Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
BIOQUÍMICA
EL DIARIO DE LABORATORIO.
Su función es registrar lo que hiciste y lo que observaste de tal modo que lo pueda
entender otra persona. Una manera es usar siempre frases completas. Es útil escribir una
descripción completa del experimento antes de entrar al laboratorio, con secciones que
establezcan el propósito, métodos, resultados y conclusiones. Es muy recomendable
preparar el diario para anotar en él los datos numéricos antes de llegar al laboratorio.
También es buena práctica escribir la ecuación química balanceada para cada reacción que
se usará, de modo que se comprenda lo que se está haciendo.
Procedimiento general:
1
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
10. Al final de cada sesión experimental debe tener la firma de la persona que realizó el
experimento y la de un testigo que puede ser el profesor de la asignatura o el auxiliar del
laboratorio.
Este orden y limpieza es una ventaja; primero que nada está el ahorro de tiempo porque no
hay que reorganizar y volver a escribir los datos. También hay un ahorro adicional de
tiempo al hacer las operaciones para obtener los resultados si te acostumbras a poner los
datos de manera ordenada y las posibilidades de error se reducen. Además en un registro
inmediato se detectan los posibles errores en las mediciones y los cálculos. Los datos no se
perderán o copiarán mal si se registran directamente en el cuaderno en vez de hojas sueltas.
En vez de llenar todo el espacio disponible se pueden dejar páginas alternas para hacer
cálculos en sucio cuando se necesiten; por ejemplo, la página izquierda para los cálculos en
sucio y la derecha para resultados.
• Idealmente se debe usar una libreta encuadernada, con hojas numeradas y pasta gruesa.
No se deben usar cuadernos de espiral, carpetas de argollas o de ningún tipo que permita
quitar y poner hojas a voluntad.
• El tamaño de la libreta debe ser cómodo de transportar y fácil de usar. De preferencia
debe caber con facilidad en los espacios de la mesa de trabajo, para que no entorpezca el
manejo de frascos de reactivo o el uso de equipo de laboratorio.
• Se recomienda forrarla con plástico, para hacerla resistente a las salpicaduras de agua o
reactivos.
• Reservar las 2 primeras hojas para usarlas como tabla de contenido. Anotar de izquierda
a derecha: Título descriptivo del experimento, fecha(s) en que se realizó y el número de
página donde inicia.
• Reservar las últimas 6 páginas del diario para anotar información útil que se use de
manera repetitiva.
2
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 1
DETERMINACIÓN DE pKa
INTRODUCCIÓN
conjugada ] [ H + ]
K a = [ Base
[ Ácido conjugado]
Esta expresión es válida para cualquier ácido (HA) monoprotónico débil, es decir, un ácido
que sólo tenga un ácido ionizable.
A partir de la tabla que se presenta más adelante, se puede deducir que la fuerza ácida
relativa puede predecirse mediante la simple inspección de los valores de pK a, ya que
cuando menor es la fuerza del ácido, o cuanto mayor es el valor de Ka mayor es la fuerza
del ácido.
Para omitir el término exponencial, los valores de Ka se expresan comúnmente como
valores de pKa, lo que se define como:
1
pK a = log = − log K a
Ka
OBJETIVO
Determinar experimentalmente el valor del pKa aparente de algunos ácidos y a partir de este
valor el pKa real de los mismos.
MATERIAL REACTIVOS
2 Buretas graduadas de 50 ml Ácido acético 0.1 M
1 Vaso de precipitado de 150 ml Hidróxido de sodio 0.17 M (valorado)
Potenciómetro Muestras problemas 0.1 M
Papel milimétrico
3
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
METODOLOGÍA
ESTANDARIZACIÓN.
Utilizando una bureta, colocar en un vaso de precipitado (lo más exacto posible) 50 ml de
ácido acético 0.1 M.
Prosiga la adición de NaOH gota a gota, hasta que la pendiente tienda a infinito. Este es el
punto final.
A partir de la gráfica determine el pKa del ácido acético, el cual corresponde al pH obtenido
con la mitad del volumen de base utilizada (V1/2).
