MANEJO DE LAS CAJAS DE PETRI EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

Integrantes: Irina Teherán Rubén Lara Cristian Mendoza Wendy Castro Rocío Gómez Yeris Imitola

Introducción

La gente más feliz, no necesariamente tiene lo mejor de todo; simplemente disfrutan al máximo de todo lo que está en su camino.

GENERALIDADES
Cápsula formada por dos discos de cristal que pueden adaptarse entre sí. En el disco que forma el fondo de la caja se deposita el agar y el conjunto puede ser fácilmente esterilizado, sembrado y colocado en la estufa. La caja de Pétri, se utiliza generalmente para la separación de los microbios cuyas colonias se desarrollan aisladamente y pueden ser estudiadas con facilidad.

HISTORIA
En 1881 Koch ideo un método para reproducir bacterias en un medio de cultivo sólido hecho con gelatina, e introdujo el método de la placa para asegurar cultivos puros. El uso de un medio sólido fue una idea nueva, ya que hasta esa época se habían empleado casi exclusivamente infusiones vegetales y otros líquidos, lo que facilito la obtención de cultivos puros de bacterias para su estudio individual. Para los cultivos en placa empleamos una cajita de vidrio llamada cápsula o caja de Petri introducida por Petri, uno de los ayudantes de Koch durante 1887.

UTILIDAD
Es utilizada para preparar cultivos de hongos, virus y bacterias, y también para seleccionar muestras de animales o alimentos. Existen de 2 tipos las plasticas y las de cristal  

Plásticas: son desechables y vienen estériles Cristal: son reutilizables pero nuevas y/o usadas deben pasar por un proceso desinfección y esterilización antes de ser usadas.

PYREX Y KIMAX Y de aluminosilicato.Material de Vidrio: Generalmente el vidrio es de borosolicato. vidrio COREX   .

lo cual significa un pequeño cambio de volumen al cambiar de temperaturas y le da mayor fuerza mecánica . y le impide daños por acción del calor.PYREX Y KIMAX    Resiste todas la temperaturas de trabajo en el laboratorio de rutina Altamente resistente a los ataques químicos Tiene un alto punto de tensión.  Bajo coeficiente de expansión lineal ( alrededor de 3 x 10 6 º Celsius).

COREX Además de las propiedades del Pirex y Kimax. el vidrio COREX presenta la ventaja de mayor resistencia mecánica: es más resistente al rayado . la rotura y oscurecimiento causado por los álcalis. .

LIMPIEZA Y DESINFECCION Material de Vidrio: .

enjuagarlo con abundante agua corriente y finalmente con agua destilada. que aún no ha sido utilizado.Limpieza del Material de Vidrio:  NO OLVIDE NUNCA QUE: El material nuevo de vidrio. El material de vidrio debe estar químicamente limpio y libre de contaminación y residuos de grasas o detergentes   . debe lavarse con solución detergente. Todo material proveniente de procedimientos de laboratorio es potencialmente infectante.

y que el agua se adhiera a la superficie del vidrio en capa continua. Debe permitir cuando se encuentra limpio que la superficie se humedezca uniformemente.Limpieza del Material de Vidrio:   Es importante que el material de vidrio se encuentre totalmente limpio antes de usarlo para análisis o para calibrarlo. .

ácido sulfúrico. alcohol y agua desionizada. La elección del agente limpiador depende de la naturaleza del contaminante. potasio. el mas utilizado es la de ácido sulfúrico y dicromato de potasio sódico.   . También se pueden utilizar para lavado de material de vidrio: Ácido nítrico al 20% durante 12 horas ( material para mediciones de iones como sodio.Limpieza del Material de Vidrio: Hay varios métodos para limpiar el material de vidrio del laboratorio. calcio y hierro).

. si se necesita de urgencia debe dejarse por lo menos una hora. de lo contrario 12 horas.Limpieza del Material de Vidrio: Material que se va a usa por primera vez. material manchado. grasoso o pipetas con coágulos de sangre se debe pasar por una mezcla Sulfocrómica. Enjuagar con agua del chorro y pasar por agua destilada.

