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TESIS DE MAESTRA
Directora
MARIA SOLEDAD HERNNDEZ GOMZ
Biloga Ph. D.
Nota de aceptacin:
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Dra. Claudia Patricia Prez Rodrguez
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Dr. Anbal Orlando Herrera Arvalo
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Dra. Mara Soledad Hernndez Gmez
AGRADECIMIENTOS
RESUMEN
Fueron investigados los efectos que los factores de proceso (ecotipo, estado de madurez,
parte de la fruta, mtodo de extraccin, dilucin, dosis de reactivo y tiempo de extraccin)
realizan sobre la extraccin de pectina del fruto de cocona, utilizando para ello la metodologa
de superficie de respuesta. Los resultados mostraron que el principal efecto lo ejerce la parte
de la fruta (corteza y semillas), seguido del mtodo de extraccin (mtodo con cido) y el
estado de madurez (maduro). En cuanto a los factores de dilucin y dosis de reactivo, sus
efectos no fueron significativos en los niveles evaluados. Para el caso de los ecotipos, no se
encontraron diferencias entre los frutos estudiados. En seguida se busc los valores ptimos
de pH y tiempo de extraccin, utilizando modelos de primer y segundo orden, con los cuales
se encontr que el principal efecto lo establece el pH con un valor ptimo de 1,9 y aunque el
tiempo no influy de manera determinante, si limita la calidad cuando se usan valores
inferiores a 60 superiores a 75 min, fijando un ptimo en 65 min. A continuacin se escal el
proceso en planta piloto, donde se ajustaron las condiciones ptimas en un pH de 2,2, un nivel
de dilucin de 1:3 y un tiempo de 65 min. Se obtuvo un rendimiento del 10% bs de pectinas,
las cuales se clasificaron como de bajo metoxilo, gelificacin lenta y 60 SAG.
ABSTRACT
There were investigated the effects of process factors, (ecotype, fruits maturity state,
extraction method, dilution, reagent dose and extraction time) performed on the extraction of
pectin from the fruit of cocona, using for this purpose the response surface methodology. The
results showed that the main effect is exercised by the fruit (rind and seeds), followed by the
extraction method (method with acid) and maturity (mature). As for the dilution factors and
reagent doses, their effects were not significant at the levels tested. In the case of ecotypes, it
was found no differences among the fruits studied. Then it sought the optimal values of pH and
extraction time, using models of first and second order, which found that the main effect is set
by the pH with an optimum value of 1.9 and although the time did not affect on a decisive way,
this aspect limits the quality when it is used values below 60 or above 75 minutes, setting an
optimum at 65 minutes. Subsequently, the process was scaled in pilot plant, where the optimal
conditions were adjusted to a pH of 2.2, a level of dilution of 1:3 and a time of 65 minutes. It
was obtain a dry pectins profit of 10%, which were classified as low methoxyl, slow gelling and
60 SAG.
TABLA DE CONTENIDO
Pg.
INTRODUCCIN ....................................................................................................................... 1
1. OBJETIVOS .......................................................................................................................... 2
2. MARCO TERICO ................................................................................................................ 3
2.1 ASPECTOS GENERALES DE LA COCONA ...................................................................... 3
2.1.1 Origen y distribucin ......................................................................................................... 3
2.1.2 Clasificacin taxonmica .................................................................................................. 3
2.1.3 Planta ............................................................................................................................... 3
2.1.4 Fruto ................................................................................................................................. 4
2.1.5 Cosecha ........................................................................................................................... 5
2.1.6 Manejo poscosecha .......................................................................................................... 5
2.1.7 Composicin qumica de los frutos ................................................................................... 6
2.1.8 Usos ................................................................................................................................. 8
2.1.9 Importancia econmica y potencial de comercializacin. ................................................. 8
2.2 PECTINAS ........................................................................................................................... 9
2.2.1 Clasificacin de las sustancias pcticas ........................................................................... 9
2.2.2 Estructura y composicin .................................................................................................. 9
2.2.3 Propiedades generales ................................................................................................... 11
2.2.4 Presencia y funcin biolgica ......................................................................................... 12
2.2.5 Usos y aplicaciones de las pectinas ............................................................................... 12
2.2.6 Importancia econmica de las pectinas .......................................................................... 12
2.2.7 Fuentes de pectina convencionales y no convencionales .............................................. 13
3. METODOLOGA .................................................................................................................. 15
3.1 MANEJO Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MATERIA PRIMA ........................................ 15
3.1.1 Recepcin ....................................................................................................................... 15
3.1.2 Seleccin y clasificacin ................................................................................................. 15
3.1.3 Lavado y desinfeccin .................................................................................................... 16
3.1.4 Escaldado ....................................................................................................................... 16
LISTA DE TABLAS
Pg.
Tabla 1. Composicin qumica del fruto de cocona ................................................................... 7
Tabla 2. Criterios de clasificacin medidos en el fruto de cocona ........................................... 25
Tabla 3. Codificacin de los factores experimentales del cribado ........................................... 25
Tabla 4. Factores establecidos y niveles ptimos.................................................................... 34
Tabla 5. Niveles de los factores experimentales de primer orden ........................................... 35
Tabla 6. Anlisis de varianza para resultados de primer orden ............................................... 35
Tabla 7. Niveles de los factores experimentales de segundo orden ........................................ 39
Tabla 8. Anlisis de varianza para resultados de segundo orden............................................ 39
Tabla 9. Prediccin de valores y deseabilidad del modelo de segundo orden......................... 43
Tabla 10. Factores establecidos y niveles ptimos del modelo de segundo orden ................. 43
Tabla 11. Caractersticas de las pectinas obtenidas en planta piloto ...................................... 50
Tabla 12. Balance de masa para ingredientes en la formulacin de bocadillo ........................ 54
Tabla 13. Anlisis de varianza para panel sensorial de bocadillo ............................................ 56
LISTA DE FIGURAS
Pg.
Figura 1. Pectinas de alto grado de metoxilo con un 80% GE. ................................................ 11
Figura 2. Pectinas de bajo grado de metoxilo con un 20% GE. ............................................... 11
Figura 3. Pectina importada por Colombia. ............................................................................. 13
Figura 4. Esquema de un diseo de termobalanza ................................................................. 21
Figura 5. Diagrama de proceso para la elaboracin de bocadillo. ........................................... 23
Figura 6. Diagrama de pareto para rendimiento ...................................................................... 26
Figura 7. Interaccin BD para rendimiento .............................................................................. 27
Figura 8. Diagrama de pareto para peso equivalente .............................................................. 27
Figura 9. Interaccin BD para peso equivalente ...................................................................... 28
Figura 10. Diagrama de pareto para acidez libre ..................................................................... 29
Figura 11. Interaccin BD para acidez libre ............................................................................. 30
Figura 12. Diagrama de pareto para contenido de metoxilo .................................................... 30
Figura 13. Interaccin BE para contenido de metoxilo ............................................................ 31
Figura 14. Diagrama de pareto para grado de esterificacin ................................................... 32
Figura 15. Interaccin BD para grado de esterificacin ........................................................... 33
Figura 16. Interaccin EF para grado de esterificacin ........................................................... 33
Figura 17. Efectos del pH y el tiempo de extraccin sobre el rendimiento .............................. 36
Figura 18. Efectos del pH y el tiempo de extraccin sobre el peso equivalente ...................... 36
Figura 19. Efectos del pH y el tiempo de extraccin sobre la acidez libre ............................... 37
Figura 20. Efectos del pH y el tiempo de extraccin sobre el contenido de metoxilo .............. 38
Figura 21. Efectos del pH y el tiempo de extraccin sobre el grado de esterificacin ............. 38
Figura 22. Superficie de respuesta para rendimiento .............................................................. 40
Figura 23. Superficie de respuesta para peso equivalente ...................................................... 40
Figura 24. Superficie de respuesta para acidez libre ............................................................... 41
Figura 25. Superficie de respuesta para contenido de metoxilo .............................................. 42
Figura 26. Superficie de respuesta para grado de esterificacin ............................................. 42
Figura 27. Deseabilidad para el modelo de segundo orden .................................................... 43
LISTA DE ANEXOS
Pg.
Anexo A. Anlisis de varianza para cribado inicial................................................................... 61
Anexo B. Evaluacin sensorial de bocadillo ............................................................................ 62
INTRODUCCIN
Colombia es uno de los pases con mayor biodiversidad, lo cual ofrece un gran potencial para
el desarrollo de negocios derivados del uso sostenible de la misma. Los productos forestales
no maderables (PFNM) hacen parte de la gran biodiversidad que presenta la Amazona
colombiana y son poco reconocidos a nivel nacional, con produccin y comercio reducido,
limitado principalmente a los departamentos de Caquet, Putumayo, Amazonas, Guaviare.
Dentro de los PFNM, los frutales amaznicos tienen gran inters, ya que el mercado mundial
de productos exticos frescos y procesados crece continuamente. Esto puede traducirse en
una consolidacin del mercado y sus valores agregados, que traern beneficios econmicos y
sociales a la comunidad de la Amazona, como una fuente alternativa de produccin
sostenible, contribuyendo a la conservacin de la biodiversidad y de recursos como el suelo,
que en esta zona se caracteriza por su fragilidad y baja fertilidad [1].
