Está en la página 1de 20

ABSTRAK

Hipofisis-gonad memainkan peran penting dalam mengatur gametogenesis di vertebrata.


Dalam kebanyakan kasus, gonadotropin bertindak melalui biosintesis hormon steroid gonad
yang pada gilirannya memediasi berbagai tahap gametogenesis. Serangkaian penelitian di
laboratorium kami menggunakan beberapa spesies ikan teleost sebagai hewan percobaan
telah memberikan informasi baru tentang regulasi endokrin dari gametogenesis. termasuk
pertumbuhan oosit, pematangan oosit. Spermatogenesis dan pematangan sperma. Artikel ini
secara singkat ulasan temuan kami pada identifikasi steroid mediator yang terlibat dalam
setiap proses gametogenesis, dan situs dan mekanisme kerja dari mediator. Pengamatan ini
secara kolektif menunjukkan kesesuaian menggunakan ikan teleost sebagai
model valid untuk memeriksa pengaruh hormonal pada gametogenesis. Model tersebut juga
bisa memiliki aplikasi dan validitas untuk vertebrata pada umumnya.
Pengenalan
Dalam vertebrata, gonadotropin adalah hormon utama untuk mengatur gametogenesis.
Namun gonadotropin tidak bertindak secara langsung. tetapi bekerja melalui gonad
biosintesis 01 hormon steroid yang pada gilirannya menengahi berbagai tahap gametogenesis.
Selama beberapa tahun terakhir, Serangkaian penelitian di laboratorium kami menggunakan
beberapa spesies ikan hewan percobaan telah memberikan informasi baru tentang Peraturan
hormonal dari gametogenesis.
Gonadotropin
Pituitaries ikan mengeluarkan dua jenis gonadotropin. dua yang berbeda gonadotropin
karbohidrat, ditunjuk sebagai GTH-I dan GTH-II, telah diisolasi dan dikarakterisasi dari
pituitaries pemijahan sohib salmon, Oncorhynchus keta (Suzuki et al, 1988a, b;. Kawauchi et
al., 1989). Kadar plasma dari GTH-I menunjukkan peningkatan diperpanjang selama
vitellogenesis / spermatogenesis dan penurunan pada saat pemijahan. Di sisi lain, tingkat
plasma GTH-II terus-menerus rendah sepanjang viteliogenesis / spermatogenesis dan
meningkat secara drastis pada waktu pemijahan di akhir musim gugur,
Peraturan hormon pertumbuhan oosit (vitelogenesis)
Oosit vertebrata non mammalia tumbuh sementara dalam profase meiosis pertama.
Pada dasarnya yang bertanggung jawab untuk pertumbuhan oosit ikan terjadi terutama
selama fase pengembangan yang disebut vitellogenesis, dan melibatkan penyerapan dan hasil
dari plasma hati sebelumnya,vitellogenin,termasuk protein kuning. Estrogen, estradiol-17
dalam banyak kasus, diproduksi oleh ovarium di bawah pengaruh gonadotropin, dimasukkan
ke dalam sistem pembuluh darah dan merangsang sintesis hati dan sekresi dari vitellogenin

Injeksi dengan ekstrak hipofisis atau berbagai persiapan dari gonadotropin menginduksi
sintesis estradiol-17B dan vitellogenesis berikutnya. kadar plasma dari estradiol-17 ~ dan
viteliogenesis yang positif berkorelasi dan peningkatan secara paralel. Eksogen estrogen bisa
menginduksi sintesis vitellogenin di hati dan penampilan di plasma.
Vitellogenin secara selektif diambil dari aliran darah dengan mengembangkan oosit
(Wallace, 1985). reseptor vitellogenin yang ditandai di membran oosit terisolasi dari coho
salmon (Stifanl el al., 1990), nila, Oreochromis niloticus (Chan et al .. 1991) dan rainbow
trout, Oncorhynchus mykiss (Lancaster dan Tyler, 1991; Le Menn dan Nunez Rodriguez,
1991). saturasi dan Scatchard analisis mengungkapkan hanya satu kelas dari situs mengikat.
Di nila, jumlah dan afinitas binding ini sangat meningkatkan dari previtellogenic ke tahap
vitellogenik, dan tetap tidak berubah sampai tahap preovulasi pada saat afinitas binding juga
tertinggi.
Beberapa hormon. seperti gonadotropin, tiroksin, triiodothyronine. insulin, dan hormon
pertumbuhan, telah terlibat dalam mengatur oosit grow1h, meskipun peran setiap ot ini
hormon telah belum ditentukan. GTH-I, tapi tidak GTH-II, merangsang penyerapan vitro dari
vitellogenin ke folikel ovarium dari utuh vitellogenik rainbow trout, serta in vitro
penggabungan vitellogenin oleh folikel sebagian gundul (Tyler, 1991). menggunakan
oosit folikel bebas dari rainbow trout, kami telah menunjukkan bahwa insulin dan tiroksin
secara signifikan meningkatkan vitellogenin penyerapan (Shibata et al., 1993). Sebaliknya,
tidak sohib salmon GTH-I atau GTH-II adalah efektif. oocy1es matang menggabungkan
hanya 1/15 dari vitellogenin. Insulin juga tidak memiliki ettect pada oocy1es matang. Ini
adalah hipotesis dari temuan ini bahwa diamati sebelumnya stimulasi serapan vitellogenin ke
folikel utuh atau oosit sebagian gundul dari rainbow trout kemungkinan besar dimediasi oleh
tindakan
produksi

