ESCUELA POLITECNICA DEL EJRCITO

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
INFORME DE LABORATORIO

Nombre: Luis Alberto Loyola

Materia: Microbiologa
Fecha: 12/04/2012

Practica N: 2

1. TEMA: Preparacin de frotis bacteriano y tincin simple

2. INTRODUCCIN
2.1.

JUSTIFICACIN:

Mediante la tincin simple de bacterias y el exmen de las mismas en el

microscopio sirve de pauta para observar algunos detalles de su morfologa,
disposicin y sus caractersticas de tincin a partir de un cultivo bacteriano,
adems ayuda al uso de tcnicas complementarias de cultivo o de estudio
bioqumico.
2.2. HIPTESIS:
La forma de las bacterias difiere de unas especies a otras pero resulta poco
variada.
2.3. OBJETIVOS:
2.3.1. GENERAL
Identificar la morfologa de las bacterias y su agrupacin mediante
tincin simple.
2.3.2. ESPECIFICOS
Realizar un frotis bacteriano a partir del cultivo respectivo.
Fijar las bacterias al portaobjetos por el mtodo del calor.
Efectuar la tincin simple de bacterias.
Observar e identificar las bacterias en el microscopio.
3. MARCO TEORICO:
Las bacterias son vegetales unicelulares pertenecientes a los procariotas que
se caracterizan por presentar pared celular, ribosomas del tipo 70s y carecer
de ncleo verdadero. En forma general todas las procariotas presentan en su
estructura pared celular, membrana citoplasmtica, citoplasma, material
nuclear y estructuras externas facultativas como: fimbrias o pili, flagelos y
capsula.
Las bacterias pueden diferenciarse en tres formas fundamentales: esfrica
(cocos), cilndrica recta (bacilos) y cilindra curvada (espirilos). Las bacterias al
dividirse, clulas hijas pueden quedarse unidas o muy prximas dando lugar a
agrupaciones para completar su estudio morfolgico.
La morfologa y agrupaciones tpicas de las bacterias se observan solo cuando
las clulas son jvenes. En los cultivos viejos o cuando las bacterias estn
sometidas a condiciones desfavorables surgen las llamadas formas de
involucin, los cocos se hinchan, los bacilos se curvan y las estructuras
internas desaparecen. (Garca, 1994)

4. MATERIALES Y MTODOS:
4.1. MATERIALES
Cultivo de bacterias, portaobjetos, asa bacteriolgica, mechero, agua
destilada, marcador indeleble, tinte (violeta cristal), mechero, microscopio,
aceite de inmersin, papel filtro.
4.2. MTODOS
Preparacin del frotis
Lave el portaobjeto con agua y jabn, squelo bien y lmpielo con etanol
al 70%.
Marque un extremo del portaobjeto con la que va a trabajar e identifique
con sus iniciales y la fecha.
Coloque una pequea gota de agua en el centro del portaobjeto.
Encienda el mechero, la llama debe ser azul y de tamao mediano.
Coja el asa como si fuera el lpiz colquela perpendicularmente en la
llama del mechero.
Despus de esterilizar el asa coja el tubo de cultivo bacteriano en la otra
mano y retire el tubo solamente quedndose con la tapa en el dedo
meique de la mano que sostiene el asa.
Flamee la boca del tubo por pocos segundos e inserte el asa estril en
el tubo de manera que no tope el vidrio.
Tome la muestra deslizando el asa sobre el crecimiento bacteriano con
cuidado para no daar el medio de cultivo.
Retire el asa cargada sin que tope las paredes del tubo y deposite la
muestra sobre la gota de agua en el portaobjeto.
Mzclela bien y extindela de manera que se forme una pelcula delgada
sobre la superficie.
Seque el frotis al aire tomando la placa con el pulgar y el ndice en un
extremo y moviendo la mano horizontalmente.
Cuando est totalmente seca, fije la preparacin pasando brevemente el
portaobjeto (con la muestra hacia arriba) 4 o 5 veces por la llama. Retire
la tincin
Tincin Simple

 Cubra el frotis con uno de los colorantes (violeta cristal) y espere un

minuto. Lave suavemente con agua de la llave
Seque con papel filtro presionando sobre el objeto y observe al
microscopio.
5. RESULTADOS::

Imagen 1.