Actualmente en la regin amaznica, se cuenta con investigaciones en temas de manejo
agronmico y transformacin de especies vegetales amaznicas, que permiten iniciar
procesos estandarizados para la produccin de mermeladas, almbares, yogures, salsas y
nctares, entre otros.
Dadas las expectativas que se tienen con los frutales amaznicos y su inminente produccin
en un perodo a corto y mediano plazo, es fundamental generar tecnologas de
aprovechamiento para estas especies y sus derivados que puedan ser transferidos e
incorporados en las cadenas de frutales amaznicos.
Uno de los subproductos potenciales de algunas de estas especies es la pectina, ingrediente
necesario en la formulacin de algunos alimentos procesados y que en la actualidad se
importa en grandes cantidades de pases citricultores o productores de manzanas. Por sto, el
desarrollo de investigaciones para establecer la potencialidad de obtencin de pectina y sus
propiedades a partir de frutas de origen tropical amaznico permitir disminuir su importacin
local de este polisacrido.
Ejemplo de este potencial es la cocona o lulo amaznico (Solanum sp), que se caracteriza por
su precocidad de cultivo y alta produccin. Adems, la pulpa del fruto posee un sabor
agridulce, el cual lo transmite a todos sus procesados; en esto radica su apetencia.
Se espera que con los resultados de esta investigacin, se puedan plantear nuevas
alternativas de aprovechamiento para la cocona a fin de incrementar su valor agregado;
adems de minimizar los impactos ambientales de su produccin y procesamiento. Es por
esto que el escalamiento del proceso desarrollado en planta piloto se considera un paso
indispensable en esta investigacin, dado que el propsito de este trabajo es transmitir el
conocimiento obtenido y que ste se aplique en las plantas donde actualmente se procesa el
fruto de cocona.
1. OBJETIVOS
GENERAL
Realizar la extraccin y caracterizacin de la pectina obtenida a partir del fruto de dos ecotipos
de Cocona (Solanum sessiliflorum), en diferentes grados de madurez; a nivel de Planta Piloto.
ESPECFICOS
Estandarizar el protocolo de extraccin de pectina obtenida a partir del fruto de dos ecotipos
de Cocona (Solanum sessiliflorum), en diferentes grados de madurez; estableciendo los
puntos crticos de proceso.
Determinar algunas propiedades fisicoqumicas del producto obtenido a partir del protocolo
estandarizado.
2. MARCO TERICO
2.1 ASPECTOS GENERALES DE LA COCONA
2.1.1 Origen y distribucin
La cocona parece ser nativa de las vertientes orientales de Los Andes del Per, Ecuador y
Colombia, especialmente del primero de estos pases. Esta especie se encuentra de manera
natural entre los 200 y 1000 m.s.n.m; asimismo, se conoce que fue introducida como cultivo
hace unos 50 aos. Este fruto crece en zonas con temperaturas medias entre 18 y 30 C, sin
presencia de heladas y con precipitacin pluvial entre 1500 y 4500 mm anuales.
Aparentemente, se beneficia de una sombra ligera durante sus primeros estados de
desarrollo; requiriendo de buena radiacin solar durante el perodo de fructificacin [2] [3] [4]
[5] [6]. Est bien adaptado a las condiciones estresantes de la Amazonia (suelos pobres, altas
temperaturas y lluvias abundantes) y ofrece un potencial para la agricultura moderna de la
regin[7].
2.1.2 Clasificacin taxonmica [2] [3]
Reino
Vegetal
Divisin
Espermatofita
Sub-divisin
Angiospermas
Clase
Dicotilednea
Sub-clase
Simptala
Orden
Tubiflorales
Familia
Solanaceae
Gnero
Solanum
Especie
Solanum sessiliflorum
Nombre comn:
Solanum topiro
2.1.3 Planta
Es una planta de crecimiento rpido que alcanza hasta dos metros de altura, al inicio es
herbcea y despus se torna semileosa. El tallo es cilndrico, grisceo, con abundante
3
pubescencia dura y ramifica desde cerca del suelo [2] [4] [5]. Las hojas son ovaladas,
grandes, de pice agudo, de bordes sinuados y de lbulos acuminados y triangulares
irregulares con un lado de lmina ms alto que el otro; sus dimensiones se encuentran entre
los 30 y 50 cm de largo y entre los 20 y 30 cm de ancho. La cara superior de la hoja est
cubierta de pelos duros y blancuzcos, con algunos estrellados; mientras que en el lado inferior
la pubescencia es suave y estrellada [4] [6] [5].
La produccin de cocona empieza a los seis meses del transplante y la planta exhibe
fructificacin contina durante uno a dos aos, no obstante, la productividad disminuye
considerablemente despus de 6 a 8 meses de la primer cosecha [2] [4] [6].
2.1.4 Fruto
El fruto vara desde casi esfrico u ovoide hasta ovalado, con 4 a 12 cm de ancho, 3 a 6 cm
de largo y 24 a 250 g de peso. El color de la baya puede ser desde amarillo hasta rojizo; los
frutos de color amarillo normalmente estn cubiertos de pubescencia blancuzca, fina y suelta,
dicha pubescencia es mucho menos notoria en el ecotipo de color rojizo. La cscara es suave
y rodea la pulpa o mesocarpio grueso, amarillo y acuoso. Las cuatro celdas que lo componen
estn llenas de semillas envueltas en muclago claro, similares a las del tomate. El fruto posee
una fragancia y sabor especial (ligeramente cido, sin dulce) [4] [5].
El nmero de frutos que produce la planta se relaciona con el tamao de los mismos; es as
como, plantas con frutos pequeos (25 a 40 g) producen entre 87 y 119 frutos, plantas con
frutos medianos (40 a 60 g), entre 83 y 95 frutos y plantas con frutos grandes (141 a 215 g)
entre 39 y 24 frutos [4] [6] [5].
Los frutos de cocona redonda (Ecotipo I) presentan un peso promedio de 40,8 g (entre 36,5 y
45,1 g), una longitud promedio de 4,2 cm (entre 4,03 y 4,36 cm) y un dimetro promedio de
4,37 cm (entre 4,22 y 4,52 cm). Estos frutos son achatados en los polos y su color vara de
amarillo a marrn oscuro. La cscara es lisa, sin vellosidades y representa el 18% del peso
total del fruto; la pulpa es de color crema, sabor cido, aroma similar al del tomate de rbol y
constituye el 67,2% del peso total; las semillas son glabras, ovaladas, achatadas y componen
el 14,6% del peso del fruto [4].
Los frutos de cocona ovalada (Ecotipo II) registran un peso, longitud y dimetro promedio de
75,79 g, 7,48cm y 4,55 cm respectivamente. Los frutos son de forma ovalada elptica y su
color vara de marrn claro a oscuro. La cscara es lisa, firme, con un espesor de 0,6-0,8 cm,
de sabor cido y representa el 75,72% del peso total del fruto, y las semillas son abovadas,
planas, glabras y constituyen el 10,94% del peso del fruto [4].
Los indicadores de madurez del fruto de cocona ms importantes son los parmetros de
crecimiento, longitud y dimetro, los cambios de color del fruto, que cambia a naranja casi en
la totalidad de su superficie, la firmeza del fruto que oscila entre 9-10 libras fuerza [8].
2.1.5 Cosecha
La cosecha se realiza manualmente, aproximadamente seis meses despus del trasplante y
contina durante todo el ao. La prctica y la recomendacin de los agricultores es que se
debe cosechar hasta los 12 meses y luego realizar la renovacin del cultivo [2] [3]. Este fruto
presenta la caracterstica de no ser climatrico, por lo tanto, no se debe cosechar sino cuando
alcance la madurez organolptica dado que despus de hacerlo, no contina su proceso de
maduracin [9].
La frecuencia de la cosecha en los dos primeros meses es semanal, en este tiempo existe
una mayor cantidad de frutos maduros, luego se reduce gradualmente al comenzar el tercer
mes. La renovacin anual de las plantas cultivadas es econmicamente justificable, debido a
un descenso en la produccin [3] [6].
Los frutos deben estar pintones o completamente anaranjados, pero en ningn caso
sobremaduros, para que puedan resistir el transporte y la manipulacin. Para una mejor
conservacin y resistencia a la manipulacin y transporte, los frutos deben ser cosechados
con pednculo, puede hacerse con la ayuda de unas tijeras podadoras. Se corta el pednculo
del fruto se hacen leves torsiones al fruto hasta que se rompa el pednculo, evitando halarlo
para no causar heridas a la planta [3] [6] [9].
2.1.6 Manejo poscosecha
Despus de retirados de la planta, los frutos deben ser manejados en un slo recipiente o
empaque; deben ser recolectados y separados segn su estado de madurez en empaques
que permitan ventilacin y no causen dao al fruto. Entre los empaques ms recomendables
estn las canastillas plsticas con una capacidad entre 15 y 20 kg para evitar que los frutos
colocados por debajo se deterioren por exceso de peso [9] [6], aunque son resistentes al
transporte. Esta resistencia mecnica es probablemente otorgada por la pulpa adherida a la
cscara; pues es consistente y elstica al mismo tiempo. Cuando stos han sido
acondicionados en cajas de 25 a 30 kg, pueden ser transportados durante varias horas an
por carreteras destapadas sin sufrir daos aparentes [6].