gonadotropin

pada

folikel

ovarium.
estradiol-1713

The teleost ovarium terdiri dari oogonia, oosit, dan sekitarnya sel folikel, jaringan pendukung
atau stroma, dan pembuluh darah dan saraf jaringan. Dengan grow1h dari oosit, sel-sel folikel
berkembang biak dan membentuk lapisan follicular terus menerus (lapisan sel granulosa).
Bersamaan dengan itu, stroma sekitarnya ikat elemen jaringan juga menjadi terorganisir
untuk membentuk lapisan luar yang berbeda dari follicularenveiope (lapisan teka). Oleh
karena itu, oosit vitellogenik, seperti yang vertebrata lainnya, terdiri dari dua sel utama
lapisan, lapisan sel teka luar dan lapisan sel granulosa dalam yang terpisah satu sama lain
oleh ruang bawah tanah yang berbeda selaput. Lapisan teka mengandung fibroblast, serat

kolagen,dan kapiler, dan, dalam beberapa spesies, sel-sel teka khusus (Nagahama, 1983).
Sebuah teknik diseksi sederhana untuk memisahkan folikel ovarium dari salmonids menjadi
dua lapisan sel, teka dan lapisan granulosa, telah membuat possibie untuk menjelaskan peran
masing-masing layer dan gonadotropin dalam proses keseluruhan produksi steroid (Kagawa
et al., 1982). Kami dalam studi vilro menunjukkan bahwa teka dan lapisan sel granulosa
bekerja sama dalam produksi steroid mediator dari oosit grow1h dan pematangan (lihat di
bawah). Sebuah model tipe dua-sel dalam producfion dari folikel estradiol-17B telah
diusulkan. Dalam model ini, lapisan sel teka, di bawah pengaruh gonadotropin, mengeluarkan
substrat androgen (Mungkin testosteron) yang berdifusi ke dalam lapisan sel granulosa mana
aromatase terlokalisir eksklusif (Kagawa el al., 1985; Nagahama, 1987b; Adachi el al., 1990).
Pembatasan

ot

distribusi

testosteron dan estradiol-17B dikonfirmasi imunohistokimia di tollicles ovarium vitellogenik


dari rainbow trout (Schulz, 1986). Kami telah menemukan bahwa lapisan sel teka dari Amago
salmon (Oncorhynchus rhodurus) dan sel granulosa Lapisan dari trout pelangi bisa
menghasilkan efek yang sama seperti yang telah dilaporkan menggunakan kombinasi teka ot
dan lapisan sel granulosa dari spesies yang sama. Kebalikan penggunaan salmon Amago
granulosa dan rainbow trout lapisan sel teka juga efektif. Ini Temuan menunjukkan bahwa
mungkin ada sedikit spesifisitas spesies ot masing-masing lapisan sel tersebut antara
salmonids (Nagahama, 1987b). Namun, model tipe dua-sel yang dijelaskan di atas tampaknya
tidak valid untuk heleroclitus Fundulus (killitish) dan medaka, Oryzias lalipes. Dalam spesies
ini, di mana sel-sel teka khusus tidak jelas dalam lapisan teka, sel-sel folikel (sel granulosa)
adalah situs utama sintesis steroid dan produksi estradiol-17B tidak membutuhkan
keterlibatan dua jenis sel (Onitake dan Iwamatsu, 1986; Petrino et al., 1989).
Gonadotropin bekerja pada lapisan sel teka untuk merangsang testosteron produksi melalui
adenyl reseptor-mediated makan adenilat-cAMP sistem. Penelitian lebih baru menunjukkan
bahwa lainnya molekul sinyal intraseluler termasuk kalsium, kalmodulin. pro1ein kinase C,
dan asam arakidonat yang terlibat dalam produksi testosteron gonadotropininduced oleh
folikel preovulasi utuh ikan mas, Carassius auralus (Van Der Kraak, 1990, 1991; Van Der
Kraak dan Chang, 1990). Sangat menarik untuk dicatat kehadiran gonadotropin reseptor di
sel granulosa ot Amago salmon folikel vitellogenik. ditemukan bahwa spesies ini
gonadotropin dan beberapa agen yang dikenal untuk meningkatkan tingkat cAMP intraseluler
gagal meningkatkan aktivitas aromatase pada lapisan granulosa sama sekali tahap
perkembangan. Namun demikian, aktivitas aromatase pada lapisan sel granulosa nyata

