo de p-Toluidina y un 1 ml de Acido Barbitúrico llevándolos inmediatamente a la cubeta del espectrofotómetro (de un cm de espesor del líquido) y hacer rápidamente la lectura de la absorbancia a 546 nm. Emplear como líquido de referencia el Agua PA-ACS en lugar de Acido Barbitúrico, o sea, 3 ml de Agua PA-ACS más 5 ml de Reactivo de p-Toluidina. 40.5. Cálculo. Determinar el contenido en hidroximetilfurfural expresado en mg/l por comparación con la correspondiente curva patrón teniendo en cuenta el factor de dilución. 40.6. Observaciones. En el caso de vinos turbios centrifugar previamente. Si hay presencia de CO2 eliminarlo agitando el vino en un matraz. 40.7. Referencias. 40.7.1. Sandoval, J. A.; Hidalgo, T. “Puesta a punto de un método para análisis cuantitativo espectrofotométrico de hidroximetilfurfural en los vinos”. Boletín I. N. I. A., 16: 4. 454-469,1967. 40.7.2. Amerine, M. A. “Hydroximethyl-furfural in California Wines”. Food Research. 13: 264-269, 1948.

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41. DETERMINACION CUALITATIVA DE ACIDO SORBICO, BENZOICO, p-CLOROBENZOICO, SALICILICO, p-HIDROXIBENZOICO Y SU ESTER ETILICO 41.1. Principio. Extracción con éter etílico de los antisépticos del vino previamente acidificados. Separación por cromatografía de capa fina. Identificación a la luz ultravioleta y reveladores específicos. 41.2. Material y aparatos. 41.2.1. Extractor en continua de Palkin (figura 41.I) que comporta un tubo A de 55 cm de longitud y 3,8 cm de diámetro. La parte superior va unida a un refrigerante de bolas mediante boca esmerilada 34-25. A 30 cm de la base y formando un ángulo de 60º se encuentra un tubo lateral acodado a los 13 cm, formando un ángulo de 120°. Este tubo lateral termina en una junta esmerilada 24/40 en bisel, lo que permite su unión a un matraz de 50 ml que se calienta sobre una placa. En el tubo A se introducen bolitas de vidrio y el tubo interior (B) de 48,5 cm de longitud y 1,2 cm de diámetro, terminando en una placa de vidrio poroso. 41.2.2. Agitador mecánico (ver 41.6.1). 41.2.3. Erlenmeyer de 500 ml de boca esmerilada. 41.2.4. Baño María. 41.2.5. Estufa eléctrica (200º C). 41.2.6. Embudos de separación de 500 ml. 41.2.7. Cápsulas de porcelana de 70-80 cm de diámetro. 41.2.8. Equipo de cromatografía de capa fina. 41.2.9. Placas de vidrio de 20 x 20 cm. 41.3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 121014 Acido Benzoico PA 182108 Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) SV Acido p-Clorobenzoico 163231 Acido 4-Hidroxibenzoico PS 141045 Acido Salicílico (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX 141055 Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX 131057 Acido Sulfanílico PA-ACS 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO Acido Tiobarbitúrico 131074 Agua PA-ACS 121086 Etanol absoluto PA 121085 Etanol 96% v/v PA 132770 Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm BHT PA-ACS-ISO 132063 n-Hexano PA-ACS 131252 Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO 164542 4-Nitroanilina PS 122006 n-Pentano PA Polvo de Poliamida para Cromatografía 131500 Potasio Dicromato PA-ISO Revelador F 254 131633 Sodio Acetato anhidro PA-ACS 131647 Sodio Carbonato 10-hidrato PA-ISO 182159 Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV 131703 Sodio Nitrito PA-ACS 131716 Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO 131091 Metanol PA-ACS-ISO 41.3.1. Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 41.3.2. Metanol PA-ACS-ISO. 41.3.3. Etanol 96% v/v PA 41.3.4. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO diluido a 20% (v/v) con Agua PA-ACS. 41.3.5. Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO. 41.3.6. Polvo de Poliamida para cromatografía Macherey-Nagel o Merck. 41.3.7. Revelador F 254 Merck o equivalente. 41.3.8. Solventes: n-Pentano PA: 10 partes. n-Hexano PA-ACS: 10 partes. Acido Acético glacial PA-ACS-ISO: 3 partes. 41.3.9. Soluciones patrones. Preparar soluciones de 0,1 g por 100 ml en Etanol 96% v/v PA con los Acidos Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX, p-Clorobenzoico, Salicílico (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX, 4-Hidroxibenzoico PS y sus ésteres. Preparar una solución de 0,2 g por 100 ml en Etanol 96% v/v PA con el Acido Benzoico PA. 41.3.10. Preparación de las placas. 10 g de Poliamida con el 3% de indicador fluorescente se homogenizan durante 20 segundos en agitador mecánico con 35 ml de Metanol PA-ACS-ISO y 25 ml de Triclorometano estabilizado con etanol PAACS-ISO. Las placas impregnadas se secan durante 1 hora a 80°C. 41.3.11. Solución hidroalcohólica conteniendo 0,15 g por 100 de Potasio Dicromato PA-ISO (41.6.2). 41.3.12. Solución saturada de Acido Tiobarbitúrico en Etanol 96% v/v PA (0,1% aproximadamente) (41.6.2). 41.3.13. Solución de 0,5 g de 4-Nitroanilina en 100 ml de Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) SV (41.6.3). 41.3.14. Solución de Sodio Nitrito al 5% (41.6.3). Disolver Sodio Nitrito PA-ACS en Agua PA-ACS. 41.3.15. Solución de Sodio Acetato al 20% (41.6.3). Disolver Sodio Acetato anhidro PA-ACS en Agua PA-ACS. 41.3.16. Solución de Sodio Carbonato al 15% (41.6.3). Disolver Sodio Carbonato 10-hidrato PAISO en Agua PA-ACS. 41.3.17. Reactivo de Pauly. Disolver 4,5 g de Acido Sulfanílico PA-ACS en 45 ml de Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) SV (calentando, diluir la solución a 500 ml en Agua PA-ACS, 10 ml de la solución diluida se enfrían con hielo), se le añaden 10 ml de solución acuosa de Sodio Nitrito al 4,5% también fría. El

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reactivo resultante se mantiene durante 15 minutos a 0°C (a esta temperatura es estable de 1 a 3 días) y se le añade un volumen igual de solución acuosa de Sodio Carbonato al 10% en el momento de pulverizar las placas (41.6.4). 41.4. Procedimiento. Acidular 100 ml de vino o mosto con 10 ml de Acido Sulfúrico al 20%.

Extraer tres veces con 20 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO cada vez, reuniendo las soluciones etéreas; o bien, durante 6 horas en el extractor continuo de Palkin con 175 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO a una velocidad de reflujo de 500-600 ml/hora. Los extractos etéreos se desecan con 6 g de Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO durante 12 horas. Filtrar y el Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO se evapora a sequedad en baño María 40-45°. El residuo se disuelve en un ml Etanol absoluto PA tomando cantidades de 5 a 10 l para cromatografía. Mediante el tratamiento de los extractos etéreos con 5 ml de Sodio Hidróxido 2,5N (diluir a 1:1 Sodio Hidróxido 5 mol/l (5N) SV con Agua PA-ACS) y acidulado de nuevo con 5 ml de Acido Sulfúrico al 20% se obtendrá en los cromatogramas las manchas correspondientes a los ácidos liberados por efecto de la saponificación. Para obtener el desarrollo de los cromatogramas, depositar la muestra en forma de manchas puntuales de 5-10 l. El desarrollo se lleva a cabo en cámara saturada con el eluyente y a temperatura ambiente. Dejar migrar el solvente hasta una altura de unos 15 cm (una hora y media a dos horas y media). Retirar la placa de la cubeta y dejar secar a la temperatura ordinaria. 41.5. Cálculo. Observación a la luz ultravioleta (360 nm). Los conservadores aparecen de abajo arriba en el siguiente orden: ácido 4-hidroxibenzoico, ésteres del ácido 4-hidroxibenzoico, ácido salicílico, ácido p-clorobenzoico, ácido benzoico y ácido sórbico. Para detectar el ácido sórbico pulverizar primeramente el cromatograma con la solución 41.3.11 y seguidamente con la 41.3.12. Calentar la placa a 80°C, 5-10 minutos. La mancha de ácido sórbico aparece de color rojo sobre fondo ocre. Para detectar los ácidos salicílico y 4-hidroxibenzoico y éster etílico del ácido 4-hidroxibenzoico, pulverizar la placa con una mezcla compuesta de 2 ml de 41.3.13 más 3-5 gotas de 41.3.14 más 8 ml de 41.3.15, añadiéndolos en este orden. Una vez seca la placa aparecen las manchas correspondientes a los tres componentes citados de color amarillo. La materia colorante propia de los vinos toma colores que van del amarillo al naranja. Pulverizar de nuevo con la solución 41.3.16. La manchas del ácido 4-hidroxibenzoico toman color rojo; las del éster etílico del ácido 4-hidroxibenzoico, color rosa, y las del acido salicílico, amarillo limón. Los distintos componentes de la materia colorante toman colores que van desde distintos tonos de ocre al pardo y también verde y azulado.

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Figura 41.l. Extractor continuo de Palkin

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Para detectar los ácidos 4-hidroxibenzoico y salicílico y el éster etílico del ácido 4-hidroxibenzoico se utiliza empleando el reactivo 41.3.17. 41.6. Observaciones. 41.6.1. Para el análisis cualitativo. 41.6.2. Para detectar el ácido sórbico. 41.6.3. Para detectar los ácidos salicílico y 4-hidroxibenzoico y éster etílico del ácido 4-hidroxibenzoico. 41.6.4. Para detectar los ácidos 4-hidroxibenzoico y salicílico y el éster etílico del ácido 4-hidroxibenzoico. 42. INVESTIGACION DE DERIVADOS MONOHALOGENADOS DEL ACIDO ACETICO 42.1. Principio. Extracción de los derivados monohalogenados del ácido acético con éter etílico previamente acidificado. Formación de tioindigo, de color rojo, que se extrae con cloroformo. El método permite detectar de 1,5 a 2 mg/l de ácido monocloroacético y las cantidades correspondientes de otros derivados monohalogenados. 42.2. Material, aparatos y reactivos. 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO Acido Tiosalicílico 131074 Agua PA-ACS 131252 Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO 132770 Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 131503 Potasio Hexacianoferrato lll PA-ACS 181692 Sodio Hidróxido 0,5 mol/l (0,5N) SV 182158 Sodio Hidróxido 2 mol/l (2N) SV 131716 Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO 42.2.1. Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 42.2.2. Acido Sulfúrico (1 + 4) (v/v) . Diluir Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS. 42.2.3. Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO desecado en estufa a 105°C. 42.2.4. Sodio Hidróxido 0,5 mol/l (0,5N) SV. 42.2.5. Acido Tiosalicílico (2 Mercaptobenzoico) al 3% (p/v) en Sodio Hidróxido 1,5N (diluir Sodio Hidróxido 2 mol/l (2N) SV con Agua PA-ACS y ajustar a la concentración indicada). 42.2.6. Potasio Ferricianuro al 2% (preparar inmediatamente antes de usar). Disolver Potasio Hexacianoferrato lll PA-ACS en Agua PA-ACS. 42.2.7. Triclorometano estabilizado con etanol PA-ACS-ISO. 42.2.8. Baño de agua. 42.2.9. Estufa eléctrica. 42.2.10. Embudos de separación. 42.2.11. Cápsulas de porcelana 70-80 mm Ø. 42.2.12. Tubos de 150 x 15 mm con tapón esmerilado. 42.2.13. Tubos de 150 x 15 mm con llave inferior. 42.3. Procedimiento. Introducir en un Erlenmeyer de 500 cc y boca esmerilada 100 ml de vino, 5 ml de Acido Sulfúrico (1+5) y, agitando, 100 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO, continuando en un agitador durante una hora. Separar en embudo de decantación y descartar la capa inferior. Añadir 8-10 g de Sodio Sulfato anhidro PA-ACS-ISO al extracto éter, agitando vigorosamente. Verter el éter en otro embudo de 500 ml, agregando sucesivamente: 5,0, 2,5 y 2,5 ml de Sodio Hidróxido 0,5 mol/l (0,5N) SV, agitando un minuto cada vez y reuniendo las tres capas inferiores alcalinas obtenidas en un tubo con tapón esmerilado, en el cual se habrá vertido previamente 1 ml de la solución de Acido Tiosalicílico. Agitar enérgicamente durante treinta segundos y transferir el contenido del tubo a una cápsula de porcelana, evaporando durante una hora en baño de agua (90-100°C), tiempo que habrá de respetarse aun cuando el agua se evapore mucho antes. Si se formara una costra sobre la superficie, es conveniente romperla con una varilla fina de vidrio, lo que facilitará la evaporación. Pasado este tiempo, llevar la cápsula con el residuo seco a la estufa mantenida a 200°C durante treinta minutos exactamente, pasados los cuales se retira y se deja enfriar a la temperatura ambiente. Añadir 2 ml de Agua PA-ACS que disolverá la mayor parte del extracto y recoger en un tubo con llave en su parte inferior; agregar otros 2 ml de Agua PA-ACS para lavar la cápsula y, por último, 3 ml de solución de Potasio Ferricianuro, recogiendo todo ello con los primeros, agitando bien el tubo durante treinta segundos para facilitar la oxidación. Conviene asegurarse de que todo el residuo se disolvió bien en los 4 ml de Agua PA-ACS antes de añadir la solución de Potasio Ferricianuro. En presencia de un derivado monohalogenado se desarrollará una coloración rojo-anaranjado (apenas perceptible para contenidos inferiores a 0,1 mg). Agregar 3 ml de Triclorometano estabilizado con etanol PAACS-ISO; agitar alternativamente tres-cuatro veces y decantar. Si el extracto clorofórmico inferior se colorea de rojo-fucsia o rosado, indica la presencia de derivados monohalogenados del ácido acético. 42.4. Referencias. 42.4.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A 35h. 42.4.2. Cabezuco, Gorostiza y Garrido: Determinación de derivados monohalogenados del ácido acético. Instituto de Fermentaciones (1971, ATA, vol. II, núm. 1, páginas 145-151).

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43. GRADO ALCOHOLICO EN POTENCIA 43.1. Principio. Es el volumen en litros de alcohol susceptible de obtenerse por fermentación total de los azúcares contenidos en 100 litros de vino. 43.2. Material y aparatos. Como en 7(a).2 o 7(b).2. 43.3. Reactivos. Como en 7(a).3 o 7(b).3. 43.4. Procedimiento. Como en 7(a) o 7(b). 43.5. Cálculo. N-1 Grado alcohólico en potencia = ———— 17 donde: N = g/l de azúcares reductores de la muestra. 44. GRADO ALCOHOLICO TOTAL 44.1. Principio. Se considera el grado alcohólico total como la suma del grado alcohólico adquirido determinado según 5(a) o 5(b), y del grado alcohólico potencial, determinado según 43. 44.2. Cálculo. Grado alcohólico total = Grado alcohólico adquirido + + Grado alcohólico potencial. 45. COLORANTES SINTETICOS 45.1. Principio. Concentración mediante ebullición, extracción con éter etílico y fijación de colorantes sintéticos básicos y ácidos sobre lana y posterior confirmación por cromatografía en papel. 45.2. Material y aparatos. 45.2.1. Hebras de lana blanca previamente desengrasadas con Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 45.2.2. Hebras de lana blanca mordentadas. Disolver 1 g de Aluminio Sulfato 18-hidrato escoriforme (BP, F. Eur.) PRS-CODEX y 1,2 g de Potasio Hidrógeno Tartrato PA en 500 ml de Agua PA-ACS. Introducir en esta solución 10 g de hebras de lana blanca, previamente desengrasadas con Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO y secas, agitar durante una hora y dejar reposar de

dos a tres horas; transcurrido dicho tiempo, secar a temperatura ambiente. 45.2.3. Papel para cromatografía Whatman número 1 o similar. 45.2.4. Erlenmeyer de 50 ml de capacidad. 45.2.5. Ampolla de decantación de 200 ml de capacidad. 45.3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 131082 1-Butanol PA-ACS-ISO 121085 Etanol 96% v/v PA 141101 Aluminio Sulfato 18-hidrato escoriforme (BP, F. Eur.) PRS-CODEX 141128 Amoníaco 20% (en NH3) PRS 132770 Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 121486 Potasio Hidrógeno Tartrato PA 131687 Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO 45.3.1. Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 45.3.2. Sodio Hidróxido al 5%. Disolver Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS. 45.3.3. Acido Acético glacial PA-ACS-ISO. 45.3.4. Acido Acético diluido, 1/18 (v/v). Diluir Acido Acético glacial PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS. 45.3.5. Acido Clorhídrico diluido 1/10 (v/v). Diluir Acido Clorhídrico 35% PA-ISO con Agua PA-ACS. 45.3.6. Amoníaco 20% (en NH3) PRS. 45.3.7. Solvente número 1 para cromatografía de colorantes de carácter básico: 1-Butanol PA-ACS-ISO . . . . . . . . . . . 50 ml Etanol 96% v/v PA . . . . . . . . . . . . . . 25 ml Acido Acético glacial PA-ACS-ISO . . . 10 ml Agua PA-ACS. . . . . . . . . . . . . . . . . . 25 ml 45.3.8. Solvente número 2 para la cromatografía de colorantes de carácter ácido: 1-Butanol PA-ACS-ISO . . . . . . . . . . . 50 ml Etanol 96% v/v PA . . . . . . . . . . . . . . 25 ml Amoníaco 20% (en NH3) . . . . . . . . . . 10 ml Agua PA-ACS. . . . . . . . . . . . . . . . . . 25 ml 45.4. Procedimiento. 45.4.1. Determinación de colorantes de carácter básico. Poner 200 ml de vino en un Erlenmeyer de 500 ml y llevar a ebullición hasta que el vino se reduzca a un tercio de su volumen. Enfriar y neutralizar con la solución de Sodio Hidróxido al 5% hasta claro viraje del color natural del vino. Extraer dos veces, con 30 ml de Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO cada vez, y juntar las dos fases etéreas; en ellas se encuentran eventualmente los colorantes básicos; el residuo de la extracción debe ser conservado con objeto de investigar los colo-

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rantes ácidos. Lavar dos veces el Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO empleado en la extracción con 5 ml de Agua PA-ACS, con el objeto de eliminar el Sodio Hidróxido; a continuación, añadir 5 ml de Acido Acético diluido a la fase etérea; la presencia de un colorante básico colorea la fase ácido-acuosa; la presencia de este colorante puede confirmarse por su fijación sobre lana mordentada. La fase ácido-acuosa obtenida se alcaliniza con Amoníaco 20% (en NH3) PRS previamente diluido al 5% con Agua PA-ACS; añadir 0,5 g de lana mordentada y llevar a ebullición durante un minuto; aclarar la lana bajo el chorro de agua fría; de permanecer coloreada, el vino contiene un colorante básico. 45.4.1.1. Caracterización por cromatografía de papel. A partir de la fase acético-acuosa que contiene el colorante básico, concentrar hasta 0,5 ml. Si el colorante ha sido fijado sobre lana, añadir a ésta 10 ml de Agua PA-ACS, 10 gotas de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO y llevar a ebullición, y una vez retirada la lana previamente escurrida, concentrar la solución hasta 0,5 ml. Depositar sobre papel de cromatografía 20 microlitros de la anterior solución concentrada a 3 cm del borde lateral y a 2 cm del borde inferior. Introducir dicho papel en una cubeta que contenga el solvente 45.3.7. de forma que su borde inferior esté sumergido en el solvente 1 cm. Retirar y dejar secar al aire cuando se haya alcanzado una altura del frente del solvente comprendido entre 20 o 25 cm. Identificar el colorante por medio de soluciones de colorantes sintéticos básicos depositados simultáneamente sobre el cromatograma. 45.4.2. Determinación de colorantes de carácter ácido. Partir del residuo de vino concentrado a un tercio y neutralizado después de su extracción con Eter Dietílico estabilizado con 6 ppm de BHT PA-ACS-ISO; si no se realizó la determinación de colorante de carácter básico, poner 200 ml de vino en un Erlenmeyer de 500 ml y llevar a ebullición hasta que el vino se reduzca a un tercio de su volumen. En uno u otro caso, añadir 3 ml de Acido Clorhídrico diluido (45.3.5) y 0,5 g de lana blanca; hervir durante cinco minutos, decantar el líquido y lavar la lana con Agua PA-ACS abundante. En el Erlenmeyer que contiene la lana, añadir 100 ml de Agua PAACS y 2 ml de Acido Clorhídrico diluido (45.3.5); hervir durante cinco minutos, decantar el líquido ácido y repetir esta operación hasta que el líquido de lavado sea incoloro. Después de haber lavado bien la lana, para eliminar completamente el líquido ácido añadir 50 ml de Agua PA-ACS y 10 gotas de Amoníaco 20% (en NH3) PRS; llevar a ebullición suave durante diez minutos a fin de disolver la materia colorante artificial que eventualmente se haya fijado sobre la lana. A continuación, retirar la lana del Erlenmeyer, llevar el volumen de líquido a 100 ml y hervir hasta evaporación completa del Amonio Hidróxido; una vez conseguida dicha evaporación, añadir 2 ml de Acido Clorhídrico diluido (45.3.5) (comprobar que el líquido haya adquirido reacción francamente ácida, llevando una gota de éste sobre el papel indicador). Poner en el Erlenmeyer 60 mg de lana blanca y llevar a ebullición durante cinco minutos; retirar la lana y aclararla bajo el chorro de agua fría. Si después de esta operación la lana toma coloración roja, cuando se trata de vino tinto, o amarilla, si se trata de vino blanco, confirma la presencia de materia colorante orgánica artificial de naturaleza ácida. Si la coloración adquirida es débil o dudosa, repetir el tratamiento con Amoníaco 20% (en NH3) PRS y hacer una segunda fijación sobre una hebra de lana de 30 mg. Si transcurrida esta segunda fijación se obtiene una coloración rosa, aunque sea débil, se deduce la presencia de colorante ácido. Recurrir para un análisis más completo a nuevas fijaciones-eluciones (hasta 4 o 5), operando siempre de forma idéntica a la empleada para la segunda fijación hasta que se obtenga una coloración rosácea que, aunque sea pálida, no ofrece lugar a dudas. 45.4.2.1. Caracterización por cromatografía de papel. Añadir sobre la hebra de lana coloreada 10 ml de Agua PA-ACS, 10 gotas de Amoníaco 20% (en NH3) PRS y llevar a ebullición; retirar la lana previamente escurrida y concentrar la solución amoniacal hasta 0,5 ml. Depositar sobre papel de cromatografía 20 microlitros de la anterior solución concentrada, a 3 cm del borde lateral y a 2 cm del borde inferior; introducir dicho papel en una cubeta que contenga el solvente 45.3.8 de forma que su borde inferior esté sumergido en el solvente 1 cm. Retirar y dejar secar al aire cuando se haya alcanzado una altura del frente del solvente comprendida entre 20 o 25 cm. Identificar el colorante por medio de soluciones de colorantes sintéticos ácidos depositados simultáneamente sobre el cromatograma. 45.5. Referencia. 45.5.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. A43k, páginas 1-6. 46. MERCURIO 46.1. Principio. Oxidación de la materia orgánica con ácido nítrico y crómico, reducción de las sales mercúricas por acción de Sn2+, volatilización del Hg metálico, arrastre del mismo por corriente de aire y determinación de su absorbancia a 253,7 nanómetros. Este método es aplicable a concentraciones de mercurio superiores a 0,05 mg/l.

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46.2. Material y aparatos. 46.2.1. Espectrofotómetro de absorción. 46.2.2. Lámpara de mercurio. 46.2.3. Aparato para la reducción del ion mercúrico a mercurio metal y posterior arrastre de éste con corriente de aire (figura 46.1). 46.2.4. Matraces de reacción de forma cónica de 100 ml de capacidad. 46.2.5. Bomba peristáltica accionada con motor provisto de vaciador de velocidad. 46.2.6. Llave de purga en T de teflón. 46.2.7. Tubo flexible de tigón de 1/8 pulgada de diámetro interior y un metro, aproximadamente, de longitud. 46.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 471058 Acido Sulfúrico 95-98% (máx 0,0000005% de Hg) PA-ACS-ISO

131074 Agua PA-ACS 471153 Cromo VI Oxido (máx 0,000005% de Hg) PA-ACS 471303 Estaño ll Cloruro (máx 0,000005% de Hg) PA-ACS-ISO 121925 Hidroxilamonio Sulfato PA 313186 Mercurio solución patrón Hg = 1,000 ± 0,002 g/l AA 251450 Parafina P. F. 55-60º C en pastilla DC 46.3.1. Acido Sulfúrico 95-98% (máximo 0,0000005% Hg) PA-ACS-ISO, exento de mercurio. 46.3.2. Mercurio II Oxido amarillo PA-ACS. 46.3.3. Cromo VI Oxido (máx 0,000005% Hg) PA-ACS exento de mercurio. 46.3.4. Cromo VI Oxido (máx 0,000005% Hg) PA-ACS exento de mercurio. 46.3.5. Solución de Acido Crómico al 5%. Llevar a un vaso de 500 ml 25 g de Cromo VI Oxido y

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Figura 46.l. Esquema de la instalación

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disolverlos en 25 ml de Agua PA-ACS. Añadir lentamente y agitando Acido Sulfúrico concentrado hasta enrasar a 500 ml cuando la solución esté fría. 46.3.6. Solución reductora.- Solución al 40% de Estaño II Cloruro en Agua PA-ACS, acidulada con Acido Sulfúrico. 46.3.7. Solución patrón.- Mercurio solución patrón Hg = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,080 g de 131426 Mercurio ll oxido amarillo PA en 100 ml de 131019 Acido Clohídrico 35% PA-ISO a 1000 ml. En ambos casos, mediante dilución 1/1.000 se obtiene la solución de 1 mg/l. 46.4. Procedimiento. 46.4.1. Preparación de la muestra. Tomar 1 ml de muestra y colocarla dentro de un matraz cónico. Añadir 2 ml de Acido Nítrico 70% PAACS-ISO. Cerrar con película de Parafina P. F. 5560°C en pastilla DC y dejarlo en digestión durante sesenta minutos a temperatura ambiente. Añadir 5 ml de Acido Crómico al 5%, refrigerando durante la adición en baño de hielo. Tapar el matraz y dejarlo durante sesenta minutos, agitando cada diez minutos. Transcurrido este tiempo, añadir 15 ml de Agua PA-ACS, enfriando durante la adición con baño de hielo. Una vez fríos los matraces, añadir 2 g, aproximadamente, de Hidroxilamonio Sulfato PA, agitar y acoplar los matraces al aparato de medida. Añadir 10 ml de solución reductora. Continuar como en 46.4.3. 46.4.2. Construcción de la curva patrón. A partir de 46.3.7, tomar 0; 5; 10; 15; 20 y 25 ml. Tratarlas a continuación como se indica en 46.4.1. Estas soluciones contienen 0; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 y 0,5 partes por millón de Hg. Anotar las absorbancias obtenidas frente a las concentraciones correspondientes. 46.4.3. Determinación. Efectuar la lectura de la absorbancia de la muestra. Una vez preparada según 46.4.1. 46.5. Referencias. 46.5.1. A. Bouchard: “Determination of mercury aftersoon temperature digestion by flamaless atomic absorption.” Atom. Absorpt. Newsletter, vol. 12, número 5 (115-117), 1973. 46.5.2. A. García de Jalón y J. Frías: “Un método para la determinación de mercurio en vinos mediante espectrofotometría de absorción atómica sin llama.” Ministerio de Agricultura. Abril 1972. 47. PLOMO 47.1. Principio. Determinación del plomo por A. A. después de una concentración previa con objeto de conseguir resultados suficientemente precisos. 47.2. Material y aparatos. 47.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 47.2.2. Lámpara de plomo. 47.2.3. Cápsula de platino de 100 ml de capacidad o similar. 47.2.4. Baño de arena. 47.2.5. Mufla con circulación de aire. 47.2.6. Matraces de 10; 100 y 1.000 ml de capacidad. 47.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313189 Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA 47.3.1. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 47.3.2. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. 47.3.3. Acido Nítrico al 1%. Diluir Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS. 47.3.4. Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,598 g de 131473 Plomo ll Nitrato PA enrasando a 1.000 ml con Acido Nítrico al 1%. 47.4. Procedimiento. 47.4.1. Preparación de la muestra. Poner 100 ml de la muestra en una cápsula de platino y llevarla a evaporación hasta consistencia siruposa en baño de arena. Añadir a continuación 2 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y carbonizar el residuo en el baño de arena. Seguidamente introducir la cápsula en la mufla y mantenerla durante dos horas a 450°C; transcurrido dicho tiempo, sacarla y dejarla enfriar. Añadir 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO, evaporar en el baño de arena e introducir en la mufla, repitiendo esta operación hasta obtener cenizas blancas. Disolver a continuación las cenizas con 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 2 ml de Agua PA-ACS, una vez disueltas filtrar y recoger el filtrado en un matraz de 10 ml, lavando la cápsula y el filtro con Agua PA-ACS hasta el enrase. 47.4.2. Construcción de la curva patrón.- A partir de la solución patrón 47.3.4, tomar alícuotas de 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 y 1 ml, y llevar a 100 ml con Acido Nítrico al 1% (v/v). El contenido en plomo de estas soluciones es, respectivamente, 2; 4; 6; 8 y 10 ppm Anotar las absorbancias obtenidas frente a las concentraciones correspondientes. 47.4.3. Determinación.- Efectuar la lectura directa de la muestra preparada según 47.4.1 a 283,3 nm. 47.5. Cálculo. Calcular el contenido en plomo, expresado en ppm mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuenta el factor de dilución.

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48. RELACION P/ 48.1. Principio. Estimación de los contenidos relativos de glucosa y fructosa, en mostos, vinos dulces y mistelas, mediante el establecimiento de la relación entre azúcares reductores y desviación polarimétrica a 20°C. 48.2. Material y aparatos. 48.2.1. Como en 7(a).2; 7(b).2, o 7(c).2. 48.2.2. Polarímetro con luz monocromática amarilla (lámpara de vapor de sodio) y tubo de 20 cm. 48.3. Procedimiento. 48.3.1. Determinar el contenido en azúcares reductores según el método 7(a), 7(b) o 7(c). 48.3.2. Medida de la desviación polarimétrica. Una vez verificado el correcto reglaje del polarímetro, comprobando la correspondencia del valor “cero” con la existencia de un campo luminoso uniforme, ajustándolo si es necesario, introducir en el tubo del polarímetro el líquido de defecación, sin diluir, incoloro y limpio, utilizando para la determinación de azúcares reductores, evitando la formación de burbujas de aire. Anotar la temperatura del líquido que debe ser lo más próxima posible a 20°C. Efectuar la lectura de la desviación polarimétrica varias veces sucesivas, tomando la media de los resultados obtenidos. 48.4. Cálculo. Determinar el poder rotatorio y la relación P/ aplicando las fórmulas siguientes: 20 = t+ t (t - 20) x K P/ 20 (expresado con su correspondiente signo) siendo: P = g/l de azúcares reductores. = poder rotatorio en divisiones sacarimétricas a t°C (un grado polarimétrico = 4,615 divisiones sacarimétricas). 20 = poder rotatorio en divisiones sacarimétricas a20°C. t = temperatura del líquido en el momento de la lectura.
t

TABLA I p/ t

K 0,006 0,007 0,008 0,009 0,012 0,012 0,013 0,014 0,022 0,042

1,19 1,41 1,73 2,24 2,64 3,20 4,06 5,56 8,8 21

49. ANHIDRIDO CARBONICO (Método aprobado pero no publicado en el B.O.E.) 49.1. Principio. Después de la oxidación en frío del anhídrido sulfuroso por el hidrógeno peróxido en presencia del ion de cobre II, el anhídrido carbónico desplazado del vino por una solución tampón de fosfato y ácido fosfórico es arrastrado en frío en circuito cerrado por una corriente de aire mediante una pequeña bomba de circulación hacia una solución valorada de bario hidróxido. El exceso de esta base se determina inmediatamente con una solución valorada de ácido clorhídrico en presencia de un indicador mixto de timolftaleína-fenolftaleína. Aplicable a contenidos inferiores a 6 g/l. 49.2. Material y aparatos. 49.2.1. Aparato de vidrio para extracción del CO2 en circuito cerrado (fig. l) compuesto de: - un matraz de 250 ml (1) provisto de una bola antiespuma sobre la que va adaptada una bureta (5); - dos barboteadores (2) y (3); - una bomba (4) que garantice la circulación del aire en el circuito (2 a 10 burbujas por segundo). 49.3. Reactivos. 181021 Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV 131032 Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131182 Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 121085 Etanol 96% v/v PA 131325 Fenolftaleína PA-ACS 141076 Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS

K = coeficiente variable con la naturaleza de los azúcares, dado por la tabla I en función del valor P/ t.

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48.5. Referencias. 48.5.1. J. Blouin. Manual practique d’analyse des Moûts et Vins. 1977. 48.5.2. J. Ribereau Gayon, E. Peynaud. Sciences et Techniques du Vin. Tome I. 1972.

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121677 Sodio di-Hidrógeno Fosfato 2-hidrato PA 131687 Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO 182157 Sodio Hidróxido 0,4 mol/l (0,4N) SV 171739 Timolftaleína RE 49.3.1. Solución de Sodio Hidróxido 0,2N: En un matraz aforado diluir exactamente a 1:1 Sodio Hidróxido 0,4 mol/l (0,4N) SV con Agua PA-ACS. 49.3.2. Solución de Bario Cloruro de 90 g de BaCl2. 2H20 por litro. Disolver Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS. 49.3.3. Solución de Bario Hidróxido. Mezclar 2 volúmenes de la solución de Bario Cloruro de 90 g/l con 1 volumen de solución de Sodio Hidróxido 0,2N. Conservar en recipiente que evite la carbonatación. 49.3.4. Solución tampón: Disolver en Agua PA-ACS recientemente hervida 400 g de Sodio di-Hidrógeno Fosfato 2-hidrato PA y añadir 50 ml de Acido orto-Fosfórico (d 20°C = 1,63): Diluir Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS hasta la densidad indicada que corresponde a, aproximadamente, 79,4% y completar hasta 1 l con Agua PA-ACS recientemente hervida. 49.3.5. Sodio Hidróxido al 50% (p/p). Solución acuosa (d = 1,525) que contenga 50 g de Sodio Hidróxido lentejas 97% PA-ACS-ISO en 100 g de solución. Utilizarla 15 días después de su preparación para lograr la decantación del eventual Na2CO3. Esta solución debe ser transparente. 49.3.6. Hidrógeno Peróxido en solución de 10 volúmenes. Esta solución contiene 30,4 g de H2O2 por litro y libera 10 veces su volumen de oxígeno por descomposición catalítica con MnO2 en medio alcalino. 49.3.7. Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO, pulverizado. 49.3.8. Disolver 1 g de Fenolftaleína PA-ACS y 0,5 g de Timolftaleína RE en Etanol 96% v/v PA, neutro y completar hasta 100 ml. 49.3.9. Acido Clorhídrico 0,2N. En un matraz aforado diluir a 1:5 Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor de la solución 0,2N obtenida. 49.4. Procedimiento. 49.4.1. Vinos que contienen menos de 4 g de CO2 por litro. La botella de vino se debe mantener en posición horizontal durante una noche a 0°C. Colocar en el barboteador (2) 150 ml exactamente medidos de solución de Bario Hidróxido. Introducir en el matraz (1) algunos cristales de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO y 5 ml de Hidrógeno Peróxido de 10 volúmenes. Poner, con cuidado, en un matraz previamente enjuagado y enfriado a 0°C, 50 ml de vino. Colocar el matraz (1) en el circuito y esperar 10 minutos. Conectar la bomba, e introducir mediante la bureta (5) 20 ml de solución tampón. Dejar en funcionamiento 30 minutos. Parar la bomba y tomar del barboteador (2), 50 ml de la solución de Bario Hidróxido; valorarla con Acido Clorhídrico 0,2N con indicador mixto. Sea V2 el número de ml gastados. Es indispensable valorar diariamente el Bario Hidróxido utilizando 150 ml. Sea V1 el número de ml de Acido Clorhídrico 0,2N necesarios. 49.4.2. Vinos que contienen más de 4 g de CO2 por litro. La botella debe mantenerse en posición horizontal a 0°C durante una noche. Abrir la botella con precaución. Para botellas de 750 ml sustituir 50 ml del vino por 50 ml de Sodio Hidróxido al 50% haciendo resbalar suavemente la solución por el cuello de la botella. Cerrar ésta inmediatamente y homogeneizar su contenido agitándola; colocarla seguidamente en un baño de agua a 20°C. Colocar en el barboteador (2) 300 ml exactos de solución de Bario Hidróxido. Introducir en el matraz (1) unos cristales de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO y 5 ml de Hidrógeno Peróxido de 10 volúmenes. Introducir lentamente la pipeta en la botella para evitar desprendimiento de CO2 y tomar 50 ml del vino y echarlos al matraz. Conectarlo al aparato y dejarlo reposar 10 minutos. El volumen del vino tomado se deberá reducir a 25 ml, si éste contiene más de 8 g/l de anhídrido carbónico. Conectar la bomba, e introducir en el matraz (1) con una bureta (5), 40 ml de solución tampón. Ponerla en funcionamiento durante 30 minutos. Parar la bomba y tomar del barboteador (2) 50 ml de la solución de Bario Hidróxido. Valorarla con Acido Clorhídrico 0,2N en presencia de indicador mixto. Sea V2 el número de ml utilizados. Sea V1 el número de ml de Acido Clorhídrico 0,2N consumidos para valorar 150 ml de solución de Bario Hidróxido. 49.5. Cálculo. 49.5.1. Para vinos que contienen menos de 4 g de CO2 por litro. Cantidades de CO2 en gramos por l en el vino. CO2(g/l) = 0,088 (V1- 3V2). 49.5.2. Para vinos que contienen más de 4 g de CO2 por litro. Medir el volumen de líquido que queda en la botella y añadir 50 o 25 ml de la muestra tomada para la determinación. Sea V el volumen total así determinado. Calcular seguidamente el factor de corrección f, necesario para tener en cuenta los 50 ml de Sodio Hidróxido al 50% introducidos en la botella:

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V f = ———— V - 50 Si la muestra para la determinación es de 50 ml, la cantidad de anhídrido carbónico en g/l es (2V1 6V2) . 0,088 . f. Este resultado debe multiplicarse por 2 si la toma de muestra es de 25 ml. 49.6. Referencias. 49.6.1. Jaulmes (P.), Meth. An. 1972, n° 422; Ann. Fals. Exp. chim. 1973, n° 708, 96-109. 49.6.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A-39, 1978.

50. ETANAL (Método aprobado pero no publicado en el B.O.E.) 50.1. Principio. El etanal se determina en el vino, previamente decolorado con carbón, midiendo a 570 nm la coloración verde o violeta que da con el sodio nitroprusiato y la piperidina. 50.2. Material y aparatos. 50.2.1. Espectrofotómetro capaz de efectuar lecturas a 570 nm. 50.3. Reactivos. 131015 Acido Bórico PA-ACS-ISO 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 131064 Acido Sulfuroso solución 6% PA-ACS 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 121237 Carbón Activo polvo PA Etanal 171327 Fenolftaleína solución 1% RE 162377 Piperidina PS 182415 Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 121705 Sodio Nitroprusiato 2-hidrato PA 181772 Yodo 0,05 mol/l (0,1N) SV 50.3.1. Solución de Piperidina al 10% (v/v). Preparar antes de cada medida la mezcla de 2 ml de Piperidina PS con 18 ml de Agua PA-ACS. 50.3.2. Solución de Sodio Nitroprusiato al 0,4% (p/v). En un matraz aforado de 250 ml disolver 1 g de Sodio Nitroprusiato 2-hidrato PA, pulverizado. Completar hasta el enrase con Agua PA-ACS. 50.3.3. Carbón Activo polvo PA. 50.3.4. Acido Clorhídrico diluido al 25% (v/v) (aproximadamente 102 g/l). Diluir convenientemente Acido Clorhídrico 35% PA-ISO con Agua PA-ACS. 50.3.5. Solución alcalina. Disolver 8,75 g de Acido Bórico PA-ACS-ISO en 400 ml de Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV. Completar hasta un litro con Agua PA-ACS. 50.4. Procedimiento. 50.4.1. Determinación del Etanal. Colocar 25 ml de líquido a analizar en un Erlenmeyer de 100 ml, adicionar unos 2 g de Carbón Activo polvo PA. Agitar enérgicamente durante algunos segundos, dejar reposar durante 2 minutos y filtrar sobre un filtro de pliegues de poro fino para obtener un filtrado claro. 2 ml de filtrado incoloro se colocan en un Erlenmeyer de 100 ml y se adiciona agitando 5 ml de solución de Sodio Nitroprusiato y 5 ml de solución de Piperidina, mezclar y colocar inmediatamente la mezcla en la cubeta de lectura de 10 mm de espesor. La

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Figura 1

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coloración obtenida que varía del verde al violeta, se mide a 570 nm con relación al aire. Esta coloración aumenta para disminuir seguidamente con rapidez. Elegir como valor definitivo la máxima absorbancia que se obtiene al cabo de unos 50 segundos. La cantidad de Etanal contenido en el líquido analizado se deduce de una curva patrón. 50.4.2. Construcción de la curva patrón. Solución patrón de Etanal combinado con el Anhídrido Sufuroso. Tomar Acido Sulfuroso solución 6% PA-ACS, valorar en SO 2 determinar su cantidad exacta midiéndola con Yodo 0,05 mol/l (0,1N) SV. En un matraz aforado de 1 litro colocar el volumen de esta solución que corresponda a 1.500 mg de SO2. Introducir en el matraz, ayudados con un embudo, alrededor de 1 ml de Etanal destilado recientemente y recogido sobre una mezcla refrigerante. Enrasar a 1 litro con Agua PA-ACS, mezclar y dejar durante la noche. La cantidad exacta de esta solución patrón de Etanal combinada con el SO2 debe determinarse como sigue: En un Erlenmeyer de 500 ml, colocar 50 ml de solución patrón de Etanal, adicionar 20 ml del Acido Clorhídrico diluido y 100 ml de Agua PA-ACS. Oxidar el SO2 libre con Yodo 0,05 mol/l (0,1) SV en presencia de solución de Almidón soluble RE hasta coloración azul débil. Añadir unas gotas de Fenolftaleína solución 1% RE y la suficiente solución alcalina hasta la desaparición de la coloración azul y aparición de color rosa. Valorar el SO2 combinado al Etanal con el Yodo 0,05 mol/l (0,1) SV hasta coloración azul débil. Siendo n el volumen gastado, la solución patrón de Etanal combinado con el SO2 contiene: 44,05 n mg de Etanal por litro. Preparación de la curva patrón: En matraces aforados de 100 ml colocar sucesivamente 5-10-15-20 y 25 ml de la solución patrón. Enrasar con Agua PA-ACS. Estas diluciones corresponden a cantidades de Etanal próximas a 40-80120-160 y 200 mg/l. La cantidad exacta de las diluciones debe calcularse a partir del contenido en Etanal de la solución patrón determinada anteriormente. Proceder a la medida del Etanal sobre 2 ml de cada una de estas soluciones como se indica anteriormente. La representación gráfica de las absorbancias de estas soluciones en función de la cantidad de Etanal es una recta que no pasa por el origen. 50.5. Cálculo Calcular el contenido en Etanal mediante comparación con la correspondiente curva patrón. 50.6. Observaciones. Si, de forma excepcional, el líquido a analizar contiene Etanal libre, no combinado con el SO2 será necesario, antes de empezar a determinar el Etanal total, pasarlo previamente al estado de combinación con el SO2. Para efectuar esto, adicionar a una parte del líquido a analizar un pequeño exceso de SO2 libre y esperar algunas horas antes de proceder a la determinación. 50.7. Referencias. 50.7.1. H. Rebelein (1970), Dtsch. Lebensmit. Rdsch 1970. 66, 5-6. 50.7.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A-37, 1978. 51. PRESION DEL ANHIDRIDO CARBONICO 51.1. Principio. Medida de la presión gaseosa de un recipiente cerrado herméticamente mediante un aparato adecuado que disponga de un manómetro. 51.2. Material y aparatos. 51.2.1. Equipo manométrico que conste de las siguientes partes: 51.2.1.1. Aguja perforadora del tapón o del recipiente, hueca, con válvula que obture el orificio de entrada de gas a la misma y sistema estanco de adaptación al tapón o recipiente. 51.2.1.2. Conducto que ponga en comunicación la aguja con el manómetro. 51.2.1.3. Manómetro que permita lecturas de hasta 10 kg/cm2. 51.3. Procedimiento. Mantener la muestra en reposo durante dos horas al menos. Llevar la temperatura aproximadamente a 20°C y perforar el tapón o el recipiente según el caso. Abrir la válvula con lo que el gas pasa al manómetro. Leer la presión que indica el manómetro. 51 4. Expresión de los resultados. La presión se expresará en atmósferas a 20°C. 1 atm. = 760 mm de Hg = 1.034 kg/cm2 52. ANTISEPTICOS Y ANTIFERMENTOS (Método microbiológico) 52.1. Principio. Comparación del desarrollo, en vino problema y testigo, de las levaduras contenidas en láminas de agar-extracto de levadura glucosado, tras permanecer sumergidas 48 horas en ellos. 52.2. Material y aparatos. 52.2.1. Hematímetro.

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52.2.2. Cajas Petri. 52.2.3. Portaobjetos rayados en zig-zag. 52.2.4. Varilla en forma de U de unos 0,5 cm de diámetro. 52.2.5. Tubos de ensayo aforados a 10 ml. 52.2.6. Tubos capaces de contener portaobjetos normales de microscopía. 52.2.7. Autoclave. 52.2.8. Microscopio. 52.2.9. Estufa de cultivo. 52.3. Reactivos y medios de cultivo. 141792 Agar (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX 131074 Agua PA-ACS Etanal 403687 Extracto de levadura CULTIMED 121341 D(+)-Glucosa PA 52.3.1. Solución acuosa de Etanal de 6,9 g/l (1 ml de esta solución combina 10 mg de SO2). 52.3.2. Mosto de 10º Bé. peptonado al 1 por 1.000. Esterilizar en autoclave a 112°C durante 20 minutos. 52.3.3. Agar-extracto de levadura glucosado: Extracto de levadura CULTIMED. . . . . 5 g D(+)-Glucosa PA . . . . . . . . . . . . . . . . 20 g Agar (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX . 17,5 g Agua PA-ACS . . . . . . . . . . . . . . . . 1.000 g Una vez fundido en baño de agua, distribuir a razón de 10 ml por tubo y esterilizar a 120°C durante 20 minutos. 52.3.4. Capa de levadura: Saccharomyces bayanus. 52.4. Procedimiento. 52.4.1. Preparación del vino problema: Si la dosis de SO2 libre es superior a 15 mg/l, proceder a combinación del exceso mediante la solución acuosa de Etanal, dejando transcurrir 24 horas, desde su adición. Comprobar de nuevo que el contenido de SO2 libre es inferior a 15 m/l. 52.4.2. Preparación del vino testigo: Utilizar un vino de características lo más parecidas posibles al vino problema, especialmente en grado alcohólico. Respecto al SO2 libre se procederá como en 52.4.1 52.4.3. Siembra del Agar (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX y formación de la película: Una vez fundidos en baño de agua los tubos con 10 ml de agar-extracto de levadura glucosado y cuando la temperatura baja a 45-50°C, sembrar, tras conteo con hematímetro, 5 millones de levaduras/ml (50 millones por tubo) de un cultivo de 72 horas en mosto peptonado de 10° Bé. Tras homogeneizar rápidamente los tubos sembrados, verter su contenido sobre los portaobjetos rayados, situados en posición inclinada, apoyados sobre un brazo de la varilla en U colocada dentro de la caja Petri; el agar fundido deslizará uniformemen-

te sobre la superficie de cada portaobjeto, formando una lámína de agar. Acto seguido colocar horizontalmente los portaobjetos apoyando sobre los dos brazos de la varilla en U y dejar en reposo durante un par de horas. 52.4.4. Formación de colonias: Asegurada la solidificación del medio sembrado, sumergir completamente los portaobjetos en los tubos que contienen el vino problema y el vino testigo. Tapar no herméticamente los tubos y mantener en la estufa de cultivo a 25°C durante 48 horas. Finalizado este período eliminar el vino de los tubos, dejando los portaobjetos en el interior de ellos en contacto con el aire y a 25°C. 52.4.5. Observación microscópica: Observar las láminas inmediatamente después de sacadas del vino. Si no se aprecia desarrollo de colonias incubar en estufa a 25°C y repetir la observación microscópica a las 24, 48 y 72 horas si es necesario. En los vinos de alto grado alcohólico puede retrasarse aún más el desarrollo de las colonias, como se comprueba en el vino testigo. 52.5. Interpretación de los resultados. La presencia franca de colonias indica la ausencia de antisépticos y antifermentos. 52.6. Referencia. 52.6.1. Método biológico español-argentino para la investigación de la presencia de antisépticos en los vinos. E. Feduchy An. INIA. Serv. Tecnol. agr. N 2. 1975.

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Productos derivados de la uva: Zumos de uva

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METODOS DE ANALISIS 1. GRADO BRIX 1.1. Principio. Medida del índice de refracción y conversión en grados Brix mediante las tablas adjuntas. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Refractómetro provisto del equipo necesario para mantener la temperatura a 20ºC. 1.2.2. Matraces o recipientes de vidrio que cierren herméticamente. 1.3. Procedimiento. Colocar el refractómetro en un lugar iluminado con luz difusa o frente a una fuente de luz artificial. Circular agua a temperatura constante a 20°C a través de los prismas del refractómetro. Ajustar el instrumento colocando unas gotas de agua destilada entre los prismas. El índice de refracción deberá ser 1,3330; si no es así corregir adecuadamente la lectura. Situar el zumo de uva en un envase herméticamente cerrado en un baño a 20°C y esperar a que alcance dicha temperatura. Tomar con una pipeta un poco de zumo de uva y poner unas gotas entre los prismas del refractómetro. Medir el índice de refracción. 1.4. Expresión de los resultados. A partir del valor obtenido del índice de refracción se obtiene el grado Brix mediante la tabla I. 1.5. Observaciones. 1.5.1. Si se emplea otra temperatura para medir el índice de refracción, utilizar la tabla II para la corrección de temperatura a 20°C . 1.6. Referencias. Official Methods of Analysis, AOAC-1984.

