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Facultad Medicina
Av. 12 de Octubre 1076 y Roca
Apartado postal 17-01-2184
Telf: 593 2 299 15 21
1. DATOS INFORMATIVOS:
MATERIA O MDULO:
LABORATORIO CLNICO PRCTICAS
CARRERA:
MEDICINA
NIVEL:
SEGUNDO
N CRDITOS:
1,5 (UNO COMA CINCO)
CRDITOS TEORA:
1
CRDITOS PRCTICA:
0,5
DATOS DEL PROFESOR:
Nombre: Celia Annabel Bowen Fernndez
Grado Acadmico o Ttulo Profesional: Dra. Bioqumica y Farmacia opcin Bioq. Clnica
Breve indicacin de la lnea de actividad acadmica: Docencia en diferentes en diferentes ramas
de la patologa clnica (Laboratorio clnico y Microbiologa), coordinadora de los laboratorios
en el rea de Destrezas Clnico Quirrgicas
Indicacin de horario de atencin a estudiantes: Martes, Mircoles y Viernes 12:00 a 13.00 horas
Correo Electrnico: bowencelia@yahoo.es
Telfono: 084678618
PROFESOR:
Grado acadmico o ttulo profesional: Dra. Bioqumica y Farmacia opcin: Bioq. Clnica/ Diploma
Superior en Pedagogas Innovadoras
2. DESCRIPCIN DE LA MATERIA:
En este nivel de la carrera se estudian los fundamentos bsicos del laboratorio clnico, su estructura y
organizacin dentro de un servicio de salud, sus funciones y se dan las primeras correlaciones de las
pruebas de laboratorio con casos clnicos. Se aprende el uso racional de las pruebas ms comunes y
se pretende incentivar al estudiante a tomar con conciencia crtica las solicitudes de laboratorio y
rescatar la interpretacin clnica como elemento fundamental de la Medicina de Laboratorio.
3. OBJETIVOS GENERAL:
Reconocer la metodologa y realizacin de las pruebas bsicas de laboratorio clnico con el fin de
corroborar la presencia y las concentraciones de los diferentes analitos en las muestras biolgicas,
con la morfologa y fisiologa del individuo normal, estudiadas en las dems reas de las ciencias
morfofuncionales del segundo nivel de la carrera.
4.
ESPECFICOS:
4.1. ACTITUDINALES:
a. Compartir conocimientos y experiencias durante el proceso de aprendizaje
b. Manejar adecuadamente el manejo del microscopio segn las normas indicadas
c. Identificar y cumplir las normas de bioseguridad
4.2. PROCEDIMENTALES:
a. Revisar el mtodo de la puncin venosa y capilar y realizar el procedimiento
b. Aprender a preparar soluciones y diluciones y su aplicacin para deducir las
unidades de medida utilizadas en el laboratorio
c. Realizar y explicar los pasos del examen elemental y microscpico de orina y
del coproparasitario y su respectiva interpretacin
d. Realizar exmenes de glucosa, colesterol, rea, transaminasas y bilirrubinas as
como relacionarlos con el respectivo diagnstico en caso de haber alteraciones
4.3. COGNITIVOS:
a. Revisar los anticoagulantes y tubos de ensayo utilizados en las pruebas ms
comunes
b. Especificar el fundamento de las pruebas bioqumicas enzimo-colorimtricas,
de la espectrofotometra y los clculos matemticos necesarios
c. Conocer la tcnica de electroforesis y las diferentes fracciones proteicas
sanguneas
5. CONTENIDOS
1. Laboratorio clnico: Normas de bioseguridad
PRIMERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEMANA 2 rotacin
2. Toma de muestras de sangre, anticoagulantes, tubos al vaco
PRIMERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEMANA 2 rotacin
3. Soluciones y diluciones, unidades de medida
SEGUNDA SEMANA 1 rotacin, DCIMA PRIMERA SEMANA 2 rotacin
4. Elemental y microscpico de orina
TERCERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA TERCERA SEMANA 2 rotacin
5. Parasitologa, coprolgico-coproparasitario
CUARTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA CUARTA SEMANA 2 rotacin
6. Carbohidratos: glucosa
QUINTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA QUINTA SEMANA 2 rotacin
7. Lpidos: colesterol
QUINTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA QUINTA SEMANA 2 rotacin
8. Protenas: electroforesis y examen qumico
SEXTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEXTA SEMANA 2 rotacin
9. Funcin renal: urea
SPTIMA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SPTIMA SEMANA 2 rotacin
10. Pruebas de funcin heptica: transaminasas, bilirrubinas
OCTAVA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SPTIMA SEMANA 2 rotacin
6. METODOLOGA, RECURSOS:
6.1. Mtodos didcticos
a. Charla de fundamentacin terica
b. Explicacin prctica y observacin
c. Realizacin de prcticas de pruebas de laboratorio
6.2. Recursos
a. Uso de manual de prcticas de Laboratorio Clnico
b. Toma de fotos con respecto a las prcticas realizadas en clases (smartboard)
c. Uso de Atlas de sedimento urinario y parsitos
Autora: Dra. Celia Bowen
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PRCTICA No. 1
Autora: Dra. Celia Bowen
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PRACTICA No. 2
Autora: Dra. Celia Bowen
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Fundamento terico:
Las soluciones son mezclas homogneas de dos o ms substancias, que pueden
separarse por mtodos fsicos en sus diversas substancias componentes. En una
solucin, aquella substancia que se encuentra en mayor proporcin se conoce como
Solvente y las dems como Solutos.
Existen varias formas de expresar la concentracin de una solucin, esto es, la
proporcin de soluto a solvente. Para efectos cualitativos, frecuentemente se habla de
soluciones diluidas, concentradas, saturadas o sobresaturadas. Aunque existen diversas
formas de expresar matemticamente la proporcin de soluto a solvente dentro de una
solucin, las de uso mas extendido suelen ser Molaridad, el Porcentaje Peso a Volumen,
el Porcentaje Peso a Peso y las Partes por Milln.
El porcentaje Peso a Volumen es una relacin que expresa los gramos de soluto que se
hallan contenidos en cada 100 mililitros de solucin.
Materiales y reactivos:
Materiales:
- Probeta graduada de 50 ml
- Vaso de precipitacin de 50 ml
- Matraz aforado de 50 ml
- Pipetas graduadas de : 1, 2, 5 y 10 ml.
- Peras de seguridad
- Tubos de ensayo
- Gradillas
- Balanza
- Varilla de vidrio
Reactivos:
- Safranina en polvo
- Cloruro de sodio en polvo
- Agua destilada
Procedimiento:
1. Mtodo para preparar soluciones:
Unidades de medidas:
p/v = peso de soluto sobre volumen de solvente expresado en gr/ 100ml
v/v = volumen de soluto sobre volumen de solvente expresado en ml/100 ml.
Ejemplo de soluciones p/v:
Preparar 50 ml. de solucin de NaCl (cloruro de sodio) al 0.85% en agua destilada
Datos
V1= 50 ml.
V2= 100 ml
Autora: Dra. Celia Bowen
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Concentrac. Solucin= 0.85% (pesar 0.85 gramos de NaCl y aforar con agua
destilada hasta obtener 100 ml de solucin)
0.85 gr. NaCl
100 ml agua destilada
X
50 ml agua destilada
X= 0.425 gr. de NaCl disolver en agua destilada hasta
obtener 50 ml de solucin
Ejemplo de soluciones v/v:
Preparar 40 ml. de solucin de Etanol al 70% en agua destilada
Datos
V1= 40 ml.
