CROMATOGRAFIA

Definición de cromatografía Método usado principalmente para la separación de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel (matriz). La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa, distribuida como una película, etc... Las separaciones cromatografícas se consiguen mediante la distribución de los componentes de una mezcla entre la fase fija y la fase móvil. La separación entre dos sustancias empieza cuando una es retenida más fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse más rápidamente en la fase móvil. las retenciones mencionadas pueden tener su origen en dos fenómenos de interacción que se dan entre las dos fases y que pueden ser : 1.-La adsorción, que es la retención de una especie química por parte de los puntos activos de la superficie de un sólido quedando delimitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial. 2.- La absorción, que es la retención de una especie química por parte de una masa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera,absorción pura, o a reaccionar químicamente con la misma, absorción con reacción química, considerando ambas como un fenómeno másico y no superficial. tipo líquido-sólido intercambio iónico líquido-líquido fase estacionaria fase movil

sólido inerte como gel de sílice o disolventes alúmina resina cambiadora soluciones acuosas

líquido adsorbido en un soporte líquido sólido película de líquido adsorbida gas sobre un soporte sólido

gas-líquido

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Es preciso también poder guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa para activarlas. La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares. Ventajas de la cromatografía en capa fina

Las propiedades de la fase estacionaria pueden alterarse mediante la adición de compuestos tales como disoluciones tamponadoras para mantener el pH deseado. láminas de vidrio. pero puede ser tratado con hidrocarburos para neutralizar los grupos -OH. y y y y y . para separaciones analíticas. etc). de forma que se haga apto para separar componentes lipófilos (esteroides. La proporción de adsorbente y agua depende del tipo de adsorbente. En la preparación de las placas también se pueden adicionar indicadores fluorescentes o aglomerantes. El adsorvente se deslíe en agua destilada. lo que hace que sea un método adecuado para fines analíticos. No consigue un desarrollo tan alto de la sustancia depositada como el gel de sílice. Dos parte de agua y una de adsorbente pueden tomarse como norma general. Pueden usarse reveladores corrosivos.y y y El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor.2 mm. En general para realizar una separación preparativa de un gramo de muestra es necesario una placa de vidrio de 20x20 cm. El método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles. en general suele ser de: 0. ácidos grasos. aunque también se le puede añadir un adherente. y se utiliza para separar componentes insaturados. 35 gramos de adsorbente y 80 ml. Cabe destacar la adición de nitrato de plata (AgNO3). Se trata de un adsorbente polar. no obstante. Originariamente se utilizaban. dándole a ésta un carácter básico. Carbón activo (carbón en polvo) Celulosa Almidón Azucares Preparación de placas. para proporcionar firmeza al adsorbente.1-0. en diversos tipos de gel de sílice. juntos o por separados (amarillo y/o verde). yeso (sulfato de cálcico semihidratado). A este proceso se le denomina cromatografía de fase reversa (silanizado). Para mezclar la papilla homogéneamente es preferible agitar de modo mecánico. Adsorbentes Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el tamaño de las partículas del adsorbente. que sobre papel destruirían el cromatograma.. habrán de consultarse la instrucciones del fabricante. cuanto más finamente dividido esté mayor será su adhesión al soporte. Óxido de aluminio (alúmina): La alúmina u óxido de aluminio es un adsorbente ligeramente básico debido a que en el proceso de extracción de la alúmina a partir de la bauxita quedan algunas moléculas de hidróxido de aluminio adheridas a la alúmina. como soporte del adsorbente. pero en la actualidad también se utilizan láminas de otros compuestos orgánicos más flexibles. a este proceso se le denomina argentación. ceras. Dependiendo del tipo de separación que se desee (cualitativa o preparativa) se utilizará un tamaño de placa u otro. También han sido incorporados dos indicadores del ultravioleta. Algunos de los adsorventes más utilizados son: y Gel de sílice (silicagel): Lleva incorporado un agente aglomerante. vitaminas liposolubles. de agua destilada. El espesor de la placa es otro factor a tener en cuenta al preparar la placa.