Imagen 2.

En la imagen 1. Se observan cocos agrupados en racimos, estafilococos.

En la imagen 2. Se observan bacilos agrupados en cadenas, estreptobacilos.
6. DISCUSIN:
Las bacterias en cuanto a su forma pueden diferir de especie a especie
notablemente, sin embargo resulta
poco variada. (Garca, 1994)
Las tcnicas de coloracin son muy importantes para la identificacin de la
morfologa bacteriana, en la observacin de la imagen 1 se puede diferenciar
claramente colonias de bacterias de forma redonda (cocos), llegan a formar
racimos (estafilococos).
En la imagen 2 se observa formas muy diferentes en cuanto a la imagen 1 ya
que estos tienen una forma alargada (bacilos) agrupados en cadenas
(estreptobacilos). (Fuller, 2007)
Cabe mencionar que la morfologa de las bacterias y las agrupaciones que
forman se logran observar cuando las clulas son jvenes, y la observacin de
las muestras en la imagen 1 y 2 reflejan lo mencionado anteriormente ya que
de otro modo si fueran cultivos viejos estos presentan formas de involucin.
(Garca, 1994)
7. CONCLUSIONES:
La observacin de bacterias al microscopio se dificulta por la falta de
contraste, por ello es imprescindible teirlas con el uso de algn
colorante.
Las bacterias difieren en cuanto a especies pero su morfologa es poco
variada
Las bacterias presentan bsicamente tres formas distintas: cocos,
bacilos y espirilos.
8. RECOMENDACIONES
Tome las precauciones necesarias para la esterilizacin correcta de los
materiales a utilizar.
Seque bien la muestra en el portaobjeto al aire libre o cerca del
mechero.

 Al fijar la muestra bacteriana flamee tan solo de 4 a 5 veces ya que si lo

hace dems puede alterar la estructura de las bacterias.
9. BIBLIOGRAFA:
Murray, P., Rosenthal, K., Pfallaer, M. (2009). Microbiologa Mdica
(6a Ed.). Espaa. GEA Consultora Editorial.
Garca, P., M, Fernndez., Paredes, F. (1994). Microbiologa clnica
practica (2a Ed.). Cdiz. Servicio Publicaciones UCA
Fuller, J. (2007). Instrumentacin quirrgica. (4a Ed.). Espaa.
Editorial Mdica Panamericana S.A.
ANEXOS
Cuestionario
1. Nombre varias estructuras bacterianas que no puedan ser vistas
con tcnicas de tincin simple.
Pared celular, cidos nucleicos.
2. Enumere los pasos de la preparacin del frotis bacteriano que
evitan la contaminacin del cultivo, de la muestra y de la persona
que lo realiza
Coja el asa como si fuera el lpiz colquela perpendicularmente en la
llama del mechero.
Despus de esterilizar el asa coja el tubo de cultivo bacteriano en la otra
mano y retire el tubo solamente quedndose con la tapa en el dedo
meique de la mano que sostiene el asa.
Flamee la boca del tubo por pocos segundos e inserte el asa estril en
el tubo de manera que no tope el vidrio.
Tome la muestra deslizando el asa sobre el crecimiento bacteriano con
cuidado para no daar el medio de cultivo.
Retire el asa cargada sin que tope las paredes del tubo y deposite la
muestra sobre la gota de agua en el portaobjeto.
Coloque nuevamente el asa perpendicularmente en la llama para
esterilizarlo.
3. Qu pasara si no se fijan las bacterias al portaobjetos antes de
ser teidas?
En el caso de no fijar las bacterias al portaobjetos, al momento de ser teidas y
posteriormente al lavar con agua para retirar el colorante se perdera toda la
muestra por no estar fijada.
4. Explique los fundamentos de la tincin simple
La principal dificultad de observar las clulas bacterianas al microscopio es la
ausencia de contraste entre la clula y el medio que la rodea, por lo tanto el
mtodo ms simple para aumentar su contraste es el uso de colorantes es
decir, tincin simple.