meningkat selama vitellogenesis. Dengan demikian, mekanisme ot aktivasi salmon Amago


granulosa sistem aromatase sel tidak diketahui pada saat ini.
Kami juga menyelidiki mekanisme aktivasi aromatase di awal folikel vitellogenik dari
medaka, spesies di mana urutan peristiwa seperti vitellogenesis, oosit pertumbuhan. meiosis
pematangan, dan ovulasi dapat diberi batas waktu akurat (Sakai ef al., 1987). Menggunakan
model ini, kami telah menunjukkan progresif peningkatan aktivitas aromatase, dinilai secara
tidak langsung dengan konversi testosteron eksogen untuk estradiol ~ 17B, di folikel
vitellogenik terisolasi antara 28 dan 20 jam sebelum pemijahan (Sakai et Al" 1988), Dalam
spesies ini, aktivitas aromatase nyata ditingkatkan oleh hamil mare serum gonadotropin
(PMSG) setelah 18 jam inkubasi folikel dari vitellogenik diisolasi pada 32 jam sebelum
pemijahan, tindakan ini PMSG yang menirukan oleh forskolin dan dbcAMP yang dikenal
untuk meningkatkan tingkat sel cAMP ot, ini efek meningkatkan PMSG, forskolin dan
dbcAMP pada aromatisasi benar-benar dihambat oleh aktinomisin 0 dan cycloheximide, hasil
ini menunjukkan bahwa PMSG menginduksi aktivitas aromatase pada medaka folikel
vitellogenik melalui siklase adenilat ~ sistem cAMP, Selanjutnya aksi ini PMSG tergantung
pada

baik

transkripsi

dan

translasi

proses

(Nagahama

et

al.,

pematangan

1991).
oosit

Sebuah periode pertumbuhan oosit diikuti oleh proses yang disebut oosit pematangan yang
terjadi sebelum ovulasi dan merupakan lor prasyarat pembuahan sukses. Pematangan oosit
didefinisikan sebagai reinitiation dan penyelesaian pembelahan meiosis pertama, selanjutnya
pengembangan menjadi metafase II. Pada beberapa spesies seperti ikan mas, yang Acara
pertama terlihat dari pematangan oosit adalah migrasi germinal vesikel (GV) ke arah tiang
hewan dan sering digunakan sebagai indikator terjadinya pematangan oosit. Mekanisme
Proses ini melibatkan perubahan dalam jaringan cytoskeletal seperti distribusi mikrotubulus
(Lessman et Al" 1988; Jiang et al.,tidak dipublikasikan). Setelah migrasi GV, beberapa proses
terjadi pada inti dan sitoplasma oosit, termasuk rincian dari vesikel germinal (GVBD) (yang
menunjukkan akhir profase I), kondensasi kromosom, pembentukan dari spindle, dan ekstrusi
tubuh polar pertama (yang menandai selesainya meiosis I) (Masui dan Clarke, 1979; Goetz,
1983;

Nagahama,

1987c).

Studi

dari

laboratorium

kami

dan

lain-lain

telah

menunjukkan bahwa di teleosts, seperti dalam amfibi. pematangan oosit adalah diatur oleh
tiga mediator utama, yaitu, gonadotropin, pematangan ~ merangsang hormon (MIH), dan
pematangan ~ mempromosikan Faktor (MPF) (Nagahama, 1987c; Redding dan Patino, 1993)
(Gambar.

3).

mediator

utama

dari

pematangan

oosit

gonadotropin

Studi in vitro inkubasi telah menunjukkan bahwa gonadotropin menginduksi pematangan


meiosis di postvitellogenic folikel tertutup oosit ikan, tetapi tidak pada oosit defolliculated
(Goetz, 1983; Nagahama, 1987c). Cyanoketone, inhibitor spesifik 3B ~ hidroksi ~ ", 5 ~
steroid dehydrogenase, benar-benar dihapuskan kematangan yang efek gonadotropin (Young
et Al" 1982; Deman ada dan Goetz, 1987). Secara bersama-sama, temuan ini menunjukkan
bahwa gonadotropin memicu pematangan dengan merangsang sel-sel folikel untuk
mensintesis ", 4 ~ steroid yang bekerja langsung pada oosit menyebabkan pematangan.
mediator

sekunder

dari

pematangan

oosit

hormon

Maturationinducing

(MIH)

