REPLICACIN DEL ADN

El significado gentico de la replicacin es el de conservar la informacin gentica.

La estructura del ADN en doble hlice permite comprender como dicha molcula
puede dar lugar a copias sin perder su conformacin. En principio, las dos hebras
deberan separarse. Despus, mediante la accin de otra enzima, a partir de
desoxirribonucletidos sueltos y segn la complementariedad de bases, podra irse
construyendo las hebras complementarias de las dos hebras modelo iniciales.

MODELOS DE REPLICACIN PROPUESTOS

Para explicar este proceso se propusieron tres hiptesis:
Hiptesis Conservativa. Propone que tras la duplicacin, quedan, por un lado, las
dos hebras antiguas juntas y, por otro, las dos hebras nuevas tambin espiralizadas.
La Hiptesis Semiconservativa sobre la duplicacin del ADN se debe a Watson y
Crick. En ella se sostiene que, en las dos molculas de ADN de doble hlice hijas,
una de las hebras sera la antigua y otra la moderna.
La Hiptesis Dispersiva supone que la primitiva molcula de ADN se fragmenta en
multitud de pequeos trozos, copindose stos y reunindose tanto los fragmentos
originales como las copias de modo que las dos nuevas molculas estn formadas
por fragmentos antiguos y nuevos.

El experimento ms definitivo para dilucidar cul de estas tres hiptesis era la

correcta fue el de Meselson y Stahl en 1957. La hiptesis confirmada fue la
semiconservativa.

REPLICACIN IN VIVO DEL ADN

La enzima que lleva a cabo la replicacin del ADN es la ADN polimerasa, esta
enzima tiene unos requerimientos especficos para trabajar, que le imponen
restricciones:
1. Slo aade nucletidos en la direccin 5 3.
2. Necesita para poder empezar a copiar y unir nucletidos un molde de ADN.
3. Necesita un pequeo trocito de ARN al cual unir los nucletidos, ya que ella no
puede empezar a unir los nucletidos sin tener una pequea cadena ya formada.
4. Utiliza nucletidos trifosfato.
Dadas las necesidades de esta enzima y sabiendo que la molcula de ADN est
formada por dos hebras antiparalelas, se plantea un problema en la cadena de ADN
que va en la direccin 5 3, porque aqu la enzima estara trabajando en la
direccin contraria, y sin embargo, se observa que las dos hebras se van replicando.

La solucin al dilema la dio el desabrimiento, en 1968, por Okazaki de unos

fragmentos constituidos por unos 50 nucletidos de ARN y entre 1.000 y 2.000
nucletidos de ADN, denominados fragmentos de Okazaki. As se poda explicar
como se copia esta cadena, siendo de forma discontinua en la direccin 5 3 y la
otra cadena de forma continua. Tambin quedaba solucionado el problema de que la
enzima necesitara una cadena de ARN a la cual unir los nucletidos.

Veamos ahora como se lleva acabo el proceso:

Existe una secuencia de nucletidos en el ADN llamada origen de replicacin

que acta como seal de iniciacin.

Las cadenas de ADN estn unidas por puentes de hidrgeno, que debemos
romper para facilitar la separacin de las cadenas para ser copiadas, esta
separacin la lleva a cabo las enzimas helicasas.

Como el desenrollamiento de la doble hlice da lugar a superenrollamientos en el

resto de la molcula, capaces de detener el proceso, se hace preciso la presencia
de las enzimas topoisomerasas que eliminen las tensiones en la fibra.

A continuacin, para evitar que las dos hebras vuelvan a reunirse y formar los
puentes de hidrgeno se colocan unas protenas llamadas SSB (Single-Strand
DNA Binding proteins), que estabilizan las cadenas sencillas.

El proceso es bidireccional, es decir, hay una helicasa trabajando en un sentido y

otra trabajando en sentido opuesto. Se forman pues las llamadas burbujas u ojos
de replicacin.

Como ninguna ADN-polimerasa puede actuar sin cebador, interviene primero una
ARN polimerasa (primasa) que si lo puede hacer, sintetiza un corto fragmento de
ARN de unos 10 nucletidos denominado primer que acta como cebador.

Despus interviene la ADN polimerasa III, que a partir de este cebador comienza
a sintetizar en direccin 5 3 una hebra de ADN partir de nucletidos trifosfato.
La energa necesaria para el proceso es aportada por los propios nucletidos que
pierden dos de sus fsforos. Esta nueva hebra se sintetiza en el sentido que se
abre la horquilla de replicacin, es de crecimiento continuo y se denomina hebra
conductora.

Sobre la otra hebra (hebra discontinua o retardada) la ARN polimerasa

sintetiza unos 40 nucletidos de ARN en un punto que dista unos 1.000
nucletidos de la seal de iniciacin. A partir de ellos la ADN polimerasa III
sintetiza unos 1.000 nucletidos de ADN, formndose un fragmento de Okazaki.
Este proceso se va repitiendo a medida que se van separando las dos hebras
patrn.

