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Ing. Bioqca. Diapositivas 1

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INGENIERÍA BIOQUÍMICA

Mario Arias Zabala
Facultad de Ciencias Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín 2007

PROGRAMA RESUMIDO
1. Breve reseña histórica 2. Generalidades de los Procesos Bioquímicos 3. Procesos Fermentativos 3.1. Estequiometría de procesos fermentativos 3.2. Cinética de procesos fermentativos 3.3. Aspectos termodinámicos 4. Técnicas del cultivo celular 4.1. Cultivo discontinuo (batch) 4.2. Cultivo alimentado (fed batch) 4.3. Cultivo continuo 5. Agitación de Medios de Cultivo 6. Aireación de Medios de Cultivo 7. Esterilización 8. Escalado

BIBLIOGRAFÍA (Libros)
1. Doran, P. : Bioprocess Engineering Principles. Academic Press. 1995. 2. Blanch, H. and Clark, D.: Biochemical Engineering. Marcel Dekker. 1997. 3. Casablancas, F. y López, J. (Editores): Ingeniería Bioquímica. Editorial Síntesis.1998. 4. Bailey, J. and Ollis, D.: Biochemical Engineering Fundamentals. McGraw-Hill. 1986. 5. Quintero, R.: Ingeniería Bioquímica. Editorial Alhambra. 1981. 6. Bu¶Lock, J. y Kristiansen, B.: Biotecnología Básica. Edit. Acribia. 1991. 7. Stanbury, P., Whitaker, A. and Hall, S.: Principles of Fermentation Technology. Edit. Butterworth Heinemann. 1995. 8. Nielsen, J. and Villadsen, J.: Bioreaction Engineering Principles. Plenum Press. 1994. 9. Wang, D. y otros: Fermentation and Enzyme Techonology. John Wiley and Sons. 1979. 10. Aiba, S., Humphrey, A. and Millis, N.: Biochemical Engineering. Academic Press. 1973. 11. Shuler, M. and Kargi, F.: Bioprocess Engineering: Basic Concepts. Prentice Hall. 1992.

BIBLIOGRAFÍA (Revistas)
1. Biotechnology and Bioengineering 2. Biotechnology Progress 3. Journal of Fermentation and Bioengineering 4. Biochemical Engineering Journal 5. Chemical and Biochemical Engineering Quarterly 6. The Chemical Engineering Journal and the Biochemical Engineering Journal 7. Process Biochemistry 8. Applied Biochemistry and Microbiology 9. Applied Microbiology and Biotechnology 10. Journal of Applied Microbiology 11. Letters in Applied Microbiology 12. American Journal of Biochemistry and Biotechnology 13. Biotechnology Advances 14. Critical Reviews in Biotechnology 15. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology

AREAS DE INVESTIGACIÓN EN INGENIERÍA BIOQUÍMICA

‡ Optimización de procesos existentes. ‡ Desarrollo de nuevos procesos con base en células microbianas modificadas . genéticamente, células vegetales y células animales. ‡ Procesos con células y enzimas inmovilizadas. ‡ Nuevos diseños de biorreactores. ‡ Desarrollo de biosensores y sensores virtuales. ‡ Monitoreo y control asistido por computador de bioprocesos.

que las levaduras son plantas y causan la fermentación.o. 1828 Wohler sintetiza la urea. incluyendo la caja de petri. inventadas por Ricardo Petri. 1862 Pasteur postula que todos los procesos fermentativos resultan de actividad microbiana y descubre los m. anaerobios. 1837 Cagniar. no surgen espontáneamente. 1675 Leeuwenhoek mejora los lentes del microscopio y descubre formas de vida unicelular. 1750 Spallanzani aporta evidencias de que los m.BREVE RESEÑA HISTÓRICA DE LA MICROBIOLOGÍA 1665 Hook describe la estructura celular del corcho. Schwann y Kutzing proponen. desmintiendo que los compuestos orgánicos sólo pueden ser sintetizados por organismos vivos. 1883 Koch introduce las técnicas del cultivo puro.o. 1876 Tyndall desarrolla el método de esterilización discontinua por calentamiento. independientemente. .

