CICLO DE LOS CIDOS TRICARBOXLICOS

CICLO DEL CIDO CTRICO

Piruvato Deshidrogenasa
La conexin entre la llamada fase anaerbica de
la gluclisis, en donde se metaboliza la glucosa
para convertirla en 2 molculas de cido
pirvico, con la fase aerbica de la gluclisis, que
llevar la degradacin de la glucosa hasta CO2 y
H2O en el Ciclo de Krebs, consiste en la
descarboxilacin oxidativa del piruvato a
Acetil-CoA.
Esta transformacin es catalizada por un
complejo multienzimtico llamado Piruvato
Deshidrogenasa.

Piruvato Deshidrogenasa
La conversin del piruvato a Acetil-CoA por la accin

de la Piruvato Deshidrogenasa es un punto crtico

del metabolismo, particularmente en el hgado,
puesto que disminuye la posibilidad de que el
piruvato se reconvierta en glucosa o en cido lctico.
La conversin a Acetil-CoA compromete al piruvato
a entrar al Ciclo de Krebs, donde puede ser utilizado
como sustrato para la fosforilacin oxidativa, o
puede ser convertido a citrato para ser exportado al
citosol y servir como sustrato para la biosntesis de
cidos grasos e isoprenoides.

Piruvato Deshidrogenasa
La descarboxilacin oxidativa del piruvato en los
organismos anaerbicos requiere la utilizacin
de un receptor de electrones diferente al NAD+,
el cual es frecuentemente una protena ferro
sulfurada.
La conversin es catalizada por una enzima
dependiente de tiamina (vitamina B1) que
tambien produce la acilacin de la Coenzima-A.
Los equivalentes reductores son eliminados por
la produccin de H2 por la actividad de una
hidrogenasa.

Piruvato
Piruvato deshidrogenasa

Acetil-CoA
Citrato
Citrato Sintetasa

Oxaloacetato

H 2O

PIRUVATO DESHIDROGENASA

FORMACIN DE ACETIL-COENZIMA A

PIRUVATO DESHIDROGENASA

UNA REACCIN MUY FCIL DE PONER EN EL PAPEL.

PERO MUY DIFCIL DE LLEVAR A CABO POR LA COMPLEJIDAD DEL SISTEMA
ENZIMTICO NECESARIO PARA QUE SE REALICE

PIRUVATO

Acetil-CoA

Es un complejo formado
por tres enzimas que
transforma el piruvato
resultante de la gluclisis,
en Acetil-CoA por medio
de una reaccin de
descarboxilacin oxidativa.
De esta manera enlaza la
Va de Embden-Meyerhof
con el Ciclo de Krebs.

Piruvato Deshidrogenasa
La Piruvato deshidrogenasa es un sistema complejo formado

por 60 unidades en los procariotas, 102 en los eucariotas,

organizadas en 3 unidades enzimticas funcionales

Este complejo multienzimtico est estructural y

funcionalmente relacionado con otros dos procesos de gran

importancia para el metabolismo celular la cetoglutrico
deshidrogenasa y la alfa-cetocido deshidrogenasa
responsable de la degradacin de algunos amino cidos.

El complejo est formado por las siguientes enzimas. Cada una

de las cuales requiere un conjunto de cofactores especficos:

1.
2.
3.

Piruvato deshidrogenasa {Tiamina Pirofosfato}

Dihidrolipoil Transacetilasa {Lipoil-CoA}
Dihidrolipoil Deshidrogenasa {FAD y NAD+}

Es el paso limitante de toda la reaccin de

conversin del pirvico en Acetil-CoA.
Requiere Tiamina (Vitamina B1) pirofosfato como
cofactor. Por esta razn la tiamina fue llamada en un
tiempo cocarboxilasa.
La enzima est formada por 24 subunidades en los
procariotas y por 30 subunidades en los eucariotas.
El mecanismo central de la actividad enzimtica es
un ataque nucleoflico sobre el carbono 2 (ceto) del
pirvico, con la produccin de un hemi-tioacetal que
libera el CO2
Al final de la reaccin se libera el CO2 resultante de
la descarboxilacin del piruvato y el derivado
acilado de la tiamina pirofosfato.

