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MEBRANAS Y OSMOSIS.

Emiliano Pérez Asiaín. Biología molecular de la célula 2.


Biología. Facultad de ciencias

Resumen Esto ocurre cuando una célula


viva se introduce en un vaso con
Realizamos una serie de
agua destilada. A consecuencia
experimentos para medir los
de que el líquido celular consta
cambios en el tamaño que sufren
de una solución acuosa a cuyos
las células, tanto vegetales como
solutos disueltos se les impide
animales. Utilizamos células de
fluir al exterior, producen una
epidermis de cebolla además de
tensión de absorción tal, que
células de tubérculo de papa.
ocurre un flujo osmótico a través
Para hacer la evaluación en las
de la membrana celular, y el
células animales, utilizamos
agua fluye al interior de la célula;
eritrocitos de gallo. Realizamos
ésta se hincha lentamente hasta
evaluaciones cualitativas de todo
llegar el momento en que estalla,
ellos. De igual manera realizamos
dispersando su contenido celular
mediciones de tamaño en las
en el agua destilada.
células vegetales y mediciones
de absorbancia para medir la En cambio, si una célula viva, en
fragilidad osmótica de los lugar de ser introducida en agua
eritrocitos. destilada, se introduce en una
solución que posee un valor de
Introducción presión osmótica mayor a la
Las membranas biológicas están dada por el plasma celular
formadas por una bicapa lipídica (solución hipotónica), la célula
que contiene proteínas integrales disminuye de tamaño,
y periféricas. Se caracterizan por adquiriendo aspecto de mórula
ser semipermeables o por el paso del solvente
selectivamente permeables, esto intracelular al exterior. Si la
significa que permiten el paso solución en la que se coloca la
libre de agua y sustancias de célula no provoca ningún cambio
bajo peso molecular sin carga a por el flujo osmótico, ya sea
través de ellas, más fácilmente interior o exterior a la célula, se
que el movimiento de sustancias le llama solución isotónica.(Del
cargadas y grandes moléculas de castillo, 1997)
soluto. (Denbigh, 1955) La presión es una fuerza por
El efecto osmótico en las células unidad de área (P=F/A), de tal
se verifica directamente por el forma que la presión osmótica
fenómeno llamado "plasmólisis". generada en la célula resultante
de la ósmosis, produce una
presión hidrostática sobre las vacuola aumenta, su potencial
paredes celulares denominada: osmótico disminuye y el agua se
presión de turgor (Pt). El turgor mueve desde el protoplasto hacia
en las plantas da lugar al la vacuola, lo que resulta en la
crecimiento, movimientos y otras deshidratación del protoplasto.
respuestas como la apertura de Las células en una fase de
los estomas. Desde que las crecimiento rápido y
fuerzas se desarrollan en pares, metabolismo activo, se
recordando la Tercera Ley de caracterizan por una
Acción y Reacción de Newton, concentración baja del jugo
que dice que las fuerzas reales vacuolar y una alta hidratación
existen en partes iguales en del protoplasma. Las células
magnitud y opuestas en inactivas y en estado de latencia
dirección, desde el exterior de la se caracterizan por una alta
célula se ejerce una presión en concentración de jugo vacuolar y
sentido contrario, pero con la una baja hidratación del
misma magnitud que se llama protoplasma, esto se observa en
presión parietal (Pp). Cuando se semillas y en los tallos de plantas
alcanza la condición de equilibrio, durante el período de invierno.
no ocurre difusión neta de agua
al interior de la célula y las tres La membrana de los eritrocitos
presiones se igualan:P0 = Pt= Pp. es semipermeable y cuando son
colocados en una solución
Sin embargo en cualquier otra hipotónica el líquido penetra
condición que no sea la de osmóticamente a ellos, hasta que
equilibrio, alcanza el equilibrio osmótico o
Pt= Pp pero ambas serán hasta que se rompen, dando
diferentes a la presión osmótica, salida a la hemoglobina, la que
P0. se lee colorimétricamente. (Lewis
El potencial hídrico permite & Bain, ,2008)
predecir la dirección de la La capacidad del eritrocito
ósmosis, la que ocurre de un alto normal para soportar la
a un bajo potencial hídrico. Existe hipotonicidad se debe a su forma
por lo tanto un gradiente con bicóncava, que permite que la
valores altos en la zona célula incremente su volumen en
absorbente de las raíces de la cerca de un 70% antes que la
planta y valores bajos en los superficie de la membrana se
órganos de la planta que pierden distienda, después de este límite
agua por transpiración (hojas) se produce la hemólisis. (Vives-
La presión osmótica de una Aguilar.2006)
solución depende de la presencia Método
de solutos disueltos. El potencial
osmótico de la savia celular La serie de experimentos las
puede revelar el grado de dividimos en dos etapas, la
hidratación del protoplasma. Sí la primera fue en la que trabajamos
concentración de solutos en la con las células vegetales.
Cebolla anteriores dibujamos los
Para los experimentos con las cambios que se observaron.
células de cebolla, primero Para finalizar esta parte, se
