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Calibracin de Micropipetas por el Mtodo Gravimtrico

Juan Carlos Sakihara


Interno TM en el INSN - UNMSM
Las micropipetas se emplean en qumica clnica, farmacia y biologa, entre otros campos en
los que se necesita dispensar pequeos volmenes, generalmente del orden de microlitros.
Dado que en muchas de estas operaciones una variacin de volumen muy pequea puede
ocasionar un error muy grande, es importante que el pipeteo sea confiable, para lo cual se
debe mantener calibradas las micropipetas.
Es importante sealar que no es lo mismo calibrar un pipeta que probar una pipeta, aunque
los mtodos se solapen un poco. Probar una pipeta es una operacin rutinaria en la que se
verifica que la pipeta est cumpliendo con su funcin, es decir verificar que el volumen
indicado en la pipeta sea el mismo que la pipeta este dispensando realmente; procedimiento
que debera ser realizado regularmente por el usuario. Calibrar (una pipeta), procedimiento
que puede ser realizado por el usuario o por un laboratorio especializado, es un
procedimiento en el cual se establece la relacin entre el volumen dispensado y el volumen
nominal del instrumento. De este modo, la calibracin se puede dividir en dos partes: una
parte de evaluacin y una parte de ajuste.
Dentro de la evaluacin del volumen dispensado, el mtodo ms sencillo es el gravimtrico,
que consiste en el pesado de una cantidad de lquido dispensada con la pipeta. Si se conoce
el peso del lquido dispensado y la densidad del mismo, se puede calcular el volumen
descargado y ajustar la pipeta de acuerdo a dicho volumen. Cabe resaltar que la eleccin del
procedimiento se hace dependiendo del volumen a evaluar, mientras ms pequeo el
volumen, ms exigente debe ser el mtodo.
El mtodo gravimtrico puede dividirse asimismo en cuatro mtodos. En el primer mtodo, el
mtodo normal, basado en la ISO 4787 y la ISO 8655, se emplea un tip para cargar y
descargar agua 5 veces con el objetivo de saturar la humedad relativa del aire en el interior
de la pipeta. Luego, con un tip nuevo, se dispensa el volumen a evaluar y se determina
mediante su peso (restando el peso del recipiente con el volumen dispensado y el recipiente
seco). El recipiente es limpiado y se repite el proceso diez veces. La media de las diez
pesadas es una medida del volumen dispensado por la pipeta.
El segundo mtodo, el mtodo de la evaporacin, se basa en la ISO 7655 y consta de un
proceso de humidificacin igual que el primer mtodo, seguido de un dispensado del volumen
a evaluar en un recipiente que contenga agua a una altura de 3 milmetros. Se realiza el
pesado antes y despus del dispensado y se vuelve a dispensar en el mismo recipiente (el
peso dispensado se calcula restando el peso despus de dispensar y el peso antes de
dispensar). El procedimiento se repite diez veces y se controla el tiempo que tarda todo el
procedimiento. Se deja el recipiente al ambiente durante el mismo tiempo que tard el
procedimiento y se controla la variacin del peso debido a la evaporacin; el valor del peso
perdido por evaporacin se divide entre diez y se aade al valor de las mediciones anteriores.

El tercer mtodo, el mtodo sin evaporacin, se basa tambin en la ISO 7655 pero no toma
en cuenta la evaporacin del agua, siendo igual al segundo mtodo, excepto por la medicin
de la prdida de agua por evaporacin al final.
El cuarto mtodo, el mtodo sin evaporacin y con aceite, tambin se basa en la ISO 8655 y
es similar al anterior. En este mtodo, el recipiente se llena con aceite hasta una altura de 5
milmetros, se dispensa el volumen a evaluar teniendo cuidado de que el agua dispensada
quede debajo del aceite y se pesa. El proceso se repite diez veces, pesando antes y despus
de cada dispensado. Como el aceite prcticamente no se evapora (debido a su alta presin
de vapor), la evaporacin del agua dispensada se desprecia y se realizan los clculos. Es
importante notar que toda el agua dispensada debe quedar debajo del aceite para evitar la
evaporacin, asimismo no se debe dispensar por las paredes.
En un estudio realizado en el 2007 se encontr que el mtodo ms confiable y con menor
incertidumbre era el mtodo sin evaporacin, adems de ser uno de los ms rpidos y no
requerir de ninguna correccin del volumen pesado.
Hay que tomar en cuenta que, debido a los pequeos volmenes que se pesan, es
importante contar con una balanza cuya sensibilidad sea apropiada, es decir, una balanza
analtica que a su vez debe ser apropiadamente controlada. Asimismo las condiciones
ambientales deben estar controladas: no deben haber corrientes de aire (pueden interferir en
la lectura de la balanza), la temperatura debe ser estable entre 15 y 30C (la densidad del
agua vara con la temperatura), la humedad relativa debe ser mayor al 50% (para disminuir la
evaporacin del agua), y la presin atmosfrica debe mantenerse a 101.32.5 kPa (la
presin atmosfrica tambin afecta la evaporacin del agua).
Finalmente, si en la evaluacin se encuentra que el volumen nominal no concuerda con el
volumen calculado a partir del peso, se ajusta la pipeta con un instrumento adecuado
proporcionado por el fabricante.
Bibliografa
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Sica, A; Constantino, P; Heijo, G; Fabretti, JA; Santo C. Evaluacin del Error debido a la
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