 Una

reaccin de transacilacin transfiere el

grupo acetil del derivado acetil de la
Tiamina pirofosfato y lo transfiere a la
Coenzima A.
Esto produce Acetil-CoA, que es liberada al
interior de la mitocondria para entrar en el
ciclo de Krebs y convierte la Lipoil-CoA en
la forma reducida del cido Lipoico.
La Dihidrolipoil Transacetilasa es la enzima
mas compleja del grupo y esta formada por
24 subunidades en los procariotas y por 60
subunidades en los eucariotas.

E3 Dihidrolipoil Deshidrogenasa
Para que la reaccin contine se requiere reformar la

Lipoil-CoA, para lo cual el cido Lipoico debe ser

oxidado nuevamente.
La forma reducida del cido Lipoico es oxidada
mediante un reaccin que requiere FAD como
cofactor, el cual ser convertido a FADH2.
Enseguida la forma reducida del FAD, FADH2, es
reoxidada por una reaccin ligada a NAD+,
producindose NADH.
La dihidrolipoil deshidrogenasa es la parte ms
sencilla del complejo enzimtico y est formada por
12 subunidades tanto en procariotas como en
eucariotas

Por anaplerosis.- La mayor parte del piruvato se oxida a

acetil-CoA, pero una cierta cantidad se convierte en
oxalacetato (proceso anaplertico), permitiendo que la
acetil-CoA se combine con este ltimo para que el ciclo
de Krebs funcione adecuadamente.
Por inhibicin competitiva.- Tanto la acetil-CoA como el
NADH son inhibidores competitivos; de esta manera,
cuando el aporte de acetil-CoA es suficiente a expensas
de los cidos grasos, la enzima es inhibida, evitando as
el desperdicio innecesario de piruvato derivado de la
glucosa.

REGULACIN 2
Por el proceso de fosforilacin defosforilacin.- Existen dos

formas interconvertibles de la piruvato deshidrogenasa:

una, fosforilada, o forma inactiva, la otra desfosforilada, es la
forma activa.
La intervonversin es catalizada por dos enzimas: la
piruvato deshidrogenasa cinasa, que requiere ATP, y la
piruvato deshidrogenasa fosfatasa.
Ambas enzimas forman parte del complejo, asociadas a la
dihidrolipoil transacetilasa.
La principal funcin reguladora es ejercida por la cinasa que
al fosforilar la piruvato deshidrogenasa la convierte en su
forma inactiva; esto ocurre cuando hay exceso de ATP en la
clula.
Cabe destacar el papel estimulador que ejercen sobre la
cinasa la acetil-CoA y el NADH, y el papel inhibidor del
piruvato y el ADP.

REGULACIN 3
Por actividad endcrina.- La actividad del

complejo piruvato deshidrogenasa tambin

es regulada por algunas hormonas.
De entre ellas cabe destacar la insulina que
incrementa la forma activa (desfosforilada)
en tejido adiposo;
Las catecolaminas como la adrenalina
pueden activar la piruvato deshidrogenasa en
el tejido cardiaco.

Piruvato deshidrogenasa
Localizacin

En las clulas eucariotas la descarboxilacin del

piruvato para producir Acetil-CoA, se realiza dentro de
las mitocondrias. Esto requiere que el piruvato sea
transportado a travs de la membrana mitocondrial
La difusin pasiva del piruvato al interior de la
mitocondria es imposible porque el piruvato lleva una
carga negativa.
En consecuencia se sabe que el transporte del
piruvato se hace por medio de una protena
transportadora y requiere el gasto de energa.

Piruvato deshidrogenasa
Localizacin

Una vez dentro de la mitocondria el piruvato es

rpidamente descarboxilado y convertido en AcetilCoA. Esta reaccin es irreversible y atrapa la AcetilCoA en el interior de la mitocondria.
La Acetil-CoA puede ser transportada fuera de la
matriz mitocondrial utilizando el llamado desvo
(Shuttle) del citrato
El CO2 es pequeo y apolar y difunde fcilmente
fuera de la mitocondria.
En los procariotas, que no tienen mitocondrias, esta
descarboxilacin se realiza en el citosol, o no se
realiza.