TABLA I Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,3330 1,3331 1,3332 1,3333 1,3334 1,3335 1,3336 1,3337 1,3338 1,3339 1,3340 1,3341 1,3342 1,3343 1,3344 1,3345 1,3346 1,3347 1,3348 1,3349 1,3350 1,3351 1,3352 1,3353 1,3354 1,3355 1,3356 Grado Brix 0,009 0,078 0,149 0,253 0,288 0,358 0,428 0,498 0,567 0 637 0,707 0,776 0,846 0,915 0,985 1,054 1,124 1,193 1,263 1,332 1,401 1,470 1,540 1,609 1,678 1,747 1,815 n 20° 1,3357 1,3358 1,3359 1,3360 1,3361 1,3362 1,3363 1,3364 1,3365 1,3366 1,3367 1,3368 1,3369 1,3370 1,3371 1,3372 1,3373 1,3374 1,3375 1,3376 1,3377 1,3378 1,3379 1,3380 1,3381 1,3382 1,3383 Grado Brix 1,885 1,954 2,023 2,092 2,161 2,230 2,299 2,367 2,436 2,505 2,574 2,642 2,711 2,779 2,848 2,917 2,985 3,053 3,122 3,190 3,259 3,327 3,395 3,463 3,532 3,600 3,668 n 20º 1,3384 1,3385 1,3386 1,3387 1,3388 1,3389 1,3390 1,3391 1,3392 1,3393 1,3394 1,3395 1,3396 1,3397 1,3398 1,3399 1,3400 1,3401 1,3402 1,3403 1,3404 1,3405 1,3406 1,3407 1,3408 1,3409 1,3410 Grado Brix 3,736 3,804 3,872 3,940 4,008 4,076 4,144 4,212 4,279 4,347 4,415 4.483 4,550 4,618 4,686 4,753 4,821 4,888 4,956 5,023 5,091 5,158 5,225 5,293 5,360 5,427 5,494 n 20° 1,3411 1,3412 1,3413 1,3414 1,3415 1,3416 1,3417 1,3418 1,3419 1,3420 1,3421 1,3422 1,3423 1,3424 1,3425 1,3426 1,3427 1,3428 1,3429 1,3430 1,3431 1,3432 1,3433 1,3434 1,3435 1,3436 1,3437 Grado Brix 5,562 5,629 5,696 5,763 5,830 5,897 5,964 6,031 6,098 6,165 6,231 6,298 6,365 6,432 6,498 6,565 6,632 6,698 6,765 6,831 6,898 6,964 7,031 7,097 7,164 7,230 7,296

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TABLA I (Continuación) Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,3438 1,3439 1,3440 1,3441 1,3442 1,3443 1,3444 1,3445 1,3446 1,3447 1,3448 1,3449 1,3450 1,3451 1,3452 1,3453 1,3454 1,3455 1,3456 1,3457 1,3458 1,3459 1,3460 1,3461 1,3462 1,3463 1,3464 1,3465 1,3466 1,3467 1,3468 1,3469 1,3470 1,3471 1,3472 1,3473 1,3474 1,3475 1,3476 1,3477 1,3478 1,3479 1,3480 1,3481 1,3482 1,3483 1,3484 1,3485 1,3486 1,3487 1,3488 1,3489 Grado Brix 7,362 7,429 7,495 7,561 7,627 7,693 7,759 7,825 7,891 7,957 8,023 8,089 8,155 8,221 8,287 8,352 8,418 8,484 8,550 8,615 8,681 8,746 8,812 8,878 8,943 9,008 9,074 9,139 9,205 9,270 9,335 9,400 9,466 9,531 9,596 9,661 9,726 9,791 9,856 9,921 9,986 10,051 10,116 10,181 10,246 10,331 10,375 10,440 10,505 10,570 10,634 10,699 n 20° 1,3490 1,3491 1,3492 1,3493 1,3494 1,3495 1,3496 1,3497 1,3498 1,3499 1,3500 1,3501 1,3502 1,3503 1,3504 1,3505 1,3506 1,3507 1,3508 1,3509 1,3510 1,3511 1,3512 1,3513 1,3514 1,3515 1,3516 1,3517 1,3518 1,3519 1,3520 1,3521 1,3522 1,3523 1,3524 1,3525 1,3526 1,3527 1,3528 1,3529 1,3530 1,3531 1,3532 1,3533 1,3534 1,3535 1,3536 1,3537 1,3538 1,3539 1,3540 1,3541 Grado Brix 10,763 10,828 10,892 10,957 11,021 11,086 11,150 11,215 11,279 11,343 11,407 11,472 11,536 11,600 11,664 11,723 11,792 11,856 11,920 11,984 12,048 12,112 12,175 12,240 12,304 12,368 12,431 12,495 12,559 12,623 12,686 12,750 12,813 12,877 12,940 13,004 13,067 13,131 13,194 13,258 13,321 13.384 13,448 13,551 13,574 13,637 13,700 13,763 13,826 13,890 13,953 14,016 n 20º 1,3542 1,3543 1,3544 1,3545 1,3546 1,3547 1,3548 1,3549 1,3550 1,3551 1,3552 1,3553 1,3554 1,3555 1,3556 1,3557 1,3558 1.3559 1,3560 1,3561 1,3562 1,3563 1,3564 1,3565 1,3566 1,3567 1,3568 1,3569 1,3570 1,3571 1,3572 1,3573 1,3574 1,3575 1,3576 1,3577 1,3578 1,3579 1,3580 1,3581 1,3582 1,3583 1,3584 1,3585 1,3586 1,3587 1,3588 1,3589 1,3590 1,3591 1,3592 1,3593 Grado Brix 14,079 14,141 14,204 14,267 14,330 14,393 14,456 14,518 14,581 14,644 14,707 14,759 14,832 14,894 14,957 15,019 15,082 15.144 15,207 15,269 15,332 15,394 15,456 15,518 15,581 15,643 15,705 15,767 15,829 15,891 15,953 16,016 16,078 16,140 16,201 16,263 16,325 16,387 16,449 16,511 16,573 16,634 16,696 16,758 16,819 16,881 16,943 17,004 17,065 17,127 17,189 17,250 n 20° 1,3594 1,3595 1,3596 1,3597 1,3598 1,3599 1,3600 1,3601 1,3602 1,3603 1,3604 1,3605 1,3606 1,3607 1,3608 1,3609 1,3610 1,3611 1,3612 1,3613 1,3614 1,3615 1,3616 1,3617 1,3618 1,3619 1,3620 1,3621 1,3622 1,6223 1,3624 1,3625 1,3626 1,3627 1,3628 1,3629 1,3630 1,3631 1,3632 1,3633 1,3634 1,3635 1,3636 1,3637 1,3638 1,3639 1,3640 1,3641 1,3642 1,3643 1,3644 1,3645 Grado Brix 17,311 17,373 17,434 17,496 17,557 17,618 17,679 17,741 17,802 17,863 17,924 17,985 18,046 18,107 18,168 18,229 18,290 18,351 18,412 18,473 18,534 18,595 18,655 18,716 18,777 18,837 18,898 18,959 19,019 19,080 19,141 19,201 19,262 19,322 19,382 19,443 19,503 19,564 19,624 19,684 19,745 19,805 19,865 19,925 19,985 20,045 20,106 20,166 20,226 20,286 20,346 20,406

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TABLA I (Continuación) Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,3646 1,3647 1,3648 1,3649 1,3650 1,3651 1,3652 1,3653 1,3654 1,3655 1,3656 1,3657 1,3658 1,3659 1,3660 1,3661 1,3662 1,3663 1,3664 1,3665 1,3666 1,3667 1,3668 1,3669 1,3670 1,3671 1,3672 1,3673 1,3674 1,3675 1,3676 1,3777 1,3678 1,3679 1,3680 1,3681 1,3682 1,3683 1,3684 1,3685 1,3686 1,3687 1,3688 1,3689 1,3690 1,3691 1,3692 1,3693 1,3694 1,3695 1,3696 1,3697 Grado Brix 20,466 20,525 20,585 20,645 20,705 20,765 20,825 20,884 20,944 21,004 21,063 21,123 21,183 21,242 21,302 21,361 21,421 21,480 21,540 21,599 21,658 21,718 21,777 21,836 21,895 21,955 22,014 22,073 22,132 22,192 22,251 22,310 22,369 22,428 22,487 22,546 22,605 22,664 22,723 22,781 22,840 22,899 22,958 22,017 23,075 23,134 23,193 23,251 23,310 23,369 23,427 23,486 n 20° 1,3698 1,3699 1,3700 1,3701 1,3702 1,3703 1,3704 1,3705 1,3706 1,3707 1,3708 1,3709 1,3710 1,3711 1,3712 1,3713 1,3714 1,3715 1,3716 1,3717 1,3718 1,3719 1,3720 1,3721 1,3722 1,3723 1,3724 1,3725 1,3726 1,3727 1,3728 1,3729 1,3730 1,3731 1,3732 1,3733 1,3734 1,3735 1,3736 1,3737 1,3738 1,3739 1,3740 1,3741 1,3742 1,3743 1,3744 1,3745 1,3746 1,3747 1,3748 1,3749 Grado Brix 23,544 23,603 23,661 23,720 23,778 23,836 23,895 23,953 24,011 24,070 24,128 24,186 24,244 24,302 24,361 24,419 24,477 24,535 24,593 24,651 24,709 24,767 24,825 24,883 24,941 24,998 25,056 25,114 25,172 25,230 25,287 25,345 25,403 25,460 25,518 25,576 25,633 25,691 25,748 25,806 25,863 25,921 25,978 26,035 26,093 26,150 26,207 26,265 26,322 26,379 26,436 26,493 n 20º 1,3750 1,3751 1,3752 1,3753 1,3754 1,3755 1,3756 1,3757 1,3758 1,3759 1,3760 1,3761 1,3762 1,3763 1,3764 1,3765 1,3766 1,3767 1,3768 1,3769 1,3770 1,3771 1,3772 1,3773 1,3774 1,3775 1,3776 1,3777 1,3778 1,3779 1,3780 1,3781 1,3782 1,3783 1,3784 1,3785 1,3786 1,3787 1,3788 1,3789 1,3790 1,3791 1,3792 1,3793 1,3794 1,3795 1,3796 1,3797 1,3798 1,3799 1,3800 1,3801 Grado Brix 26,551 26,608 26,665 26,722 26,779 26,836 26,893 26,950 27,007 27,064 27,121 27,178 27,234 27,291 27,348 27,405 27,462 27,518 27,575 27,632 27,688 27,745 27,802 27,858 27,915 27,971 28,028 28,084 28,141 28,197 28,253 28,310 28,366 28,422 28,479 28,535 28,591 28,648 28,704 28,760 28,816 28,872 28,928 28,984 29,040 29,096 29,152 29,208 29,264 29,320 29,376 29,432 n 20° 1,3802 1,3803 1,3804 1,3805 1,3806 1,3807 1,3808 1,3809 1,3810 1,3811 1,3812 1,3813 1,3814 1,3815 1,3816 1,3817 1,3818 1,3819 1,3820 1,3821 1,3822 1,3823 1,3824 1,3825 1,3826 1,3827 1,3828 1,3829 1,3830 1,3831 1,3832 1,3833 1,3834 1,3835 1,3836 1,3837 1,3838 1,3839 1,3840 1,3841 1,3842 1,3843 1,3844 1,3845 1,3846 1,3847 1,3848 1,3849 1,3850 1,3851 1,3852 1,3853 Grado Brix 29,488 29,544 29,600 29,655 29,711 29,767 29,823 29,878 29,934 29,929 30,045 30,101 30,156 30,212 30,267 30,323 30,378 30,434 30,489 30,544 30,600 30,655 30,711 30,766 30,821 30,876 30,932 30,987 31,042 31,097 31,152 31,207 31,262 31,317 31,372 31,428 31,482 31,537 31,592 31,647 31,702 31,757 31,812 31,867 31,922 31,976 32,031 32,086 32,140 32,195 32,250 32,304

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TABLA I (Continuación) Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,3854 1,3855 1,3856 1,3857 1,3858 1,3859 1,3860 1,3861 1,3862 1,3863 1,3864 1,3865 1,3866 1,3867 1,3868 1,3869 1,3870 1,3871 1,3872 1,3873 1,3874 1,3875 1,3876 1,3877 1,3878 1,3879 1,3880 1,3881 1,3882 1,3883 1,3884 1,3885 1,3886 1,3887 1,3888 1,3889 1,3890 1,3891 1,3892 1,3893 1,3894 1,3895 1,3896 1,3897 1,3898 1,3899 1,3900 1,3901 1,3902 1,3903 1,3904 1,3905 Grado Brix 32,359 32,414 32,468 32,523 32,577 32,632 32,686 32,741 32,795 32,849 32,904 32,958 33,013 33,067 33,121 33,175 33,230 33,284 33,338 33,392 33,446 33,500 33,555 33,609 33,663 33,717 33,771 33,825 33,879 33,933 33,987 34,040 34,094 34,148 34,202 34,256 34,310 34,363 34,417 34,471 34,524 34,578 34,632 34,685 34,739 34,793 34,846 34,900 34,953 35,007 35,060 35,114 n 20° 1,3906 1,3907 1,3908 1,3909 1,3910 1,3911 1,3912 1,3913 1,3914 1,3915 1,3916 1,3917 1,3918 1,3919 1,3920 1,3921 1,3922 1 3923 1,3924 1,3925 1,3926 1,3927 1,3928 1,3929 1,3930 1,3931 1,3932 1,3933 1,3934 1,3935 1,3936 1,3937 1,3938 1,3939 1,3940 1,3941 1,3942 1,3943 1,3944 1,3945 1,3946 1,3947 1,3948 1,3949 1,3950 1,3951 1,3952 1,3953 1,3954 1,3955 1,3956 1,3957 Grado Brix 35,167 35,220 35,274 35,327 35,380 35,434 35,487 35,540 35,593 35,647 35,700 35,753 35,806 35,859 35,912 35,965 36,019 36,072 36,125 36,178 36,231 36,284 36,337 36,389 36,442 36,495 36,548 36,601 36,654 36,706 36,759 36,812 36,865 36,917 36,970 37,023 37,075 37,128 37,180 37,233 37,286 37,338 37,391 37,443 37,495 37,548 37,600 37,653 37,705 37,757 37,810 37,862 n 20º 1,3958 1,3959 1,3960 1,3961 1,3962 1,3963 1,3964 1,3965 1,3966 1,3967 1,3968 1,3969 1,3970 1,3971 1,3972 1,3973 1,3974 1,3975 1,3976 1,3977 1,3978 1,3979 1,3980 1,3981 1,3982 1,3983 1,3984 1,3985 1,3986 1,3987 1,3988 1,3989 1,3990 1,3991 1,3992 1,3993 1,3994 1,3995 1,3996 1,3997 1,3998 1,3999 1,4000 1,4001 1,4002 1,4003 1,4004 1,4005 1,4006 1,4007 1,4008 1,4009 Grado Brix 37,914 37,967 38,019 38,071 38,123 38,175 38,228 38,280 38,332 38,384 38,436 38,488 38 540 38 592 38,644 38,696 38,784 38,800 38,852 38,904 38,955 39,007 39,059 39,111 39,163 39,214 39,266 39,318 39,370 39,421 39,473 39,525 39,576 39,628 39 679 39 731 39,782 39,834 39,885 39,937 39,988 40,040 40,091 40,142 40,194 40,245 40,295 40,348 40,399 40,450 40,501 40,553 n 20° 1,4010 1,4011 1,4012 1,4013 1,4014 1,4015 1,4016 1,4017 1,4018 1,4019 1,4020 1,4021 1,4022 1,4023 1,4024 1,4025 1,4026 1,4027 1,4028 1,4029 1,4030 1,4031 1,4032 1,4033 1,4034 1,4035 1,4036 1,4037 1,4038 1,4039 1,4040 1,4041 1,4042 1,4043 1,4044 1,4045 1,4046 1,4047 1,4048 1,4049 1,4050 1,4051 1,4052 1,4053 1,4054 1,4055 1,4056 1,4057 1,4058 1,4059 1,4060 1,4061 Grado Brix 40,604 40,655 40,706 40,757 40,808 40,860 40,911 40,962 41,013 41,064 41,115 41,166 41,217 41,268 41,318 41,369 41,420 41,471 41,522 41,573 41,623 41,674 41,725 41,776 41,826 41,877 41,928 41,978 42,029 42,080 42,130 42,181 42,231 42,282 42,332 42,383 42,433 42,484 42,534 42,585 42,635 42,685 42,736 42,786 42,836 42,887 42,937 42,987 43,037 43,088 43,138 43,188

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TABLA I (Continuación) Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,4062 1,4063 1,4064 1,4065 1,4066 1,4067 1,4068 1,4069 1,4070 1,4071 1,4072 1,4073 1,4074 1,4075 1,4076 1,4077 1,4078 1,4079 1,4080 1,4081 1,4082 1,4083 1,4084 1,4085 1,4086 1,4087 1,4088 1,4089 1,4090 1,4091 1,4092 1,4093 1,4094 1,4095 1,4096 1,4097 1,4098 1,4099 1,4100 1,4101 1,4102 1,4103 1,4104 1,4105 1,4106 1,4107 1,4108 1,4109 1,4110 1,4111 1,4112 1,4113 Grado Brix 43,238 43,288 43,338 43,388 43,439 43,489 43,539 43,589 43,639 43,689 43,739 43,789 43,838 43,888 43,938 43,988 44,038 44,088 44,138 44,187 44,237 44,287 44,337 44,386 44,436 44,486 44,535 44,585 44,635 44,684 44,734 44,783 44,833 44,882 44,932 44,981 45,031 45,080 45,130 45,179 45,228 45,278 45,327 45,376 45,426 45,475 45,524 45,574 45,623 45,672 45,721 45,770 n 20° 1,4114 1,4115 1,4116 1,4117 1,4118 1,4119 1,4120 1,4121 1,4122 1,4123 1,4124 1,4125 1,4126 1,4127 1,4128 1,4129 1,4130 1,4131 1,4132 1,4133 1,4134 1,4135 1,4136 1,4137 1,4138 1,4139 1,4140 1,4141 1,4142 1,4143 1,4144 1,4145 1,4146 1,4147 1,4148 1,4149 1,4150 1,4151 1,4152 1,4153 1,4154 1,4155 1,4156 1,4157 1,4158 1,4159 1,4160 1,4161 1,4162 1,4163 1,4164 1,4165 Grado Brix 45,820 45,869 45,918 45,967 46,016 46,065 46,114 46,163 46,212 46,261 46,310 46,359 46,408 46,457 46,506 46,555 46,604 46,652 46,701 46,750 46,799 46,848 46,896 46,945 46,994 47,043 47,091 47,140 47,188 47,237 47,286 47,334 47,383 47,431 47,480 47,528 47,577 47,625 47,674 47,722 47,771 47,819 47,868 47,916 47,964 48,013 48,061 48,109 48,158 48,206 48,254 48,302 n 20º 1,4166 1,4167 1,4168 1,4169 1,4170 1,4171 1,4172 1,4173 1,4174 1,4175 1,4176 1,4177 1,4178 1,4179 1,4180 1,4181 1,4182 1,4183 1,4184 1,4185 1,4186 1,4187 1,4188 1,4189 1,4190 1,4191 1,4192 1,4193 1,4194 1,4195 1,4196 1,4197 1,4198 1,4199 1,4200 1,4201 1,4202 1,4203 1,4204 1,4205 1,4206 1,4207 1,4208 1,4209 1,4210 1,4211 1,4212 1,4213 1,4214 1,4215 1,4216 1,4217 Grado Brix 48,350 48,399 48,447 48,495 48,543 48,591 48,639 48,687 48,735 48,784 48,832 48,880 48,928 48,976 49,023 49,071 49,119 49,167 49,215 49,263 49,311 49,359 49,407 49,454 49,502 49,550 49,598 49,645 49,693 49,741 49,788 49,836 49,884 49,931 49,979 50,027 50,074 50,122 50,169 50,217 50,264 50,312 50,359 50,407 50,454 50,502 50,549 50,596 50,644 50,691 50,738 50,786 n 20° 1,4218 1,4219 1,4220 1,4221 1,4222 1,4223 1,4224 1,4225 1,4226 1,4227 1,4228 1,4229 1,4230 1,4231 1,4232 1,4233 1,4234 1,4235 1,4236 1,4237 1,4238 1,4239 1,4240 1,4241 1,4242 1,4243 1,4244 1,4245 1,4246 1,4247 1,4248 1,4249 1,4250 1,4251 1,4252 1,4253 1,4254 1,4255 1,4256 1,4257 1,4258 1,4259 1,4260 1,4261 1,4262 1,4263 1,4264 1,4265 1,4266 1,4267 1,4268 1,4269 Grado Brix 50,833 50,880 50,928 50,975 51,022 51,069 51,116 51,164 51,211 51,258 51,305 51,352 51,399 51,446 51,493 51,540 51,587 51,634 51,681 51,728 51,775 51,822 51,859 51,916 51,963 52,010 52,057 52,104 52,150 52,197 52,244 52,291 52,338 52,384 52,431 52,478 52,524 52,571 52,618 52,664 52,711 52,758 52,804 52,851 52,897 52,944 52,990 53,037 53,083 53,130 53,176 53,223

93

TABLA I (Continuación) Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,4270 1,4271 1,4272 1,4273 1,4274 1,4275 1,4276 1,4277 1,4278 1,4279 1,4280 1,4281 1,4282 1,4283 1,4284 1,4285 1,4286 1,4287 1,4288 1,4289 1,4290 1,4291 1,4292 1,4293 1,4294 1,4295 1,4296 1,4297 1,4298 1,4299 1,4300 1,4301 1,4302 1,4303 1,4304 1,4305 1,4306 1,4307 1,4308 1,4309 1,4310 1,4311 1,4312 1,4313 1,4314 1,4315 1,4316 1,4317 1,4318 1,4319 1,4320 1,4321 Grado Brix 53,269 53,316 53,362 53,408 53,455 53,501 53,548 53,594 53,640 53,686 53,733 53,779 53,825 53,871 53,918 53,964 54,010 54,056 54,102 54,148 54,194 54,241 54,287 54,333 54,379 54,425 54,471 54,517 54,563 54,609 54,655 54,701 54,746 54,792 54,838 54,884 54,930 54,976 55,022 55,067 55,113 55,159 55,205 55,250 55,296 55,342 55,388 55,433 55,479 55,524 55,570 55,616 n 20° 1,4322 1,4323 1,4324 1,4325 1,4326 1,4327 1,4328 1,4329 1,4330 1,4331 1,4332 1,4333 1,4334 1,4335 1,4336 1,4337 1,4338 1,4339 1,4340 1,4341 1,4342 1,4343 1,4344 1,4345 1,4346 1,4347 1,4348 1,4349 1,4350 1,4351 1,4352 1,4353 1,4354 1,4355 1,4356 1,4357 1,4358 1,4359 1,4360 1,4361 1,4362 1,4363 1,4364 1,4365 1,4366 1,4367 1,4368 1,4369 1,4370 1,4371 1,4372 1,4373 Grado Brix 55,661 55,707 55,752 55,798 55,844 55,889 55,935 55,980 56,026 56,071 56,116 56,162 56,207 56,253 56,298 56,343 56,389 56,434 56,479 56,525 56,570 56,615 56,660 56,706 56,751 56,796 56,841 56,887 56,932 56,977 57,022 57,067 57,112 57,157 57,202 57,247 57,292 57,337 57,382 57,427 57,472 57,517 57,562 57,607 57,652 57,697 57,742 57,787 57,832 57,877 57,921 57,966 n 20º 1,4374 1,4375 1,4376 1,4377 1,4378 1,4379 1,4380 1,4381 1,4382 1,4383 1,4384 1,4385 1,4386 1,4387 1,4388 1,4389 1,4390 1,4391 1,4392 1,4393 1,4394 1,4395 1,4396 1,4397 1,4398 1,4399 1,4400 1,4401 1,4402 1,4403 1,4404 1,4405 1,4406 1,4407 1,4408 1,4409 1,4410 1,4411 1,4412 1,4413 1,4414 1,4415 1,4416 1,4417 1,4418 1,4419 1,4420 1,4421 1,4422 1,4423 1,4424 1,4425 Grado Brix 58,011 58,056 58,101 58,145 58,190 58,235 58,279 58,324 58,369 58,413 58,458 58,503 58,547 58,592 58,637 58,681 58,726 58,770 58,815 58,859 58,904 58,984 58,993 59,037 59,082 59,126 59,170 59,215 59,259 59,304 59,348 59,392 59,437 59,481 59,525 59,569 59,614 59,658 59,702 59,746 59,791 59,835 59,879 59,923 59,967 60,011 60,056 60,100 60,144 60,188 60,232 60,276 n 20° 1,4426 1,4427 1,4428 1,4429 1,4430 1,4431 1,4432 1,4433 1,4434 1,4435 1,4436 1,4437 1,4438 1,4439 1,4440 1,4441 1,4442 1,4443 1,4444 1,4445 1,4446 1,4447 1,4448 1,4449 1,4450 1,4451 1,4452 1,4453 1,4454 1,4455 1,4456 1,4457 1,4458 1,4459 1,4460 1,4461 1,4462 1,4463 1,4464 1,4465 1,4466 1,4467 1,4468 1,4469 1,4470 1,4471 1,4472 1,4473 1,4474 1,4475 1,4476 1,4477 Grado Brix 60,320 60,364 60,408 60,452 60,496 60,540 60,584 60,623 60,672 60,716 60,759 60,803 60,847 60,891 60,935 60,979 61,023 61,066 61,110 61,154 61,198 61,241 61,285 61,329 61,372 61,416 61,460 61,503 61,547 61,591 61,634 61,678 61,721 61,765 61,309 61,852 61,895 61,939 61,983 62,026 62,070 62,113 62,156 62,200 62,243 62,287 62,330 62,373 62,417 62,460 62,503 62,547

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TABLA I (Continuación) Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,4478 1,4479 1,4480 1,4481 1,4482 1,4483 1,4484 1,4485 1,4486 1,4487 1,4488 1,4489 1,4490 1,4491 1.4492 1,4493 1,4494 1,4495 1,4496 1,4497 1,4498 1,4499 1,4500 1,4501 1,4502 1,4503 1,4504 1,4505 1,4506 1,4507 1,4508 1,4509 1,4510 1,4511 1,4512 1,4513 1,4514 1,4515 1,4516 1,4517 1,4518 1,4519 1,4520 1,4521 1,4522 1,4523 1,4524 1,4525 1,4526 1,4527 1,4528 1,4529 Grado Brix 62,590 62,633 62,677 62,720 62,763 62,806 62,849 62,893 62,936 62,979 63,022 63,065 63,108 63,152 63,195 63,238 63,281 63,324 63,367 63,410 63,453 63,496 63,539 63,582 63,625 63,668 63,711 63,754 63,797 63,840 63,882 63,925 63,968 64,011 64,054 64,097 64,139 64,182 64,225 64,268 64,311 64,353 64,396 64,439 64,481 64,524 64,567 64,609 64,652 64,695 64,737 64,780 n 20° 1,4530 1,4531 1,4532 1,4533 1,4534 1,4535 1,4536 1,4537 1,4538 1,4539 1,4540 1,4541 1,4542 1,4543 1,4544 1,4545 1,4546 1,4547 1,4548 1,4549 1,4550 1,4551 1,4552 1,4553 1,4554 1,4555 1,4556 1,4557 1,4558 1,4559 1,4560 1,4561 1,4562 1,4563 1,4564 1,4565 1,4566 1,4567 1,4568 1,4569 1,4570 1,4571 1,4572 1,4573 1,4574 1,4575 1,4576 1,4577 1,4578 1,4579 1,4580 1,4581 Grado Brix 64,823 64,865 64,908 64,950 64,992 65,035 65,078 65,120 65,163 65,205 65,248 65,290 65,333 65,375 65,417 65,460 65,502 65,544 65,587 65,629 65,672 65,714 65,756 65,798 65,841 65,883 65,925 65,967 66,010 66,052 66,094 66,136 66,178 66,221 66,263 66,305 66,347 66,389 66,431 66,473 66,515 66,557 66,599 66,641 66,683 66,725 66,767 66,809 66,851 66,893 66,935 66,977 n 20º 1,4582 1,4583 1,4584 1,4585 1,4586 1,4587 1,4588 1,4589 1,4590 1,4591 1,4592 1,4593 1,4594 1,4595 1,4596 1,4597 1,4598 1,4599 1,4600 1,4601 1,4602 1,4603 1,4604 1,4605 1,4606 1,4607 1,4608 1,4609 1,4610 1,4611 1,4612 1,4613 1,4614 1,4615 1,4616 1,4617 1,4618 1,4619 1,4620 1,4621 1,4622 1,4623 1,4624 1,4625 1,4626 1,4627 1,4628 1,4629 1,4630 1,4631 1,4632 1,4633 Grado Brix 67,019 67,061 67,103 67,145 67,186 67,228 67,270 67,312 67,354 67,396 67,437 67,479 67,521 67,563 67,604 67,646 67,688 67,729 67,771 67,813 67,854 67,895 67,938 67,979 68,021 68,063 68,104 68,146 68,187 68,229 68,270 68,312 68,353 68,395 68,436 68,478 68,519 68,561 68,602 68,643 68,685 68,726 68,768 68,809 68,850 68,892 68,933 68,974 69,016 69,057 69,098 69,139 n 20° 1,4634 1,4635 1,4636 1,4637 1,4638 1,4639 1,4640 1,4641 1,4642 1,4643 1,4644 1,4645 1,4646 1,4647 1,4648 1,4649 1,4650 1,4651 1,4652 1,4653 1,4654 1,4655 1,4656 1,4657 1,4658 1,4659 1,4660 1,4661 1,4662 1,4663 1,4664 1,4665 1,4666 1,4667 1,4668 1,4669 1,4670 1,4671 1,4672 1,4673 1,4674 1,4675 1,4676 1,4677 1,4678 1,4679 1,4680 1,4681 1,4682 1,4683 1,4684 1,4685 Grado Brix 69,181 69,222 69,263 69,304 69,346 69,387 69,428 69,469 69,510 69,551 69,593 69,634 69,675 69,716 69,757 69,798 69,839 69,880 69,921 69,962 70,003 70,044 70,085 70,126 70,167 70,208 70,249 70,290 70,331 70,372 70,413 70,453 70,494 70,535 70,576 70,617 70,658 70,698 70,739 70,780 70,821 70,861 70,902 70,943 70,984 71,024 71,065 71,106 71,146 71,187 71,228 71,268

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TABLA I (Continuación) Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,4686 1,4687 1,4688 1,4689 1,4690 1,4691 1,4692 1,4693 1,4694 1,4695 1,4696 1 4697 1 4698 1,4699 1,4700 1,4701 1,4702 1,4703 1,4704 1,4705 1,4706 1,4707 1,4708 1,4709 1,4710 1,4711 1,4712 1,4713 1,4714 1,4715 1,4716 1,4717 1,4718 1,4719 1,4720 1,4721 1,4722 1,4723 1,4724 1,4725 1,4726 1,4727 1,4728 1,4729 1,4730 1,4731 1,4732 1,4733 1,4734 1,4735 1,4736 1,4737 Grado Brix 71,309 71,349 71,390 71,431 71,471 71,512 71,552 71,593 71,633 71,674 71,714 71,755 71,795 71,836 71,876 71,917 71,957 71,998 72,038 72,078 72,119 72,159 72,199 72,240 72,280 72,320 72,361 72,401 72,441 72,482 72,522 72,562 72,602 72,643 72,683 72,723 72,763 72,803 72,843 72,884 72,924 72,964 73,004 73,044 73,084 73,124 73,164 73,204 73,244 73,285 73,325 73,365 n 20° 1,4738 1,4739 1,4740 1,4741 1,4742 1,4743 1,4744 1,4745 1,4746 1,4747 1,4748 1,4749 1,4750 1,4751 1,4752 1,4753 1,4754 1,4755 1,4756 1,4757 1,4758 1,4759 1,4760 1,4761 1,4762 1,4763 1,4764 1,4765 1,4766 1,4767 1,4768 1,4769 1,4770 1,4771 1,4772 1,4773 1,4774 1,4775 1,4776 1,4777 1,4778 1,4779 1,4780 1,4781 1,4782 1,4783 1,4784 1,4785 1,4786 1,4787 1,4788 1,4789 Grado Brix 73,405 73,445 73,485 73,524 73,564 73,604 73,644 73,684 73,724 73,764 73,804 73,844 73,884 73,924 73,963 74,003 74,043 74,083 74,123 74,162 74,202 74,242 74,282 74,321 74,361 74,401 74,441 74,480 74,520 74,560 74,599 74,633 74,678 74,718 74,758 74,797 74,837 74,876 74,916 74,956 74,995 75,035 75,074 75,114 75,153 75,193 75,232 75,272 75,311 75,350 75,390 75,429 n 20º 1,4790 1,4791 1,4792 1,4793 1,4794 1,4795 1,4796 1,4797 1,4798 1,4799 1,4800 1,4801 1,4802 1,4803 1,4804 1,4805 1,4806 1,4807 1,4808 1,4809 1,4810 1,4811 1,4812 1,4813 1,4814 1,4815 1,4816 1,4817 1,4818 1,4819 1,4820 1,4821 1,4822 1,4823 1,4824 1,4825 1,4826 1,4827 1,4828 1,4829 1,4830 1,4831 1,4832 1,4833 1,4834 1,4835 1,4836 1,4837 1,4838 1,4839 1,4840 1,4841 Grado Brix 75,469 75,508 75,547 75,587 75,626 75,666 75,705 75,744 75,784 75,823 75,862 75,901 75,941 75,980 76,019 76,058 76,098 76,137 76,176 76,215 76,254 76,294 76,333 76,372 76,411 76,450 76,489 76,528 76,567 76,607 76,646 76,685 76,724 76,763 76,802 76,841 76,880 76,919 76,958 76,997 77,036 77,075 77,113 77,152 77,191 77,230 77,269 77,308 77,347 77,386 77,425 77,463 n 20° 1,4842 1,4843 1,4844 1,4845 1,4846 1,4847 1,4848 1,4849 1,4850 1,4851 1,4852 1,4853 1,4854 1,4855 1,4856 1,4857 1,4858 1,4859 1,4860 1,4861 1,4862 1,4863 1,4864 1,4865 1,4866 1,4867 1,4868 1,4869 1,4870 1,4871 1,4872 1,4873 1,4874 1,4875 1,4876 1,4877 1,4878 1,4879 1,4880 1,4881 1,4882 1,4883 1,4884 1,4885 1,4886 1,4887 1,4888 1,4889 1,4890 1,4891 1,4892 1,4893 Grado Brix 77,502 77,541 77,580 77,619 77,657 77,696 77,735 77,774 77,812 77,851 77,890 77,928 77,967 78,006 78,045 78,083 78,122 78,160 78,199 78,238 78,276 78,315 78,353 78,392 78,431 78,469 78,508 78,546 78,585 78,623 78,662 78,700 78,739 78,777 78,816 78,854 78,892 78,931 78,969 79,008 79,046 79,084 79,123 79,161 79,199 79,238 79,276 79,314 79,353 79,391 79,429 79,468

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TABLA I (Continuación) Conversión de Indice de Refracción a Grados Brix n 20° 1,4894 1,4895 1,4896 1,4897 1,4898 1,4899 1,4900 1,4901 1,4902 1,4903 1,4904 1,4905 1,4906 1,4907 1,4908 1,4909 1,4910 1,4911 1,4912 1,4913 1,4914 1,4915 1,4916 1,4917 1,4918 1,4919 1,4920 1,4921 1,4922 1,4923 1,4924 1,4925 1,4926 1,4927 1,4928 1,4929 1,4930 1,4931 1,4932 1,4933 1,4934 1,4935 1,4936 1,4937 1,4938 1,4939 1,4940 1,4941 1,4942 1,4943 1,4944 1,4945 Grado Brix 79,506 79,544 79,582 79,620 79,659 79,697 79,735 79,773 79,811 79,850 79,888 79,925 79,964 80,002 80,040 80,078 80,116 80,154 80,192 80,231 80,269 80 307 80 345 80,383 80,421 80,459 80,497 80,534 80,572 80,610 80,648 80,686 80,724 80,762 80,800 80,838 80,876 80,913 80,951 80,989 81,027 81,065 81,103 81,140 81,178 81,216 81,254 81,291 81,329 81,367 81,405 81,442 n 20° 1,4946 1,4947 1,4948 1,4949 1,4950 1,4951 1,4952 1,4953 1,4954 1,4955 1,4956 1,4957 1,4958 1,4959 1,4960 1,4961 1,4962 1,4963 1,4964 1 4965 1 4966 1,4967 1,4968 1,4969 1,4970 1,4971 1,4972 1,4973 1,4974 1,4975 1,4976 1,4977 1,4978 1,4979 1,4980 1,4981 1,4982 1,4983 1,4984 1,4985 1,4986 1,4987 1,4988 1,4989 1,4990 1,4991 1,4992 1,4993 1,4994 1,4995 1,4996 1,4997 Grado Brix 81,480 81,518 81,555 81,593 81,631 81,668 81,706 81,744 81,781 81,819 81,856 81,894 81,932 81,969 82,007 82,044 82,082 82,119 82,157 82,194 82,232 82,269 82,307 82,344 82,381 82,419 82,456 82,494 82,531 82,569 82,606 82,643 82,681 82,718 82,755 82,793 82,830 82,867 82,905 82,942 82,979 83,016 83,054 83,091 83,128 83,165 83,202 83,240 83,277 83,314 83,351 83,388 n 20º 1,4998 1,4999 1,5000 1,5001 1,5002 1,5003 1,5004 1,5005 1,5006 1,5007 1,5008 1,5009 1,5010 1,5011 1,5012 1,5013 1,5014 1,5015 1,5016 1,5017 1,5018 1,5019 1,5020 1,5021 1,5022 1,5023 1,5024 1,5025 1,5026 1,5027 1,5028 1,5029 1,5030 1,5031 1,5032 1,5033 1,5034 1,5035 1,5036 1,5037 1,5038 1,5039 1,5040 1,5041 1,5042 1,5043 1,5044 1,5045 1,5046 1,5047 1,5048 1,5049 Grado Brix 83,425 83,463 83.500 83,537 83,574 83,611 83,648 83,685 83,722 83,759 83,796 83,833 83,870 83,907 83,944 83,981 84,018 84,055 84,092 84,129 84,166 84,203 84,240 84,277 84,314 84,351 84,333 84,424 84,461 84,498 84,535 84,572 84,609 84,645 84,682 84,719 84,756 84,792 84,829 84,866 84,903 84,939 84,976 85,013 85,049 85,086 85,123 85,159 85,195 85,233 85,269 85,306 n 20° 1,5050 1,5051 1,5052 1,5053 1,5054 1,5055 1,5056 1,5057 1,5058 1,5059 1,5060 1,5061 1,5062 1,5063 1,5064 1,5065 1,5066 1,5067 1,5068 1,5069 1,5070 1,5071 1,5072 1,5073 1,5074 1,5075 1,5076 1,5077 1,5078 1,5079 Grado Brix 85,343 85,379 85,416 85,452 85,489 85,525 85,562 85,598 85,635 85,672 85,703 85,744 85,781 85,817 85,854 85,890 85,927 85,963 86,000 86,036 86,072 86,109 86,145 86,182 86,218 86,254 86,291 86,327 86,363 86,399

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TABLA Il GRADO BRIX Temp. °C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 0 0,50 0,46 0,42 0,37 0,33 0,27 0,22 0,17 0,12 0,06 5 0,54 0,49 0,45 0,40 0,35 0,29 0,24 0,18 0,13 0,06 10 0,58 0,53 0,48 0,42 0,37 0,31 0,25 0,19 0,13 0,06 15 0,61 0,55 0,50 0,44 0,39 0,33 0,26 0,20 0,14 0,07 20 0,64 0,58 0,52 0,46 0,40 0,34 0,27 0,21 0,14 0,07 25 0,66 0,60 0,54 0.48 0,41 0,34 0,28 0,21 0,14 0,07 30 0,68 0,62 0,56 0,49 0,42 0,35 0,28 0,21 0,14 0,07 40 0,72 0,65 0,58 0,51 0,44 0,37 0,30 0,22 0,15 0,08 50 0,74 0,67 0,60 0,53 0,45 0,38 0,30 0,23 0,15 0,08 60 0,76 0,69 0,61 0,54 0,46 0,39 0,31 0,23 0,16 0,08 70 0,79 0,71 0,63 0,55 0,48 RESTAR 0,40 0,32 0,24 0,16 0,08

21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

0,06 0,13 0,19 0,26 0,33 0,40 0,48 0,56 0,64 0,72

0,07 0,13 0,20 0,27 0,35 0,42 0,50 0,57 0,66 0,74

0,07 0,14 0,21 0,28 0,36 0,43 0,52 0,60 0,68 0,77

0,07 0,14 0,22 0,29 0,37 0,44 0,53 0,61 0,69 0,78

0,07 0,15 0,22 0,30 0,38 0,45 0,54 0,62 0,71 0,79

0,08 0,15 0,23 0,30 0,38 0,46 0,55 0,63 0,72 0,80

0,08 0,15 0,23 0,31 0,39 0,47 0,55 0,63 0,72 0,80

0,08 0,15 0,23 0,31 0,40 0,48 0,56 0,64 0,73 0,81

0,08 0,16 0,24 0,31 0,40 0,48 0,56 0,64 0,73 0,81

0,08 0,16 0,24 0,32 0,40 0,48 0,56 0,64 0,73 0,81

0,08 0,16 0,24 0,32 0,40 SUMAR 0,48 0,56 0,64 0,73 0,81

2. DENSIDAD 2.1. Principio. La densidad (20°/20ºC) del líquido a analizar se determina por medio del picnómetro. 2.2. Material y aparatos. 2.2.1. Estufa. 2.2.2. Desecador. 2.2.3. Baño a 20°C. 2.2.4. Balanza analítica sensible a 0,1 mg. 2.2.5. Picnómetro Reischauer de 50 ml o similar. El picnómetro Reischauer consiste en un matraz de 50 ml de capacidad, cerrado con un capuchón esmerilado provisto de un cuello de 6 cm de longitud y 4 mm de diámetro interior. 2.2.6. Erlenmeyer de 500 ml. 2.2.7. Embudo de 10 cm de diámetro. 2.2.8. Tubos capilares. 2.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 502612 DERQUIM Mezcla crómica Papel de filtro

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2.4. Procedimiento. Si el líquido a analizar contiene una apreciable cantidad de gas carbónico, conviene eliminar completamente éste agitando fuertemente en un Erlenmeyer y filtrarlo a continuación por medio de un filtro cubierto de un vidrio de reloj. 2.4.1 Determinación del peso del picnómetro vacío: Limpiar el picnómetro con Mezcla crómica DERQUIM, caliente si es necesario; después enjuagar cuidadosamente con Agua PA-ACS. Secar durante tres horas en la estufa a 105108ºC. Enfriar en desecador hasta temperatura ambiente y expresar el resultado con cuatro cifras decimales. 2.4.2. Determinación del peso del picnómetro lleno de agua. Llenar el picnómetro hasta la marca con Agua PA-ACS. Tapar y ponerlo en un baño de agua a 20ºC durante veinte minutos. Estando la temperatura equilibrada, enrasar el picnómetro (siempre sumergido en el baño de agua) con la ayuda de un capilar. Secar la parte vacía del cuello del picnómetro por medio del papel de filtro. Colocar el tapón, retirar el picnómetro del baño de agua y secar cuidadosamente. El peso

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del picnómetro lleno de agua debe ser determinado con una precisión de cuatro cifras decimales. 2.4.3. Determinación del peso del picnómetro lleno de muestra: Después de haber vaciado el picnómetro, lavar varias veces con la muestra y proceder como en 2.4.2., sustituyendo el Agua PA-ACS por zumo de uva. 2.5. Cálculos. Calcular la densidad 20º/20°C aplicando la siguiente fórmula: c-a d = ——— b-a Siendo: a = Peso picnómetro vacío. b = Peso picnómetro lleno de agua hasta la marca. c = Peso picnómetro lleno de líquido para analizar hasta la marca. La densidad obtenida debe expresarse con una precisión de cuatro cifras decimales. 2.6. Referencias. Federation Internationale des Producteurs de Jus de Fruits. Método número 1, 1968. 3. pH 3.1. Principio. Medida potenciométrica a 20ºC, previa eliminación del dióxido de carbono por agitación en frío y con vacío parcial. 3.2. Material y aparatos. 3.2.1. pH-metro. 3.2.2. Electrodo/s para medida de pH. 3.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 131481 Potasio Hidrógeno Ftalato PA-ISO 272168 Tampón, Solución pH 4,00 ± 0,02 (20ºC) ST 272170 Tampón, Solución pH 7,00 ± 0,02 (20ºC) ST 3.3.1. Tampón, Solución pH 4,00 ± 0,02 (20ºC) ST o prepararla disolviendo 10,211 g de Potasio Hidrógeno Ftalato PA-ISO (KHC6H 4O 4) (secado una hora a 105ºC) en un litro de Agua PAACS a 20ºC. 3.4. Procedimiento. Introducir un volumen adecuado de muestra en un kitasato. Conectar a vacío agitando al mismo tiempo el matraz, hasta eliminación del gas carbónico. Tomar un volumen de muestra exento de dióxido de carbono y determinar el pH. 3.5. Expresión de los resultados. Expresar el pH medido a 20ºC con uno o dos decimales, según la precisión del aparato. 3.6. Observaciones. 3.6.1. Antes de cada nueva medida, limpiar los electrodos con agua destilada y secarlos con papel de filtro. 3.6.2. El electrodo de calomelanos debe ser llenado de tiempo en tiempo de solución saturada de ClK. 3.6.3. El electrodo de vidrio debe ser conservado en agua y el de calomelanos en solución saturada de ClK. Los electrodos combinados deben ser conservados en solución saturada de ClK. 3.6.4. El calibrado se hace con ayuda de las soluciones tampones siguiendo las indicaciones particulares del fabricante del aparato. 3.7. Referencias. Federation International des Producteurs de Jus de Fruits. Método número 11, año 1968. 4. ACIDEZ TOTAL 4.1. Principio. Valoración potenciométrica a pH=8,1 de la acidez del zumo de uva, previa eliminación del dióxido de carbono. 4.2. Material y aparatos. 4.2.1. pH-metro con electrodo/s para medidas de pH. 4.2.2. Agitador magnético. 4.3. Reactivos. 171694 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) RE 4.4. Procedimiento. Tomar 20 ml del zumo de uva, exento de dióxido de carbono, obtenido como en 3.4, y llevar a un vaso de unos 100 ml de capacidad. Poner en marcha el agitador y valorar con solución 4.3 hasta pH 8,1 a 20ºC. Mantener en marcha el agitador durante la operación, que debe durar, como mínimo, cinco minutos. 4.5. Cálculos. Calcular la acidez total expresada en meq/l, con una aproximación de 0,1 meq/l, o en gramos de ácido tartárico/l.

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V Acidez total (meq/l) = 10 —— 2 V Acidez total (g ac.tartárico/l) = 0,75 —— 2 Siendo: V= Volumen, en ml, de solución de Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) RE 4.6. Referencias Recuil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins O.I.V. A 10 (1969), 1-3.

181969 Yodo 0,01 mol/l (0,02N) SV 5.3.1. Sodio Hidróxido 0,05 mol/l (0,05N) SV 5.3.2. Solución de Fenolftaleína al 1% en Etanol 96% PA. Usese Fenolftaleína PA-ACS y diluir convenientemente. 5.3.3. Solución de Yodo 0,01N. Diluir Yodo 0,01 mol/l (0,02N) SV con Agua PA-ACS a 1:1 y determinar el factor. 5.3.4. Almidón soluble RE. 5.4. Procedimiento Alimentar el generador de vapor con Agua de Cal solución saturada RE o Agua de Barita solución saturada RE limpia, manteniéndolo lleno hasta unos 2/3 de su volumen. Poner en el borboteador 20 ml de zumo de uva exento de gas carbónico, como en 3.4. Añadir al zumo de uva unos 0,5 g de Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO, poner en marcha el generador de vapor, manteniendo abierta la salida del tubo purgador del vapor; después de cerrar éste, calentar el borboteador. Durante la operación se regula el calentador de forma que el volumen del líquido en el borboteador no pase sensiblemente de los veinte ml iniciales. Destilar en unos doce-quince minutos 250 ml. Valorar con Sodio Hidróxido 0,05 mol/l (0,05N) SV en presencia de dos gotas de Fenolftaleína como indicador. Valorar el dióxido de azufre libre en este mismo destilado, añadiendo al terminar la valoración anterior una gota de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO, para acidular nuevamente, valorando el dióxido de azufre libre con solución de Yodo 0,01N, añadiendo también 2 ml de Almidón soluble RE como indicador y un cristal de Potasio Yoduro PA-ISO. Para determinar el dióxido de azufre combinado con el Acetaldehído, añadir 20 ml de solución saturada de di-Sodio tetra-Borato 10-hidrato PAACS-ISO (el liquido toma un color rosa pálido) y valorar nuevamente con solución de Yodo 0,01N. 5.5. Cálculos. Calcular la acidez volátil expresada en meq/l o en g de ácido acético/l. Acidez volátil (meq/l)=5(V/2-V’/10-V’’/20) Acidez volátil (g/l ácido acético)=0,3(V/2V’/10-V”/20) Siendo: V = Volumen en ml utilizados de solución de sodio hidróxido 0,05N. V’ = Volumen en ml de yodo 0,01N utilizado en la oxidación del dióxido de azufre libre. V” = Volumen en ml de yodo 0,01N utilizado en la oxidación del dióxido de azufre combinado con el acetaldehído.

5. ACIDEZ VOLATIL 5.1. Principio. Separación de los ácidos volátiles del zumo de uva por arrastre con vapor de agua, evitando la presencia de dióxido de carbono en el destilado. Valoración con solución de sodio hidróxido, descontando los contenidos de ácido sórbico y de dióxido de azufre libre y total. 5.2. Material y aparatos. 5.2.1. Aparato para destilación (ver figura 21.I pág. 52). 5.2.1.1. Matraz generador de vapor de 3.500 ml (a). El agua condensada en el tubo de unión del matraz con el borboteador, se purga por el purgador (c). 5.2.1.2. Borboteador (b). Tubo cilíndrico de 3 cm de diámetro y 27 cm de altura. Este tubo reposa sobre un disco de amianto de 15 cm de diámetro con un orificio central de 29 mm. El tubo (d) por el que entra el vapor en el borboteador debe llegar a 1cm del fondo. 5.2.1.3. Columna rectificadora (e). De 20 mm de diámetro y 50 cm de altura. 5.2.1.4. Refrigerante de West (f). De 40 cm de longitud útil, colocado verticalmente. 5.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131066 Acido L(+) Tartárico PA-ACS-ISO 171073 Agua de Cal solución saturada RE (o 171071 Agua de Barita solución saturada RE) 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 121085 Etanol 96% PA 131325 Fenolftaleína PA-ACS 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 131644 di-Sodio tetra-Borato 10-hidrato PA-ACS-ISO 182153 Sodio Hidróxido 0,05 mol/l (0,05N) SV

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5.6. Observaciones. 5.6.1. La determinación de la acidez volátil se efectuará inmediatamente después de la apertura del envase. 5.6.2. En la destilación del zumo de uva para la determinación de la acidez volátil, el ácido sórbico pasa casi en su totalidad al destilado, falseando el resultado del análisis. Efectuar la corrección. 100 mg de ácido sórbico equivalen a 0,892 meq = 0,0535 g de ácido acético. 5.6.3. La corrección de la acidez volátil se realiza según la norma Jaulmes, descontándose Ia totalidad del contenido en dióxido de azufre libre y la mitad del contenido de dióxido de azufre total. 6. SOLIDOS SOLUBLES El contenido en sólidos solubles expresado en g/l se calcula a partir del valor de la densidad, obtenida según el método oficial número 2 y utilizando la tabla adjunta.