A continuacin interviene la ADN polimerasa I, que, primero, gracias a su funcin

exonucleasa, retira los segmentos de ARN, y que luego, gracias a su funcin
polimerasa, rellena los huecos con nuceltidos de ADN.

Finalmente la ADN ligasa unir los dos extremos, tanto en la cadena continua
como los sucesivos fragmentos de Okazaki que se van formando en la cadena
discontinua.

Cuando se observa como se produce la replicacin se ve que la cadena continua va

ms rpida que la discontinua, esto es debido a que cada vez que se forma un
fragmento de Okazaki hay que realizar todo este proceso como si se comenzara la
sntesis de nuevo, formando el primer y el resto de pasos, sin embargo, en la
continua solo se realizar una vez.

REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS

Es similar a la de los procariontes, es decir, semiconservativa y bidireccional.
Existe una hebra conductora que sintetiza de manera continua y la retardada de
forma discontinua con fragmentos de Okazaki.
Sin embargo, la replicacin en eucariotas presenta ciertas peculiaridades:

El ADN de los eucariontes est fuertemente

asociado a los octmeros de histonas, en
forma de nucleosomas, por lo que adems de
replicarse el ADN, deben duplicarse tambin
las histonas. Al parecer, tanto los nuevos
nucleosomas como los antiguos se reparten de
manera aleatoria entre las dos nuevas hebras
hijas: en la retardada y en la conductora.

La longitud del ADN de un cromosoma

eucaritico es mucho mayor que el ADN
bacteriano, de ah que no haya un nico origen
de replicacin. Para que el proceso sea ms
rpido, existen numerosas burbujas de
replicacin a lo largo de cada cromosoma.

CORRECCIN DE ERRORES
La actividad de la ADN polimerasa debe ser exacta, rpida y fiel, ya que la vida entera
y su continuidad de generacin en generacin dependen de la exactitud y precisin
con que se transmite la informacin, es decir de la fidelidad de la duplicacin del
ADN.
La seleccin de nucletidos por la ADN polimerasa y su actividad autocorrecctora,
constituyen mecanismos de prevencin de errores, pero an as se comete un error
de apareamiento por cada 10 millones de bases.
Esta precisin podra resultar suficiente para una bacteria, cuyo genoma contiene 3
millones de pares de bases, pero resulta insuficiente para el genoma humano que
contiene 3.109 pares de bases.

Un error por cada 10 millones de bases supondra 300 equivocaciones en cada

duplicacin del ADN humano, y teniendo en cuenta que durante el desarrollo
embrionario a partir del zigoto el genoma humano se duplica casi mil millones de
veces, se producira una acumulacin del trescientos mil billones de errores, lo que
evidentemente, es incompatible con la vida, ya que la formacin inicial se perdera
pronto como consecuencia de las divisiones celulares.
Por ello, para aumentar todava ms la precisin de la duplicacin, existe una
maquinaria enzimtica que corrige los posibles errores cometidos por el ADN
polimerasa en ADN recin sintetizados (correccin postreplicativa), con lo que la
exactitud de la rplica alcanza la increble perfeccin de un error por cada diez mil
millones de bases (1010). Esta correccin se realiza por medio de un conjunto de
enzimas agrupados en un complejo multienzimtico que detecta el nucletido mal
emparejado, lo elimina y regenera la secuencia correcta, del siguiente modo:

Para detectar el nucletido mal emparejado,

el aparato de correccin debe reconocer la
cadena recin sintetizada, donde se
encuentra el error y diferenciarla de la
cadena molde. Ambas cadenas son
complementarias, pero mientras que la
cadena molde tienen metiladas las
adeninas de las secuencias GATC, existe
un lapso de tiempo durante el cual las
adeninas de estas secuencias en la cadena
rplica aparecen sin metilar, y es en este
intervalo
cuando
acta
el
complejo
multienzimtico y detecta los posibles
errores.

La eliminacin se realiza mediante una

endonucleasa que corta el segmento en el
lugar donde se encuentra el error.

Por ltimo, la secuencia correcta se

regenera cuando la ADN polimerasa I
rellena el hueco utilizando como molde la
cadena original, y por ltimo una ligasa unir
los fragmentos.