4
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
El cálculo del pKa real de las muestras se realiza utilizando la ecuación final de la
siguiente deducción:
[ RCOO ] + [ RCOOH ]
−
= [ RCOOH ]T = [ ACIDO TOTAL ]
[ RCOOH ] T
[ RCOO ] −
=
[ RCOOH ]
1+
[ ROOC ] −
Pero como:
Ka =
[ RCOO ][ H ]
− +
,
[ RCOOH ] =
[H ] +
[ RCOOH ] [ RCOO ] −
Ka
[ RCOOH ] T
[ RCOO ] −
=
[H ] +
1+
KA
[ Na ] +
+ H+ [ ] [
= RCOO −
]
sustituyendo se obtendría que:
[ Na ] + [ H ] = [ [ H ]]
+
RCOOH+ T
+
1+
Ka
[ RCOOH ] T = ([
] [ ])
Na + + H + 1 +
H+
[ ]
Ka
5
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
[ Na ][ H ] + ( [ H ] )
2
+ + +
[ RCOOH ] = [ Na ] + [ H ] +
T
K
+
K
+
a a
[ Na ][ H ] + ( [ H ] )
2
+ + +
[ RCOOH ] − [ Na ] = [ H ] +
T
K
+
K
+
a a
[ ]
K a ( [ RCOOH ] T − Na + ) = K a H + + Na + H + + ( H + ) [ ] [ ][ ] [ ] 2
[ ]
K a Na + − K A [ H ] − [ Na[ R][CHO]O−H](T[ H− [])N a=+ ] 0= [ N Ka+ ] ([ Na ]
+ + + + 2
a
+
[ ]) = ([ H ]) ([ Na ][ H ])
− H+ + 2 + +
K =
( [ H ]) + ([ Na] [ H ])
+ 2 + +
a
( [ Na ] − [ H ] ) + +
3.2 Sustituir también el valor de Na+ utilizado hasta el momento de obtener el punto medio
de la titulación.
3.3 Calcular también el valor de Ka y a partir de este, el valor del pKa real del ácido.
6
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 2
SOLUCIONES AMORTIGUADORAS.
INTRODUCCIÓN
La adición de una sal soluble de un ácido débil a una solución acuosa de este ácido,
aumentará el pH (disminuye la concentración de H+) de la solución. La sal se ionizará
totalmente y el aumento de la concentración de la base conjugada del ácido débil, por
efecto de la ley de “acción de masas” desplazará el equilibrio hacia la izquierda y extraerá
algunos iones hidrógeno, debido a lo anterior, el pH de una solución de un ácido débil está
determinado no tanto por la concentración del ácido, sino por la razón de la concentración
de la sal (base conjugada) a la concentración del ácido sin disociar. Tales soluciones se
llaman soluciones amortiguadoras y pueden resistir el cambio de pH cuando se añade un
ácido o base fuerte.
H2PO4- → HPO4= + H+
OBJETIVO
MATERIAL REACTIVOS
4 Matraces volumétricos de 100 ml Fosfato de potasio monobásico
1 Pipeta volumétrica de 1, 2, 5 y 10 ml Fosfato de sodio dibásico
4 Vasos de precipitado de 250 ml Hidróxido de sodio
1 Bureta graduada de 25 o 50 ml Ácido bórico
2 vidrios de reloj de 5 cm de diámetro Hidróxido de sodio 1 N
1 Pizeta Ácido clorhídrico 1 N
Agua destilada
7
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
METODOLOGÍA
VOLUMEN DE BASE
C. A. =
INCREMENTO DE pH
8
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
9
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 3
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
INTRODUCCIÓN
OBJETIVO
MATERIAL REACTIVOS
13 Tubos de ensaye de 12 x 100 mm Reactivo de Bradford
3 Pipetas de 5 ml Cloruro de sodio 0.15 M
2 Pipetas de 1 ml Reactivo de Biuret
1 Gradilla Solución amortiguadora TRIS
Baño María Estándar de proteína 10 mg/ml
Espectrofotómetro Estándar de proteína 100 µ g/100 µ l
1 Pizeta
1 Vaso de precipitado de 250 ml
10
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
METODOLOGÍA
Esta técnica se basa en la formación de un ligando de color azul, que se obtiene por la
unión del azul de Coomassie a las proteínas.
11
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
1.1 Del estándar de proteínas empleado en el método de Biuret (10 mg/ml), hacer la
dilución adecuada para obtener una concentración de 100 µ g/100 µ l. Esta solución
resultante, se utilizará como estándar en el método de Bradford.
En 1 ml de la solución de (10 mg/ml) hay 10 000 µ g. En 10 ml de la solución 100 000
µ g. Tengo que disolver estos en 100 000 µ l para que quede una solución de 100 000
µ g/100 000 µ l que es igual a 100 µ g/100 µ l y 100 000 µ l son 100 ml. por tanto
debo disolver 10 ml de la solución patrón en 100 ml de agua.