. anticuerpos monoclonales. . . orgánicos (cítrico. tecnología de células y enzimas inmovilizadas. . 1865 ± 1940 Era Pasteur: Solventes orgánicos (etanol. glicerol).BREVE CRONOLOGÍA DE LA BIOTECNOLOGÍA ± 1865 Era pre-Pasteur: Bebidas alcohólicas (cerveza. tratamiento aerobio de aguas . gasohol. transformaciones microbiológicas de esteroides. . butanol. productos lácteos . . Era de los antibióticos: Penicilinas (tecnología de fermentación sumergida). Era post antibióticos: Aminoácidos. vino). acético. tecnología de la estructura de la célula animal. residuales. insulina humana. láctico). tecnología del ADN recombinante (ingeniería genética). yogurt). proteína unicelular (SCP). vacunas contra virus. 1960 ± 1975 . Era de la nueva biotecnología: Tecnología de los hibridomas. acetona. tratamiento anaerobio de aguas residuales (biogás). . gran variedad de antibióticos. (quesos. 1940 ± 1960 . ác. enzimas (detergentes). polisacáridos bacterianos (goma xantana). otros alimentos fermentados. 1975 ± .

Este conjunto de operaciones constituyen los llamados Bioprocesos. para la obtención de bienes (productos útiles) o servicios (tratamiento de desechos contaminantes o aguas residuales) en condiciones económicas. Procesos Biotecnológicos o Procesos Biológicos. o de componentes de dichas células (enzimas).Generalidades de los procesos biológicos La Ingeniería Bioquímica se ocupa del estudio del conjunto de operaciones que hacen uso de células (microbianas. . vegetales o animales). Procesos Bioquímicos.

Son procesos catalíticos. libres en suspensión en un medio líquido o inmovilizadas en soportes físicos. Biocatalizador: Células. ‡ Procesos Fermentativos: Utilizan células libres en suspensión o inmovilizadas en soportes físicos. Son procesos autocatalíticos. . tejidos celulares u órganos.Bioprocesos ‡ Procesos Enzimáticos: Utilizan enzimas o complejos enzimáticos aislados de las células. enzimas o complejos enzimáticos. como agentes de la biotransformación.

Proceso Enzimático: S + E P (Producto) + E (Enzima) (Proceso Catalítico) (Sustrato) (Enzima) S (Sustrato) E (Enzima) P (Producto) Proceso Fermentativo: S (Sustratos o Nutrientes) + Xo (Biomasa o Inóculo) X + P (Productos o Metabolitos) (Biomasa) (Proceso Autocatalítico) .

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etc. extracto de levadura. ‡ Micronutrientes: sulfatos (S) y fosfatos (P) de Na.). Sustrato limitante: nutriente presente en menor proporción estequiométrica. caldo peptonado (hidrolizado de proteínas). hormonas. aire enriquecido con O2. ‡ Oxígeno (procesos aerobios): aire. úrea.Nutrientes: ‡ Fuente de carbono y energía: carbohidratos (glucosa. lactosa. harinas de soya o pescado. almidón. amoniaco. hidrocarburos. celulosa. K u otros metales. aunque en algunos casos puede ser la fuente de N o el O2. sacarosa. precursores. . ‡ Fuente de nitrógeno: nitrógeno elemental (N2). etc. vitaminas. oxígeno puro. Normalmente es la fuente de C y energía. etc. sales de amonio. etc.

dado de medio. . en condiciones económicas.Inóculo: volumen. Vi. de suspensión de células viables. Ej. V. licor de cocción de maíz.1 V Medio de cultivo: solución. ‡ Medios sintéticos o definidos: composición exactamente definida. que contiene los nutrientes necesarios para las células. la fermentación de un volumen. de concentración adecuada capaz de garantizar. ‡ Medios complejos: composición no conocida con exactitud (medios industriales).05-0. normalmente son medios selectivos (medios de laboratorio). normalmente acuosa. Comúnmente: Vi = 0.: melazas. suero de leche.

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nivel de espuma. por la acción del biocatalizador (células o biomasa). pH. agitación.Preparación de medios ‡ Tipo y cantidad de nutrientes a emplear (formulación) ‡ Esterilización ‡ Ajuste de condiciones ambientales (T.) Control del proceso: T. . fuerza iónica. homogenización. concentraciones de O2 y CO2. Fermentación: conversión de los componentes del medio en biomasa y productos o metabolitos. pH. etc.

cristalización.). . secado. destilación. etc. disrupción celular. intercambio iónico. adsorción. agitación.) Control de variables más importantes Separación y purificación del producto (Down stream processing) Conjunto de operaciones de separación y purificación de la biomasa o de los metabolitos de interés (centrifugación. precipitación. extracción.Optimización del proceso ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Tipo de fermentador Modo de operación Tipo de células Medio de cultivo Condiciones de operación más adecuadas (T. separación con membranas. filtración. cromatografías. pH. etc.