Limpieza del Material de Vidrio:      Mezcla Sulfocrómica: Medir 500 ml de agua destilada en erlenmeyer de un litro Añadir lentamente con agitación constante 250 ml de ácido sulfúrico concentrado Sumergir el erlenmeyer en un recipiente que contenga agua corriente para enfriar el contenido Agregar 100 g de dicromato de potasio y mezclar hasta disolver Aforar a un litro con agua destilada .

. dejándolos seguros para su manipulación. Se realiza utilizando el hipoclorito de sodio o dicloroisocianurato de sodio según sea el caso.Material de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio: DESCONTAMINACIÓN: Es un procedimiento que remueve microorganismos patógenos de los objetos. Se emplea jabón enzimático.

Esta siempre debe proceder a los procesos de desinfección. . materia orgánica.Material de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio: LIMPIEZA: Es la remoción de toda materia extraña ( suciedad. etc) de los objetos o las superficies. etc. instrumental o elementos. pisos. El detergente común se usa para superficies como paredes. usualmente es realizada con agua y detergente enzimático para los equipos.

Detergente Enzimático: Detergente que contiene enzimas proteolíticas que disuelven la materia orgánica. preferiblemente de pH neutro. no producir daño en los equipos. Debe eliminar la suciedad orgánica e inorgánica.Material de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio: LIMPIEZA: Detergente: Agente químico utilizado para la eliminación de suciedad . Se utiliza para pre-remojo del instrumental. no dejar residuos ( facilidad de enjuague) y no ser tóxico para el personal que lo manipula. disminuyendo la posibilidad de corrosión y picado. tween ) . evitando la manipulación del material contaminado por parte del operario. Biodegradable y no iónico al 2% ( extran.

finalmente debe lavarse con alcohol etílico. . si es material para contener como los vasos de precipitados.Material de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio:     LIMPIEZA: Después de haber mantenido el material en la disolución limpiante lavar totalmente con agua del grifo lavar finalmente con agua destilada.

cualquier ruptura en la capa indica un lugar de contaminación. .Material de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio: LAVADO DE RECIPIENTES:  Debe adicionarse suficiente solución limpiadora y girarlo varias veces. para que una capa de disolución cubra todo el interior.

PROTOCOLO DE DESINFECCION Y LAVADO DE MATERIAL CONTAMINADO EN EL LABORATORIO Material de Vidrio .

clorados. aldehídos. Los mas usados son yodóforos. alcoholes y peroxígenos .Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio DESINFECCIÓN: Es un proceso que elimina todos los microorganismos de los objetos o superficies con excepción de las esporas bacterianas. Se realiza utilizando un agente desinfectante.

6% acuoso 0.000 ppm 30-50 ppm yodo libre 2% NIVEL ACCION Intermed Alto Alto Intermed Bajo Intermed Bajo Intermd Intermed Alto BACT Si Si Si Si Si Si Si si VIRU LIPO Si Si Si Si Si Si Si si VIRU HIDRO No Si Si No Si Si Si Si TBC Si Si Si No No Si Si Si HON GOS Si Si Si Si Si Si Si Si ESPO RAS No Si Si No No No No Si .4-5% acuoso 100-10.Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio GERMICIDA Alcohol etílico Peróxido de hidrogeno Formaldehído Amonios cuaternarios Fenólicos Cloro y derivados Yodóforos Glutaraldehído CONCEN TRACION 50-75% 3-25% 3-8% 0.4-1.

Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio     DESINFECCIÓN: Prepare diariamente una solución de hipoclorito de sodio a 500 PPM. para el lavado de material así: 5 cc de límpido comercial (hipoclorito de sodio 5%) 500 cc de agua del chorro Utilícela para descartar el material y para descontaminar el material biológico (muestras) Deje actuar hasta el día siguiente ( mínimo dos horas) Esta solución se debe renovar todos los días. porque es desactivada por acción de la luz directa. Produce vapores tóxicos al incinerar los residuos infecciosos. cuando a sido agregada a estos .