tuvimos que hacer dos cortes reemplazó la solución de cloruro
con navaja, los cortes fueron de sodio al 6% por agua des
transversales y dos cortes ionizada utilizando la técnica
paralelos de poco más de un descrita anteriormente y se
centímetro de longitud. En los dibujaron los cambios
extremos de estos pedazos de observados en el microscopio.
cebolla que resultaron
seccionamos longitudinalmente Papa
con la navaja, después Para la parte del experimento
desechamos las dos primeras con la papa se le quitó la cascara
hojas y conservamos la que y posteriormente le tuvimos que
quedó. Posteriormente de la hacer 15 cortes utilizando un
cara interna de la hoja horadador cilíndrico. Los cortes
desprendimos una membrana tenían que ser aproximadamente
transparente, según las de 1cm de largo, una vez que
indicaciones no se debe utilizar obtuvimos las 15 piezas, se midió
la capa externa que es mas lo largo y su diámetro y se anoto
brillosa. en una tabla.
Después colocamos un pequeño Lo siguiente que hicimos fue
fragmento de esta capa que colocar 5 trozos de papa en el
recibe el nombre de epidermis sentido de las agujas del reloj
en un portaobjetos, se colocó dentro de un vaso de
una gota de rojo neutro. El precipitados de 100 ml con cada
siguiente paso fue colocar el una de las siguientes soluciones.
portaobjetos y observar en el Vaso con 50 ml solución isotónica
microscopio. Se dibujó lo (NaCl 0.9%). Vas con 50 ml
observado. solución hipertónica (NaCl 6%).
lo siguiente que se realizo fue Vaso con 50 ml solución
agregarle una gotita de solución hipotónica (Agua destilada).
salina al 4%, para ello tomamos
un poco de solución con una Una ves sumergidos totalmente y
pipeta Pasteur y la depositamos acomodados según su orden en
a un lado de la preparación, en la tabla, los dejamos reposar por
el lado opuesto colocamos un 30 minutos a temperatura
pedacito de papel filtro para que ambiente.
este por capilaridad aspire la Transcurrido el tiempo sacamos
solución de fosfatos con rojo los trozos de papa y los secamos
neutro. Posteriormente con papel absorbente, se
dibujamos los cambios que volvieron a medir y a pesar como
observamos. al inicio del experimento, los
El siguiente paso consistió en datos fueron anotados en una
sustituir la solución al 4% por la tabla.
de 6%, al igual que en los casos Revisar figura 2.
2.5ml, al sexto 3 ml y en el
Eritrocitos ultimo 4.3ml.
Para la parte correspondiente a la
fragilidad osmótica de eritrocitos El siguiente paso fue agregar
comenzamos realizando una agua destilada hasta obtener un
evaluación cualitativa de los mismo volumen en todos los
eritrocitos de la muestra. Para tubos, es decir 5ml.
ello colocamos en un Posteriormente se mezclo por
portaobjetos un gota de sangre y
una gota de solución, primero Leectura Eritrocitos
agua destilada. En otro tubo Absorbancia % de NaCl
portaobjetos una gota nueva y 7 0.001 0.86
solución de cloruro de sodio al 6 0.173 0.6
6%. 5 0.176 0.5
En un último portaobjetos 4 0.233 0.46
colocamos otra pequeña gota de 3 0.203 0.4
sangre y una de solución 2 0.135 0.1
fisiológica. Colocamos sus 1 0.121 0
respectivos cubreobjetos y
observamos en el microscopio. inversión y se agregaron .05 ml
Dibujamos todo lo que de sangre en cada uno de los
observamos. tubos, echo esto volvimos a
La siguiente fase del mezclar por inversión y dejamos
experimento con eritrocitos reposando a temperatura
consiste en una evaluación ambiente durante 30 minutos.
cuantitativa de la lisis en las Transcurrido el tiempo de reposo,
diferentes concentraciones. se volvió a mezclar por inmersión
para posteriormente centrifugar
Primero se consiguieron 5ml de a 2000 rpm. Durante 5 minutos.
sangre de gallo en un vacutainer
con EDTA como anticoagulante.
Se numeraron 7 tubos de ensaye Figura 1. Lecturas de
en orden ascendente y se les absorbancia de muestra de
colocaron las siguientes sangre.
sustancias por medio de una Colocamos la muestra en el
pipeta. espectrofotómetro y leímos a
Solución de NaCl 1% pH 7.4, Sin 540nm utilizando el tubo 7 como
embargo esta fue sustituida por blanco.
la solución fisiología que Debido a que nuestra muestra
utilizamos al comenzar los presentaba un color muy opaco,
experimentos. En el primer tubo fue necesario hacer una dilución
no se coloco esta solución, en el antes de leer en
segundo fueron .5 ml en el espectrofotómetro. La proporción
tercero fueron 2ml, en el cuarto quedo 19:1. Los datos obtenidos
se agregaron 2.3ml, en el 5to se apuntaron en una tabla.
Revisar Figura 1
Resultados
Diámetro(c Largo (cm) Masa (gr)
m)
inicia final inicia final inicia final
l l l
1.8 1.8 1.1 1.1 2.73 2.8
1.8 1.8 1.2 1.2 3.34 3.43
Solución 1.8 1.8 3.24
1.3 1.3 3.67
isotónica
1.8 1.8 1.1 1.1 3.47 3.57
1.8 1.8 1.3 1.4 3.49 3.59
1.8 1.6 1.2 1.2 3.35 2.78
Solución 1.8 1.6 1.2 1.2 3.61 3.09
hipertóni 1.8 1.6 1.3 1.3 3.6 3.09
ca 1.8 1.6 1.1 1.1 2.96 2.51
1.8 1.6 1.2 1.2 3.37 2.79
1.8 1.8 1.1 1.1 2.92 2.98
Solución 1.8 1.85 1.1 1.15 2.95 3.05
hipotónic 1.8 1.8 1.1 1.2 2.93 3.03
a 1.8 1.8 1.2 1.3 2.7 2.77
1.8 1.8 1.1 1.1 2.54 2.59