Los frutos de la cocona recolectados en el estado de madurez optimo (color anaranjado) son
menos perecibles que los frutos de otras solanceas [3].
Los frutos pueden conservarse a temperatura ambiente entre 27 y 30 C, a la sombra y con
buena ventilacin, sin que se deterioren por un perodo de cinco a siete das. En
refrigeradores de uso domstico, el perodo de conservacin puede alcanzar hasta 30 das,
sin que se altere el sabor natural [3] [6].
2.1.8 Usos
Se utiliza en la elaboracin de jugos y nctares, pero tambin tiene un alto potencial para usarse en
la elaboracin de ensaladas. Es considerado el tomate de la Amazonia; preparado con aj es muy
agradable y se emplea como ensalada o como complemento a comidas tpicas en la selva peruana
[3] [5] [8]. Tambin se utiliza en la preparacin de encurtidos. Por otro lado, es posible usarlo en la
preparacin de compotas dulces, de manera semejante al durazno, y en mermeladas y jaleas [6] [1].
El uso vara de acuerdo con los ecotipos. Los frutos de tamao grande son preferidos para la
obtencin de pulpa, mientras que los frutos pequeos se utilizan para la obtencin de jugos. Los
nativos waorani en la amazona, utilizan el jugo para limpiar y dar brillo al cabello. La planta hervida
es frotada sobre las mordeduras de araas para cicatrizar las heridas [5].
La cocona es valorada por las poblaciones tradicionales del Amazonas Occidental por su capacidad
de sanar enfermedades de la piel. Las hojas maceradas son utilizadas por los indgenas peruanos y
brasileos para evitar la formacin de ampollas en la piel en caso de quemaduras provocadas por
fuego o agua hirviendo. El jugo de la cavidad locular de los frutos se utiliza para calmar la picazn de
la piel [6] [14].
El jugo puro es utilizado por las poblaciones tradicionales del Amazonas brasileo, peruano y
colombiano para controlar colesterol, diabetes, exceso de cido rico y otras enfermedades
causadas por el mal funcionamiento de los riones y del hgado [15] [10].
Un detalle muy importante observado en el valor nutritivo de la cocona es que sta puede ser
considerada un fruto altamente diettico, debido a su bajo aporte calrico y contenidos significativos
de fibra alimenticia. Esta evidencia sugiere su indicacin, en las ms variadas formas de consumo,
en la dieta alimenticia de la poblacin de la Amazonia, en especial a los pacientes
hipercolesterolmicos e hiperglicmicos [6] [16] [17].
2.1.9 Importancia econmica y potencial de comercializacin.
Este fruto tiene potencial para involucrarse en el desarrollo del comercio de nuevos frutales
amaznicos, para lo cual la industrializacin requerida es relativamente sencilla. La especie tiene
adems la ventaja de su precocidad, ya que inicia su produccin a los seis meses del trasplante. La
productividad es alta, pudiendo llegar a 80 a 100 t/ha en condiciones de cultivos altamente
tecnificados [18]. La posibilidad de programar las siembras y obtener cosecha durante todo el ao
tambin es una ventaja para la industrializacin con respecto a otros frutales de produccin
estacional [5].
El mercado actual es de consumo local en las formas indicadas anteriormente. Sin embargo, existe
un mercado de exportacin para los jugos y nctares, que no es satisfecho por la falta de materia
prima. Asimismo, existe un buen potencial para producir diferentes productos industrializados de
cocona, los cuales, posiblemente, tendran un buen mercado de consumo en los pases amaznicos
y de exportacin fuera de la regin [1] [5].
2.2 PECTINAS
Las pectinas son un grupo complejo de heteropolisacridos estructurales que contienen sobre todo
unidades de cido galacturnico. Estos compuestos estn presentes en las paredes celulares
primarias y en la laminilla media de las clulas parenquimticas de muchas plantas, donde estn
frecuentemente asociadas con otros componentes de la pared celular, tales como la celulosa,
hemicelulosa y la lignina, y son responsables de la firmeza de algunos productos. La disolucin de
los componentes de dicha pared celular, sobre todo de las pectinas se ha relacionado con el
ablandamiento de diversas especies vegetales [19] [20] [21].
La cantidad y calidad de pectina til que presentan los frutos dependen de la especie y del tipo de
fruto, de la cantidad que el fruto contiene naturalmente, del estado de maduracin en la cosecha, de
las condiciones de manejo y de la actividad enzimtica despus de la recoleccin y desde luego, del
proceso de extraccin. Dependen tambin de la parte del fruto que se utilice y de la tecnologa
empleada en el proceso de obtencin. En frutos sin madurar la mayor cantidad de material pctico
es insoluble en agua, la cantidad y la solubilidad aumentan con la madurez; esto genera cambios en
la firmeza del fruto [19] [21].
2.2.1 Clasificacin de las sustancias pcticas
Se pueden distinguir dos clases principales de sustancias pcticas: los cidos pectnicos, que tienen
una pequea porcin de sus cidos galacturnicos como steres metlicos, y los cidos pcticos,
que slo contienen molculas de cido galacturnico libre de esterificacin. Por definicin las
pectinas son cidos pectnicos con diferentes grados de esterificacin y neutralizacin, que pueden
contener de 200 a 1000 unidades de cido galacturnico. Existen otros compuestos de este tipo, las
protopectinas, altamente esterificadas con metanol y muy insolubles en agua, que se encuentran en
los tejidos de los frutos y son responsables de su textura rgida; sin embargo, la accin de la enzima
protopectinasa hace que se conviertan en pectinas solubles o cido pectnico, en un proceso que
ocurre durante la maduracin y que trae consigo el ablandamiento del fruto [20].
De todas estas sustancias, las pectinas son las ms abundantes e importantes, estn presentes
especialmente en algunos tejidos suaves, como en la corteza de los ctricos, en las manzanas, las
peras, entre otros. An dentro del propio vegetal existe una distribucin de las pectinas [20].
2.2.2 Estructura y composicin
La columna vertebral de la pectina est compuesta por unidades enlazadas (1-4) del cido
galacturnico interrumpidos por enlaces simples (1-2) de residuos de ramnosa. Los grupos
carboxilos de las unidades del cido galacturnico estn parcialmente esterificados por metanol, lo
cual define el contenido de metoxilo en una pectina dependiendo de la fuente y el modo de
extraccin. El grado de esterificacin (GE) est definido por la relacin de residuos de acido
galacturnico metilesterificados con el total de unidades de cido galacturnico presentes en la
9
10
convencin en grados SAG. Estos grados se definen como el nmero de gramos de sacarosa que
en una solucin acuosa de 65 Brix y un valor de pH 3.2 aproximadamente, son gelificados por un
gramo de pectina, obtenindose un gel de una consistencia determinada [21] [25].
2.2.4 Presencia y funcin biolgica
Las sustancias pcticas son conocidas por contribuir a la adhesin entre las clulas y al mecanismo
de fuerza de la pared celular, a travs de su habilidad para formar geles estabilizantes, y tienen
tambin un importante papel en el crecimiento de las clulas de las plantas. Adicionalmente a estas
importantes funciones fisiolgicas, estos polisacridos estructurales tienen tambin otras funciones,
entre ellas, el que estn involucrados en las interacciones entre plantas y agentes patgenos; la
cantidad y la naturaleza de la pectina son determinantes para la estructura de los frutos y vegetales
durante su crecimiento, madurez, almacenamiento y procesamiento; adicionalmente ellas tienen un
importante papel como fibra nutricional, y pueden tener interesantes propiedades teraputicas [19].
2.2.5 Usos y aplicaciones de las pectinas
La principal aplicacin de las pectinas en la industria de alimentos es la fabricacin de compotas y
mermeladas; se utiliza tambin como agente gelificante en pudines, estabilizante de emulsiones y
suspensiones, agente viscosante en bebidas, agente estabilizante en helados y postres fros, y en
soluciones para recubrir salchichas y carnes enlatadas [19] [21] [23].
En el campo farmacutico las pectinas se emplean por su accin protectora y reguladora del sistema
gastrointestinal, su accin desintoxicante, anticolesterol, inmunolgica, antihemorrgica,
anticancergena y cicatrizante; prolonga la accin teraputica al aumentar los tiempos de liberacin
de los principios activos [21] [23] [26] [27].
Se usan tambin en la formacin de pelculas para recubrir papel y dar caractersticas de suavidad
en el papel de envoltura, como vehculo en la preparacin de suspensiones de sulfato de bario para
aplicar en las radiografas por rayos X, en la fabricacin de pelculas biodegradables en forma de
mezclas de pectina y alcohol polivinlico como reemplazantes de derivados del petrleo; estas
pelculas son biodegradables, reciclables y permitidas para formas farmacuticas de liberacin
prolongada y como protectores o adhesivos en preparaciones farmacuticas para la piel [21] [23].
2.2.6 Importancia econmica de las pectinas
La totalidad de la cantidad de pectina consumida en Colombia es importada, debido a que no existe
ninguna empresa productora de esta sustancia, lo cual implica altos precios de venta de dicho
producto.
En la figura 3 puede observarse como entre los aos 2004 al 2006, el uso de pectina se increment
progresivamente, en el 2004 se importaron 193.039 kg de pectina, mientras que en el 2005 se
12
Cantidad en Kg.