TABLA 6.1 Estracto seco total (g/l) Densidad relativa con dos decimales Tercer decimal de la densidad relativa 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Gramos por litro del extracto 1,00 1,01 1,02 1,03 1,04 1,05 1,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,17 1,18 1,19 1,20 1,21 0 25,8 51,7 77,7 103,7 129,8 155,9 182,1 208,4 234,7 261,0 287,4 313,9 340,4 366,9 393,6 420,3 447,1 473,9 500,9 527,8 555,0 2,6 28,4 54,3 80,3 106,3 132,4 158,6 184,8 211,0 237,3 263,6 290,0 316,5 343,0 369,6 396,2 423,0 449,8 476,6 503,5 530,5 557,7 5,1 31,0 56,9 82,9 109,0 135,0 161,2 187,4 213,6 239,9 266,3 292,7 319,2 345,7 372,3 398,9 425,7 452,4 479,3 506,2 533,3 560,4 7,7 33,6 59,5 85,5 111,6 137,6 163,8 190,0 216,2 242,5 268,9 295,3 321,8 348,3 375,0 401,6 428,3 455,2 482,0 508,9 536,0 563,1 10,3 36,2 62,1 88,1 114,2 140,3 166,4 192,6 218,9 245,2 271,5 298,0 324,5 351,0 377,6 404,3 431,0 457,8 484,7 511,6 538,7 565,8 12,9 38,8 64,7 90,7 116,8 142,9 169,0 195,2 221,5 247,8 274,2 300,6 327,1 353,7 380,3 406,9 433,7 460,5 487,4 514,3 541,4 568,5 15,4 41,3 67,3 93,3 119,4 145,5 171,6 197,8 224,1 250,4 276,8 303,3 329,8 356,3 382,9 409,6 436,4 463,2 490,1 517,0 544,1 571,2 18,0 43,9 69,9 95,9 122,0 148,1 174,3 200,5 226,8 253,1 279,5 305,9 332,4 359,0 385,6 412,3 439,0 465,9 492,8 519,7 546,8 573,9 20,6 46,5 72,5 98,5 124,6 150,7 176,9 203,1 229,4 255,7 282,1 308,6 335,1 361,6 388,3 415,0 441,7 468,6 495,5 522,4 549,6 576,6 23,2 49,1 75,1 101,1 127,2 153,3 179,5 205,8 232,0 258,4 284,8 311,2 337,8 364,3 390,9 417,6 444,4 471,3 498,2 525,1 552,3 579,3

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TABLA 6.1 (Continuación) Densidad relativa con dos decimales Tercer decimal de la densidad relativa 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Gramos por litro del extracto 1,22 1,23 1,24 1,25 1,26 1,27 1,28 1,29 1,30 1,31 1,32 1,33 1,34 1,35 582,0 609,3 636,6 664,0 691,4 719,1 746,7 774,4 802,3 830,2 858,3 886,5 914,8 943,1 584,8 612,1 639,4 666,8 694,2 721,9 749,5 777,2 805,0 833,1 861,2 889,4 917,7 587,5 614,8 642,1 669,5 697,0 724,7 752,3 780,0 807,8 835,9 864,0 892,2 920,5 590,2 617,5 644,9 672,3 699,8 727,4 755,1 782,8 810,6 838,7 866,8 895,0 923,3 593,0 620,3 647,4 675,0 702,5 730,2 757,8 785,6 813,4 841,5 869,6 897,9 926,2 595,7 623,0 650,3 677,7 705,3 732,9 760,6 788,3 816,2 844,3 872,4 900,7 929,0 598,4 625,7 653,1 680,5 708,1 735,7 763,4 791,1 819,0 847,1 875,3 903,5 931,8 601,1 628,4 655,8 683,2 710,8 738,5 766,1 793,9 821,8 849,9 878,1 906,4 934,7 603,9 631,2 658,6 686,0 713,6 741,2 768,9 796,7 824,6 852,7 880,9 909,2 937,5 606,6 633,9 661,3 688,7 710,4 744,0 771,7 799,5 827,4 855,5 883,7 912,0 940,3

TABLA DE INTERPOLAR 4° decimal de la densidad relativa 1 2 3 4 5 6 7 8 9

g/l del extracto seco 0,26 0,52 0,78 1,04 1,30 1,56 1,82 2,08 2,34

102

M
7. AZUCARES TOTALES Y REDUCTORES 7.1. Principio. Eliminación previa de todas las materias reductoras distintas de los azúcares por defecación, inversión y posterior valoración basada en la acción reductora de los azúcares sobre una solución cupro-alcalina. 7.2. Material y aparatos. 7.2.1. Material necesario para volumetrías. 7.2.2. Baño de agua. 7.2.3. Erlenmeyer de 300 ml con refrigerante de reflujo. 7.3. Reactivos 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131018 Acido Cítrico 1-hidrato PA-ACS-ISO 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 121085 Etanol 96% v/v PA 131325 Fenolftaleína PA-ACS 131505 Potasio Hexacianoferrato III 3-hidrato PA-ACS 131515 Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 172174 Reactivo de Luff-Schoorl RE 131648 Sodio Carbonato anhidro PA-ACS-ISO 181723 Sodio Tiosulfato 0,1mol/l (0,1N) SV 121787 Zinc Sulfato 7-hidrato PA 7.3.1. Solución de Acido Sulfúrico al 25 % en volumen. Diluir convenientemente Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS. 7.3.2. Acido Clorhídrico 35% PA-ISO. 7.3.3. Acido Acético glacial PA-ACS-ISO. 7.3.4. Solución de Potasio Hidróxido al 30%. Disolver unos gramos de Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO en el volumen conveniente de Agua PA-ACS. 7.3.5. Solución de Potasio Yoduro al 30%. Usese Potasio Yoduro PA-ISO, disuelto con Agua PAACS hasta la concentración deseada. Conservar en frasco topacio. 7.3.6. Solución de Almidón al 1%. Disolver 1 g de Almidón soluble RE con Agua PA-ACS, enrasando a 100 ml. 7.3.7. Solución de Carrez I: Disolver 150 g de Potasio Hexacianoferrato III 3hidrato PA-ACS en un litro de Agua PA-ACS. 7.3.8. Solución de Carrez II: Disolver 300 g de Zinc Sulfato 7-hidrato PA en un litro de Agua PA-ACS. 7.3.9. Reactivo de Luff-Schoorl RE, o bien prepararlo de la siguiente forma: Disolver 50 g de Acido Cítrico 1-hidrato PA-ACSISO en 500 ml de Agua PA-ACS y 143,7 g de Sodio Carbonato anhidro PA-ACS-ISO en 350 ml de Agua PA-ACS tibia; cuando se haya enfriado, mezclar con cuidado ambas soluciones. Disolver 25 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO en 100 ml de Agua PA-ACS. Añadir a la solución anterior y enrasar con Agua PA-ACS hasta 1 l. 7.3.10. Sodio Tiosulfato 0,1mol/l (0,1N) SV. 7.3.11. Solución de Fenolftaleína: Disolver 0,1 g de Fenolftaleína PA-ACS en 100 ml de Etanol 96% v/v PA. 7.4. Procedimiento. 7.4.1. Preparación de la muestra: Tomar con pipeta 25 ml de la muestra en matraz aforado de 500 ml. Añadir 150 ml de Agua PA-ACS y 5 ml de la solución Carrez I; mezclar y añadir 5 ml de la solución Carrez II. Mezclar y enrasar con Agua PA-ACS. Dejar en reposo diez minutos y filtrar. 7.4.2. Inversión de los azúcares: Tomar con pipeta 25 ml de la muestra preparada según (7.4.1.) y llevar a un matraz de 100 o 200 ml, según la dilución a emplear. Diluir con Agua PA-ACS hasta 75 ml y añadir 5 ml de Acido Clorhídrico 1-hidrato PAACS-ISO. Antes de 5 minutos llevarlo a 67-70°C en un baño de agua, mantenerlo durante cinco minutos a esa temperatura. Comprobar la temperatura con un termómetro introducido en la disolución. Enfriar inmediatamente el matraz a 20°C, quitar el termómetro y aclararlo. Neutralizar el contenido con solución de Potasio Hidróxido al 30%, utilizando Fenolftaleína como indicador. Añadir unas gotas de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO hasta que el color de la Fenolftaleína desaparezca. Enrasar el matraz con Agua PA-ACS. 7.4.3. Determinación de los azúcares totales: La solución de la muestra no debe contener más de 50 mg de azúcares reductores. Tomar con pipeta 25 ml de la muestra preparada según (7.4.2.) sobre un matraz que contenga 25 ml de la solución de Luff-Schoorl (7.3.9.). Añadir al matraz unas perlas de vidrio y conectar el refrigerante de reflujo. Calentar el matraz con llama potente durante dos minutos y mantener a ebullición durante diez minutos exactos. Enfriar inmediatamente en agua. Cuando esté completamente frío, añadir 10 ml de la solución de Potasio Yoduro (7.3.5.) y, con cuidado, 25 ml de la solución de Acido Sulfúrico (7.3.1.). Añadir 2 ml de la solución de Almidón (7.3.6.) y valorar el contenido del matraz con solución de Sodio Tiosulfato 0,1mol/l (0,1N) SV (7.3.10.) hasta obtener una coloración blanca cremosa. Si se hubieran empleado menos de 5 ml en la valoración, repetir la determinación utilizando una dilución de la muestra más adecuada. Realizar en paralelo una determinación en blanco, empleando 25 ml de Agua PA-ACS.

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7.4.4. Azúcares reductores: Para la determinación de azúcares reductores seguir el mismo procedimiento suprimiendo la inversión (7.4.2.). 7.5. Cálculos. Sea D la diferencia entre lo gastado de Sodio Tiosulfato por el blanco y lo gastado por la muestra. La concentración de azúcares totales expresados en glucosa se obtiene del valor D en la tabla, interpolando en caso necesario y multiplicando por el factor de dilución. 7.6. Referencias. Federation International des Producteurs de Jus de Fruits. Método número 4. Año 1985.

8. ACIDO ASCORBICO 8.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación del ácido ascórbico por cromatografía de líquidos de alta eficacia, detectándolo en el ultravioleta a 268 nm. 8.2. Material y aparatos. 8.2.1. Equipo de filtración de muestra y disolvente para eliminar partículas superiores a 0,5 mm. 8.2.2. Cromatógrafo de líquidos equipado con detector de ultravioleta de longitud de onda variable y registrador. 8.2.3. Columna NH 2 - Lichorsob de 250 x 4,6 mm fr 10 mm o similar. 8.3. Reactivos. 263093 Acetonitrilo-gradiente HPLC 131013 Acido L(+)-Ascórbico PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131509 Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO 8.3.1. Solución patrón de Acido Ascórbico de 300 mg/l, preparada con Acido L(+) - Ascórbico PA-ACS-ISO y Agua PA-ACS y conservada en matraz color topacio. 8.3.2. Solución A: Tampón fosfato pH 3,5. Disolución 0,005M de Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO (KH2PO4): Filtrar esta solución con (8.2.1.). 8.3.3. Solución B: Acetonitrilo-gradiente HPLC. 8.4. Procedimiento. 8.4.1. Condiciones cromatográficas orientativas: Fase móvil: Tampón Potasio di-Hidrógeno Fosfato/Acetonitrilo-gradiente HPLC: 60/40 (v/v). Flujo : 1 ml/minuto. 8.4.2. Calibrado: Inyectar en el cromatógrafo entre 10 y 20 ml de la solución patrón (7.3.1.) y calcular el factor de respuesta. Co Factor de respuesta (F) = –––– Ap Siendo: Co = Concentración en mg/l de ácido ascórbico. Ap = Area del pico en el cromatograma de la solución patrón. 8.4.3. Determinación: Homogeneizar. Filtrar mediante (8.2.1.) e inyectar de 10 a 20 ml en el cromatógrafo. 8.5. Cálculos. El contenido de ácido ascórbico, expresado en

Tabla 7,1 Para 25 ml de reactivo de Luff-Schoorl D = ml de Tiosulfato 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 mg de Glucosa 2,4 4,8 7,2 9,7 12,2 14,7 17,2 19,8 22,4 25,0 27,6 30,3 33,0 35,7 38,5 41,3 44,2 47,1 50,0 53,0 56,0 59,1 62,2 Diferencia 2,4 2,4 2,5 2,5 2,5 2,6 2,6 2,6 2,6 2,6 2,7 2,7 2,7 2,7 2,8 2,9 2,9 2,9 3,0 3,0 3,0 3,1

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M
mg/l (sin decimales), se obtendrá mediante la siguiente fórmula: Acido ascórbico (mg/l) = F x Ac Siendo: F = Factor de respuesta. Ac = Area del pico del ácido ascórbico en la muestra. 8.6. Observaciones. 8.6.1. La determinación del ácido ascórbico se realizará inmediatamente después de la apertura del envase. 8.6.2. Con este método no se determina ácido dehidroascórbico. Co Factor de respuesta (F) = –––– Ap Siendo: Co = Concentración en g/l del patrón. Ap = Area del pico patrón en el cromatograma. 9.4.3. Determinación: Filtrar la muestra mediante los equipos del apartado (9.2.1.) e inyectar una cantidad conocida en la columna. 9.5. Cálculos El contenido en glucosa y fructosa, expresado en g/l, se obtiene mediante la siguiente fórmula: Glucosa (g/l) = F1 x A1 x f Fructosa (g/l) = F2 x A2 x f Siendo: F1 = Factor de respuesta de la glucosa. F2 = Factor de respuesta de la fructosa. f = Factor de dilución. A1 = Area del pico de glucosa en la muestra. A2 = Area del pico de fructosa en la muestra. 9.6. Observaciones. Los factores de respuesta deben calcularse varias veces durante una sesión. Es pues recomendable tener termostatizado el detector. 10. NITROGENO TOTAL 10.1. Principio. Digestión del producto con ácido sulfúrico concentrado, en presencia de catalizador, en la cual se transforma el nitrógeno orgánico en iones amonio, que en medio fuertemente básico es desplazado en forma de amoníaco, y recogido sobre ácido bórico. La posterior valoración con ácido clorhídrico permite el cálculo de la cantidad inicialmente presente de nitrógeno orgánico y amoniacal en la muestra. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Aparato Kjeldahl. 10.3. Reactivos. 131015 Acido Bórico PA-ACS-ISO 182107 Acido Clorhídrico 0,05 mol/l (0,05N) SV 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 122726 Cobre II Sulfato anhidro PA 121085 Etanol 96% v/v PA 9.4.2. Calibrado: inyectar en el cromatógrafo una cantidad conocida de la solución patrón y calcular los factores de respuesta.

9. RELACION GLUCOSA-FRUCTOSA 9.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación de glucosa y fructosa por cromatografía de líquidos de alta eficacia con detector de índice de refracción. 9.2. Material y aparatos. 9.2.1. Equipos de filtración de muestra y disolventes para eliminar partículas superiores a 0,5 mm. 9.2.2. Cromatógrafo de líquidos equipado con detector de índice de refracción y registrador. 9.2.3. Columna Sugar-Pack u otra columna que permita la separación de glucosa y fructosa. 9.2.4. Horno para columna. 9.3. Reactivos. 124559 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódico Cálcica PA 131074 Agua PA-ACS 212236 Agua Desionizada QP 121211 Calcio Acetato x-hidrato PA 142728 D (-)-Fructosa (F.Eur., BP, USP) PRS-CODEX 121341 D(+)-Glucosa PA 9.3.1. Soluciones patrón de Glucosa y Fructosa al 10% (p/v). Preparar ambas soluciones disolviendo 10 g de D (-)-Fructosa (F.Eur., BP, USP) PRSCODEX y D(+)-Glucosa PA en 100 ml de Agua PAACS. 9.4. Procedimiento. 9.4.1. Condiciones cromatográficas orientativas para la columna Sugar-Pack: Fase móvil: Solución de 20 mg/l de Calcio Acetato x-hidrato PA o Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódico Cálcica PA en Agua Desionizada QP y Agua PA-ACS. Flujo : 0,4-0,5 ml/min. Temperatura del horno : 90-95° C.

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171327 Fenolftaleína solución 1% RE Papel Tornasol 131532 Potasio Sulfato PA-ACS-ISO 171617 Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS 141625 Selenio metal polvo PRS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 171759 Verde de Bromocresol indicador RE-ACS 10.3.1. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 10.3.2. Catalizador de selenio. Mezclar bien pulverizados 80 g de Potasio Sulfato PA-ACS-ISO, 20 g de Cobre II Sulfato anhidro PA y 5 g de Selenio metal polvo PRS. 10.3.3. Fenolftaleína solución 1% RE y Papel Tornasol. 10.3.4. Indicador: Pesar 105 mg de Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS y 150 mg de Verde de Bromocresol indicador RE-ACS y disolver a 100 ml con Etanol 96% v/v PA. 10.3.5. Solución de Acido Bórico al 1%. Pesar 10 g de Acido Bórico PA-ACS-ISO, disolver con Agua PA-ACS, añadir 10 ml del indicador (10.3.4.) y enrasar a 1 litro con Agua PA-ACS. 10.3.6. Solución de Sodio Hidróxido al 40%. Disolver Sodio Hidróxido 97% lentejas PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS hasta la concentración deseada. 10.3.7. Acido Clorhídrico 0,05 mol/l (0,05N) SV. 10.4. Procedimiento. Poner en el matraz Kjeldahl 5-10 ml de zumo de uva y añadir 1 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. Evaporar hasta consistencia siruposa. Añadir 10 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y 7 g de catalizador (10.3.2.), continuar calentando primero lentamente y después enérgicamente hasta decoloración, proseguir unos minutos más. Si es necesario se van añadiendo nuevas dosis de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO de 5 en 5 ml. Enfriar el matraz a temperatura ambiente, adicionar unas gotas de Fenolftaleína solución 1% RE y llevarlo al aparato de destilación. En un vaso cilíndrico de unos 200 ml añadir 25 ml de Acido Bórico PA-ACSISO (10.3.5.). Añadir al matraz solución de Sodio Hidróxido (10.3.6.) en cantidad suficiente para viraje de la Fenolftaleína solución 1% RE. Conectar el aparato de destilación con el generador de vapor de agua y comenzar el arrastre del Amoníaco recogiendo el destilado en la solución de Acido Bórico (10.3.5.). Después de quince-veinte minutos, comprobar con Papel de Tornasol si una gota del destilado no acusa reacción alcalina. En este caso separar el vaso y proceder a la valoración. Valorar con Acido Clorhídrico 0,05 mol/l (0,05N) SV (10.3.7). 10.5. Cálculo. El contenido en nitrógeno expresado en mg/l vendrá por la siguiente fórmula:

700 (V1- V0) Nitrógeno (mg/l) = ––––––––––––– V Siendo: V = Volumen, en ml, utilizados de muestras. V1 = Volumen, en ml, de solución de ácido clorhídrico empleado en la valoración. V0 = Volumen, en ml, de solución de ácido clorhídrico empleado en el blanco. 10.6. Observaciones. Para efectuar el procedimiento Kjeldahl podrán utilizarse sistemas automáticos o semiautomáticos, adaptándose a las especificaciones del equipo. 10.7. Referencias. Recueil des Methodes Internationales d’Analyse des Vins. O. I. V. A. (40). 1969.

11. ETANOL 11.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación del etanol por cromatografía gaseosa. 11.2. Material y aparatos. 11.2.1. Cromatógrafo de gases equipado con detector de ionización de llama. 11.2.2. Columna cromatográfica. Columna de 2 m de longitud y 2 mm de diámetro interno, relleno de Porapak Q 80-100 mallas o cualquier otra columna que permita la separación y cuantificación del etanol. 11.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 351085 Etanol 96% v/v CG 354457 2-Propanol CG 11.4. Procedimiento. 11.4.1. Condiciones cromatográficas: Las condiciones cromatográficas orientativas para la columna de Porapak son: Gas portador nitrógeno 35 ml/min.; temperatura del horno: 130° C; temperatura del inyector y del detector: 180° C. 11.4.2. Calibrado. 11.4.2.1. Patrón interno: Solución al 10% (v/v) de 2-Propanol CG en Agua PA-ACS 11.4.2.2. Solución patrón: Preparar una solución de Etanol 96% v/v CG-Agua PA-ACS que contenga el porcentaje de Etanol que se supone tiene la muestra. 11.4.2.3. Solución de calibrado: A 100 ml de la solución patrón (11.4.2.2.) se le ha de añadir 1 ml de la solución del patrón interno (11.4.2.1.) y se inyecta 1 microlitro en el cromatógrafo. 11.4.2.4. Muestra problema: A 100 ml de la muestra añadir 1 ml de la solución patrón interno (11.4.2.1.) e inyectar 1 microlitro en el cromatógrafo.

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11.5. Cálculos. Calcular el factor de respuesta y la concentración de etanol en la muestra, aplicando las fórmulas siguientes: Ci x Ap Factor de respuesta (FR) = ––––––––– Ai Concentración en la muestra Aim (% en volumen) = FR x ––––––– Apm Siendo: Ci = Porcentaje en volumen del etanol en la solución patrón. Ap = Area del patrón interno en la solución patrón. = Area del etanol en la solución patrón. Ai Aim = Area del etanol en la muestra problema. Apm = Area del patrón interno en la muestra problema. 11.6 Observaciones. La determinación de etanol se efectuará inmediatamente después de la apertura del envase. 12. INDICE DE FORMOL 12.1. Principio. Valoración de la acidez de los compuestos formados por la reacción del formaldehído con los aaminoácidos. 12.2. Material y aparatos. pH metro. 12.3. Reactivos. 131328 Formaldehído 36,5-38% p/v estabilizado con metanol PA-ACS 141076 Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS 182155 Sodio Hidróxido 0,25 mol/l (0,25N) SV 12.3.1. Sodio Hidróxido 0,25 mol/l (0,25N) SV. 12.3.2. Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS. 12.3.3. Solución de Formaldehído. Llevar el Formaldehído 36,5-38% p/v estabilizado con metanol PA-ACS, a pH 8,1 mediante la solución de Sodio Hidróxido 0,25 mol/l (0,25N) SV (12.3.1.), utilizando el pH-metro. Comprobar cada hora. 12.4. Procedimiento. Poner 25 ml de zumo de uva en un vaso de precipitados y neutralizar con Sodio Hidróxido 0,25 mol/l (0,25N) SV (12.3.1.) hasta pH 8,1, utilizando el pH-metro. Añadir 10 ml de la solución de Formaldehído (12.3.3.) y mezclar. Al cabo de un minuto efectuar la valoración potenciométrica de la solución problema con la solución de Sodio Hidróxido 0,25 mol/l (0,25N) SV hasta pH 8,1. Si se hubieran utilizado más de 20 ml de la solución de Sodio Hidróxido 0,25 mol/l (0,25N) SV, deberá realizarse de nuevo la valoración empleando 15 ml de solución de Formaldehído, en lugar de 10 ml. Si la muestra contiene Anhídrido Sulfuroso, añadir algunas gotas de Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS antes de la neutralización. 12.5 Expresión de los resultados. El índice de formol de la muestra analizada es igual a la cantidad de solución alcalina utilizada en la valoración expresada en ml de sodio hidróxido 0,1N y que corresponden a 100 ml de zumo de uva. 12.6. Referencias. Federation Internationale des Producteurs de Jus de Fruits. Analyses F.I.P.J.F. No. 30 Año 1984. 13. PROLINA 13.1. Principio. Determinación cuantitativa de la prolina por reacción con ninhidrina en medio ácido. 13.2. Material y aparatos. 13.2.1. Tubos de ensayo con tapón de rosca. 13.2.2. Espectrofotómetro o colorímetro que permita efectuar lecturas a 517 nm. 13.3. Reactivos. 131030 Acido Fórmico 98% PA-ACS 131074 Agua PA-ACS 141897 Eter mono-Metílico del Etilenglicol PRS 132362 Ninhidrina PA-ACS 131090 2-Propanol PA-ACS-ISO 13.3.1. Ninhidrina al 3% en Eter mono-Metílico del Etilenglicol PRS 13.3.2. Acido Fórmico 98% PA-ACS 13.3.3. 2-Propanol PA-ACS-ISO-Agua PA-ACS 1:1 (v/v). 13.4. Procedimiento. Diluir la muestra hasta que contenga de 5 a 50 mg/l de prolina. Tomar 0,5 ml de muestra diluida e introducirla en un tubo de ensayo con tapón de rosca, añadir 0,25 ml de Acido Fórmico 98% PAACS y 1 ml de solución de Ninhidrina al 3%. Cerrar herméticamente el tubo e introducirlo en un baño de agua hirviendo durante catorce o quince minutos, añadiendo mientras se enfría 5 ml de solución de 2-Propanol PA-ACS-ISO- Agua PA-ACS 1:1 (v/v). A continuación efectuar la lectura de la absorción a 517 nm después de cinco minutos y antes

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de treinta minutos. Efectuar un blanco siguiendo el procedimiento anterior, pero usando 0,5 ml de Agua PA-ACS en vez de la solución problema. 13.5. Interpretación de los resultados. Calcular el contenido en prolina por comparación con una curva patrón que comprenda concentraciones entre 5 y 50 mg/l. 13.6. Referencias. C.S. Dugh J. of Food Science 34 (1969). 228. 14. ACIDO SORBICO 14.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación del ácido sórbico por cromatografía de líquidos de alta eficacia y detección en ultravioleta a 230 nm. 14.2. Material y aparatos. 14.2.1. Equipos de filtración de muestra y de solventes, para eliminar partículas superiores a 0,5 mm. 14.2.2. Cromatógrafo de líquidos equipado con detector de ultravioleta de longitud de onda variable y registrador. 14.2.3. Columna C-18 de 250x4,6 mm de 10 mm o similar. 14.3. Reactivos. 141055 Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX 131074 Agua PA-ACS 261091 Metanol HPLC 122333 di-Potasio Hidrógeno Fosfato 3-hidrato PA 131509 Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO 14.3.1. Solución patrón de 50 mg/l de Acido Sórbico (USP-NF) PRS-CODEX en Metanol HPLC. 14.3.2. Solución tampón de fosfatos de pH = 6,6. Disolver 2,5 g de di-Potasio Hidrógeno Fosfato 3-hidrato PA (K2HPO4.3H2O) y 2,5 g de Potasio diHidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO (KH2PO4) en un litro de Agua PA-ACS. Filtrar esta solución con (12.4.1.). 14.3.3. Metanol HPLC. 14.4. Procedimiento. 14.4.1. Condiciones cromatográficas orientativas: Fase móvil: Metanol HPLC-tampón fosfato 10:90 (v/v). Flujo : 1 ml/min. 14.4.2. Calibrado: Inyectar en el cromatógrafo entre 10 y 20 ml de la solución patrón (14.3.1.) y calcular el factor de respuesta.

Co Factor de respuesta (F) = ––––– Ap Siendo: Co = Concentración en mg/l de ácido sórbico. Ap = Area del pico en el cromatograma de la solución patrón. 14.4.3. Determinación: Poner 10 ml de zumo de uva en un matraz de 50 ml y enrasar con Metanol HPLC. Homogeneizar. Filtrar con 14.2.1. e inyectar entre 10 y 20 µl en el cromatógrafo. 14.5. Cálculos. El contenido en ácido sórbico expresado en mg/l se obtendrá mediante la siguiente fórmula: Acido Sórbico (mg/l) = F x A1 x f Siendo: F = Factor de respuesta. A1 = Area del pico del ácido sórbico en la muestra. f = Factor de dilución de la muestra. 14.6. Observaciones. La sensibilidad puede aumentarse efectuando lecturas a 250 nm. 14.7. Referencias. T. Stijve and Hischenhuber-Deutsche Lebensmittel-Rundschau 80, Jahrf/Heft 3/1984. 15. ACIDO BENZOICO 15.1 Principio. Separación, identificación y cuantificación del ácido benzoico por cromatografía de líquidos de alta eficacia y detección en el ultravioleta a 230 nm. 15.2. Material y aparatos. Como en 14.2. 15.3. Reactivos. 121014 Acido Benzoico PA 131074 Agua PA-ACS 261091 Metanol HPLC 122333 di-Potasio Hidrógeno Fosfato 3-hidrato PA 131509 Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO 15.3.1. Solución patrón de Acido Benzoico PA en Metanol HPLC de 50 mg/l. 15.3.2. Como en 14.3.2. 15.3.3. Como en 14.3.3. 15.4 Procedimiento. Como en 14.4., siendo en este caso Co la concentración en mg/l de Acido Benzoico en la solución patrón (15.3.1.).

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15.5. Cálculos. El contenido en ácido benzoico expresado en mg/l se obtendrá mediante la siguiente fórmula: Acido benzoico (mg/l) = F x A1 x f Siendo: F = Factor de respuesta. A1 = Area del pico del ácido benzoico en la muestra. f = Factor de dilución de la muestra. 15.6. Observaciones. La sensibilidad puede aumentarse efectuando lecturas a 217 nm. 15.7. Referencias. Como en 14.7. 16. HIDROXIMETILFURFURAL 16.1 Principio. Separación, identificación y cuantificación del hidroximetilfurfural por cromatografía de líquidos de alta eficacia y detección en el ultravioleta a 285 nm. 16.2. Material y aparatos. 16.2.1. Equipos de filtración de muestra y de solventes, para eliminar partículas superiores a 0,5 µm. 16.2.2. Cromatógrafo de líquidos equipado con detector ultravioleta de longitud de onda variable y registrador. 16.2.3. Columna C-18 de 200 x 4,6 mm de 5 µm o similar. 16.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS Hidroximetilfurfural 261091 Metanol HPLC 16.3.1. Solución patrón: Solución de 20 mg/l de Hidroximetilfurfural recientemente destilado en Metanol HPLC. 16.4. Procedimiento. 16.4.1. Condiciones cromatográficas orientativas: Fase móvil: Agua Destilada y Desionizada. tiempo de retención aproximado: 7 minutos. Flujo 1 ml/min. 16.4.2. Calibrado: Inyectar en el cromatógrafo 20 µl de la solución patrón (16.3.1.) y calcular el factor de respuesta. Co Factor de respuesta (F) = –––––– Ap 17. CENIZAS 17.1 Principio. Incineración del residuo obtenido tras la evaporación del zumo de uva realizada de manera que se puedan obtener todos los cationes (excepto amonio) en forma de carbonatos y otras sales minerales anhidras. 17.2. Material y aparatos. 17.2.1. Cápsulas de platino o cuarzo, de unos 80 mm de diámetro, con fondo plano. 17.2.2. Baño de agua y arena. 17.2.3. Horno eléctrico regulable. 17.2.4. Balanza analítica con sensibilidad de 0,1 mg. 17.3. Procedimiento. Poner 25 ml de zumo de uva en cápsula tarada. Evaporar con precaución en baño de agua (17.2.2.) hasta consistencia siruposa. Añadir al residuo unas gotas de aceite de oliva, calentar lentamente en baño de arena (17.2.2.), hasta que la mayor parte de la sustancia orgánica esté carbonizada. Introducir la cápsula en el horno (17.2.3.) a 525° C hasta que el residuo esté blanco (generalmente a las seis u ocho horas). Enfriar enseguida la cápsula en un desecador (unos treinta minutos) y pesar rápidamente. Puede, ocurrir, a veces, que el carbono no se quema completamente. En este caso, humidificar las cenizas con Agua PA-ACS, evaporar de nuevo y calcinar. Si fuera necesario, repetir esta operación varias veces. 17.4. Cálculos. El contenido en cenizas, expresado en gramos por litro, vendrá dado por la siguiente fórmula: Cenizas (g/l) = 40 x P Siendo: Co = Concentración, en mg/l, de hidroximetilfurfural. Ap = Area del pico en el cromatograma de la solución patrón. 16.4.3. Determinación: Inyectar en el cromatógrafo 20 µl de la muestra filtrada. 16.5. Cálculos. El contenido en hidroximetilfurfural expresado en mg/l se obtendrá mediante la siguiente fórmula: Hidroximetilfurfural (mg/l) = F x A1 x f Siendo: F = Factor de respuesta A1 = Area del pico de HMF en la muestra f = Factor de dilución de la muestra.

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Siendo: P = Peso en g de las cenizas contenidas en 25 ml de zumo de uva. 17.5. Observaciones. Un ligero color marrón rojizo de las cenizas, posiblemente de Fe2O3 es aceptado y no requiere un posterior tratamiento. 17.6. Referencias. Federation International des Producteurs de Jus de Fruits. Método N° 9. Año 1962. 18. MATERIAL MINERAL INSOLUBLE EN ACIDO CLORHIDRICO AL 10% 18.1. Principio. Tratamiento de las cenizas con ácido clorhídrico al 10%, en las condiciones que se especifica en el método. 18.2. Material y aparatos. 18.2.1. El mismo que en (17.2.). 18.2.2. Papel de filtro, sin cenizas, de porosidad media o crisol filtrante número 3. 18.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131459 Plata Nitrato PA-ACS-ISO 18.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 18.3.2. Solución de Acido Clorhídrico al 10% (p/p). 18.3.3. Solución de Plata Nitrato de 100 g/l. Disolver Plata Nitrato PA-ACS-ISO con Agua PAACS hasta la concentración deseada. 18.4. Procedimiento. Añadir a las cenizas totales en la misma cápsula que se ha utilizado para su preparación, de 15 a 25 ml de la solución de Acido Clorhídrico (18.3.2.). Llevar la cápsula y mantener a ebullición durante diez minutos. Recubrir la cápsula con vidrio de reloj, para impedir cualquier proyección. Dejar enfriar y filtrar el contenido de la cápsula a través del papel del filtro o crisol (18.2.2.). Lavar el papel de filtro o crisol con Agua PA-ACS hasta que las aguas de lavado estén exentas de Acido Clorhídrico, lo que se comprueba con la solución de Plata Nitrato (18.3.3.). Evaporar cuidadosamente e incinerar en el horno regulado a 525° C durante una hora. Dejar enfriar la cápsula o el crisol y pesar con una precisión de 0,001 g. Repetir las operaciones de incineración hasta que la diferencia de masa entre dos determinaciones sucesivas sea inferior a 0,001 g.

18.5. Cálculos. El contenido en cenizas insoluble en ácido, expresadas en mg/l, vendrá dado por la siguiente expresión: Cenizas insolubles mg/l = (P1-P0) x 40 Siendo: P0 = Peso, en mg, de la cápsula vacía o el crisol vacío. P1 = Peso, en mg, de la cápsula o crisol con las cenizas insolubles en ácido. 18.6. Referencias. Instituto de Racionalización y Normalización del Trabajo, UNE 34-096-81. 19. FOSFORO TOTAL 19.1. Principio. Transformación de los compuestos fosforados y posterior valoración espectrofotométrica como fosfomolibdovanadato. 19.2. Material y aparatos. 19.2.1. Espectrofotómetro o colorímetro de efectuar lecturas a 400 nm. 19.2.2. Cápsula de platino, cuarzo o similar. 19.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131134 Amonio Molibdato 4-hidrato PA-ACS-ISO 122352 Amonio meta-Vanadato PA 131509 Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO 19.3.1. Solución patrón de fosfatos. Disolver 0,2397 g de Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACSISO (KH2PO4), desecado previamente en estufa durante dos horas a 105° C, en Agua PA-ACS y enrasar a 250 ml. 19.3.2. Solución de Amonio Molibdato. Disolver 60 g de Amonio Molibdato 4-hidrato PA-ACS-ISO en 900 ml de Agua PA-ACS caliente, enfriar y enrasar a 1 litro. 19.3.3. Solución de Amonio meta-Vanadato. Disolver 1,5 g de Amonio meta-Vanadato PA en 690 ml de Agua PA-ACS caliente, añadir 300 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO, enfriar y enrasar a 1 litro. 19.3.4. Solución de metamolibdovanadato. Añadir lentamente la solución de Amonio Molibdato (19.3.2.) sobre la solución de Amonio meta-Vanadato (19.3.3.), agitando. Conservar la solución en frascos de polietileno.

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19.3.5. Solución de Acido Clorhídrico. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS en (1 + 3) (v/v). 19.3.6. Solución de Acido Clorhídrico. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS en (1 + 9) (v/v). 19.4. Procedimiento. 19.4.1. Curva de calibrado. A partir de la solución patrón (19.3.1.) preparar una serie de soluciones que contengan 0,00; 0,05; 0,10; 0,15; 0,20; 0,25; 0,30 y 0,35 mg de P2O5/10 ml respectivamente. A continuación poner alícuotas de 10 ml de cada solución en matraz aforado de 50 ml. Rápidamente añadir a cada matraz 5 ml del reactivo de Metamolibdovanadato (19.3.4.), mezclar, enrasar y tapar. Dejar reposar al menos treinta minutos. Efectuar las lecturas de los patrones frente a la solución 0,00 antes de una hora, a 400 nm. Representar gráficamente concentraciones frente a absorbancias leídas. 19.4.2. Preparación de la muestra. Tomar 25 ml de zumo de uva y obtener las cenizas según método oficial número 17. Disolver las cenizas en 10 ml de solución de Acido Clorhídrico (19.3.5.) y evaporar en baño de agua. Disolver el residuo obtenido en 10 ml de solución de Acido Clorhídrico (19.3.6.) calentar en baño maría y transferir a matraz de 100 ml, enfriar y enrasar con Agua PA-ACS. Agitar y filtrar para eliminar las materias insolubles presentes. 19.4.3. Determinación. Tomar 10 ml de filtrado y continuar como en la curva de calibrado (19.4.1.). Si el contenido de P2O5 en las cenizas es superior a 3,5 mg, llevar a matraz aforado superior a 100 ml o efectuar diluciones hasta que el contenido de P2O5 en la alícuota sea menor a 0,35 mg. 19.5. Cálculos. El contenido en mg de P2O5 en 100 ml de muestra se obtendrá mediante la curva de calibrado, teniendo en cuenta las diluciones efectuadas. Para expresar el resultado como mg de P en 100 ml de muestra, multiplicar el resultado anterior por 0,437. 19.6. Referencias. Official Methods of Analysis of the AOAC, 14ª edición, 1984. 20. SULFATOS 20.1. Principio. Previa eliminación del dióxido de azufre por ebullición, se precipitan los iones sulfato como Bario Sulfato, se calcina y se pesa. 20.2. Material y aparatos. 20.2.1. Matraz Erlenmeyer de 500 ml provisto de ampolla con llave de 100 ml y tubo de desprendimiento de vapor, atravesando ambos el tapón. El matraz se coloca sobre disco metálico de 15 cm de diámetro con abertura circular de 8 cm de diámetro. 20.2.2. Baño de agua y plancha caliente. 20.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 182108 Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) SV 131074 Agua PA-ACS 131182 Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO 131459 Plata Nitrato PA-ACS-ISO 20.3.1. Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) SV. 20.3.2. Bario Cloruro. 100 g de Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO en 1.000 ml de Agua PAACS. 20.3.3. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 20.4. Procedimiento. 20.4.1. Eliminación del dióxido de azufre del zumo de uva. Introducir en el Erlenmeyer del aparato descrito 50 ml de Agua PA-ACS y 1 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. Hervir esta solución para eliminar el aire del aparato. Introducir 100 ml de zumo de uva por la ampolla de llave evitando que la ebullición se pare durante esta adición. Continuar la ebullición hasta reducir el volumen del líquido a unos 100 ml eliminando todo el dióxido de azufre. 20.4.2. Precipitación de Bario Sulfato. Llevar el residuo de la evaporación anterior a un vaso de 400 ml, enjuagando el matraz con la cantidad de Agua PA-ACS suficiente para llevar el volumen total a 200 ml. Añadir 5 ml de Acido Clorhídrico 2 mol/l (2N) SV y llevar a ebullición. Adicionar gota a gota 10 ml de solución de Bario Cloruro, con la precaución de no parar la ebullición y dejar reposar en caliente, colocando el vaso sobre placa a 60°C durante cuatro horas y en baño de agua hirviendo durante dos horas. En el caso de pequeñas cantidades de precipitado, se recomienda un segundo reposo en frío durante 12 horas. Filtrar por filtro sin cenizas, lavar el vaso y precipitado con Agua PAACS caliente hasta que no dé reacción con Plata Nitrato PA-ACS-ISO, llevar el filtro cuidadosamente plegado a crisol de porcelana tarado, desecar, calcinar y, después de enfriar en un desecador, pesar. 20.5. Cálculos. Calcular el contenido de sulfatos expresado en meq/l o en g/l de potasio sulfato con una aproximación de ± 0,05 g/l. Sulfato = 85,68 P meq/l. Sulfato = 7,465 P g/l de potasio sulfato. P = peso de las cenizas en g. 20.6. Referencias. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V., A 14, 1-4. 1969.

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21. ANHIDRIDO SULFUROSO 21.1. Principio. Liberación del sulfuroso “libre” por acidificación del zumo de uva, arrastre por corriente de aire, oxidación por borboteo en agua oxigenada neutra y valoración con sosa del ácido sulfúrico formado. Liberación por ebullición moderada del sulfuroso “combinado”, que queda en el zumo de uva después de la extracción del sulfuroso “libre” y análogo tratamiento que en la determinación del sulfuroso “libre”. El sulfuroso “total” es la suma del sulfuroso “libre” y el sulfuroso “combinado”. Puede determinarse acidificando el zumo de uva y calentando y procediendo como en los dos casos anteriores. Este método es aplicable para contenidos en anhídrido sulfuroso superiores a 10 mg/l. 21.2. Material y aparatos. Como en 28 (a).2. de Métodos de Análisis de Vinos pág. 59. 21.3. Reactivos. Como en 28 (a).3. de Métodos de Análisis de Vinos pág. 59. 21.4. Procedimiento. 21.4.1. Análisis del anhídrido sulfuroso libre. En el matraz de 100 ml del aparato, poner 10 ml de zumo de uva y añadir 5 ml de Acido Fosfórico al 25%, colocando acto seguido el matraz en su sitio. Si la riqueza en SO2 del vino es pequeña, se emplea el matraz de 250 ml y se ponen 20-25 ml de uva. Sumergir el matraz en un baño de agua a 10° C. Colocar 2-3 ml de Hidrógeno Peróxido de 0,3 volúmenes y dos gotas del reactivo indicador en el matraz B y neutralizar el Hidrógeno Peróxido con Sodio Hidróxido 0,01N. Adaptar el matraz B al aparato y hacer borbotear aire (o, nitrógeno) durante 12-15 minutos. Retirar el matraz B y valorar el ácido sulfúrico formado con Sodio Hidróxido 0,01 N. 21.4.2. Análisis de anhídrido sulfuroso combinado. Después de terminar la valoración del anhídrido sulfuroso libre, colocar en el matraz B, ya limpio, los 2-3 ml de Hidrógeno Peróxido neutralizado y con las dos gotas del indicador. Calentar con llama pequeña hasta llevar a la ebullición el zumo de uva que quedó en el matraz después de la determinación anterior. Aplicar el fuego directo sobre el fondo del matraz, que descansará sobre chapa metálica perforada con orificio de 30 mm de diámetro, para evitar la pirogenación de los azúcares del zumo de uva sobre las paredes del matraz. Mantener el paso del aire o nitrógeno durante la ebullición que durará 12-15 minutos, tiempo que se considera suficiente para arrastrar todo el sulfuroso combinado y después oxidarlo. Retirar el matraz B

y valorar el ácido sulfúrico formado con Sodio Hidróxido 0,01N. 21.4.3. Anhídrido sulfurososo total. Puede determinarse por la suma del anhídrido sulfuroso libre más el anhídrido sulfuroso combinado, pero también puede determinarse directamente, actuando desde un principio con corriente de aire o nitrógeno y con calor. 21.5. Cálculos. Calcular el contenido en anhídrido sulfuroso expresado en mg/l, con una aproximación de 10 mg/l. 320 V1 Anhídrido sulfuroso = –––––––– mg/l V2 Siendo: V1 = Volumen, en ml, de NaOH 0,01N gastados en la valoración. V2 = Volumen, en ml, de muestra para el análisis. 21.6. Referencias. 21.6.1. Paul, F. “Mitteinlungen Klosternenberg”, A : 8, 21, 1958. 21.6.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. O.I.V., A17, 1-8, 1969. 22. POTASIO 22.1. Principio. El potasio se determina por fotometría de llama previa adición de litio cloruro, para evitar la ionización parcial de los metales en la llama. 22.2. Material y aparatos. 22.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 22.2.2. Material de uso normal en laboratorio. 22.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 141392 Litio Cloruro PRS 313190 Potasio solución patrón K = 1,000 ± 0,002 g/l AA 22.3.1. Potasio solución patrón K = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,907 g de 131494 Potasio Cloruro PA-ACS-ISO en un litro de Agua PA-ACS. 22.3.2. Solución de Litio Cloruro: Disolver 37,3 g de Litio Cloruro PRS en 100 ml de Agua PA-ACS. 22.3.3. Soluciones de Potasio de 0; 1; 2; 3; 5 y 7 mg/l preparadas a partir de la solución de Potasio, previa adición de la cantidad necesaria de Litio Cloruro PRS, para que el Litio se encuentre en una proporción de aproximadamente 2.000 mg/l.

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22.4. Procedimiento. Tomar 1 ml de la muestra y llevar a 200 ml con Agua PA-ACS (previa adición de la cantidad necesaria de Litio Cloruro PRS para que el Litio se encuentre en una proporción de aproximadamente 2.000 mg/l), leyéndose en fotometría de llama frente a las soluciones de referencia a 766-770 nm. 22.5. Cálculos. El contenido de potasio se calcula a partir del valor obtenido en el espectrofotómetro por comparación con la curva patrón, teniendo en cuenta la dilución efectuada. Los resultados se expresan en mg de Potasio/ 100 ml de la muestra. 22.6. Observaciones. Puede utilizarse una solución de 40 g/l de cloruro de cesio en lugar de cloruro de litio, siendo en este caso la concentración adecuada de cloruro de cesio en las disoluciones de la muestra y patrones entre 0,1-0,4%. 22.7. Referencias. 22.7.1. Federation International des Producteurs de Jus de Fruits, Método núm. 33. Año 1984. 23. SODIO 24. ARSENICO 23.1. Principio. El Sodio se determina por fotometría de llama previa adición de litio cloruro, para evitar la ionización parcial de los metales en la llama. 23.2. Material y aparatos. 23.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 23.2.2. Material de uso normal en laboratorio. 23.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 141392 Litio Cloruro PRS 313192 Sodio solución patrón Na = 1,000 ± 0,002 g/l AA 23.3.1. Sodio solución patrón Na = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 2,542 g de 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO (NaCl) en un litro de Agua PA-ACS. 23.3.2. Solución de Litio Cloruro: Disolver 37,3 g de Litio Cloruro PRS en 100 ml de Agua PA-ACS. 23.3.3. Soluciones de Potasio de 0; 1; 2; 3 y 5 mg/l preparadas a partir de la solución de Sodio, previa adición de la cantidad necesaria de Litio Cloruro PRS, para que el Litio se encuentre en una proporción de aproximadamente 2.000 mg/l. 23.4. Procedimiento. Tomar 1 ml de la muestra y llevar a 100 ml (ver 23.6.2.) con Agua PA-ACS (previa adición de la can24.1. Principio. La muestra se somete a una digestión ácida con una mezcla de ácido nítrico y sulfúrico. La determinación del arsénico se realiza por espectrofotometría de absorción atómica, con generador de hidruros. 24.2. Material y aparatos. 24.2.1. Material de uso normal en laboratorio. 24.2.2. Matraces Kjeldahl de 250 ml. 24.2.3. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con sistema generador de hidruros. 24.2.4. Lámpara de descarga sin electrodos. 24.2.5. Fuente de alimentación para lámpara de descarga sin electrodos. 24.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131669 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313171 Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA 131515 Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO 123314 Sodio Borohidruro PA 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO tidad necesaria de Litio Cloruro PRS para que el Litio se encuentre en una proporción de aproximadamente 2.000 mg/l), leyéndose en fotometría de llama frente a las soluciones de referencia a 589 nm. 23.5. Cálculos. El contenido de sodio se calcula a partir del valor obtenido en el espectrofotómetro por comparación con la curva patrón, teniendo en cuenta la dilución efectuada. Los resultados se expresan en mg de sodio/l de la muestra. 23.6. Observaciones. 23.6.1. Puede utilizarse una solución de 40 g/l de cloruro de cesio en lugar de cloruro de litio, siendo en este caso la concentración adecuada de cloruro de cesio en las disoluciones de la muestra y patrones entre 0,1 y 0,4%. 23.6.2. Efectuar las diluciones necesarias para que la muestra esté en el rango de la curva. 23.7. Referencias. 23.7.1. Federation International des Producteurs de Jus de Fruits, Método núm. 33. Año 1984. 23.7.2. Métodos Associations of Official Analytical Chemist. Ed. 1984.

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24.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 24.3.2. Disolución de Acido Clorhídrico al 32% v/v. Disolver 32 ml de Acido Clorhídrico 37% PAACS-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 24.3.3. Disolución de Acido Clorhídrico al 1,5%. Disolver 15 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACSISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 1.000 ml. 24.3.4. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 24.3.5. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 24.3.6. Disolución de Sodio Hidróxido al 1% (p/v): Pesar 1 g de Sodio Hidróxido lentejas PAACS-ISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 24.3.7. Disolución de Sodio Borohidruro al 3% (p/v): Pesar tres gramos de Sodio Borohidruro y disolverlo hasta 100 ml con la solución de Sodio Hidróxido al 1%. 24.3.8. Disolución de EDTA Sal Disódica 2-hidrato al 1%. Pesar 1 g de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO y disolverlo hasta 100 ml con Agua PA-ACS. 24.3.9. Disolución de Potasio Hidróxido al 20%. Pesar 23,5 g de Potasio Hidróxido 85% lentejas PAISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 24.3.10. Disolución de Acido Sulfúrico al 20% (v/v). Diluir 20 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO (24.3.5) con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 24.3.11. Disolución de Acido Sulfúrico al 1% (v/v). Diluir 1 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 24.3.12. Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA o disolver 0,132 g de 241151 Arsénico III Oxido EQP en 2,5 ml de Potasio Hidróxido al 20% (24.3.9.), neutralizar con Acido Sulfúrico al 20% (24.3.10.), diluir hasta 100 ml con Acido Sulfúrico 1% (24.3.11.). 24.3.13. Solución patrón de Arsénico de concentración 10 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución patrón de Arsénico (24.3.12.), en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 24.3.14. Solución patrón de Arsénico de concentración 0,1 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución de Arsénico (24.3.13.), en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 24.4. Procedimiento. 24.4.1. Preparación de la muestra: En un matraz Kjeldahl, de 250 ml introducir 2 g de muestra con 20 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 5 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. Llevar a ebullición hasta reducir el volumen a 5 ml. Dejar enfriar y disolver con Agua PA-ACS en un matraz de 50 ml la solución resultante. 24.4.2. Preparación de los patrones de trabajos y del blanco. En un matraz Kjeldahl, introducir 5 ml

de la solución de Arsénico (24.3.14.) y someterlo al mismo tratamiento que la muestra. 1 ml de la solución contiene 10 nanogramos de Arsénico. Preparar un blanco con todos los reactivos utilizados siguiendo el tratamiento dado a la muestra. 24.4.3. Condiciones del espectrofotómetro: Encender la fuente de alimentación de las lámparas de descarga sin electrodos con el tiempo suficiente para que se estabilice la energía de la lámpara. Encender el espectrofotómetro, ajustar la longitud de onda a 193,7 nm, colocando la rejilla de acuerdo con las condiciones del aparato. Encender el generador de hidruros, colocando la temperatura de la celda a 900° C, esperando hasta que se alcanza dicha temperatura. Se ajustan las condiciones del generador de hidruros según las especificaciones del aparato. Ajustar el flujo de argón de acuerdo con las características del aparato. 24.4.4. Determinación: Las determinaciones de la concentración de Arsénico se realizan por el método de adición de patrones, por medio de medidas duplicadas en el espectrofotómetro en las condiciones especificadas en (24.4.3.), añadiendo al matraz de reacción 3 ml de la solución (24.3.8.). Como patrones internos se usan 10, 20 y 50 ng de Arsénico. Lavar los matraces antes y después de cada uso, con Acido Clorhídrico 1,5% (24.3.3.). Al construir la gráfica de adición hay que descontar el valor de absorbancia del blanco obtenido en las mismas condiciones anteriores, pero añadiendo 3 ml de la solución blanco. En estas condiciones el límite de detección de la técnica es de 5 ng. 25. HIERRO 25.1. Principio. Determinación del hierro por absorción atómica previa mineralización de la muestra. 25.2. Material y aparatos. 25.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 25.2.2. Lámpara de hierro. 25.2.3. Los utilizados para el plomo en (26.2.3.), (26.2.4.) y (26.2.5.). 25.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313182 Hierro solución patrón Fe = 1,000 ± 0,002 g/l AA 25.3.1. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. 25.3.2. Acido Nítrico al 1%. Diluir Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS hasta la concentración indicada. 25.3.3. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO.