Para recordar la secuencia en el

Ciclo de Krebs, recordemos que
est formado por tres fases:
a) Componentes de 6 tomos
de carbono (en verde)
b) Componentes de 5 tomos
de carbono (en purpura)
c) Componentes de 4 tomos
de carbono (en azul)

1.

Citrato Sintetasa

2.

Aconitasa

3.

Isocitrato Deshidrogenasa

4.

-cetoglutarato Deshidrogenasa

5.

Succinil-CoA Sintetasa

6.

Succinato Deshidrogenasa

7.

Fumarasa

8.

Malico Deshidrogenasa

 Es una serie de reacciones enzimticas cuya actividad es de

importancia central para todas las clulas vivas que utilizan

oxgeno durante el proceso de respiracin celular.
Constituye una va Anfiblica, es decir: contribuye tanto al
catabolismo, como al anabolismo celular.
Culmina la utilizacin aerbica de la glucosa convirtindola
finalmente en CO2 y H2O, utilizando oxgeno como parte de la
respiracin celular.
Proporciona muchos precursores para producir algunas
molculas fundamentales para la clula, entre ellas el
cetoglutarato y el oxalacetato precursores de algunos
aminocidos.
El ciclo de Krebs ocurre en las mitocondrias de las clulas
eucariotas y en el citoplasma de las clulas procariotas.
Los componentes y reacciones del ciclo del cido ctrico fueron
establecidos por Albert Szent-Gyrgyi y Hans Krebs.

LOCALIZACIN
Los componentes del ciclo se encuentran en las
mitocondrias.
Sin embargo algunas enzimas y metabolitos
tambin se encuentran en el citosol
(extramitocondrial).
Dentro de las mitocondrias, las enzimas se
localizan en la membrana interna y en la matriz
mitocondrial, y prximas al sitio donde radican las
de la cadena respiratoria.
Esta proximidad facilita el adecuado
acoplamiento de ambos procesos.

El ciclo de Krebs
como va anablica

 En los organismos aerbicos, el ciclo de Krebs es el anillo de

conjuncin de las rutas metablicas responsables del

catabolismo y degradacin de los carbohidratos, las grasas
y las protenas convirtindolos finalmente en CO2 y H2O.
El Ciclo de Krebs, ligado al proceso de fosforilacin
oxidativa, constituye el proceso donde se produce la mayor
cantidad de energa que finalmente puede ocupar la clula
para el resto de sus funciones y metabolismo.
La acetil-CoA constituye el principal sustrato del ciclo.
Su inicio consiste en la condensacin de acetil-CoA con
oxalacetato, generndose cido ctrico. De aqu uno de los
nombres que ha recibido esta va enzimtica.

Glorieta Bioqumica"
Una va metablica es anfiblica cuando puede

funcionar tanto en sentido catablico como en

sentido anablico.
Desde este punto de vista nos parece muy adecuado
el considerar al ciclo de Krebs como una Glorieta
Bioqumica", ya que presenta diversos puntos de
entrada y de salida que facilitan el que el material
que llega, sea de fuentes hidrocarbonadas o de otras
fuentes, pueda abandonarlo para formar grasa,
sintetizar amino cidos o regenerar carbohidratos
(gluconeognesis) para su almacenamiento o
utilizacin en otras vas o en otros destinos.

CoA

Citrato Sintetasa
La reaccin inicial del Ciclo de Krebs, es la

condensacin de la acetil-CoA con oxalacetato

(ltimo producto del ciclo) para producir el primero
de los cidos tricarboxlicos que participan en el Ciclo
y por los cuales lleva uno de sus nombres, Ciclo de
los cidos tricarboxlicos (TCA).
Esta reaccin de condensacin es catalizada por la
enzima Citrato Sintetasa (tambin llamada enzima
condensante de Ochoa).
El citrato producido por la enzima, es capaz de
inhibir competitivamente la actividad de la enzima.
La reaccin supone la hidrlisis del enlace tioster de
la acetil-CoA. Esta reaccin es sumamente
exoergnica (G'=-31.4 kJ/mol), motivo por el
cual este paso es irreversible.