V2= 100 ml
Concentrac. Solucin= 70% (70 ml de etanol puro diluidos en 100 ml de agua
destilada)
70 ml de etanol
100 ml agua destilada
X
40 ml agua destilada
X= 28 ml. de etanol puro diluir en 12 ml de agua destilada para
obtener una solucin de 40 ml de etanol al 70%
2. Mtodo para realizar diluciones
Partiendo de una solucin cualquiera que sea su concentracin las diluciones se
realizan del siguiente modo:
Si se tiene una solucin HCl (cido clorhidrico) y se quiere diluir en agua destilada
1:20 para obtener un volumen final de 50 ml se realiza los siguientes clculos:
1ml de soluc. HCl
20 ml. de agua destilada
X
50 ml de agua destilada
X =2.5 ml de HCl se necesita para obtener una
solucin de 50 ml en agua destilada (medir 47.5 ml de agua)
3. Para obtener el factor de dilucin:
Utilizando el ejemplo anterior el factor de dilucin se obtiene del siguiente modo:
Fd =
Volumen mayor
=
Volumen menor (alcuota)
50 =
2,5
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PRACTICA No. 4
Tema: Elemental y microscpico de orina
Objetivos:
Autora: Dra. Celia Bowen
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TAREA EN CLASE:
Cada estudiante debe traer su muestra de orina siguiendo las instrucciones anteriores,
realizar el anlisis clnico durante la prctica y realizar el reporte de la misma para
archivar en la carpeta.
PRACTICA No. 5
Tema: Parasitologa : Coproparasitario
Objetivos:
1. Observacin macroscpica y microscpica de las heces para aprender a
reconocer diferentes patologas gastrointestinales
2. Aprender a realizar la tcnica para la preparacin de un coproparasitario
Materiales y rectivos:
A. Materiales
-Placa portaobjetos
-Placa cubreobjetos
-Microscopio
-Guantes
-Palillos de dientes
Autora: Dra. Celia Bowen
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B. Reactivos
-Solucin fisiolgica al 0.85%
-Solucin de lugol (dilucin 1:5 de lugol)
-Muestra de heces
Procedimiento:
Recoleccin de la muestra:
Debe recogerse en un recipiente limpio, debe tenerse cuidado de no mezclarse con
orina, descartar los provenientes de pacientes tratados con bismuto y bario. Las
muestras obtenidas deben enviarse rpidamente al laboratorio especialmente si son
lquidas o semilquidas ya que las formas trofozoicas de los protozoos pierden
movilidad y mueren poco despus de enfriarse.
Procesar la muestra antes de dos (2) horas. Si esto no es posible, mantener las muestras
en refrigeracin o temperatura de 4 Centgrados.
1. Examen macroscpico (fsico) heces:
La inspeccin de las heces es importante, ya que puede conducir a un diagnsrtico
de infectacin parasitaria, ictericia obstructiva, diarrea, malabsorcin, obstruccin
rectosigmoidea, disentera o colitis ulcerosa, o prdida de sangre en el conducto
gastrointestinal.
a. Debe anotarse la consistencia (especificando si son pastosas, blandas,
semilquidas lquidas duras) y color del excremento (caf, amarilla, rojiza,
negruzca, verdes, etc)
b. Los progltides o gusanos adultos se pueden detectar en el examen general,
manchas de sangre o moco, y, la presencia de restos alimenticios.
Color: Normalmente las heces son de color pardo de diferente intensidad, este color se
debe a la presencia de urobilina, varia de acuerdo a la ingestin de alimentos y
medicamentos.
Olor: Las sustancias aromticas provenientes de la desaminacin y descarboxilacin del
triptofano por las bacterias son las que le dan a la materia fecal el olor caracterstico.
Consistencia: Normalmente las heces son blandas aunque moldeadas. Se observan heces
extremadamente duras en el estreimiento y lquidas por accin de purgantes, o por
causas que originen diarrea. Esta consistencia puede ser : Lquida, blanda o dura.
Aspecto: Hay diferentes aspectos como son : Diarreico, cremoso, mucoide, granuloso,
pastosa,caprino.
Reaccin: La reaccin y el pH de la materia fecal depende del rgimen alimenticio.
