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09/26/2010

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Tema 3.

- Diagnóstico de laboratorio de las Enteroparasitosis
• Características generales de las Enteroparasitosis • Principales protozoosis y helmintiasis intestinales • Ciclos biológicos tipo: a) Entamoeba histolytica b) Taenia saginata c) Enterobius vermicularis d) Anquilostómidos • Principios y utilidad de las técnicas de estudio parasitológico de heces. El examen coproparasitario • Elementos no parasitarios de las heces • El método de Graham

ENTEROPARASITOSIS. Características generales
• Tracto digest humano → Numerosos parásitos: • Protozoos • Helmintos COMENSALES PATOGENOS

• Infestación • Vía digestiva (mayoría de casos) • Vía cutánea

• Formas infestantes • QUISTES / OOQUISTES → Protozoos

ENTEROPARASITOSIS. Características generales

Mecanismos transmisión • Infestación por FECALISMO

• Infestación por CARNIVORISMO

• Infestación s/ ciclo ANO-MANO-BOCA

• Infestación CUTANEA Mecanismos transmisión → Relación con ciclo biológico

INFESTACION POR FECALISMO
• Característico de parásitos de ciclo biológico MONOXENO PROTOZOOS a) PARASITOS • • • • • b) COMENSALES • • • • • • •

Entamoeba histolytica Giardia lamblia Isospora belli Cryptosporidium spp. Balantidium coli

Entamoeba coli Endolimax nana Iodamoeba butschlii Chilomastix mesnili Blsatocystis hominis Entamoeba polecki Enterocytozoon spp.

HELMINTOS • Asacaris lumbricoides • Trichuris trichiura • Hymenolepis nana

INFESTACION POR FECALISMO

Medio Externo
Contam suelo Formas infestantes Ingestión Quistes Ooquistes Huevos Larvas

Hosp Infestado

(=)

Hosp Susceptible

www./dpd.cdc.gov/dpdx

INFESTACION POR CARNIVORISMO
• En parásitos con ciclos biológicos complejos, con uno o varios Hosp. Intermediarios ( Ciclos HETEROXENOS) • Entre los hospedadores existe una relación PREDADOR PRESA • El PREDADOR soporta al parásito en su intest, donde se realiza la f sexuada (Se comporta como Hosp DEFINITIVO) • La Presa se infesta por fecalismo, a partir de las formas que elimina el H D con las heces (hosp intermediario) • En el caso del hombre la infestación se adquiere por ingestión de carnes y pescados crudos, o insuficientemente cocinados

INFESTACION por la piel
• Algunas especies de helmintos intestinales (s/t nematodos) • Eliminación de: • larvas • huevos muy desarrollados • Se transforman en LARVAS INFESTANTES (larvas filariformes) Migr viscerales • Ancylostoma duodenale • Necator americanus • Strongyloides stercoralis Contacto con H. Definitivo

Penetración piel

Local definitiva en intestino

Diagnóstico de laboratorio de las Enteroparasitosis Consideraciones generales:
• Numerosas técnicas de examen coproparasitario

• Finalidad diferente • Aplicación • General • ± Selectiva o específica • Utilidad en función de su capacidad para: • Concentrar elementos parasitarios • Cuantificar la carga parasitaria • Evidenciar difs estadíos evolutivos • Preparar extensiones permanentes

Diagnóstico de laboratorio de las Enteroparasitosis (2)
• IMPORTANTE:

• 1) Selección técnica(s) s/ casos • Grupo o especies de parásitos • Fase evolutiva • 2) Examen de varias muestras (3) por paciente

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES • Evidenciación de parásitos que: • Viven en el tracto digestivo • Realizan su tránsito al m ext a través del mismo • I) No todas las técnicas son adecuadas para todos los parásitos: • Importante conocer ciertos datos: • Procedencia geográfica del enfermo • Resumen HC • Resultados otras pruebas/análisis • Información relativa a trattos recientes • II) Un ex aislado con result negativo no tiene ningún valor eliminatorio

• III) La muestra debe ser examinada rápidamente

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

Para descartar una parasitosis intestinal: • Realizar al menos 3 exámenes coproparasitarios seriados (a dias alternos) • Tras una adecuada preparación del paciente • Remitiendo las muestras lo mas rápidamente posible al lab