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25.3.4. Hierro solución patrón Fe = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1g de 131365 Amonio Hierro III Sulfato 12-hidrato PA en 50 ml de la solución de Acido Nítrico (1+1) y diluir hasta 1.000 ml con Acido Nítrico 1% (v/v). 25.4. Procedimiento. 25.4.1. Preparación de la muestra. Como en (26.4.1.). 25.4.2. Curva de calibrado. A partir de la solución patrón (25.3.4.), preparar una serie de soluciones conteniendo de 0,5 a 5,0 mg de hierro por litro, con Acido Nítrico al 1% (v/v). 25.4.3. Determinación. Igual que para el Plomo. Efectuar las lecturas a 248,3 nm. 25.5. Cálculos. Obtener el contenido de hierro de la muestra por interpolación a partir de la curva de calibrado y teniendo en cuenta las diluciones efectuadas. 26. PLOMO 26.1. Principio Determinación del plomo por absorción atómica previa mineralización de la muestra. 26.2. Material y aparatos. 26.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 26.2.2. Lámpara de plomo. 26.2.3. Cápsulas de platino, cuarzo o similar. 26.2.4. Baño de arena o placa calefactora. 26.2.5. Horno eléctrico (mufla) con dispositivo de control de temperatura. 26.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313189 Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA 26.3.1. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. 26.3.2. Acido Nítrico al 1% en Agua PA-ACS. 26.3.3. Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,598 g de 131473 Plomo II Nitrato PA-ACS enrasando a 1000 ml con Acido Nítrico al 1%. 26.3.4. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 26.4 Procedimiento. 26.4.1. Preparación de la muestra.- Poner 100 ml de la muestra en una cápsula de platino o cuarzo y llevarla a evaporación hasta consistencia siruposa en baño de arena. Añadir a continuación 2 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y carbonizar el residuo en el baño de arena. Seguidamente introducir la cápsula en la mufla y mantenerla durante dos horas a 450°C. Transcurrido dicho tiempo, sacarla y dejarla enfriar. Añadir 1 ml de Agua PA-ACS, evaporar en el baño de arena o placa e introducir en la mufla, repitiendo esta operación hasta obtener cenizas blancas. Un ligero color marrón rojizo en éstas, posiblemente de Fe 2O3 es aceptado y no requiere un posterior tratamiento. Disolver a continuación las cenizas con 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 2 ml de Agua PAACS, una vez disueltas filtrar y recoger en un matraz de 10 ml, lavando la cápsula y el filtro con Agua PAACS hasta el enrase. 26.4.2. Curva patrón.- Diluir alícuotas apropiadas de la solución patrón con Acido Nítrico al 1% para obtener una curva de concentraciones 2; 4; 6; 8 y 10 mg/l. 26.4.3. Determinación.- Operar según las especificaciones del aparato, usando llama de aire-acetileno. Medir las absorbancias de la muestra y patrones a 283 nm. Si la solución está muy concentrada, diluirla con Acido Nítrico al 1%. 26.5. Cálculos. Calcular el contenido en plomo, expresado en mg/l mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuenta el factor dilución. 26.6. Referencias. 26.6.1. Métodos Oficiales de Análisis de Vinos. Ministerio de Agricultura, pág. 134 (I), 1976. 27. ESTAÑO 27.1. Principio. Determinación de estaño por absorción atómica, previa digestión ácida. 27.2. Materiales y aparatos. 27.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 27.2.2. Lámpara de estaño. 27.2.3. Material de uso normal en laboratorios. 27.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 212236 Agua Desionizada QP 313180 Estaño patrón Sn = 1,000 ± 0,002 g/l AA 27.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 27.3.2. Solución de Acido Clorhídrico 7N. Diluir Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO con Agua PAACS hasta la concentración deseada. 27.3.3. Agua Desionizada 27.3.4. Estaño solución patrón Sn = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de

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141304 Estaño metal, granalla PRS en 100 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO y diluir hasta 1.000 ml con Agua Desionizada. 27.4. Procedimiento. 27.4.1. Preparación de la muestra.- Medir de 1 a 5 ml de la muestra directamente en un Erlenmeyer. Añadir 25 ml de solución de Acido Clorhídrico 7N. Llevar a ebullición y mantenerla a fuego lento durante cinco minutos. Enfriar y transferir cuantitativamente a un matraz de 50 ml, enrasando con Agua PAACS. Agitar y filtrar con papel Watman número 1. 27.4.2. Curva de calibrado.- A partir de la solución patrón de Estaño, preparar una serie de soluciones conteniendo 50; 100; 150 y 250 mg/l de Estaño. 27.4.3. Determinación.- Operar según las especificaciones del aparato usando una llama reductora de óxido nitroso-acetileno. Medir las absorbancias de la muestra y patrones a 286 nm. 27.5. Cálculos. Obtener el contenido de estaño de la muestra por interpolación a partir de la curva de calibrado.

con Acido Nítrico al 1% para obtener soluciones que contengan de 1 a 5 mg de Cobre. 28.4.3. Determinación.- Igual que para el Plomo. Medir a 324,7 nm. 28.5 Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos para la muestra, hallar mediante la curva patrón las concentraciones de Cobre de la muestra, teniendo en cuenta el factor de dilución. 29. ZINC 29.1. Principio. Determinación del zinc por absorción atómica, previa mineralización de la muestra. 29.2. Material y aparatos. 29.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 29.2.2. Lámpara de zinc. 29.2.3. Los utilizados para el Plomo en (26.2.3.), (26.2.4.) y (26.2.5.). 29.3 Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313193 Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA 29.3.1. Los utilizados para el Plomo en (26.3.1.), (26.3.2.) y (26.3.4.). 29.3.2. Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de 141783 Zinc metal, polvo PRS en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico diluido con Agua PA-ACS (1:1) y diluir a un litro con Acido Nítrico al 1% (v/v). 29.4. Procedimiento. 29.4.1. Preparación de la muestra.- Como para el Plomo (26.4.1.). 29.4.2. Construcción de la curva patrón.- Diluir partes alícuotas de la solución patrón (29.3.2.), con Acido Nítrico al 1% para obtener soluciones de 0,5 a 1 mg/l. 29.4.3. Determinación. Igual que para el plomo. La lectura se efectuará a 213,5 nm. 29.5 Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancias obtenidos, hallar las concentraciones de Zinc para la muestra, teniendo en cuenta el factor concentración o dilución.

28. COBRE 28.1. Principio Determinación del cobre por absorción atómica, previa mineralización de la muestra. 28.2. Material y aparatos. 28.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 28.2.2. Lámpara de cobre. 28.2.3. Los utilizados para el Plomo, en (26.2.3.), (26.2.4.) y (26.2.5.). 28.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313178 Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA 28.3.1. Los utilizados para el plomo en (26.3.1.), (26.3.2.) y (26.3.4.) 28.3.2. Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de Cobre puro en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 1:1. Diluir después a un litro con Acido Nítrico al 1%. 28.4 Procedimiento. 28.4.1. Preparación de la muestra.- Como para el Plomo en (26.4.1.). 28.4.2. Construcción de la curva patrón.- Diluir partes alícuotas de la solución patrón de Cobre

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Productos derivados de la uva: Vinagres

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1. EXTRACTO TOTAL 1.1. Principio. El extracto seco total se define como el conjunto de todas las sustancias que, en condiciones físicas determinadas, no se volatilizan. En estas condiciones físicas deben fijarse de tal manera que las sustancias componentes del extracto sufran el mínimo de alteración. El método está basado en una evaporación del vinagre en baño de agua con secado posterior en estufa regulable a 100 - 105°C. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Balanza con aproximación de 0,001 g. 1.2.2. Estufa con ventilación de aire regulable de 100 a 105°C. 1.2.3. Desecador de vidrio con ácido sulfúrico concentrado o gel de sílice (sílice amorfa impregnada con sustancia reveladora) como sustancia desecadora. 1.2.4. Baño de agua. 1.2.5. Cápsulas de fondo plano de 5 cm de diámetro construidas en platino, níquel o cuarzo. 1.2.6. Pipetas aforadas de 10 ml con doble enrase. 1.3. Procedimiento. Agitar la muestra y filtrar a través de un papel de filtro plegado (tipo jarabe). Medir 10 ml del vinagre filtrado en una cápsula previamente tarada. Evaporar en baño de agua hirviente durante 30 minutos y mantener en la estufa durante dos horas y media a 105°C. Dejar secar la cápsula en el interior del desecador y, una vez fría, pesar en la balanza de precisión. 1.4. Cálculo. El valor del extracto total del vinagre , en porcentaje, se hallará mediante la fórmula siguiente: Extracto total: (M - m) 10 en la que: M = masa, en gramos, de la cápsula con el extracto seco. m = masa, en gramos, de la cápsula vacía. 1.5. Referencias. 1.5.1. Instituto de Racionalización del Trabajo. Una norma española 33.101. 1.5.2. A. O. A. C. Official Methods of Analysis. 11a. ed., página 519, 30.061. 2. ACIDEZ TOTAL (Grado acético) 2.1. Principio. La acidez total se define como la totalidad de los ácidos volátiles y fijos que contiene el vinagre expresada en gramos de ácido acético por 100 ml de vinagre. La determinación se efectúa mediante una volumetría de neutralización en presencia de solución alcohólica de fenolftaleína como indicador. 2.2. Material y aparatos. 2.2.1. Bureta de 50 ml graduada en décimas de ml. 2.2.2. Pipeta aforada de 10 ml con doble enrase. 2.2.3. Matraces Erlenmeyer de 250 ml de capacidad. 2.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131325 Fenolftaleína PA-ACS 181692 Sodio Hidróxido 0,5 mol/l (0,5N) SV 2.3.1. Sodio Hidróxido 0,5 mol/l (0,5N) SV. 2.3.2. Solución indicadora de Fenolftaleína. Se disuelven 10 g de Fenolftaleína PA-ACS en Etanol 96% v/v PA y se completa a un litro con el mismo solvente. 2.4. Procedimiento. Medir 10 ml de vinagre, previamente filtrado, en un Erlenmeyer de 250 ml. Diluir con 100 o 150 ml de Agua PA-ACS recién hervida y fría hasta conseguir una solución débilmente coloreada. Añadir seis gotas de la solución indicadora de Fenolftaleína y agregar Sodio Hidróxido 0,5 mol/l (0,5N) SV contenido en la bureta gota a gota y agitando hasta viraje del indicador. 2.5. Cálculo. El valor de la acidez total o grado acético del vinagre en porcentaje se hallará mediante la fórmula siguiente: Acidez total o grado acético = a x 10 x 0,0300 en la que : a =volumen, en ml, de sodio hidróxido 0,5N. 2.6. Referencias. 2.6.1. Instituto de Racionalización del Trabajo. Una norma española 33.101. 2.6.2. A. O. A. C. Official Methods of Analysis. 11a. ed , página 520, 30. 068. 3. ACIDEZ FIJA 3.1. Principio. La acidez fija se define como la totalidad de los ácidos fijos que contiene el vinagre, expresada en gramos, de ácido acético por 100 ml de vinagre.

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3.2. Material y aparatos. 3.2.1. Baño de agua. 3.2.2. Bureta de 10 ml de capacidad graduada en décimas de ml. 3.2.3. Pipeta aforada de 10 ml con doble enrase. 3.2.4. Cápsulas de 200 ml de capacidad. 3.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131325 Fenolftaleína PA-ACS 181694 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV 3.3.1. Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV. 3.3.2. Disolución indicadora de Fenolftaleína PAACS al 1% en Etanol 96% v/v PA. 3.4. Procedimiento. Medir 10 ml de vinagre previamente filtrado y llevarlo a una cápsula de porcelana. Evaporar a sequedad en baño de agua. Añadir de 5 a 10 ml Agua PA-ACS recientemente hervida y volver a evaporar a sequedad, repitiendo esta operación cinco veces más. Añadir, aproximadamente, 180 ml de Agua PA-ACS recientemente hervida y fría, añadir seis gotas de la solución indicadora de Fenolftaleína y agregar Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV contenido en la bureta, gota a gota y agitando, hasta viraje del indicador. 3.5. Cálculo. El valor de la acidez fija del vinagre, expresado en gramos de ácido acético por 100 ml, se hallará mediante la fórmula siguiente: Acidez fija = a x 10 x 0,00600 en la que: a = volumen, en ml de sodio hidróxido 0,1N. 3.6. Referencias. 3.6.1. Instituto de Racionalización del Trabajo. Una norma española 33.101. 3.6.2. A. O. A. C. Official Methods of Analysis. 11a. ed., página 520, 30.069. 4. ACIDEZ VOLATIL 4.1. Principio. Se define convencionalmente como valor de la acidez volátil de un vinagre la diferencia entre los valores de su acidez total y fija, expresadas ambas en gramos de ácido acético por 100 ml de vinagre. 4.2. Cálculo. El valor de la acidez volátil del vinagre, expresado en gramos de ácido acético por 100 ml, se hallará mediante la fórmula siguiente:

At - Af = acidez volátil en la que : At = acidez total o grado acético, expresado en gramos de ácido acético por 100 ml. Af = acidez fija de la misma muestra de vinagre, expresada en gramos de ácido acético por 100 ml. 4.3. Referencias. 4.3.1. Instituto de Racionalización del Trabajo. Una norma española 33.101. 4.3.2. A. O. A. C. Official Methods of Analysis. 11a. ed., página 520, 30.070. 5. SULFATOS 5.1. Principio. Precipitación del bario sulfato en medio ácido. 5.2. Material y aparatos. 5.2.1. Vasos de precipitado de 250 ml. 5.2.2. Baño de agua. 5.2.3. Estufa. 5.2.4. Desecador. 5.3. Reactivos. 181021 Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV 131074 Agua PA-ACS 131182 Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO 171461 Plata Nitrato solución 0,1% p/v RE 5.3.1. Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV. 5.3.2. Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO. 5.4. Procedimiento. A 100 ml de muestra en vaso de precipitado de 250 ml añadir 2 ml de Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV, calentar a ebullición e ir añadiendo gota a gota 10 ml de Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO (1 g /100 ml de BaCl2.2H2O) sin que deje de hervir la solución. Continuar hirviendo cinco minutos manteniendo el volumen constante, añadiendo Agua PAACS caliente siempre que sea necesario. Dejar en reposo hasta que el sobrenadante esté claro (una noche es suficiente, aunque no conviene sobrepasar ese tiempo). Filtrar por papel sin cenizas de poro fino, lavar con Agua PA-ACS caliente hasta que no dé reacción con Plata Nitrato solución 0,1% p/v RE las aguas del lavado, secar, calcinar, enfriar en desecador y pesar. 5.5. Cálculo. La proporción de sulfatos = 7,465 P g/l de K2SO4 siendo; P = peso, en g, del producto de la calcinación. 5.6. Referencias. 5.6.1. A. O. A. C. Official Methods of Analysis. 11a. ed. (1970).

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5.6.2. Instituto de Racionalización del Trabajo. Una norma española 33-104-73. 6. ACETILMETILCARBINOL (ACETOINA) 6.1. Principio. Determinación cuantitativa de la acetoína por cromatografía de gases. 6.2. Material y aparatos. 6.2.1. Equipo de cromatografía de gases compuesto por: 6.2.1.1. Detector de ionización de llama. 6.2.1.2. Horno con temperatura regulable. 6.2.1.3. Registrador. 6.2.1.4. Gases: Aire-nitrógeno. 6.2.1.5. Columna: FFAP 2,5% sobre Chromosorb G (HP), añadiéndose un 0,5 de un reductor de colas (p. e., Carbowax 1.500) y de dimensiones 2 m de longitud y 1/8 de pulgada de diámetro externo de la columna. 6.2.2. Microjeringa de 1 a 10 µl. 6.3. Reactivos. Acetoína 131074 Agua PA-ACS 121884 1-Pentanol PA 121086 Etanol absoluto PA 142400 Calcio Hidróxido polvo 90% (USP) PRS-CODEX 6.3.1. Acetoína. 6.3.2. 1-Pentanol PA. 6.3.3. Etanol absoluto PA. 6.3.4. Calcio Hidróxido polvo 90 % (USP) PRSCODEX. 6.4. Procedimiento. 6.4.1. Disolución patrón. 6.4.1.1. De Acetoína: A partir de Acetoína purificada de su posible contenido en Diacetilo mediante destilación, obtener soluciones de Acetoína que cubran un rango de concentraciones de 10 a 500 mg/l en Agua PA-ACS. 6.4.1.2. De patrón interno: Añadir 2 ml de 1-Pentanol PA en 100 ml de Solución Hidroalcohólica al 50%. 6.4.2. Determinación. 6.4.2.1. Condiciones cromatográficas. Gas portador: Nitrógeno (flujo de 12,5 mg/min.). Temperatura horno: 70° C. Temperatura inyector: 180° C. Inyección : 4 o 2 µl. Patrón interno: 1-Pentanol PA. 6.4.2.2. Método operatorio. A cada una de las soluciones patrón de Acetoína preparadas en 6.4.1.1., añadir solución de 1-Pentanol PA de tal forma que a las soluciones que contengan de 10 a 50 mg/l de Acetoína se le añadan 15 µl y a las que contengan de 50 a 500 mg/l se le añadan 35 µl e inyectarlas a continuación, obteniendo la curva de calibrado (se deben efectuar dos curvas de calibrado, una que cubra el rango de 0-50 mg/l de Acetoína y otra de 50 a 300 mg/l). La inyección de la muestra puede efectuarse directamente del vinagre, una vez añadido el patrón interno, pero teniendo en cuenta que el tiempo de retención es elevado y la concentración del acético es muy grande, obliga a esperar un largo período de tiempo entre dos inyecciones sucesivas. Para evitar esta dificultad, deben neutralizarse a pH = 7 las muestras, preferiblemente con Calcio Hidróxido polvo, 90% (USP) PRS-CODEX para evitar variaciones de volumen. Téngase en cuenta que la concentración de Acetoína en el medio neutro puede variar con tiempo, por lo que la neutralización debe hacerse inmediatamente antes de inyectar en el cromatógrafo. 6.5. Cálculo. Los cromatogramas obtenidos de las distintas soluciones patrón permiten representar gráficamente la relación existente entre el cociente: Area del pico de la acetoína ––––––––––––––––––––––––––––––– Area del pico del alcohol n-amílico La relación de áreas obtenida para la muestra se compara con la curva de calibrado (concentración de acetoína /relación de áreas ), obteniéndose la cantidad de acetoína de la muestra. 6.6. Referencia. 6.1.1. E. F. Gorostiza, M. L. Gil de la Peña y M. C. Gómez Cordobés. Instituto de Fermentaciones Industriales. 7. CENIZAS 7.1. Principio. Se denominan cenizas de un vinagre el conjunto de los productos de incineración del residuo de evaporación de un volumen conocido del vinagre, realizada de manera que se puedan obtener todos los cationes en forma de carbonatos y otras sales minerales anhidras. 7.2. Material y aparatos. 7.2.1. Horno eléctrico regulable. 7.2.2. Baño de agua y baño de arena. 7.2.3. Lámpara de infrarrojo. 7.2.4. Cápsula de platino o de cuarzo de 70 mm de diámetro y 25 mm de altura, fondo plano.

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7.3. Procedimiento. Colocar 20 ml de vinagre en una cápsula tarada en balanza que aprecie 1/10 de mg. Evaporar con precaución en baño de agua hasta consistencia siruposa, continuar el calentamiento sobre baño de arena con moderación y durante una media hora. Es conveniente ayudar a la evaporación con la aplicación de rayos infrarrojos hasta carbonización. Cuando ya no se desprendan vapores, llevar la cápsula al horno eléctrico a 525 ± 25° C y con aireación continua. Después de cinco minutos de carbonización completa, sacar la cápsula del horno, dejar enfriar y añadir 5 ml de Agua PA-ACS, que se evaporan en baño de agua, y llevar de nuevo al horno a 525°C. Si la combustión de las partes carbonosas no se consigue en 15 minutos, volver a comenzar la operación de adición de Agua PA-ACS, evaporación y recalcinación. Después de enfriar en el desecador, pesar la cápsula con las cenizas. 7.4. Cálculo. Calcular el contenido en cenizas expresado en g/l. Cenizas = 50 P g/l. P = peso, en g, de las cenizas contenidas en 20 ml de vinagre. Dar los resultados con una aproxinación de 0,03 g/l. 7.5. Referencias. 7.5.1. Recueil des Méthodes Internationales d'Analyse des Vins. O. I. V., AGI, 1969. 7.5.2. Métodos Oficiales de Análisis de Vinos, Ministerio de Agricultura, 1971, pág. 66. 8. INDICE DE OXIDACION 8.1. Principio. Oxidación con potasio permanganato de las sustancias volátiles fácilmente oxidables de los vinagres. 8.2. Materiales y aparatos. 8.2.1. Matraz de destilación de 250 ml de capacidad provisto de dispositivo de entrada de vapor de agua para destilación por arrastre de vapor. 8.2.2. Matraz Erlenmeyer de 50 ml de capacidad provisto de boca esmerilada y tapón. 8.2.3. Matraz aforado de 50 ml de capacidad. 8.2.4. Refrigerante de serpentín de 25 cm de capacidad útil. 8.2.5. Calderín generador de vapor. 8.2.6. Pipeta aforada con doble enrase de 10; 20; 25 y 50 ml de capacidad.

8.2.7. Bureta de 50 ml de capacidad graduada en décimas de ml. 8.3. Reactivos. 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón Soluble RE 181528 Potasio Permanganato 0,2 mol/l (1N) SV 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 181722 Sodio Tiosulfato 1mol/l (1N) SV 8.3.1. Potasio Permanganato 0,2 mol/l (1N) SV 8.3.2. Disolución valorada de Sodio Tiosulfato 1 mol/l (1N) SV. En un matraz aforado diluir a 1:1 Sodio Tiosulfato 1 mol/l (1N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor de la solución 0,5N obtenida. 8.3.3. Disolución de Potasio Yoduro PA-ISO al 50%. Ver 8.6.2. Disolver Potasio Yoduro PA-ISO en Agua PA-ACS y ajustar a la concentración indicada. 8.3.4. Disolución indicadora de Almidón. Disolver 5 g de Almidón soluble RE en 20 ml de Agua PA-ACS y se vierte en 1 ml de Agua PA-ACS hirviente. Se continúa la ebullición durante cinco minutos y se deja enfriar antes de su empleo. Conviene guardarla en frascos esterilizados. 8.3.5. Disolución de Acido Sulfúrico al 50% en volumen. Diluir Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS. 8.4. Procedimiento. Ajustar el vinagre a 4 g por 100 de acidez total, expresada en ácido acético. Tomar 50 ml de vinagre, con la acidez debidamente ajustada, e introducir en el matraz de destilación. Pasar a su través una corriente de vapor de agua procedente del calderín descrito, a una velocidad regulada, de manera que cuando se hayan recogido 50 ml de destilado se conserven en el matraz de destilación aproximadamente 45 ml. Comprobar que la temperatura del destilado no sobrepase 25°C. Pasar los 50 ml del destilado al matraz Erlenmeyer de 500 ml. Añadir 10 ml de la solución de Acido Sulfúrico 96% PAACS y 25 ml Potasio Permanganato 0,2 mol/l (1N) SV. Mantener el matraz durante una hora en el baño de agua a 25°C. Trascurrido ese tiempo, añadir 20 ml de la disolución de Potasio Yoduro. Tapar el matraz y mezclar bien su contenido. Inmediatamente valorar el yodo liberado con la dilolución de Sodio Tiosulfato 1 mol/l (1N) SV. Simultáneamente, a la muestra de vinagre llevar, en las mismas condiciones, un blanco en que el destilado se sustituya por 50 ml de Agua PAACS. 8.5. Cálculo. El valor del índice de oxidación de hallará mediante la fórmula siguiente:

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a -b I = –––––– x grado acético del vinagre original 8 donde: I = índice de oxidación. a = volumen, en ml, de sodio tiosulfato 1 mol/l (1N) SV consumido en la valoración de la muestra en blanco. b = volumen, en ml, de sodio tiosulfato 1 moll (1N) SV consumido en la valoración de la muestra de vinagre diluido. 8.6. Observaciones. 8.6.1. Si el índice de oxidación resulta mayor que 15, ha de repetirse la determinación, usando 25 ml del vinagre ajustando a 4 grados acéticos, añadiendo 25 ml de agua. Repetir esta reducción a la mitad hasta que el índice de oxidación sea menor que 15. Calcular el índice de oxidación, teniendo en cuenta las diluciones efectuadas. 8.6.2. Esta disolución no se debe usar si presenta color amarillento. 8.7. Referencias. 8.7.1. Instituto de Racionalización del Trabajo. Una norma española 33-102-73. 8.7.2. Métodos Oficiales de Análisis de la Association of Official Agricultural Chemists de Estados Unidos (ed. 1970). 9. METANOL (Alcohol Metílico), METODO DEL ACIDO CROMOTROPICO 9.1. Principio. Como en 37.1 de los métodos oficiales de análisis de vinos. 9.2. Material y aparatos. Como en 37.2 de los métodos oficiales de análisis de vinos y matraz aforado de 25 ml. 9.3 Reactivos. 171024 Acido Cromotrópico Sal Disódica 2-hidrato RE 131032 Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131527 Potasio Permanganato PA-ACS-ISO 131698 Sodio Disulfito PA-ACS 141717 Sodio Sulfito anhidro (BP, F. Eur.) PRS-CODEX 9.3.1. Como 37.3.1 de los métodos oficiales de análisis de vinos. 9.3.2. Idem. 9.3.3. Idem. 9.3.4. Etanol 96% v/v PA. 9.4. Procedimiento. Tomar 25 ml de vinagre, destilar en destilador simple y recoger 15 ml de destilado en matraz aforado de 25 ml sumergido en baño de hielo. Añadir el Etanol 96% v/v PA suficiente para que una vez enrasado a 25 ml con Agua PA-ACS la concentración del Etanol 96% v/v PA sea del 5-6% (9.6.1.). Continuar como en 37.4. de los métodos oficiales de análisis de vinos. 9.5.Cálculo. Como en 37.5 de los métodos oficiales de análisis de vinos. 9.6. Observaciones. 9.6.1. En vinagres normales suele ser suficiente añadir 1,5% de Etanol 96% v/v PA. 9.7. Referencia. 9.7.1. Association of Official Agricultural Chemists Official Methods of Analysis,1965, página 138. 10 (a). ACIDO TARTARICO (Método cualitativo) 10 (a).1. Principio. Precipitación del ácido tartárico en forma de potasio bitartrato. 10 (a).2. Material y aparatos. 10 (a).2.1. Centrífuga. 10 (a).3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131494 Potasio Cloruro PA-ACS-ISO 121526 di-Potasio Oxalato 1-hidrato PA 131729 Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PA-ACS-ISO 10 (a).3.1. Acido Acético glacial PA-ACS-ISO. 10 (a).3.2. Solución de Precipitación. Disolver 300 g de Potasio Cloruro PA-ACS-ISO; 5,75 g de Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PA-ACS-ISO y 1,25 g de di-Potasio Oxalato 1-hidrato PA y enrasar a 1.000 ml con Agua PA-ACS. A baja temperatura la solución deposita pequeños cristales, por lo que se debe calentar ligeramente antes de emplearse. 10 (a).3.3. Etanol 96% v/v PA. 10 (a).4. Procedimiento. Poner en un tubo de centrífuga 10 ml de vinagre,

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0,4 ml de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO, 7,5 ml de la solución de Precipitación y 2 ml de Etanol 96% v/v PA. Agitar con una varilla de vidrio hasta que aparezca un enturbiamiento cristalino aproximadamente a los diez segundos. Mantener el tubo durante una hora a 8°C aproximadamente. Al cabo de este tiempo agitar enérgicanente el contenido del tubo con una varilla de vidrio, con la precaución de mezclar bien con la solución que sobrenada. Dejar en reposo aproximadamente a 8°C durante una hora. Transcurrido este tiempo centrifugar. 10 (a).5. Interpretación de resultados. La aparición de precipitado indica la presencia de ácido tartárico en la muestra. 10 (a) .6. Referencia. 10 (a).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d'Analyse des Vins. O. I. V. A-12-h.

10 (b). ACIDO TARTARICO (Método cuantitativo) 10(b).1 Principio. Aislamiento del ácido tartárico mediante columna de resinas cambiadoras de aniones y posterior valoración colorimétrica. 10(b).2. Material y aparatos. 10(b).2.1. Resinas aniónicas de basicidad fuerte (III Merck o equivalente). Las resinas deben de encontrarse en forma de acetato. Para ello deben estar al menos veinticuatro horas en contacto con una solución de ácido acético al 30 %. 10(b).2.2. Columnas de vidrio de 10-11 mm de diámetro y 30 cm de longitud con llave en la parte inferior. 10(b).3. Reactivos. 131008 Acido Acetico glacial PA-ACS-ISO 181061 Acido Sulfúrico 0,05 mol/l (0,1N) SV 181059 Acido Sulfúrico 0,5 mol/l (1N)SV 182105 Acido Sulfúrico 1mol/l (2N) SV 131066 Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 122352 Amonio meta-Vanadato PA 141339 Glicerina (USP,BP,F. Eur.) PRS-CODEX 211376 Lana de Vidrio, lavada QP Resina Lewatit MP 600 (aniónica fuerte I) 131633 Sodio Acetato anhidro PA-ACS 181691 Sodio Hidróxido 1mol/l 1N SV 121700 Sodio meta-Peryodato PA 121716 Sodio Sulfato anhidro PA 10(b).3.1. Acido Acético al 30 % (v/v).- Introducir 300 ml de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO en un matraz aforado y completar a 1.000 ml con Agua PA-ACS.

10(b).3.2. Acido Acético al 0,5 % (v/v).- Introducir 5 ml de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO en un matraz aforado y completar hasta 1.000 ml con Agua PA-ACS 10(b).3.3. Solución de Sodio Sulfato al 7,1 % (0,5N).- Disolver 71 g de Sodio Sulfato anhidro PA y completar hasta 1.000 ml con Agua PA-ACS. 10(b).3.4. Reactivo Vanádico.- Disolver 10 g de Amonio meta-Vanadato PA en 150 ml de Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV. Pasar esta solución a un matraz aforado de 500 ml, añadir seguidamente 200 ml de una solución de Sodio Acetato anhidro PA diluido al 27 % en Agua PA-ACS y llevar luego a 500 ml con Agua PA-ACS. 10(b).3.5. Acido Sulfúrico 1 mol/l (2N) SV. 10(b).3.6. Acido Sulfúrico 0,05 mol/l (0,1N) SV. 10(b).3.7. Solución de Acido Peryódico 0,1N (0,05M).- Introducir 10,696 g de Sodio meta-Peryodato PA en un matraz aforado de 1.000 ml, añadir 50 ml de Acido Sulfúrico 0,5 mol/l (1N) SV y completar hasta 1.000 ml con Agua PA-ACS. 10(b).3.8. Solución de Glicerina al 10 %.- Pesar 10 g de Glicerina (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX, bidestilada y llevarla a 100 ml con Agua PA-ACS. 10(b).3.9. Solución de Acido Tartárico de 1 g por l.- En un matraz aforado de 500 ml disolver 500 mg de Acido L(+)-Tartárico PA-ACS-ISO en 6,6 ml de Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV y enrasar con solución de Sodio Sulfato al 7,1% a 500 ml. 10(b).4. Procedimiento. 10(b).4.1. Preparación de las columnas de resinas aniónicas. Colocar en el fondo de la columna [10(b).2.2.] Lana de Vidrio lavada QP formando tapón de 2-3 mm de altura, aproximadamente, y añadir Agua PA-ACS hasta una altura de unos 5 mm sobre el tapón de Lana de Vidrio lavada QP. Añadir la Resina Lewatit® MP 600 aniónica (*) conservada en Acido Acético al 30 %, agitar esta suspensión y agregar rápidamente un volumen de unos 10 ml, evitando la formación de burbujas de aire, depositando en la superficie un tapón de Lana de Vidrio lavada QP, que se conduce con una varilla de vidrio con el fin de no remover las resinas en los sucesivos lavados anteriores en su superficie. Las resinas solamente pueden servir para una sola vez. 10(b).4.2. Aislamiento del Acido Tártarico.- Abrir la llave inferior de la columna y dar salida al Acido Acético diluido hasta unos 2-3 ml por encima del tapón superior de Lana de Vidrio lavada QP. Añadir seguidamente unos 10 ml de Acido Acético al 0,5% y vaciar hasta igual altura; efectuar estos lavados cuatro veces. Después del último lavado y con la llave cerrada, adicionar 10 ml de vinagre a analizar y señalar la altura alcanzada con un lápiz graso, abrir a continuación la llave y dejar salir vinagre goteando a razón de 1-1,5 gotas por segundo (25-30 ml por minuto) hasta un poco por encima del tapón supe-

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rior de Lana de Vidrio lavada QP. Llenar de nuevo la columna con Acido Acético al 0,5 % hasta la señal del lápiz graso y dejar salir a la misma velocidad que la vez anterior y lavar después en la misma forma siete veces con 10 ml de Agua PA-ACS. Al terminar el último lavado, cerrar la llave cuando el nivel del líquido se encuentre un poco más arriba del tapón superior de Lana de Vidrio lavada QP. Colocar un matraz receptor aforado de 100 ml. Eluir los ácidos fijados en el cambiador de aniones, mediante adiciones de solución de Sodio Sulfato [10(b).3.3.] hasta la señal trazada en el tubo. Para hacer esta operación resulta práctico colocar un frasco con solución de Sulfato unido por el cuello a la columna mediante un manguito de caucho y con unas pinzas para regular la caída del líquido en la bureta o tubo. Puestos así en comunicación los dos aparatos (frasco y bureta o tubo), abrir las pinzas del caucho de unión y la llave inferior, dejando caer el líquido a la bureta unos 10 cm de altura y sin que queden huecos vacíos. Regular la salida del líquido en la proporción de 2-3 gotas por segundo, para llenar el matraz receptor hasta el enrase. 10(b).4.3. Determinación del ácido Tartárico.- En dos matraces cónicos de 100 ml (A) y (B) introducir 20 ml del eluido. El matraz (A) sirve para la medida y el matraz (B), en el cual el Acido Tartárico es destruido por el Acido Peryódico, constituye el testigo. Añadir al matraz (A) 2 ml de Acido Sulfúrico 1 mol/l (2N) SV, 5 ml de Acido Sulfúrico 0,05 mol/l (0,1N) SV y 1 ml de Glicerina (USP,BP,F.Eur) PRS-CODEX al 10%. En el matraz (B), añadir 2 ml de Acido Sulfúrico 1 mol/l (2N) SV, 5 ml de Acido Peryódico 0,1N, esperar quince minutos y añadir 1 ml de Glicerina al 10 % para destruir el exceso de Acido Peryódico. Esperar dos minutos. Verter a continuación, agitando, primero en el matraz (B) e inmediatamente después en el matraz (A), 5 ml del Reactivo Vanádico. Disparar inmediatamente un cronómetro e introducir el contenido de dichos matraces en las cubetas de caras paralelas de 10 mm de espesor del espectrofotómetro. Al cabo de un minuto y treinta segundos medir la densidad óptica a 490 nm del líquido procedente del matraz (A) (medida) después de haber reglado el aparato para obtener la transmisión al 100 % con la cubeta conteniendo el líquido testigo (B). 10(b).5. Cálculo 10(b).5.1. Preparación de la curva patrón.Tomar 10; 20; 30; 40 y 50 ml de la solución 10(b).3.9. e introducir cada alícuota en un matraz aforado de 100 ml. Enrasar con solución de sodio sulfato al 7,1%. Las diferentes diluciones corresponden a eluidos del vinagre conteniendo 1; 2; 3; 4 y 5 g de ácido tartárico por litro. En dos matraces (A) y (B) de 100 ml poner 20 ml de cada una de estas soluciones y tratarlas idénticamente igual a los eluidos del vinagre anteriormente descrito. La representación gráfica de las densidades ópticas de estas soluciones está en función de la cantidad de ácido tartárico. Para ello es recomendable y más preciso partir de concentraciones 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 y 1 g/l de ácido tartárico. 10(b).5.2. Comprobar los valores obtenidos en el ensayo con los correspondientes de la curva patrón. 10(b).6. Referencia. 10(b).6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. A12h. (*). En el original indica “Resina cambiadora de aniones”, entendemos que es apropiada la Resina Lewatit“ MP 600 aniónica fuerte I. 11. COBRE 11.1. Principio. Determinación directa por espectrofotometría de absorción atómica. 11.2. Material y aparatos. Espectrofotómetro de absorción atómica, con lámpara específica de cobre. 11.3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 313178 Cobre solución patrón Cu = 1,000 + 0’002 g/l AA 11.3.1 Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0’002 g/l AA o preparar disolviendo 1’000 g de Cobre puro en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO (1 + 1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO previamente diluido al 1 % (v/v) con Agua PA-ACS. 11.3.2. Soluciones que contengan de 1 a 10 mg/l de Cobre.- Diluir partes alícuotas de la solución patrón con Acido Acético al 5 % en Agua PA-ACS. 11.4. Procedimiento. 11.4.1. Calibrado del aparato.- Ajustar el aparato a una longitud de onda de 324,7 nm en condiciones tales que se obtenga una respuesta lineal al introducirse las series de patrones preparados. 11.4.2. Determinación.- Efectuar la lectura directa de la absorbancia. 11.5. Interpretación de los resultados. Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos, hallar mediante la curva de patrón las concentraciones de cobre de la muestra.

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11.6. Referencias. 11.6.1 G. Charlot et D. Bezier: “Analyse quantitative minerale”. El Masson, París (1955), 749-752. 11.6.2. H.E. Parker: “Atomic Absorption Newsletter” (1963), 13 11.6.3. Standart Conditions for Zn and Cu. Analytical Methods for atomic absorbtion spectrophotometry “Perkin-Elmer”. 11.6.4. F. Rousselet: “Spectrophotometrie par absorption atomique Boudin”. Ed. Paris (1968), págs 59-144. 12. CLORUROS 12.1. Principio. Determinación directa de cloruros por potenciometría utilizando el electrodo Ag/AgCl. 12.2. Material y aparatos. 12.2.1. pH-metro con escala que permita apreciar 2 mV. 12.2.2. Agitador magnético. 12.2.3. Electrodo Ag/AgCl con una solución saturada de potasio nitrato como electrolito. 12.2.4. Microbureta graduada en 1/100 de ml. 12.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131459 Plata Nitrato PA-ACS-ISO Potasio Cloruro (máx. 0,005% de Br) 12.3.1. Solución patrón de Cloruros.- Disolver 2,1027 g de Potasio Cloruro (máx. 0,005% de bromo), para análisis, previamente desecado en Agua PA-ACS hasta 1 litro; 1 ml de esta solución contiene 1 mg de ion Cloro. 12.3.2. Solución de Plata Nitrato.- Disolver 4,7912 g de Plata Nitrato PA-ACS-ISO en Etanol al 10% (v/v) hasta un litro. Diluir Etanol 96% v/v PA con Agua PA-ACS. 1 ml de esta solución corresponde a 1 mg de ion Cloro. 12.3.3. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. 12.4. Procedimiento. 12.4.1. Determinación del potencial del punto de equivalencia.- Introducir 5,0 ml de la solución patrón de Cloruros en un vaso de 150 ml. Diluir aproximadamente a 100 ml con Agua PA-ACS y acidificar con 1,0 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACSISO (12.3.3.). Introducir los electrodos. Añadir la solución de Plata Nitrato agitando moderadamente. Los cuatro primeros ml se adicionan en fracciones de 1 ml y se leen las correspondientes lecturas en milivoltios; los dos siguientes ml, en fracciones de 0,2 ml y se continúa adicionando en fracciones de 1 ml hasta que se hayan alcanzado un total de

10 ml. Después de cada adición se debe esperar unos treinta segundos antes de hacer la correspondiente lectura en minivoltios. Los valores así obtenidos se llevan sobre un papel milimetrado en función de los correspondientes ml de solución de Plata Nitrato, y a partir del punto singular de la curva obtenida, determinar el potencial del punto de equivalencia. Para comprobar el potencial del punto de equivalencia, llevar a un vaso de 150 ml, 5,0 ml de la solución patrón de Cloruros, 95 ml de Agua PAACS y 1 ml de Acido Nítrico 70 % PA-ACS-ISO. Introducir el electrodo y valorar agitando, justamente hasta el potencial del punto de equivalencia. Repetir esta operación hasta obtener una buena concordancia con los resultados. Este control debe efectuarse antes de determinar la concentración de cloruros en cada serie de muestras a analizar. 12.4.2. Determinación.- Llevar a un vaso de 150 ml, 50,0 ml de vinagre. Añadir 50 ml de Agua PA-ACS y 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. Valorar a continuación, siguiendo el procedimiento descrito anteriormente, hasta alcanzar el potencial del punto de equivalencia. 12.5. Cálculo. La cantidad de cloruros se determina mediante las expresiones: 0,02 n en gramos de ion cloro. 0,5633 n en miliequivalentes por litro de ion cloro. 0,0329 n en gramos de sodio cloruro por litro. Siendo: n = volumen en ml de solución de plata nitrato necesario para alcanzar el potencial del punto de equivalencia. 12.6. Referencia. 12.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyse des Vins. OIV A-15j. 13. GRADO ALCOHOLICO 13.1. Principio. Separación del alcohol por destilación, oxidación del mismo por potasio dicromato y determinación del contenido por valoración del exceso de dicromato. 13.2. Material y aparatos. Como en los apartados 5(a).2.1; 5(a).2.1.1; 5(a).2.1.2; 5(a).2.1.3 y 5(a).2.1.4 de los Métodos Oficiales de Análisis de Vinos. 13.3. Reactivos. 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO

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131074 Agua PA-ACS 131368 Amonio Hierro II Sulfato 6-hidrato PA-ISO 211229 Calcio Hidróxido natural, polvo QP 171321 1,10-Fenantrolina 1-hidrato RE-ACS 131362 Hierro II Sulfato 7-hidrato PA-ACS-ISO 131500 Potasio Dicromato PA-ISO 131527 Potasio Permanganato PA-ACS-ISO 13.3.1. Solución de Potasio Dicromato.- Disolver 33,608 g de Potasio Dicromato PA-ISO en una cantidad suficiente de Agua PA-ACS y completar hasta un litro a 20° C. Esta solución corresponde al grado alcohólico internacional O.I.V. 1 ml de esta solución oxida 7,8934 mg de alcohol. 13.3.2. Solución de Amonio Hierro II Sulfato.Disolver 135 g de Amonio Hierro II Sulfato 6-hidrato PA-ISO y 20 ml de Acido Sulfúrico 96 % PA-ISO en una cantidad de Agua PA-ACS suficiente y completar hasta 1 litro, un volumen de esta solución corresponde a medio volumen de solución de Potasio Dicromato cuando está recientemente preparada. Esta solución se oxida lentamente, por lo que debe ser valorada frecuentemente en la misma que se realiza la determinación del alcohol, sustituyendo la disolución alcohólica por Agua PA-ACS. 13.3.3. Solución de Potasio Permanganato.Disolver 1,088 g de Potasio Permanganato PAACS-ISO en una cantidad suficiente de Agua PAACS y completar hasta 1 litro. 13.3.4. Solución de Acido Sulfúrico diluido.- A 500 ml de Agua PA-ACS añadir, poco a poco y agitando, 500 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. Después de enfriado, completar hasta 1 litro con Agua PA-ACS. 13.3.5. Reactivo de Hierro II orto-Fenantrolina.Disolver 0,695 g de Hierro II Sulfato 7-hidrato PAACS-ISO en 100 ml de Agua PA-ACS, añadir 1,485 g de 1,10-Fernantrolina 1-hidrato RE-ACS. Calentar para favorecer la disolución. 13.3.6. Lechada de cal 4N.- Desleír en la concentración conveniente, Calcio Hidróxido natural, polvo QP con Agua PA-ACS. 13.4 Procedimiento. 13.4.1. Destilación.- Medir 200 ml de vinagre en matraz aforado y anotar la temperatura. Introducir el vinagre en el matraz de destilación que contenga unos fragmentos de material poroso. Lavar el matraz cuatro veces con 5 ml de Agua PA-ACS. Alcalinizar con un ligero exceso de Lechada de cal 4N. Recoger el destilado en el matraz aforado de 100 ml. Enrasar con Agua PA-ACS a la misma temperatura que se midió el vinagre inicialmente. 13.4.2. En un matraz Erlenmeyer, con tapón esmerillado, de 250 ml, poner 20 ml de solución valorada en Potasio Dicromato, 20 ml de Acido Sulfúrico diluido y agitar. Añadir 10 ml de destilado exactamente medidos. Tapar el Erlenmeyer, agitar y esperar por lo menos treinta minutos, agitando de vez en cuando. 13.4.3. Valoración.- Valorar el exceso de Dicromato con la solución de Amonio Hierro II Sulfato. Cuando la coloración verde de la solución vire a verde azulado, añadir cuatro gotas de reactivo de 1,10-Fenantrolina. Detener la adición de solución de Amonio Hierro II cuando el líquido vire a marrón. A menudo se puede llegar a pasar el viraje, siendo entonces necesario volver al punto preciso adicionando solución de Potasio Permanganato. Un décimo del volumen empleado de esta solución se resta del volumen de empleado de Hierro II Sulfato. Hacer una prueba en blanco sustituyendo los 10 ml de destilado por Agua PA-ACS. 13.5. Cálculo. n’ - n Grado alcohólico = ––––––– n’ Siendo: n = volumen, en ml, gastados en la valoración. n’ = volumen, en ml, gastados en la prueba en blanco. 13.6. Observaciones. Si el grado alcohólico del vinagre es superior a 0,8°, repetir la oxidación utilizando 10 ml de destilado diluido a 1/2. 13.7. Referencia. 13.7.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des vins. O. I. V. A-2-16. 14. ARSENICO 14.1. Principio. Reducción del arsénico a arsenamina gaseosa que reacciona con plata dietilditiocarbamato (disuelto en piridina), dando un complejo de color rojo. 14.2. Material y aparatos. 14.2.1. Aparato Quickfit (figura I) 14.2.2. Espectrofotómetro o colorímetro que permita lecturas a 538 nm. 14.3. Reactivos. 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfurico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS Arsénico 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 131303 Estaño II Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO 131457 Piridina PA-ACS

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Figura 14.1

122382 Plata Dietilditiocarbamato PA 131466 Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO 131542 Potasio Yoduro PA-ISO Zinc metal, granulado, exento de Arsénico. 14.3.1. Solución de Plata Dietilditiocarbamato PA.- Disolver 1.000 g de este reactivo en 200 ml de Piridina PA-ACS. Esta solución puede conservarse algunas semanas. 14.3.2. Plomo II Acetato en algodón.- Impregnar el algodón hidrófilo en solución acuosa de Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO al 10%, escurrir el líquido en exceso y desecar al vacío. 14.3.3. Solución acuosa de Potasio Yoduro PAISO al 15%. 14.3.4. Solución acuosa de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO al 2% 14.3.5. Solución de Estaño Cloruro.- Disolver 0,33 g de Estaño II Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO en 100 cc de Acido Clorhídrico al 32% (d=1,16). Diluir Acido Clorhídrico 35 % PA-ISO con Agua PAACS. 14.3.6. Zinc metal granulado, exento de Arsénico. 14.3.7. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 14.3.8. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 14.3.9. Solución de 100 mg/l de Arsénico.

14.4. Procedimiento. 14.4.1. Preparación de la muestra.- En un matraz Kjeldahl de 500 ml, introducir 100 ml de vinagre con 100 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO, para evitar las pérdidas de As. Llevar a ebullición hasta reducir el volumen a 10 ml, añadir 5 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y continuar la ebullición adicionando Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO gota a gota hasta la total decoloración. Después de la expulsión de los vapores nitrosos dejar enfriar, diluir con 10 ml de Agua PA-ACS y calentar hasta casi sequedad. Una vez frío el matraz, trasvasar el residuo al matraz de valoración utilizando 40 ml de Agua PA-ACS. 14.4.2. Valoración.- Poner en el tubo en U, 3 ml de la solución de Plata Dietilditiocarbamato. Colocar en la parte superior del tubo intermedio del aparato el algodón impregnado en Plomo II Acetato al 10 % con objeto de retener el sulfhídrico y la fosfamina que puedan desprenderse al mismo tiempo que la arsenamina. Introducir la muestra preparada en el Erlenmeyer de 100 ml del aparato descrito y añadir sucesivamente 10 ml de la solución de Estaño II Cloruro, 5 ml de la solución de Potasio Yoduro y 1 ml de la solución de Cobre II Sulfato. Después de quine minutos añadir 5 g de Zinc granulado y cerrar rápidamente el aparato. Colocarlo en la oscuridad y dejar pasar vapores por lo menos durante una hora. 14.4.3. Preparación de la curva de patrón.- A partir de una solución 14.3.9, preparar soluciones que contengan 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8; 9; 10; 11; 12 mg de Arsénico por litro. 14.5. Cálculo. Calcular el contenido en arsénico utilizando la correspondiente curva patrón. 14.6. Observaciones. 14.6.1. Interfiere en la determinación el antimonio cuyo complejo absorbe a 510 nm. 14.6.2. La Ley de Lambert-Beer se cumple entre las concentraciones de 0 y 15 microgramos de As. 14.6.3. Este método tiene un límite de detección de 0,2 microgramos. 14.7. Referencias. 14.7.1. Vasak, V y Sedivec, V (1952) Chem. Listy 46, 341, citado por M.D. Garrido, M.L. Gil y C. Llaguno. An. Bromatología XXVI-2 (1974), 167-176. 14.7.2. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des Vins. O. I. V. A-34f. 15. ZINC 15.1. Principio. Determinación directa por espectrofotometría de absorción atómica.