250000
200000
150000
100000
50000
0
2004
2005
2006
Ao
inters en los ltimos aos, aunque con resultados que an no proveen ningn uso comercial
significante [19].
Este inters fue el que motivo la realizacin de la presente investigacin, puesto que como resultado
del procesamiento de la cocona se generan una gran cantidad de residuos a los cuales no se les
aplica ninguna clase de tratamiento, dando como resultado un alto impacto ambiental sobre los sitios
donde se desarrollan estos procesos y desperdiciando un material del cual se pueden obtener una
cantidad de subproductos tiles para la industria. Observando que existe un sinnmero de trabajos
encaminados al aprovechamiento de esta clase materiales, se tuvieron en cuenta los procedimientos
y resultados de estos, para establecer los parmetros iniciales de la experimentacin.
Algunos de los trabajos para la obtencin de pectinas de fuentes no convencionales se citan a
continuacin:
Orujo de oliva, pulpa de tomate, desperdicio del almidn de papa y semillas de linaza [19].
14
3. METODOLOGA
A continuacin se describen los procedimientos para la extraccin y caracterizacin de la pectina
obtenida del fruto de cocona, la cual fue evaluada sobre los elementos resultantes del despulpado.
Los anlisis se realizaron con frutos procedentes de San Jos del Guaviare, suministrados por la
empresa Asoprocegua.
Este trabajo se desarroll en dos fases; la fase experimental fue llevada a nivel de laboratorio, donde
se determino la aptitud tecnolgica de cada uno de los ecotipos seleccionados y los protocolos para
la extraccin de la pectina; y la fase industrial que consisti en replicar el mejor procedimiento en la
escala piloto.
Las experiencias se llevaron a cabo en los laboratorios del Instituto de Ciencia y Tecnologa de
Alimentos (ICTA) y en los laboratorios de poscosecha del programa de Ingeniera Agrcola; ambos
ubicados en la Universidad Nacional de Colombia - Sede Bogot.
3.1 MANEJO Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MATERIA PRIMA
El objeto de las operaciones previas de acondicionamiento es contar con una materia prima de
buena calidad, sin partculas extraas, que puedan influir en las caractersticas de la pectina que se
extraiga. Otro objetivo fue estabilizar el material desde el punto de vista qumico y biolgico y as
ajustar los parmetros para identificar el rendimiento real en la obtencin de pectinas.
3.1.1 Recepcin
Se recibieron dos ecotipos de fruto (1 y 2) en estado de madurez pintn y maduro. Se verific que
los frutos se encontraran sanos y en madurez organolptica completa.
3.1.2 Seleccin y clasificacin
La disponibilidad de pectinas vara a travs de la maduracin de los frutos. En consecuencia se
estableci realizar la extraccin en dos grados de madurez sucesivos, con el fin de seleccionar el
grado de madurez ms apropiado para realizar la extraccin. Los parmetros tenidos en cuenta para
la clasificacin fueron:
15
Ecotipos 1 y 2: Se tomaron como base de estudio estos ecotipos, por ser los de mayor oferta en
la produccin de frutales del mercado Colombiano, al momento de realizar esta investigacin.
16
Estado de madurez Maduro y Pintn: Se decidi evaluar estos factores para determinar el
impacto de la utilizacin de estos materiales en la extraccin y conocer cul ofrece mejores
valores de rendimiento y calidad.
Pulpa y residuos (corteza y semillas) del fruto: Se decidi utilizar estos dos sustratos para la
extraccin debido a que son el resultado del proceso comnmente utilizado para el
aprovechamiento del fruto en la industria.
Adicionalmente se decidi controlar tres factores que intervienen en los procesos de extraccin de
pectina como los son:
Mtodo 1: Se experiment aplicando el mtodo de hidrlisis cida, dentro del cual se contempl
la utilizacin de dos soluciones ajustadas con cido clorhdrico (R.A) para alcanzar diferentes
valores de pH (2.2 y 3.2). Estos valores se encuentran dentro del rango ptimo definido por
estudios anteriores [19] [21] [47] [70] [29] [51] [55] [62] [37] [38].
Mtodo 2: Se consider un mtodo que contempla el uso de sales como coadyuvantes para la
extraccin; que para este caso fue el hexametafosfato de sodio o calgn, el cual fue manejado
en dos proporciones (0.5% y 1%) respecto a la cantidad de muestra a extraer (50 g). El valor del
pH fue de 4.5, el cual se mantuvo contante para los dos casos evaluados. Los valores
controlados fueron tomados de la literatura [19] [21] [70] [67] [23] [42].
Dilucin: Se experiment con dos valores de dilucin diferentes (1:1 y 1:2) con los cuales fue
preparado el material a extraer respecto al volumen de solvente usado, estableciendo una
relacin peso:volumen. Se tuvo en cuenta que este es uno de los factores de proceso que ms
influyen sobre los costos, por ser el punto determinante en el consumo de alcohol [21] [62] [42].
influyeron en las variables de respuesta. En esta etapa se corre un diseo de primer orden que
permita caracterizar en forma preliminar el tipo de superficie de respuesta y detectar la presencia de
curvatura [75]. Para este caso se decidi utilizar un arreglo factorial multinivel de 4 x 5, donde se
evalu el pH y el tiempo de extraccin, respectivamente. Este ltimo fue considerado dentro de los
rangos encontrados en la literatura [21] [47] [70] [71] [29] [51] [55] [62] [31].
Bsqueda de segundo orden: En el momento en que se detecta la presencia de curvatura por la
falta de ajuste del modelo de primer orden, el cual no describe de manera adecuada la informacin
generada; es entonces cuando se corre un diseo de segundo orden para caracterizar mejor la
superficie y modelar la curvatura [75].
Para este caso se utiliz un diseo de composicin central (DCC), por ser el que ofrece mayor
flexibilidad al poder construirlo a partir de los diseos ya establecidos. Este mtodo se compone de
tres tipos de puntos:
se determin utilizando el mtodo de la AOAC [76], por medio del cual se establece la prdida de
peso. El rendimiento fue expresado como porcentaje de bulbo seco (%BS). El porcentaje de
humedad para las muestras se estableci en 91 %, por tanto su base seca es del 9%.
Rendimiento (%BS) = Peso muestra de pectina seca (x) 100
50 g (x) 9%
3.4.2 Peso equivalente y acidez libre
Para la determinacin del peso equivalente por titulacin y de la acidez libre se emple la tcnica de
Owens que aparece citada en la literatura [21] [77] [78].
Se calcul el peso equivalente y la acidez libre por medio de las siguientes frmulas:
Peso equivalente = Peso de la muestra (mg) / meq. de hidrxido de sodio.
Acidez libre= meq de carboxilos libres / (g) = N x Vol. de soda (ml) / peso de la muestra (g)
3.4.3 Contenido de metoxilo
Se utiliz el mtodo establecido por Owens el cual se reporta en la literatura [21] [77] [78].
Se calcul el porcentaje de metoxilo por medio de la frmula:
% de Metoxilo = meq de hidrxido x 31 x 100 / mg de muestra
3.4.4 Grado de esterificacin
El clculo del grado de esterificacin expresado como porcentaje de esterificacin por metilos, de los
grupos carboxilo de los cidos pectnicos, se basa en las determinaciones de la acidez libre y de las
unidades metiladas. La suma de las unidades de carboxilos libres y de las unidades de carboxilos
metilados corresponde al nmero de carboxilos totales de los cidos pectnicos. La relacin entre los
carboxilos esterificados y los carboxilos libres, expresados como mili equivalentes por gramo, puede
llamarse grado de esterificacin (GE). Este valor fue calculado de acuerdo al mtodo establecido por
Owens [21] [77] [78].
Para el clculo del grado de esterificacin se utiliz la siguiente frmula:
GE = Carboxilos esterificados (meq / g) X 100 / Carboxilos totales (meq / g)
Carboxilo totales = Carboxilos libres + Carboxilos esterificados
20
son caractersticos de cada tipo de polmero y por tanto, pueden ser utilizados con finalidades de
identificacin [80].
Es con este ltimo fin para el cual se consider la realizacin de este anlisis, por cuanto se necesita
identificar plenamente que tipo de biopolmero se est obteniendo de la hidrlisis cida;
comparndolo con otras muestras de pectina comerciales.
3.5 ANLISIS Y PROCESAMIENTO DE DATOS
Para el anlisis de los resultados se utilizaron los siguientes elementos:
Coeficiente de determinacin, R2: Este coeficiente compara la variabilidad explicada por el modelo
frente a la variacin total, cuantificada a travs de la suma de cuadrados (SC). De esta forma se
determina el porcentaje de variabilidad presente en los datos y que es explicado por el modelo. En
general, para fines de prediccin se recomienda un coeficiente de determinacin ajustado de al
menos un 70% [75].
Diagrama de Pareto estandarizado: Se logra al estimar los efectos graficndolos, para as
visualizar cules tienen un mayor impacto sobre la variable de respuesta [75]. En el grfico aparece
una franja vertical azul que fija el lmite de significancia (valor-P menor que 0.05) para los efectos
calculados, por lo que cualquier efecto situado por debajo de este lmite, no posee una diferencia
significativa que incida en la variable de respuesta.