Aspectos a estudiar en un bioproceso ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Estequiometría Cinética Termodinámica Fenómenos de Transporte Dinámica y Control Economía .

a saber: ‡ Sustratos o nutrientes (S) ‡ Biocatalizador.ESTEQUIOMETRÍA DE PROCESOS FERMENTATIVOS Objetivo Establecimiento de relaciones cuantitativas entre los distintos componentes del proceso. células o biomasa (X) ‡ Productos o metabolitos (P) Aplicaciones ‡ Formulación de medios de cultivo ‡ Requerimientos de enfriamiento de biorreactores ‡ Control por computador de biorreactores .

Enfoques: Molecular o microscópico: supone el conocimiento del conjunto de reacciones químicas que constituyen el metabolismo celular (modelos de caja blanca) Ingeniería Metabólica. .

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Requerimientos Nutricionales y Ambientales  Necesidades elementales  Necesidades de nutrientes específicos  Requerimientos energéticos  Necesidades ambientales del cultivo b.Diseño de Medios de Cultivo a. Objetivos del proceso  Obtención de productos  Producción de biomasa (proteína unicelular. Restricciones técnico-económicas  Disponibilidad y costos de las materias primas  Facilidad de recuperación de productos  Control de contaminación . SCP)  Mantenimiento celular c.

Es aplicable para propósitos ingenieriles como formulación de medios y control de biorreactores. relaciones estequiométricas empíricas y en el conocimiento de la composición elemental de la biomasa.Enfoque Macroscópico No considera los procesos que a nivel molecular ocurren en las células (modelos de caja negra). Características del enfoque macroscópico ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ ‡ Se deben cumplir los balances de masa y energía. Se basa en balances elementales de materia. Se requiere conocer el contenido celular de todos los elementos para los cuales se deban hacer los cálculos (composición elemental de la biomasa). Algunos nutrientes pueden ser limitantes o algunos productos pueden ser inhibitorios. El número de nutrientes en el medio usualmente es muy grande y no todos pueden ser incluidos en los cálculos. . No se tienen en cuenta los mecanismos o rutas de reacciones que el sistema emplea.

es posible asociarle una ³fórmula empírica´.Ecuación genérica del proceso: ‡ Fuente C + Fuente N + O2 ‡ CaHbOc + NlOmHn + O2 Células + Productos + CO2 + H2O C H O N + CjHvOz+ CO2 + H2O Donde: CaHbOc: fórmula genérica para carbohidratos o hidrocarburos. NlOmHn: fórmula genérica para la fuente de nitrógeno. Conocida la composición elemental de la biomasa. C H O N : ³fórmula empírica´ de la biomasa. CjHvOz: fórmula genérica para el producto extracelular. .

etc. P ‡ Iones monoatómicos: Na+. Cl‡ Elementos traza: Mn. factores ambientales. Cu. ‡ La composición elemental de las células varía con la especie. B. Co. Mg2+.Composición elemental de microorganismos ‡ Sólo 22 elementos químicos. K+. la rata de crecimiento celular. Fe. Si X: Elementos presentes sólo en algunas especies. el sustrato limitante. H. Mo. Ca2+. I. V. N. . son componentes esenciales de los organismos vivos. O. ‡ Elementos de la materia orgánica: C. Al. Zn.

Ejemplo: Composición elemental de la bacteria Escherichia coli.295N0.936O0. Ejemplo: Determine la ³fórmula empírica´ de un microorganismo que tiene la siguiente composición porcentual en peso seco: *10-3 Fórmula empírica: CH1.251 .

el sistema tendría 4 ecuaciones y 5 incógnitas (los 5 coeficientes estequiométricos). 1) (Ec. . correspondiente al crecimiento celular sin formación de productos extracelulares (metabolitos externos): a CHxOy + b O2 + c HlOmNn CH O N + d H2O + e CO2 x: Coeficientes estequiométricos (5 incógnitas) Establezca las ecuaciones de balance elemental del proceso. 4) Conocidas las fórmulas empíricas de las fuentes de carbono y nitrógeno y de la biomasa. Solución: ‡ ‡ ‡ ‡ Balance de C: Balance de H: Balance de O: Balance de N: a=1+e ax + cl = + 2d ay + 2b + cm = + d + 2e cn = (Ec. 3) (Ec. requiriendo otra ecuación para su solución.Ejemplo: Considere la siguiente ecuación química genérica. 2) (Ec.