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15.2. Material y aparatos. 15.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 15.2.2. Lámpara de zinc. 15.3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 131036 Acido Nítrico 60% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313193 Zinc solución patrón Zn = 1,000 + 0,002 g/l AA 15.3.1. Zinc solución patrón Zinc = 1,000 + 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de zinc puro en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico 60% PA-ISO (1+1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico al 1% (v/v) (diluir Acido Nítrico 60% PA-ISO con Agua PA-ACS). 15.4. Procedimiento. 15.4.1. Preparación de la muestra.- No se necesita preparación especial. En caso de elevada concentración, realizar una o varias diluciones hasta quedar dentro del rango de medida. 15.4.2. Determinación.- Diluir partes alícuotas de la solución (15.3.1.) con Acido Acético al 5% (diluir Acido acético glacial PA-ACS-ISO con Agua PAACS) para obtener soluciones de 0, 0,5, 1, 1,5 y 2 ppm. Aspirar las soluciones patrón y a continuación la muestra, anotando las absorbancias obtenidas a 213,8 nm. 15.5. Interpretación de resultados. Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos, hallar las concentraciones de zinc de la muestra. 15.6. Referencias. 15.6.1. H. E. Parker, Atomic Absorptions Newsletter (1963), 13. 15.6.2. Standart conditions for Zn and Cu. Analytical Methods for atomic absorption spectrophotometry “Perkin-Elmer”. 16. PROLINA 16.1. Principio. Determinación cuantitativa de la prolina por reacción con ninhidrina en medio ácido. 16.2. Material y aparatos. 16.2.1. Tubos de ensayo con tapón de rosca. 16.2.2. Espectrofotómetro o colorímetro que permita efectuar lecturas a 517 nm. 16.3. Reactivos. 131030 Acido Fórmico 98% PA-ACS 131074 Agua PA-ACS 141897 Eter mono-Metílico del Etilenglicol PRS 132362 Ninhidrina PA-ACS 131090 2-Propanol PA-ACS-ISO 16.3.1. Ninhidrina al 3% en Eter mono-Metílico del Etilenglicol PRS. 16.3.2. Acido Fórmico 98% PA-ACS. 16.3.3. 2-Propanol PA-ACS-ISO - Agua PA-ACS 1:1 (v/v) 16.4. Procedimiento. Diluir la muestra hasta que contenga de 0,05 a 0,5 milimoles/ml de prolina. Tomar 1/2 ml de muestra diluida e introducirla en un tubo de ensayo con tapón de rosca, añadir 0,25 ml de Acido Fórmico 98% PA-ACS y 1 ml de solución de Ninhidrina al 3%. Cerrar herméticamente el tubo e introducirlo en un baño de agua hirviendo durante catorce o quince minutos. Enfriarlo a unos 200°C de cinco a diez minutos, añadiendo mientras se enfría 5 ml de solución de 2-Propanol PA-ACS-ISO - Agua PA-ACS 1:1 (v/v). A continuación efectuar la lectura de la absorción a 517 nm después de cinco minutos y antes de treinta minutos. Efectuar un blanco siguiendo el procedimiento anterior, pero usando 0,5 ml de Agua PA-ACS en vez de la solución problema. 16.5. Interpretación de resultados. Calcular el contenido en prolina por comparación con una curva patrón que comprenda concentraciones entre 0,05 y 0,50 milimoles/ml. 16.6. Referencia. 16.6.1. C.S.Ough J. of Food Science 34 (3), pág. 228 (1969). 17. ACIDO ACETICO DE SINTESIS 17.1. Principio. Separación del ácido acético mediante extracción con éter iso-propílico y medida de su contenido en C14 mediante espectrofotometría de centelleo líquido. 17.2. Material y aparatos. 17.2.1. Pipeta automática de 100 µl. 17.2.2. Pipeta aforada de 10 ml. 17.2.3. Viales para conteo, de vidrio con bajo contenido en potasio, dotados de un sistema de cierre de material plástico para evitar el ataque del ácido acético. 17.2.4. Extractor líquido-líquido en continuo, con capacidad para 2 litros de muestra y 3,5 litros de disolvente orgánico. 17.2.5. Columna rectificadora de 1 cm de longitud y 3 cm de diámetro interno, rellena de anillos

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rasching (0,7 x 0,4 cm) con camisa aislante cerrada al vacío. 17.2.6. Columna de destilación fraccionada de 40 cm de longitud y 3 cm de diámetro interno, rellena de anillos rasching (0,7 x 0,4 cm) con camisa aislante cerrada al vacío y llave de salida a los 20 cm. 17.2.7. Espectrofotómetro de centelleo líquido. 17.3. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO Butil-PBD. 131314 Eter Di-iso-Propílico estabilizado con ~50 ppm de BHT PA-ACS Tolueno marcado con C14 17.3.1. Eter Di-iso-Propílico estabilizado con ~ 50 ppm de BHT PA-ACS. 17.3.2. Acido Acético glacial PA-ACS-ISO. 17.3.3. Tolueno marcado con C14. 17.3.4. Solución de 8 g/l de Butil-PBD en Tolueno para centelleo. 17.4. Procedimiento. 17.4.1. Extracción y purificación del ácido acético.- Extraer 2 litros de vinagre de 5 grados acéticos (o la cantidad correspondiente si se trata de vinagres de otra graduación) en continuo con 3,5 litros de Eter Di-iso-Propílico estabilizado con ~ 50 ppm de BHT PA-ACS durante 24 horas al menos con lo que se obtiene un extracto que debe contener aproximadamente el 70% de ácido acético presente en el vinagre. Eliminar el disolvente por destilación en la columna 17.2.5. y rectificar el residuo en la columna 17.2.5. Recoger, por la salida situada en el centro de la columna, la fracción que destila a 114° despreciando las primeras gotas de destilado. El destilado debe tener una riqueza de ácido acético mayor del 95% en peso. 17.4.2. Medidas espectrofotométricas. 17.4.2.1. Fondo: En un vial se introducen 10,5 g de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO y 10 ml del líquido del centelleo (17.3.4.). 17.4.2.2. Muestra problema: Introducir, en los viales de conteo, 10,5 g de cada destilado y 10 ml de líquido de centelleo (17.3.4.) Preparar al menos 2 viales por cada muestra problema y uno para el fondo de Acido Acético glacial PA-ACS-ISO. Cada vial se lee 300 minutos como mínimo. Una vez efectuado el conteo añadir a cada vial un volumen de patrón interno (17.3.3.) que dé aproximadamente 40.000 dpm y contar durante 4 minutos. 17.5. Cálculo. Actividad específica (dpm C14/g de C) = A1 - A2 siendo:

cpm(M) A1 = ––––––––––––––– 0,4 x E1 x g x e cpm(F) A2 = ––––––––––––––– 0,4 x E2 x g x c cpm (M+P) - cpm(M) E1 (Eficacia de la muestra) = ––––––––––––––––– dpm (P) cpm (F+P) - cpm(F) E2 (Eficacia del fondo ) = ––––––––––––––––––– dpm (P) g= gramos de la muestra o fondo en el vial. c= gramos de ácido acético por gramo de muestra o de fondo. cpm (M+P) = cuentas por minuto de la muestra más el patrón. cpm (F+P) = cuentas por minuto del fondo más el patrón. cpm (M) = cuentas por minuto de la muestra. cpm (F) = cuentas por minuto del fondo. dpm (P) = desintegraciones por minuto del patrón.

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Productos Derivados de la Uva: Orujo, Heces y Lías.

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METODOS DE ANALISIS 1. CONTENIDO ALCOHOLICO EN ORUJOS, HECES Y LIAS. 1.1. Principio. Se determina por destilación de la muestra alcalinizada y medida del contenido alcohólico por alcohometría. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Aparato de destilación.- Consta de las siguientes partes: 1.2.1.1. Matraz de destilación de 1.000 ml con rodaje esmerilado. Se puede utilizar de boca ancha o de boca estrecha. 1.2.1.2. Columna de rectificación de 20 cm de largo. 1.2.1.3. Disco metálico o de amianto con un orificio de 8 cm de diámetro. 1.2.1.4. Refrigerante de West de 40 cm de longitud con circulación rápida de agua. 1.2.2. Equipo de medida. 1.2.2.1. Alcohómetros. 1.2.2.2. Termómetros.- Graduados en grados y décimas de grado y comprendiendo el intervalo de 0 a 30°. 1.2.2.3. Probeta cilíndrica de 36 mm de diámetro y 320 mm de altura. 1.2.3. Granatorio. 1.2.4. Matraz aforado de 200 ml. 1.2.5. Vaso de precipitados. 1.3. Reactivos. 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 211234 Calcio Oxido natural, escoriforme QP 171748 Tornasol tintura RE 1.3.1. Lechada de Cal. Solución de 120 g de Calcio Oxido natural, escoriforme QP en 1.000 ml de Agua PA-ACS. 1.3.2. Acido Sulfúrico al 10%. Diluir Acido Sulfúrico al 96% PA-ISO con Agua PA-ACS. 1.4. Procedimiento. El producto a analizar es vertido en un vaso de precipitados donde es agitado para su homogeneización y al mismo tiempo para favorecer la expulsión de CO2 que pueda contener. En el caso de orujos, el muestreo se realiza de forma que la muestra sea lo más homogénea posible. Pesar 200 g de muestra homogeneizada y vaciar en el matraz de destilación, añadiendo 200 ml de Agua PA-ACS, parte de los cuales se utilizan para enjuagar el vaso que ha contenido la muestra y a continuación se añade Lechada de Cal hasta neutralizar el exceso (10 ml aproximadamente). Destilar a continuación recogiendo 200 ml, o bien las tres cuartas partes de este volumen (150 ml). Añadir al destilado más gotas de Tornasol tintura RE y comprobamos que el destilado toma color azul, de franca alcalinidad, debida al NH3 que contiene. Seguidamente, con una pipeta se adiciona Acido Sulfúrico al 10% en cantidad suficiente para que el destilado vire a rojo, añadiendo un poco más (0,5 ml) para que el medio quede francamente ácido. Completar con Agua PA-ACS el contenido de los 200 ml del matraz y se procede a una segunda destilación, como si de un vino se tratase. El destilado recogido de esta segunda destilación está ya en condiciones para determinar su grado alcohólico por aerometría y efectuar la corrección a 20° C. 1.5. Expresión de los resultados. El resultado se puede expresar: - cm3 de alcohol absoluto / 100 g de muestra. 1.6. Referencias. 1.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des Vins. O. I. V. 1969, A2 1-19. 1.6.2. De Bernadi, P.; García Viana, E. 1969. “Determinación de grado alcohólico de heces y lías”. Estación Enológica de Requena.

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Figura 1.1

Aguardientes compuestos: Whisky

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METODOS DE ANALISIS 1. OBTENCION DEL DESTILADO 1.1. Principio. Destilación de la muestra en condiciones determinadas. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Matraz de 500 a 1.000 ml de capacidad de fondo redondo y boca esmerilada. 1.2.2. Alargadera tipo Kjeldahl o similar. 1.2.3. Refrigerante tipo Dimroth, (20-30 cm de longitud) o similar. 1.2.3. Matraces aforados de 100 y 200 ml de capacidad. 1.2.5. Manta eléctrica o mechero de gas. 1.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 1.4. Procedimiento. 1.4.1. Muestras con menos de 60% de etanol. Medir 200 ml de muestra en un matraz aforado que antes de enrasar se mantiene en baño de agua de 20°C durante media hora. Enrasar con pipeta, limpiando el interior del cuello del matraz de posibles gotas adheridas con papel de filtro. Debe evitarse que queden burbujas de aire adheridas a las paredes del matraz. Pasar cuantitativamente el volumen medido al matraz de destilación, lavando tres veces consecutivas el matraz aforado de 200 ml con 20 ml de Agua PA-ACS cada vez, añadiendo las aguas de lavado al matraz de destilación. Cuando se trate de bebidas siruposas, por su gran contenido en azúcar, el lavado debe efectuarse consecutivamente con tres porciones de 50 ml de Agua PA-ACS. Proceder a la destilación. Es conveniente añadir bolitas de vidrio para facilitar la ebullición suave. En algunos casos, si se teme la formación de espuma, añadir un antiespuma inerte (como silicona). El matraz de recogida del destilado es el mismo en que se efectuó la medida. Se le añaden 10 ml de Agua PA-ACS y se dispone ligeramente inclinado, de forma que el destilado resbale por la pared sin salpicadura, dentro de un baño de hielo o agua fría a menos de 10°C. El refrigerante debe ir dotado de una alargadera que penetre por lo menos 4-6 cm en el cuello del matraz. Cuando se hayan recogido aproximadamente 190 ml, llevar el matraz tapado al baño de agua a 20°C. Cuando se alcance dicha temperatura, dentro del mismo baño, enrasarse con Agua PA-ACS mediante pipeta. Tapar el matraz e invertirlo varias veces para homogeneizar su contenido, antes de proceder a la determinación del etanol. 1.4.2. Muestras con más de 60% de etanol. El procedimiento anteriormente descrito, difiere únicamente en que la muestra se mide en matraz aforado de 100 ml, que se lava varias veces con agua hasta alcanzar un volumen de aproximadamente 230 ml. El destilado se recoge en matraz aforado de 200 ml, y se enrasa con Agua PA-ACS dentro del baño de agua a 20°C. 1.5. Observaciones. 1.5.1. El sistema de destilación debe comprobarse en ambos casos como sigue: Destilar 200 ml de una mezcla hidroalcohólica al 10% en volumen 5 veces sucesivas. Determinar en la última destilación el título alcohométrico del destilado que no debe ser menor de 9,9% en volumen de etanol. 1.5.2. La destilación debe efectuarse procurando que el flujo del destilado sea uniforme. 1.5.3. El tiempo de recogida del destilado estará comprendido entre 45 y 90 minutos. 1.6. Referencia. 1.6.1. Instituto Español de Normalización. UNE 33-112-75. 2. FURFUROL 2.1. Principio. Destilación y posterior medida espectrofotométrica de su absorción a 277 nm. 2.2. Material y aparatos. 2.2.1. Pipetas de doble enrase de 1,5 y 25 ml. 2.2.2. Matraces aforados de 100, 200 y 500 ml. 2.2.3. Espectrofotómetro ultravioleta visible. 2.2.4. Aparato de destilación por arrastre de vapor, según figura I.

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Figura 2.1

2.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol v/v 96% PA 141334 Furfuraldehído PRS 2.3.1. Disolución patrón de furfurol (furfuraldehído) de aproximadamente 116 mg/l. Destilar Furfuraldehído PRS recogiendo solamente la fracción de punto de ebullicion, 161,2°C. De este destilado tomar 1 ml, llevarlo a un matraz aforado de 100 ml enrasando con Etanol 96% v/v PA. Tomar 5 ml de esta disolución y diluir con alcohol al 50% en volumen en un matraz aforado de 500 ml. 2.3.2. Disoluciones de referencia. A partir de (2.3.1.) obtener disoluciones de 0; 1 ;2; 3; 4 y 5 mg/l de Furfuraldehído PRS. 2.4. Procedimiento. 2.4.1. Preparación de la muestra. Destilar 25 ml de la muestra en el aparato descrito en (2.2.4.) recogiendo 200 ml. Si se observa turbidez en el destilado añadir un volumen conocido de Etanol 96 % v/v PA, hasta lograr total limpidez en el destilado. 2.4.2. Determinación. Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 277 nm, comparando con las lecturas efectuadas a las disoluciones de referencia o bien calculando la absorbancia de una disolución que contenga 1 mg/l de Furfuraldehído PRS (valor aproximado 0,15). 2.5. Cálculo. El contenido en furfuraldehído se obtiene mediante la fórmula: A Furfuraldehído (mg/l) = ––– x F A’ Siendo: A = Absorbancia de la muestra. A’ = Absorbancia de una disolución que contiene 1 mg/l de furfuraldehído. F = Factor de dilución. 2.6. Observaciones. 2.6.1. La disolución de referencia se debe preparar inmediatamente antes de efectuar la medida. 2.7. Referencia. 2.7.1. Instituto Español de Normalización. UNE 33-109-74. 3. EXTRACTO SECO 3.1. Principio. Evaporación de la muestra a 105° C y pesada posterior del residuo.

3.2. Material y aparatos. 3.2.1. Estufa de aire regulable de 95°C a 105°C. 3.2.2. Cápsulas de platino o cuarzo de fondo plano, de 77 mm de diámetro interno y 18 mm de altura. 3.2.3. Desecador de vidrio que contenga ácido sulfúrico concentrado o gel de sílice como sustancias desecadoras. 3.2.4. Baño de agua. 3.2.5. Balanza analítica. 3.3. Procedimiento. Medir 25 ml de muestra a 20°C. Evaporar a sequedad, en las cápsulas correspondientes previamente desecadas y taradas, en baño de agua hirviente y mantener en la estufa a 105° C durante 30 minutos. Dejar enfriar las cápsulas en el interior del desecador y una vez frías pesar en la balanza. 3.4. Cálculo. El valor del extracto total de la muestra, en gramos por litro, se hallará mediante la fórmula siguiente: Extracto total (g/l) = ( M - m ) x 40 Siendo: M = Peso, en g, de la cápsula con el extracto seco. m = Peso, en g de la cápsula vacía. 3.5. Referencia. 3.5.1. Instituto Español de Normalización. UNE 33-106-74. 4. ESTERES 4.1. Principio. Reacción cuantitativa de los ésteres con hidroxilamina en solución alcalina, formación de ácido hidroxámico, acidificación, formación de un complejo coloreado con iones férricos y medida del color desarrollado a 525 nm. 4.2. Material y aparatos. 4.2.1. Espectrofotómetro o colorímetro que permita lecturas a 525 nm. 4.2.2. Tubos de ensayo de longitud 20 cm y diámetro interno 2,5 cm. 4.3. Reactivos. 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131318 Etilo Acetato PA-ACS-ISO 131914 Hidroxilamino Cloruro PA-ACS-ISO 141358 Hierro III Cloruro 6-hidrato, trozos PRS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO

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4.3.1. Disolución de Hidroxilamina Clorhidrato 2M. Conservar en nevera. 4.3.2. Disolución de Sodio Hidróxido 3,5N. 4.3.3. Disolución de Hidroxilamina Clorhidrato 1M en Sodio Hidróxido 1,75 N. Mezclar inmediatamente antes de su uso, volúmenes iguales del reactivo (4.3.1.) y (4.3.2.). Desechar a las seis horas. 4.3.4. Disolución de Acido Clorhídrico 4N. 4.3.5. Disolución de Hierro Tricloruro 0,37M. Disolver 50 g de Hierro III Cloruro 6-hidrato, trozos PRS en unos 400 ml de Agua PA-ACS en un matraz aforado de 500 ml. Añadir 12,5 ml de Acido Clorhídrico 4N y enrasar con agua. 4.4. Procedimiento. 4.4.1. Construcción de la curva patrón. 4.4.1.1. Solución patrón. Pesar 5 g de Etilo Acetato PA-ACS-ISO y llevar a un litro con alcohol de 50° (preparar a partir de Etanol 96% v/v PA y Agua PA-ACS). 4.4.1.2. Soluciones de 50, 100, 150, 200, 250 y 300 mg/l de Etilo Acetato. Tomar de la solución (4.4.1.1.), 2,5; 5,0; 7,5; 10,0; 12,5 y 15,0 ml introduciéndolos en matraces de 250 ml de capacidad y completar con alcohol de 50° hasta el enrase. 4.4.1.3. Solución de referencia. Tomar 4 ml de la solución (4.3.3.) y 2 ml de la disolución (4.3.4.) mezclándolas en un tubo de ensayo (4.2.2.). Mezclar y añadir 2 ml de una cualquiera de las soluciones (4.4.1.2.). Introducir en una serie de tubos de ensayo (4.2.2.), 2 ml de cada una de las soluciones (4.1.2.) y 4 ml de (4.3.3.). Agitar y dejar reaccionar entre uno y 20 minutos. Añadir 2 ml de la disolución de Acido Clorhídrico 4N y mezclar. Añadir 2 ml de la disolución de Hierro III Cloruro 0,37 M a cada uno de los matraces, tanto al de la solución de referencia como a los de las soluciones (4.4.1.2.). Efectuar las lecturas colorimétricas a una longitud de onda de 525 nm. Obtener las gráficas de calibrado mediante la representación de las diferencias de absorción de las soluciones (4.4.1.2.), respecto a la solución de referencia, en función de la concentración de Etilo Acetato. 4.4.2. Preparación de la muestra. Destilar siguiendo el procedimiento descrito en el método oficial nº 1. 4.4.3. Determinación. Introducir en un tubo (4.2.2.) 2 ml del destilado y 4 ml de disolución de Hidroxilamina Clorhidrato (4.3.3.), agitar y dejar reaccionar entre 1 y 20 minutos. Añadir 2 ml de la disolución de Acido Clorhídrico (4.3.4.) y mezclar. Añadir 2 ml de la disolución de Hierro III Cloruro (4.3.5.) Efectuar la lectura colorimétrica a 525 nm inmediatamente, tomando como blanco la solución de referencia preparada de la siguiente forma: Introducir en un tubo (4.2.2.) 4 ml de la disolución de Hidroxilamina Clorhidrato (4.3.3.) y 2 ml de la solución de Acido Clorhídrico (4.3.4.), mezclar y añadir 2 ml de destilado. Añadir 2 ml de la disolución de Hierro III Cloruro (4.3.5.) y mezclar. 4.5. Cálculo. A partir de las lecturas obtenidas se halla el contenido en ésteres expresados en etilo acetato, mediante las gráficas de calibrado. 4.6. Observaciones. 4.6.1. El mismo blanco puede ser usado para una serie de muestras de distinto contenido en ésteres, pero de semejente graduación alcohólica. 4.7. Referencias. 4.7.1. Association of Official Analytical Chemists. Edición 1975-9053-59. 4.7.2. Instituto Español de Normalización. UNE 33-111-77. 5. ALCOHOLES SUPERIORES 5.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación de los alcoholes superiores al etanol, por cromatografía de gases. 5.2. Material y aparatos. 5.2.1. Cromatógrafo de gases equipados con detector de ionización de llama. 5.2.2. Columna cromatográfica.- Columna de 4 m de longitud de 1/8” de diámetro interno rellena de Carbowax 1500 al 15% sobre Chromosorb W 80-100 mallas, lavado a los ácidos. 5.2.3. Microjeringas de 1 ml. 5.3. Reactivos. 5.3.1. Patrones cromatográficos: 351082 1-Butanol CG 354330 iso-Butanol CG 353851 2-Butanol CG 354539 2-Metil-1-Butanol CG 351079 3-Metil-1-Butanol CG 352516 4-Metil-2-Pentanol CG 351885 1-Propanol CG 5.3.2. Etanol pureza cromatográfica. 5.4. Procedimiento. 5.4.1. Condiciones cromatográficas.- Las condiciones cromatográficas orientativas son: Gas portador nitrógeno 20 ml/min., temperatura del horno 35°C, temperatura del inyector y del detector 150°C. 5.4.2. Calibrado. 5.4.2.1. Patrón interno : Solución de 5 g/l en etanol de 40° de 4-Metil-2-Pentanol.

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5.4.2.2. Solución patrón: Preparar una solución en etanol de 40° en las proporciones que se indican en la Tabla 1. 5.4.2.3. Solución de calibrado: A 10 ml de la solución patrón (5.4.2.2.) se le añade 1 ml de la solución del patrón interno (5.4.2.1.) y se inyecta 1 ml en el cromatógrafo. 5.4.3. Muestra problema.- A 10 ml de la muestra llevada a 40°C se le añade 1 ml de patrón interno (5.4.2.1.) e inyectar 1 mlitro en las mismas condiciones en que se hizo para el calibrado. 5.5. Cálculo. Una vez identificados los picos por sus retenciones relativas al patrón interno se calculan los factores de respuesta para cada uno de ellos y las concentraciones en la muestra problema aplicando las fórmulas: Ci x Ap Factor de respuesta (Fr) = –––––––– Ai Aim Concentración en la muestra (mg/l) = Fr x ––––– x f Apm Siendo: Ci = Concentración del compuesto en la solución patrón. Ap = Area del patrón interno en la solución patrón. Ai = Area del compuesto en la solución patrón. Aim = Area del compuesto en la muestra problema. Apm = Area del patrón interno en la muestra problema. f = Factor de dilución de la muestra. El contenido en alcoholes superiores vendrá dado por la suma de los valores individuales obtenidos de cada uno de ellos y se expresará en mg/100 ml de alcohol absoluto. 5.6. Referencia. 5.6.1. Association of Official Agricultural Chemists

TABLA 1 –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– Compuesto Concentración (mg/l) –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– 2-Butanol 10 1-Propanol 125 iso-Butanol 175 1-Butanol 15 2-Metil-1-Butanol 100 3-Metil-1-Butanol 300 –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– 6. METANOL 6.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación del alcohol metílico por cromatografía gaseosa. 6.2. Material y aparatos. Como en (5.2.). 6.3. Reactivos. Etanol pureza cromatográfica. Metanol pureza cromatográfica 352516 4-Metil-2-Pentanol CG

6.4. Procedimiento. 6.4.1. Condiciones cromatográficas. Como en (5.4.1.) 6.4.2. Calibrado. 6.4.2.1. Patrón interno.- Como en (5.4.2.1.). 6.4.2.2. Solución patrón.- Preparar una solución de Metanol, en Etanol a 40º C, de concentración similar a la esperada en la muestra. 6.4.2.3. Solución de calibrado.- A 10 ml de la solución patrón (6.4.2.2.) se le añade 1 ml de la solución del patrón interno (6.4.2.1.), y se inyecta 1 ml en el cromatógrafo. 6.4.3. Muestra problema. Como en (5.4.3.). 6.5. Cálculo. Como en (5.5.). 7. GRADO ALCOHOLICO 7.1. Principio. Se determina por destilación del producto y medida de la densidad del destilado por areometría. Para bebidas con un contenido en extracto seco menor o igual a 600 mg en 100 ml, se efectuará directamente, sin destilación. 7.2. Material y aparatos. 7.2.1. Aparatos de destilación como en (1.2.). 7.2.2. Alcohómetro con graduación de 0,1° de d 20/20 debidamente contrastado.

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7.2.3. Termómetro con graduación de 0,1°C. 7.2.4. Probeta transparente de 36 mm de diámetro interior y 320 mm de altura. 7.2.5. Baño termostático a 20°C. 7.3. Procedimiento. 7.3.1. Obtención del destilado.- Según método oficial nº 1 en el caso de bebidas con extracto seco, sea mayor de 600 mg/100 ml. 7.3.2. Determinación areométrica.- Limpiar y secar el alcohómetro antes de su empleo. Dejar que el alcohómetro, termómetro, probeta y muestra, alcancen en el baño termostatizado la temperatura de 20ºC. Aclarar 2 o 3 veces con la muestra la probeta que contiene el termómetro. Echar la muestra en la probeta hasta un volumen conveniente, inclinarla unos 45° para evitar la agitación y las burbujas (al introducir luego el alcohómetro, el nivel del líquido debe estar justo por debajo del borde de la probeta). Tapar la probeta con la palma de la mano, e invertirla 3 o 4 veces para igualar las temperaturas de la probeta y del líquido. Secar el líquido de la parte exterior de la probeta (no poner las manos sobre la probeta para no calentar el líquido contenido). Introducir el alcohómetro en el líquido de arriba a abajo 5 o 6 veces, de manera que alcance la misma temperatura y que se distribuya cualquier cambio de temperatura en todo el líquido. Mantener el bulbo del alcohómetro en el líquido, secar el vástago, dejarlo en reposo de modo que sólo unas pocas décimas de grados estén mojadas. Leer en el alcohómetro, luego en el termómetro. Para leer en la escala del alcohómetro situar el ojo justo debajo del plano de la superficie del líquido, levantar lentamente la cabeza manteniendo la visual perpendicular al alcohómetro, hasta que la superficie varíe de elipse a una línea recta. Anotar el punto en que esta línea intersecciona con la escala del alcohómetro, siendo ésta la lectura del alcohómetro. Levantarlo ligeramente por encima de dicha lectura y dejarlo en reposo de nuevo. Volver a leer en el alcohómetro y en el termómetro, comprobando así las primeras lecturas. Hacer la lectura del alcohómetro con aproximación de 0,05° y la del termómetro con 0,1°. Sacar el alcohómetro y secarlo. Invertir la probeta con la muestra varias veces para que se equilibre térmicamente todo el conjunto. Volver a atemperar el alcohómetro, secar el vástago y realizar nuevas lecturas en el alcohómetro y en el termómetro. Los valores calculados son válidos si tienen aproximación de 0,1 grados alcohólicos, si no fuera así, realizar lecturas adicionales y calcular la media. 7.4. Cálculo. 7.4.1. Muestras con extracto seco mayor de 600 mg en 100 ml: El grado alcohólico real es el leído en el destilado obtenido según (7.3.1.). Si en la obtención del destilado, 100 ml de muestra se destilaron hasta 200 ml, la lectura obtenida, debe ser multiplicada por 2. 7.4.2. Muestras con extracto seco menor o igual a 600 mg en 100 ml: Para obtener el grado alcohólico real, adicionar al grado alcohólico aparente (leído directamente en la muestra sin destilar) 0,2 grados alcohólicos por cada 100 mg de extracto/100 ml. 7.5. Referencia. 7.5.1. Association of Official Analytical Chemist. Edición 1980-9015-9. 8. ALDEHIDOS 8.1. Principio. Reacción de los aldehídos con sodio bisulfito. Oxidación del ácido sulfuroso con yodo y valoración del exceso de yodo con sodio tiosulfato. 8.2. Material y aparatos. 8.2.1. Bureta de 25 ml graduada en décimas de mililitro. 8.3. Reactivos 131074 Agua PA-ACS 211642 Sodio Hidrógeno Sulfito solución 40% p/v QP 182160 Sodio Tiosulfato 0,05 mol/l (0,05N) SV 182161 Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV 8.3.1. Sodio Tiosulfato 0,05 mol/l (0,05N) SV. 8.3.2. Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV. 8.3.3. Disolución de Sodio Bisulfito 0,05N. Preparar esta disolución a partir de Sodio Hidrógeno Sulfito solución 40% p/v QP y Agua PA-ACS. 8.4. Procedimiento. Poner 100 ml del destilado (obtenido según Método Oficial 1) en un matraz de 500 ml. Añadir 100 ml de Agua PA-ACS y un exceso de la disolución (8.3.3.) calculado de modo que equivalga por lo menos a 25 ml de Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV. Dejar el matraz bien tapado, durante 30 minutos agitando de vez en cuando. Añadir 50 ml de Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV. Valorar el exceso de Yodo añadido con Sodio Tiosulfato 0,05 mol/l (0,05N) SV, hasta decoloración completa. Debe hacerse simultáneamente un ensayo en blanco, para comprobar en cada serie de ensayos la estabilidad de las disoluciones de Yodo y Tiosulfato por ser tan diluidas.

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8.5. Cálculo. El contenido en aldehídos, expresado como acetaldehído, vendrá dado por la siguiente fórmula: 1,1 x 100 Aldehídos (mg/100 ml = (V2 - V1 ) x ––––––––––– de etanol absoluto) A Siendo: V1 = Volumen, en ml, de sodio tiosulfato gastado en la muestra. V2 = Volumen, en ml, de sodio tiosulfato gastado en el blanco. A = Grado alcohólico. 8.6. Observaciones. 8.6.1. La disolución de sodio bisulfito tiene mayor tiempo de estabilidad si se le añade un 10 % de alcohol. En cualquier caso esta solución es estable como máximo una semana. 8.7. Referencias. 8.7.1. Association of Official Agricultural Chemists 1980-9052. 8.7.2. Instituto Español de Normalización. UNE 33-107-74. 9. ACIDEZ VOLATIL 9.1. Principio. Se define convencionalmente como la diferencia entre los valores de la acidez total y fija, expresadas ambas en mg de ácido acético por 100 ml de alcohol absoluto. 9.2. Material y aparatos. 9.2.1. Bureta de 10 ml graduada en décimas. 9.2.2. pH-metro. 9.2.3. Cápsulas de platino o porcelana. 9.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 121086 Etanol absoluto PA 181693 Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV 9.3.1. Disolución de Sodio Hidróxido 0,01N. Diluir a 1:10 en matraz aforado Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV con Agua PA-ACS. 9.3.2. Etanol absoluto PA.

a 100°C durante 30 minutos. Disolver y transferir el residuo con varias porciones de alcohol (llevando previamente a pH 8,2) de una graduación similar a la muestra usando 50 ml de Etanol absoluto PA en total. Valorar con la disolución de Sodio Hidróxido (9.3.1.) a pH = 8,2 utilizando el pH-metro. 9.5. Cálculo. V1 x 1,2 x 100 9.5.1. Acidez total (en = –––––––––––––– mg/100 ml de etanol absoluto) A Siendo : V1 = Volumen, en ml de sodio hidróxido empleados en (9.4.1.). A = Grado alcohólico de la muestra. V2 x 1,2 x 100 9.5.2. Acidez fija (en = –––––––––––––– mg/100 ml de etanol absoluto) A Siendo: V2 = Volumen, en ml, de sodio hidróxido empleados en (9.4.2.) A = Grado alcohólico de la muestra. 9.5.3. El valor de la acidez volátil, expresado en mg de ácido acético por 100 ml de etanol absoluto, vendrá dado por la fórmula: Acidez volátil = Acidez total - Acidez fija. 9.6. Referencia. 9.6.1. Association of Official Analytical Chemists. Edición 1980-9046-9045. 10. CENIZAS (Materia mineral total) 10.1. Principio. Se denominan cenizas de un whisky, al conjunto de los productos de incineración del residuo de evaporación de un volumen conocido del whisky. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Horno eléctrico regulable. 10.2.2. Baño de agua y baño de arena. 10.2.3. Lámpara de infrarrojo. 10.2.4. Cápsula de platino o de cuarzo de 77 mm de diámetro interno y 18 mm de altura, fondo plano. 10.2.5. Balanza analítica. 10.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS

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9.4. Procedimiento. 9.4.1. Acidez Total. Valorar 50 ml de la muestra con la disolución de Sodio Hidróxido (9.3.1.), a pH 8,2 utilizando el pHmetro. 9.4.2. Acidez fija. Evaporar, al baño maría, en una cápsula (9.2.3.), 50 ml de la muestra, desecarla

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10.4. Procedimiento. Colocar 25 ml de whisky en una cápsula tarada en balanza que aprecie 1/10 de mg. Evaporar con precaución en baño de agua hasta consistencia siruposa, continuar el calentamiento sobre baño de arena con moderación y durante una media hora. Es conveniente ayudar a la evaporación con la aplicación de rayos infrarrojos hasta carbonización. Cuando ya no se desprendan vapores, llevar la cápsula al horno eléctrico a 525°C ± 25°C y con aireación continua. Después de cinco minutos de carbonización completa, sacar la cápsula del horno, dejar enfriar y añadir 5 ml de Agua PA-ACS, que se evapora en baño de agua, y llevar de nuevo al horno a 525° C. Si la combustión de las partes carbonosas no se consigue en quince minutos, volver a comenzar la operación de adición de Agua PA-ACS, evaporación y recalcinación. Después de enfriar en el desecador, pasar la cápsula con las cenizas. 10.5. Cálculo. El contenido en cenizas vendrá dado por la siguiente fórmula: Cenizas (g/l) = 40 x P Siendo: P = Peso, en gramos, de las cenizas contenidas en 25 ml de whisky. 10.6. Referencias. 10.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des Vins. O.I.V., AGI, 1969. 10.6.2. Métodos Oficiales de Análisis de Vinos, Ministerio de Agricultura, 1971, pág 66. 11. PLOMO 11.1. Principio. Determinación del plomo por A.A., previa mineralización de la muestra. 11.2. Material y aparatos. 11.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 11.2.2. Lámpara de plomo. 11.2.3. Cápsulas de platino, cuarzo o similar. 11.2.4. Baño de arena o placa calefactora con regulación de temperatura o estufa con control de temperatura en el rango de 50 a 150°C. 11.2.5. Mufla. Conveniente tenerla dentro de vitrina de extracción de humos. 11.2.6. Matraces de 10, 100 y 1.000 ml de capacidad. 11.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313189 Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA 11.3.1. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 11.3.2. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. 11.3.3. Acido Nítrico al 1% v/v en Agua PA-ACS. 11.3.4. Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,598 g de 131473 Plomo II Nitrato PA-ACS enrasando a 1.000 ml con Acido Nítrico al 1%. 11.4. Procedimiento. 11.4.1. Preparación de la muestra.- Poner 100 ml de la muestra en la cápsula (11.2.3.) y llevarla a evaporación hasta consistencia siruposa en baño de arena (11.2.4.). Añadir a continuación 2 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y carbonizar el residuo en el baño de arena o placa. Seguidamente introducir la cápsula en la mufla y mantenerla durante dos horas a 450°C, transcurrido dicho tiempo, sacarla y dejarla enfriar. Añadir 1 ml de Agua PA-ACS, evaporar en el baño de arena o placa e introducir en la mufla, repitiendo esta operación hasta obtener cenizas blancas. Un ligero color marrón-rojizo en las cenizas (posiblemente de Hierro III Oxido) es aceptado y no requiere un tratamiento posterior. Disolver a continuación las cenizas con 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 2 ml de Agua PAACS. Llevar la solución a un matraz de 10 ml, lavar la cápsula con Agua PA-ACS y añadir las aguas del lavado hasta el enrase, filtrando posteriormente. 11.4.2. Construcción de la curva patrón.- Diluir alícuotas apropiadas de la solución patrón (11.3.4.) con Acido Nítrico al 1% (v/v) para obtener una curva de concentraciones 2, 4, 6, 8 y 10 mg/l. 11.4.3. Determinación.- Operar según las especificaciones del aparato; usando llama de aire-acetileno. Medir las absorbancias de la muestra y patrones a 283 nm. Si la solución está muy concentrada diluirla con Acido Nítrico al 1%. 11.5 Cálculo. Calcular el contenido en plomo, expresado en mg/l mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuenta el factor de concentración o dilución. 11.6. Referencia. 11.6.1. Métodos Oficiales de Análisis de Vinos. Ministerio de Agricultura, pág 134 (I), 1976. 12. ZINC 12.1. Principio. Determinación del Zinc por A.A. previa mineralización de la muestra.

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12.2. Material y aparatos. 12.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 12.2.2. Lámpara de Zinc. 12.2.3. Los utilizados para el Pb en (11.2.3.), (11.2.4.), (11.2.5.) y (11.2.6.). 12.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313193 Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA 12.3.1. Los utilizados para el plomo en (11.3.1.), (11.3.2.) y (11.3.3.). 12.3.2. Zinc solución patron Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de 141782 Zinc metal , granalla PRS en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico (1:1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico del 1% (v/v). 12.4. Procedimiento. 12.4.1. Preparación de la muestra.- Como en (11.4.1.). 12.4.2. Construcción de la curva patrón.- Diluir partes alícuotas de la solución patrón (12.3.2.), con Acido Nítrico al 1% para obtener soluciones de 0,5; 1; 1,5 y 2 mg/l. 12.4.3. Determinación.- Igual que para el Plomo. La lectura se efectuará a 213,8 nm. 12.5 Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancias obtenidos, hallar las concentraciones de Zinc para la muestra, teniendo en cuenta el factor concentración o dilución. 12.6. Referencia. 12.6.1. H. E. Parker. Atomic Absorption Newsletter (1963), 13. 13. COBRE 13.1. Principio. Determinación del cobre por A.A., mineralización por cenizas a ≤ 450°C y concentración previa a la lectura con objeto de conseguir resultados suficientemente precisos. 13.2. Material y aparatos. 13.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 13.2.2. Lámpara de cobre. 13.2.3. Los utilizados para el plomo en (11.2.3.), (11.2.4.), (11.2.5.) y (11.2.6.). 13.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS

313178 Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA 13.3.1. Los utilizados para el plomo en (11.3.1.), (11.3.2.) y (11.3.3.). 13.3.2. Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de Cobre puro en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico (1:1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico del 1% (v/v). 13.4. Procedimiento. 13.4.1. Preparación de la muestra.- Como en (11.4.1.). 13.4.2. Construcción de la curva patrón.- Diluir partes alícuotas de la solución patrón (13.3.2.) con Acido Nítrico del 1% para obtener soluciones que contengan de 1 a 5 mg de cobre/l. 13.4.3. Determinación.- Igual que para el plomo. Medir a 324,7 nm. 13.5. Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos para la muestra, hallar mediante la curva patrón las concentraciones de cobre de la muestra. 13.6. Referencias. 13.6.1. H. E. Parker: “Atomic Absorption Newsletter (1963),13”. 13.6.2. F. Rousselet: “Spectrophotometrie par absorption atomique Boudin”. Ed. París (1968), pág 59-144. 14. ARSENICO 14.1. Principio. La muestra se somete a una digestión ácida con una mezcla de ácido nítrico y sulfúrico. La determinación del arsénico se realiza por espectrofotometría de absorción atómica, con generador de hidruros. 14.2. Material y aparatos. 14.2.1. Balanzas con exactitud de 0,001 g de 0,1 g. 14.2.2. Matraces aforados de 50 y 100 ml de capacidad. 14.2.3. Pipetas de doble aforo. 14.2.4. Matraces Kjedahl de 250 ml. 14.2.5. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con sistema generador de hidruros. 14.2.6. Lámpara de descarga sin electrodos. 14.2.7. Fuente de alimentación para lámpara de descarga sin electrodos. 14.2.8. Registro gráfico. 14.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131669 Acido Etilendiaminotetraacético sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO

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131037 131058 131074 313171 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO Acido Sulfúrico PA-ISO Agua PA-ACS Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA 131515 Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO 123314 Sodio Borohidruro PA 131687 Sodio Hidróxido 97%, lentejas PA-ACS-ISO 14.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO (d= 1,19 g/ml). 14.3.2. Disolución de Acido Clorhídrico 32% v/v. Disolver 32 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACSISO (d= 1,19 mg/l) con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.3. Disolución de Acido Clorhídrico 1,5% v/v. Disolver 15 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACSISO (d=1,19 mg/l) con Agua PA-ACS hasta un volumen de 1.000 ml. 14.3.4. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 14.3.5. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO (d=1,84). 14.3.6. Disolución de Sodio Hidróxido al 1%. Pesar 1 g de Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.7. Disolución de Sodio Borohidruro al 3%. Pesar tres gramos de Sodio Borohidruro y disolverlo hasta 100 ml con Sodio Hidróxido al 1%. 14.3.8. Disolución de Acido Etilendiaminotetraacético al 1%. Pesar un gramo de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACSISO y disolverlo hasta 100 ml con Agua PA-ACS. 14.3.9. Disolución de Potasio Hidróxido al 20%. Pesar 20 g de Potasio Hidróxido 85% lentejas PAISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.10. Disolución de Acido Sulfúrico al 20% (v/v). Diluir 20 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.11. Disolución de Acido Sulfúrico al 1% (v/v). Diluir 1 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.12. Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA o disolver 0,132 g de 241151 Arsénico III Oxido EQP-ACS en 2,5 ml de Potasio Hidróxido al 20% (14.3.9.), neutralizar con Acido Sulfúrico al 20% (14.3.10.), diluir hasta 100 ml con Acido Sulfúrico 1% (14.3.11.). 14.3.13. Solución patrón de Arsénico de concentración 10 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución patrón de Arsénico (14.3.12.), en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 14.3.14. Solución patrón de Arsénico de concentración 0,1 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución de Arsénico (14.3.13.), en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 14.4. Procedimiento. 14.4.1. Preparación de la muestra. En un matraz Kjeldahl, de 250 ml introducir 10 ml de muestra con 20 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 5 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. Llevar a ebullición hasta reducir el volumen a 5 ml. Dejar enfriar y disolver con Agua PA-ACS en un matraz de 50 ml la solución resultante. 14.4.2. Preparación del blanco y patrones de trabajo. En un matraz Kjedahl, introducir 5 ml de la solución de Arsénico (14.3.14.) y someterlo al mismo tratamiento que la muestra. 1 ml de la solución contiene 10 nanogramos de Arsénico. Preparar un blanco con todos los reactivos utilizados siguiendo el tratamiento dado a la muestra. 14.4.3. Condiciones del espectrofotómetro. Encender la fuente de alimentación de las lámparas de descarga sin electrodos con el tiempo suficiente para que se estabilice la energía de la lámpara. Encender el espectrofotómetro, ajustar la longitud de onda a 193,7 nm, colocando la rejilla de acuerdo con las condiciones del aparato. Encender el generador de hidruros, colocando la temperatura de la celda a 900°C, esperando hasta que se alcanza dicha temperatura. Se ajustan las condiciones del generador de hidruros según las especificaciones del aparato. Ajustar el flujo de Argón de acuerdo con las características del aparato. Encender el registrador. 14.4.4. Determinación.- Las determinaciones de la concentración de Arsénico se realizan por el método de adición de patrones, por medio de medidas duplicadas en el espectrofotómetro en las condiciones especificadas en (14.4.3.), añadiendo al matraz de reacción 3 ml de la solución (14.4.1.), más 3 ml de la solución (14.3.2.), y 10 ml de la solución (14.3.8.). Como patrones internos se usan 10, 20 y 50 ng de Arsénico. Lavar los matraces antes y después de cada uso, con Acido Clorhídrico 1,5% (14.3.3.). Al construir la gráfica de adición hay que descontar el valor de absorbancia del blanco obtenido en las mismas condiciones anteriores, pero añadiendo 3 ml de la solución blanco. En estas condiciones el límite de detección de la técnica es de 5 ng.

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Aguardientes compuestos: Ron

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METODOS DE ANALISIS 1. OBTENCION DEL DESTILADO 1.1. Principio. Destilación de la muestra en condiciones determinadas. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Matraz de 500 a 1.000 ml de capacidad de fondo redondo y boca esmerilada. 1.2.2. Alargadera tipo Kjedahl o similar. 1.2.3. Refrigerante tipo Dimroth (20-30 cm de longitud) o similar. 1.2.4. Matraces aforados de 100 y 200 ml de capacidad. 1.2.5. Manta eléctrica o mechero de gas. 1.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 1.3.1. Agua PA-ACS 1.4 Procedimiento. 1.4.1. Muestras con menos del 60% de Etanol. Medir 200 ml de muestra en un matraz aforado que antes de enrasar se mantiene en baño de agua a 20°C durante media hora. Enrasar con pipeta, limpiando el interior del cuello del matraz de posibles gotas adheridas con papel de filtro. Debe evitarse que queden burbujas de aire adheridas a las paredes del matraz. Pasar cuantitativamente el volumen medido al matraz aforado de 200 ml con 20 ml de Agua PAACS cada vez, añadiendo las aguas del lavado al matraz de destilación. Cuando se trate de bebidas siruposas, por su gran contenido en azúcar, el lavado debe efectuarse consecutivamente con tres porciones de 50 ml de Agua PA-ACS. Proceder a la destilación. Es conveniente añadir bolitas de vidrio para facilitar la ebullición suave. En algunos casos, si se teme la formación de espuma, añadir un antiespumante inerte (como silicona). El matraz de recogida del destilado es el mismo en que se efectuó la medida. Se le añaden 10 ml de Agua PA-ACS y se dispone ligeramente inclinado, de forma que el destilado resbale por la pared sin salpicadura, dentro de un baño de hielo o agua fría, a menos de 10° C. El refrigerante debe ir dotado de una alargadera que penetra por lo menos 4-6 cm en el cuello del matraz. Cuando se hayan recogido aproximadamente 190 ml, llevar el matraz tapado al baño de agua a 20°C. Cuando se alcance dicha temperatura, dentro del mismo baño, enrasar con Agua PA-ACS mediante pipeta. Tapar el matraz e invertirlo varias veces para homogeneizar su contenido antes de proceder a la determinación del etanol. 1.4.2. Muestras con más del 60% de etanol. El procedimiento anteriormente descrito difiere únicamente en que la muestra se mide en matraz aforado de 100 ml, que se lava varias veces con Agua PA-ACS hasta alcanzar un volumen de aproximadamente 230 ml. El destilado se recoge en matraz aforado de 200 ml, y se enrasa con Agua PA-ACS dentro del baño de agua a 20°C. 1.5 Observaciones. 1.5.1. El sistema de destilación debe comprobarse en ambos caso como sigue: Destilar 200 ml de una mezcla hidroalcohólica al 10% en volumen cinco veces sucesivas. Determinar en la última destilación el título alcohométrico del destilado, que no debe ser menor del 9,9% en volumen de etanol. 1.5.2. La destilación debe efectuarse procurando que el flujo del destilado sea uniforme. 1.5.3. El tiempo de recogida del destilado estará comprendido entre cuarenta y cinco y noventa minutos. 1.6. Referencia. 1.6.1. Instituto Español de Normalización. UNE 33-112-75. 2. FURFUROL (Furfuraldehído) 2.1. Principio. Destilación y posterior medida espectrofotométrica de su absorción a 277 nm. 2.2. Material y aparatos. 2.2.1. Pipetas de doble enrase de 1,5 y 25 ml. 2.2.2. Matraces aforados de 100, 200 y 500 ml. 2.2.3. Espectrofotómetro ultravioleta visible. 2.2.4. Aparato de destilación por arrastre de vapor, según figura 1. 2.3. Reactivos 131074 Agua PA-ACS 121086 Etanol absoluto PA 141334 Furfuraldehído PRS 2.3.1. Disolución patrón de Furfuraldehído de aproximadamente 116 mg/l. Destilar Furfuraldehído PRS recogiendo solamente la fracción del punto de ebullición 161,2°C. De este destilado tomar 1 ml, llevarlo a un matraz aforado de 100 ml, enrasando con Etanol al 95% en volumen. Tomar 5 ml de esta disolución y diluir con Etanol al 50% en volumen en un matraz aforado de 500 ml. 2.3.2. Disoluciones de referencia. A partir de (2.3.1.) obtener disoluciones de 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mg/l de Furfuraldehído.

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2.6. Observaciones. 2.6.2. La disolución de referencia se debe preparar inmediatamente antes de efectuar la medida. 2.7. Referencia. 2.7.1. Instituto Español de Normalización. UNE 33-109-74. 3. EXTRACTO SECO REDUCIDO 3.1. Principio. Evaporación de la muestra a 105°C y pesada posterior del residuo, y aplicación de una fórmula empírica. 3.2. Material y aparatos. 3.2.1. Estufa de aire regulable de 95°C a los 105°C. 3.2.2. Crisoles de platino o cuarzo de fondo plano, de 77 mm de diámetro interno y 18 mm de altura. 3.2.3. Desecador de vidrio que contenga ácido sulfúrico concentrado o gel de sílice como sustancia desecadora. 3.2.4. Baño de agua. 3.2.5. Balanza analítica. Figura 2.1 3.3. Procedimiento. Medir 25 ml de muestra a 20°C. Evaporar a sequedad, en las cápsulas correspondientes previamente desecadas y taradas, en baño de agua hirviente y mantener la estufa a 105ºC, durante treinta minutos. Dejar enfriar las cápsulas en el interior del desecador y una vez frías pesar en la balanza de precisión. 3.4. Cálculo. El valor del extracto total de la muestra, en gramos por litro, se hallará mediante la fórmula siguiente: Extracto total (g/l) = (M-m)x40 Siendo: M = peso, en g, de la cápsula con el extracto seco. m = peso, en g, de la cápsula vacía. El extracto seco reducido se calcula mediante la fórmula siguiente: Extracto seco reducido = ESR en (g/l) Extracto seco total = EST en (g/l) Azúcares totales = AT en (g/l) = sacarosa + azúcares reductores ESR = EST - AT 3.5. Referencia. 3.5.1. Instituto Español de Normalización. UNE 33-106-74.

2.4. Procedimiento. 2.4.1. Preparación de la muestra. Destilar 25 ml de la muestra en el aparato descrito en (2.2.4.), recogiendo 200 ml. Si se observa turbidez en el destilado, añadir un volumen conocido de Etanol 95% hasta lograr total limpidez en el destilado. 2.4.2. Determinación. Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 277 nm, comparando con las lecturas efectuadas a las disoluciones de referencia o bien calculando la absorbancia de una disolución que contenga 1 mg/l de Furfuraldehído PRS (valor aproximado 0,15). 2.5. Cálculo. El contenido en Furfuraldehído se obtiene mediante la fórmula: A Furfuraldehído (mg/l) = ––– x F A’ Siendo: A = absorbancia de la muestra. A’ = absorbancia de una disolución que contiene 1 mg/l de Furfuraldehído. F = factor de dilución.

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4. ESTERES 4.1. Principio. Reacción cuantitativa de los ésteres con hidroxilamina en solución alcalina, formación de ácido hidroxámico, acidificación, formación de un complejo coloreado con iones férricos y medida del color desarrollado a 525 nm. 4.2. Material y aparatos. 4.2.1. Espectrofotómetro o colorímetro que permita lectura a 525 nm. 4.2.2. Tubos de ensayo de longitud 20 cm y diámetro interno 2,5 cm. 4.3. Reactivos 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 131318 Etilo Acetato PA-ACS-ISO 131914 Hidroxilamonio Cloruro PA-ACS-ISO 141358 Hierro III Cloruro 6-hidrato, trozos PRS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 4.3.1. Disolución de Hidroxilamonio Cloruro 2M. Diluir convenientemente Hidroxilamonio Cloruro PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS. Conservar en nevera. 4.3.2. Disolución de Sodio Hidróxido 3,5 N. Diluir convenientemente Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS. 4.3.3. Disolución de Hidroxilamonio Cloruro 1M en Sodio Hidróxido 1,75N: mezclar inmediatamente antes de su uso, volúmenes iguales del reactivo (4.3.1.) y (4.3.2.). Desechar a las seis horas. 4.3.4. Disolución de Acido Clorhídrico 4N. Diluir convenientemente Acido Clorhídrico 35% PA-ISO en Agua PA-ACS. 4.3.5. Disolución de Hierro III Cloruro 0,37M. Disolver 50 g de Hierro III Cloruro 6-hidrato, trozos PRS en unos 400 ml de Agua PA-ACS en un matraz aforado de 500 ml. Añadir 12,5 ml de Acido Clorhídrico 4N y enrasar con agua. 4.4. Procedimiento. 4.4.1. Construcción de la curva patrón. 4.4.1.1. Solución patrón. Pesar 5 g de Etilo Acetato PA-ACS-ISO y llevar a un litro con Etanol 96% v/v PA convenientemente diluido en Agua PA-ACS hasta concentración 50º. 4.4.1.2. Soluciones de 50, 100, 150, 200, 250 y 300 mg/l de Etilo Acetato PA-ACS-ISO. Tomar de la solución (4.4.1.1.), 2,5; 5,0; 7,5; 10,0; 12,5 y 15,0 ml introduciéndolos en matraces de 250 ml de capacidad y completar con Etanol de 50° hasta el enrase. 4.4.1.3. Solución de referencia. Tomar 4 ml de la solución (4.3.3.) y 2 ml de la disolución (4.3.4.) mezclándolas en un tubo de ensayo (4.2.2.). Mezclar y añadir 2 ml de una cualquiera de las soluciones (4.4.1.2.). Introducir en una serie de tubos de ensayo (4.2.2.), 2ml de cada una de las soluciones (4.4.1.2.) y 4 ml de (4.3.3.). Agitar y dejar reaccionar entre uno y veinte minutos. Añadir 2 ml de la disolución de Acido Clorhídrico 4N y mezclar. Añadir 2 ml de la disolución de Hierro III Cloruro 0,37M a cada uno de los matraces, tanto al de la solución de referencia como a los de las soluciones (4.4.1.2.). Efectuar las lecturas colorimétricas a una longitud de onda de 525 nm. Obtener las gráficas de calibrado mediante la representación de las diferencias de absorción de las soluciones (4.4.1.2.), respecto a la solución de referencia, en función de la concentración de Etilo Acetato. 4.4.2. Preparación de la muestra. Destilar siguiendo el procedimiento descrito en el método oficial número 1. 4.4.3. Determinación. Introducir en un tubo (4.2.2.), 2 ml del destilado y 4 ml de disolución de Hidroxilamonio Cloruro (4.3.3.), agitar y dejar reaccionar entre uno y veinte minutos. Añadir 2 ml de la disolución de Acido Clorhídrico (4.3.4.) y mezclar. Añadir 2 ml de la disolución de Hierro III Cloruro (4.3.5.) Efectuar la lectura colorimétrica a 525 nm inmediatamente, tomando como blanco la solución de referencia preparada de la siguiente forma: Introducir en un tubo (4.2.2.) 4 ml de la disolución de Hidroxilamonio Cloruro (4.3.3.) y 2 ml de la solución de ácido clorhídrico (4.3.4.), mezclar y añadir 2 ml del destilado. Añadir 2 ml de la disolución de Hierro III Cloruro (4.3.5.) y mezclar. 4.5 Cálculo. A partir de las lecturas obtenidas se halla el contenido en ésteres, expresados en mg de etilo acetato por 100 ml de alcohol absoluto, mediante las gráficas de calibrado. 4.6. Observaciones. 4.6.1. El mismo blanco, puede ser usado para una serie de muestras de distinto contenido en ésteres, pero de semejante graduación alcohólica. 4.7. Referencias. 4.7.1. Association of Official Analytical Chemists. Edición 1975-9053-59 4.7.2. Instituto Español de normalización. UNE 33-111-77.