13% u otra simplemente cambie en la formula la concentración x= ( 1 litro) x 5.Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio Ejemplo: Si deseamos preparar un litro de solución a una concentración de 5000 ppm y el hipoclorito viene en concentración del 5% sería: ( 1 litro) x 5000 ppm = 100 cc de hipoclorito 5 x 10 Si la concentración del cloro cambia sea 6%.000 ppm = 38.46 cc de hipoclorito 13 x 10 .

El recipiente usado debe tener una capacidad superior a la que se va a preparar. Añadir agua hasta completar el volumen de solución a preparar.Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio     Preparación: Medir con probeta plástica los 100 cc de hipoclorito Agregar el hipoclorito al recipiente en el cual se va a preparar. .

elementos no críticos. Los más usados son yodopovidona en solución o jabón al 2. Desinfectar unidades y quirófanos. hongos y bacterias con un tiempo de contacto de 30 minutos.Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio      Compuestos yodóforos: Son líquidos de acción contra virus.5% y yodo polietoxipolipropoxietanol. No tiene acción sobre esporas bacterianas. Desinfectante de nivel intermedio. .

Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio ESTERILIZACION: Se hace con el fin de destruir. todos los microorganismos. como en recipiente o instrumentos. tanto en medio de cultivo. .

Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio ESTERILIZACIÓN: El material que amerite autoclavado por alta contaminación someterlo: a 121ºC. 15 libras de presión por 20 minutos. .

Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio ESTERILIZACIÓN: La central de Esterilización debe cumplir con:  Recepción del material  Lavado  Secado  Inspección  Lubricación  Empaque  Procesamiento  Almacenamiento materiales estériles  Almacenamiento materiales no estériles .

Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio    Una vez descontaminado el material deje en agua con jabón líquido neutro . lave con cepillo y asa de pipetas tubos o probetas. las láminas y laminillas deben ser enjuagadas con el cepillo respectivo o esponjilla ( este material no debe ser lavado más de 5 veces. . Saque el agua de jabón con abundante agua del chorro y finalmente deje en agua destilada para extraer los residuos de jabón. Las láminas y laminillas sumergirlas en alcohol etílico y secar con tela que no deje escapar lanilla. después debe descartarse).

mientras es recogida por la ruta de recolección. roedores o insectos en la central de aseo y residuos. . para evitar sean regadas por animales. luego clasificar y colocar en sus respectivos puestos .Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio   Los tubos y demás material de vidrio dejelos secar al aire. Al material biológico de descarte adicionar hipoclorito a 500 PPM y descartar al día siguiente en las bolsas rojas que serán enviadas a incineración. mantener en canecas con tapa hermética.

La desinfección se hace con el objeto de destruir microorganismos patógenos. de aguas y alimentos. se hace diariamente una limpieza. . para remover la suciedad o mugre y posteriormente una sanitización ( proceso de desinfección eficiente) para esto se utiliza un detergente eficaz.Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio En el laboratorio clínico. biodegradable y agua de buena calidad. toxigénicos y saprofíticos.

se sumerge en solución detergente neutra y utilizando una esponjilla o cepillo de cerdas suaves se lava nuevamente con agua corriente.Material del Laboratorio de Microbiología LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO:   El material de vidrio que contenga cultivos o cualquier otro tipo de material contaminado por microorganismos. se deja escurrir y se seca al horno en calor seco. es colocado en un recipiente de descarte para llevarlo a desinfección y posterior esterilización cuando así lo amerite. 200 ºC por 1 a 2 horas. . según el volumen de material. Luego se lava con agua corriente.