66O0. . la fuente de nitrógeno es amoniaco y la biomasa tiene la fórmula empírica CH1. ‡ Ejercicio: Determine los coeficientes estequiométricos del proceso anterior.20. si la fuente de carbono es el hexadecano. Se sabe además.43 moles CO2/mol O2.27N0.La otra ecuación generalmente es una relación empíricamente obtenida entre algún par de coeficientes estequiométricos. es 0. que el factor de rendimiento Moles CO2 formadas/Moles O2 consumidas. también conocido como Cociente Respiratorio (RQ). Estas relaciones se conocen genéricamente como Factores de Rendimiento. por determinación experimental.

g CO2/g O2). (moles biomasa/mol sustrato. ‡ Yc/o : Rendimiento de CO2 con respecto al oxígeno (RQ). (moles producto/mol sustrato. . ‡ Yp/x: Rendimiento de producto con respecto a la biomasa. g producto/g sustrato). (moles biomasa/mol oxígeno. ‡ Yx/o: Rendimiento de biomasa con respecto al oxígeno. g producto/g biomasa). ‡ Yp/s: Rendimiento del producto a partir del sustrato.Otros factores de rendimiento ampliamente usados ‡ Yx/s: Rendimiento de biomasa a partir del sustrato. g biomasa/g oxígeno). (moles producto/mol biomasa. g biomasa/g sustrato). (moles CO2/mol O2.

Rendimiento Global y Rendimiento Instantáneo YF/G = ¨F/¨G (Rendimiento Global) ¨F. de volumen constante. rG: Ratas volumétricas de reacción de F y G. ¨G: Variaciones en las cantidades de F y G en un intervalo finito de tiempo.  YF/G YFG Lim . los factores de rendimiento son siempre positivos. Para un reactor discontinuo (batch). podemos definir: (¨F/¨G) = dF/dG = (dF/dt)/(dG/dt) = rF/rG = YF/G (Rendimiento ¨G 0 Instantáneo) rF. Notas  Por definición. en el cual la reacción química entre F y G es la única fuente de variación de sus cantidades.

Rendimiento Teórico y Rendimiento Observado ‡ Rendimiento Teórico: Dado por la relación estequiométrica existente entre las sustancias relacionadas en el factor de rendimiento. ¨ST: Variación total medida u observada en la cantidad de sustrato. donde los ¨¶s son los cambios medidos u observados en las cantidades de F y G en un intervalo dado de tiempo. Rendimiento Observado: Dado por la relación ¨F/¨G. sustrato). Representa el máximo rendimiento posible. . Y¶XS = ¨X/-¨ST (Rendimiento observado de biomasa con respecto al . Ejemplo: Considere el proceso fermentativo de producción de biomasa dado por la ecuación: S X ‡ ¨X: Variación medida u observada en la cantidad de biomasa.

. entonces. Sustrato utilizado para mantenimiento celular (movimiento. además de la biomasa. transporte activo de sustancias a través de membranas. etc.En realidad: ¨ST = ¨SC + ¨SM ¨SC : ¨SM: . Sustrato realmente utilizado para crecimiento celular. hay formación de productos extracelulares: ¨ST = ¨SC + ¨SM + ¨SP Donde: ¨SP: Sustrato consumido para la formación de productos extracelulares. YXS > Y¶XS Cuando. Como ¨SC < ¨ST . . Por tanto: YXS = ¨X/-¨SC (Rendimiento Verdadero o Teórico de biomasa con respecto al . recambio de componentes celulares.). sustrato).

