Clula BrdU-negativa

Clula BrdU-positiva

Para demostrar la rplica exitosa, evaluamos "dobletes", es

decir, la presencia de clulas hijas BrdU-positivas en la
proximidad cercana del uno al otro. Puesto que la divisin de
es un(s)proceso de
3D, se
espera que
Duracinclulas
de perifusin
Duracin
de perifusin
(s) el seccionamiento
de 2D capture aproximadamente un tercio de todos los dobletes.
Por lo tanto, si todas las clulas BrdU-positivas sufrieron un ciclo
celular completo, esperamos aproximadamente el 33 % de
clulas en dobletes. De hecho, se encontr que el 25 % el 9.5
% de las clulas recin replicadas estaban presente como
dobletes (Figura 2). Adems, una fraccin de las clulas de
BrdU-positivas teidas para Ki67, un marcador de proliferacin
que se expresa a lo largo del ciclo celular, etiquetando las
clulas que sufran la rplica dentro de las 12 horas precediendo
a la recuperacin del injerto (lFigura 2o). Como se predijo, la
mayor parte de clulas eran BrdU positivas, pero Ki67
negativas, puesto que se haban replicado varios das antes de
la extraccin de injerto.
La proliferacin celular con frecuencia es asociada con la de
diferenciacin transitoria (17). Si el estmulo de rplica de clula
humana debe ser perseguido como un enfoque teraputico
para compensar la prdida de clulas funcional en la diabetes,
entonces las clulas recin replicadas rpidamente debe
reestablecer las propiedades de las clulas maduras. Como el
nmero de clulas recin reproducidas es pequeo
comparado
con
l
de
las
clulas
preexistentes
(aproximadamente el 2.7 % por regla general), la evaluacin
directa de produccin de insulina aumentada estimulada por
glucosa de los islotes transformados en " ensayos a granel" no
son factibles, ya que estas medidas reflejan en gran parte las
propiedades de clulas preexistentes.
Por lo tanto, para determinar si las clulas que haban
replicado en respuesta a la supresin p57Kip2 haban
recuperado su estado de diferenciacin, se realiz
immunofluorescencia doble etiquetado para BrdU y marcadores
de clulas maduras. Se observ que clulas BrdU-positivas
en islotes humanos p57 suprimidos expresaron NKX6.1 y Pdx1,
as manteniendo o recuperando la firma molecular de sus
contrapartes maduros (suplementario Figura 3).