2.2 Preparar 7 tubos de ensaye, de acuerdo a la siguiente tabla de distribución de
reactivos.
Los datos de la columna 2 se multiplicam por 10 que es el factor de dilución que se hace.
10 ml de la solución patrón en 100 ml de agua
1.1 Mezclar perfectamente cada uno de los tubos de ensaye y determinar la absorbencia
a una λ de 595 nm. Utilizar el tubo No. 1 (blanco) para calibrar el
espectrofotómetro.
1.2 Registrar los datos y elaborar una gráfica (en papel milimétrico) de absorbencia
contra concentración (µ g/ml), tomando solo los valores de los tubos del 2 al 6.
1.3 Utilizando la gráfica anterior, interpolar el valor de la absorbencia de la muestra
problema y determine su concentración.
12
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 4
EXTRACCIÓN DE LA UREASA.
INTRODUCCIÓN
Se emplea como catalizador en los laboratorios de análisis clínico para cuantificar la urea.
El hidróxido de amonio formado puede titularse y representa una medida de la cantidad de
urea presente en una muestra de sangre o de orina.
En esta enzima los grupos sulfhidrilo (-SH) son de gran importancia. La enzima es activa
cuando los grupos –SH están intactos. Las formas oxidadas (-S-S-) inactivas,
probablemente pueden ser reactivadas por la acción de compuestos ricos en –SH tales como
la cisteína y el glutatión. Una alteración más estable es la reacción de los grupos –SH con
iones metálicos como Hg++, Ag+ o Cu++, con los cuales forma un “mercáptido”. Estos
derivados mercaptídicos inactivos de las moléculas enzimáticas, pueden en ocasiones
reactivarse por efecto de cisteína o glutatión.
OBJETIVO
MATERIAL REACTIVOS
2 Matraces Erlenmeyer de 200 ml Harina de soya o de haba
Embudo simple Acetona/agua 3:1 (v/v)
Papel filtro Hielo
Frasco color ámbar de 50 ml Acetona
Agitador de vidrio
Mortero con pistilo
Estufa
METODOLOGÍA
13
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
Colocar el triturado obtenido, en una estufa a 60°C y dejarlo secar durante la noche.
1. EXTRACCIÓN DE LA UREASA
1.1 Pesar 5 g del pulverizado en un matraz Erlenmeyer y cubrirlo con una mezcla de
acetona/agua.
1.2 Depositar el matraz en un baño de hielo y agitar la mezcla constantemente durante 15
min.
1.3 Filtrar la mezcla y lavar el pulverizado que queda retenido en el papel, utilizando 5 ml
de acetona fría.
1.4 Conservar el filtrado en un frasco color ámbar a temperatura de 3 a 5°C.
14
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 5
INTRODUCCIÓN
Las enzimas modifican la velocidad de una reacción química sin alterar el equilibrio final,
ya que reducen la energía libre de activación para la transformación del sustrato a producto.
La velocidad de una reacción catalizada por una enzima, se incrementa al aumentar la
concentración del sustrato, hasta un punto en el cual ya no hay incremento aún con la
adición de más sustrato.
En esta fase, el sustrato ha saturado los sitios activos de la enzima y se logra la velocidad
máxima de la reacción, la cual depende de la afinidad de la enzima y el sustrato
correspondiente.
OBJETIVO
MATERIAL REACTIVOS
Baño María Rojo de metilo al 0.04%
Pipeta de 1 ml HCl 0.1 M
Pipeta de 5 ml Urea 0.20 M
6 Vasos de precipitados de 250 ml HgCl2 al 1%
10 Tubos de ensaye Solución de ureasa
Bureta graduada de 25 ml Acetato fenil mercúrico 0.001 M
Pinzas para bureta Cisteína 0.01 M
Embudo simple Amortiguador de fosfatos 0.1 M a pH 7.01
Papel milimétrico
METODOLOGÍA
15
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
µmoles de urea hidrolizad os ( ml de HCl del problema −ml de HCl del tubo 1)( 0.1)(1000 )
=
min ( 30 )( 2 )
A: Volumen de ácido usado (L)
XA : Molaridad del ácido usado (mol/L)
NA : Número de moles de HCL adicionado
NN : Número de moles de amoniaco que reaccionan con el HCL adicionado (mol)
NU
V =
t
16
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
AX A
V =
2t
REACTIVACIÓN DE LA UREASA CON CISTEÍNA
1. Preparar 2 tubos de ensaye con los siguientes reactivos y en el orden que se indica.
17
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 6
INTRODUCCIÓN
Las reacciones catalizadas por enzimas son afectadas por la concentración del sustrato, la
concentración de la enzima, el pH del medio de reacción y la temperatura.