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5. ALCOHOLES SUPERIORES 5.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación de los alcoholes superiores al etanol por cromatografía de gases. 5.2. Material y aparatos. 5.2.1. Cromatógrafo de gases equipado con detector de ionización de llama. 5.2.2. Columna cromatográfica. Columna de 4 m de longitud de 1/8” de diámetro interno rellena de Carbowax 1500 al 15% sobre Chromosorb W 80-100 mallas, lavado a los ácidos. 5.2.3. Microjeringas de 1 µl. 5.3. Reactivos. 5.3.1. Patrones cromatográficos: 131082 1-Butanol PA-ACS-ISO 354330 iso-Butanol CG 353851 2-Butanol CG 354539 2-Metil-1-Butanol CG 351079 3-Metil-1-Butanol CG 4-Metil-2-Pentanol (patrón interno) 351885 1-Propanol CG 5.3.2. Etanol pureza cromatográfica. 5.4. Procedimiento. 5.4.1. Condiciones cromatográficas. Las condiciones cromatográficas orientativas son: gas portador nitrógeno 20 ml/min., temperatura del horno 85°C, temperatura del inyector y del detector 150°C. 5.4.2. Calibrado. 5.4.2.1. Patrón interno : Solución de 5 g/l en etanol de 40° C 4-Metil-2-Pentanol. 5.4.2.2. Solución patrón: Preparar una solución en alcohol de 40° en las proporciones que se indican en la tabla 1. 5.4.2.3. Solución de calibrado: A 10 ml de la solución patrón (5.4.2.2.) se le añade 1 ml de la solución patrón interno (5.4.2.1.) Y se inyecta 1 µl en el cromatógrafo. 5.4.3. Muestra problema. A 10 ml de la muestra llevada a 40°C se le añade 1 ml de patrón interno (5.4.2.1.) e inyectar un litro en las mismas condiciones en que se hizo para el calibrado. 5.5. Cálculo. Una vez identificados los picos por sus retenciones relativas al patrón interno se calculan los factores de respuesta para cada uno de ellos y las concentraciones en la muestra problema aplicando las fórmulas. Ap Factor de respuesta ( Fr ) = Ci x ––––– Ai Aim Concentración en la muestra (mg/l) = Fr x –––––– x f Apm Siendo: Ci = concentración del compuesto en la solución patrón. Ap = área del patrón interno en la solución patrón. Ai = área del compuesto en la solución patrón. Aim = área del compuesto en la muestra problema. Apm = área del patrón interno en la muestra problema. f = factor de dilución de la muestra. El contenido en alcoholes superiores vendrá dado por la sumo de los valores individuales obtenidos de cada uno de ellos y se expresará en mg/100 ml de alcohol absoluto. 5.6. Referencia. 5.6.1. Association of Official Agricultural Chemists 1980, 9075. TABLA 1 ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– Compuesto Concentración (mg/l) ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– 2-Butanol 10 1-Propanol 125 iso-Butanol 175 1-Butanol 15 2-Metil-1-Butanol 100 3-Metil-1-Butanol 300 ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– 6. METANOL (Alcohol Metílico) 6.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación del metanol por cromatografía gaseosa. 6.2. Material y aparatos. Como en 5.2. 6.3. Reactivos. Metanol pureza cromatográfica. 4-Metil 2-Pentanol (Patrón interno). Etanol pureza cromatográfica. 6.4. Procedimiento. 6.4.1. Condiciones cromatográficas.- Como en 5.4.1. 6.4.2. Calibrado. 6.4.2.1. Patrón interno. Como en 5.4.2.1. 6.4.2.2. Solución patrón. Preparar una solución

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M
de Metanol en Etanol a 40°, de concentración similar a la esperada en la muestra. 6.4.2.3. Solución de calibrado. A 10 ml de la solución del patrón interno (6.4.2.2.), se le añade 1 ml de la solución del patrón interno (6.4.2.1.) y se inyecta 1 µl en el cromatógrafo. 6.4.3. Muestra problema. Como en 5.4.3. 6.5. Cálculo. Como en 5.5. 6.6. Referencia. Como en 5.6. 7. GRADO ALCOHOLICO 7.1. Principio Se determina por destilación del producto y medida de la densidad del destilado por areometría. 7.2. Material y aparatos. 7.2.1. Aparatos de destilación como en 1.2. 7.2.2. Alcohómetro con graduación de 0,1° de d 20/20 debidamente contrastado. 7.2.3. Termómetro con graduación de 0,1°C. 7.2.4. Probeta transparente de 36 mm de diámetro interior y 320 mm de altura. 7.2.5. Baño termostático a 20°C. 7.3. Procedimiento. 7.3.1. Obtención del destilado. Según método oficial número 1. 7.3.2. Determinación areométrica. Limpiar y secar el alcohómetro antes de su empleo. Echar el destilado en la probeta, inclinarla unos 45° para evitar la agitación y las burbujas. Tapar la probeta con la palma de la mano, e invertirla 3 o 4 veces para igualar las temperaturas de la probeta y el líquido. Dejar que el alcohómetro, termómetro, probeta y destilado, alcance en el baño termostatizado la temperatura de 20°C. Introducir el alcohómetro en el líquido de arriba a abajo 5 o 6 veces, de manera que alcance la misma temperatura y que se distribuya cualquier cambio de temperatura en todo el líquido. Mantener el bulbo del alcohómetro en el líquido, secar el vástago, dejarlo en reposo de modo que sólo unas pocas décimas de grados estén mojadas. Leer en el alcohómetro, luego en el termómetro. Para leer en la escala del alcohómetro situar el ojo justo debajo del plano de la superficie del líquido, levantar lentamente la cabeza manteniendo la visual perpendicular al alcohómetro, hasta que la superficie varíe de elipse a una línea recta. Anotar el punto en que esta línea intersecciona con la escala del alcohómetro, siendo ésta la lectura del alcohómetro. Levantarlo ligeramente por encima de dicha lectura y dejarlo en reposo de nuevo. Volver a leer en el alcohómetro y en el termómetro, comprobando así las primeras lecturas. Hacer la lectura del alcohómetro con aproximación de 0,05° y la del termómetro con 0,1°. Sacar el alcohómetro y secarlo. Invertir la probeta con la muestra varias veces (el termómetro quede en su sitio), para que se equilibre térmicamente todo el conjunto. Volver a atemperar el alcohómetro, secar el vástago y realizar nuevas lecturas en el alcohómetro y en el termómetro. Los valores calculados son válidos si tienen aproximación de 0,1 grado alcohólico, si no fuera así, realizar lecturas adicionales y calcular la medida. 7.4. Cálculo. El grado alcohólico real es el leído en el destilado obtenido según 7.3.1. Si en la obtención del destilado, 100 ml de muestra se destilaron hasta 200 ml, la lectura obtenida, debe ser multiplicada por 2. 7.5. Referencia. 7.5.1. Association of Official Analytical Chemists. Edición 1980-9015-9. 8. ALDEHIDOS 8.1. Principio. Reacción de los aldehídos con sodio bisulfito. Oxidación del ácido sulfuroso con yodo y valoración del exceso de yodo con sodio tiosulfato. 8.2. Material y aparatos. 8.2.1. Bureta de 25 ml graduada en décimas de ml. 8.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 211642 Sodio Hidrógeno Sulfito solución 40% p/v QP 182160 Sodio Tiosulfato 0,05 mol/l (0,05N) SV 182161 Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV 8.3.1. Sodio Tiosulfato 0,05 mol/l (0,05N) SV. 8.3.2. Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV 8.3.3. Disolución de Sodio Bisulfito 0,05N. Diluir convenientemente Sodio Hidrógeno Sulfito solución 40% p/v QP en Agua PA-ACS. 8.4. Procedimiento. Poner 100 ml del destilado (obtenido según Método oficial número 1) en un matraz de 500 ml de Agua PA-ACS y un exceso de la disolución (8.3.3.) calculado de modo que equivalga, por lo menos, a 25 ml de Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV. Dejar el matraz, bien tapado, durante treinta minutos, agitando de vez en vez. Añadir 50 ml de Yodo 0,025 mol/l (0,05N) SV. Valorar el exceso de yodo añadido con Sodio Tio-

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sulfato 0,05 mol/l (0,05N) SV hasta decoloración completa. Debe hacerse simultáneamente un ensayo en blanco, para comprobar en cada serie de ensayos la estabilidad de las soluciones de Yodo y Tiosulfato por ser tan diluidas. 8.5. Cálculo. El contenido en aldehídos, expresado como acetaldehído, vendrá dado por la siguiente fórmula: 1,1 x 100 Aldehídos (mg/100 ml - V1) x –––––––––– de alcohol absoluto) = (V2 A Siendo: V1 = volumen, en ml, de sodio tiosulfato gastado en la muestra. V2 = volumen, en ml, de sodio tiosulfato gastado en el blanco. A = grado alcohólico. 8.6. Observaciones. 8.6.1. La solución de sodio bisulfito tiene mayor tiempo de estabilidad si se le añade un 10% de alcohol. En cualquier caso esta solución es estable, como máximo una semana. 8.7. Referencias. 8.7.1. Association of Official Agricultural Chemists 1980-9052. 8.7.2. Instituto Español de Normalización. UNE 33-107-74. 9. ACIDEZ VOLATIL 9.1. Principio. Se define convencionalmente como la diferencia entre los valores de la acidez total y fija, expresadas ambas en mg de ácido acético por 100 ml de alcohol absoluto. 9.2. Material y aparatos. 9.2.1. Bureta de 10 ml graduada en décimas. 9.2.2. pH-metro. 9.2.3. Cápsulas de platino o porcelana. 9.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 121086 Etanol absoluto PA 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO

con la disolución de Sodio Hidróxido (9.3.1.) a pH 8,2 utilizando el pH-metro. 9.4.2. Acidez fija. Evaporar, al baño María, en una cápsula (9.2.3.), 50 ml de la muestra, desecarla a 100° C durante treinta minutos. Disolver y transferir el residuo con varias porciones de Etanol absoluto PA (llevando previamente a pH 8,2) de una graduación similar a la muestra usando 50 ml de Etanol absoluto PA en total. Valorar con la disolución de Sodio Hidróxido (9.3.1.) a pH = 8,2 utilizando el pH-metro. 9.5. Cálculo. V1 x 1,2 x 100 9.5.1. Acidez fija (en mg/100 ml de etanol absoluto) = ––––––––––––––– A Siendo: V1 = volumen, en ml, de sodio hidróxido empleados en 9.4.1. A = grado alcohólico de la muestra. V2 x 1,2 x 100 9.5.2. Acidez fija ( en mg/100 ml de etanol absoluto) = –––––––––––––– A Siendo: V2 = volumen, en ml, de sodio hidróxido empleados en 9.4.2. A = grado alcohólico de la muestra. 9.5.3. El valor de la acidez volátil, expresado en mg de ácido acético por 100 ml de etanol absoluto, vendrá dado por la fórmula : Acidez volátil = acidez total - acidez fija. 9.6. Referencia. 9.6.1. Association of Official Analytical Chemists. Edición 1980-9046-9048. 10. AZUCARES REDUCTORES 10.1 Principio. Eliminación previa de todas las materias reductoras distintas de los azúcares reductores por defecación y posterior valoración basada en la acción reductora de los azúcares sobre una solución cupro-alcalina. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Erlenmeyer de 300 ml con refrigeración de reflujo. 10.2.2. Material necesario para volumetría. 10.2.3. Baño de agua. 10.3. Reactivos. 131808 Acido Cítrico anhidro PA-ACS 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO

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9.3.1. Disolución de Sodio Hidróxido 0,01N. Diluir convenientemente Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS. 9.3.2. Etanol absoluto PA. 9.4. Procedimiento. 9.4.1. Acidez total. Valorar 50 ml de la muestra

M
131074 171096 121212 131270 211835 131466 131542 122032 131659 181691 181723 Agua PA-ACS Almidón soluble RE Calcio Carbonato precipitado PA Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO Piedra Pómez gránulos QP Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO Potasio Yoduro PA-ISO Sodio Carbonato 1-hidrato PA Sodio Cloruro PA-ACS-ISO Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV 25% y 2 ml de Engrudo de Almidón. A continuación valorar con Sodio Tiosulfato 0,1mol/l (0,1N) SV. Efectuar una prueba en blanco, sustituyendo los 25 ml de muestra, por igual volumen de Agua PAACS y tratar como se ha indicado para la muestra. 10.5. Cálculo. La cantidad de azúcar, expresada en azúcares reductores contenida en la muestra analizada, se obtiene en la tabla adjunta en función del número n’ - n de ml de tiosulfato utilizado. Siendo: n = volumen, en ml, de solución de sodio tiosulfato 0,1 N, utilizados para la valoración de la muestra. n’ = volumen, en ml, de solución de sodio tiosulfato 0,1 N, utilizados en la prueba en blanco. Expresar el contenido en gramos de azúcares reductores por litro, teniendo en cuenta las diluciones efectuadas en el curso de la defecación del volumen de la muestra analizada. 10.6. Referencia. 10.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des Vins. O. I. V. A4e 106-107 (defecación y 126-127 (valoración).

10.3.1. Solución de Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO (aproximadamente saturada). Añadir a 250 g de Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO, Agua PA-ACS caliente hasta 0,5 l y agitar hasta disolución completa. 10.3.2. Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV. 10.3.3. Calcio Carbonato precipitado PA. 10.3.4. Solución cupro-alcalina. Disolver por separado 25 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PAACS-ISO en 100 ml de Agua PA-ACS; 50 g de Acido Cítrico anhidro PA-ACS en 300 ml de Agua PAACS y 388 g de Sodio Carbonato 1-hidrato PA en 300-400 ml de Agua PA-ACS caliente. Mezclar la solución de Cobre Sulfato y completar el volumen con Agua PA-ACS hasta un litro. 10.3.5. Solución de Potasio Yoduro al 30%. Diluir convenientemente Potasio Yoduro PA-ISO con Agua PA-ACS. Conservar en frasco topacio. 10.3.6. Solución de Acido Sulfúrico al 25 % en volumen. Diluir convenientemente Acido Sulfúrico 96% PA-ISO en Agua PA-ACS. 10.3.7. Sodio Tiosulfato 0,1mol/l (0,1N) SV. 10.3.8. Engrudo de almidón de 5 g/l. Diluir convenientemente 5 g de Almidón soluble RE en 1 l de Agua PA-ACS; contendrá 200 g/l de Sodio Cloruro PA-ACS-ISO para asegurar su conservación. Esta solución debe ser mantenida diez minutos en ebullición en el momento de su preparación. 10.4. Procedimiento. 10.4.1. Defecación plúmbica. Llevar 100 ml de ron a un matraz aforado de 125 ml. Añadir agitando 5 ml de solución saturada de Plomo II Acetato y 1 g de Calcio Carbonatado precipitado PA, agitar varias veces y dejar sedimentar, por lo menos quince minutos, enrasar con Agua PA-ACS, añadir 0,6 ml más de Agua PA-ACS y filtrar. 10.4.2. Valoración. Poner en el Erlenmeyer de 300 ml 25 ml de la solución cuproalcalina y 25 ml de ron previamente defecado. Añadir unos gramos de Piedra Pómez granulos QP y llevar a ebullición, que debe ser alcanzada en dos minutos, adaptando a Erlenmeyer al refrigerante de reflujo y mantener exactamente durante diez minutos la ebullición. Enfriar inmediatamente bajo corriente de agua fría. Añadir 10 ml de la solución de Potasio Yoduro al 30%, 25 ml de la solución de Acido Sulfúrico al

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ml sodio tiosulfato 0,1N

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TABLA 10.I Azúcares reductores expresados en mg de glucosa Primera cifra decimal 0 0,0 3,2 6,4 9,7 13,0 16,4 19,8 23,2 26,6 30,0 33,4 36,8 40,3 43,8 47,3 50,8 54,3 58,0 61,8 65,5 69,4 73,3 77,2 81,2 85,2 89,2 1 0,3 3,5 6,7 10,0 13,3 16,7 20,1 23,5 26,9 30,3 33,7 37,2 40,7 44,2 47,7 51,2 54,7 58,4 62,2 65,9 69,8 73,7 77,6 81,6 85,6 89,6 2 0,6 3,8 7,1 10,4 13,7 17,1 20,5 23,9 27,3 30,7 34,1 37,5 41,0 44,5 48,0 51,5 55,0 58,8 62,5 66,3 70,2 74,1 78,0 82,0 86,0 90,0 3 1,0 4,2 7,4 10,7 14,0 17,4 20,8 24,2 27,6 31,0 34,4 37,9 41,4 44,9 48,4 51,9 55,4 59,1 62,9 66,7 70,6 74,5 78,4 82,4 86,4 90,4 4 1,3 4,5 7,7 11,0 14,4 17,8 21,2 24,6 28,0 31,3 34,8 38,2 41,7 45,2 48,7 52,2 55,8 59,5 63,3 67,1 71,0 74,9 78,8 82,8 86,8 90,8 5 1,6 4,8 8,1 11,4 14,7 18,1 21,5 24,9 28,3 31,7 35,1 38,6 42,1 45,6 49,1 52,6 56,2 59,9 63,7 67,5 71,4 75,3 79,2 83,2 87,2 91,2 6 1,9 5,1 8,4 11,7 15,0 18,4 21,8 25,2 28,6 32,0 35,4 38,9 42,4 45,9 49,4 52,9 56,5 60,3 64,0 67,8 71,7 75,6 79,6 83,6 87,6 91,6 7 2,2 5,4 8,7 12,0 15,4 18,8 22,2 25,6 29,0 32,4 35,8 39,3 42,8 46,3 49,8 53,3 56,9 60,7 64,4 68,2 72,1 76,0 80,0 84,0 88,0 92,0 8 2,6 5,7 9,0 12,3 15,7 19,1 22,5 25,9 29,3 32,7 36,1 39,6 43,1 46,6 50,1 53,6 57,3 61,0 64,8 68,6 72,5 76,4 80,4 84,4 88,4 92,4 9 2,9 6,1 9,4 12,7 16,1 19,5 22,9 26,3 29,7 33,0 36,5 40,0 43,5 47,0 50,5 54,0 57,6 61,4 65,1 69,0 72,9 76,8 80,8 84,8 88,8 92,8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25

M
11. PLOMO 11.1. Principio. Determinación del plomo por A.A., previa mineralización de la muestra. 11.2. Material y aparatos. 11.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 11.2.2. Lámpara de plomo. 11.2.3. Cápsulas de platino, cuarzo o similar. 11.2.4. Baño de arena o placa calefactora con regulación de temperatura o estufa con control de temperatura en el rango de 50 a 150° C. 11.2.5. Mufla. Conveniente tenerla dentro de vitrina de extracción de humos. 11.2.6. Matraces de 10, 100 y 1000 ml de capacidad. 11.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313189 Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA 11.3.1. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 11.3.2. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. 11.3.3. Acido Nítrico al 1% en Agua PA-ACS (v/v). 11.3.4. Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,589 g de 131473 Plomo II Nitrato PA-ACS enrasando a 1.000 ml con Acido Nítrico al 1%. 11.4. Procedimiento. 11.4.1. Preparación de la muestra. Poner 100 ml de la muestra en la cápsula (11.2.3.), llevarla a evaporación hasta consistencia siruposa en baño de arena (11.2.4.). Añadir a continuación 2 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y carbonizar el residuo en el baño de arena o placa. Seguidamente introducir la cápsula en la mufla y mantenerla durante dos horas a 450° C, transcurrido dicho tiempo, sacarla y dejarla enfriar. Añadir 1 ml de Agua PA-ACS, evaporar en el baño de arena o placa e introducir en la mufla, repitiendo esta operación hasta obtener cenizas blancas. Un ligero color marrón-rojizo en las cenizas (posiblemente de Fe2O3 ) es aceptado y no requiere un tratamiento posterior. Disolver a continuación las cenizas con 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 2 ml de Agua PAACS. Llevar la solución a un matraz de 10 ml, lavar la cápsula con Agua PA-ACS y añadir las aguas de lavado hasta el enrase, filtrando posteriormente. 11.4.2. Construcción de la curva de patrón. Diluir alícuotas apropiadas de la solución patrón (11.3.4.) con Acido Nítrico al 1% (v/v) para obtener una curva de concentraciones 2, 4, 6, 8 y 10 mg/l. 11.4.3. Determinación. Operar según las especificaciones del aparato, usando llama de aire-acetileno. Medir las absorbancias de la muestra y patrones a 283 nm. Si la solución está muy concentrada diluirla con Acido Nítrico al 1%. 11.5. Cálculo. Calcular el contenido en plomo, expresado en mg/l mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuenta el factor de concentración o dilución. 11.6. Referencia. 11.6.1. “Métodos Oficiales de Análisis de Vinos”. Ministerio de Agricultura, pág 134 (I), 1976. 12. ZINC 12.1. Principio. Determinación del zinc por A.A. previa mineralización de la muestra. 12.2. Material y aparatos. 12.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 12.2.2. Lámpara de zinc. 12.2.3. Los utilizados para el plomo en 11.2.3., 11.2.4., 11.2.5. y 11.2.6. 12.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 313193 Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA 12.3.1. Los utilizados para el plomo en 11.3.1., 11.3.2. y 11.3.3. 12.3.2. Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de 141782 Zinc metal granalla PRS en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO (1:1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico del 1% (v/v). 12.4. Procedimiento. 12.4.1. Preparación de la muestra. Como en 11.4.1. 12.4.2. Construcción de la curva patrón. Diluir partes alícuotas de la solución patrón (12.3.2.) con Acido Nítrico al 1% para obtener soluciones de 0,2; 1; 1,5 y 2 mg/l. 12.4.3. Determinación. Igual que para el plomo. La lectura se efectuará a 213,8 nm. 12.5. Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancias obtenidos, hallar las concentraciones de Zn para la muestra, teniendo en cuenta el factor concentración o dilución.

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12.6. Referencia. 12.6.1. H. E. Parker. “Atomic Absorption Newsletter” (1963),13. 13. COBRE 13.1. Principio. Determinación del cobre por A.A., mineralización por cenizas a < 450° C y concentración previa a la lectura con objeto de conseguir resultados suficientemente precisos. 13.2. Material y aparatos. 13.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 13.2.2. Lámpara de cobre. 13.2.3. Los utilizados para el plomo, en 11.2.3., 11.2.4., 11.2.5. y 11.2.6. 13.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 313193 Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA 13.3.1. Los utilizados para el plomo en 11.3.1., 11.3.2. y 11.3.3. 13.3.2. Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de Cobre puro en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO (1:1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico del 1% (v/v). 13.4. Procedimiento. 13.4.1. Preparación de la muestra. Como en 11.4.1. 13.4.2. Construcción de la curva patrón. Diluir partes alícuotas de la solución patrón (13.3.2.) con Acido Nítrico del 1%, para obtener soluciones que contengan de 1 a 5 mg de Cu/l. 13.4.3. Determinación. Igual que para el plomo. Medir a 324,7 nm. 13.5. Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos para la muestra, hallar mediante la curva patrón las concentraciones de cobre de la muestra. 13.6. Referencia. 13.6.1. H. E. Parker “Atomic Absorption Newsletter” (1963),13. 13.6.2. F. Rousselet “Spectrophotometrie par absorption atomique Boudin”. Edición París (1968), páginas 59-144.

14. ARSENICO 14.1. Principio. La muestra se somete a una digestión ácida con una mezcla de ácido nítrico y sulfúrico. La determinación del arsénico se realiza por espectrofotometría de absorción atómica, con generador de hidruros. 14.2. Material y aparatos. 14.2.1. Balanzas con exactitud de 0,001 g y de 0,1 g. 14.2.2. Matraces aforados de 50 y 100 ml de capacidad. 14.2.3. Pipetas de doble aforo. 14.2.4. Matraces Kjedahl de 250 ml. 14.2.5. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con sistema generador de hidruros. 14.2.6. Lámpara de descarga sin electrodos. 14.2.7. Fuente de alimentación para lámpara de descarga sin electrodos. 14.2.8. Registrador gráfico. 14.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131669 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO 131036 Acido Nítrico 60% PA-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313171 Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA 131515 Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO 123314 Sodio Borohidruro PA 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 14.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 14.3.2. Disolución de Acido Clorhídrico 37% PAACS-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.3. Disolución de Acido Clorhídrico 37% PAACS-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 1000 ml. 14.3.4. Acido Nítrico 60% PA-ISO. 14.3.5. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 14.3.6. Disolución de Sodio Hidróxido al 1%. Pesar 1 g de Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.7. Disolución de Sodio Borohidruro al 3%. Pesar 3 g de Sodio Borohidruro PA y disolverlo hasta 100 ml con Sodio Hidróxido al 1%. 14.3.8. Disolución al 1% de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO. Pesar 1 g de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO y disolverlo hasta 100 ml con Agua PA-ACS. 14.3.9. Disolución de Potasio Hidróxido al 20%. Pesar 20 g de Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO

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M
y disolverlo con Agua PA-ACS hasta el volumen de 100 ml. 14.3.10. Disolución de Acido Sulfúrico al 20% (v/v). Diluir 20 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.11. Disolución de Acido Sulfúrico al 1% (v/v). Diluir 1 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.12. Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA o disolver 0,132 g de 241151 Arsénico III Oxido EQP-ACS en 2,5 ml de Potasio Hidróxido al 20% (14.3.9), neutralizar con Acido Sulfúrico al 20% (14.3.10), diluir hasta 100 ml con Acido Sulfúrico 1% (14.3.11.). 14.3.13. Solución patrón de Arsénico de concentración 10 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución de Arsénico (14.3.12.) en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 14.3.14. Solución patrón de Arsénico de concentración 0,1mg/l. Pipetear 1 ml de la solución de Arsénico (14.3.13.) en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 14.4. Procedimiento. 14.4.1. Preparación de la muestra. En un matraz Kjeldahl, de 250 ml, introducir 10 ml de muestra con 20 ml de Acido Nítrico (14.3.4.) y 5 ml de Acido Sulfúrico (14.3.5.). Llevar a ebullición hasta reducir el volumen a 5ml Dejar enfriar y disolver con Agua PA-ACS en un matraz de 50 ml la solución resultante. 14.4.2. Preparación del blanco y patrones de trabajo. En un matraz Kjedahl, introducir 5 ml de la solución de Arsénico (14.3.14.), y someterlo al mismo tratamiento que la muestra. Un ml de la solución contiene 10 nanogramos de Arsénico. Preparar un blanco con todos los reactivos utilizados siguiendo el tratamiento dado a la muestra. 14.4.3. Condiciones del espectrofotómetro. Encender la fuente de alimentación de las lámparas de descarga sin electrodos con el tiempo suficiente para que se estabilice la energía de la lámpara. Encender el espectrofotómetro, ajustar la longitud de onda a 193,7 nm, colocando la rejilla de acuerdo con las condiciones del aparato. Encender el generador de hidruros, colocando la temperatura de la celda a 900°C, esperando hasta que se alcance dicha temperatura. Se ajustan las condiciones del generador de hidruros según las especificaciones del aparato. Ajustar el flujo de argón de acuerdo con las características del aparato. Encender el registrador. 14.4.4. Determinación. Las determinaciones de la concentración de Arsénico se realizan por el método de adición de patrones por medio de medidas duplicadas en el espectrofotómetro en las condiciones especificadas en 14.4.3., añadiendo al matraz de reacción 3 ml de la solución 14.4.1., más 3 ml de la solución 14.3.2. y 10 ml de la solución 14.3.8. Como patrones internos se usan 10, 20 y 50 ng de As. Lavar los matraces antes y después de cada uso, con Acido Clorhídrico (14.3.3.). Al construir la gráfica de adición hay que descontar el valor de absorbancia del blanco obtenido en las mismas condiciones anteriores, pero añadiendo 3 ml de la solución blanco. En estas condiciones el límite de detección de la técnica es de 5 ng. 15. SACAROSA 15.1. Principio. La sacarosa se determina por la diferencia de los poderes reductores antes y después de la hidrólisis clorhídrica del líquido procedente de la defecación del ron. 15.2. Reactivos 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 15.2.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 15.2.2. Sodio Hidróxido 12 N. Diluir convenientemente Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS 15.3 Procedimiento. Poner en dos matraces Erlenmeyer, de 200 ml cada uno, el mismo volumen del líquido defecado según el método oficial número 10. Añadir a cada matraz 0,3 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACSISO, por cada 10 ml de líquido defecado. En uno de los matraces añadir inmediatamente 0,3 ml de Sodio Hidróxido 12 N, por cada 10 ml de líquido defecado, procediendo a la valoración de los azúcares reductores según el método oficial número 10. Llevar el otro matraz con el contenido sin neutralizar a baño de agua hirviendo durante 3 minutos. Añadir entonces el mismo volumen de Sodio Hidróxido 12 N que al otro matraz y valorar como en el caso anterior. 15.4. Cálculo. La diferencia entre las cantidades de azúcares reductores encontrada en los resultados de estas dos valoraciones, multiplicada por 0,95 de la riqueza en sacarosa de la muestra de estudio. Este resultado se expresa en g/l de ron teniendo presentes las diluciones efectuadas eventualmente en el curso de la defecación y del volumen de la muestra de ron que se sometió a la defecación. 15.5. Referencia. 15.5.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des Vins. O. I. V. AS, 4, 1969.

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Aguardientes compuestos: Ginebra

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M
METODOS DE ANALISIS 1. OBTENCION DEL DESTILADO 1.1. Principio. Destilación de la muestra en condiciones determinadas. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Matraz de 500 a 1.000 ml de capacidad, de fondo redondo y boca esmerilada. 1.2.2. Alargadera tipo Kjedahl o similar. 1.2.3. Refrigerante tipo Dimroth (20-30 cm de longitud) o similar. 1.2.4. Matraces aforados de 100 y 200 ml de capacidad. 1.2.5. Manta eléctrica o mechero de gas. 1.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 1.3.1. Agua PA-ACS. 1.4. Procedimiento. 1.4.1. Muestras con menos de 60% de etanol. Medir 200 ml de muestra en un matraz aforado que antes de enrasar se mantiene en baño de agua a 20°C durante media hora. Enrasar con pipeta, limpiando el interior del cuello del matraz de posibles gotas adheridas con papel de filtro. Debe evitarse que queden burbujas de aire adheridas a las paredes del matraz. Pasar cuantitativamente el volumen medido al matraz de destilación lavando tres veces consecutivas el matraz aforado de 200 ml con 20 ml de Agua PA-ACS cada vez, añadiendo las aguas de lavado al matraz de destilación. Cuando se trate de bebidas siruposas, por su gran contenido en azúcar, el lavado debe efectuarse consecutivamente con tres proporciones de 50 ml de Agua PA-ACS. Proceder a la destilación. Es conveniente añadir bolitas de vidrio para facilitar la ebullición suave. En algunos casos, si se teme la formación de espuma, añadir un antiespumante inerte (como silicona). El matraz de recogida del destilado es el mismo en que se efectuó la medida. Se le añaden 10 ml de Agua PA-ACS y se dispone ligeramente inclinado, de forma que el destilado resbale por la pared sin salpicadura, dentro de un baño de hielo o agua fría a menos de 10°C. El refrigerante debe ir dotado de una alargadera que penetre, por lo menos, 4-6 cm en el cuello del matraz. Cuando se hayan recogido, aproximadamente, 190 ml, llevar el matraz tapado al baño de agua a 20°C. Cuando se alcance dicha temperatura, dentro del mismo baño, enrasar con Agua PA-ACS mediante pipeta. Tapar el matraz e invertirlo varias veces para homogeneizar su contenido antes de proceder a la determinación del etanol. 1.4.2. Muestras con más del 60% de etanol. El procedimiento anteriormente descrito difiere únicamente en que la muestra se mide en matraz aforado de 100 ml, que se lava varias veces con Agua PA-ACS hasta alcanzar un volumen de, aproximadamente, 230 ml. El destilado se recoge en matraz aforado de 200 ml y se enrasa con Agua PA-ACS dentro del baño de agua a 20°C. 1.5. Observaciones. 1.5.1. El sistema de destilación debe comprobarse en ambos casos como sigue: Destilar 200 ml de una mezcla hidroalcohólica al 10% en volumen cinco veces consecutivas. Determinar en la última destilación el título alcoholimétrico del destilado, que no debe ser menor del 9,9% en volumen de etanol. 1.5.2. La destilación debe efectuarse procurando que el flujo del destilado sea uniforme. 1.5.3. El tiempo de recogida del destilado estará comprendido entre cuarenta y cinco y noventa minutos. 1.6. Referencia. 1.6.1. Instituto Español de Normalización. UNE 33-112-75. 2. FURFUROL (Furfuraldehído) 2.1. Principio. El furfurol se combina con la anilina en presencia del ácido acético para dar un compuesto de color rojo. 2.2. Reactivos. 131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO 141156 Anilina PRS 2.2.1. Acido Acético glacial PA-ACS-ISO. 2.2.2. Anilina PRS recientemente destilada. Al destilar debe pasar, como mínimo, un 95% entre 183°C y 185°C. 2.3. Procedimiento. Poner 10 ml de destilación de ginebra (obtenido según el método oficial número 1) o la ginebra directamente, si no contiene ni extracto ni color, en un tubo de tapón esmerilado. Añadir 0,5 ml de Anilina PRS y 2 ml de Acido Acético glacial PA-ACSISO. Agitar. 2.4. Cálculo. Si antes de veinte minutos no aparece ninguna coloración rosa salmón, la muestra se considera exenta de furfurol.

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2.5. Referencia. 2.5.1. Codex Oenologique International. OIV. 3. EXTRACTO SECO 3.1. Principio. Evaporación de la muestra a 105°C y pesada posterior del residuo. 3.2. Material y aparatos. 3.2.1. Estufa de aire regulable de 95°C a 105°C. 3.2.2. Cápsulas de platino o cuarzo de fondo plano, de 77 mm de diámetro interno y 18 mm de altura. 3.2.3. Desecador de vidrio que contenga 141058 Acido Sulfúrico 95-98% (USP-NF,BP) PRSCODEX o 211335 Gel de Sílice 3-6 mm con indicador QP. 3.2.4. Baño de agua. 3.2.5. Balanza analítica. 3.3. Procedimiento. Medir 25 ml de muestra a 20°C. Evaporar a sequedad, en cápsulas correspondientes previamente desecadas y taradas, en baño de agua hirviente y mantener la estufa a 105°C durante treinta minutos. Dejar enfriar las cápsulas en el interior del desecador y una vez frías pesar en la balanza. 3.4. Cálculo. El valor del extracto total de la muestra, en gramos por litro, se hallará mediante la fórmula siguiente: Extracto total (g/l) = (M - m) x 40 Siendo: M = Peso en g de la cápsula con el extracto seco. m = Peso en g de la cápsula vacía. 3.5. Referencia. 3.5.1. Instituto Español de Normalización. UNE 33-106-74. 4. BASES NITROGENADAS 4.1. Principio. Fijación del amoníaco y las bases nitrogenadas mediante ácido fosfórico, seguida de una primera destilación. Liberación del amoníaco y las bases nitrogenadas con sodio hidróxido, segunda destilación y posterior valoración con ácido clorhídrico del segundo destilado. El límite de detección del método es de 1 mg/l.

4.2. Material y aparatos. 4.2.1. Matraz de 200 ml de capacidad. 4.2.2. Según (1.2.2.), (1.2.3.), (1.2.4.) y (1.2.5.). 4.3. Reactivos. 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 121660 Acido orto-Fosfórico 50% PA 131074 Agua PA-ACS 121086 Etanol absoluto PA 171617 Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS 171688 Sodio Hidróxido solución 10% p/v RE 4.3.1. Acido orto-Fosfórico 50% PA. 4.3.2. Sodio Hidróxido solución 10% p/v RE. 4.3.3. Solución de Acido Clorhídrico 0,01N. Diluir convenientemente Acido Clorhídrico 35% PAISO en Agua PA-ACS. 4.3.4. Solución de Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS, disolver con 50 ml de Etanol absoluto PA al 90% de volumen. 4.4. Procedimiento. En un matraz de 200 ml, introducir 50 ml de muestra, adicionar 40 ml de Agua PA-ACS y dos gotas de Acido orto-Fosfórico 50% PA; destilar y desechar los primeros 80 ml. Enfriar el matraz y al residuo frío adicionar 2 ml de Sodio Hidróxido solución 10% p/v RE (o 20 ml de solución de sodio hidróxido al 1%, si hay proyecciones). Destilar de nuevo recogiendo alrededor de 7 ml de destilado en un tubo de ensayo en el que previamente se han introducido 2 ml de Agua PA-ACS y una gota de solución de Rojo de Metilo, procurando que el destilado caiga en el fondo del tubo con la ayuda de una alargadera. Valorar a continuación con una solución de Acido Clorhídrico 0,01N hasta que el indicador vire a rojo. 4.5. Cálculo. Nitrógeno (mg de nitrógeno/litro) = 2,8 n. Siendo: n = volumen, en ml, de solución de ácido clorhídrico, 0,01N gastados en la valoración. 4.6. Referencia. 4.6.1. Codex Oenologique International. OIV, 1978, pág. 17. 5. ALCOHOLES SUPERIORES 5.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación de los alcoholes al etanol, por cromatografía de gases. 5.2. Material y aparatos. 5.2.1. Cromatógrafo de gases equipado con detector de ionización de llama.

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M
5.2.2. Columna cromatográfica. Columna de 4 m de longitud de 1/8” de diámetro interno rellena de Carbowax 1500 al 15% sobre Chromosorb W 80-100 mallas, lavado a los ácidos. 5.2.3. Microjeringas de 5 µl. 5.3. Reactivos. 5.3.1. Patrones cromatográficos: 353851 2-Butanol CG 351885 1-Propanol CG 354330 iso-Butanol CG 131082 1-Butanol PA-ACS-ISO 354539 2-Metil-1-Butanol CG 351079 3-Metil-1-Butanol CG 352516 4-Metil-2-Pentanol CG 5.3.2. Etanol pureza cromatográfica. 5.4. Procedimiento. 5.4.1. Condiciones cromatográficas. Las condiciones cromatográficas orientativas son : Gas portador nitrógeno 20 ml/min., temperatura del horno 85°C, temperatura del inyector y del detector 150°C. 5.4.2. Calibrado. 5.4.2.1. Patrón interno: Solución de 5 g/l en Etanol de 40° de 4-Metil-2-Pentanol. 5.4.2.2. Solución patrón: Preparar una solución en alcohol de 40° en las proporciones que se indican en la tabla 1. 5.4.2.3. Solución de calibrado: A 10 ml de la solución patrón (5.4.2.2.) se le añade 1 ml de la solución patrón interno (5.4.2.1.) y se inyecta 1µl en el cromatógrafo. 5.4.3. Muestra problema. A 10 ml de la muestra llevada a 40° se le añade 1 ml de patrón interno (5.4.2.1.) e inyectar un µl en las mismas condiciones en que se hizo para el calibrado. 5.5. Cálculo. Una vez identificados los picos por sus retenciones relativas al patrón interno se calculan los factores de respuesta para cada uno de ellos y las concentraciones en la muestra problema aplicando las fórmulas: Ap Factor de respuesta (Fr) = Ci x –––– Ai Aim Concentración en la muestra (mg/l) = Fr x ––––– x f Apm Siendo: Ci = concentración del compuesto en la solución patrón. Ap = área del patrón interno en la solución patrón. Ai = área del compuesto en la solución patrón. TABLA 1 –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– Compuesto Concentración (mg/l) –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– 2-Butanol 10 1-Propanol 125 2-Metil-1-Propanol 175 1- Butanol 15 2-Metil-1-Butanol 100 3-Metil-1-Butanol 300 –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– Aim = área del compuesto en la muestra problema. Apm = área del patrón interno en la muestra problema. f = factor de dilución de la muestra. El contenido en alcoholes superiores vendrá dado por la suma de los valores individuales obtenidos de cada uno de ellos y se expresará en mg/100 ml de alcohol absoluto. 5.6. Referencia. 5.6.1. Association of Official Agricultural Chemists 1980, 9075.

6. METANOL (Alcohol Metílico) 6.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación del metanol por cromatografía gaseosa. 6.2. Material y aparatos. Como en 5.2. 6.3. Reactivos 6.3.1. Metanol pureza cromatográfica 6.3.2. 4-Metil-2-Pentanol (patrón interno) 6.3.3. Etanol pureza cromatográfica 6.4. Procedimiento. 6.4.1. Condiciones cromatográficas. Como en 5.4.1. 6.4.2. Calibrado. 6.4.2.1. Patrón interno. Como en 5.4.2.1. 6.4.2.2. Solución patrón. Preparar una solución de Metanol pureza cromatográfica a 40°C, de concentración similar a la esperada en la muestra. 6.4.2.3. Solución de calibrado. A 10 ml de la solución patrón (6.4.2.2.) se le añade 1 ml de la solución del patrón interno (6.4.2.1.) y se inyecta 1 µl en el cromatógrafo. 6.4.3. Muestra problema. Como en 5.4.3.

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6.5. Cálculo. Como en 5.5. 6.6. Referencia. 6.6.1. Association of Official Agricultural Chemists 1980, 9075. 7. GRADO ALCOHOLICO 7.1. Principio. Se determina por destilación del producto y medida de la densidad del destilado por areometría. 7.2. Material y aparatos. 7.2.1. Aparatos de destilación como en 1.2. 7.2.2. Alcohómetro con graduación de 0,1°C de d 20/20 debidamente contrastado. 7.2.3. Termómetro con graduación de 0,1°C. 7.2.4. Probeta transparente de 36 mm de diámetro interior y 320 mm de altura. 7.2.5. Baño termostático a 20°C. 7.3 Procedimiento. 7.3.1. Obtención del destilado. Según método oficial número 1. 7.3.2. Determinación areométrica. Limpiar y secar el alcohómetro antes de su empleo. Echar el destilado en la probeta, inclinar a unos 45° para evitar la agitación y las burbujas. Tapar la probeta con la palma de la mano, e invertirla tres o cuatro veces para igualar las temperaturas de la probeta y del líquido. Dejar que el alcohómetro, termómetro, probeta y destilado, alcance en el baño termostatizado la temperatura de 20°C. Introducir el alcohómetro en el líquido de arriba a abajo cinco o seis veces, de manera que alcance la misma temperatura y que se distribuya cualquier cambio de temperaturas en todo el líquido. Mantener el bulbo del alcohómetro en el líquido, secar el vástago, dejarlo en reposo de modo que sólo unas pocas décimas de grados estén mojadas. Leer en el alcohómetro, luego en el termómetro. Para leer en la escala del alcohómetro situar el ojo justo debajo del plano de la superficie del líquido, levantar lentamente la cabeza manteniendo la visual perpendicular al alcohómetro, hasta que la superficie varíe de elipse a una línea recta. Anotar el punto en que esta línea intersecciona con la escala del alcohómetro, siendo ésta la lectura del alcohómetro. Levantarlo ligeramente por encima de dicha lectura y dejarlo en reposo de nuevo. Volver a leer en el alcohómetro y en el termómetro, comprobando así las primeras lecturas. Hacer la lectura del alcohómetro con aproximación de 0,05° y la del termómetro con 0,1°. Sacar el alcohómetro y secarlo. Invertir la probeta con la muestra varias veces (el termómetro queda en su sitio), para que se equilibre térmica-

mente todo el conjunto. Volver a atemperar el alcohómetro, secar el vástago y realizar nuevas lecturas en el alcohómetro y en el termómetro. Los valores calculados son válidos si tienen aproximación de 0,1 grado alcohólico, si no fuera así, realizar lecturas adicionales y calcular la media. 7.4. Cálculo. El grado alcohólico real es el leído en el destilado según 7.3.1. Si en la obtención del destilado, 100 ml de muestra se destilaron hasta 200 ml, la lectura obtenida, debe ser multiplicada por 2. 7.5. Referencia. 7.5.1. Association of Official Analytical Chemists. Edición 1980-9015-9 8. SACAROSA 8.1. Principio. La sacarosa se determina por la diferencia de los poderes reductores antes y después de la hidrólisis clorhídrica del líquido procedente de la defecación de la ginebra. 8.2. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 8.2.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 8.2.2. Sodio Hidróxido 12N. Diluir convenientemente Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS 8.3. Procedimiento. Poner en dos matraces Erlenmeyer de 200 ml cada uno, el mismo volumen del líquido defecado según el método oficial número 10. Añadir a cada matraz 0,3 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACSISO por cada 10 ml de líquido defecado. En uno de los matraces, añadir inmediatamente 0,3 ml de Sodio Hidróxido 12N, por cada 10 ml de líquido defecado, procediendo a la valoración de los azúcares reductores, según el método oficial número 10. Llevar el otro matraz con el contenido sin neutralizar a baño de agua hirviendo durante tres minutos. Añadir entonces el mismo volumen de Sodio Hidróxido 12N que al otro matraz y valorar como en el caso anterior. 8.4. Cálculo. La diferencia entre las cantidades de azúcares reductores encontrada en los resultados de estas dos valoraciones, multiplicadas por 0,95, da la riqueza en sacarosa de la muestra de estudio.

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M
Este resultado se expresa en g/l de ginebra, teniendo presentes las diluciones efectuadas eventualmente en el curso de la defecación y del volumen de la muestra de ginebra que se sometió a la defecación. 8.5. Referencia. 8.5.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des Vins. OIV, A5, 4. 1968. 9. ACIDEZ TOTAL 9.1. Principio. La acidez total de la ginebra se considera como la suma de los ácidos titulables cuando se lleva la ginebra a pH=7 por adición de un licor alcalino valorado. El ácido carbónico no se considera comprendido en la acidez total. El gas carbónico se elimina previamente de la ginebra por agitación en frío y con vacío parcial. 9.2. Material y aparatos. 9.2.1. Potenciómetro con electrodo de vidrio. 9.2.2. Agitador magnético 9.2.3. Kitasato de un litro. 9.3. Reactivos 131074 Agua PA-ACS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 9.3.1. Disolución de Sodio Hidróxido 0,01N recientemente preparada. 9.4. Procedimiento. Poner 150 ml de ginebra en un Kitasato de 1 l de capacidad, conectar al vacío agitando al mismo tiempo el matraz. El desprendimiento de CO2 se aprecia a los pocos momentos. Observar atentamente el momento en que dejan de desprenderse las burbujas, desconectar del vacío. Tomar 100 ml de la ginebra sin CO2 y llevar a un vaso de unos 250 ml de capacidad, introducir el electrodo del vidrio en la ginebra. Poner en marcha el agitador procurando que no se formen burbujas y añadir desde bureta solución de Sodio Hidróxido (9.3.1.) a la ginebra hasta que la aguja del potenciómetro marque pH=7, manteniendo el agitador en marcha durante la operación, que no debe durar más de cinco minutos. 9.5. Cálculo. Calcular la acidez total expresada en meq/l con una aproximación de 0,1 meq/l o en mg de ácido acético. Acidez total = 6 v mg ácido acético /l v = volumen en ml de sodio hidróxido 0,01N. 9.6. Referencias. 9.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des Vins. OIV, A 10, 1 3, 1969. 9.6.2. Jaulmes, P.: “La mesure de l’acidité total des Vins”. Annal des Falsifications et des Fraudes, 556, 1955. 10. MATERIAS REDUCTORAS (Azúcares reductores) 10.1. Principio. Eliminación previa de todas las materias reductoras distintas de los azúcares por defecación y posterior valoración basada en la acción reductora de los azúcares sobre una solución cupro-alcalina. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Erlenmeyer de 300 ml con refrigerante de reflujo. 10.2.2. Material necesario para volumetría. 10.2.3. Baño de agua. 10.3. Reactivos. 131808 Acido Cítrico anhidro PA-ACS 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 121212 Calcio Carbonato precipitado PA 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 211835 Piedra Pómez gránulos QP 131466 Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 122032 Sodio Carbonato 1-hidrato PA 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO 181691 Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV 181723 Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV 10.3.1. Solución de Plomo II Acetato 3-hidrato (aproximadamente saturada). Añadir a 250 g de Plomo II Acetato 3-hidrato PA-ACS-ISO Agua PAACS caliente hasta 0,5 l y agitar hasta disolución completa. 10.3.2. Sodio Hidróxido 1 mol/l (1N) SV. 10.3.3. Calcio Carbonato precipitado PA. 10.3.4. Solución cupro-alcalina. Disolver por separado: 25 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PAACS-ISO en 100 ml de Agua PA-ACS; 50 g de Acido Cítrico anhidro PA-ACS en 300 ml de Agua PAACS y 388 g de Sodio Carbonato 1-hidrato PA en 300-400 ml de Agua PA-ACS caliente. Mezclar la solución de Cobre Sulfato y completar el volumen con Agua PA-ACS hasta 1 l. 10.3.5. Solución de Potasio Yoduro al 30%. Diluir convenientemente Potasio Yoduro PA-ISO en Agua PA-ACS. Conservar el frasco en topacio. 10.3.6. Solución de Acido Sulfúrico 25% en volumen. Diluir convenientemente Acido Sulfúrico 96% PA-ISO en Agua PA-ACS.

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10.3.7. Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV. 10.3.8. Engrudo de almidón de 5 g/l; contendrá 200 g/l de Sodio Cloruro PA-ACS-ISO para asegurar su conservación. Esta solución debe ser mantenida diez minutos en ebullición en el momento de su preparación. 10.4. Procedimiento. 10.4.1. Defecación plúmbica. Llevar 100 ml de ginebra a un matraz aforado de 125 ml. Añadir agitando 5 ml de solución saturada de Plomo II Acetato 3-anhidro PA-ACS-ISO y 1 g de Calcio Carbonato precipitado PA, agitar varias veces y dejar sedimentar, por lo menos quince minutos, enrasar con Agua PA-ACS, añadir 0,6 ml más de agua y filtrar. 10.4.2. Valoración. Poner en el Erlenmeyer de 300 ml 25 ml de la solución cupro-alcalina y 25 ml de ginebra previamente defecado. Añadir unos gramos de Piedra Pómez QP y llevar a ebullición, que debe ser alcanzada en dos minutos, adaptando el Erlenmeyer al refrigerante de reflujo y mantener exactamente durante diez minutos la ebullición. Enfriar inmediatamente bajo corriente de agua fría. Añadir 10 ml de la solución de Potasio Yoduro al 30%, 25 ml de la solución de Acido Sulfúrico al 25% y 2 ml de Engrudo de Almidón. A continuación
ml sodio tiosulfato 0,1N

valorar con Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV. Efectuar una prueba en blanco, sustituyendo los 25 ml de muestra, por igual volumen de Agua PAACS y tratar como se ha indicado para la muestra. 10.5. Cálculo. La cantidad de azúcar, expresada en azúcares reductores contenida en la muestra analizada, se obtiene en la tabla adjunta en función del número n’-n de ml de tiosulfato utilizado. Siendo: n = volumen, en ml, de solución de sodio tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) utilizados en la valoración de la muestra. n’ = volumen, en ml, de solución de sodio tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) utilizados para la prueba en blanco. Expresar el contenido en gramos de azúcares reductores por litro, teniendo en cuenta las diluciones efectuadas en el curso de la defecación del volumen de la muestra analizada. 10.6. Referencia. 10.6.1. Recueil des Méthodes Internationales d’Analyses des Vins. OIV, A4e, 106-107 (defecación) y 126-127 (valoración).

