Aplicación de luminol

en huellas
de escena del crimen

William Ivan Alejandro LLANOS TORRICO

Julio de 2.010
 El lugar de los hechos

 La fase más importante en la

investigación
 Es irrepetible
 Han de localizarse todos los indicios
para su posterior envío al laboratorio.
 Si los indicios no se detectan, no se
preservan, no se embalan
adecuadamente, no llegará a haber
identificación criminalística.
 Situaciones características en el
Lugar de Hechos
 Siempre es posible que se hayan producido
mezclas, contaminaciones o pérdida de indicios.
 Los indicios son frágiles y pudieron haberse
manipulado.
 Los indicios pueden pasar inadvertidos.
 Los indicios pueden sufrir alteraciones en sus
características
Tipos de indicios
Sangre:

Sustancia viscosa, roja y espesa, presente en el

sistema circulatorio (arterias, arteriolas, capilares y
venas), constituidas por una parte líquida o plasma y
una parte de elementos celulares (hematíes,
leucocitos y plaquetas).
 Identificación del individuo de quien procede

 “Podemos asegurar que con respecto al ser humano, existen

numerosas diferencias sanguíneas individuales que ya han sido
puestas de manifiesto, e indudablemente todavía existen otras que aún
no han sido establecidas”.
Karl Landsteiner
Disertación Nobel, 1930.

 “Cada nuevo individuo es único en su información genética, de aquí el

término de individualidad biológica. En cualquier parte del organismo
siempre se encuentra el mismo material genético, propio de cada
individuo y diferente de cualquier otro, excepto en el caso de gemelos
monocigotos”.

Zannoni – Primarrosa
1.999.
Sangre:

Entre sus funciones se tienen:

 Trasportar el oxígeno y eliminar el anhídrido

carbónico.
 Promover las defensas del organismo frente a las
infecciones.
 Termorregulación.
 Regulación osmótica.
 Nutrición celular.
Sangre:

Volemia:
Volumen normal de sangre de una persona.

Cálculo:
 6 – 8 % del peso corporal.
 13 / 14 parte del peso corporal.
M – 10%.
Sangre:
Agua – 90%

Fracción Líquida
Proteínas.
Lípidos.
Sólidos – 10% Glúcidos.
Sales Minerales.
Composición Enzimas.

Glóbulos Rojos.
Fracción Sólida Glóbulos Blancos.
(Elementos Celulares)
Plaquetas.
Sangre:

Glóbulos Rojos
(Hematíes o Eritrocitos):
 Anucleados, bicóncavos, circulares.
Elementos  7 – 7,5 m diámetro.
Celulares  2 – 3 m espesor.
 85 M volumen.
 5.000.000 x mm3H.
 4.500.000 x mm3H.
Sangre:

Glóbulos Blancos (Leucocitos):

 Nucleados.
 6.500 – 7.00 mm3.
 Granulocitos E: 1,5% parásitos.
Elementos
 Granulocitos B: 0,5% respuestas alérgicas.
Celulares
 Linfocitos: 26% detectan y atacan células
cancerosas.
 Monocitos: 6% devoran células muertas o
dañadas (Macrófagos).
Hemoglobina:
Estructura:
Cromoproteína
PM 64.500 – 96% Globina – 4% Hemo

Globina:
Fracción proteica constituida por cuatro
cadenas polipeptídicas.

Hemo:
Núcleo porfirínico formado por cuatro grupos pirroles unidos por
puentes de meteno (=C) que constituyen anillos tetrapirrólicos.
16 Isómeros – Nº 9 presente en elementos biológicos.
Un átomo de hierro está ligado a los cuatro nitrógenos en el centro del
anillo.
1 Molécula de Hemo = 4 Grupos Hemo.
Sangre:
Examen visual preliminar:
 Aspecto.
 Color.
 Forma.
 Número.
 Dimensiones.
 Ubicación.

Importancia Criminalística:
 Data de los hechos.
 Intensidad de las lesiones.
 Reconstrucción de los hechos.
 Admitir o refutar alegatos.
 Identificación de sujetos.
Color:

Ropa blanca y soportes claros y absorbentes:

 Contornos muy nítidos por penetrar la sangre en los tejidos.

