Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Citoquimica
Citoquimica
APLICADA A LA HEMATOLOGIA
inorgnicas.
As se mejora la diferenciacin celular.
Tambin sirven para el diagnstico
CITOMORFOLOGIA.
70-80%
CITOQUIMICA.
90-95%
INMUNOFENOTIPO
MAS
MICROSC. ELECTRN.
99100%
MUESTRAS UTILIZADAS
EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA
PUNCION DE MDULA SEA
PUNCION DE GANGLIOS
LCR
TIPOS DE TINCIONES
Se pueden clasificar en:
Atendiendo al nivel de vitalidad de las clulas que
CITOQUMICA ELCTRNICA
CITOQUMICA FLUORESCENTE
INMUNOCITOQUMICA
NO FLUORESCENTE
CITOQUMICA AUTOMATIZADA
sustancias que son capaces de dar reacciones citoqumicas intensamente coloreadas que permiten su revelacin.
CITOQUIMICA ELECTRONICA:
CITOQUIMICA FLUORESCENTE:
INMUNES
NO INMUNES
INMUNOCITOQUMICA NO FLUORESCENTE
Inmunocitoqumica con deteccin
indirecta y enzimtica. La seccin
se obtiene de tejido previamente
fijado. Inmediantemante despus
se incuban en una solucin de
bloqueo que satura los posibles
sitios de unin inespecfica, gracias
a una alta concentracin de
protena como la albmina de suero
bovino. Tras cada paso de unin de
anticuerpos o del complejo avidinabiotina-peroxidasa se procede a
lavar los cortes en una solucin
tamponada de fosfato (tampn
fosfato), en la que tambin van
disueltos los anticuerpos. La
reaccin de la peroxidasa convierte
unos sustratos, la diaminobencidina
y el perxido de hidrgeno, en un
producto insoluble y coloreado
visible con el microscopio tico.
CITOQUIMICA AUTOMATIZADA:
celulares
El Dx de la patologa
ESTANDARIZACION DE METODOS EN
CITOQUIMICA
Preparacin estricta de los reactivos
Practicas permanentes de las reacciones con preparados testigos
Realizacin, la fijacin y conservacin adecuada de los preparados y
reactivos
Determinacin de tiempos exactos para cada uno de los pasos
dem de temperatura (especial para enzimas)
Tiempo y condiciones de la inmersin para la lectura
Dimetros y conservacin idneos de los elementos sobre los cuales
clulas.
Incubacin en el medio de reaccin: como consecuencia se generan
reaccin .
sensibilidad, especificidad y
reproductibilidad.
ENZIMAS RECONOCIBLES
1-DNA Y RNA.
2-PROTEINAS.
3-HEMOGLOBINA.
4-HIDRATOS DE CARBONO.
5-LIPIDOS.
6-FOSFOLIPIDOS.
7-METALES
1-MIELOPEROXIDASAS (MPO)
2-FOSFATASA ALCALINA (FAL)
3-FOSFATASA ACIDA (FAC)
4-ESTERASAS (EST)
5-FOSFATASA ACIDA TARTRATO
RESISTENTE (FAC-TR)
6-DEHIDROGENASAS (DH)
CITOQUIMICA CLASICA
reconocimiento por:
principios no enzimticos
principios enzimticos
MPO
Fe hemosidernico: PERLS
FAL
FAL
ESTEARASAS
CATALASAS
ENZIMAS HIDROLITICAS
TINCIONES CLASICAS
1) RECONOCIMIENTO DE SUSTRATOS NO
ENZIMATICOS
TINCIN DE PAS
(Peryodic Schiff Acid)
Se basa en la rotura de los enlaces -C-C- presentes en los
carbohidratos por la accin del cido perydico, potente
agente oxidante, liberndose grupos aldehdo que al
combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de
color rojo prpura intenso.
-C-C-
ALDEHIDOS
ACIDO PERYODICO
PURPURA
SCHIFF
RESULTADOS:
TINCION DE PERLS
Se basa en la liberacin de los iones frricos de su
Sideroblastos en anillo
Reflejando una anormalidad
en la acumulacin de Fe en
las mitocondrias
(azul de Prusia)
Hemocromatosis
(cortes histolgicos de
hgado)
HEMOGLOBINA FETAL
Test de Kleihauer-Betke
La hemoglobina fetal (HbF o 22) es cido y lcali
El producto de
la reaccin es
negro y
granular
2) RECONOCIMIENTO DE SUSTRATOS
ENZIMATICOS
MIELOPEROXIDASA
La demostracin citoqumica de esta enzima se
basa en la accin oxidante de la peroxidasa sobre
un sustrato (bencidina) en presencia de perxido
de hidrgeno, apareciendo un precipitado azul en
el lugar del citoplasma en donde se ha producido
la reaccin.
BENCIDINA
H2O2
MPO
Resultados.
siempre patrones granulares!
ERITROCITOS Y SU PROGENIE : NEGATIVOS (etanol)
GRANULOCITOS Y SU PROGENIE : (+) patrn granular intenso en
NORMALES..
PATOLOGICOS
ESTRES OXIDATIVO
Scorificacin de MPO en granulocitos:
Se categorizaron los neutrfilos de acuerdo al contenido de
FOSFATASA ALCALINA
La FA es una fosfomonoesterasa que es activa francamente a
Alfa-naftil fostato
ph alcalino
FAL
naftilo
Colorante
diazoico
Compuesto diazotado
fosfato
Cuidados:
Efectuar la reaccin en frotis de no mas de 24 hs.
Conservar los preparados en heladera envueltos en
papel absorbente con un desecador.
Ph de la reaccin
La actividad granulocitica de la FA se
manifiesta en forma de un
precipitado de color pardo negruzco
localizado en el citoplasma
Se encuentran actividad FA en
algunas clulas maduras y
semimaduras de la
granulopoyesis neutrofilica
(segmentados y bandas)
FOSFATASA ACIDA
Se basa en la hidrlisis del substrato
naftol-AS-Bi-fosfato.
La aplicacin prctica del estudio de la FA se refiere sobre
todo al estudio de los sndromes linfoproliferativos
crnicos (LPC) y leucemia aguda linfoblstica (LAL), dnde
existe una buena correlacin entre el tipo de positividad y
el fenotipo de membrana.
ESTEARASAS
Son un grupo de enzimas capaces de hidrolizar
CLOROACETOESTEARASA (CEA)
SUSTRATO ESPECIFICO: Naftol AS-D Cloroacetato
-Naftil butirato
Es el sustrato especfico para las esterasas
monoctica pero a pesar de su aparente
especificidad no es recomendado por el Comit
Internacional de Hematologa por su costo
EN RESUMEN..
Granulocitos
Mb
PAS
Fe
MPO
FAL
FAC
ANAE
NCAE
Sudan
Black
Seg
Linfocitos
Monocitos
Plaquetas
Lbl
Lin
Mbl
Mon
Mg
Pq
Eritrocitos
PEbl
GR
Positividad en mazacotes