La temperatura influye sobre la velocidad de una reacción enzimática de dos formas: (1)
durante períodos cortos y a un rango estrecho de temperatura, la velocidad aumenta
aproximadamente dos veces por cada incremento de 10°C y (2) por arriba de 40 o 50°C, la
velocidad disminuye rápidamente debido a la desnaturalización de la enzima por el calor.
OBJETIVO
REACTIVOS
MATERIAL
6 Tubos de ensaye de 20 ml Ureasa
Pipetas de 2 y 5 ml HgCl2 al 1 %
Goteros Urea 0.25 M
6 Vasos de precipitado de 250 ml Rojo de metilo al 0.04 %
Embudo simple HCl 0.1 M
Baño de agua a 4, 25, 35, 50 y 65°C Amortiguador de fosfatos 0.1 M a pH 7.01
Bureta graduada de 25 ml
Papel milimétrico
METODOLOGÍA
1. Preparar una serie de tubos de ensaye con las soluciones que se indican en el siguiente
cuadro, respetando el orden de adición de las mismas.
18
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
6 2.5 2.5 0 5
TUBO No. 1 2 3 4 5 6
TEMPERATURA °C 35 4 25 35 50 65
canela estable
Con los resultados obtenidos, construir una gráfica que relacione los µ M de urea
hidrolizados a diferentes temperaturas.
19
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 7
INTRODUCCIÓN
OBJETIVO
REACTIVOS
MATERIAL
6 Tubos de ensaye de 20 ml Ureasa
5 Pipetas de 5 ml HgCl2 al 1 %
Goteros Urea 0.25 M
6 Vasos de precipitado de 250 ml Rojo de metilo al 0.04 %
Embudo simple HCl 0.1 M
Baño de agua a 50°C Amortiguador de acetatos 0.1 M a pH 4.0
Bureta graduada de 25 ml Amortiguador de fosfatos 0.1 M a pH 6.0
Papel milimétrico Amortiguador de fosfatos 0.1 M a pH 7.0
Amortiguador de boratos 0.1 M a pH 8.0
METODOLOGÍA
1. Preparar una serie de tubos de ensaye con las soluciones que se indican en el siguiente
cuadro, respetando el orden de adición de las mismas.
canela estable
20
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
1. Con los resultados obtenidos, construir una gráfica que relacione los µ M de urea
hidrolizados (actividad enzimática) con el pH.
21
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 8
CINÉTICA ENZIMÁTICA
INTRODUCCIÓN
Cinética enzimática.
Las enzimas son proteínas que realizan la catálisis de las reacciones químicas que se llevan
a cabo en los seres vivos. Aunque las reacciones enzimáticas obedecen a los mismos
principios de la cinética química, se diferencian de éstas por el hecho de que las enzimas
son susceptibles de saturación.
Durante una reacción enzimática, el sustrato S se une químicamente a la enzima E para
formar un complejo ES. Luego de sufrir varias reacciones químicas el complejo ES se
rompe para dar origen a los productos y enzima libre, que puede iniciar otro ciclo catalítico.
E + S ⇔ ES ⇔ E + P
Transaminasas.
22
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
catálisis enzimática. A las enzimas que catalizan dichas reacciones se les conoce como
transaminasas. En esta reacción el grupo alfa – amino se transfiere al ceto – ácido alfa –
cetoglutárico.
La actividad de la transaminasa pirúvica se determina por colorimetría midiendo la cantidad
de alfa – cetoácido producido. Mediante la reacción estequiométrica con 2,4-DNPH que
forma un compuesto colorido que tiene una absorción a una λ de 505 nm.