 Reciente: Roja.
 Antigua: Morena o parda y aún negruzca.
 Una vez seca: diminutas masas, ligeramente elevadas como
pequeñas escamas brillantes, más o menos resquebrajadas según
condiciones ambientales.
  Manchas de proyección.

 Manchas por escurrimiento.

 Manchas por contacto.

Forma:
 Manchas por impregnación.

 Manchas por limpiamiento.

 Manchas por arrastre.

  Reconstrucción de los hechos.

Importancia:  Intensidad de las lesiones.

 Admitir o refutar alegatos.

Problemas forenses que plantea
una muestra de sangre:
 Naturaleza sanguínea.
 Determinación de especie.
 Identificación del individuo.
 Data de la mancha de sangre.
 Cantidad de sangre que compone la mancha.
 Región del cuerpo de donde procede la sangre.
 Sexo genético de la persona de quien procede la sangre.
 Grupo etario.
 Agentes extraños a su naturaleza (medicamentos, drogas ilícitas,
agentes patógenos).
Naturaleza Sanguínea:

Métodos de Orientación:
¿Es Sangre?

TÉCNICA INDICADOR SEÑAL SENSIBILIDAD

Adler Bencidina Azul Intenso 1 / 200.000

O - Tolidina Orto – Tolidina Azul Verdoso 1 / 200.000

Verde de Malaquita
Medinger Verde 1 / 1.000.000
(leuco derivado)

K – Meyer Fenolftaleína Rojo 1 / 1.000.000

Hidracida del Ácido Quimioluminiscencia

Luminol 1 / 5.000.000
Alfa Amino ftálico blanco azulada
  Histológicos.

 Biológicos.
Métodos
De Certeza:
 Físicos (Cromatográficos – Instrumental).

 Microquímicos.
 Métodos de Certeza:

Teichmann → Cristales de
Clorhidrato de Hematina.

Takayama → Cristales de
Microquímicos
Hemocromógeno.

Guarino → Cristales de
Hematoporfirina
(Ácida – Alcalina).
 Determinación de Especie:

Histológicos

Uhlenhutt:
Proteínas Séricas (Halo Isogenético).
Métodos Bioquímicos Hexagon Obti – Test (Banda Azul):
Hemoglobina Humana Sub Tipos HbAo,
HbA2, Hb F y Hb S.

ADN
Sistemas tendentes a la determinación
de la identidad biológica:

Sistemas Eritrocitarios:

 ABO: A; B; AB; O; y Sub Grupos.

 Rh: D; d; C; c; Cc; E; e; Ee.

 MNS: M; N; MN.

 Otros sistemas: Kell; Lewis; Kidd; Diego; P; otros.

Sistema ABO:

Antecedentes

A
Antígenos Aglutinógenos
B

α → Alfa – Anti A
Anticuerpos
β → Beta – Anti B

Incompatibilidad
Test de Landsteiner
Sanguínea
LA PRUEBA
DE
LUMINOL
LUMINOL
El Luminol químicamente denominado
como: 3 aminophtalahidrazida (5-amino-
2, 3-dihidro-phthalazino-1,4-diona) fue
sintetizada por Smicthz en el año de
1902, comprobando a la vez, que esta
sustancia produce una brillante
quimioluminiscencia (producción de luz
por reacción química: Una fuerte luz
fluorescente azul en soluciones ácidas
con pH menor de 7).
Posteriormente, en el año de 1927 otro investigador de
apellido Lommel, observó dicha quimioluminiscencia
después de la oxidación del compuesto en medio alcalino
(Soluciones con pH mayores de 7).

En 1934 el investigador Albrecht denominó a este

compuesto LUMINOL, por las propiedades
quimioluminiscentes que presentaba.
Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da
en presencia del peróxido de hidrógeno.

En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol

presentaba luminiscencia en presencia de sangre. Esto es
debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina.
Posteriormente, en el año de 1927 otro investigador de
apellido Lommel, observó dicha quimioluminiscencia
después de la oxidación del compuesto en medio alcalino
(Soluciones con pH mayores de 7).