Condensacin de la Acetil-CoA con Oxalacetato

Se inicia el Ciclo de Krebs

Aconitasa
El citrato es convertido en isocitrato por medio de la

enzima aconitasa (aconitato hidratasa).

La reaccin tiene lugar en dos pasos:

deshidratacin hasta cis-aconitato (el cual permanece unido a la

enzima) y
rehidratacin hasta isocitrato

Las concentraciones (en condiciones estndar) de citrato

(91%), del intermediario cis-aconitato (3%) y de isocitrato

(6%), conducen la reaccin hacia la produccin de
isocitrato.
Adems, el consumo de isocitrato y la produccin continua
de citrato in vivo, por ley de accin de masas, hace que la
reaccin est desplazada hacia la conversin citratoisocitrato.
La aconitasa reacciona en forma asimtrica, actuando sobre
la parte del citrato que deriva del oxalacetato.

Isocitrato Deshidrogenasa
El isocitrato es oxidado por deshidrogenacin, en una

reaccin catalizada por la enzima isocitrato deshidrogenasa.

La enzima requiere NAD+ y Mg++.
La reaccin se lleva a cabo en dos pasos:
1.
2.

Deshidrogenacin, en la que se forma oxalosuccinato que

permanece unido a la enzima, y
Descarboxilacin para formar el -cetoglutarato.

En esta reaccin irreversible se produce CO2 y el primer

NADH + H+ del ciclo.

El citosol posee tambin una isocitrato deshidrogenasa
pero esta isozima requiere NADP+ como coenzima, a
diferencia de la enzima mitocondrial que participa en el
ciclo de Krebs, la cual requiere NAD+.

El isocitrato es oxidado por

deshidrogenacin, en una
reaccin catalizada por la enzima

Isocitrato Deshidrogenasa.

La enzima requiere NAD+ y Mg++. Este ltimo facilita la

liberacin de CO2
La reaccin se lleva a cabo en dos pasos:
1.
2.

Deshidrogenacin, en la que se forma oxalosuccinato que

permanece unido a la enzima, y
Descarboxilacin para formar el -cetoglutarato.

-Cetoglutarato Deshidrogenasa
El ciclo prosigue mediante la actividad de la enzima

-cetoglutarato deshidrogenasa, la cual convierte el

-cetoglutarato (o 2-oxo-glutarato) en succinil-CoA.
La -cetoglutarato deshidrogenasa es un complejo
multienzimtico, cuya accin es anloga a la
piruvato deshidrogenasa y utiliza los mismos
cofactores: pirofosfato de tiamina (TPP), cido
lipoico, NAD+, FAD y coenzima A.
La reaccin es prcticamente irreversible y en ella se
forma el segundo CO2, que proviene del oxalacetato.
Para que la acetil-CoA convierta en CO2 su radical
acetato, el ciclo ha de dar dos vueltas.

-Cetoglutarato Deshidrogenasa
Succinil-CoA

la enzima -cetoglutarato
deshidrogenasa convierte
el -cetoglutarato (o 2-oxoglutarato) en succinil-CoA.

La -cetoglutarato deshidrogenasa es un complejo

multienzimtico, cuya accin es anloga a la piruvato

deshidrogenasa y utiliza los mismos cofactores: pirofosfato
de tiamina (TPP), cido lipoico, NAD+, FAD y coenzima A.
Esta enzima tambin es un complejo de 3 subunidades y el
mecanismo de la reaccin se semejante

Succinil-CoA Sintetasa
El ciclo contina con la liberacin de la CoA y la conversin

de succinil CoA en succinato.

La succinil CoA es un tioster de alta energa (su G de
hidrlisis est en unos -33.5 kJ mol-1, parecido al del ATP
que es de -30.5 kJ mol-1).
En este punto del ciclo de Krebs se realiza una fosforilacin a
nivel del sustrato, y puede generarse ATP.
Sin embargo, la transferencia del enlace de alta energa no
se hace directamente al ADP, sino que se realiza la
fosforilacin de GDP (guanosina difosfato) que pasa a GTP
(o de IDP, inosina difosfato, que pasa a ITP).
Ambos nucletidos pueden ser utilizados para la formacin
de ATP por accin de una enzima, la nuclesido difosfato
cinasa o fosfocinasa.