diámetro (cm) largo (cm) Masa (gr)


inicial final inicial final inicial final
Promedi Promedi Promedi Promedi Promedi Promedi
Tratamiento o ± DE o ± DE o ± DE o ± DE o ± DE o ± DE
Solucion 1.8 1.8 1.2 1.22 3.34 3.326
Isotonica
solucion 1.8 1.6 1.2 1.2 3.378 2.852
Hipertonica
solucion 1.8 1.81 1.12 1.17 2.808 2.884
Hipotónica
Figura 2. Mediciones de tamaño y masa de trozos de papa.
Figura 3. Tabla de promedios de los tres tratamientos.
% % largo % masa
Tratamiento diámetro Figura 4
Solucion 100 98.36065 100.4209 Tabla de cambios
Isotonica 57 26 relativos de los
112.5 100 118.4431 promedios
solucion
Hipertonica 98 obtenidos en la
99.447513 95.72649 97.36477 Figura 3.
solucion
Hipotónica 81 57 12

Figura 5. Grafica comparativa entre los promedios inicial y final


del diámetro de los trozos de papa.

Figura 6. Grafica comparativa entre los promedios inicial y final


del largo de los trozos de papa.

Figura 7. Grafica comparativa entre los promedios inicial y final


del la masa de los trozos de papa.