Ej. ‡ El producto es un metabolito secundario. cerevisiae.: Producción de etanol por S.: Producción de antibióticos por mohos. Ej. ‡ El producto surge del metabolismo energético.Estequiometría del crecimiento celular con formación de productos extracelulares Casos ‡ El producto principal aparece como resultado del metabolismo energético primario. . niger. Ej. Sólo para procesos de la primera clase se puede expresar la estequiometría del proceso por una única ecuación química que relaciona la biomasa acumulada con el sustrato consumido y el producto formado.: Producción de ácido cítrico por A.

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de la biomasa y el producto.Ecuación genérica: aCwHxOy + bO2 + cNlOmHn CH O N + dH2O + eCO2 + fCHvOz ‡ Conocidas las fórmulas empíricas de las fuentes de carbono y nitrógeno. . o a partir de un balance de electrones. O. ‡ Las dos ecuaciones faltantes se pueden obtener a partir de factores de rendimiento. se tendrían 6 incógnitas (los 6 coeficientes estequiométricos). experimentalmente hallados. faltando dos ecuaciones para poder resolver el sistema. ‡ Los balances elementales de C. H y N suministrarían 4 ecuaciones.

5 (NO3 -). Electrones Disponibles: número de electrones disponibles en un compuesto para transferir al oxígeno en la oxidación del compuesto hasta CO2. Calcule el número de electrones disponibles y el grado de reducción. S: 6. C: 4. Ejemplo: Considere el sustrato CwHxOyNz. de electrones disponibles: 4w + x . 0 (N2). Se calcula a partir de la valencia de los distintos elementos que constituyen el compuesto.2y ± 3z)/w . H2O y compuestos que contienen N. Solución ‡ ‡ No. H: 1.Otra ecuación entre los coeficientes estequiométricos puede obtenerse de un balance de electrones. N: -3 (NH3). O: -2. P: 5. Grado de Reducción ( ): número equivalentes de electrones disponibles en aquella cantidad del material que contiene 1 at-gr de C.2y ± 3z Grado de reducción ( s): (4w + x .

P : Grado de reducción del producto. X : Grado de reducción de la biomasa. para la reacción química genérica de producción de biomasa con formación de producto extracelular: aCwHxOy + bO2 + cNlOmHn CH O N + dH2O + eCO2 + fCjHvOz el balance de electrones disponibles. Así.Balance de electrones Los electrones disponibles para transferir al oxígeno son conservados durante el metabolismo. con N2 como fuente de nitrógeno. S S± 4b = X + fj P . es: aw Donde: : Grado de reducción del sustrato.

sumada a las ecuaciones de balance elemental y a los factores de rendimiento conocidos. provee otra ecuación que relaciona los coeficientes estequiométricos (incógnitas) la cual.La ecuación de balance de electrones anterior. Así. Demanda teórica de oxígeno El requerimiento de oxígeno de un proceso fermentativo. permitirá determinar los coeficientes estequiométricos. pudiendo estimarse su demanda teórica a partir de un balance de electrones. para la fermentación representada por la ecuación genérica: CwHxOy + aO2 + bNlOmHn Balance de electrones: w S cCH O N + dH2O + eCO2 + fCjHvOz ± 4a = c X +fj P La demanda teórica de oxígeno (dada por el coeficiente estequiométrico a) será: a = (w S ± c X ± f j P)/4 . está directamente relacionado con los electrones disponibles en el sustrato para transferir al oxígeno.

De la ecuación: obtenemos: Donde: a = (w S± c S) X± fj x P)/4 1 = ( 4a/w + (c /w S) + (f j P/w S) 4a/w S: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con el . En un proceso anaerobio en ausencia de formación de producto: c Por tanto: c = cmax = w S/ x x /w S= 1 . oxígeno. fj P/w S: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con el . biomasa. metabolito extracelular. c x /w S: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con la .

5 (-2) + 0.2 (-3) = 4.2 fmax = w S/ Análogamente: j P fmax: Límite superior teórico de rendimiento del producto. MX. el grado de reducción de la biomasa ( x) sería: x = 4 + 1. . MS: Masas moleculares de la biomasa y del sustrato respectivamente. Además: YXS = cMX/MS Donde: YXS: Rendimiento de biomasa a partir del sustrato.8 + 0.2.8O0. Por tanto: Yxs.5N0. max = w S MX/ x MS Admitiendo como fórmula genérica para la biomasa la fórmula empírica: CH1.Donde: cmax : Máximo rendimiento teórico o termodinámico posible de biomasa.

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