 . Lavar con agua corriente.Material del Laboratorio de Microbiología El material de vidrio o cualquier otro material contaminado con microorganismos. es colocado en un recipiente para llevarlo al autoclave para su esterilización 121 º C por 30 minutos. se deja escurrir y se seca en calor seco (horno). Luego se sumerge en solución detergente y posteriormente se lava normalmente con agua del chorro y una esponjilla.

se colocan en un recipiente con solución de hipoclorito de sodio.000 ppm). se lavan con abundante agua del chorro.Material del Laboratorio de Microbiología  Las pipetas después de su uso. 1 g/L de cloro libre( 1. se escurren. se enjuagan con agua destilada. . se secan en un ambiente de calor seco.

. que se utiliza para esterilizar el material de vidrio y frascos para toma de muestras utiliza una temperatura de 170 º C por dos horas.Material del Laboratorio de Microbiología ESTERILIZACION POR CALOR SECO:  Se utiliza el flameado por mechero.  El horno de aire caliente. para esterilizar asas resistentes al fuego.

subtilis ( oxido Etileno). Cinta Indicadora para Oxido de Etileno) o Biológico ( tiras con esporas específicas: Bacillus stearothermophilus ( vapor). Se coloca un Indicador ya sea Químico ( Cinta Indicadora para vapor. Integradores químicos. se sella con cinta de enmascarar para esterilización y se lleva al autoclave a 121·C por 15 a 20 minutos a 15 a 20 libras de presión.Material del Laboratorio de Microbiología ESTERILIZACION EN CALOR HÚMEDO Envolver el material en papel de esterilización (papel kraft). Se usa para medios de cultivo y materiales  . B.

para limpiar paredes y pisos y para sumergir el material sucio antes de esterilizar.Material del Laboratorio de Microbiología ESTERILIZACION POR MEDIOS QUIMICOS:   Se utiliza hipoclorito de sodio al 5 %. Se utiliza para limpieza de los mesones.000 ppm de cloro libre. . virus. antes y después de trabajar. vegetativas. que es efectivo contra células bacterianas. hongos y parásitos. esporuladas. los mesones también son limpiados con fenol al 1 % o formol al 4%. a una concentración de 1.

Material termosensible. compresas. equipos metálicos e instrumental. No líquidos y polvos. líquidos. madera. canales ciegos Telas y Siliconas Artículos porosos: papel. Artículos de vidrio. silicona. material de caucho y material textil. Elementos sensibles al calor. instrumental delicado con bordes de corte. Telas y materiales de caucho. Elementos sensibles al calor. material termosensible. Qué no esterilizar? Materiales que contengan celulosa: papel. Elementos sensibles al calor. tela.Material del Laboratorio de Microbiología CARACTERÍSTIC VAPOR CALOR SECO PLASMA OXIDO DE ETILENO GAS DE FORMALDEHIDO Qué esterilizar? Líquidos hidrosolubles. Polvos. . tela. compresas. Esterilización de canales largos y angostos como lúmenes.

polipropileno no tejido 15 min a 121 *C 10 min a 126*C 3 min a 134 *C ( solo en caso de urgencia) aluminio Tyvek/Mylar y polipropilen no tejido Kraf blanco. Ciclo corto: cargas que no contienen endoscopios flexibles Cinta Indicadora para Plasma ( en el exterior del paquete) Indicador químico Cinta indicadora para Vapor ( en el exterior del paquete) Cinta indicadora para Calor Seco ( en el exterior del paquete) Cinta Indicadora para Formaldehído ( en el exterior del paquete) . Tyvek/Mylar. polipropileno no tejido 8 horas a 65*C Tiempo y Temperatura 30 min a 180*C 1 hora a 170*C 2 horas a 160*C 2.Material del Laboratorio de Microbiología CARACTERÍST VAPOR CALOR SECO PLASMA OXIDO DE ETILENO GAS DE FORMALDEHID Tipo de Empaque Algodón. polipropileno no tejido Proceso 6 horas. polietileno. Cinta Indicadora para Oxido de Etileno ( en el exterior del paquete) Kraf blanco. Temperatura entre 38*C y 55*C.5 horas a 150*C 3 horas a 140*C 6 horas a 120*C 45 min a 50*C( 50Lt) 75 min (100 Lt) 54 min (100 Lt). polietileno. Aireamiento 10 horas. Tyvek/Mylar. kraf blanco.