Sejumlah penelitian telah dilakukan untuk menguji efek dari berbagai steroid pada induksi
pematangan oosit in vitro (lihat ulasan, Jalabert, 1976; Iwamatsu, 1978; Fostier et al, 1983.;
Goetz, 1983; Nagahama et al, 1983.; Greeley et al., 1986; Canario dan Scott, 1988; Trant dan
Thomas, 1988). Di antara C18, C19, dan C21 steroid diuji sejauh ini, steroid C21 selalu
dilaporkan memiliki maturatlon lebih kuat ~ merangsang aktivitas dari Hormon dan
gametogencsis injish 219 dua kelompok lainnya steroid. The MIH dari pagi lalu salmon
adalah dimurnikan dan ditandai dari media yang belum matang tapi fullgrown folliculated
oosit

telah

diinkubasi

dengan

sebagian

dimurnikan

salmon gonadotropin (Nagahama dan Adachi, 1985). Di antara 20 Fraksi dipisahkan dengan
fase terbalik cair kinerja tinggi kromatografi, aktivitas pematangan-inducing hanya
ditemukan di satu fraksi yang memiliki waktu retensi bertepatan persis dengan 17a, 20B ~
dihidroksi ~ 4 ~ pregnen ~ 3 ~ satu (17 , 20B ~ DP). kemurnian dan karakterisasi akhir dari
fraksi aktif ini telah dikonfirmasi lebih lanjut dengan kromatografi lapis tipis dan
spektrometri massa dengan otentik 17a, 20B ~ DP. Plasma tingkat 17a, 20B ~ DP yang
ditemukan menjadi tinggi hanya dalam matang dan ovulasi Amago betina salmon dan sangat
rendah atau nondetectable (kurang dari 30 pg / ml) pada wanita selama periode yang tersisa
oftheir hidup (Young et al .. 1983a) .ltwas juga menemukan bahwa di antara steroid diuji, 17
,
inducer

20B
dari

~
GVBD

DP
di

adalah
Amago

yang
salmon

paling
oosit

efektif

postvitellogenic

(Nagahama et al., 1983). 17 , 20B ~ DP demikian diidentifikasi sebagai alami MIH di


Amago salmon (Nagahama, 1987a). Furtherstudies dari laboratorium kami dan yang lain
menunjukkan bahwa 17a, 20B ~ fungsi DP sebagai umum MIH ke beberapa ikan teleost
lainnya termasuk sebagian besar spesies dari salmonids (Jalabert, 1976; Goetz, 1983;
Yamauchi et at .. 1984; Canario dan Scott, 1988). Baru-baru ini, 17a, 20B, 21 ~ trihidroksi ~
4 ~ pregnen ~ 3 ~ satu (20B ~ S) telah diidentifikasi sebagai MIH alami dari Atlantik croaker,

ikan perciform laut (Trant et al .. 1986; Trant dan Thomas, 1989a). dalam spesies ini, 20B ~ S
ditemukan menjadi salah satu paling steroid ampuh untuk mendorong GVBD in vitro (Trant
dan Thomas, 1988). Paparan jatuh tempo folikel ovarium untuk HCG in vitro sangat
peningkatan produksi mereka 2GB.S, dengan seiring bertambahnya tingkat pematangan oosit
in vitro. Selanjutnya, in vitro produksi dan tingkat plasma dari 17a, 20B ~ DP selama periode
oosit pematangan yang sangat Jow di spesies ini (Trant dan Thomas, 1989b). Hasil ini sangat
mendukung hipotesis bahwa 20B ~ S adalah alami, MIH utama dalam croaker Atlantic.
Keterlibatan 20B-S di induksi pematangan oosit juga disarankan dalam terkait erat spesies.
tutul Seatrout, Cynoscion nebolusus (Thomas dan Trant. 1989). Namun, 208-S tidak tampak
terlibat dalam induksi pematangan oosit di salmonids, karena tidak ada bukti untuk kehadiran
sejumlah besar ini steroid dalam darah salmonids perempuan menjalani pematangan atau
ovulasi (Scott dan Canario, 1987).
17a,

20B-DP

produksi

Menggunakan teknik inkubasi terisolasi salmonid folikel persiapan mirip dengan yang
digunakan untuk studi tentang folikular produksi estradiol-178, tipe model dua sel telah
diusulkan, untuk pertama kalinya dalam vertebrata apapun, untuk produksi folikular MIH.
Dalam model ini, lapisan sel teka menghasilkan 17ahydroxyprogesterone yang melintasi
lamina basal dan dikonversi ke 17a, 208-DP oleh lapisan sel granulosa mana gonadotropin
bertindak untuk meningkatkan aktivitas 208-hidroksisteroid dehidrogenase (208-HSD),
enzim kunci yang terlibat dalam konversi 17a-hydroxyprogesteroneto 17a, 208-DP (Young et
al

..