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES El examen PARASITOLOGICO DE HECES forma parte del ESTUDIO COPROLOGICO, mas general, que informa sobre: • Aspecto macroscópico de las heces • Consistencia / agua / Veloc tránsito..... • Color (calidad/cantidad flujo biliar) • Presencia de sangre, mucus ...... • Aspecto microscópico restos alimenticios • Presencia mucus, hematíes, leucos, céls epiteliales ...... • Presencia de parásitos (trofoz, quistes, huevos, larvas....) • Elementos micóticos, su relación o proporción con bacterias

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES El examen COPROPARASITARIO no resulta de utilidad cuando: • La eliminación de los parásitos no se realiza por el intestino • La puesta de huevos no se lleva a cabo en el intestino • Los parásitos son inmaduros o estériles, y no dan lugar a formas de diseminación • Parasitismo por un único individuo (esp dioicas) • Parasitismo reciente (fase adulta no desarrollada)

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Preparación paciente Régimen alimenticio estricto desde 72 h antes a la recogida de la muestra ( UTOPIA ??) Condiciones mínimas: • Evitar medicamentos opacos no absorbibles • Carbón vegetal • Contrastes radiológicos (papilla baritada) • Sustancias grasas (s/t supositorios) • Evitar alimentos con muchos residuos • • • • Legumbres Frutas de cutícula resistente Vegetales con céls duras Frutos con semillas duras y pequeñas (p ej higos)

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Muestras Considerar adecuadamente las condiciones de : • Toma de muestra • Asepsia? • Momento? / lugar? • Recipiente ? • Envío de muestra • En hospital • Por correo • Conservación de las muestras • Provisional por frio (att trofozoítos amebas) • Definitiva (soluciones fijadoras)

TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO

• 1) Examen directo de una pequeña porción de heces frescas • 2) Examen después de aplicar un método de concentración • 3) Examen de extensiones o preparaciones permanentes Examen directo Observación microscópica minuciosa de toda la preparación • Objetivo seco débil (10 x) • Objetivo seco fuerte (25-40 x) • Habitualmente no se emplea obj de inmersión • Importante: No diluir demasiado las muestras

TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO Examen directo SF Lugol

Movilidad Tinción (Trofozoítos) Vacuolas Núcleos

TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO 2) Examen post-concentración • Reunión en un pequeño vol los elementos parasitarios inicialmente dispersos en una gran masa de heces • Numerosos métodos • Ninguno evidencia todos los tipos de parásitos, (cada uno tiene sus indicaciones precisas) Métodos físicos • Por sedimentación • Por flotación • Empleo de 2 fases no miscibles Agua // Eter o Acetato etilo Métodos difásicos

METODOS DE CONCENTRACION Métodos físicos • Dilución minuciosa heces en líquido o solución de densidad: • Inferior a la de los parásitos (Técnicas de sedimentación) • Superior (Técnicas de flotación) • Ventajas: • Realización muy simple • Precisan poco material • Inconvenientes: • Procesos largos • Exigen mucha manipulación • No aplicables a series grandes de muestras En ciertos casos se puede acelerar x centrifugación suave

TECNICAS DE CONCENTRACION. Mét de sedimentación simple • Triturar las heces (10-20 g) en agua de grifo • Poner la dil en una probeta de 250-500 cc y rellenar (agua grifo) • Dejar reposar aprox 1 h • Deshechar sobrenadante • Resuspender en agua de grifo • Dejar sedimentar 45 min • Deshechar sobrenadante • Repetir esta op varias veces, hasta que el sobrenadante quede transparente • Recoger y examinar el mat sedimentado. Hacer tres tomas: • Superficie • Media altura • Fondo

TECNICAS DE CONCENTRACION. Mét de flotación Características a considerar: Densidad sol empleada > Dens parásitos ⇒ Concentración en superficie Importante: • Manipular rápidamente • Impreg huevos operculados ⇒ Sediment • Alteración morfol huevos (Identificación)
Sulfato de cinz Película superficial

Sedimento

METODOS DE CONCENTRACION Métodos físicos. Ejemplos Técnicas de sedimentación • Método de sedimentación simple • Método de Faust e Ingalls • Sedimentación en columna alta

Técnicas de flotación • Método de Fulleborn • Método de Willis (flotación en salmuera) • Método de Faust (flotación en sulfato de zinc)

METODOS DE CONCENTRACION

Métodos difásicos • Derivados todos del mét de Telemann (1.908)

• Empleo de dos fases no-miscibles • Fase acuosa (sol. formaldehido) • Fase éter o disolv de lípidos (Acetato de etilo)

• Los elementos fecales y los parásitos se localizan en la fase acuosa o en la interfase agua-éter, en función de una característica, el balance hidrófilo-lipófilo