Material del Laboratorio de Microbiología CARACTERÍST VAPOR CALOR SECO PLASMA OXIDO DE ETILENO GAS DE FORMALDEHID Indicador químico Integrador químico Vapor ( interior del paquete) Integrador Químico Plasma ( interior del paquete) Integrador químico Oxido de Etileno ( interior del paquete) Test de Esporas Bacillus subtilis variedad niger ( una vez al día en una carga aleatoria) Integrador químico Formaldehído ( interior del paquete) Indicador biológico Test de Esporas de Bacillus stearothermophilus ( una vez al día en una carga aleatoria) Test de Esporas de Bacillus subtilis variedad niger ( una vez al día en una carga aleatoria) Test de Esporas de Bacillus stearothermophilus ( una vez al día en una carga aleatoria) Test de Esporas de Bacillus stearothermopilus (una vez al día en una carga aleatoria) .

medios líquidos de cultivo Cuando? Que usa? Diariamente Hipoclorito de sodio 5000 ppm Recipientes para descartar el material Elementos de protección personal . tubos con solución salina.Material del Laboratorio de Microbiología DESECHO DE MATERIAL DE CULTIVO Cajas de Petri.

.Material del Laboratorio de Microbiología DESECHO DE MATERIAL DE CULTIVO      Esterilizar en el autoclave a 121*C por 1 hora Medios de cultivo de las cajas de petri: desechar en la bolsa roja marcada ³peligroso infeccioso´ Solución salina y tioglicolato: desecharlos en el sifón Depositar los tubos en solución de hipoclorito a 5000 ppm durante 30 minutos Lavar los tubos según las indicaciones del lavado de material de vidrio.

Calidad del material de vidrio  PRUEBAS DE LIMPIEZA PARA EL MATERIAL DE VIDRIO: .

.Prueba de limpieza  Los vasos sucios generalmente tienen gotas de agua en la superficie interna.

  La forma más simple es llenar el material de vidrio con agua destilada ± desionizada y vaciarla.Prueba de limpieza Observamos si el material de vidrio está cubierto por una capa continua de agua que no forma goticas en las paredes ni fluye de manera discontinua. .

que produce manchas blanquecinas en las paredes al secarse. Estas manchas podrían originarse a partir del lavado inadecuado del material con agua dura.Prueba de limpieza   Otra forma de controlar la calidad del lavado del material de vidrio es la presencia de manchas de agua dentro y fuera del vaso o tubo de ensayo. .

Prueba de limpieza  El auxiliar del laboratorio como parte integrante del sistema de garantía de calidad. debe analizar algunos materiales al azar. . el cual debe ser avalado por el jefe directo o de la sección. por lo menos una vez a la semana para detectar restos de detergentes y debe registrar el resultado de esta supervisión.

Revisar la calidad del detergente o del agua y prolongar el tiempo de enjuague con agua del chorro y destilada posterior al proceso de limpieza.Prueba de limpieza  Cuando se advierte restos de detergentes en cualquiera de los materiales de vidrio deben tomarse las precauciones y ejercer los procedimientos de corrección de inmediato.  .

La aparición de un color rosa ( púrpura) en cualquier momento indica la presencia de detergente residual. .Prueba de limpieza    La eliminación del detergente puede comprobarse con una solucion de: 2mg de sulfobromoftaleina sódica BSP en 10 ml de agua destilada O a 20 ml de agua desionizada agregar dos gotas de BSP  la disolución puede hacerse en un recipiente y ser usada para lavar las paredes internas y externas del material de vidrio seleccionado.

.Que Dios los tenga en la palma de su mano Y que los Ángeles los cuiden siempre.

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