En 1934 el investigador Albrecht denominó a este

compuesto LUMINOL, por las propiedades
quimioluminiscentes que presentaba.
Además descubre que la reacción quimioluminiscente se da
en presencia del peróxido de hidrógeno.

En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol

presentaba luminiscencia en presencia de sangre. Esto es
debido a la capacidad peroxidásica de la hemoglobina.
En el año de 1937 se reportó la primera aplicación forense
del Luminol, como prueba presuntiva de detección de
sangre, dicho ensayo fue realizado por Walter Specht.
Este investigador roció sangre en varios
substratos como paredes, gradas, piedras, y tierra dejándola
expuesta por 14 días a las condiciones ambientales.
Seguidamente aplicó el Luminol y
fotografió los resultados. Todas las áreas que contenían
manchas de sangre presentaron luminiscencia que perduró
por 15 minutos. En esta ocasión el Luminol funcionó bien
con manchas de sangre frescas y viejas; se observó mayor
respuesta quimioluminiscente en las manchas de sangre
viejas, que en las manchas frescas o nuevas.
En el año de 1939, los investigadores Moody y Proescher,
basándose en la investigación de Specht, aplicaron el
Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenían
manchas de sangre de tres años de antigüedad, obteniendo
resultados satisfactorios.

En 1942, McGrath, recomendó el uso de la prueba de

Luminol, para la detección de sangre, él notó que las
manchas de sangre viejas, daban respuestas más fuertes y
prolongas, debido a que en estas, hay una mayor
concentración de metahemoglobina y hemática.
Los investigadores Lytle y Hedgecock, en el año de 1978
estudiaron los efectos del Luminol en solución alcalina, en
la sangre detectada por la prueba, concluyendo que no
afectaba la actividad enzimática de los eritrocitos, pero no
reportan los efectos del reactivo en la determinación de
grupo ABO en las manchas, ni análisis de marcadores
genéticos (ADN).
 
La prueba de Luminol es extremadamente sensible en la
detección de sangre. En 1986 Thornton y colaboradores
detectaron luminiscencia, a simple vista, proveniente de
sangre que fue diluida 1:10000 partes.
En el año de 1939, los investigadores Moody y Proescher,
basándose en la investigación de Specht, aplicaron el
Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenían
manchas de sangre de tres años de antigüedad, obteniendo
resultados satisfactorios.

En 1942, McGrath, recomendó el uso de la prueba de

Luminol, para la detección de sangre, él notó que las
manchas de sangre viejas, daban respuestas más fuertes y
prolongas, debido a que en estas, hay una mayor
concentración de metahemoglobina y hemática.
 Fundamento teórico
de la prueba de luminol
La prueba del Luminol emplea:

• el Carbonato de Sodio para crear una solución alcalina de

pH 10.4-10.8,
• Perborato de Sodio como agente oxidante, y el
• Luminol como la sustancia a ser oxidada con la
subsecuente emisión de luz.

La sangre es el sistema peroxidasa que cataliza la reacción.

Reactivos utilizados para la prueba de
luminol
1. Carbonato de Sodio
2. Perborato de Sodio Trihidratado
3. Luminol
(5-amino-2,3-dihydrophthalazine 1,4-dione)
 Preparación del reactivo
1. Pesar 3,5 gramos de Perborato de Sodio en una
balanza analítica. Depositar la medida en un beaker de
1.000 ml de volumen.

2. Pesar 25 gramos de Carbonato de Sodio y 0,5 gramos

de Luminol en una balanza analítica y colocarlos juntos en
un recipiente limpio.
 
3. Medir un volumen de agua destilada de 500 ml con una
probeta de 1.000 ml de capacidad.
 Preparación del reactivo
4. Agregar los 500 ml de agua destilada al beaker con los
3,5 gramos de Perborato de Sodio.
 
5. Agitar hasta disolver por completo.
 
6. Agregar a esta solución la medida de Carbonato de
Sodio y Luminol.

7. Agitar hasta disolver por completo.

8. Verter la solución disuelta en el atomizador.

 Cómo se aplica la prueba
• Antes de la aplicación del reactivo el personal debe vestir
prendas que lo protejan del contacto directo con el Luminol.
Es imprescindible la utilización de mascarillas que impidan
la inhalación del atomizado.