Grficos de interaccin: En estos grficos se presentan las diferentes interacciones que poseen un
efecto significativo en la variable de respuesta. En el caso de una interaccin cualquiera, dgase
(AB); los niveles del primer trmino (A) estarn representados en el eje x, mientras los niveles del
segundo trmino (B) se representan con lneas.
Deseabilidad: La deseabilidad general optimizada es calculada tomando la deseabilidad de cada
respuesta, elevndola a la potencia especificada por su impacto, multiplicando los resultados juntos
y elevando el producto a una potencia 1 dividida por la suma de los impactos. El resultado es un
nmero entre 0 y 1, con ms peso en la respuesta que en el impacto alto [75].
Grficos de superficie de respuesta: Este procedimiento crea grficos de superficie basados en
una funcin matemtica, la cual puede tener cualquier operador algebraico u otra expresin. Las
grficas resultantes muestran el valor de la funcin sobre un rango especificado para X y Y [75].
3.6 UTILIZACIN DE SUBPRODUCTOS
Como resultado del proceso de extraccin de pectina se obtuvieron algunos subproductos, dentro de
los cuales se encuentra la pulpa que fue retirada durante el proceso de filtracin posterior a la
hidrlisis cida. Este subproducto se produjo debido a la accin del cido, el cual ocasion un
despulpado qumico sobre los residuos que an tenan adheridos este material. Dada la cantidad de
22
23
24
Maduro
Pintn
Ecotipo 1 Ecotipo 2 Ecotipo 1 Ecotipo 2
Peso (g)
433
815
422
824
Dimetro Longitudinal (cm)
4.50.5
7.60,8
4.60,5
7.50,7
Slidos Solubles (Bx)
6.50.5
7.40,8
5.40,4
6.20,7
Acidez titulable (AT)
1.670.17 1.990.22 1.910.23 2.160.25
Relacin de Madurez (Bx / AT)
3.89
3.72
2.83
2.87
() Desviacin estndar calculada
Se definieron los niveles de los factores experimentales a controlar, codificndolos para su manejo
con el programa estadstico.
Tabla 3. Codificacin de los factores experimentales del cribado
Nombre
Codificacin
Descripcin
Nivel Descripcin
A:Dosis de reactivo
pH 2,2 y Calgn 0.5% (-1,0) pH 3,2 y Calgn 1%
B:Metodo de extraccin Mtodo con cido
(-1,0) Mtodo con calgn
C:Dilucin
1:1
(-1,0) 1:2
D:Madurez
Pintn
(-1,0) Maduro
E:Parte de la fruta
Pulpa
(-1,0) Corteza
F:Ecotipo
Ecotipo 1
(-1,0) Ecotipo 2
Nivel
(1,0)
(1,0)
(1,0)
(1,0)
(1,0)
(1,0)
Se realiz un ANOVA para este modelo, con el fin de establecer la significancia de los efectos sobre
las variables de respuesta (ver Anexo A).
4.1.1 Rendimiento
Los efectos principales del mtodo de extraccin (B), madurez (D), parte de la fruta (E), dosis de
reactivo (A) y los efectos de interaccin BD, CD, AC, EF y AD, fueron altamente significativos para
esta variable de respuesta, con un R2 del 79,85%. El efecto de la interaccin BC fue significativo ms
no fue representativo para el anlisis (ver figura 6).
25
+
-
D:Madurez
BD
E:Parte de la fruta
A:Dosis de reactivo
CD
AC
EF
AD
BC
0
6
9
Efecto estandarizado
12
15
El efecto primordial que contribuy a la variabilidad del rendimiento, fue el mtodo de extraccin
donde se utiliz cido. Este resultado pudo deberse a que el mtodo fue capaz de hidrolizar algunos
compuestos insolubles de la pectina e incrementar la recuperacin de stas en el medio de
extraccin [21] [70] [71].
Un segundo efecto lo constituyo el estado de madurez maduro del fruto, el cual pudo originarse por
los diferentes procesos de maduracin que se llevan a cabo en el fruto; los cuales, incrementaran la
disponibilidad de pectina para ser extrada. Aunque la cantidad de sustancias pcticas en los frutos
inmaduros es mayor, el proceso de degradacin enzimtica que ocurre en la maduracin facilita la
extraccin de la pectina al hacerla ms susceptible a la hidrlisis [19] [49].
Otro efecto lo form la interaccin entre los factores de mtodo de extraccin y estado de madurez.
Este ltimo influy en el rendimiento cuando se utiliz el mtodo con calgn, ofreciendo mejores
resultados para el fruto maduro. Sin embargo, los mejores resultados se obtuvieron cuando se utiliz
el mtodo con cido, sin que al parecer exista una diferencia entre los estados de madurez
evaluados para este nivel (ver figura 7). Esto confirm el hecho de que el mtodo con cido posee
una mayor capacidad de extraccin sobre las pectinas presentes en el fruto, de acuerdo con
resultados previos [70] [34].
Avanzando en el proceso se encontr que la parte del fruto del cual se obtuvieron los mejores
rendimientos fue de la pulpa. Estudios previos han reportado que este tipo de sustratos presentan
buenos rendimientos [21] [52] [58], sin embargo no sucede as con las caractersticas de gelificacin,
puesto que estas son inferiores a las encontradas en las cortezas y residuos de otros frutos [47] [49]
[60].
Para terminar se encontr, que teniendo en cuenta los resultados analizados hasta el momento, la
dosis de reactivo que entreg mejores rendimientos corresponde al pH de 2,2. Sin embargo, no se
observ que este factor ejerza un efecto predominante entre los dems efectos considerados, razn
por la cual no se cont con una sustentacin suficiente para su establecimiento.
26
No se encontr efecto significativo del ecotipo y de la dilucin sobre el rendimiento. Por tanto se
pueden utilizar otros criterios; como el econmico, para el establecimiento de estos factores.
Figura 7. Interaccin BD para rendimiento
0,5
Madurez=1,0
Madurez=-1,0
Rendimiento
0,4
Madurez=1,0
0,3
0,2
0,1
Madurez=-1,0
0
-1,0
1,0
Metodo de extraccin
+
-
D:Madurez
E:Parte de la fruta
C:Dilucin
AB
AD
BC
DE
AC
CD
BF
0
6
8
Efecto estandarizado
10
12
parmetro de pH menos agresivo con el material y por tanto produjo pectinas con un mayor peso
molecular, lo cual influyo directamente sobre el valor del peso equivalente [47].
Figura 9. Interaccin BD para peso equivalente
(X 1000,0)
4
Peso equivalente
Madurez=1,0
3
Madurez=1,0
Madurez=-1,0
Madurez=1,0
Madurez=-1,0
Madurez=-1,0
0
-1,0
1,0
Metodo de extraccin
El estado de madurez se estableci como segundo efecto, siendo el fruto maduro el que proporcion
los mejores valores. Estos indicios muestran que las pectinas con un mayor peso equivalente se
encuentran en este sustrato. El mtodo con cido no favoreci este tipo de caractersticas
fisicoqumicas [19] [29].
Luego se encuentra a la pulpa como mejor oferente respecto a la parte de la fruta utilizada. Este
resultado pudo originarse en el hecho de que en este sustrato se encuentran las cadenas de cidos
poligalacturnicos mas largas y con mayor peso molecular, lo cual influy directamente sobre el
peso equivalente de las pectinas [19].
En ltimo lugar dentro de los efectos principales se ubica la dilucin, correspondiendole a la
proporcin 1:1 los mejores resultados. Este comportamiento concuerda con los resultados
encontrados en maracuy [47], en donde a menor proporcin de dilucin, mayor fue el valor del peso
equivalente.
Se observa que la dosis de reactivo, el mtodo de extraccin y el ecotipo no generaron un impacto
significativo en la determinacin de esta variable de respuesta por cuanto el establecimiento de
estos factores de proceso pueden ser fijados de acuerdo con criterios de eficiencia en los procesos y
calidad en las pectinas obtenidas.
4.1.3 Acidez libre
Los efectos del mtodo de extraccin (B), parte de la fruta (E), madurez (D), dosis de reactivo (A) y
las interacciones BD, AC, BE, BC, CD y DE, fueron altamente significativos para la variable juzgada,
con un R2 del 87.41%. El efecto del ecotipo (F) y de las interacciones BF y EF fueron significativos
ms no representativos para el anlisis (ver figura 10).
28
+
-
10
15
Efecto estandarizado
20
25
El efecto producido por el mtodo de extraccin cido se ubica en primer lugar. Esto pudo ocurrir por
el cambio de la naturaleza qumica de los grupos carboxilo presentes en los compuestos de pectina;
disminuyendo su estado como forma de sales o steres y aumentando su presencia como grupos
cidos [21].
En seguida se sita el efecto producido por la parte de la fruta, donde son los residuos obtenidos del
fruto (corteza y semillas), los que obtienen los mejores resultados. Esto pudo derivarse de una
mayor absorcin de compuestos cidos por parte de este sustrato durante la extraccin, lo cual
contribuy a un mayor valor de acidez libre.
A continuacin se posiciona el efecto del estado de madurez, el cual est representado para este
caso por el fruto maduro. Aquello pudo ser causado por una mayor predisposicin de los grupos
presentes en este sustrato, a ser acidificados por las soluciones utilizadas durante la extraccin.