TELMEROS: ENVEJECIMIENTO Y MUERTE CELULAR

Los cromosomas eucariotas son lineales y presentan en sus extremos unas regiones,
denominadas telmeros constituidas por secuencias repetitivas del tipo
TTAGGGTTAGGG.Cuando se replica el ADN lineal, los extremos 5 de los
telmeros, no pueden ser replicados.
Cuando se elimina el ARN cebador del extremo 5 de cada una de las hebras recin
sintetizadas, el hueco que queda no lo pueden rellenar los enzimas ADN
polimerasas, porque no encuentran extremos hidroxilo libres sobre los que aadir
nuevos nucletidos.
La imposibilidad de replicar los extremos de cada cromosoma da lugar a que el
telmero se vaya acortando en cada ciclo de replicacin, hasta llegar a una
cantidad crtica. Esta prdida deja al descubierto los extremos de los cromosomas
que se unen unos a otros producindose la imposibilidad de replicacin. Este
acortamiento de los telmeros est relacionado con el envejecimiento celular y la
muerte programada o apoptosis de las clulas.

El acortamiento de los telmeros, puede

ser remediado mediante una enzima, la
telomerasa, que repara el dao y hace
a las clulas inmortales, es el caso de
las clulas embrionarias y tumorales.
La
telomerasa
es
una
ribonucleoproteina que acta como
trasncriptasa inversa (sintetiza ADN a
partir de un molde de ARN), ya que
tienen una hebra de ARN con la
secuencia apropiada para actuar como
molde para la sntesis de la secuencia
telomrica de ADN que se aade en los
extremos 3 de cada cromosoma para
evitar su acortamiento en cada proceso
de duplicacin.

AGENTES MUTAGNICOS
El ADN es un compuesto que se encuentra sometido continuamente a las agresiones
de sustancias qumicas, tanto de nuestro propio metabolismo como del exterior.
Tambin es alterado por agentes fsicos.

EFECTO DE LA TEMPERATURA. Las clulas humanas por el mero hecho de

encontrarse a 37, pierden diariamente y de forma espontnea unas 5.000 bases
pricas (A y G) en un proceso que implica la rotura del enlace N-glucosdico
denominado despurinizacin.

EFECTO DE LOS RAYOS ULTRAVIOLETA DE LA RADIACIN SOLAR. Esta

radiacin induce la formacin de enlaces covalentes
entre dos bases pirimidnicas sucesivas en la misma
cadena, lo que da lugar a dmeros de timina y de
citosina; como consecuencia se rompen los puentes
de hidrgeno que mantenan con sus bases
complementarias y la doble hlice se desorganiza
alrededor de los dmeros. Estos dmeros pueden
repararse fotoqumicamnete, pues las clulas poseen
unas enzimas que pueden activarse por la accin de
la luz ultravioleta.

METABOLITOS REACTIVOS. Algunos residuos del metabolismo, sobre todo los

radicales libres derivados del oxgeno, son compuestos altamente reactivos y
capaces de inducir lesiones en el ADN.

RADIACIONES IONIZANTES. Se conocen con este nombre a determinadas

radiaciones electromagnticas de longitud de onda muy corta y por ello altamente
energticas, como los rayos (gamma) y los rayos X y los flujos de neutrones
y protones originados en los reactores nucleares, que al colisionar con los
tomos y las molculas que encuentran en su camino, los transforman en iones y
radicales muy reactivos, capaces de atacar a numerosas molculas de las
clulas, entre ellas el ADN, produciendo la rotura de sus cadenas.

Las consecuencias derivadas de su accin dependen de la intensidad de la radiacin

y del tiempo de exposicin, ya que sus efectos son acumulativos. Si la radiacin es
muy intensa, llegan a romperse los cromosomas y se produce la muerte celular.
Son ms sensibles las clulas que s encuentran en divisin que las que no se dividen;
por ello cuando se aplica radioterapia en el tratamiento contra el cncer, la radiacin
destruye preferentemente a las clulas cancerosas, que estn continuamente
dividindose, y deja intactas las restantes clulas del organismo. Si la radiacin afecta

a una mujer embarazada, se producen mutaciones de ADN en el feto que pueden

ocasionar la paricin de malformaciones en el recin nacido, de ah que nunca se
utilicen rayos X como mtodo de exploracin en las mujeres gestantes.

RADIACIN CORPUSCULAR: PARTCULAS y . Son las partculas que se

emiten en los procesos de desintegracin de istopos radiactivos, y sus efectos
sobre el ADN son similares a los producidos por las radiaciones rayos o los rayos
X, que ocasionan la rotura de las cadenas de ADN. El caso ms grave fue el
sucedi en el accidente nuclear de Chernbil.

SUSTANCIAS QUIMICAS. Constituyen una autntica legin de sustancias,

habitualmente utilizadas y que nos rodean.
El benzopireno y otros hidrocarburos policclicos, que son molculas planas
que al intercambiarse entre los pares de bases establecen puentes, mediante
enlaces covalentes, entre las dos hebras de ADN. El cido nitroso, que provoca
la desaminacin de la citosina y la adenina. Los agentes alquilantes como el gas
mostaza, que introducen grupos metilo, etilo en las bases del ADN y alteran la
replicacin.
Como la mayora de estos agentes mutagnicos favorecen el desarrollo de
tumores carcingnicos.

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