Las placas. se dejan reposar un corto espacio de tiempo después de cubrirlas. de manera que al aplicar 2 µl resulta en la carga 20 µg de producto sólido. cuando sea posible. Mezclar en un Erlenmeyer el agua y el adsorbente. luego se colocan en bandejas metálicas. Acetato Tetracloruro Piridina. carbono. 4.* Etanol. dietílico. Los productos a examinar se disolverán.5.2 mm. 5. Agua. para evitar los agrietamientos que se producirían por efecto del cambio de temperatura. el proceso a seguir es el siguiente: 1. Muchos reactivos de revelado llegan a detectar 0. En este momento puede activarse el agente adsorbente. Cloroformo. normalmente. Agitar enérgicamente. Extender la papilla sobre el soporte de vidrio. etilo. de forma que en la placa solo quedará la muestra a analizar.1 µg de material. Una vez colocado el toque se deja secar para evaporar el disolvente. para separaciones preparativas. Para ello existen en el mercado extensores que se utilizan para crear de forma mecánica placas homogéneas del espesor deseado. que afectarían al desarrollo del proceso cromatográfico. .* Metanol. la mezcla cloroformo:metanol (1:1) es efectiva.* de de de petróleo. Benceno. Golpear con el dedo la parte inferior del so porte.0. por esto con esta carga puede llegarse a observar un 5% de impurezas. Frecuentemente se emplean disoluciones al 1%.. bien calentándolas durante 30-60 minutos a 105-110 ºC (las placas de celulosa no deben calentarse más de 10 minutos a 105 ºC) para expulsar así el aire. 2. La placa debe quedar libre de grumos y rugosidades. Elección del eluyente La elección del eluyente dependerá lógicamente del componente que se va a separar y del material en que la separación se lleva a cabo. Es conveniente dejar secar las placas inicialmente al aire. Principales eluyentes en orden creciente de polaridad: Eter Eter Ciclohexano. Ácido acético. Sin embargo a menudo se necesitan disolventes polares. 3. en un disolvente orgánico no polar que tenga un punto de ebullición lo suficientemente bajo para que se evapore después de la aplicación. Si no se disponer de extensor. Diclorometano. Hacer oscilar la papilla de un lado a otro. bien dejando las placas reposar toda la noche a temperatura ambiente.

Frecuentemente esta distancia es de 10 cm. . esto es. Generalmente el eluyente se introduce en la cámara una hora antes del desarrollo. El tiempo de desarrollo. parece ser la más conveniente para medir valores de RF. No utilizar compuestos muy volátiles. El tiempo de una cromatografía cualitativa suele ser de un par de minutos. No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad). La cromatografía se realiza en una cubeta. Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares. ya que permite separar las impurezas que se desplazan con mayor y menor velocidad. Después del desarrollo. cosa que no debe olvidarse. Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares. Las placas pueden desarrollarse durante un tiempo prefijado. La mejor posición de desarrollo para un componente es el punto medio entre el origen y el frente del eluyente. El frente del eluyente nunca debe llegar a tocar el borde de la placa. Desarrollo de la cromatografía en capa fina El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el método ascendente. o hasta que se alcance una línea dibujada a una distancia fija desde el origen. podemos seguir utilizando la misma placa para aplicar otros eluyentes más polares. b) Aplicando un eluyente poco polar. para permitir la saturación de la atmósfera. al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi en vertical. a) Toque de la muestra sin aplicar ningún eluyente. Esto se hace para estandarizar los valores de RF. Para conseguir la máxima saturación posible de la atmósfera de la cámara. A veces pueden obtenerse separaciones mejores sin poner papeles en las paredes.*compuestos cancerígenos. En la elección del eluyente influyen varios factores: y y y y y Precio. Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores). Pureza. por lo general. las parades se tapizan con papel impregnado del eluyente. las placas pueden secarse rápidamente con una corriente de aire caliente. La elección del eluyente se realiza de forma empírica. hasta dar con el más apropiado. mientras que el tiempo de una cromatografía preparativa puede llegar a un par de horas.. c) Aplicando un eluyente más polar. no llega a los 30 minutos. por la acción de la capilaridad.