Curiosamente la enzima que cataliza esta reaccin es ms conocida por

su actividad en sentido inverso, por lo cual se llama succinil-CoA
sintetasa, que por su actividad real, por la cual debe llevar el nombre de

succinato tiocinasa

GTP

Otras Enzimas
Una reaccin alternativa en tejidos extra-hepticos

es la transferencia de la CoA de la succinil-CoA al

acetoacetato, para producir acetoacetil-CoA
Esta reaccin, de gran importancia en algunos
estados metablicos, permite la incorporacin de
cuerpos cetnicos al ciclo de Krebs y es catalizada
por la enzima succinil CoA transferasa (o tioforasa).
En el hgado se puede producir la desacilacin
directa de la succinil-CoA por la actividad de una
succinil-CoA deacilasa, producindose succinato y,
lo que es importante, aumentando los niveles de
CoA libre.

Parte final del ciclo

La parte final del ciclo consiste en la reorganizacin

de molculas de cuatro tomos de carbono, hasta la

regeneracin del oxalacetato.
Para que esto sea posible, el grupo metilo presente
en el succinato tiene que convertirse en un carbonilo.
Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la beta
oxidacin de los cidos grasos, tal conversin ocurre
mediante tres pasos: una primera oxidacin, una
hidratacin y una segunda oxidacin.
Estos tres pasos, adems de regenerar oxalacetato,
permiten la extraccin ulterior de energa mediante
la formacin de FADH2 y NADH.

 Por accin de la succinato deshidrogenasa, el succinato es

deshidrogenado a fumarato,
Esta enzima utiliza FAD como coenzima, el cual en estado
reducido (FADH2) constituye una fuente directa de electrones
para la cadena respiratoria a nivel de la coenzima Q.
Esta es la nica enzima del ciclo integrada a la membrana
mitocondrial interna, directamente ligada a la cadena
respiratoria.
Se renen as, anatmica y fisiolgicamente, el ciclo de Krebs el
transporte de electrones y la fosforilacin oxidativa.

fumarato

Succinato Deshidrogenasa

FADH2
FAD

succinato

Mlico
Deshidrogenasa
L-malato

H2O

Fumarasa

El fumarato presenta luego una

serie de cambios para regenerar
el oxalacetato, los cuales
comprenden una hidratacin
catalizada por la fumarasa
(fumarato hidratasa) para
formar L-malato, el cual luego se
oxida o oxalacetato por medio de
la deshidrogenasa mlica y el
NAD+ como coenzima.

REGULACIN
La regulacin del ciclo de Krebs se realiza principalmente por

la disponibilidad de sustrato y por la retro-inhibicin por

acumulacin de los productos del ciclo

El aumento en la concentracin de NADH, inhibe a la piruvato

deshidrogenasa, a la isocitrato deshidrogenasa y a la citrato sintetasa
La acetil-CoA inhibe a la piruvato deshidrogenasa.
La succinil-CoA inhibe a la succinil-CoA sintetasa y a la citrato sintetasa
Aunque los niveles de ATP son consistentemente conservados in vivo y no
cambian ms del 10% entre el reposo absoluto y el ejercicio ms activo, in
vitro, el ATP es un potente inhibidor alostrico de la citrato sintetasa y de
la -cetoglutarato deshidrogenasa
El Calcio tambin funciona como regulador. Activa tres de las
deshidrogenasas que participan en el ciclo: la piruvato deshidrogenasa, la
isocitrato deshidrogenasa y la -cetoglutarato deshidrogenasa y por lo
tanto aumenta el flujo continuo a travs del ciclo.
Recordemos adem<s que el citrato es un inhibidor de la fosfofructocinasa
(la enzima que es paso limitante de la gluclisis) y acta eficientemente
disminuyendo el aporte de sustrato inicial, piruvato, para el ciclo de Krebs

 La proximidad intracelular fsica y funcional

del ciclo del cido ctrico y la cadena

respiratoria, determina que la actividad de
uno dependa de la otra y viceversa.
A su vez, ambas vas metablicas estn
reguladas por las concentraciones relativas
de ATP/ADP y NADH/NAD+.