OBJETIVO
REACTIVOS
MATERIAL
Bisturí o navaja Chícharos frescos
Botella para lavar de 500 ml Solución ácida de 2,4 dinitrofenilhidracina 1.5 mM
Pipeta Pasteur Solución amortiguadora TRIS-HCl 40 mM, EDTA
Cristalizador 0.25 Mm pH 7.5
Embudo de vidrio de tallo largo Solución de Hidróxido de sodio 1 N
Gasa Solución patrón de ácido pirúvico .002 M
Hielo Sustrato L-alanina 0.002 M α -cetoglutarato
Parrilla magnética 0.002M, TRIS-HCl 0.1 M pH 7.5
4 Pipetas serológicas de 1, 5, 10 ml
Probeta graduada de 50 ml
Termómetro
2 Tubos para centrífuga
15 Tubos de ensaye
Mortero con pistilo
2 Vasos de precipitado de 250 ml
METODOLOGÍA
23
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
CINÉTICA DE LA TRANSAMINACIÓN
Prepare un baño María o una estufa a 37°C, y al mismo tiempo ponga a hervir agua en un
vaso de precipitado de 250 ml que se usará como baño María. A un tubo de ensaye agregue
1 ml de sustrato y 0.2 ml del extracto de la enzima y colóquelo en el baño María en
ebullición, durante 5 minutos.
Prepare 7 tubos de ensaye para cada una de las concentraciones de acuerdo a la tabla
siguiente:
De cada una de las concentraciones se tienen 5 tubos, el primer tubo de cada concentración
no se incuba, de inmediato se le adiciona 1 ml. De 2,4 dinitrofenilhidracina se homogeniza
y reposa durante 20 minutos, posteriormente se adicionan 5 ml de solución NaOH 1 N se
agita y espera 5 minutos y se lee en el espectrofotómetro a una λ de 505 nm.
El segundo tubo se incuba durante 5 minutos y posteriormente se adiciona 2,4 dinitro
fenilhidracina, se homogeniza y reposa durante 20 minutos posteriormente se adicionan 5
24
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
c
o Primera concentración
n.
Segunda concentración
p
i Tercera concentración
r
u Reacción de primer
v orden
a
t
Tiempo Incubación
A cada curva (concentración), determine su pendiente en la parte inicial del tiempo donde
la curva es de primer orden y construya una gráfica de velocidad de reacción (pendiente de
la curva) contra concentración de sustrato; para determinar la Velocidad máxima de la
reacción enzimática.
Volumen en mililitros
Tubo número Agua Patrón de ác. pirúvico
1 3.0 0.0
2 2.5 0.5
3 2.0 1.0
4 1.5 1.5
5 1.0 2.0
6 0.5 2.5
25
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
Objetivo
Fundamento
2 H2O2 → O2 + 2 H2O
Procedimiento experimental
26
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
Se coloca el papel hasta el fondo del reactor con una varilla de vidrio y se toma
como tiempo inicial del experimento (tiempo cero) cuando se deja el papel en
libertad. A continuación , se cronometra el tiempo que tarda en subir el papel de
filtro hasta situarse en la superficie.
Cálculos
PRÁCTICA No. 8
27
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
CINÉTICA ENZIMÁTICA
INTRODUCCIÓN
Cinética enzimática.
Las enzimas son proteínas que realizan la catálisis de las reacciones químicas que se llevan
a cabo en los seres vivos. Aunque las reacciones enzimáticas obedecen a los mismos
principios de la cinética química, se diferencian de éstas por el hecho de que las enzimas
son susceptibles de saturación.
Durante una reacción enzimática, el sustrato S se une químicamente a la enzima E para
formar un complejo ES. Luego de sufrir varias reacciones químicas el complejo ES se
rompe para dar origen a los productos y enzima libre, que puede iniciar otro ciclo catalítico.
E + S ⇔ ES ⇔ E + P
OBJETIVO
28
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
REACTIVOS
MATERIAL
Rojo de metilo al 0.04%
2 Pipeta de 1 mL
HCl 0.01 M
2 Pipeta de 5 mL
Urea 0.25 M
4 Matraces Erlenmeyer de 125 mL
HgCl2 al 1%
17 Tubos de ensaye 20x120 mm
Solución de ureasa
1 Bureta graduada de 25 o 50 mL
Amortiguador de fosfatos 0.1 M a pH 7.01
1 Pinzas para bureta
Agua destilada
1 Soporte universal
1 Pizeta
METODOLOGÍA
1. Prepare 4 tubos de ensaye para cada una de las concentraciones de acuerdo a la tabla
siguiente:
2.
Concentración UREA 0.25 M AMORT. DE HgCl2
(mL) FOSFATOS (mL) (gotas)
1 0.25 4.75 0
2 0.50 4.5 0
3 0.75 4.25 0
4 1.00 4.00 0
Blanco 1.25 3.75 3
29
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA - DEPARTAMENTO DE ING. BIOQUÍMICA
30