Si la placa se estropea por acción del aire o de la luz.dinitrofenilhidracina (para aldehidos y cetonas). pero las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente señalar las manchas aparecidas. el cual forma complejos coloreados con los componentes orgánicos (con tonos amarillo-marrón). Métodos físicos. Verde de bromocresol (para ácidos carboxílicos). se secará en una cámara que contenga un gas inerte o aislada de la luz. Métodos físicos. Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo. De tal forma que al colocar la placa bajo una lámpara ultravioleta.4 . que reacciona con los componentes orgánicos produciendo manchas negras. para ello se pulveriza la placa con los reactivos reveladores con la ayuda de un pulverizador de vidrio y una pera de goma. aparecen . Si el reactivo revelador es peligroso o muy corrosivo. existen otros específicos: y y y y 2. Además de estos reveladores generales. El tamaño de las manchas no está relacionado con la cantidad de componente separado. Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas). Métodos químicos Consisten en ralizar una reacción química entre un reactivo revelador y los componentes separados. para ello existen dos tipos de métodos: y y Métodos químicos. Ninhidrina (para aminoácidos). Es preferible pulverizar con las placas en posición horizontal. La pulverización se realizará poco a poco. la pulverización deberá realizarse en una vitrina de gases bien ventilada. Otro reactivo revelador bastante utilizado es el ácido sulfúrico. En cromatografía en capa fina no puede realizarse el bañado del cromatograma (en cromatografía en papel sí). o mediante un dispositivo que proporcione aire comprimido. y dependiendo del indicador y de la longitud de onda. Localización de sustancias Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la posición de dichos compuestos. El más común consiste en añadir al adsorbente un indicador fluorescente.

ya que alterarían los compuestos. De esta manera se tiene el . La fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase estacionaria. Se utiliza para la separación de sustancias gaseosas. Las sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda total. Cromatografía de gases. La Fase Móvil es un Gas (llamado Gas Portador) y la Fase Estacionaria puede ser un sólido (Cromatografía Gas-Sólido) o una Película de líquido de alto punto de ebullición (Generalmente Polietilén-Glicol o Silicón) recubriendo un sólido inerte (Cromatografía Gas-Líquido). todos los demás compuestos sobre la placa se relacionan con éste. Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma placa con el mismo eluyente u otros de menor polaridad. puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. los cálculos se simplifican si el denominador es 10. En este caso no se pueden usar reveladores químicos. El máximo valor de RFque se puede alcanzar es de 1. o en otros casos aparece toda la placa fluorescente excepto donde hay componentes. También se puede operar de la manera siguiente: Se selecciona un compuesto (X). el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plástico o vidrio. mide la retención de un componente. sino indIcador ultravioleta. una columna normalmente localizada en el interior de una cámara termostatizada (horno). Para averiguar si dos compuestos son iguales. Se define como: La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la mancha. La fase estacionaria esta constituida por un sólido poroso.RX . lo ideal es un RF entre 0. un . fase estacionaria. ya que: Cromatografía en columna Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Alúmina (Al2O3). cantidad de muestra).65 y 0. hasta apreciar una separación mínima. La migración de las sustancias de la mezcla a través de la columna se encuentra retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas pueda ejercer con la fase estacionaria. Para que los RFsean reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa. Algunos compuestos poseen cierta fluorescencia (aunque no es normal) con lo que pueden ser detectados directamente en una lámpara de ultravioleta. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo. La banda individual de cada sustancia puede ensancharse con el tiempo debido a procesos difusiónales. La solución que sale al final de la co lumna se reemplaza constantemente por nueva solución que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna. Sílica u Oxido de Magnesio. se colocan ambos sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. y por tanto la resolución. la separación.manchas fluorescentes en las zonas en las que hay componentes. fase móvil. aumenta con la longitud de la columna. Una vez desarrollados se calculan losRF y si son distintos.7. El cromatógrafo de gases esta constituido normalmente por un suministro y una entrada del gas portador. un puerto de inyección. que tenga una posición de desarrollo conveniente. Constantes Rf Y Rx La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posición de un compuesto sobre una placa como una fracción decimal. disminuyendo por tanto la resolución.