Para poder graficar (figura 9) los resultados obtenidos de la parte


cuantitativa con eritrocitos tuvimos que obtener el porcentaje de
hemolisis a partir de la absorbancia registrada en la tabla de la Figura 1.
Se utilizó la lectura del espectrofotómetro de cada tubo, dividido entre
las unidades de lectura del tubo 1, multiplicado por 100, lo que nos dio
como resultado los datos de la siguiente tabla. Figura 8

Figura 8. Tabla de % de hemolisis y % de NaCl

Eritrocitos
tub % de % de
o hemolisis NaCl
0.82644628
7 1 0.86
142.975206
6 6 0.6
145.454545
5 5 0.5
192.561983
4 5 0.46
3 167.768595 0.4
111.570247
2 9 0.1
1 100 0

Figura 9. Grafica de % de hemolisis vs % de NaCl


Discusión que las Las células de puesto que
La serie de plantas papa al observar al
experimentos tienen presentaron microscopio
que diferente cambios los eritrocitos
realizamos presión bastante de la sangre
para observar osmótica en significativos de gallo,
la osmosis y sus diferentes al ser observamos
el transito del secciones evaluadas una
agua en la vasculares, cuantitativam diferencia
membrana tales como ente, las sustancial
nos hace las raíces las graficas nos con respecto
plantearnos hojas o los permiten a lo
nuevas tallos. contrastar los esperado, ya
preguntas, Entonces cambios que que los
tales como habría de ocurrieron en eritrocitos de
¿La esperarse la papa. Los gallo tienen
concentració que los cambios mas núcleo, no
n en la resultados de significativos como la
solución las células ocurrieron en mayoría de
fisiológica epidermatica la solución los
que s de cebolla, hipertónica, mamíferos.
utilizamos sean un tanto tal como Esto nos hace
para las diferentes a podemos preguntarnos
células de los de los apreciar en la si esta
eritrocito, tubérculos de figura 5 ya característica
será la misma papa. que esta influirá en su
que se deba presenta la fragilidad
utilizar para Las células de diferencia osmótica, ya
las células epidermis de mayor, entre que el núcleo
vegetales? cebolla el diámetro ocupa un
sufrieron la inicial y el espacio en el
Otra pregunta contracción final. La masa citoplasma
que sale a en el también varió que bien
flote es si es protoplasto en la podría ser
importante la que se concentració utilizado por
región de esperaba. En n hipertónica, agua, para
donde se la sin embargo tratar de
tomen las preparación no fue tan proporcionar
células con rojo significativo un equilibrio
vegetales neutro se como en el osmótico al
para estos pudo incluso diámetro. encontrarse
experimentos apreciar la en medios
, puesto que vacuola La parte de con
la bibliografía contraída. eritrocitos fue diferentes
consultada aun más concentracio
menciona sorprendente, nes.
Tampoco hay la parte de dge
La etapa que descartar cuantificación Universi
cualitativa del la posibilidad , por medio ty
experimento de un error al de la Press.
con momento de colorimetría, (Ver
eritrocitos, hacer los no se pudo secc.
generó datos cálculos, lo llevar a cabo II).
un tanto que nos satisfactoria Vives-
confusos, arrojaría mente, Aguilar.
puesto que datos posiblemente 2006
en la figura 8 erróneos. por alguna de Manual
encontramos Conclusione las razones de
porcentajes s expuestas Técnica
de hemolisis Se consiguió más arriba. s de
superiores al observar el Laborat
100 % lo cual cambio en la Bibliografía orio en
no concuerda estructura de Del Castillo, Hemato
con la la célula, se Luis F. logía.
realidad. La observo en el 1997. El 3°
grafica que microscopio fenóme Ed.edito
se obtuvo a el protoplasto no rial
partir de de las células mágico Masson.
estos datos vegetales de la Lewis,S. &
tampoco contraído. Y osmosis Bain,
concuerda se pudo . B.and
con la medir el Segund Bates,I.
esperada. cambio que a 2008
Puede ser sufrieron los edición. Hemato
causa de fragmentos Fondo logía
algún error al de papa en de Práctica
momento de las diferentes cultura . 10°Ed.
verter la soluciones. económ Editoria
sangre en la ica. l
solución. Otra Se pp37- Elsevier
posibilidad es observaron 38 .
el error al los cambios Denbigh, K.
momento de en los G.. http://www.fo
diluir la eritrocitos de 1955.T rest.ula.
sangre para gallo, en el he ve/~rub
que la microscopio, Principl enhg/re
pudiera leer debido a las es of lahid/
el diferentes Chemic consult
espectrofotó concentracio al ado 11-
metro. nes Equilibr sep-
agregadas. ium. 2010
Sin embargo Cambri