1986;

Langkah

pertama

ot

Nagahama,
efek

merangsang

1987a,
gonadotropin

b).
di

teka

lapisan sel aktivasi reseptor-dimediasi adenilat siklase dan pembentukan cAMP, situs utama
aksi mungkin terjadi pada langkah steroidogenik antara kolesterol dan pregnenolon
melibatkan sistem enzim kolesterol rantai samping belahan dada (Kanamori dan Nagahama,
1988a, b). Aksi gonadotropin pada perangkat tambahan 208-HSD disel granulosa yang
menirukan oleh forskolin, oleh dbcAMP, tapi tidak dbcGMP, dan oleh dua inhibitor
phosphodiesterase (Nagahama et al .. 1985a: Kanamori dan Nagahama, 1988b). Selanjutnya,
gonadotropin

dan

forskolin

menyebabkan

akumulasi

cepat

cAMP

dengan tingkat maksimum pada 30-60 menit. Temuan ini konsisten dengan pandangan bahwa
cAMP adalah utusan kedua gonadotropin tindakan dalam sel granulosa. Dalam percobaan in
vitro utilizingboth inhibitor sintesis protein (Cycloheximide dan puromycin) dan RNA
sintesis inhibitor (Aktinomisin D, Cordycepin dan-amanitin) telah mengungkapkan bahwa

gonadotropin dan cAMP induksi aktivitas 208-HSD di granulosa lapisan sel tergantung pada
aktivasi RNA baru ot dan protein perpaduan. Studi tentu saja waktu kami lebih lanjut
menunjukkan bahwa de novo sintesis dari 208-HSD in vitro dalam menanggapi gonadotropin
dan dbcAMP terjadi, dan terdiri dari gen peristiwa transkripsi dalam pertama 6 jam paparan
ot untuk gonadotropin dan dbcAMP dan Peristiwa transkripsi 6-9 h affer eksposur ke
gonadotropin dan cAMP (Nagahama et al., 1985b). Secara bersama-sama, hasil ini
menunjukkan bahwa gonadotropin menyebabkan sintesis de novo dari 208-HSD di sel
salmon granulosa am lalu melalui mekanisme tergantung pada sintesis RNA. pergeseran
steroidogenik terjadi dalam sel folikel segera sebelum pematangan oosit Kapasitas folikel
utuh untuk menghasilkan estradiol-178 di Menanggapi gonadotropin meningkat rangsangan
selama oosit pertumbuhan, namun dengan cepat menurun berkaitan dengan kemampuan
oosit matang dalam menanggapi gonadotropin (Kagawa et di" 1983). produksi testosteron
oleh persiapan lapisan teka diperoleh setiap bulan selama pertumbuhan oosit dan pematangan
memiliki mengungkapkan bahwa kapasitas thecallayerto menghasilkan testosteron dalam
menanggapi gonadotropin secara bertahap meningkat selama kursus pertumbuhan oosit dan
puncak selama periode postvitellogenic: ini kapasitas lapisan sel teka dikelola oleh periode
oosit pematangan dan ovulasi (Kanamori et at .. 1988). Aromatase Kegiatan di lapisan sel
granulosa meningkat selama vitellogenesis dan menurun dengan cepat dalam hubungan
dengan kemampuan oosit untuk jatuh tempo dalam menanggapi gonadotropin (Young etat,
1983b:. Kanamori et a /., 1988). penurunan aktivitas aromatase ini tampaknya bertepatan
dengan penurunan kemampuan folikel utuh untuk menghasilkan estradiol-17B dalam
menanggapi gonadotropin. Sejak testosteron produksi dalam lapisan sel teka tidak menurun
selama waktu ini, mengurangi produksi estradiol-178 oleh folikel postvitellogenic adalah
karena. sebagian, untuk penurunan aktivitas aromatase dalam sel granulosa lapisan.
Segera sebelum pematangan oosit, folikel ovarium utuh ikan salmonid memperoleh
peningkatan kemampuan untuk menghasilkan 17a, 208-DP dalam menanggapi gonadotropin.
lapisan sel teka tidak mengembangkan kemampuan untuk menghasilkan 17C1hidroksiprogesteron dalam menanggapi gonadotropin sampai segera sebelum pematangan
oosit. Meskipun lapisan sel granulosa pertama memperoleh kemampuan untuk mengkonversi
eksogen
17C1-hidroksiprogesteron
gonadotropin
peningkatan
selama

ke

17a,

sekitar

bulan

endogen

20

aktivitas

pematangan

oosit.