2. Exmen Microscpico de las heces:
En una lmina portaobjetos se colocan dos gotas, en la parte izquierda solucin salina y
en la derecha lugol, luego se toma con un palillo la muestra de materia fecal, se debe
escoger la parte que tenga elementos anormales como sangre, moco, etc. y de otra parte
Autora: Dra. Celia Bowen
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POD (peroxidasa)
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Blanco de reactivo
STD muestra
STD muestra
5 ul
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Materiales y reactivos:
Materiales
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
3. Clculo de la concentracin de la glucosa
C (mg/dl)= 100 x A muestra
A Estndar
Valores de referencia: 70 100 mg/dl
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de glucosa en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la
carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
PRCTICA No 7
LPIDOS: Determinacin de colesterol en sangre
1. Objetivos:
3. Conocer la tcnica mediante la cual se determina el colesterol en sangre
Autora: Dra. Celia Bowen
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Colesterol + O2
Blanco de reactivo
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STD muestra
STD muestra
5 ul
Materiales y reactivos:
Materiales
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
4. Clculo de la concentracin de colesterol
C (mg/dl)= 200 x A muestra
A Estndar
Valores de referencia: hasta 200 mg/dl
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de colesterol en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en
la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
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CONSULTA:
Criterios de la OMS para:
- Sndromes metablicos
- Factores de riesgo cardiovascular
Nota: Archivar en la carpeta y estudiar para la evaluacin parcial
PRCTICA No. 8
TEMA: Mtodo para electroforesis de protenas en suero
Objetivo:
Aplicar la tcnica de electroforesis para separar las diversas fracciones protecas del
suero humano
Fundamento terico:
La electroforesis es una tcnica basada en los movimientos de molculas cargadas en un
campo elctrico, cada molcula se mueve hacia el electrodo de carga opuesta (ctodo y
nodo), este movimiento denominado electroforesis da nombre a la tcnica. En el
transporte electrofortico, a la fuerza del campo elctrico se opone la resistencia viscosa
del medio, producindose, cuando se igualan una velocidad constante de
desplazamiento de las partculas.
En resumen, puede decirse que cuando una molcula cargada se coloca en un campo
elctrico se mover hacia uno u otro electrodo dependiendo de: 1) su carga elctrica, 2)
su tamao, 3) la intensidad del campo elctrico y 4) la temperatura del medio.
La electroforesis se aplica en el campo de la Bioqumica a la separacin de compuestos
que poseen grupos ionizables (aminocidos, pptidos, protenas, cidos nucleicos)
teniendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias depende del pH del medio en
que se encuentren. Si la molcula tiene carga positiva migrar hacia el ctodo, si tiene
carga negativa hacia el nodo. La fuerza inica de la solucin tampn tiene una
importancia fundamental en la electroforesis, puesto que cuando es baja, permite
velocidades de migracin de los solutos ms rpidas y con menor desprendimiento de
calor.
Las protenas estn compuestas de aminocidos que poseen grupos ionizables
(principalmente -COO- y NH+ 3), pueden encontrarse cargadas positiva o
negativamente, o bien de permanecer elctricamente neutras segn la proporcin de los
diversos grupos ionizados a un determinado pH. En su punto isoelctrico (pI o pH I), la
protena tiene carga neta cero. Por debajo de pI las protenas estarn cargadas
positivamente y por encima del pI negativamente.
El porcentaje normal de estas protenas en el suero humano es:
-Albmina54-62%
Autora: Dra. Celia Bowen
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--globulinas9-15%
--globulinas14-19%
--globulinas14-19%
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(NH4+)2 + CO2
Nitroprusiato (no es enzima)
(NH4+)+salicilato+ClONa+ 2-oxoglutarato
Indofenol (verde)
Parte experimental:
1.Procedimiento (en suero o plasma):
1.1. En cuatro tubos de ensayo marcados como B (blanco), S (Standard), M1 (muestra
1) y M2 (muestra 2) agregar:
B
S
M1
M2
Standard
10 ul
Suero o plasma
10 ul
10 ul
Reactivo 1
1000 ul
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Enzima ureasa
5 ul
5 ul
5 ul
5 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 3 minutos a 37C
Reactivo 2
1000 ul
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 5 minutos a 37C.
