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INTRODUCCION
Microscopa de fluorescencia: Descubierto en 1908 por Khler y Siedentopf, y se basa
en que una sustancia natural en las clulas o un colorante fluorescente aplicado al corte
es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energa absorbida como rayos
luminosos.
Siendo escasas las molculas autofluorescentes, su aplicacin ms difundida es para
revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de antgenos o anticuerpos.
Tambin se puede inyectar molculas fluorescentes especficas en un animal o
directamente en clulas y usarlas como marcadores.
2. Espejo dicroico: Refleja la luz de ciertas longitudes de onda y de dejar pasar otras.
En este caso refleja luz de longitud de onda menos de 510 nm (por ello refleja la luz
incidente azul) y deja pasar la luz de longitud de onda superior a 510 nm, dejando pasar
la luz verde emitida por el fluorocromo.
3. Segundo filtro de barrera: Es el filtro que selecciona la luz de longitud de onda
fluorescente. En este caso deja pasar la luz de longitud de onda 520 a 560 nm.
Entre otros aspectos o fundamentos, importantes a considerar tenemos:
*El largo de onda de la fluorescencia (emisin) es generalmente ms largo que el largo
de onda de la luz excitadora
*Mientras ms larga sea la longitud de onda, ms baja es la energa de la luz. Por lo
tanto la energa de la fluorescencia es ms baja que la luz absorbida.
*La intensidad de la fluorescencia es generalmente mucho ms baja que la de la luz de
excitacin
*La fluorescencia se desvanece.
*Cada substancia posee un espectro de fluorescencia caracterstico.
APLICACIONES
1. Autofluorescencia: Detecta la fluorescencia emitida por molculas de la muestra
misma.
2.Fluorescencia inducida: Partes especficas de la muestra pueden ser observadas
selectivamente, mediante mtodos de tincin. Ej:substancias especficas como organelos
celulares, protenas, anticuerpos, DNA, RNA, etc.
3. Sobre objetos bastante ms pequeos que la limitacin del poder de resolucin,
siempre que su emisin de luz sea lo suficientemente intensa. Ej: molcula de DNA, un
virus.