que permiten identificar los aminoácidos presentes en la mezcla. la longitud de la columna es entre 5 y 25 cm. Es una Cromatografía de alta presión es decir se aplica el flujo a presión (entre 1500 a 2200 psi). y requiere de equipo sofisticado. La cantidad relativa de cada uno de ellos se determina calculando el área la curva del pico correspondiente. La muestra se introduce a través del sistema de inyección dentro de la columna que es el sitio d onde ocurre la separación. La fase móvil o gas portador transporta los componentes de la muestra a través de la columna. La columna de aluminio. midiendo conductividad térmica y electronegatividad de las sustancias eluídas. lo que permite estandarizar la cromatografía. registrar e imprimir el cromatógrama. por esta razón debe ser inerte para evitar interacciones con la muestra o la fase estacionaria. . limita el ensanchamiento por difusión de las bandas. que posteriormente se amplifica por un registrador grafico o un integrador permitiendo indicar el momento en que salen de la columna los componentes. vidrio o teflón contiene la fase estacionaria sólida o líquida y esta sujeta a la superficie por un soporte que es generalmente de sílice. y una bomba que inyecte el líquido a la columna. se requiere un colector. La Fase Estacionaria es una resina de intercambio iónico que contiene grupos cargados. Al final de la columna existe el detector que permite la detecció n y cuantificación de las sustancias. teniendo la propiedad de separar especies ionizadas (Cationes o Aniones). y ser capaz de minimizar la difusión gaseosa. la mezcladora se requiere para variar la proporción de solvente en la fase móvil y el inyector permite l a aplicación de la muestra. En proteínas la cromatografía de intercambio iónico se basa en las diferencias en signo y magnitud de la carga eléctrica neta de las proteínas a un valor . un inyector. Se pueden analizar muestras proteicas. Los picos se relacionan según su "tiempo de retención" con estándares. La salida de la sustancia se registra en un cromatógrama en forma de picos y se determinan medidas como la altura y el área del pico. La reducción del tiempo en que la sustancia se encuentra en el interior de la columna. A la salida de la columna se coloca un detector generalmente de absorción ultravioleta o de fluorescencia y si se desea recuperar las moléculas que eluyen de la columna. El sistema HPLC requiere una mezcladora de solventes. la Fase Móvil es generalmente una solución amortiguadora de pH. El tamaño de partícula es entre 3 y 10 micras. Se produce una señal tipo eléctrico.Cromatografía Liquida de alta eficiencia o rendimiento (HPLC). aumentando por tanto la resolución. En los sistemas modernos el análisis de la información obtenida se realizan mediante una computadora acoplada al equipo.detector y un sistema computarizado para analizar. acero inoxidable. Generalmente las columnas de sílica requieren alta presión para que el flujo de líquido sea adecuado. Cromatografía de intercambio iónico. identificar la naturaleza los picos eluídos y cuantificar su contenido.

Tipos de cromatografía Naturaleza de fase estacionaria Naturaleza de fase estacionaria Sólido Adsorción Exclusión . Cromatografía por Permeabilidad en Gel. La matriz de la columna esta formada por un polímero entrecruzado con poros de tamaños determinados. La Cromatografía de Afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando. las proteínas que se retienen en la columna son aquellas que se unen específicamente a un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la columna. también llamada de filtración en gel. Después de que las proteínas que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a través de la columna. Cromatografía de Afinidad. Las proteínas de menor tamaño. La Cromatografía de exclusión molecular. de forma que se genere un gradiente de tal concentración. la proteína de interés que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante leempleo de una solución que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interacción entre el ligando y la proteína. La separación de la proteína de la matriz cargada puede obtenerse gradualmente cambiando el pH y/o la concentración salina de la fase móvil. La afinidad de cada proteína a los grupos cargados de la columna esta influenciada por el pH y por la concentración de iones en solución (concentración salina) que compiten con la proteína en la interacción con la matriz. Es útil para la separación de proteínas. debido a que son demasiado grandes para introducirse enlos poros de las bolas de polímero y por tanto siguen una ruta más corta y directa a lo largo de la longitud de la columna.de pH determinado. separa en función de su tamaño. En este caso. Las proteínas de mayor tamaño migran más deprisa a lo largo de la columna que las de pequeño tamaño. entran en los poros y su marcha a lo largo de la columna es más lenta.