Leer la absorbancia de la muestra (A muestra) y del estndar (A Estndar) en
espectrofotmetro a Hg 578 nm frente a un blanco reactivo antes de 60 minutos
Clculos de concentracin de urea:
C (mg/dl)= A_muestra x 80
A estandar
Valores de referencia en suero: 10 50 mg/dl
Parmetros a considerar:
Autora: Dra. Celia Bowen
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1.Procedimiento (en suero o plasma) tanto para TGO como para TGP:
Longitud de onda: Hg 334 nm
Temperatura: 25 C
Cubeta: 1 cm paso de luz
Ajuste cero: contra el aire
Reactivo de trabajo
Muestra
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PRCTICA No. 11
TEMA: Determinacin de bilirrubina total y directa
El 80-85% de la bilirrubina se origina de la degradacin de la hemoglobina con un 1520% que es derivada del citocromo, mioglobina y catalasas. La bilirrubina no
conjugada, la cal se liga a la albmina del plasma, es producida en el curso de la
degradacin en el sistema reticuloendotelial, clulas Kupffer del hgado, bazo y mdula
sea. Los ensayo de bilirrubina son posible para evaluar el grado de severidadad de los
sntomas clnicos de la ictericia as como para evaluar la funcin y el estado del hgado.
Significado de los resultados anormales
La ictericia es la coloracin amarillenta de la piel y de la esclertica del ojo, que ocurre
cuando la bilirrubina se acumula en la sangre a un nivel mayor a 2.5 mg/dL
aproximadamente. La ictericia se presenta porque los glbulos rojos se estn
descomponiendo demasiado rpido para que el hgado los procese, lo cual podra
suceder debido a una enfermedad heptica o a una obstruccin de las vas biliares.
Si hay una obstruccin de las vas biliares, la bilirrubina directa se acumular, escapar
del hgado y terminar en la sangre. Si los niveles son lo suficientemente altos, una
parte de ella aparecer en la orina. Slo la bilirrubina directa aparece en la orina. El
aumento de la bilirrubina directa generalmente significa que las vas biliares (secrecin
heptica) estn obstruidas.
El aumento de la bilirrubina indirecta o bilirrubina total pueden ser un signo de:
Sndrome de Crigler-Najjar
Eritoblastosis fetal
Enfermedad de Gilbert
Cicatrizacin de un hematoma grande (moretn o sangrado bajo la piel)
Anemia hemoltica
Enfermedad hemoltica del recin nacido
Hepatitis
Ictericia fisiolgica (normal en los recin nacidos)
Anemia drepanoctica
Reaccin a una transfusin
Anemia perniciosa
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En presencia del acelerador cafena, la bilirrubina total se acopla con el cido sulfnico
para formar un complejo azobilirrubinado rojo, la intensidad del color es proporcional a
la concentracin de la bilirrubina. La determinacin de la bilirrubina directa es
desarrollada sin aditivo de cafena. La adicin de tartrato alcalino causa una
transformacin del complejo rojo de la azobilirrubina a un complejo azul y las lecturas
de las absorvancias son entre 546-578 nm.
Bilirrubina total:
Acido sulfanlico + NaNO2
cafena
azobilirrubina (rojo)
complejo verde
1. Esquema de pipeteo:
Bilirrubina total
Microdeterminacin
Pipetear en las cubetas
Blanco de reactivo
Muestra
Reactivo 1
100 ul
100 ul
Reactivo 2
------
25 ul
Reactivo 3
500 ul
500 ul
Muestra
100 ul
100 ul
500 ul
500 ul
Blanco de reactivo
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Muestra
Reactivo 1
100 ul
100 ul
Reactivo 2
------
25 ul
1000 ul
1000 ul
Muestra
100 ul
100 ul
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
Valores de referencia:
Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dl
Bilirrubina directa: hasta 0.25 mg/dl
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TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de las bilirrubinas en un suero sanguneo y luego reportar los
clculos en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
BIBLIOGRAFIA:
ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin, Editorial
Mdica Panamericana, Bogot, 2.001
Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin, Editorial
Salvat Mdica, Mxico, 1.993
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra, 1.992
Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica, Editorial Mdica
Panamericana, Mxico, 2.001
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