METODOS DE CONCENTRACION Métodos difásicos • Realización : • Dilución de las heces en agua (o el la fase acuosa) • Adición y emulsión con el éter ( o acet de etilo) • Centrifugación suave • Algunos ejemplos: • Método de Telemann • Método de Rivas • Método de Ritchie • Método de Blagg, Schloegel, Mansoer y Khalaf
Sedimento Parásitos

Eter
Restos Líp disueltos

Formalina

Acetato de etilo Restos fecales y grasa

Formalina

Sedimento (Parásitos)

12

% d e t e c t a d o

Examen directo, conc por flotación y tinción de hematoxilina-férrica Examen directo y conc por flotación Examen directo

Número de exámenes

Incremento de la detección de Entamoeba histolytica en relación al número de muestras fecales examinadas y a las técnicas empleadas

OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSIS Técnicas del Examen Coproparasitario. Resumen 1.- Observación macroscópica 2.- Observación microscópica 2.1.- Observación microscópica de preparaciones “en fresco” (entre porta y cubre) • Muestras de heces directamente en SF o Lugol • Muestras de técnicas de concentración 2.2.- Observación microscópica de preparaciones teñidas, permanentes o no, que permiten la conservación y la observación cuidadosa y detallada de los parásitos

OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSIS TINCIONES ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES • Utilidad: Demostración de ooquistes de Cryptosporidium spp. Evidenciación de Cyclospora spp. • Aplicables a frotis de heces (tb ciertos concentrados) • Técnicas: Las mas empleadas son la de KINYOUN y una modificación de la ZIEHL-NEELSEN TINCION DE HEMATOXILINA-FERRICA • Utilidad: Observación detallada de quistes, pero s/t de trofozoítos de protozoos. Si se realiza montaje, buena colección permanente Exige una realización cuidadosa,

COLORACIÓN DE KINYOUN (Cryptosporidium // Cyclospora) • Fijación frotis: Metanol 30 seg •Tinción : 5 min (frio) con sol de Fuscina básica • • • • Fusc básica Fenol Etanol (95%) A dest 4g 8g 90 ml 100 ml

• Lavado • a) Etanol 50%: 3-5 min • b) Agua corriente • Decoloración: Acido sulfúrico 1%: 2 min • Contracoloración: Azul metileno Loeffler: 1-2 min • Azul de metileno • Alcohol 95% • KOH 0,01% 0,3 g 30 ml 100 ml

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Elementos no parasitarios de las heces • Restos alimenticios semi-digeridos • Células epiteliales (mucosa intestinal) • Células sanguíneas • Leucocitos (úlceras intestinales) • Macrófagos ≈ amebas patógenas • Hematíes • Bacterias • Hongos

Elementos no parasitarios de las heces (2)
RESTOS ALIMENTICIOS

• Tejido conjuntivo • Fibras musculares estríadas (carne) Att tamaño / ángulos • Grasas neutras → Glóbulos refringentes tamaño variable • Acidos grasos → Agujas finas • Almidón • Crudo: Granos en capas concéntricas • Céls reserva amilácea (s/ procedencia) • Celulosa • Digerible: Masas celulósicas (céls reserva) • No digerible: Traqueídas, pelos vegetales, polen etc
CRISTALES

• Origen alimentario (oxalato de calcio) • Endógeno (Ox calcio, fosfato amónico-magnésico, Charcott-Leyden) • Medicamentos

OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSIS 1.- Examen directo de líquido duodenal • Se obtiene por sondaje duodenal o con càpsula entérica o test del cordón"“Enterotest” • Observación • Fresco (directo o tras centrifugación) • Extensiones (frotis) coloreados (tinc AAR) • Utilidad / Rendimiento • Trofozoítos de Giardia lamblia • Ooquistes de Isospora y Cryptosporidium • Huevos de Fasciola hepatica • Larvas de Strongyliodes stercoralis

2.- Técnica de Graham (Mét de la cinta adhesiva o espátula adhesiva) • Método mas empleado para el diagnóstico de la oxiuriasis o enterobiasis (Enterobius vermicularis) • Observación microscópica del material recogido de la zona perianal, por aplicación de una sup adhesiva (celofán o similar) • La cinta se dispone sobre un soporte rígido (depresor lengua), con la sup adhesiva hacia el exterior • Se aplica varias veces sobre la piel, en los márgenes anales • Se envia al laboratorio y se observa a microscopio (10X) IMPORTANTE • Realizar al menos 3-5 tomas antes de informar un resultado negativo • Realizar la toma de muestra a 1ª hora por la mañana, antes de salir de la cama

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