Primera cifra decimal 0 0,0 3,2 6,4 9,7 13,0 16,4 19,8 23,2 26,6 30,0 33,4 36,8 40,3 43,8 47,3 50,8 54,3 58,0 61,8 65,5 69,4 73,3 77,2 81,2 85,2 89,2 1 0,3 3,5 6,7 10,0 13,3 16,7 20,1 23 5 26,9 30,3 33,7 37,2 40,7 44,2 47,7 51,2 54,7 58,4 62,2 65,9 69,8 73,7 77,6 81,6 85,6 89,6 2 0,6 3,8 7,1 10,4 13,7 17,1 20,5 23,9 27,3 30,7 34,1 37,5 41,0 44,5 48,0 51,5 55,0 58,8 62,5 66,3 70,2 74,1 78,0 82,0 86,0 90,0 3 1,0 4,2 7,4 10,7 14,0 17,4 20,8 24,2 27,6 31,0 34,4 37,9 41,4 44,9 48,4 51,9 55,4 59,1 62,9 66,7 70,6 74,5 78,4 82,4 86,4 90,4 4 1,3 4,5 7,7 11,0 14,4 17,8 21,2 24,6 28,0 31,3 34,8 38,2 41,7 45,2 48,7 52,2 55,8 59,5 63,3 67,1 71,0 74,9 78,8 82,8 86,8 90,8 5 1,6 4,8 8,1 11,4 14,7 18,1 21,5 24,9 28,3 31,7 35,1 38,6 42,1 45,6 49,1 52,6 56,2 59,9 63,7 67,5 71,4 75,3 79,2 83,2 87,2 91,2 6 1,9 5,1 8,4 11,7 15,0 18,4 21,8 25,2 28,6 32,0 35,4 38,9 42,4 45,9 49,4 52,9 56,5 60,3 64,0 67,8 71,7 75,6 79,6 83,6 87,6 91,6 7 2,2 5,4 8,7 12,0 15,4 18,8 22,2 25,6 29,0 32,4 35,8 39,3 42,8 46,3 49,8 53,3 56,9 60,7 64,4 68,2 72,1 76,0 80,0 84,0 88,0 92,0 8 2,6 5,7 9,0 12,3 15,7 19,1 22,5 25,9 29,3 32,7 36,1 39,6 43,1 46,6 50,1 53,6 57,3 61,0 64,8 68,6 72,5 76,4 80,4 84,4 88,4 92,4 9 2,9 6,1 9,4 12,7 16,1 19,5 22,9 26,3 29,7 33,0 36,5 40,0 43,5 47,0 50,5 54,0 57,6 61,4 65,1 69,0 72,9 76,8 80,8 84,8 88,8 92,8

162

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25

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11. PLOMO 11.1. Principio Determinación del plomo A.A., previa mineralización de la muestra. 11.2. Material y aparatos. 11.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 11.2.2. Lámpara de plomo. 11.2.3. Cápsulas de platino, cuarzo o similar. 11.2.4. Baño de arena o placa calefactora con regulación de temperatura o estufa con control de temperatura en el rango de 50 a 150°C. 11.2.5. Mufla. Conveniente tenerla dentro de vitrina de extracción de humos. 11.2.6. Matraces de 10, 100 y 1.000 ml de capacidad. 11.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313189 Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA 11.3.1. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 11.3.2. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO. 11.3.3. Acido Nítrico al 1% en Agua PA-ACS. 11.3.4. Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,598 g de 131473 Plomo II Nitrato PA-ACS enrasando a 1.000 ml con Acido Nítrico al 1%. 11.4 Procedimiento. 11.4.1. Preparación de la muestra. Poner 100 ml de la muestra en la cápsula (11.2.3.) llevarla a evaporación hasta consistencia siruposa en baño de arena (11.2.4.). Añadir a continuación 2 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y carbonizar el residuo en el baño de arena o placa. Seguidamente introducir la cápsula en la mufla y mantenerla durante dos horas a 450°C, transcurrido dicho tiempo, sacarla y dejarla enfriar. Añadir 1 ml de Agua PA-ACS, evaporar en el baño de arena o placa e introducir en la mufla, repitiendo esta operación hasta obtener cenizas blancas. Un ligero color marrón-rojizo en las cenizas (posiblemente de Fe2O3) es aceptado y no requiere un tratamiento posterior. Disolver a continuación las cenizas con 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 2 ml de Agua PAACS. Llevar la solución a un matraz de 10 ml, lavar la cápsula con Agua PA-ACS y añadir las aguas del lavado hasta el enrase, filtrando posteriormente. 11.4.2. Construcción de la curva patrón. Diluir alícuotas apropiadas de la solución patrón (11.3.4.) con Acido Nítrico al 1% (v/v) para obtener una curva de concentraciones 2, 4, 6, 8 y 10 mg/l. 11.4.3. Determinación. Operar según las especificaciones del aparato, usando llama de aire-acetileno. Medir las absorbancias de la muestra y patrones a 283 nm. Si la solución está muy concentrada diluirla con Acido Nítrico al 1%. 11.5. Cálculo. Calcular el contenido en plomo, expresado en mg/l mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuente el factor de concentración o dilución. 11.6. Referencia. 11.6.1. Métodos Oficiales de Análisis de Vinos. Ministerio de Agricultura, pág. 134 (I), 1976. 12. ZINC 12.1. Principio. Determinación del zinc por A.A. previa mineralización de la muestra. 12.2. Material y aparatos. 12.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 12.2.2. Lámpara de zinc. 12.2.3. Los utilizados para el Pb en (11.2.3.), (11.2.4.) (11.2.5.) y (11.2.6.) 12.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313193 Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA 12.3.1. Los utilizados para el plomo en (11.3.1.), (11.3.2.) y (11.3.3.) 12.3.2. Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de 141782 Zinc metal granalla PRS en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico (1:1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico del 1 % (v/v). 12.4. Procedimiento. 12.4.1. Preparación de la muestra. Como en (11.4.1.). 12.4.2. Construcción de la curva patrón. Diluir partes alícuotas de la solución patrón (12.3.2.), con Acido Nítrico al 1% para obtener soluciones de 0,5; 1; 1,5 y 2 mg/l. 12.4.3. Determinación. Igual que para el plomo. La lectura se efectuará a 213,8 nm. 12.5 Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancias obtenidos, hallar las concentraciones de Zn para la muestra, teniendo en cuenta el factor concentración o dilución.

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12.6. Referencia. 12.6.1. H. E. Parker. Atomic Absorption Newsletter (1963), 13. 13. COBRE 13.1. Principio. Determinación del cobre por A.A., mineralización por cenizas a ≤ 450°C y concentración previa a la lectura con objeto de conseguir resultados suficientemente precisos. 13.2. Material y aparatos. 13.2.1. Espectrofotómetro de A.A. 13.2.2. Lámpara de cobre. 13.2.3. Los utilizados para el plomo, en (11.2.3.), (11.2.4.), (11.2.5.) y (11.2.6.). 13.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313178 Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA 13.3.1. Los utilizados para el plomo en (11.3.1.), (11.3.2.) y (11.3.3.) 13.3.2. Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de Cobre puro en el mínimo volumen necesario de HNO3 (1:1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico del 1 % (v/v). 13.4. Procedimiento. 13.4.1. Preparación de la muestra. Como en (11.4.1.). 13.4.2. Construcción de la curva patrón. Diluir partes alícuotas de la solución patrón (13.3.2.), con Acido Nítrico del 1% para obtener soluciones que contengan de 1 a 5 mg de Cobre/l. 13.4.3. Determinación. Igual que para el plomo. Medir a 324,7 nm. 13.5 Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos para la muestra, hallar mediante la curva patrón las concentraciones de cobre de la muestra. 13.6 Referencias. 13.6.1. H. E. Parker: “Atomic Absorption Newsletter (1963),13” 13.6.2 F. Rousselet: “Spectrophotometrie par absorption atomique Boudin”. Ed Paris (1968), pág. 59-144

14. ARSENICO 14.1. Principio. La muestra se somete a una digestión ácida con una mezcla de ácido nítrico y sulfúrico. La determinación del arsénico se realiza por espectrofotometría de absorción atómica, con generador de hidruros. 14.2. Material y aparatos. 14.2.1. Balanzas con exactitud de 0,001 g de 0,1 g. 14.2.2. Matraces aforados de 50 y 100 ml de capacidad. 14.2.3. Pipetas de doble aforo. 14.2.4. Matraces Kjeldahl de 250 ml. 14.2.5. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con sistema generador de hidruros. 14.2.6. Lámpara de descarga sin electrodos. 14.2.7. Fuente de alimentación para lámpara de descarga sin electrodos. 14.2.8. Registrador gráfico. 14.3. Reactivos. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131669 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313171 Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA 131515 Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO 123314 Sodio Borohidruro PA 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 14.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 14.3.2. Disolución de Acido Clorhídrico. Disolver 32 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.3. Disolución de Acido Clorhídrico. Disolver 15 ml de Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 1.000 ml. 14.3.4. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO 14.3.5. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 14.3.6. Disolución de Sodio Hidróxido al 1%. Pesar 1 g de Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.7. Disolución de Sodio Borohidruro al 3%. Pesar tres gramos de Sodio Borohidruro y disolverlo hasta 100 ml con Sodio Hidróxido al 1%. 14.3.8. Disolución al 1 % de Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO. Pesar 1 g de Acido Etilendiaminotetra-acético PAACS-ISO y disolverlo hasta 100 ml con Agua PAACS. 14.3.9. Disolución de Potasio Hidróxido al 20%. Pesar 20 g de Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-

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ISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.10. Disolución de Acido Sulfúrico al 20% (v/v). Diluir 20 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO (14.3.5) con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.11. Disolución de Acido Sulfúrico al 1% (v/v). Diluir 1 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 14.3.12. Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA o disolver 0,132 g de 241151 Arsénico III Oxido EQP-ACS en 2,5 ml de Potasio Hidróxido al 20% (14.3.9.), neutralizar con Acido Sulfúrico al 20% (14.3.10.), diluir hasta 100 ml con Acido Sulfúrico 1% (14.3.11.). 14.3.13. Solución patrón de Arsénico de concentración 10 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución patrón de Arsénico (14.3.12.), en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 14.3.14. Solución patrón de Arsénico de concentración 0,1 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución de Arsénico (14.3.13.), en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 14.4. Procedimiento. 14.4.1. Preparación de la muestra. En un matraz Kjeldahl, de 250 ml introducir 10 ml de muestra con 20 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 5 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. Llevar a ebullición hasta reducir el volumen a 5 ml. Dejar enfriar y disolver con Agua PA-ACS en un matraz de 50 ml la solución resultante. 14.4.2. Preparación del blanco y patrones de trabajo. En un matraz Kjeldahl, introducir 5 ml de la solución de Arsénico (14.3.14.) y someterlo al mismo tratamiento que la muestra. 1 ml de la solución contiene 10 nanogramos de Arsénico. Preparar un blanco con todos los reactivos utilizados siguiendo el tratamiento dado a la muestra. 14.4.3. Condiciones del espectrofotómetro. Encender la fuente de alimentación de las lámparas de descarga sin electrodos con el tiempo suficiente para que se estabilice la energía de la lámpara. Encender el espectrofotómetro, ajustar la longitud de onda a 193,7 nm, colocando la rejilla de acuerdo con las condiciones del aparato. Encender el generador de hidruros, colocando la temperatura de la celda a 900°C, esperando hasta que se alcance dicha temperatura. Se ajustan las condiciones del generador de hidruros según las especificaciones del aparato. Ajustar el flujo de Argón de acuerdo con las características del aparato. Encender el registrador. 14.4.4. Determinación.- Las determinaciones de la concentración de Arsénico se realizan por el método de adición de patrones, por medio de medidas duplicadas en el espectrofotómetro en las condiciones especificadas en (14.4.3.), añadiendo al matraz de reacción 3 ml de la solución (14.4.1.), más 3 ml de la solución (14.3.2.), y 10 ml de la solución (14.3.8.). Como patrones internos se usan 10, 20 y 50 ng de Arsénico. Lavar los matraces antes y después de cada uso, con Acido Clorhídrico (14.3.3.). Al construir la gráfica de adición hay que descontar el valor de absorbancia del blanco obtenido en las mismas condiciones anteriores, pero añadiendo 3 ml de la solución blanco. En estas condiciones el límite de detección de la técnica es de 5 ng.

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Aguardientes compuestos: Anís

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1. OBTENCION DEL DESTILADO 1.1. Principio. Destilación de la muestra en condiciones determinadas. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Matraz de 500 a 1.000 ml de capacidad de fondo redondo y boca esmerilada. 1.2.2. Alargadera tipo Kjeldahl o similar. 1.2.3. Refrigerante tipo Dimroth (20-30 cm de longitud) o similar. 1.2.4. Matraces aforados de 100 y 200 ml de capacidad. 1.2.5. Manta eléctrica o mechero de gas. 1.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 1.3.1. Agua PA-ACS 1.4. Procedimiento. 1.4.1. Muestras con menos del 60% de Etanol. Medir 200 ml de muestra en un matraz aforado que antes de enrasar se mantiene en baño de agua a 20°C durante media hora. Enrasar con pipeta, limpiando el interior del cuello del matraz de posibles gotas adheridas con papel de filtro. Debe evitarse que queden burbujas de aire adheridas a las paredes del matraz. Pasar cuantitativamente el volumen medido al matraz de destilación, lavando tres veces consecutivas el matraz aforado de 200 ml con 20 ml de Agua PA-ACS cada vez, añadiendo las aguas del lavado al matraz de destilación. Cuando se trate de bebidas siruposas, por su gran contenido en azúcar, el lavado debe efectuarse consecutivamente con tres porciones de 50 ml de Agua PA-ACS. Proceder a la destilación. Es conveniente añadir bolitas de vidrio para facilitar la ebullición suave. En algunos casos, si se teme la formación de espuma, añadir un antiespumante inerte (como silicona). El matraz de recogida del destilado es el mismo en que se efectuó la medida. Se le añaden 10 ml de Agua PA-ACS y se dispone ligeramente inclinado, de forma que el destilado resbale sin salpicadura por la pared del matraz, que debe estar dentro de un baño de hielo o agua fría, a menos de 1°C. El refrigerante debe ir dotado de una alargadera que penetra por lo menos 4-5 cm en el cuello del matraz. Cuando se hayan recogido aproximadamente 190 ml, llevar el matraz tapado al baño de agua a 20°C. Cuando se alcance dicha temperatura, dentro del mismo baño, enrasar con Agua PA-ACS mediante pipeta. Tapar el matraz e invertirlo varias veces para homogeneizar su contenido antes de proceder a la determinación del etanol. 1.4.2. Muestras con más del 60% del Etanol. El procedimiento anteriormente descrito difiere únicamente en que la muestra se mide en matraz aforado de 100 ml, que se lava varias veces con Agua PA-ACS hasta alcanzar un volumen de aproximadamente 230 ml. El destilado se recoge en matraz aforado de 200 ml, y se enrasa con Agua PA-ACS dentro del baño de agua a 20°C. 1.5. Observaciones. 1.5.1. El sistema de destilación debe comprobarse en ambos caso como sigue: Destilar 200 ml de una mezcla hidroalcohólica al 10 por 100 en volumen cinco veces sucesivas. Determinar en la última destilación el título alcohométrico del destilado, que no debe ser menor del 9,9% en volumen de etanol. 1.5.2. La destilación debe efectuarse procurando que el flujo del destilado sea uniforme. 1.5.3. El tiempo de recogida del destilado estará comprendido entre 45 y 90 minutos. 1.5.4. El destilado podrá tener aspecto lechoso como consecuencia de la emulsión de los aceites esenciales. 1.6. Referencias. 1. Métodos Oficiales de análisis del ron, ginebra y whisky. 2. PESO ESPECIFICO DEL ACEITE ESENCIAL NATURAL (En materia prima)

2.1. Principio. Se basa en la determinación de la densidad relativa del aceite esencial respecto al agua a la misma temperatura. Se determinará esta densidad relativa a 25°C para evitar la posible solidificación de la muestra. 2.2. Material y aparatos. 2.2.1. Baño de agua termostatizado a 25 ± 0,1°C. 2.2.2. Picnómetro de 50 ml, según figura adjunta (fig. 2.1.). 2.2.3. Termómetro de 10°C- 30°C, graduado en décimas de grado. 2.2.4. Tubo capilar. 2.2.5. Balanza analítica. 2.3. Procedimiento. 2.3.1. Llenar completamente el picnómetro con agua recientemente destilada, tapar y colocar en 2.2.1., de forma que el nivel del agua del baño esté ligeramente por encima del nivel de enrase del picnómetro.

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2.3.2. Después de treinta minutos quitar el tapón y con 2.2.4. ajustar el nivel del agua hasta que la parte inferior del menisco sea tangente con la señal de enrase del picnómetro. 2.3.3. Sacar el picnómetro del baño. Con un pequeño rollo del papel de filtro secar el interior del cuello del picnómetro y el tapón. Introducirlo en baño a temperatura ambiente durante quince minutos para acelerar la atemperación del líquido. Pasado este tiempo sacar el picnómetro del baño, secarlo cuidadosamente, dejarlo otros quince minutos a temperatura ambiente y pesar. 2.3.4. Vaciar el picnómetro, enjuagar con acetona y secar completamente con corriente de aire. Dejar quince minutos a temperatura ambiente, tapar y pesar. Según lo descrito: Pa = Peso aparente del agua = Peso del picnómetro lleno - Peso del picnómetro vacío. 2.3.5. Del mismo modo que con el agua, se procede con el líquido problema, siendo: Pw = Peso del picnómetro lleno - Peso del picnómetro vacío.

2.4. Cálculos: Pa Peso específico : P 25/25 = ––––– Pw 2.5. Observaciones. Para evitar la solidificación de la muestra, es conveniente que la temperatura de la habitación esté próxima a los 25° C. 2.6. Referencias. 1. Official Methods of Analysis of the AOAC, 13ª edición, 1984 : 9.020-9.022. 3. PUNTO DE FUSION DEL ACEITE ESENCIAL NATURAL (En materia prima) 3.1. Principio. Observación, con un sistema adecuado, de la temperatura a la que se produce la fusión del aceite esencial, previamente congelado. Como el aceite esencial no es un compuesto puro, no tendrá punto de fusión fijo, sino que fundirá en un rango determinado desde que se observan los primeros síntomas en los cristales hasta que la muestra se vuelve completamente líquida. 3.2. Material y aparatos. 3.2.1. Agitador. 3.2.2. Termómetro de 10°C- 30°C, graduado en décimas de grado. 3.2.3. Tubos capilares de vidrio. 3.2.4. Lupa o lente de aumento. 3.2.5. Vaso de precipitado de 1.000 ml, forma baja. 3.3. Procedimiento. Se dispone de un sencillo sistema de medida consistente en un agitador magnético con placa de calefacción variable, un vaso de precipitado de 600 ml, un termómetro y una lupa. Preparar un tubo capilar cerrado en su extremo, donde se hace llegar una gota del aceite esencial con la ayuda de otro tubo capilar más fino. Introducir la punta del tubo capilar en un baño de hielo, durante dos horas, para que se congele. Llevar el vaso aproximadamente a la mitad con agua destilada e introducir la punta del capilar y el termómetro de forma que queden al menos 30 milímetros por debajo de la superficie. Empezando 8-10°C por debajo del punto de fusión de la muestra, calentar suavemente para incrementar la temperatura del baño 0,5°C/minuto, aproximadamente, agitando simultáneamente el agua del baño con ayuda del agitador. Anotar la temperatura a la que se produce la fusión completa de la muestra, que se observará con la ayuda de una lupa o lente de aumento.

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Figura 2.l

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3.4. Resultado. El punto de fusión del aceite esencial será la media aritmética de tres determinaciones sucesivas que deberán coincidir en un rango de 0,5°C. 3.5. Referencias. 1. Official Methods of Analysis of the AOAC, 14ª edición, 1984: 28.014. 4. GRADO ALCOHOLICO 4.1. Principio. Destilación del producto y posterior medida de la densidad del destilado por areometría. 4.2. Material y aparatos. 4.2.1. Aparato de destilación como en el Método Oficial número 1. 4.2.2. Alcohómetro graduado en décimas de grado de d 20/20, debidamente contrastado. 4.2.3. Termómetro graduado en décimas de grado centígrado. 4.2.4. Probeta transparente de 36 mm de diámetro interior y 320 mm de altura. 4.2.5. Baño termostático a 20°C. 4.3. Procedimiento. 4.3.1. Obtención del destilado: Según Método Oficial número 1. 4.3.2. Determinación areométrica: Limpiar y secar el alcohómetro antes de su empleo. Verter el destilado debidamente homogeneizado en la probeta. Introducir el alcohómetro y el termómetro en el líquido. Esperar veinte minutos para que el termómetro, el alcohómetro y el destilado adquieran la temperatura del baño termostático. Alcanzada esta temperatura, sacar el termómetro, secar el vástago del alcohómetro y dejarlo introducir en el destilado con un ligero movimiento de rotación. Anotar el grado alcohólico leído. Repetir estas operaciones varias veces. Las lecturas obtenidas son válidas si tienen aproximación de 0,1 grados alcohólicos. Si no fuera así, realizar lecturas adicionales y calcular la media. 4.4. Cálculos. El grado alcohólico es la lectura obtenida en 4.3.2., expresada en grados y décimas de grado de alcohol. Si en la obtención del destilado 100 ml de muestra se destilaron a 200 ml, la lectura hay que multiplicarla por dos. Nota: No quedando claro el párrafo anterior, interpretamos: En el caso de muestras de más de 60% de alcohol, sólo se toman 100 ml que se diluyen a 200 ml por lo cual, hay que multiplicar la lectura por dos. 4.5. Referencias. 1. Official Methods of Analysis of the AOAC, 14ª edición, 1984 : 9.023-9.024. 5. AZUCARES TOTALES 5.1. Principio. Dilución previa de la muestra, inversión y posterior valoración basada en la acción reductora de los azúcares sobre una solución cuproalcalina. 5.2. Material y aparatos. 5.2.1. Erlenmeyer de 250 ml con boca esmerilada. 5.2.2. Refrigerante de reflujo de 30 cm de longitud útil. 5.2.3. Material necesario para volumetría. 5.2.4. Baño de agua con termostato. 5.3. Reactivos. 131018 Acido Cítrico 1-hidrato PA-ACS-ISO 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 141270 Cobre II Sulfato 5-hidrato (USP, BP) PRS-CODEX 171327 Fenolftaleína solución 1% RE 131542 Potasio Yoduro PA-ISO 121647 Sodio Carbonato 10-hidrato PA 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 181693 Sodio Hidróxido 0,1mol/l (0,1N) SV 181723 Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV 5.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO. 5.3.2. Solución de Sodio Hidróxido 12N, preparada a partir de Sodio Hidróxido lentejas PA-ACSISO y Agua PA-ACS. 5.3.3. Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV. 5.3.4. Solución cuproalcalina: Disolver por separado 25 g de Cobre II Sulfato 5hidrato (USP,BP) PRS-CODEX (SO4Cu.5H2O) en 100 ml de Agua PA-ACS, 50 g de Acido Cítrico 1-hidrato PA-ACS-ISO en 300 ml de Agua PA-ACS y 388 g de Sodio Carbonato 10-hidrato PA en 300-400 ml de agua caliente. Mezclar cuidadosamente las soluciones de Acido Cítrico y Sodio Carbonato. Añadir enseguida la solución de Cobre Sulfato y llevar a un litro. 5.3.5. Solución de Potasio Yoduro al 30% (p/v), preparada a partir de Potasio Yoduro PA-ISO y Agua PA-ACS.

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Conservar en frasco topacio. Es aconsejable no preparar más de lo que se vaya a consumir diariamente. 5.3.6. Solución de Acido Sulfúrico al 25% en volumen, preparada a partir de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO. 5.3.7. Engrudo de almidón de 5 g/l. Para preparar esta solución mantenerla en ebullición durante diez minutos. Añadir 200 g de Sodio Cloruro PAACS-ISO por litro para asegurar su conservación. 5.3.8. Solución de Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV. 5.4. Procedimiento. Pipetear 10 ml de anís ( o el volumen adecuado en función del contenido en azúcares) en un matraz de 500 ml, enrasándose con Agua PA-ACS (solución A). En un matraz de 200 ml se pipetean 25 ml de la solución A, enrasándose con Agua PA-ACS. Se realiza la inversión de la forma siguiente: En un matraz de 50 ml pipetear 20 ml de solución B. Se añaden 3 ml de Acido Clorhídrico 37% PAACS-ISO, llevándose durante cinco minutos a un baño a 75°C. Se saca y se deja enfriar. Se añade Fenolftaleína solución 1% RE y se neutraliza con solución de Sodio Hidróxido 12N hasta cerca del punto de viraje y posteriormente con solución de Sodio Hidróxido 0,1 mol/l (0,1N) SV hasta viraje. Se enrasa con Agua PA-ACS y se procede al análisis de los azúcares reductores totales (solución M). En un Erlenmeyer se ponen 25 ml de la solución cuproalcalina y 25 ml de la solución M, se somete a ebullición con refrigerante de reflujo manteniendo la ebullición diez minutos; se enfría rápidamente, se añaden 2 ml de almidón, 10 ml de solución de Potasio Yoduro y 25 ml de Acido Sulfúrico al 25%, valorándose inmediatamente con solución de Sodio Tiosulfato 0,1 mol/l (0,1N) SV. Se repite la valoración con un blanco, sustituyendo los 25 ml de solución M por 25 ml de Agua PA-ACS. 5.5. Cálculos. Sea D la diferencia entre lo gastado por el blanco y lo gastado por la muestra. La concentración de azúcares totales en la muestra se obtiene a partir del valor D en la tabla, interpolando en cada caso necesario y multiplicando el valor obtenido por 40 (factor de dilución). Concentración azúcares totales gramos/litros = Valor obtenido en tabla x 40. 5.6. Observaciones. 5.6.1. En el caso de haber tomado un volumen

distinto de anís, tener en cuenta para los cálculos el factor de dilución. 5.7. Referencias 1. Recueil des méthodes internationales d'analyse des vins OIV A4-126-127.

–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– D = ml Mg Diferencia de tiosulfato –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– 1 2,4 2,4 2 4,8 2,4 3 7,2 2,5 4 9,7 2,5 5 12,2 2,5 6 14,7 2,6 7 17,2 2,6 8 19,8 2,6 9 22,4 2,6 10 25,0 2,6 11 27,6 2,7 12 30,3 2,7 13 33,0 2,7 14 35,7 2,7 15 38,5 2,8 16 41,3 2,9 17 44,2 2,9 18 47,1 2,9 19 50,0 3,0 20 53,0 3,0 21 56,0 3,0 22 59,1 3,1 23 62,2 –– –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– 6. ANETOL 6.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación del anetol por cromatografía de gases. 6.2 Material y aparatos. 6.2.1. Cromatógrafo de gases equipado con detector de ionización de llama. 6.2.2. Columna de acero inoxidable de 3 m de longitud de 1/8 pulgadas de diámetro interno, rellena de SE 52 al 4% sobre Chromosob. AW. DMCS, de 100-120 mallas. 6.2.3. Microjeringa de 1 µl. 6.3. Reactivos. 131074 Agua PA-ACS 121086 Etanol absoluto PA 142961 L(-)-Mentol (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX Trans-anetol

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M
6.3.1. Trans-anetol patrón con un contenido en cis-anetol menor de 0,5%. 6.3.2. L(-)-Mentol (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX 6.3.3. Etanol absoluto PA. 6.4. Procedimiento. 6.4.1. Curva de calibrado. 6.4.1.1. Patrón interno. Pesar 0,25 g de L(-)-Mentol (USP, BP, F. Eur.) PRS-CODEX y llevar a un matraz aforado de 100 ml, disolver en 40 ml de Etanol absoluto PA y enrasar con Agua PA-ACS. 6.4.1.2. Solución patrón. Pesar 1 g de anetol y disolver en 400 ml de Etanol absoluto PA, enrasar a 1 litro con Agua PA-ACS. Ese patrón debe estar en el momento de su utilización recientemente preparado. 6.4.1.3. Solución de calibrado. A partir de la solución 6.4.1.2. preparar soluciones que contengan 0,1; 0,25; 0,50; 0,75 y 1 g/l en alcohol de 40°C. A 100 ml de estas soluciones se le añade 5 ml de la solución 6.4.1.1. Estas soluciones se inyectan en el cromatógrafo obteniendo la curva de calibrado, representándose: Area del Patrón ––––––––––––––––––––– frente a concentraciones. Area del patrón interno 6.4.2. Condiciones cromatográficas aproximadas. Temperatura del horno: 130°C. Temperatura del inyector: 220°C. Temperatura del detector: 220°C. 6.4.3. Preparación de la muestra: Tomar 100 ml del destilado, según método 1. Añadir 5 ml de patrón interno e inyectar en el cromatógrafo. 6.5. Cálculos. Aim 6.5.1. Calcular la relación –––– y llevar a la curva Apm de calibrado, obteniéndose el valor de la concentración de anetol en la muestra problema. 6.5.2. También se puede emplear un patrón de concentración fija de anetol, calculándose el factor de respuesta y la concentración de la muestra aplicando las fórmulas siguientes: Ap Fr = Ci –––– Ai Aim Concentración de la muestra g/l = Fr x –––– x f Apm Siendo : Ci = Concentración del anetol en la solución patrón, que será similar a la esperada en la muestra problema. Ap = Area del patrón interno en la solución patrón. Ai = Area del anetol en la solución patrón. Aim = Area del anetol en la muestra problema. Apm = Area del patrón interno en la muestra problema. F = Factor de dilución de la muestra. Se debe realizar el cálculo de la concentración en anetol de la muestra con un patrón de riqueza aproximada a la esperada. En caso de no conocerse ésta, se debe efectuar una inyección previa para fijar el nivel de anetol refiriéndola al patrón de 1g/l y una vez evaluado se inyectará un patrón, si fuese necesario, de concentración próxima a la de la muestra, obteniendo el resultado final por referencia a este segundo patrón. 6.6. Referencias. 1. José Ramón García Hierro y Gertrudis Marín Esteban. Informe del Laboratorio Arbitral de la Subdirección General de Laboratorios Agrarios.

7. METANOL 7.1. Principio. Separación, identificación y cuantificación del metanol por cromatografía gaseosa. 7.2. Material y aparatos. 7.2.1. Cromatógrafo de gases equipado con detector de ionización de llama. 7.2.2. Columna cromatográfica. Columna de 4 m de longitud, de 1/8 pulgadas de diámetro interno, rellena de Carbowax 1500, al 15% sobre Chromosorb W, 80-100 mallas, lavada a los ácidos. 7.2.3. Microjeringas de 1 µl. 7.3. Reactivos. 7.3.1. Metanol pureza cromatográfica 7.3.2. 352516 4-Metil-2-Pentanol CG 7.3.3. Etanol pureza cromatográfica 7.4. Procedimiento. 7.4.1. Obtención del destilado como en el método oficial número 1. 7.4.2. Condiciones cromatográficas: Las condiciones cromatográficas orientativas son: Gas portador; nitrógeno, 20 ml/min, temperatura del horno, 85°C; temperatura del inyector y del detector, 150°C.

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7.4.3. Calibrado: 7.4.3.1. Patrón interno: Solución de 5 g/l de 4-Metil-2-Pentanol CG en etanol de 40°C. 7.4.3.2. Solución Patrón: preparar una solución de metanol en etanol de 40°, de concentración similar a la esperada en la muestra. A 10 ml de esta solución añadir 1 ml de la solución de patrón interno 7.4.3.1. e inyectar 1 µl en el cromatógrafo. 7.4.4. Muestra problema: A 10 ml del destilado de anís llevado a 40°, se le añade 1 ml de patrón interno 7.4.4.1. e inyectar 1 µl en las mismas condiciones en que se hizo para el calibrado. 7.5. Cálculos. Calcular el factor de respuesta y la concentración de metanol aplicando las siguientes fórmulas: Ap Factor de respuesta (Fr) = Ci –––– Ai Aim Concentración de la muestra (mg/l) = Fr ––––– f , Apm siendo: Ci = Concentración del metanol en la solución patrón. Ap = Area del patrón interno en la solución patrón. Ai = Area del metanol en la solución patrón. Aim = Area del metanol en la muestra problema. Apm = Area del patrón interno en la muestra problema. f = Factor de dilución de la muestra.

7.6. Referencias. 1. "Official Methods of Analysis of the A.O.A.C" 14ª edición, 1984 : 5.008-5.011. 8. BASES NITROGENADAS 8.1. Principio. Fijación de las bases nitrogenadas y del amoníaco mediante el ácido fosfórico en el destilado de la muestra. Liberación de éstos mediante solución de sodio hidróxido y valoración con ácido clorhídrico. El límite de detección de este método es de 1 mg/l. 8.2. Material y aparatos. 8.2.1. Destilador simple con dispositivos para adición (figura 8.1.). 8.2.2. Probeta de 100 ml de capacidad. 8.2.3. Tubos de ensayo de boca esmerilada de 30 ml de capacidad. 8.2.4. Bureta de 25 ml de capacidad. 8.2.5. Pipetas de 50 ml de capacidad. 8.2.6. Matraz de 50 ml. 8.3. Reactivos. 182107 Acido Clorhídrico 0,05 mol/l (0,05N) SV 121660 Acido orto-Fosfórico 50% PA 131074 Agua PA-ACS 121085 Etanol 96% v/v PA 171617 Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO

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Figura 8.l Destilador simple con dispositivo para adición

M
8.3.1. Acido orto-Fosfórico 50% PA (d= 1,34 g/ml). 8.3.2. Disolución de Sodio Hidróxido al 1%, preparada a partir de Sodio Hidróxido lentejas PAACS-ISO y Agua PA-ACS. 8.3.3. Disolución de Acido Clorhídrico 0,01N, preparada a partir de Acido Clorhídrico 0,05 mol/l (0,05N) SV y Agua PA-ACS. 8.3.4. Disolución de Rojo de Metilo: Pesar 0,1 g de Rojo de Metilo RE-ACS y disolver en 50 ml de Etanol 90% v/v, preparado por dilución previa de Etanol 96% v/v PA. 8.3.5. Agua Destilada PA (pH 6,5-7,5). 8.4. Procedimiento. Obtener el destilado de 100 ml de muestra, operando según método de análisis número 1. En un matraz de fondo redondo de 250 ml introducir 60 ml del destilado, 40 ml de Agua PA-ACS y 2 gotas de Acido orto-Fosfórico 50% PA; destilar, recogiendo los primeros 80 ml del destilado en 8.2.2. y desecharlos. Enfriar el matraz y al residuo frío añadir 20 ml de disolución de Sodio Hidróxido al 1%. Destilar de nuevo, recogiendo alrededor de 10 ml de destilado en un tubo de ensayo, en el que previamente se han introducido 2 ml de Agua PA-ACS y una gota de disolución de Rojo de Metilo, procurándose que el destilado caiga en el fondo del tubo con la ayuda de una alargadera. Valorar a continuación con disolución de Acido Clorhídrico 0,01N hasta viraje del indicador. Efectuar el mismo procedimiento sobre un blanco de etanol al 40%. 8.5. Cálculos. Concentración de bases nitrogenadas expresadas como hidróxido de amonio (mg/l) = 2,8 (v - v'). Siendo: v = Volumen, en mililitros, de disolución de Acido Clorhídrico 0,01N gastados en la valoración. v' = Volumen, en mililitros, de disolución de Acido Clorhídrico 0,01 N gastados en el blanco. 8.6. Referencias. 1. "Codex Oenologique International, O.I.V.", 1978, página 17 9. ACEITES ESENCIALES 9.1. Principio. Extracción de los aceites esenciales y cuantificación. 9.2. Material y aparatos. 9.2.1. Embudos de decantación de 500 ml. 9.2.2. Desecador con dispositivos para hacer vacío o rotavapor. 9.2.3. Matraces de 100 ml de forma corazón con boca adecuada para adaptar al rotavapor. 9.3. Reactivos 131074 Agua PA-ACS Anetol Patrón 132770 Eter Dietílico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 122006 n-Pentano PA 131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO 121716 Sodio Sulfato anhidro PA 9.3.1. n-Pentano PA. 9.3.2. Sodio Cloruro PA-ACS-ISO. 9.3.3. Eter Dietílico estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO. 9.3.4. Anetol Patrón. 9.4. Procedimiento. Tomar 40 ml de anís e introducir en un embudo de decantación añadiendo 160 ml de Agua PAACS, 40 g de ClNa y 60 ml de n-Pentano PA. Agitar y dejar decantar durante unos diez minutos. Una vez separadas las fases, tomar la correspondiente al Pentano. Añadir Sodio Sulfato anhidro PA. Filtrar. Llevar al rotavapor para evaporar el Pentano, sin que la temperatura del baño alcance los 30° C. Disolver el residuo obtenido en 5 ml de Eter Dietílico estabilizado con ~6 ppm de BHT PAACS-ISO e inyectar en el cromatógrafo en las mismas condiciones del método número 6. Normalizar esta inyección obteniendo el porcentaje de Anetol. 9.5 Cálculos. El contenido en aceites esenciales totales expresado en gramos por litro vendrá dado por la siguiente fórmula: 100 Aceites esenciales (g/l) = A ––––– B Siendo : A = Contenido de anetol, expresado en g/l, obtenido en el método 6. B = Contenido en porcentaje de anetol obtenido en la normalización. 9.6. Referencias. 1. "Dosaje des huilles essentielles totales dans les liqueurs anissés". A. Maurel. Annales des Falsifications et L'Expertise Chimique et Toxicologuique, 1941 2. Informe interno del Grupo de Trabajo de Métodos Oficiales de análisis del Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación.

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10. HIDROXIMETILFURFURAL Y FURFURAL 10.1. Principio. Separación y cuantificación por cromatografía líquido-líquido de hidroximetilfurfural y furfural. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Cromatógrafo líquido-líquido con detector U.V. 10.2.2. Columna Sherisorb ODS 5 µ de 20 x 0,46 cm o columna similar de fase reserva. 10.2.3. Microjeringa de 25 o 50 µl o cualquier sistema de inyección adecuado según loop e inyector. 10.2.4. Equipo de filtración de disolventes para cromatografía líquido-líquido con filtro de 0,45 µm o similar. 10.2.5. Equipo de filtración de muestras con filtros de 0,5 µm o similar. 10.3. Reactivos. 261091 Metanol HPLC 141334 Furfuraldehído PRS Hidroximetilfurfural 131509 Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO 122333 di-Potasio Hidrógeno Fosfato 3-hidrato PA 10.3.1. Metanol HPLC. 10.3.2. Solución tampón de Potasio di-Hidrógeno Fosfato PA-ACS-ISO y di-Potasio Hidrógeno Fosfato 3-hidrato PA. Disolver 1,25 g de KH2PO4 y 1,25 g de K2HPO4 en agua hasta un litro. 10.3.3. Hidroximetilfurfural patrón y Furfuraldehido recientemente destilado. 10.4. Procedimiento. 10.4.1. Condiciones cromatográficas orientativas: Fase móvil. Solución de metanol al 10% (v/v) en disolución tampón (10.3.2.). Flujo: 0,8 ml/mn. Longitud de onda. 285 nm. Tiempo de retención aproximado: Siete minutos para Hidroximetilfurfural y diez minutos para el Furfural. 10.4.2. Soluciones patrón: Prepara soluciones de Hidroximetilfurfural y Furfural en Metanol de concentraciones aproximadas a 5 mg/l. 10.4.3. Diluir 5 ml de la muestra en Metanol a 25 ml. Filtrar e inyectar directamente. 10.5. Cálculos. Calcular la concentración de Hidroximetilfurfural

y Furfural expresada en mg/l, mediante las siguientes fórmulas. Am Hidroximetilfurfural o Furfural (mg/l) = ––––– x C Ap Siendo: Am = Area de la muestra. Ap = Area del patrón externo. C = Concentración en mg/l del patrón. 10.6. Observaciones. 10.6.1. Observación. - La preparación del patrón de Hidroximetilfurfural debe efectuarse cada día. Para evitar esta preparación se puede utilizar el mismo patrón, pero controlando su riqueza actual, midiendo la absorbancia en U.V. a 284 nm, empleando la siguiente fórmula: A c = –––– x 100 Exl Siendo: c = Concentración en moles/l de Hidroximetilfurfural. E = Coeficiente de absorción Molar, 1,82 x 104. l = Longitud de paso de la cubeta en cm. A = Absorbancia del patrón a 284 nm. 11. ARSENICO 11.1. Principio. La muestra se somete a una digestión ácida con una mezcla de ácido nítrico y sulfúrico. La determinación del arsénico se realiza por espectrofotometría de absorción atómica, con generador de hidruros. 11.2. Material y aparatos. 11.2.1. Balanzas con exactitud de 0,001 g y de 0,1 g 11.2.2. Matraces aforados de 50 y 100 ml de capacidad. 11.2.3. Pipetas de doble aforo. 11.2.4. Matraces "Kjeldahl" de 250 ml. 11.2.5. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con sistema generador de hidruros. 11.2.6. Lámpara de descarga sin electrodos. 11.2.7. Fuente de descarga sin electrodos. 11.2.8. Registrador gráfico. 11.3. Reactivos. Se utilizan solamente reactivos de grado de pureza para análisis y Agua Destilada. 131020 Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO 131669 Acido Etilendiaminotetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO

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M
131036 131058 131074 313171 Acido Nítrico 60% PA-ISO Acido Sulfúrico 96% PA-ISO Agua PA-ACS Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA 131515 Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO 123314 Sodio Borohidruro PA 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-ACS-ISO 11.3.1. Acido Clorhídrico 37% PA-ACS-ISO (d=1,19 g/ml). 11.3.2. Disolución de Acido Clorhídrico. Disolver 32 ml de Acido Clorhídrico 37% PAACS-ISO (d=1,19 g/ml), con Agua PA-ACS hasta un volumen de 1.000 ml. 11.3.3. Disolución de Acido Clorhídrico. Disolver 15 ml de Acido Clorhídrico 37% PAACS-ISO (d=1,19 g/ml), con Agua PA-ACS hasta un volumen de 1.000 ml. 11.3.4. Acido Nítrico 60% PA-ISO (d=1,40 g/ml). 11.3.5. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO (d=1,84 g/ml). 11.3.6. Disolución de Sodio Hidróxido al 1%. Pesar 1 g de Sodio Hidróxido lentejas PA-ACSISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 11.3.7. Disolución de Sodio Borohidruro al 3%. Pesar tres gramos de Sodio Borohidruro y disolverlo hasta 100 ml con Sodio Hidróxido al 1%, preparada a partir de Sodio Hidróxido lentejas PAACS-ISO y Agua PA-ACS. 11.3.8. Disolución al 1 % de Acido Etilendiamino-tetraacético Sal Disódica 2-hidrato PA-ACS-ISO (EDTANa2). Pesar 1 g de EDTANa2 y disolverlo hasta 100 ml con Agua PA-ACS. 11.3.9. Disolución de Potasio Hidróxido al 20%. Pesar 20 g de Potasio Hidróxido 85% lentejas PA-ISO y disolverlo con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 11.3.10. Disolución de Acido Sulfúrico al 20% (v/v). Diluir 20 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO (11.3.5) con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 11.3.11. Disolución de Acido Sulfúrico al 1% (v/v). Diluir 1 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO (11.3.5) con Agua PA-ACS hasta un volumen de 100 ml. 11.3.12. Arsénico solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA o disolver 0,132 g de 241151 Arsénico Oxido EQP-ACS en 2,5 ml de Potasio Hidróxido al 20% (11.3.9.), neutralizar con Acido Sulfúrico al 20% (11.3.10.), diluir hasta 100 ml con Acido Sulfúrico 1% (11.3.11.). 11.3.13. Solución patrón de Arsénico de concentración 10 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución patrón de Arsénico (11.3.12.), en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 11.3.14. Solución patrón de Arsénico de concentración 0,1 mg/l. Pipetear 1 ml de la solución de Arsénico (11.3.13.), en un matraz aforado de 100 ml. Diluir hasta el enrase con Agua PA-ACS. 11.4. Procedimiento. 11.4.1. Preparación de la muestra. En un matraz "Kjeldahl", de 250 ml introducir 4 g de muestra con 20 ml de Acido Nítrico 60% PA-ISO (11.3.4.) y 5 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO (11.3.5.). Llevar la ebullición hasta reducir el volumen a 5 ml. Dejar enfriar y disolver con Agua PA-ACS en un matraz de 50 ml la solución resultante. 11.4.2. Preparación del blanco y patrones de trabajo. En un matraz "Kjeldahl", introducir 5 ml de la solución de Arsénico (11.3.14.) y someterlo al mismo tratamiento que la muestra. 1 ml de la solución contiene 10 nanogramos de arsénico. Preparar un blanco con todos los reactivos utilizados siguiendo el tratamiento dado a la muestra. 11.4.3. Condiciones del espectrofotómetro. Encender la fuente de alimentación de las lámparas de descarga sin electrodos con el tiempo suficiente para que se estabilice la energía de la lámpara. Encender el espectrofotómetro, ajustar la longitud de onda a 193,7 nm, colocando la rejilla de acuerdo con las condiciones del aparato. Encender el generador de hidruros, colocando la temperatura de la celda a 900°C, esperando hasta que se alcance dicha temperatura. Se ajustan las condiciones del generador de hidruros según las especificaciones del aparato. Ajustar el flujo de argón de acuerdo con las características del aparato. Encender el registrador. 11.4.4. Determinación. Las determinaciones de la concentración de Arsénico se realizan por el método de adición de patrones, por medio de medidas duplicadas en el espectrofotómetro en las condiciones especificadas en (11.4.3.), añadiendo al matraz de reacción 3 ml de la solución (11.4.1.), más 3 ml de la solución (11.3.2.), y 10 ml de la solución (11.3.8.). Como patrones internos se usan 10, 20 y 50 ng de As. Lavar los matraces antes y después de cada uso, con Acido Clorhídrico (11.3.3.). Al construir la gráfica de adición hay que descontar el valor de absorbancia del blanco obtenido en las mismas condiciones anteriores, pero añadiendo 3 ml de la solución blanco.

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12. PLOMO 12.1. Principio Determinación del plomo por absorción atómica. 12.2. Material y aparatos. 12.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 12.2.2. Lámpara de plomo. 12.2.3. Cápsulas de platino, cuarzo o similar (de 150 ml de capacidad, aproximadamente) 12.2.4. Baño de arena o placa calefactora con regulación de temperatura o estufa con control de temperatura en el rango de 50 a 150°C. 12.2.5. Mufla. Conveniente tenerla dentro de vitrina de extracción de humos. 12.2.6. Matraces de 10, 100 y 1.000 ml de capacidad. 12.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO Acido Nítrico al 1% 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313189 Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA 12.3.1. Acido Sulfúrico 96% PA-ISO (d= 1,835 g/ml). 12.3.2. Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO (d= 1,413 g/ml). 12.3.3. Acido Nítrico al 1% en Agua PA-ACS. 12.3.4. Plomo solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,598 g de 131473 Plomo II Nitrato PA-ACS enrasando a 1.000 ml con Acido Nítrico al 1%. 12.4. Procedimiento. 12.4.1. Preparación de la muestra.- Pesar 20 g de la muestra en la cápsula (12.2.3.); llevarla a evaporación hasta consistencia siruposa en baño de arena (12.2.4.). Añadir a continuación 2 ml de Acido Sulfúrico 96% PA-ISO y carbonizar lentamente el residuo en el baño de arena o placa. Seguidamente introducir la cápsula en la mufla y mantenerla durante dos horas a 450°C; transcurrido dicho tiempo, sacarla y dejarla enfriar. Añadir 1 ml de Agua PA-ACS, evaporar en el baño de arena o placa e introducir en la mufla, repitiendo esta operación hasta obtener cenizas blancas. Un ligero color marrón-rojizo en las cenizas (posiblemente de Fe2O3) es aceptado y no requiere un tratamiento posterior. Disolver a continuación las cenizas con 1 ml de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO y 2 ml de Agua PAACS. Llevar la solución a un matraz de 10 ml, lavar la cápsula con Agua PA-ACS y añadir las aguas del lavado hasta el enrase, filtrando posteriormente. 12.4.2. Construcción de la curva patrón.- Diluir

alícuotas apropiadas de la solución patrón (12.3.4.) con Acido Nítrico al 1% (v/v) para obtener una curva de concentraciones 2, 4, 6, 8 y 10 mg/l. 12.4.3. Determinación. Operar según las especificaciones del aparato, usando llama de aire-acetileno. Medir las absorbancias de la muestra y patrones a 283 nm. Si la solución está muy concentrada diluirla con Acido Nítrico al 1%. 12.5. Cálculos. Calcular el contenido en plomo, expresado en mg/l mediante comparación con la correspondiente curva patrón y teniendo en cuenta el factor de concentración o dilución. 12.6. Referencia. 1. Métodos Oficiales de Análisis de Vinos. Ministerio de Agricultura, pág. 134 (I), 1976. 13. ZINC 13.1. Principio. Determinación del zinc por absorción atómica previa mineralización de la muestra. 13.2. Material y aparatos. 13.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 13.2.2. Lámpara de zinc. 13.2.3. Los utilizados para el Pb en (12.2.3.), (12.2.4.) (12.2.5.) y (12.2.6.) 13.3. Reactivos. 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO Acido Nítrico al 1% 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313193 Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA 13.3.1. Los utilizados para el plomo en (12.3.1.), (12.3.2.) y (12.3.3.) 13.3.2. Zinc solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de 141782 Zinc metal granalla PRS en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO (1:1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico del 1 % (v/v). 13.4. Procedimiento. 13.4.1. Preparación de la muestra.- Como en (12.4.1.). 13.4.2. Construcción de la curva patrón.- Diluir partes alícuotas de la solución patrón (13.3.2.), con Acido Nítrico al 1% para obtener soluciones de 0,5; 1; 1,5 y 2 mg/l. 13.4.3. Determinación. Igual que para el plomo. La lectura se efectuará a 213,8 nm.

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13.5. Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancias obtenidos, hallar las concentraciones de Zinc para la muestra, teniendo en cuenta el factor concentración o dilución. 13.6. Referencia. 1. H.E. Parker. “Atomic Absorption Newsletter” (1963), 13. 14. COBRE 14.1 Principio Determinación del cobre por absorción atómica previa mineralización de la muestra. 14.2. Material y aparatos. 14.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica. 14.2.2. Lámpara de Cobre. 14.2.3. Los utilizados para el plomo, en (12.2.3.), (12.2.4.), (12.2.5.) y (12.2.6.). 14.3. Reactivos 131037 Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO Acido Nítrico al 1% 131058 Acido Sulfúrico 96% PA-ISO 131074 Agua PA-ACS 313178 Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA 14.3.1. Los utilizados para el plomo en (12.3.1.), (12.3.2.) y (12.3.3.) 14.3.2. Cobre solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA o preparar disolviendo 1,000 g de Cobre puro en el mínimo volumen necesario de Acido Nítrico 70% PA-ACS-ISO (1:1) y diluir a 1 litro con Acido Nítrico del 1 % (v/v). 14.4. Procedimiento. 14.4.1. Preparación de la muestra.- Como en (12.4.1.). 14.4.2. Construcción de la curva patrón.- Diluir partes alícuotas de la solución patrón (14.3.2.), con Acido Nítrico al 1% para obtener soluciones que contengan de 1 a 5 mg de Cobre/litro. 14.4.3. Determinación.- Igual que para el plomo. Medir a 324,7 nm. 14.5. Cálculo. Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos para la muestra, hallar mediante la curva patrón las concentraciones de Cobre de la muestra. 14.6 Referencias. 1. H.E. Parker: "Atomic Absorption Newsletter" (1963).13. 2 F. Rousselet: "Spectrophotometrie par absorption atomique Boudin". Ed Paris (1968), pág. 59-144.