Luego se encuentra el efecto de la dosis de reactivo, la cual considerando lo observado hasta el
momento, corresponde al pH de 2.2. Este resultado va de acuerdo con lo encontrado anteriormente,
ya que el desarrollo de la extraccin bajo estas condiciones de pH inferiores favorecieron la hidrlisis
de los compuestos de pectina con aumento de los grupos carboxilos [21].
Despus se halla la interaccin entre el mtodo de extraccin y el estado de madurez del fruto. Se
puede deducir que la utilizacin del mtodo con calgn, exhibe diferencias entre los estados de
madurez evaluados, siendo mejores los resultados obtenidos con el fruto maduro. Contrastando
estos resultados se encontr que el uso del mtodo cido, no muestra diferencias significativas entre
los estados de madurez evaluados (ver figura 11). Estos resultados confirmaron la alta incidencia del
mtodo cido en la determinacin de la acidez libre, provocada posiblemente por la fuerte accin
hidrolizante del cido clorhdrico, lo cual concuerda con lo encontrado en la literatura [62].
Por ltimo se encuentra el efecto del ecotipo 1, sin que se pueda decir de manera concluyente, que
alguno de los dos ecotipos es significativamente mejor para la obtencin de pectinas. Al parecer, no
existe un efecto de la dilucin sobre la determinacin de la acidez libre.
29
Madurez=1,0
Madurez=1,0
Madurez=-1,0
Madurez=-1,0
Acidez libre
Madurez=1,0
1
Madurez=-1,0
0
-1,0
1,0
Metodo de extraccin
+
-
10
15
20
Efecto estandarizado
25
30
Pertenece el primer lugar al efecto ocasionado por la parte de la fruta, que para este caso
correspondi a los residuos obtenidos del fruto (corteza y semillas), de los cuales se extrajeron los
mejores resultados. El efecto de este factor tuvo una amplia diferencia respecto a los dems; y por
tanto estableci a la corteza como mejor sustrato para la obtencin de pectinas, debido a que estos
compuestos se localizan mayoritariamente en estas zonas para otorgar firmeza a los frutos (ver
figura 12). Estos resultados van de la mano con los encontrados en otras investigaciones [47] [49]
[60], donde las mejores caractersticas se obtuvieron de sustratos como las corteza y los residuos a
los que usualmente no se les otorga ningn uso, pero que sin embargo poseen un gran potencial
para la obtencin de estos compuestos.
30
Consecutivamente se encuentra al mtodo cido, por ser el que mejores valores ofrece para esta
variable. Este mtodo ha sido utilizado en otras investigaciones [21] [47] [51], donde se han obtenido
muy buenos resultados debido a su fuerte accin hidrolizante, la cual permite la despolimerizacin
de los compuestos pcticos presentes en los sustratos susceptibles de extraccin.
El efecto siguiente lo compone la interaccin entre el mtodo de extraccin y la parte de la fruta.
Existe una marcada diferencia entre los resultados obtenidos por el mtodo cido, logrando los
mejores valores con el uso de los residuos (corteza y semillas). Para el caso del uso de la pulpa
como sustrato, no se observaron diferencias significativas entre los mtodos de extraccin utilizados
(ver figura 13). Estos resultados coincidieron con los reportados en trabajos similares [47] [49] [51],
donde se presenta una mayor metoxilacin de los grupos carboxilo presentes en los residuos,
mediante el uso del mtodo cido.
Figura 13. Interaccin BE para contenido de metoxilo
5
Contenido de metoxilo
Parte de la fruta=1,0
4
3
Parte de la fruta=1,0
2
Parte de la fruta=-1,0
Parte de la fruta=-1,0
0
-1,0
1,0
Metodo de extraccin
En lo que respecta al estado de madurez, el mejor sustrato correspondi al fruto maduro. Teniendo
en cuenta los procesos de maduracin que se desarrollan sobre los compuestos presentes en la
cocona, entre ellos las pectinas, se puede decir que stos favorecen la formacin de grupos ster
metlicos al interior de las cadenas del cido poligalacturnico. Estos resultados concuerdan con lo
observado en pasifloraceas como el maracuy [49].
En cuanto a la dosis de reactivo; se consider que los mayores valores se obtienen a un pH de 2,2.
Se pudo establecer a este valor como el ptimo; sin embargo, la magnitud del efecto no permiti
determinar de manera contundente este factor. La misma situacin se present para el efecto del
ecotipo, por cuanto su influencia no fue representativa para la determinacin de esta variable de
respuesta.
Por ltimo se observ la falta de significancia del efecto de la dilucin sobre esta variable, por lo cual
para su definicin pudieron considerarse otros criterios.
31
+
-
8
Efecto estandarizado
12
16
El primer efecto lo representan los residuos obtenidos del fruto (corteza y semillas). Estos resultados
son comparables con lo observado en otras investigaciones [21] [52] [58] [47] [49] [60], donde los
residuos obtuvieron mejores valores, en comparacin con los valores encontrados para las pulpas.
El segundo efecto lo constituy el estado de madurez, que para este caso correspondi al fruto
maduro. Esta evidencia confirma el hecho de que los procesos de maduracin favorecen la
disponibilidad de grupos carboxilos esterificados en una mayor proporcin. Debido a que la
solubilidad de los compuestos pectnicos se encuentra ntimamente ligada a la longitud de sus
cadenas, estos incrementan su disponibilidad a medida que agentes enzimticos como la
protopectinasa, ocasionan su disolucin. Estos resultados coincidieron con lo observado en
pasiflorceas como el maracuy [49].
El tercer efecto lo conforma la interaccin entre el mtodo de extraccin y el estado de madurez. El
uso del mtodo con calgn present marcadas diferencias de acuerdo al estado de madurez que se
evalu; obtenindose con ste los mejores valores en el fruto maduro. En cuanto al mtodo cido,
no se presentaron diferencias entre los estados de madurez evaluados y la diferencia de ste
mtodo con el otro no fue notable (ver figura 15).
El cuarto efecto lo estableci el mtodo de extraccin cido, el cual no difiere en gran medida con los
valores obtenidos en el mtodo con calgn, siempre que se utiliz un sustrato procedente del fruto
maduro (ver figura 15).
32
Grado de esterificacin
80
Madurez=1,0
60
Madurez=1,0
Madurez=1,0
Madurez=-1,0
Madurez=-1,0
40
20
Madurez=-1,0
0
-1,0
1,0
Metodo de extraccin
El quinto efecto lo compone la interaccin entre la parte de la fruta y el ecotipo. Los mejores
resultados se presentaron con los residuos obtenidos del fruto (corteza y semillas), sin que los
ecotipos evaluados a este nivel, hayan tenido un impacto significativo. Estos valores concurren con
lo encontrado en otras investigaciones [47] [49] [60], en las cuales se obtuvieron mejores
propiedades utilizando estos sustratos. Adicionalmente se observa que cuando se utiliz la pulpa, los
ecotipos presentaron una diferencia marcada entre sus valores, obtenindose mejores resultados
con el nivel inferior correspondiente al ecotipo 1 (ver figura 16).
Figura 16. Interaccin EF para grado de esterificacin
Grado de esterificacin
68
Ecotipo=1,0
Ecotipo=-1,0
58
48
Ecotipo=-1,0
38
28
18
Ecotipo=1,0
-1,0
1,0
Parte de la fruta
En cuanto al efecto del ecotipo, este establece al ecotipo 1 como el mejor; sin embargo, no se han
establecido hasta el momento diferencias significativas entre los dos ecotipos evaluados. Por otra
parte la dilucin ubica su nivel ptimo en 1:1, lo cual coincide con lo observado en la evaluacin del
peso equivalente, dejando entre ver la correlacin que guardaron estas dos variables. Por ltimo se
encuentra que la mejor dosis de reactivo pudo corresponder a un pH de 2.2 o a un porcentaje de
calgn de 0.5%. No se cont con la suficiente evidencia para decidir cul de estos dos valores es
mejor para la determinacin de esta variable.
33
Ecotipo: Las variables en los que tuvo un efecto significativo fueron el grado de esterificacin, la
acidez libre y el contenido de metoxilo. En las dems variables no se presentaron diferencias
significativas. En consecuencia, ninguno de los dos ecotipos posee una diferencia marcada respecto
a las caractersticas fisicoqumicas evaluadas, que permitieran decidir cul de ellos es mejor.
4.2 BSQUEDA DE PRIMER ORDEN
Las variables de respuesta evaluadas en este modelo fueron rendimiento, peso equivalente, acidez
libre, contenido de metoxilo y grado de esterificacin.
En la Tabla 5 se definen los niveles de los factores experimentales que se
codificndolos para su manejo con el programa estadstico.
controlaron,
El efecto de los tiempos de extraccin no fue significativo sobre el rendimiento, como se muestra en
la tabla 6. Sin embargo se pudo identificar unas leves diferencias entre ellos, donde los mejores
valores se presentaron con el tratamiento de 75 min, seguido de los tratamientos de 60 y 45 min,
35
respectivamente. Los tratamientos de 30 y 90 min obtuvieron los menores valores para esta variable
(ver figura 17). Teniendo en cuenta lo anterior se identificaron los puntos ptimos, respecto al pH en
1,7 y respecto al tiempo de extraccin en el rango comprendido entre 45 y 75 min, valores que
concuerdan con los encontrados en otras investigaciones [47] [57] [60].