Dengan

208-DP

sebelum
B-HSD
demikian,

dalam

pematangan
di

sel

penurunan

menanggapi
oosit,

granulosa
C17-20

lyase

sebuah
terjadi
andi

Kegiatan

dehidrogenase

peningkatan

atau

208-HSD

di

178-hidroksisteroid

sel

granulosa

dalam

muncul

sel

untuk

teka

dan

menjadi

besar

faktor yang bertanggung jawab forthe peningkatan pesat dalam 17a, 208-DP produksi
oleh

folikel

Karena

Shiff

terjadi

dalam

dimana
karakterisasi

jawab

untuk

sisipan
samping

1993),

cDNA

encoding

full-length
dada

dan

et

(Tanaka

at.,
et

seperti

langkah,

enzim
sel

dalam

kita

mengisolasi

et

1988).
asam

terisolasi

testis

cDNA

spesies
cDNA

sebagian

dan
library

(Tanaka

cDNA
et

cDNA

dikonfirmasi

memperkenalkan

testis

tersedia
kita
al.,

di

sintetik
memiliki,

encoding

al.,

(P-450arom)

itu.

babi

oligonukleotida

kloning

et

..

sitokrom

ovarium,

Karena

al

(P-450c17)

nonsteroidogenic.

hanya

ditentukan,

et

(Sakai

dengan

encoding

kloning
trout

sitokrom

Sisipan

208-HSD

dan

(Takahashi

aromatase

hewan.

Kami

rainbow

(38-HSD)

steroidogenik

dan

biosintesis.

terisolasi

(P-450scc)

ginjal

enzim

Menggunakan

amino

waktu,

otthe

dari

ini

steroidogenik

tumor

kloning
puritied

urutan

1992b).

kebanyakan

persiapan
al.,

..

setiap

monyet

belum

dan

al

mengkodekan
COS-1

1992),

pertama
steroidogenik

208-DP

lyase

molekuler

identifikasi

kolesterol

17a-hydroxylaseiC17-20

(Sakai

17a,

dehidrogenase

konsentrasi

enzim

baru-baru

sitokrom

208-DP

Langkah

adalah

mengkode

belahan

17a,

peristiwa

gonadotropin.
ini

38-hidroksisteroid

1993),

oleh

oosit.

meningkatnya

masalah

mRNA

untuk

menyelidiki

estradiol-178

cDNA

melengkapi
rantai

diatur

klon

bertanggung

dengan

untuk

penjelasan

pematangan

estradiol-178

hubungan

pergeseran

memiliki

dari

penting

terhadap

selama

steroidogenik

gonadotropin.

tidak

utuh

Untortunately,
208-HSD

cDNA

sebagai

pertama

208-HSD,

karena

babi

(Nakajin

disimpulkan
untuk

208-HSD

1992a).

ke

dari

CDNA

dari

pertama
babi
berisi

terbuka reading frame diprediksi untuk mengkodekan 289 residu asam amino.
Mengejutkan itu memiliki 85% homologi asam amino dengan karbonil manusia
reduktase. Kami sekarang menggunakan klon cDNA ini untuk mengisolasi cDNA
encoding
cDNA library.