• Se debe procurar una completa oscuridad para la

aplicación del reactivo.

• Aplicar el reactivo por aspersión, en las zonas del

escenario en donde se sospecha la presencia de sangre.
 Cómo se aplica la prueba
• En un lapso no menor de 10 segundos debe aparecer una
reacción lumínica que evidencia la actividad peroxidasa que
posee la sangre entre otras sustancias.

• Después de localizar los diferentes focos lumínicos se

procede a evaluar la naturaleza de estos.
 
• De sospechar que los focos lumínicos se deben a la
presencia de sangre (manchas de color y aspecto
característico), se debe delimitar el área de reacción positiva
con cinta adhesiva o con un marcador a base de agua, esto
con el objetivo de facilitar el levantamiento de muestra y el
registro fotográfico.
 Cuidados que se deben tener al aplicar
la prueba
• Procurar en la medida de lo posible no entrar en contacto
directo con la sustancia. Es necesario asegurarse de que
todo el personal presente este debidamente protegido.
 
• La vida media del Luminol ya preparado, es de 8 horas, por
lo que debe tenerse la precaución de no exceder este tiempo
en su aplicación.
 
• La prueba de Luminol es presuntiva para detectar la
presencia de sangre, esto significa que requiere de otras
técnicas como la determinación de especie para afirmar la
presencia de sangre.
 Cuidados que se deben tener al aplicar
la prueba
• Esta sustancia no es corrosiva y no mancha
 
• Se ha observado que no tiene efectos destructivos e
inhibitorios sobre la sangre, permitiendo la realización de
análisis posteriores de ABO y ADN.

• Una desventaja de esta técnica es que por ser basada en la

actividad peroxidasa y esta estar presente en muchas
sustancias tales como ciertos metales, jugo de fruta,
detergentes y productos de limpieza en general, es común
obtener reacciones inespecíficas.
 Cuidados que se deben tener al aplicar
la prueba
• Antes de la aplicación de la prueba se debe realizar un
ensayo previo con controles positivos, falsos positivos y
negativos, para evaluar la efectividad del reactivo.
 
• El reactivo de Luminol muestra una alta sensibilidad ante la
presencia de sangre, se observan reacciones positivas en
muestras diluidas, hasta diez mil veces y capaz de detectar
manchas de 25 años de antigüedad.
 Varios estudios han
demostrado que el luminol
provoca la pérdida de
diversos marcadores
genéticos.
 Debido a que el luminol es
hidrosoluble, también puede
diluir una muestra ya diluída.
Esto coloca al indicio por
debajo de los límites de
detección.
 Fotografía de la prueba luminol

La fotografía en la Prueba del Luminol es de suma

importancia para la investigación criminalística, ya que ella
muestra toda la labor realizada por el equipo de aplicación,
como a la vez permitirá al juzgador en el proceso del debate,
como se manifestaron las manchas de sangre, su dinámica,
arrastre, etc.
 Fotografía de la prueba luminol
Fijar fotográficamente escenarios reactivados con Luminol,
depende de varios factores:
• ISO de la película
• Tiempo de exposición
• Duración de la luminiscencia del químico
• Intensidad de la luminiscencia
•Tomas en total oscuridad

Para obtener imágenes positivas de la escena se deben de

controlar varios factores, sujetos algunos a variaciones como
el tiempo de exposición, espacio y luz.
Comparación con reactivos para
pruebas de campo de sangre
- Fluoresceina
- Bluestar
- Luminol
Pruebas comparativas
 Sangre lavada y repintada

FLUORESCEINA BLUESTAR LUMINOL

Tiempo de exposición: 20 s
Tiempo de exposición: 1 m 15 s
Sangre lavada y limpiada del piso

FLUORESCEINA BLUESTAR LUMINOL

Tiempo de exposición: 20 s
Tiempo de exposición: 1 m 15 s
 Sangre lavada en alfombra

BLUESTAR LUMINOL
FLUORESCEIN Tiempo de exposición: 20 s
Tiempo de exposición: 1 m 15 s
 Sangre lavada con detergente para
ropa

FLUORESCEINA BLUESTAR LUMINOL

Tiempo de exposición: 20 s
Tiempo de exposición: 1 m 15 s
Gracias