Figura 17. Efectos del pH y el tiempo de extraccin sobre el rendimiento
Tiempo de
Extraccin
Tiempo de
Extraccin
36
Tiempo de
Extraccin
37
Tiempo de
Extraccin
Tiempo de
Extraccin
El tiempo de extraccin slo fue importante en las variables con los menores valores de R2, por lo
que este factor tambin fue contemplado en la bsqueda de segundo orden.
4.3 BSQUEDA DE SEGUNDO ORDEN
Las variables de respuesta evaluadas en este modelo fueron rendimiento, peso equivalente, acidez
libre, contenido de metoxilo y grado de esterificacin.
A continuacin se definieron los niveles de los factores experimentales a controlar.
Tabla 7. Niveles de los factores experimentales de segundo orden
Nombre
A:pH extraccin
B:Tiempo de extraccin (min)
Nivel Nivel
inferior superior
1.2
45
Puntos axiales
Inferior
Superior
Puntos al
centro
1,7
60
4.3.1 Rendimiento
Considerando el nivel del R2 descrito en la tabla 8 para esta variable, se puede aseverar que el
principal efecto lo estableci el pH de extraccin, el cual alcanz un punto mximo en el rango
comprendido entre los valores de 1,5 y 2,0, donde la curvatura se acenta. Por debajo de este
rango, se presentaron descensos en los valores del rendimiento (ver figura 22). Estos descensos
pudieron deberse al hecho de que a medida que el pH de extraccin se incrementa, el medio se
torna dbil y no alcanza a provocar la liberacin de las pectinas, o bien porque el medio es muy
agresivo, lo cual genera degradacin de las pectinas presentes en el sustrato. Este suceso confirma
la alta capacidad hidrolizante del reactivo utilizado. Comportamientos similares fueron observados en
investigaciones sobre pasiflorceas como el maracuy [47] [23].
Tabla 8. Anlisis de varianza para resultados de segundo orden
Rendimiento Peso equivalente Acidez libre Contenido metoxilo Grado esterificacin
Fuente Cuadrado Medio Cuadrado Medio Cuadrado Medio Cuadrado Medio Cuadrado Medio
A:pH
0,0080**
1,004E7**
151,10**
0,3754**
2668,7**
ns
ns
ns
B:Tiempo
0,3615*
0,0005
7506,1
0,0072
0,7463ns
AA
0,0476**
1,079E6**
1,7773**
0,0456ns
0,5740ns
AB
0,0065**
155658,1**
1,7787**
0,0660*
17,641**
BB
0,3649*
0,3474**
0,0003ns
6266,34ns
0,0048ns
2
R
99,72%
96,04%
97,87%
99,28%
96,51%
39
Rendimiento (%BS)
10,4
9,4
8,4
7,4
6,4
5,4
4,4
90
75
60
45 Tiempo (min)
1,5
2
2,5
pH extraccin
30
Tambin se determin que sobre el rango ptimo del pH; el tiempo de extraccin no ejerci un efecto
significativo sobre la variable de respuesta (ver figura 22). Sin embargo, los valores del rendimiento
se redujeron si el tiempo de extraccin fue inferior a 60 minutos, lo cual pudo deberse a que se
requiere un mnimo de tiempo durante la extraccin, para que se provoque la liberacin de las
pectinas presentes en el sustrato.
4.3.2 Peso equivalente
El valor del R2 para esta variable fue del 97.87 %. El principal efecto sobre el peso equivalente lo
estableci el pH de extraccin (ver tabla 8), por cuanto a medida que se increment el valor del pH,
el valor del peso equivalente tambin se elev. Adicionalmente se observ que el efecto del tiempo
de extraccin no fue significativo para esta variable (ver figura 23). El origen de estos resultados
pudo deberse a que las soluciones altamente acidificadas, fragmentaron las cadenas de los cidos
poligalacturnicos, haciendo descender su peso molecular y por ende, el peso equivalente [21].
(X 1000,0)
4
3
2
1
0
90
75
60
Tiempo (min)
45
1,5
2
pH extraccin
2,5
30
40
12
10
8
6
90
4
2
0
75
1
1,5
60
45Tiempo (min)
2
2,5
30
pH extraccin
41
5,9
5,4
4,9
4,4
3,9
1
1,5
2,5
90
75
60
45
Tiempo (min)
30
pH extraccin
96
86
76
66
56
46
90
75
60
Tiempo (min)
45
1
1,5
2
pH extraccin
2,5
30
El tiempo de extraccin ejerce un efecto poco significativo sobre la variable de respuesta evaluada.
42
Deseabilidad
0,754631
0,537167
0,561426
0,670048
0,642329
Deseabilidad
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
90
75
1
1,5
45
2
pH extraccin
2,5
60
Tiempo
30
sea por su efecto lineal, cuadrtico o de interaccin. El nivel en que se utilice este factor determina si
se alcanzan las condiciones necesarias para extraer las pectinas presentes en el sustrato si por el
contrario estas resultan ser muy agresivas para los compuestos de inters, provocando el deterioro o
degradacin de los mismos. Es por ello que solo es factible la extraccin de pectinas mediante el
uso de parmetros precisos que optimicen las caractersticas evaluadas. De acuerdo a los valores
obtenidos, ejerci una influencia negativa en las variables de rendimiento, acidez libre y contenido de
metoxilo; por cuanto al descender su valor, se presentan incrementos significativos en estas
variables. Para el caso de las variables de peso equivalente y grado de esterificacin, su influencia
fue positiva por cuanto al considerarse valores superiores de pH, estas variables ascienden en su
rango.
Tiempo de extraccin: Este factor desempeo sus influencias principalmente en las interacciones
con el pH de extraccin, puesto que sus efectos lineales y cuadrticos, no ejercieron un papel
determinante en ninguna de las variables de respuesta consideradas, a excepcin del efecto
cuadrtico que acto sobre el contenido de metoxilo; razn por la cual se fijo su lmite inferior en 60
minutos.
4.4 RESULTADOS EN PLANTA PILOTO
Con el fin de replicar en planta piloto los mejores mtodos y variables de proceso seleccionados
durante la fase experimental, fue necesario el ajuste del procedimiento a los equipos y materiales de
que se tenan al momento de la realizacin de esta investigacin. A continuacin se describen cada
una de las etapas del proceso para la extraccin de pectina a nivel industrial.
4.4.1 Recepcin de la materia prima
No habiendo encontrado diferencias significativas en el rendimiento de extraccin a partir de los
ecotipos de cocona, se decidi utilizar los residuos del ecotipo 2 por ser el que ms oferta tuvo al
momento de realizar los ensayos. El peso inicial del material fue de 48 Kg, los cuales fueron el
resultado del procesamiento de 160 Kg. de fruto. Los rendimientos de pulpa, considerando estos
valores, fueron del 70% y el porcentaje de residuos, el restante 30%.
4.4.2 Escaldado
El residuo se llev a una marmita abierta con agitacin y se someti a calentamiento a una
temperatura de 70 C, mantenindolo as por un periodo de 10 min. No se utiliz ningn solvente
debido a que la humedad del material fue suficiente para poderlo realizar. El peso total de los
residuos despus del tratamiento trmico fue de 45 Kg, generndose una prdida de 3 Kg.
44
Una vez empacado, el material se almacen en refrigeracin de 5 C. Esta etapa del proceso al igual
que la inactivacin de enzimas, pueden omitirse al momento de replicar el procedimiento en campo.
Figura 29. Empacado al vacio
La pectina elaborada en el primer ensayo, present ciertos defectos en sus caractersticas, razn por
la cual se decidi ajustar el procedimiento de extraccin en el nivel de pH, por haber sido este el
factor de mayor influencia en la variabilidad de los diseos de primero y segundo orden.
En el segundo ensayo se elevo el pH de extraccin hasta 2.2, por considerar que el pH evaluado
poda estar ocasionando la degradacin de los compuestos presentes en el material de estudio y por
ende en sus caractersticas como pectina. Los dems factores de extraccin se mantuvieron
constantes y se sigui el protocolo hasta caracterizar las pectinas obtenidas.
Los resultados en el segundo ensayo tampoco dejaron obtener una buena calidad de pectina y por
tanto se decidi correr un tercer ensayo, modificando ahora la proporcin de dilucin utilizada. Se
modific este parmetro debido a que el principal efecto del escalamiento del proceso, se observ
en la evaporacin del lquido diluyente, lo cual altera la proporcin de dilucin del proceso. Este
efecto no se present en los diseos experimentales por cuanto el montaje de extraccin conto con
un sistema de reflujo de condensados, manteniendo as inalteradas las variables de proceso.
En el tercer ensayo se elev la proporcin de dilucin hasta un nivel de 1:3 que es un valor
encontrado en la literatura [21], con el objetivo de compensar las prdidas generadas durante la
evaporacin, manteniendo contantes los dems valores utilizados en el ltimo ensayo. Como
resultado de esta modificacin, se pudieron replicar los valores obtenidos en la fase experimental y
adems, obtener buenas propiedades gelificantes, similares a las pectinas comerciales.
Contemplando estos resultados se estableci a este mtodo como el mejor para replicar en las
plantas de procesamiento de Cocona.
Posterior al proceso de extraccin de los ensayos, la solucin hidrolizada termin en altas
temperaturas, por lo cual se requiri de un enfriamiento previo a la filtracin.