rainbow

trout

20B-HSD

dari

ovarium

rainbow

trout

Tingkat
mRNA
dari
P.450scc,
38.HSD,
dan
P-450c17
adalah
hampir tidak terdeteksi dalam folikel selama tahap pertengahan vitellogenik,
dan
melimpah
di
folikel
selama
tahap
post
vitellogenik
dan
pematangan oosit (Takahashi et al, 1993;.. Sakai et al, 1992,1993). Transkrip RNA P450arom
yang
hadir
dalam
ovarium
selama vitellogenesis aktif, namun tidak hadir dalam ovarium di panggung
dari pematangan oosit atau di ovarium yang mengandung postovulatory
folikel
(Tanaka
et
al.,
1992b).
Hasil
ini
konsisten
dengan
penurunan cepat dalam aktivitas aromatase pada lapisan sel granulosa
selama periode postovulatory (Young et al .. 1983b). Dengan demikian
menyimpulkan bahwa kemampuan sel granulosa untuk memproduksi estradiol-17B diatur
oleh
jumlah
transkrip
RNA
hadir
(Tanaka et al., 1992b). Hasil awal kami menunjukkan bahwa forskolin diinduksi 17a,
produksi
20B-DP
disertai
dengan
dramatis
penurunan
tingkat
mRNA
P-450arom
oleh
sel
granulosa
terisolasi
trom folikel postvitellogenic. Peningkatan 2 sampai 3 kali lipat dalam P-450scc
dan 3B-HSD mRNA dan sedikit penurunan dalam P-450c17 mRNA yang
juga
mengamati
selama
17a
forskolin-diinduksi,
20B-DP
produksi
(Tanaka
dan
Nagahama,
tidak
dipublikasikan).
awal
Northern
kami
analisis hibridisasi menggunakan babi 20B-HSD cDNA sebagai probe memiliki
mengungkapkan bahwa 20B-HSD mRNA transkrip yang rendah granulosa
sel
sebelum
pematangan
oosit,
namun
meningkat
tajam
selama
alami
dan
gonadotropin-induced
pematangan
oosit.
Situs
aksi
MIH
Sebelumnya dalam studi vitro pada ikan telah menunjukkan bahwa mekanisme
tindakan
yang
terlibat
dalam
steroid-stimulasi
pematangan
oosit
memiliki
karakteristik
khusus
yang
tidak
khas
dari
steroid
klasik
mekanisme
aksi
(Dettlaff
dan
Skoblina,
1969;
Jalabert,
1976;
Deman ada dan Goetz, 1987). Kami juga menemukan 17a itu, 20B-DP adalah
tidak efektif dalam mendorong pematangan oosit saat microinjected ke
dewasa
oosit
matang
dari
ikan
mas,
tapi
efektif
bila
diterapkan secara eksternal. Secara bersama-sama, ini hasil in vitro menunjukkan
bahwa situs aksi MIH dalam menginduksi pematangan meiosis pada ikan
oosit
adalah
pada
atau
dekat
permukaan
oosit.
lebih
banyak
bukti
langsung
untuk
keberadaan
reseptor
MIH
di
membran
oosit
plasma
telah
diperoleh
oleh
studi
mengikat
menggunakan label MIH. Kami telah mengidentifikasi dan ditandai spesifik
pengikatan
[
'H)
17a,
20B-DP
ke
membran
plasma
dibuat
dari
oosit
defolliculated
dari
rainbow
trout
(Yoshikuni
et
al.,
1993).
analisis Scatchard mengungkapkan dua situs mengikat yang berbeda: tinggi
afinitas tempat pengikatan dengan Kd pada 18 nM dan 6max 0,2 pmolesl
mg protein dan afinitas situs pengikatan rendah dengan Kd 01 0,5 ~ M dan
a
6max
dari
1
protein
pmolefmg.
Maneckjee
et
al.
(1989)
juga
melaporkan
17a,
20B-DP
mengikat
aktivitas
di
zona
radiata-oosit
kompleks
membran
rainbow
trout
dan
ikan
trout
sungai,
Salvelinus
fontinalis. Baru-baru ini, kami juga menggambarkan 17a tertentu, 20B-DP
reseptor
untuk
17a,
20B-DP
di
korteks
oosit
dari
Jepang
flounder, Paralichthys olibaceus (Yoshikuni et a /., tidak dipublikasikan).
17a
ini,
20B-DP
mengikat
meningkat
dan
mencapai
keseimbangan