A continuación se introduce una nueva fase movil que desactiva el acoplamiento por alteración reversible de los sitios activos del inhibidor-ligando. generalmente se utiliza un cambio de pH que modifica las características de los sitios activos. exclusión. también de naturaleza bioquímica. se eluye así el soluto de interés. Se procede a la elución de los demás componentes de la muestra mediante una primera fase móvil que no influye en el acoplamiento. lectinas y otras moléculas) denominadas ligandos de afinidad y enlazados químicamente en soportes sólidos adecuados. se procede a la regeneración de la columna. Sólo existe interacción específica entre este ligando y un soluto-analito (proteína) de la muestra insertada que queda retenido (adsorbido). Un volumen no excesivamente grande de muestra de naturaleza biológica se introduce en la columna que contienen un soporte polimérico inerte que retienen a la sustancia activa enlazado covalentemente y que se denomina ligando de afinidad. La cromatografía de afinidad tiene una serie de características generales que la distinguen de otros tipos de cromatografía líquidas Alta selectividad en el mecanismo de retención Campo de aplicación restringido Separación de un solo soluto analito Empleo de sistema de baja presión Columnas cortas de escasa eficacia cromatográfica . del soluto (proteína) o de ambos. cofactores. Fundamento de la cromatografía de afinidad En la figura se muestra de forma esquemática el fundamento de las separaciones mediante cromatografía de afinidad. inhibidores enzimáticos.Cambio iónico Afinidad Líquido Naturaleza de fase móvil Liquido Partición Líquido-líquido ((partición) Líquido-sólido)adsorción.Afinidad. lo que generalmente se hace mediante el empleo de la primera fase móvil y constituye una etapa rápida. Una vez finalizada la separación. Gas Gas-líquido (CGL) Gas-sólido (CGS) Cromatografía de afinidad Se trata de un tipo especial de cromatografía de adsorción sólido-líquido en la que la sustancia de naturaleza bioquímica (anticuerpos. retienen a los solutos (analitos). cambio iónico. Las separaciones se basan en el acoplamiento ¨llave-cerradura¨ típico de la biología molecular. de manera reversible y selectiva.

tamaño del grano controlable. El general. según reacciones uno o dos grupos hidroxilos de la matriz. Que se fundamenta en la selectividad en la retención que condiciona las características de la cromatografía de afinidad. Y según su actuación. se distinguen dos grandes grupos: Ligandos específicos . que consiste en el ataque químico con diferentes reactivos de la superficie de los soportes antes mencionados. respectivamente. La inmovización del ligando de afinidad se realiza en general mediante dos etapas secuenciales: . que se enlazan reversiblemente a un solo soluto. Esquema de un cromatograma de afinidad. como las lectinas y nucleótidos. como los anticuerpos . Debe poseer propiedades como tener una gran superficie. polímeros de acrilamida. estabilidad mecánica. los ligandos de afinidad se inmovilizan mediante el establecimiento de enlaces químicos covalente con el soporte sólido activado y un grupo reactivo del ligando que esté lo más lejos posible de la zona activa de bioadsorción. El objetivo de la inmovilización consiste en obtener una capa estable y densa del ligando bioquímico que conserve su actividad específica con plenitud. Esta etapa . que se caracterizan por poseer grupos hidroxilos superficiales.Ligandos de afinidad Son las moléculas bioquímicas que se encuentran ancladas químicamente sobre el soporte sólido inerte. en especial para trabajar a alta presión. Soportes El material sobre cuya superficie activada se establece el enlace covalente con el ligando de afinidad. fractogel TSK y sílices CPG. De la gran variedad de procedimientos el más común es el ataque con bromuro de cianógeno sobre la matriz de polisacárido. porosidad controlable. carácter suficientemente hidrofílic o para evitar adsorciones no específicas de proteínas u otras moléculas. El material utilizado generalmente para el soporte son geles orgánicos derivados de los polisacáridos como la agarosa (sepharosa). Según el pito de matriz se originan grupos diferentes: ésteres cianato en agarosa e imidocarbonatos en dextranos. Pueden considerarse dos clasificaciones de los mismos: Según su naturaleza.Activación del soporte. y los ligandos generales enlazados con un determinado grupo de compuestos bioquímicos. Inmovilización de ligandos La inmovilización de los ligandos de afinidad es un proceso complejo que en cada caso tiene connotaciones específicas. pueden ser macromoléculas biológicas o bien moleculas de bajo peso molecular de biomoléculas pequeñas o macromoléculas bioquímicas. y son las responsables de la adsorción específica de los solutos-analitos.

