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MANTENIMIENTO Y CALIBRACIN DE MICROPIPETAS

Castellanos Laura; Hernndez Deissy; Jaimes Jessica; Torres Erika


Universidad de pamplona. Facultad de Ciencias Bsicas. Departamento de
Microbiologa.
Pamplona, Norte de Santander. Colombia, 2015.
Tabla 1. Resultados obtenidos en la calibracin de micropipetas modelo P1000,
P100 y P10.
DATOS
Modelo de
pipeta
Rango
Marca
Temperatura
Valor Z
VOLUMEN

Glicerol
GRUPO 1
P1000

Agua
GRUPO 2
P100

100-1000l
Pipet lite
180C
0,7936
300 l
1000 l

60-100l
Pipet lite
190C
1,00264
100
60 l
l
59,9
99,2

X1

343,5

1192

X2

379,4

1088,1

59,7

X3

363,8

869,2

X4

362,8

X5
PROMEDIO
DESVIIACION
ESTANDAR
VOLUMEN
MEDIO
COEFICIENTE
DE VARIACION
(%)
COEFICIENTE
DE
VARIACION(N)
EXACTITUD (%)
EXACTITUD(N)

GRUPO 3
P10
5-10l
Boeco - Germany
180C
1,00245
5 l
10 l
4,8

9,9

99,3

4,9

10,3

59,4

98,9

4,1

9,3

1269,4

58,5

100

9,3

368,6

1224,4

58,9

99,2

4,6

9,8

363,62

1128,62

59,28

99,3
2

4,68

9,72

10,34

126,7

0,58

0,41

0,36

0,43

288,57

895,67

59,44

99,5
8

4,69

9,74

3,58

14,15

0,97

0,41

7,68

4,41

0,3

1,5

0,8

-0,42
0,8

-6,2
1,5

-2,6
1,0

0,3
-3,81
2,67

-10,43
0,8

-0,94
1,33

DISCUSIN DE RESULTADOS
El uso rutinario de micropipetas en los ensayos de laboratorio hace
importante el reconocimiento de las condiciones reales de las mismas al
momento de trabajar, debido a esto, la calibracin del implemento
volumtrico se convierte en una prctica importante para la obtencin de
resultados exactos y precisos en el laboratorio, garantizando as su

calidad. Las pruebas gravimtricas son el mtodo recomendado para la


comprobacin del rendimiento de las micropipetas conforme a la norma
ISO 8655 que especifica el coeficiente de exactitud (%E) y coeficiente de
variacin (%CV) que estas deben tener (Mettler Toledo, 2011).
Las micropipetas se fundamentan en la precisin y exactitud que aporta
en la medicin de volmenes pequeos. Por eso es necesario verificar
estos dos parmetros pues su uso frecuente, ya sea por desgaste o mal
uso, hace que pierda su calibracin, arrojando mediciones errneas. En la
calibracin se compara el volumen real que dosifica la micropipeta contra
el estndar, si la diferencia entre volmenes es pequea se puede decir
que esta calibrada pero si es muy grande entonces no lo est (BPL, 2009).
Por medio del mtodo gravimtrico se realiz el diagnstico del estado
actual de calibracin de las micropipetas marca Pipet lite y Boeco-Germany, modelos P1000, P100 y P10 utilizando diferentes rangos de
volmenes (ver tabla 1).
En general, es posible observar diferencias entre los volmenes
experimentales y los nominales de las micropipetas utilizadas, lo que pudo
darse por la necesidad de transferir su contenido a un tubo ependorf para
poder calcular su masa, y es que siempre que se transfiera materia de un
recipiente a otro se pierden trazas de la misma que quedan adheridas a
las paredes de los recipientes. Si a esto le sumamos el hecho de que al
momento de purgar la micropipeta, la falta de experiencia de sus
operarios supone la conservacin de algunas gotas de sustancia en las
puntas, no es de extraar la variacin observada en dichas mediciones.
Cabe resaltar que las diferencias entre los volmenes experimentales y
nominales medidos, son mucho ms notorias en los datos
correspondientes a la medicin de la masa de glicerol, esto puede
explicarse debido a que la densidad y viscosidad del lquido es mayor que
la del agua, por ende es ms fcil que queden residuos en las puntas
durante la transferencia al tubo ependorf.
Para analizar los datos de exactitud y precisin, se hace necesario tener
claro estos dos conceptos. La exactitud hace referencia a cuan cercanos se
encuentran los datos obtenidos del valor real y la precisin por su parte es
definida como la dispersin del conjunto de valores que se obtiene a partir
de las mediciones repetidas de una magnitud, se ve reflejada en el
Coeficiente de variacin (Contreras, 2015). As pues, podemos observar
que en la micropipeta marca pipet lite, modelo P1000 con la cual se
tomaron volmenes de 1000 l y 300 l, los valores en porcentaje de
exactitud obtenidos son mayores que los valores de tolerancia
(estipulados segn el fabricante) al igual que su coeficiente de variacin,
ya que los volmenes tomados de glicerol exceden el volumen nominal, se
consideran defectos de la alcuota por ello los valores son negativos. Estos
resultados indican que los valores de volumen estn muy dispersos entre
s y aunque no son tan lejanos del volumen nominal, la micropipeta debe