46
4.4.4 Filtracin
Para obtener la pectina que se solubiliz en el agua acidulada, la solucin hidrolizada se hizo pasar
en primera instancia por unos coladores para retener los residuos de mayor tamao, como semillas y
corteza y luego por un filtro de tela, para evitar el paso de pulpas que no se desean en la solucin
filtrada. Los residuos de gran tamao pueden ser utilizados para la elaboracin de compostaje,
mientras que la masa de pulpa cida se separ y almacen refrigerada para su posterior utilizacin
en la elaboracin de bocadillo.
Figura 32. Filtracin del hidrolizado
4.4.5 Precipitacin
Los lquidos obtenidos del proceso anterior, se dejaron enfriar para luego adicionarles etanol
industrial (96), con el fin de esterificar los grupos carboxilo presentes. La adicin se realiz muy
lentamente para evitar la precipitacin de compuestos indeseados y se dej en reposo durante una
hora con el fin de que la pectina extrada coagule. A diferencia de los procesos realizados en
laboratorio, se requiri de la mitad del volumen de alcohol utilizado en ellos, para lograr la
47
precipitacin completa de los extractos, lo cual es un factor positivo por cuanto este insumo incide
directamente sobre los costos de extraccin de la pectina.
Figura 33. Precipitacin de la pectina
48
4.4.7 Secado
La masa de pectina drenada y recuperada en los procesos anteriores se extendi sobre una bandeja
dispuesta con papel celofn. Luego se introdujo la bandeja en un deshidratador de aire forzado,
donde se mantuvo por un periodo de 18 horas a una temperatura aproximada de 40 5 C. La
pectina debe formar una capa delgada para disminuir el tiempo de deshidratado. Adems, fue
necesario darle vuelta a la pelcula, pasadas 12 horas despus de iniciado el proceso.
Figura 35. Secado de la pectina
4.4.8 Molienda
Despus de la deshidratacin, la pectina adquiri una rigidez que permiti fracturarla en partes y de
esa forma se la pudo introducir en un molino elctrico de aspas, diseado originalmente para moler
caf o productos secos. Se procedi a moler por periodos cortos para evitar que el molino se
sobrecalentara, hasta cuando las partculas de pectina alcanzaron un tamao adecuado para
tamizarlo en una malla de 80 m. El procedimiento se realiz con el fin de favorecer la solubilidad de
la pectina en sus diferentes aplicaciones.
Figura 36. Molienda de la pectina
49
4.4.9 Empaque
Finalmente la pectina se empac en bolsas de polietileno, se rotul y se almacen.
4.4.10 Caracterizacin de las pectinas obtenidas en los ensayos
Como se observa en la Tabla 11, las caractersticas de las pectinas correspondientes al rendimiento,
peso equivalente, acidez libre, contenido de metoxilo y grado de esterificacin se encuentran entre
los rangos encontrados durante la fase experimental. Sin embargo, slo la muestra de pectina
obtenida en el ensayo 3, present buenas propiedades de gelificacin.
Tabla 11. Caractersticas de las pectinas obtenidas en planta piloto
Caractersticas
Ensayo 1
Rendimiento (% bs)
9.330.28
Peso equivalente
1643.1749.3
Acidez libre
5.620.17
Contenido de metoxilo (%)
5.810.15
Grado de esterificacin (%)
65.981.98
Contenido de Humedad (%)
10.920.33
Porcentaje de cada (%)
N.G
Tiempo de asentamiento (min) N.G
SAG
N.G
Brix jalea
65.51.97
pH de jalea
3.110.09
() Desviacin estndar, (N.G) No gelifico.
Ensayo 2
8.960.27
1824.4555.93
5.030.15
5.630.16
67.522.03
10.850.35
N.G.
N.G
N.G
65.01.95
3.180.1
Ensayo 3
9.190.25
1786.5453.6
4.910.14
5.980.18
72.842.25
10.270.31
23.080.69
242.5
61.341.84
64.51.94
3.160.08
Los resultados observados en la Tabla 11, muestran que el ensayo 1 tuvo el mejor rendimiento en
comparacin con los otros dos. Considerando lo observado en laboratorio, esto se debi a la
utilizacin de un pH menor, lo cual conlleva a unas condiciones de extraccin ms agresivas sobre el
material. Se estableci un rendimiento aproximado del 10% en base seca. Comparando los datos
con la literatura se encuentra que stos son inferiores a los encontrados con maracuy [23], guayaba
[62], mango [60], pltano [51] y manzana [29], pero es superior a los encontrados en remolacha [58].
En cuanto al peso equivalente se observa que las condiciones del ensayo 2 favorecieron el peso
equivalente en las muestras, en comparacin con los otros resultados, lo cual concuerda con los
resultados de laboratorio que arrojaron valores superiores cuando se trabaj con las menores
diluciones (1:1) y con los mayores valores de pH (2.2), como son las condiciones que aplican para
este caso. Cuando se compararon estos valores con la literatura se encontr que son superiores a
los encontrados con maracuy [47] y manzana [29], pero inferiores a los encontrados con mango
[21].
Si se observan los valores de acidez libre de la Tabla 11, se puede deducir que las condiciones del
ensayo 1 favorecieron el incremento en esta caracterstica, lo cual es razonable por lo observado
durante la fase experimental, ya que este ensayo utilizo un pH de extraccin menor y por tanto el
50
51
En contraste, las curvas generadas para las otras pectinas de cocona y que son presentadas en la
Figura 38, tuvieron comportamientos errticos durante su evaluacin, efecto que pudo ser causado
por la presencia de otros biopolmeros, que fueron extrados junto a la pectina. Fue por esta razn
que se efecto un anlisis comparativo entre la pectina del ensayo 3 y un biopolmero presente en la
mayora de tejidos vegetales como lo es la celulosa.
Figura 38. Termogravimetra comparativa con pectinas de cocona
Los resultados presentados en la Figura 39, muestran que los dos compuestos desarrollan
comportamientos disimiles durante su evaluacin, y por tanto, pareciera no existir una contaminacin
representativa de este tipo de polmero sobre la pectina obtenida.
Figura 39. Termogravimetra comparativa con celulosa
52
Inactivacin de
enzimas
Tiempo: 20 min
Empacado al
vaco en Bolsas
de 1 Kg.
10 Kg. de
residuos
30 litros
30 agua
litros
de
de
agua
destilada
10 Kg. de
residuos
Almacenamiento
refrigerado a
5 C
10 Kg. de
residuos
120 ml de
HCl (R.A)
Etanol
al 50%
Deshidratado
durante 18
horas a 40 5
Filtracin y
lavados hasta
final de cloruros
5.6 litros de
etanol de 96
Precipitacin
11.2 Kg. de
Solucin de
pectina
Etanol para
recuperar
Pectina seca
85.06 g.
Molienda
Pectina
molida
84.35 g.
Tamizar
hasta
malla 80
Pectina
pulverizada
82.67 g.
Empacado
Producto
final
Hidrlisis cida
pH: 2.2
Tiempo 65 min
Dilucin 1:3
Masa
hidrolizada
21.3 Kg.
3.2 Kg. de
Residuos
Filtracin
6.5 Kg.
de Pulpa
Elaboracin
de Bocadillo
53
54
6,5 Kg de
pulpa de mora
pH = 2,8
8 Bx
6.5 Kg de pulpa
de cocona
pH = 2,2
4 Bx
7,23 Kg de
azcar
13 Kg de pulpa
mezclada al
50%
pH = 2,7
Calentamiento
de la pulpa
254 ml de
NaOH (0.1 N)
Cortado y
empacado
Enfriado
Bocadillo
75 Bx
pH 3,2
Moldeado
Masa con 75 Bx
Concentracin
de la masa
hasta alcanzar
38 Bx
7,23 Kg de azcar
65 g de pectina
rpida
Masa con
38 Bx
Concentracin
hasta alcanzar
75 Bx
55
56
CONCLUSIONES
58
RECOMENDACIONES
60
1
Me disgusta
mucho
1
2
Me disgusta
poco
2
3
Ni me gusta ni me
disgusta
3
4
Me gusta
poco
4
5
Me gusta
mucho
5
Comentarios:________________________________________________________________
Color:
RG
Muestra
PG
1
Me disgusta
mucho
1
2
Me disgusta
poco
2
3
Ni me gusta ni me
disgusta
3
4
Me gusta
poco
4
5
Me gusta
mucho
5
Comentarios:________________________________________________________________
Textura:
RG
Muestra
PG
1
Me disgusta
mucho
1
2
Me disgusta
poco
2
3
Ni me gusta ni me
disgusta
3
4
Me gusta
poco
4
5
Me gusta
mucho
5
Comentarios:________________________________________________________________
Sabor:
RG
Muestra
PG
1
Me disgusta
mucho
1
2
Me disgusta
poco
2
3
Ni me gusta ni me
disgusta
3
4
Me gusta
poco
4
5
Me gusta
mucho
5
Comentarios:________________________________________________________________
62
Aceptacin general:
RG
1
Me disgusta
Muestra
mucho
PG
1
2
Me disgusta
poco
2
3
Ni me gusta ni me
disgusta
3
4
Me gusta
poco
4
5
Me gusta
mucho
5
Comentarios:________________________________________________________________
63
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62.
63.
64.
65.
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67.
68.
69.
70.
71.
72.
73.
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