la fase móvil provoca la denaturación del ligando inmovilizado. No se utiliza ninguna fase móvil adicional Cromatografía de Desplazamiento: Procedimiento en el cual la fase móvil contiene un compuesto (el desplazarte) que es retenido más fuertemente que los componentes de la muestra analizada. Las partículas de fase estacionaria sólida. La elución normal se basa en la interacción inhibidor-analito. que sirva como tal o que esté impregnado con una sustancia que actúe de fase estacionaria (Cromatografía en Papel). Metodos de elución Según la naturaleza de los ligandos de afinidad y la de los solutos-analitos. la purificación de la lectina.es/biocel/wbc/tecnicas/cromatografia. co mo una pequeña cantidad en un tiempo breve. y eluida con un inhibidor que es también de bajo peso molecular y que tiene preferencia por el sitio activo del analito. o de soporte recubierto con una fase estacionaria líquida. o una capa de partículas sólidas extendida sobre un soporte. que es la situación más frecuente. TLC). Éste puede ser un papel.htm http://latina.ub. como una pequeña cantidad en un intervalo breve. fundamentalmente con el soporte activado. y teniendo en cuanta la forma de eliminar los solutos de la columna. del soluto-analito o de ambos mediante el cambio suave y reversible de los correspondientes sitios activo. cave distinguir los procedimientos generales de elución como: Elución bioespecífica: La fase móvil desplazante contiene a un modificador (generalmente llamado inhibidor) que en realidad se trata de un ligando de afinidad no ligado de bajo peso molecular que interacciona con el sitio activo de la macromolécula biológica que puede ser soluto-analito o bien el ligando de afinidad para solutos de bajo peso molecular. pueden llenar por completo el tubo (Columna Empaquetada) o estar concentradas sobre o a lo largo de su pared interna.textoscientificos. por lo que es retirada del sólido y eluida.htm .cinvestav. La elución invertida. Ejemplo. Se usa lectina para purificar glucoproteína. Cromatografía plana: Técnica de separación en la que la fase estacionaria está en forma de plano o sobre un plano. no restringida. dejando una ruta abierta. Bibliografía http://www.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas. Cromatografía de Elusión: Procedimiento en el que la fase móvil se pasa de forma continua a través o a lo largo del lecho cromatográfico y la muestra se suministra al sistema de forma discreta. se basa en la interacción inhibidor-ligando de afinidad.chem. produciéndose en todos los casos una elución por desplazamiento o competencia entre los componentes de bajo peso molecular ligados o no. El cual es una biomacromolécula que retienen específicamente el analito. En la elución no bioespecífica. Clasificación de acuerdo al lecho cromatografico Cromatografía en Columna: Técnica de separación en la que el lecho estacionario está contenido dentro de un tubo.com/quimica/cromatografia http://www. La presencia del inhibidor en la fase móvil provoca un desplazamiento análogo al anterior y se eluye el analito. La muestra se alimenta al sistema en forma discreta. tal como una placa de vidrio (Cromatografía en Capa Fina. para el paso de la fase móvil por el cent ro del tubo (Columna Tubular Abierta). Métodos principales Cromatografía Frontal: Procedimiento en el que la muestra (líquida o gaseosa) se alimenta de forma continua al lecho cromatográfico. Luego sigue el anclaje químico del ligando que se da mediante la reacción de grupos amino del mismo. con el sitio activo de la macromolécula biológica ligada o libre.produce en un disolvente orgánico o en mezclas con agua. Se distinguen 2 tipos de elución bioespecífica la normal y la invertida. El analito es una biosustancia macromolecular que es retenida por un ligando de afinidad de bajo peso molecular. de tal manera que se interrumpe la adsorción bioespecífica mediante eliminación de una o varias de las causas que la provocan.

http://apuntes.com/cromatografia-en-capa-fina.html .rincondelvago.

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