calibrarse. Sin embargo hay que tener en cuenta las caractersticas del
lquido utilizado (glicerol) y el manejo de la micropipeta por parte del
manipulador ya que el volumen de lquido tomado en una punta depende
del ngulo con el que se sujete la pipeta y la profundidad a la que se
sumerja al tomar el lquido, por esto cada persona consigue una precisin
y exactitud algo diferentes al utilizar una misma micropipeta y en ensayos
diferentes, al no preceder de la misma forma en cada medicin de
volumen (Galicia, 2006).
En cuanto a la pipeta modelo P100 de la misma marca, los volmenes
nominales trabajados fueron 100 y 60 l. para cada uno de estos
volmenes se obtuvieron porcentajes de exactitud menores a los valores
de tolerancia, siendo negativos debido a las variaciones de las alcuotas
tomadas que fueron mnimas. El coeficiente de variacin obtenido fue
mayor que el valor nominal pero ya que todos los valores estn muy
juntos entre si y que estn cerca al valor nominal, se considera que la
micropipeta tiene buena exactitud y precisin ya que tiene una mnima
desviacin sistemtica y una estrecha dispersin.
Para la pipeta modelo P10 y marca Boeco-Germany, los datos obtenidos tanto
de porcentaje de exactitud y coeficiente de variacin son mayores a los
valores de tolerancia para los dos volmenes nominales trabajados, 5 y 10
l, siendo este ltimo el que presenta mayor dispersin en los valores
obtenidos, lo que indica una mala reproducibilidad. Por lo anterior la pipeta
debe calibrarse, aunque teniendo en cuanta la dispersin de los valores se
consideran fallas en la manipulacin de esta. Los valores tambin son
negativos debido a la toma de la alcuota, esta distorsin en los
volmenes tomados puede deberse a la deformacin de las puntas que
generalmente son reutilizables y son sometidas a esterilizacin, por ello
hay que revisarlas, ya que son esenciales para la exactitud de las medidas
(Mettler Toledo, 2011). Tambin puede deberse a un problema con el pistn
de la micropipeta el cual al parecer no sube completamente para producir la
succin del lquido y permitir la entrada del volumen definido ( Harris, 2003).

Hay muchos factores que deben tomarse en cuenta a la hora de calibrar


micro volmenes, como las condiciones ambientales, las tcnicas de
pipeteo del operario que deben ser las correctas, los instrumentos con los
que se hacen las pruebas, tales como la balanza analtica, que deben estar
calibrados (Metrix, 2015). La precisin y exactitud que tenga una
micropipeta depender en gran parte de la forma en cmo la utiliza el
manipulador, por eso deben ser calibradas peridicamente y las personas
que las manipulen deben saber hacerlo. Adems ya que las micropipetas
tienen un intervalo de volumen que puede ser medido, su mal uso al
medir cantidades de volmenes diferentes tambin pueden afectar su
precisin y exactitud.

BIBLIOGRAFA
BPL. Mantenimiento y calibracin de micropipetas. Curso Buenas Prcticas
de Laboratorio. Colegio de Veterinarios de la Provincia de Buenos Aires.
Argentina, 2009.
Metrix, Laboratorios. Calibracin, Ajuste y Desempeo de Micropipetas.
[Pgina de internet]. Mexico. [Actualizacin Julio, 2015]. Disponible en
http://www.metrixlab.mx/
Calibracin de pipetas. [Pgina de internet]. Mettler Toledo, 2011.
Disponible en http://co.mt.com/
Jorge Contreras Pineda. El uso de las micropipetas. Biologa Celular y
Molecular Medica I. libros Digitales. 31- Julio 2015. Disponible en:
http://www.avbook.in/
Junta de Galicia. Grupo IV. Personal Laboral; Auxiliares de Laboratorio. 1a
ed. Editorial Mad, S.L. Espaa, 2006.
Harris C. Daniel. Anlisis Qumico Cuantitativo. 3a ed. Editorial Revert.
Espaa, 2003.

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