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Sidras: Sidras y otras bebidas derivadas de la Manzana

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METODOS DE ANALISIS 1. ELIMINACION DEL ANHIDRIDO CARBONICO 1.1. Principio. Desgasificación de la sidra mediante agitación y filtración. 1.2. Material y aparatos. 1.2.1. Matraz Erlenmeyer. 1.2.2. Papel de filtro. 1.2.3. Embudo. 1.3. Procedimiento. El volumen de sidra que vaya a utilizar, previamente llevada a 17-20°C, verterlo en un matraz Erlenmeyer de capacidad doble del volumen utilizado. Agitar durante diez minutos y filtrar a continuación a través de un embudo cubierto de papel de filtro seco. 2. GRADO ALCOHOLICO ADQUIRIDO Eliminar el anhídrido carbónico como se indica en el método 1 y proceder como se indica en los métodos oficiales de vinos número 5(a) ("Boletín Oficial del Estado" de 22 de julio de 1977) y 5(b) ("Boletín Oficial del Estado" del 23 de julio de 1977). 3. AZUCARES REDUCTORES Eliminar el anhídrido carbónico como se indica en el método número 1 y proceder como se indica en los métodos oficiales de vinos números 7(a) y 7(b) ("Boletín Oficial del Estado" de 23 de julio de 1977) y 7(c) ("Boletín Oficial del Estado" de 30 de agosto de 1979). 4. ANHIDRIDO SULFUROSO Proceder como se indica en el método oficial de vinos números 28(a) y 28(b) ("Boletín Oficial del Estado" de 26 de julio de 1977). 5. METANOL (Alcohol Metílico) Eliminar el anhídrido carbónico como se indica en el método número 1 y proceder como se indica en el método oficial de vinos número 37 ("Boletín Oficial del Estado" de 27 de julio de 1977). 6. ACIDEZ VOLATIL Proceder como se indica en el método oficial de vinos número 21 ("Boletín Oficial del Estado" de 23 de julio de 1977). 7. EXTRACTO SECO TOTAL Eliminar el anhídrido carbónico como se indica en el método número 1 y proceder como se indica en el método oficial de vinos número 6 ("Boletín Oficial del Estado" de 23 de julio de 1977). 8. CENIZAS Eliminar el anhídrido carbónico como se indica en el método número 1 y proceder como se indica en el método oficial de vinos número 11 ("Boletín Oficial del Estado" de 23 de julio de 1977). 9. HIERRO Eliminar el anhídrido carbónico como se indica en el método número 1 y proceder como se indica en el método oficial de vinos número 16 ("Boletín Oficial del Estado" de 23 de julio de 1977). 10. ETANAL 10.1. Principio. El etanal se determina en la sidra, previamente decolorada con carbón, midiendo a 570 nm, la coloración verde o violeta que da con el sodio nitroprusiato y la piperidina. 10.2. Material y aparatos. 10.2.1. Espectrofotómetro capaz de efectuar lecturas a 570 nm. 10.3. Reactivos. 131015 Acido Bórico PA-ACS-ISO 131019 Acido Clorhídrico 35% PA-ISO 121064 Acido Sulfuroso solución 6% PA 131074 Agua PA-ACS 171096 Almidón soluble RE 121237 Carbón Activo polvo PA Etanal 171327 Fenolftaleína solución 1% RE 162377 Piperidina PS 182415 Sodio Hidróxido 1mol/l (1N) SV 121705 Sodio Nitroprusiato 2-hidrato PA 181772 Yodo 0,05 mol/l (0,1N) SV 10.3.1. Solución de Piperidina al 10% (v/v). Preparar antes de cada medida la mezcla de 2 ml de Piperidina PS con 18 ml de Agua PA-ACS.

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10.3.2. Solución de Sodio Nitroprusiato al 0,4% (p/v). En un matraz aforado de 250 ml, disolver 1 g de Sodio Nitroprusiato 2-hidrato PA, pulverizado. Completar hasta el enrase con Agua PA-ACS. 10.3.3. Carbón activo polvo PA. 10.3.4. Acido Clorhídrico diluido al 25% (v/v) (aproximadamente 102 g/l). Diluir convenientemente Acido Clorhídrico 35% PA-ISO con Agua PAACS. 10.3.5. Solución alcalina. Disolver 8,75 g de Acido Bórico PA-ACS-ISO en 400 ml de Sodio Hidróxido 1mol/l (1N) SV con Agua PA-ACS. 10.4. Procedimiento. 10.4.1. Determinación de etanal. Colocar 25 ml de líquido a analizar en un erlenmeyer de 100 ml, adicionar unos 2 g de Carbón Activo polvo PA. Agitar enérgicamente durante algunos segundos, dejar reposar durante 2 minutos y filtrar sobre un filtro de pliegues de poro fino para obtener un filtrado claro. Dos ml de filtrado incoloro se colocan en un Erlenmeyer de 100 ml y se adiciona, agitando, 5 ml de solución de Sodio Nitroprusiato y 5 ml de solución de Piperidina; mezclar y colocar inmediatamente la mezcla en la cubeta de lectura de 10 mm de espesor. La coloración obtenida que varía del verde al violeta, se mide a 570 nm con relación al aire. Esta coloración aumenta para disminuir seguidamente con rapidez. Elegir como valor definitivo la máxima absorbancia que se obtiene al cabo de unos 50 segundos. La cantidad de etanal contenido en el líquido analizado se deduce de una curva patrón. 10.4.2. Construcción de la curva patrón. Solución patrón de Etanal combinado con el Anhídrido Sulfuroso. Tomar Acido Sulfuroso 6% PA, valorar en SO2 y determinar su cantidad exacta midiéndola con Yodo 0,05 mol/l (0,1N) SV. En un matraz aforado de 1 litro colocar el volumen de esta solución que corresponda a 1.500 mg de SO2. Introducir en el matraz, ayudados con un embudo, alrededor de 1 ml de Etanal destilado recientemente y recogido sobre una mezcla refrigerante. Enrasar a un litro con Agua PA-ACS, mezclar y dejar durante la noche. La cantidad exacta de esta solución patrón de Etanal combinada con el SO2 debe determinarse como sigue: En un Erlenmeyer de 500 ml, colocar 50 ml de solución patrón de Etanal, adicionar 20 ml del Acido Clorhídrico diluido y 100 ml de Agua PA-ACS. Oxidar el SO2 libre con Yodo 0,05 mol/l (0,1N) SV en presencia de Almidón soluble RE hasta coloración azul débil. Añadir unas gotas de Fenolftaleína solución 1%

RE y la suficiente solución alcalina hasta la desaparición de la coloración azul y aparición de color rosa. Valorar el SO2 combinado al Etanal con el Yodo 0,05 mol/l (0,1N) SV hasta coloración azul débil. Siendo n el volumen gastado, la solución patrón de Etanal combinado con el SO2 contiene : 44,05 n mg de Etanal por litro. Preparación de la curva patrón: En matraces aforados de 100 ml colocar sucesivamente 5-10-15-20 y 25 ml de la solución patrón. Enrasar con Agua PA-ACS. Estas diluciones corresponden a cantidades de Etanal próximas a 40-80120-160 y 200 mg/l. La cantidad exacta de las diluciones debe calcularse a partir del contenido en Etanal de la solución patrón determinada anteriormente. Proceder a la medida del Etanal sobre 2 ml de cada una de estas soluciones como se indica anteriormente. La representación gráfica de las absorbancias de estas soluciones en función de la cantidad de Etanal es una recta que no pasa por el origen. 10.5. Cálculo. Calcular el contenido en etanal mediante comparación con la correspondiente curva patrón. 10.6. Observaciones. Si, de forma excepcional, el líquido a analizar contiene etanal libre, no combinado con el SO2 será necesario, antes de empezar a determinar el etanal total, pasarlo previamente al estado de combinación con el SO2. Para efectuar esto, adicionar a una parte del líquido a analizar un pequeño exceso de SO2 libre y esperar algunas horas antes de proceder a la determinación. 10.7. Referencias. 10.7.1. H. Rebelein (1970), Dtsch. Lebensmit. Rdsch 1970. 66, 5-6. 10.7.2. Recueil des Méthodes Internationales d'Analyses des Vins. O. I. V. A-37, 1978. 11. ANHIDRIDO CARBONICO 11.1. Principio. Después de la oxidación en frío del anhídrido sulfuroso por el hidrógeno peróxido en presencia del ion de cobre II, el anhídrido carbónico desplazado de la sidra por una solución tampón de fosfato y ácido fosfórico es arrastrado en frío en circuito cerrado por una corriente de aire mediante una pequeña bomba de circulación hacia una solución valorada de bario hidróxido. El exceso de esta base se determina inmediatamente con una solución valorada de ácido clorhídrico en presencia de un indicador mixto de timolftaleína-fenolftaleína. Aplicables a contenidos inferiores a 6 g/l.

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11.2. Material y aparatos. 11.2.1. Aparato de vidrio para extracción del CO2 en circuito cerrado (fig. 1) compuesto de: - un matraz de 250 ml (1) provisto de una bola antiespuma sobre la que va adaptada una bureta (5); - dos barboteadores (2) y (3); - una bomba (4) que garantice la circulación del aire en el circuito (2 a 10 burbujas por segundo). 11.3. Reactivos. 181021 Acido Clorhídrico 1 mol/l (1N) SV 131032 Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO 131074 Agua PA-ACS 131182 Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO 131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO 121085 Etanol 96% v/v PA 131325 Fenolftaleína PA-ACS 141076 Hidrógeno Peróxido 30% p/v (100 vol.) PRS 121677 Sodio di-Hidrógeno Fosfato 2-hidrato PA 131687 Sodio Hidróxido lentejas PA-AC-ISO 182157 Sodio Hidróxido 0,4 mol/l (0,4N) SV 171739 Timolftaleína RE 11.3.1. Solución de Sodio Hidróxido 0,2N : En un matraz aforado diluir exactamente a 1:1 Sodio Hidróxido 0,4 mol/l (0,4N) SV con Agua PA-ACS. 11.3.2. Solución de Bario Cloruro de 90 g de BaCl2.2H2O por litro. Disolver Bario Cloruro 2-hidrato PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS. 11.3.3. Solución de Bario Hidróxido. Mezclar 2 volúmenes de la solución de Bario Cloruro de 90 g/l con 1 volumen de solución de Sodio Hidróxido 0,2N. Conservar en recipiente que evite la carbonatación. 11.3.4. Solución tampón: Disolver en Agua PA-ACS recientemente hervida 400 g de Sodio di-Hidrógeno Fosfato 2-hidrato PA y 50 ml de Acido orto-Fosfórico (d 20° C = 1,63) : Diluir Acido orto-Fosfórico 85% PA-ACS-ISO con Agua PA-ACS hasta la densidad indicada que corresponde a, aproximadamente, 79,4% y completar hasta 1 l con Agua PA-ACS recientemente hervida. 11.3.5. Sodio Hidróxido al 50% (p/p). Solución acuosa (d = 1,525) que contenga 50 g de Sodio Hidróxido lentejas PA-AC-ISO en 100 g de solución. Utilizarla 15 días después de su preparación para lograr la decantación del eventual CO3Na2. Esta solución debe ser transparente. 11.3.6. Hidrógeno Peróxido en solución de 10 volúmenes. Esta solución contiene 30,4 g de H2O2 por litro y libera 10 veces su volumen de oxígeno por descomposición catalítica con MnO2 en medio alcalino. 11.3.7. Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO, pulverizado. 11.3.8. Disolver 1 g de Fenolftaleína PA-ACS y 0,5 g de Timolftaleína RE en Etanol 96% v/v PA neutro, y completar hasta 100 ml. 11.3.9. Acido Clorhídrico 0,2 N. En un matraz aforado diluir a 1:5 Acido Clorhídrico 1mol/l (1N) SV con Agua PA-ACS y determinar el factor de la solución 0,2N obtenida. 11.4. Procedimiento. 11.4.1. Sidras que contienen menos de 4 g de CO2, por litro. La botella de sidra se debe mantener en posición horizontal durante una noche a 0°C. Colocar en el barboteador (2) 150 ml exactamente medidos de solución de Bario Hidróxido. Introducir en el matraz (1) algunos cristales de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO y 5 ml de Hidrógeno Peróxido de 10 volúmenes. Poner, con cuidado, en un matraz previamente enjuagado y enfriado a 0°C, 50 ml de sidra. Colocar el matraz (1) en el circuito y esperar 10 minutos. Conectar la bomba, e introducir mediante la bureta (5) 20 ml de solución tampón. Dejar en funcionamiento 30 minutos. Parar la bomba y tomar del barboteador (2), 50 ml de la solución de Bario Hidróxido; valorarla con Acido Clorhídrico 0,2N con indicador mixto. Sea V2 el número de ml gastados. Es indispensable valorar diariamente el Bario Hidróxido utilizando 150 ml. Sea V1 el número de ml de Acido Clorhídrico 0,2N necesarios. 11.4.2. Sidras que contienen más de 4 g de CO2 por litro. La botella debe mantenerse en posición horizontal a 0°C durante una noche. Abrir la botella con precaución. Para botellas de 750 ml sustituir 50 ml de sidra por 50 ml de Sodio Hidróxido al 50% haciendo resbalar suavemente la solución por el cuello de la botella. Cerrar ésta inmediatamente y homogeneizar su contenido agitándola; colocarla seguidamente en un baño de agua a 20° C. Colocar en el barboteador (2) 300 ml exactos de solución de Bario Hidróxido. Introducir en el matraz (1) unos cristales de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO y 5 ml de Hidrógeno Peróxido de 10 volúmenes. Introducir lentamente la pipeta en la botella para evitar desprendimiento de CO2 y tomar 50 ml de la sidra y echarlos al matraz. Conectarlo al aparato y dejarlo reposar 10 minutos. El volumen de la sidra tomado se deberá reducir a 25 ml, si ésta contiene más de 8 g/l de anhídrido carbónico. Conectar la bomba, e introducir en el matraz (1) con una bureta (5), 40 ml de solución tampón. Ponerla en funcionamiento durante 30 minutos. Parar la bomba y tomar del barboteador (2) 50 ml de la solución de Bario Hidróxido. Valorarla con Acido Clorhídrico 0,2N en presencia de indica-

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dor mixto. Sea V2 el número de ml utilizados. Sea V1 el número de ml de Acido Clorhídrico 0,2N consumidos para valorar 150 ml de solución de Bario Hidróxido. 11.5. Cálculo. 11.5.1. Para sidras que contienen menos de 4 g de CO2 por litro. Cantidades de CO2 en gramos por l en la sidra. CO2 (g/l) = 0,088 (V1 - 3V2). 11.5.2. Para sidras que contienen más de 4 g de CO2 por litro. Medir el volumen de líquido que queda en la botella y añadir 50 o 25 ml de la muestra tomada para la determinación. Sea V el volumen total así determinado. Calcular seguidamente el factor de corrección f, necesario para tener en cuenta los 50 ml de Sodio Hidróxido al 50% introducidos en la botella: V f = –––––– V - 50 Si la muestra para la determinación es de 50 ml, la cantidad de anhídrido carbónico en g/l es (2V1 - 6V2) x 0,088 x f. Este resultado debe multiplicarse por 2 si la toma de muestra es de 25 ml. 11.6. Referencias. 11.6.1. Jaulmes (P.), Metch. An. 1972, n° 422; Ann. Fals. Exp. Chim. 1973, n°708, 96-109. 11.6.2. Recueil des Méthodes Internationales d'Analyse des Vins. O. I. V. A-39, 1978.

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Figura l

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Relación de reactivos y productos auxiliares que se utilizan en los métodos analíticos. Productos derivados de la Uva, Aguardientes y Sidras.

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NOTA: Algunos de los reactivos recomendados en los métodos analíticos previamente descritos han modificado su código y mejorado su calidad. Además se han producido nuevas incorporaciones. Por favor, consulte este anexo antes de efectuar su pedido. Es la versión actualizada de la oferta de productos suministrables en Mayo de 1999.

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REACTIVOS Y PRODUCTOS AUXILIARES QUE HAN CAMBIADO DE CÓDIGO O DE CALIDAD ANTERIOR 263093 Acetonitrilo gradiente HPLC 171024 Acido Cromotrópico Sal Disódica 2-hidrato RE 124559 Acido Etilendiaminoteraacético Sal Disódica Cálcica PA 171096 121118 171432 171168 351082 354330 353851 351086 351085 141897 171321 171327 141334 261091 351091 351079 352516 164542 171439 251450 121884 171495 351885 354457 171615 171617 171634 171730 171739 171748 171759 121787 Almidón soluble RE Amonio Bromuro PA Anaranjado de Metilo solución 0,1% RE Azul de Bromotimol solución 0,04% RE 1-Butanol CG iso-Butanol CG 2-Butanol CG Etanol absoluto CG Etanol 96% CG Eter mono-Metílico del Etilenglicol PRS 1,10-Fenantrolina 1-hidrato RE-ACS Fenolftaleína solución 1% RE Furfuraldehído PRS Metanol HPLC Metanol CG 3-Metil-1-Butanol CG 4-Metil-2-Pentanol CG 4-Nitroanilina PS Negro de Eriocromo T (C.I. 14645) RE-ACS Parafina P.F. 55-60°C en pastilla DC 1-Pentanol PA Potasio Cloruro solución saturada RE 1-Propanol CG 2-Propanol CG Rojo de Fenol RE-ACS Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS Sodio Acetato 1 mol/l (1M) RE Tampón solución pH 10 RE Timolftaleína RE Tornasol tintura RE Verde de Bromocresol RE-ACS Zinc Sulfato 7-hidrato PA ACTUAL 221881 Acetonitrilo (HLPC-gradiente) PAI 121024 Acido Cromotrópico Sal Disódica 2-hidrato PA 144559 Acido Etilendiaminoteraacético Sal Cálcica Disódica (RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX 121096 Almidón de Patata soluble PA 131118 Amonio Bromuro PA-ACS 281432 Anaranjado de Metilo solución 0,1% RV 281168 Azul de Bromotimol solución 0,04% RV 361082 1-Butanol (UV-IR-HPLC) PAI 361089 iso-Butanol (UV-IR-HPLC) PAI 123851 2-Butanol PA 361086 Etanol absoluto (UV-IR-HPLC) PAI 361085 Etanol 96% (UV-IR-HPLC) PAI 131897 Eter mono-Metílico del Etilenglicol PA-ACS 131321 1,10-Fenantrolina 1-hidrato PA-ACS 281327 Fenolftaleína solución 1% RV 131334 Furfural estabilizado con ~0,1% de BHT PA-ACS 361091 Metanol (UV-IR-HPLC prep.) PAI 321091 Metanol (PAR) PAI 131079 3-Metil-1-Butanol PA-ACS 162516 4-Metil-2-Pentanol PS A10369 4-Nitroanilina, 98% 131439 Negro de Eriocromo T (C.I. 14645) PA-ACS 253211 Parafina P.F. 56-58°C en lentejas DC 131884 1-Pentanol PA-ACS 281495 Potasio Cloruro solución saturada RV 361885 1-Propanol (UV-IR-HPLC) PAI 321090 2-Propanol (PAR) PAI 131615 Rojo de Fenol PA-ACS 131617 Rojo de Metilo (C.I. 13020) PA-ACS 281634 Sodio Acetato 1 mol/l (1M) RV 281730 Solución Tampón pH 10 RV 121739 Timolftaleína PA 281748 Tornasol tintura RV 131759 Verde de Bromocresol PA-ACS 131787 Zinc Sulfato 7-hidrato PA-ACS

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ACETALDEHIDO A13752 3-HIDROXI-2-BUTANONA dímero,98% (ACETOINA dímero) 131007 ACETONA PA-ACS-ISO 221881 ACETONITRILO (HPLC-gradiente) PAI 131008 ACIDO ACETICO glacial PA-ACS-ISO ACIDO ACETICO 2 mol/l (2N) 131013 ACIDO L(+)- ASCORBICO PA-ACS-ISO A10934 ACIDO BARBITURICO, 98+% 121014 ACIDO BENZOICO PA 131015 ACIDO BORICO PA-ACS-ISO 131808 ACIDO CITRICO anhidro PA-ACS 131018 ACIDO CITRICO 1-hidrato PA-ACS-ISO 131020 ACIDO CLORHIDRICO 37% PA-ACS-ISO 131019 ACIDO CLORHIDRICO 35% PA-ISO 182107 ACIDO CLORHIDRICO 0,05 mol/l (0,05N) SV 182318 ACIDO CLORHIDRICO 0,25 mol/l (0,25N) SV 181022 ACIDO CLORHIDRICO 0,5 mol/l (0,5N) SV 181021 ACIDO CLORHIDRICO 1 mol/l (1N) SV 182108 ACIDO CLORHIDRICO 2 mol/l (2N) SV A15135 ACIDO 4-CLOROBENZOICO, 98+% 121024 ACIDO CROMOTROPICO SAL DISODICA 2-hidrato PA 144559 ACIDO ETILENDIAMINOTETRAACETICO SAL CALCICA DISODICA (RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX 131669 ACIDO ETILENDIAMINOTETRAACETICO SAL DISODICA 2-hidrato PA-ACS-ISO 182120 ACIDO ETILENDIAMINOTETRAACETICO SAL DISODICA 0,05 mol/l (0,05N) SV 131030 ACIDO FORMICO 98% PA-ACS 131032 ACIDO orto-FOSFORICO 85% PA-ACS-ISO 121660 ACIDO orto-FOSFORICO 50% PA A13700 ACIDO 4-HIDROXIBENZOICO, 99% 131034 ACIDO L(+)- LACTICO PA-ACS 131037 ACIDO NITRICO 69% PA-ACS-ISO 131036 ACIDO NITRICO 60% PA-ISO 121737 ACIDO NITRICO 53% PA ACIDO NITRICO AL 1% ACIDO PERYODICO 0,05 M 121050 ACIDO PIROGALICO PA 141045 ACIDO SALICILICO (RFE, USP, BP, Ph. Eur) PRS-CODEX 141055 ACIDO SORBICO (RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX 131057 ACIDO SULFANILICO PA-ACS 471058 ACIDO SULFURICO 95-98% (máx 0,0000005% Hg) PA-ACS-ISO 131058 ACIDO SULFURICO 96% PA-ISO 182102 ACIDO SULFURICO 0,01 mol/l (0,02N) SV 181061 ACIDO SULFURICO 0,05 mol/l (0,1N) SV 181059 ACIDO SULFURICO 0,5 mol/l (1N) SV 182105 ACIDO SULFURICO 1 mol/l (2N) SV

131064 ACIDO SULFUROSO solución 6% PA-ACS 131066 ACIDO L(+)- TARTARICO PA-ACS-ISO ACIDO TIOBARBITURICO A13401 ACIDO TIOSALICILICO,98% 141792 AGAR (USP) PRS-CODEX 131074 AGUA PA-ACS 171071 AGUA DE BARITA solución saturada RE 171073 AGUA DE CAL solución saturada RE 212236 AGUA DESIONIZADA QP ALILO iso-TIOCIANATO 121096 ALMIDON DE PATATA soluble PA 141101 ALUMINIO SULFATO 18-hidrato (RFE, BP,Ph. Eur.) PRS-CODEX AMONIACO GAS PA 121129 AMONIACO 25% (en NH3) 141128 AMONIACO 20% (en NH3) PRS 131118 AMONIO BROMURO PA-ACS 131121 AMONIO CLORURO PA-ACS-ISO 131120 di-AMONIO HIDROGENO CITRATO PA-ACS 131368 AMONIO HIERRO (II) SULFATO 6-hidrato PA-ISO 131365 AMONIO HIERRO (III) SULFATO 12-hidrato PA-ACS-ISO 131134 AMONIO MOLIBDATO 4-hidrato PA-ACS-ISO 131135 AMONIO NITRATO PA-ACS-ISO 121146 di-AMONIO TARTRATO PA 132352 AMONIO meta-VANADATO PA-ACS 281432 ANARANJADO DE METILO solución 0,1% RV A13482 trans-ANETOL,98%+ 141156 ANILINA PRS 211160 ARENA DE MAR lavada, grano fino QP A16992 ARSENICO POLVO -100 mesh, 99,99% 313171 ARSENICO solución patrón As = 1,000 ± 0,002 g/l AA 281168 AZUL DE BROMOTIMOL solución 0,04% RV 251170 AZUL DE METILENO (C.I. 52015) DC 131182 BARIO CLORURO 2-hidrato PA-ACS-ISO 131188 BARIO HIDROXIDO 8-hidrato PA-ACS-ISO 2,3-BUTANODIOL 361082 1-BUTANOL (UV-IR-HPLC) PAI 131082 1-BUTANOL PA-ACS-ISO 361089 iso-BUTANOL (UV-IR-HPLC) PAI 123851 2-BUTANOL PA A13159 BUTIL-PBD (2-(4-Bifenil)-5(4-tert-butilfenil)-1,3,4-oxadiazol 121211 CALCIO ACETATO x-hidrato PA 121212 CALCIO CARBONATO precipitado PA 121221 CALCIO CLORURO anhidro, polvo PA CALCIO CLORURO 0,5 mol/l (0,05M)

M
142400 CALCIO HIDROXIDO polvo, (RFE,USP, BP. Ph. Eur.) PRS-CODEX 211229 CALCIO HIDROXIDO natural, polvo QP 211234 CALCIO OXIDO natural, trozos QP 124537 CALCON (C.I. 15705) PA 121237 CARBON ACTIVO polvo PA 131245 CARBONO TETRACLORURO PA-ACS-ISO 251246 CARMIN DE INDIGO (C.I. 73015) DC 121248 CERIO (IV) SULFATO 4-hidrato PA 142323 CLORAMINA T 3-hidrato (RFE, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX 313178 COBRE solución patrón Cu = 1,000 ± 0,002 g/l AA 141266 COBRE METAL, polvo PRS 122726 COBRE (II) SULFATO anhidro PA 131270 COBRE (II) SULFATO 5-hidrato PA-ACS-ISO 141270 COBRE (II) SULFATO 5-hidrato (RFE, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX 471153 CROMO (VI) OXIDO (máx. 0,000005% de Hg) PA-ACS 502612 DERQUIM MC MEZCLA CROMICA 121828 DIFENILAMINA PA 313180 ESTAÑO solución patrón Sn = 1,000 ± 0,002 g/l AA 141304 ESTAÑO metal granalla PRS 471303 ESTAÑO (II) CLORURO (máx. 0,000005% de Hg) PA-ACS 131303 ESTAÑO (II) CLORURO 2-hidrato PA-ACS ETANAL (ACETALDEHIDO) 121086 ETANOL ABSOLUTO PA 361086 ETANOL ABSOLUTO (UV-IR-HPLC) PAI 361085 ETANOL 96% v/v (UV-IR-HPLC) PAI 121085 ETANOL 96% v/v PA 132770 ETER DIETILICO estabilizado con ~6 ppm de BHT PA-ACS-ISO 131314 ETER DI-iso-PROPILICO estabilizado con ~50 ppm de BHT PA-ACS 131897 ETER mono-METILICO DEL ETILENGLICOL PA-ACS 131318 ETILO ACETATO PA-ACS-ISO 403687 EXTRACTO DE LEVADURA Ingrediente CULTIMED 131321 1,10-FENANTROLINA 1-hidrato PA-ACS 131325 FENOLFTALEINA PA-ACS 281327 FENOLFTALEINA solución 1% RV A13034 FLUOROGLUCINOL DIHIDRATO, 98% (FLUOROGLUCINA) 131328 FORMALDEHIDO 37-38% p/p estabilizado con metanol PA-ACS 142728 D (-)-FRUCTOSA (RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX 131334 FURFURAL estabilizado con ~ 0,1% de BHT PA-ACS 141339 GLICERINA (RFE,USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX 121341 D (+) - GLUCOSA PA 132063 n-HEXANO PA-ACS 141076 HIDROGENO PEROXIDO 30% p/v (100 vol.) estabilizado PRS 131914 HIDROXILAMONIO CLORURO PA-ACS-ISO 121925 HIDROXILAMONIO SULFATO PA A12475 5-(HIDROXIMETIL)-2FURALDEHIDO, 97% 313182 HIERRO solución patrón Fe = 1,000 ± 0,002 g/l AA 211934 HIERRO metal, granulado fino QP 141358 HIERRO (III) CLORURO 6-hidrato trozos PRS 121793 HIERRO (II) SULFATO ~2-hidrato PA 131362 HIERRO (II) SULFATO 7-hidrato PA-ACS-ISO 121360 HIERRO (III) SULFATO x-hidrato PA 211376 LANA DE VIDRIO, lavada QP 141392 LITIO CLORURO PRS 131394 MAGNESIO ACETATO 4-hidrato PA-ACS 211794 MAGNESIO CLORURO QP ~50% MgCl2 polvo MAGNESIO CLORURO 0,1 mol/l (0,1M) 211276 MAGNESIO OXIDO QP 142367 MANGANESO (IV) OXIDO precipitado PRS 131413 MANGANESO (II) SULFATO 1-hidrato PA-ACS 142961 L(-)-MENTOL (RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX 131426 MERCURIO (II) OXIDO amarillo PA-ACS 121428 MERCURIO (II) YODURO rojo PA 313186 MERCURIO solución patrón Hg = 1,000 ±0,002 g/l AA 361091 METANOL (UV-IR-HPLC prep.) PAI 321091 METANOL (PAR) PAI 131091 METANOL PA-ACS-ISO 2-METIL-1-BUTANOL 131079 3-METIL-1-BUTANOL PA-ACS 162516 4-METIL-2-PENTANOL PS 131439 NEGRO DE ERIOCROMO T (C.I. 14645) PA-ACS 132362 NINHIDRINA PA-ACS A10369 4-NITROANILINA, 98% PAPEL DE FILTRO (Ver Tarifa Panreac, Filtración MN) 91187 PAPEL DE TORNASOL neutro (rollo) 253211 PARAFINA P.F. 56-58°C en lentejas DC 122006 n-PENTANO PA 131884 1-PENTANOL PA-ACS 211835 PIEDRA POMEZ gránulos QP PINACIANOL O AZUL DE QUINALDINA (YODURO DE 1,1’-DIETIL CARBOCIANINA) 162377 PIPERIDINA PS 131457 PIRIDINA PA-ACS

187

132382 PLATA DIETILDITIOCARBAMATO PA-ACS 131459 PLATA NITRATO PA-ACS-ISO PLATA NITRATO solución 0,1% p/v 141801 PLATA SULFATO PRS 313189 PLOMO solución patrón Pb = 1,000 ± 0,002 g/l AA 131466 PLOMO (II) ACETATO 3-hidrato PA-ACS-ISO 131473 PLOMO (II) NITRATO PA-ACS 816610.1 POLIAMIDA PARA CROMATOGRAFIA 313190 POTASIO solución patrón K = 1,000 ± 0,002 g/l AA 121489 POTASIO BROMURO PA POTASIO CLORURO (máx 0,005% de Br) 131494 POTASIO CLORURO PA-ACS-ISO 281495 POTASIO CLORURO solución saturada RV 131500 POTASIO DICROMATO PA-ISO 131505 POTASIO HEXACIANOFERRATO (II) 3-hidrato PA-ACS 131503 POTASIO HEXACIANOFERRATO (III) PA-ACS 122333 di-POTASIO HIDROGENO FOSFATO 3-hidrato PA 131509 POTASIO di-HIDROGENO FOSFATO PA-ACS-ISO 131481 POTASIO HIDROGENO FTALATO PA-ISO 121486 POTASIO HIDROGENO TARTRATO PA 121515 POTASIO HIDROXIDO 85% lentejas PA 131524 POTASIO NITRATO PA-ISO 121526 di-POTASIO OXALATO 1-hidrato PA 131527 POTASIO PERMANGANATO PA-ACS-ISO 182114 POTASIO PERMANGANATO 0,01 mol/l (0,05N) SV 181529 POTASIO PERMANGANATO 0,02 mol/l (0,1N) SV 181528 POTASIO PERMANGANATO 0,2 mol/l (1N) SV 121523 POTASIO meta-PERYODATO PA 131729 POTASIO SODIO TARTRATO 4-hidrato PA-ACS-ISO 121531 POTASIO SORBATO PA 131532 POTASIO SULFATO PA-ACS-ISO 121534 POTASIO TIOCIANATO PA 131540 POTASIO YODATO PA-ACS-ISO 131542 POTASIO YODURO PA-ACS-ISO 361885 1-PROPANOL (UV-IR-HPLC) PAI 131090 2-PROPANOL PA-ACS-ISO 321090 2-PROPANOL (PAR) PAI 172174 REACTIVO DE LUFF-SCHOORL RE A12130 RESINA DOWEX 1X2-100(Cl) RESINA LEWATIT‚ MP 600 (aniónica fuerte I)

816710 131615 131617 131621 141625 313192 141669 131633 281634 131644 123314 131648 122032 131647 131659 131668 131698 131675 121638 131965 121677 131687 171688 182153 171694 181693 181694 182155

181692 181691 182415 182158 182159 131703 121705 131706 131700 141859 131716 141717 131721

188

INDICADOR FLUORESCENTE UV254 ROJO DE FENOL PA-ACS ROJO DE METILO (C.I.13020) PA-ACS SACAROSA PA-ACS SELENIO METAL polvo PRS SODIO solución patrón Na = 1,000 ± 0,002 g/l AA SODIO METAL, barras en atmósfera de argón PRS SODIO ACETATO anhidro PA-ACS SODIO ACETATO 1 mol/l (1M) RV di-SODIO tetra-BORATO 10-hidrato PA-ACS-ISO SODIO BOROHIDRURO PA SODIO CARBONATO anhidro PA-ACS-ISO SODIO CARBONATO 1-hidrato PA SODIO CARBONATO 10-hidrato PA-ISO SODIO CLORURO PA-ACS-ISO SODIO DIETILDITIOCARBAMATO 3-hidrato PA-ACS SODIO DISULFITO PA-ACS SODIO FLUORURO PA-ACS-ISO SODIO HIDROGENO CARBONATO PA SODIO di-HIDROGENO FOSFATO 1-hidrato PA-ACS SODIO di-HIDROGENO FOSFATO 2-hidrato PA SODIO HIDROXIDO lentejas PA-ACS-ISO SODIO HIDROXIDO solución 10% p/v RE SODIO HIDROXIDO 0,05 mol/l (0,05N) SV SODIO HIDROXIDO 0,1 mol/l (0,1N) RE SODIO HIDROXIDO 0,1 mol/l (0,1N) SV SODIO HIDROXIDO 0,1 mol/l (0,1N) SV SODIO HIDROXIDO 0,25 mol/l (0,25N) SV SODIO HIDROXIDO 0,4 mol/l (0,4N) SODIO HIDROXIDO 0,5 mol/l (0,5N) SV SODIO HIDROXIDO 1 mol/l (1N) Indicador: Azul de Bromofenol SV SODIO HIDROXIDO 1 mol/l (1N) Indicador: Fenolftaleína SV SODIO HIDROXIDO 2 mol/l (2N) SV SODIO HIDROXIDO 5 mol/l (5N) SV SODIO NITRITO PA-ACS SODIO NITROPRUSIATO 2-hidrato PA di-SODIO OXALATO PA-ACS SODIO meta-PERYODATO PA-ACS SODIO SALICILATO (RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX SODIO SULFATO anhidro PA-ACS-ISO SODIO SULFITO anhidro PRS SODIO TIOSULFATO 5-hidrato PA-ACS

M
182160 SODIO TIOSULFATO 0,05 mol/l (0,05N) SV 181723 SODIO TIOSULFATO 0,1mol/l (0,1N) SV 181722 SODIO TIOSULFATO 1 mol/l (1N) SV 281730 SOLUCION TAMPON pH 10 RV 272168 TAMPON SOLUCION pH 4,00 ± 0,02 (20°C) ST 272170 TAMPON SOLUCION pH 7,00 ± 0,02 (20°C) ST 272172 TAMPON SOLUCION pH 9,00 ± 0,02 (20°C) ST TETRACLOROETANO 121739 TIMOLFTALEINA PA TOLUENO MARCADO CON C14 162378 p-TOLUIDINA PS TORIO NITRATO 4-hidrato 281748 TORNASOL TINTURA RV 131252 TRICLOROMETANO estabilizado con etanol PA-ACS-ISO 131759 VERDE DE BROMOCRESOL PA-ACS 181969 YODO 0,01 mol/l (0,02N) SV 182161 YODO 0,025 mol/l (0,05N) SV 181772 YODO 0,05 mol/l (0,1N) SV 141782 ZINC METAL, granalla PRS 313193 ZINC solución patrón Zn = 1,000 ± 0,002 g/l AA A17368 ZINC, ALAMBRE, Ø 0,25 mm, 99,99+% 141783 ZINC METAL, polvo PRS 131787 ZINC SULFATO 7-hidrato PA-ACS

189

Aditio Aditivos y coadyuvantes tecnológicos para uso alimentario industrial
PANREAC QUIMICA, S.A., fabrica además de los reactivos para análisis PANREAC, una línea de aditivos y coadyuvantes tecnológicos para uso alimentario industrial, que cumplen las especificaciones de pureza prescritas por The Food Chemicals Codex 4ª ed., complementadas con las exigencias específicas fijadas por la legislación española y comunitaria de la CEE. En la relación que sigue se indica denominación del producto, fórmula y número de identificación. Para mayor información, solicite nuestro catálogo ADITIO 1995.

190

M
Código Producto 201003 204333 201007 201008 202342 201013 202422 202034 201014 201808 201018 201020 202019 202785 202512 201669 201030 201029 201032 202344 202042 201034 202368 202051 202591 203389 202786 202345 201810 201055 201883 201058 201065 201066 201792 202035 202043 201081 201103 201130 201129 201119 201121 201116 201127 201126 201140 203464 204109 202357 203977 ACEITE DE VASELINA ACETOFENONA ACETONA ACIDO ACETICO GLACIAL ACIDO ADIPICO ACIDO L(+)-ASCORBICO ACIDO DL-ASPARTICO ACIDO L-ASPARTICO ACIDO BENZOICO ACIDO CITRICO anhidro ACIDO CITRICO 1-hidrato ACIDO CLORHIDRICO 37% ACIDO CLORHIDRICO 35% ACIDO DECANOICO ACIDO ESTEARICO (Mezcla de ácidos grasos) ACIDO ETILENDIAMINOTETRAACETICO SAL di-SODICA 2-hidrato ACIDO FORMICO 98% ACIDO FORMICO 85% ACIDO orto-FOSFORICO 85% ACIDO FUMARICO ACIDO L-GLUTAMICO ACIDO L(+)-LACTICO ACIDO LAURICO ACIDO DL-MALICO ACIDO MIRISTICO ACIDO NlCOTINlCO ACIDO OCTANOICO ACIDO PALMITICO ACIDO PROPIONICO ACIDO SORBICO ACIDO SUCCINICO ACIDO SULFURICO 95-98% ACIDO TANICO ACIDO L(+)-TARTARICO AGAR DL-ALANINA L-ALANINA ALCOHOL BENCILICO ALUMINIO POTASIO SULFATO 12-hidrato AMONIACO 30% (en NH3) AMONIACO 25% (en NH3) AMONIO CARBONATO AMONIO CLORURO AMONIO HIDROGENO CARBONATO di-AMONIO HIDROGENO FOSFATO AMONIO di-HIDROGENO FOSFATO AMONIO SULFATO L-ARGININA L-ASPARAGINA anhidra BENZOILO PEROXIDO humectado con aprox. 25% de agua D (+)-BIOTINA Sinónimos Fórmula N.º de identificación

C 8H 8O CH3COCH3 CH3COOH (CH2CH2COOH)2 C6H8O6 C4H7NO4 C4H7NO4 C6H5COOH C6H8O7 C6H8O7.H2O HCl HCI C10H20O2 C18H36O2

E-260 E-355 E-300

E-210 E-330 E-330 E-507 E-507

Na2H2C10H12N2O8.2H2O HCOOH HCOOH H3PO4 HOOCCHCHCOOH C5H9NO4 CH3CHOHCOOH C12H24O2 C4H6O5 CH3(CH2)12COOH C8H16O2 CH3CH2COOH C6H8O2 HOOCCH2CH2COOH H2SO4 (CHOH)2(COOH)2 C3H7NO2 C3H7NO2 C6H5CH2OH AIK(SO4)2.12H2O NH4OH NH4OH ~(NH4)3(CO3)2H+NH2COONH4 NH4Cl NH4HCO3 (NH4)2HPO4 NH4H2PO4 (NH4)2SO4 C6H4N4O2 C4H8N2O3 C14H10O4

E-236 E-236 E-338 E-297 E-620 E-270 E-296 E-375

E-280 E-200 E-363 E-513 E-334 E-406

(Amonio Bicarbonato)

E-522 E-527 E-527 E-503i E-510 E-503ii E-342ii E-342i E-517

191

Código Producto 201089 201082 201429 204233 201211 201212 201213 201219 201221 201215 201232 201214 202824 201818 201224 201228 201227 201226 201225 202400 201230 203238 201235 201237 202416 204441 203922 203645 202825 201286 201254 201877 201303 201086 201085 202695 201318 201319 202047 202728 202060 201339 202329 201922 201340 iso-BUTANOL 1-BUTANOL BUTANONA 2-ter-BUTIL-4-METOXIFENOL CALCIO ACETATO x-hidrato CALCIO CARBONATO precipitado tri-CALCIO di-CITRATO 4-hidrato CALCIO CLORURO anhidro escoriforme CALCIO CLORURO anhidro polvo CALCIO CLORURO 2-hidrato escoriforme CALCIO CLORURO 2-hidrato polvo CALCIO CLORURO 6-hidrato CALCIO CLORURO solución 45% (en CaCl2.2H2O) CALCIO ESTEARATO CALCIO FORMIATO tri-CALCIO FOSFATO CALCIO HIDROGENO FOSFATO anhidro CALCIO HIDROGENO FOSFATO 2-hidrato CALCIO bis (di-HIDROGENO FOSFATO) 1-hidrato CALCIO HIDROXIDO polvo CALCIO LACTATO 5-hidrato CALCIO PROPIONATO CALCIO SULFATO 2-hidrato CARBON ACTIVO polvo CARBOXIMETILCELULOSA SAL SODICA (baja viscosidad) CARBOXIMETILCELULOSA SAL SODICA (media viscosidad) CARBOXIMETLCELULOSA SAL SODICA (alta viscosidad) L-CISTINA 2,6-Di-ter-BUTIL-4-METILFENOL 1,2 DICLOROETANO DICLOROMETANO estabilizado con amileno 1-DODECANOL ESTAÑO (II) CLORURO 2-hidrato ETANOL absoluto ETANOL 96% v/v ETANOL 70% v/v ETILO ACETATO ETILO S-(-)-LACTATO L-FENILALANINA D(-)-FRUCTOSA GELATINA 80-100 Blooms GLICERINA GLICERINA 87% GLICERINA tri-ACETATO GLICINA

Sinónimos

Fórmula C4H10O

N.º de identificación

(Metiletilcetona) (BHA, Butildroxianisol)

C 4H 8O C11H16O2 Ca(CH3COO)2.xH2O CaCO3 Ca3(C6H5O7)2.4H2O CaCl2 CaCl2 CaCl2.2H2O CaCl2.H2O CaCl2.6H2O

E-320 E-263 E-170i E-333iii E-509 E-509 E-509 E-509 E-509 E-509 E-470a E-238 E-341iii E-341ii E-341ii E-341i E-526 E-327 E-282 E-516

~Ca(C18H35O2)2 C2H2CaO4 ~Ca3(PO4)2 CaHPO4 CaHPO4.2H2O (Calcio Difosfato) CaH4(PO4)2.H2O Ca(OH)2 Ca(CH3CHOHCOO)2.5H2O CaSO4.2H2O

E-466 E-466 E-466 E-921 E-321

(BHT, Butilhidroxitoluol)

C6H12N2O4S2 C15H24O ClCH2ClCH2 CI2CH2 C12H26O SnCl2.2H2O CH3CH2OH CH3CH2OH CH3CH2OH CH3COOC2H5 C5H10O3 C9H11NO2 C6H12O6

E-512

192

(Glicerol) (Glicerol)

C3H8O3 C3H8O3 C9H14O6 H2NCH2COOH

E-422 E-422 E-1518 E-640

M
Código Producto 201341 203140 202061 201076 201362 202045 202198 201375 202046 203385 201396 202029 201399 201927 201395 201404 201410 201413 202067 201091 203332 203209 201479 201487 201490 201492 201494 201522 201513 201505 201480 201512 Sinónimos Fórmula C6H12O6 C6H12O6.H2O E-414 H2O2 FeSO4.7H2O C6H9N3O2 C6H10ClN3O2.H2O C12H22O11.H2O C6H13NO2 C10H16 MgCl2.6H2O ~Mg(C18H35O2)2 Mg3(PO4)2.5H2O N.º de identificación

202333 201509 201486 201515 201524 201855 201729 201531 201532 201533 201537 201540 201542

D(+)-GLUCOSA D(+)-GLUCOSA 1-hidrato GOMA ARABIGA polvo HIDROGENO PEROXIDO 30% p/v (100 vol.) estabilizado HIERRO (II) SULFATO 7-hidrato L-HISTIDINA L-HISTIDINA mono-CLORHIDRATO 1-hidrato LACTOSA 1-hidrato L-LEUCINA D-(+)-LIMONENO MAGNESIO CLORURO 6-hidrato MAGNESIO ESTEARATO tri-MAGNESIO di-FOSFATO (Magnesio 5-hidrato orto-fosfato) MAGNESIO HIDROGENO FOSFATO 3-hidrato MAGNESIO HIDROXI CARBONATO 5-hidrato (Magnesio Carbonato) MAGNESIO SULFATO 7-hidrato MANGANESO (ll) CLORURO 4-hidrato MANGANESO (ll) SULFATO 1-hidrato D(-)-MANITA (Manitol) METANOL METILO 4-HIDROXIBENZOATO PARAFINA 51- 53°C lentejas POTASIO ACETATO POTASIO BROMATO POTASIO CARBONATO tri-POTASIO CITRATO 1-hidrato POTASIO CLORURO POTASIO DISULFITO tri-POTASIO FOSFATO 1-hidrato POTASIO HEXACIANOFERRATO (II) 3-hidrato (Potasio Ferrocianuro) POTASIO HIDROGENO CARBONATO (Potasio Bicarbonato) di-POTASIO HIDROGENO FOSFATO anhidro (di-Potasio ortoFosfato) di-POTASIO HIDROGENO FOSFATO 3-hidrato POTASIO di-HIDROGENO FOSFATO (mono-Potasio orto-Fosfato) POTASIO HIDROGENO TARTRATO POTASIO HIDROXIDO 85% lentejas POTASIO NITRATO POTASIO NITRITO POTASIO SODIO TARTRATO 4-hidrato POTASIO SORBATO POTASIO SULFATO POTASIO SULFITO POTASIO TARTRATO 1/2-hidrato POTASIO YODATO POTASIO YODURO

E-511 E-470b

MgHPO4.3H2O

E-343ii E-504ii E-518

MgSO4.7H2O MnCl2.4H2O MnSO4.H2O C6H14O6 CH3OH C8H8O3 CH3COOK KBrO3 K2CO3 K3C6H5O7.H2O KCl K2S2O5 K3PO4.H2O K4Fe(CN)6.3H2O KHCO3

E-421 E-218 E-261 E-924 E-501i E-332ii E-508 E-224 E-340iii E-536 E-501ii

K2HPO4 K2HPO4.3H2O KH2PO4 (COO)2KH(CHOH)2 KOH KNO3 KNO2 NaK(COO)2(CHOH)2.4H2O CH3(CHCH)2COOK K2SO4 K2(COO)2(CHOH)2.1/2H2O KIO3 KI

E-340ii E-340ii E-340i E-336i E-525 E-252 E-249 E-337 E-202 E-515i E-336ii

193

Código Producto 203646 201545 201090 201633 201632 203865 201637 201648 202032 201647 201655 201656 201659 201698 202363 201681 201680 201665 201638 201654 201679 201678 201965 201677 201709 201687 201686 203307 201702 201703 201711 201710 201684 201716 201715 201717 201720 201719 201721 203064 201733 202475 202101 202049 202048 201786 201788 201787 L-PROLINA 1,2-PROPANODIOL 2-PROPANOL SODIO ACETATO anhidro SODIO ACETATO 3-hidrato SODIO L(+)-ASCORBATO SODIO BENZOATO SODIO CARBONATO anhidro SODIO CARBONATO 1-hidrato SODIO CARBONATO 10-hidrato tri-SODIO CITRATO 2-hidrato tri-SODIO CITRATO 51/2-hidrato SODIO CLORURO SODIO DISULFITO SODIO DODECILO SULFATO

Sinónimos

Fórmula C5H9NO2 CH2OHCHOHCH3 CH3CH2CH2OH CH3COONa CH3COONa.3H2O C6H7NaO6 C6H5COONa Na2CO3 Na2CO3.H2O Na2CO3.10H2O Na3C6H5O7.2H2O Na3C6H5O7.51/2H2O NaCl Na2S2O5

N.º de identificación

E-262i E-262i E-301 E-211 E-500i E-500i E-500i E-331iii E-331iii E-223

(Lauril Sulfato Sódico)

194

tri-SODIO FOSFATO 1-hidrato tri-SODIO FOSFATO 12-hidrato SODIO HIDROGENO di-ACETATO (Sodio Diacetato) SODIO HIDROGENO CARBONATO (Sodio Bicarbonato) di-SODIO HIDROGENO CITRATO 11/2 Hidrato di-SODIO HIDROGENO FOSFATO (di-Sodio anhidro orto-Fosfato) di-SODIO HIDROGENO FOSFATO 12-hidrato SODIO di-HIDROGENO FOSFATO (mono-Sodio 1-hidrato orto-Fosfato) SODIO di-HIDROGENO FOSFATO 2-hidrato di-SODIO di-HlDROGENO PIROFOSFATO SODIO HIDROXIDO lentejas SODIO HIDROXIDO escamas SODIO LACTATO sol. 50% p/p SODIO NITRATO SODIO NITRITO tetra-SODIO PIROFOSFATO anhidro (tetra-Sodio Difosfato) tetra-SODIO PIROFOSFATO (tetra-Sodio 10-hidrato Difosfato) SODIO POLIFOSFATO SODIO SULFATO anhidro SODIO SULFATO 10-hidrato SODIO SULFITO anhidro SODIO TARTRATO anhidro SODIO TARTRATO 2-hidrato SODIO TIOSULFATO 5-hidrato D(-)-SORBITA (Sorbitol) TALCO lavado TIERRA SILICEA purificada y calcinada TITANIO (IV) OXIDO L-TRIPTOFANO VAINILLINA ZINC OXIDO ZINC SULFATO 1-hidrato ZINC SULFATO 7-hidrato

C12H25NaO4S Na3PO4.H2O Na3PO4.12H2O CH3COONaCH3COOH NaHCO3 C6H6Na2O7.11/2H2O Na2HPO4 Na2HPO4.12H2O NaH2PO4.H2O NaH2PO4.2H2O H2Na2O7P2 NaOH NaOH C3H5NaO3 NaNO3 NaNO2 Na4P2O7 Na4P2O7.10H2O (NaPO3)6 Na2SO4 Na2SO4.10H2O Na2SO3 Na2(COO)2(CHOH)2 Na(COO)2(CHOH)2.2H2O Na2S2O3.5H2O C6H14O6

E-339iii E-339iii E-262ii E-500ii E-331ii E-339ii E-339ii E-339i E-339i E-450i E-524 E-524 E-325 E-251 E-250 E-450iii E-450iii E-452i E-514i E-514i E-221 E-335ii E-335ii E-420i E-553b E-171

TiO2 C11H12N2O2 C8H8O3 ZnO ZnSO4.H2O ZnSO4.7H2O

M

195

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SRL

196

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