dalam 1 jam. analisis Scatchard mengungkapkan situs mengikat tunggal dengan


Kd dari 63 nM dan 6max dari 25 fmoleslcortex. The 17a, 20B-DP
reseptor
hadir
dalam
korteks
oosit
dari
kedua
postvitellogenic
oosit (500-600 ~ m dengan diameter) dan ovulasi telur, tapi tidak di
mereka baik dari pertengahan vitellogenik oosit (425-500 11m) atau oosit earlyvitellogenic
425
~
m).
Pengikatan
01
20B-S
untuk
membran
plasma
dari
ovarium
melihat
Seatrout
juga
ditandai
(Patino
dan
Thomas,
1990a). Scatchard analisis menunjukkan satu kelas dari afinitas tinggi
(Kd, 1O ~ 'OM), low.capacity (1 0 ~ 13-1 0 ~ 12 molfg ovarium) situs mengikat
untuk 20-S. Sebuah situs mengikat specilic untuk 20B-S ada di plasma
membran
dari
ovarium
tutul
Seatrout
(Palino
dan
Thomas,
1990b).
Konsentrasi
reseptor
20B-S
dalam
plasma
ovarium
membran tiga kali lebih tinggi di kursi kemenangan menjalani oosit
Hormon
dan
gametogencsis
pada
ikan
221
pematangan
dari
pada
wanita
vitelJogenic.
Peningkatan
reseptor
ini
konsentrasi pada ikan yang dikumpulkan selama siklus pemijahan alami mereka
mirip dengan yang sebelumnya diamati pada Seatrout menjalani akhir
pematangan
berikut
suntikan
LHRH
(Thomas
dan
Patino,
1991).
pengamatan
ini
menunjukkan
bahwa
perubahan
konsentrasi
MIHreceptors
di
ovarium
fisiologis
penting
selama
pematangan
oosit
alami.
Demikian
pula.
progesteron
tertentu
(a
diusulkan
MIH
oosit
amfibi)
reseptor
telah
menunjukkan
pada
permukaan
oosit
Xenopus
(Sadler
dan
Maller, 1982). Secara bersama-sama, pengamatan ini menekankan bahwa
aksi
steroid
pematangan-inducing
pada
oosit
agak
novel dalam terang konsep konvensional fhat steroid bertindak melalui
sitosol atau reseptor nuklir. Jelas, pekerjaan lebih lanjut diperlukan untuk
sepenuhnya
ciri
reseptor
steroid
pada
membran
oosit.
Perolehan
oosit
matang
dalam
menanggapi
rangsangan
hormonal
Telah
dilaporkan
bahwa
intralollicular
oosit
01
beberapa
teleosts mengembangkan kemampuan untuk menjalani GV6D dalam menanggapi
stimulasi
hormonal
segera
priorto
oosit
pematangan
akhir
tahap. Misalnya, folikel medaka memperoleh kemampuan untuk menjalani
pematangan dalam menanggapi gonadotropin 28 jam sebelum diharapkan
waktu pemijahan (Sakai et al., 1987). Pada oosit di Kisu (Sillago
japonica,
Kobayashi
et
al
..
1988),
dragonet
(Repomucenus
beniteguri,
Zhu
et
al
..
1989)
dan
croaker
Atlantic
(Patino
dan
Thomas,
1990b,
c),
ada
tahap
di
mana
mereka
dapat
menjalani
pematangan
oosit
in
vitro
dalam
menanggapi
rangsangan
gonadotropin
tetapi tidak untuk MIH. Namun, oosit ini menjadi sensitif terhadap MIH
jika
terkena
gonadotropin
in
vitro.
Hasil
ini
menunjukkan
bahwa
gonadotropin
bertanggung
jawab
untuk
induksi
pematangan
kompetensi
oosit.
Selanjutnya,
pematangan
HCG-diinduksi
kompetensi
dihambat
oleh
cycloheximide
dan
aktinomisin
0
(Patino
dan
Thomas,
1990c).
Thomas
dan
Patino
(1991)
meneliti
hubungan
antara
konsentrasi
reseptor
20B-S
dan
pengembangan
kompetensi
pematangan
menggunakan
ovarium
sistem
inkubasi.
Pengobatan
tutul
kursi
kekalahan
folikel
ovarium
dengan gonadotropin menyebabkan peningkatan dua kali lipat dalam 20B-S reseptor

konsentrasi
dan,
bersamaan,
oosit
penuh
tumbuh
memperoleh
kemampuan untuk dewasa dalam menanggapi kontras 20B-S.ln, pengobatan 20B-S
tidak
menyebabkan
peningkatan
konsentrasi
reseptor
atau
pengembangan
kompetensi
oosit
pematangan.
Demikian
pula,
in
vitro
pengobatan
folikel
flounder
Jepang
dengan
HCG
juga
menyebabkan
peningkatan
tiga
kali
lipat
dalam
17a,
konsentrasi
reseptor
20B-DP.
Selain
itu,
ini
elevasi
HCG-diinduksi
dalam
konsentrasi
reseptor
disertai
dengan
munculnya
kompetensi
kematangan
di
oosit
folikel-tertutup
(Yoshikuni
dkk.,
tidak
dipublikasikan).
diambil
bersama-sama,
hasil
ini
menunjukkan
bahwa
gonadotropin-diinduksi
peningkatan
konsentrasi
reseptor
MIH
bertanggung
jawab
untuk
pengembangan
kompetensi
oosit
pematangan
di
Seatrout
dan
flounder
Jepang,
dan
tidak
dimediasi
oleh
kenaikan
produksi 01 MIH.
mediator
tersier
pematangan
oosit
faktor
Maturationpromoting
(MPF)
Dalam studi sebelumnya, Dettlaff et al. (1977) melaporkan MPF-seperti
aktivitas
di
sturgeon,
Acipenser
stellatus.
oosit.
Namun.
ini
Kegiatan
tidak
detecfed
di
hadapan
01
cycloheximide,
sebuah
sintesis
protein
inhibitor.
faktor
sehingga
pretranslational
hulu
Kegiatan MPF dari benar tidak dikecualikan. Untuk menentukan apakah aktivitas MPF hadir
dalam
oosit
ikan
matang,
kita
diekstraksi
MPF
aktivitas
dari
human
chorionic
gonadotropin
(HCG)
-injected
dewasa
oosit ikan mas dan melahirkan secara alami oosit ikan mas (Nagahama
dan
Yamashita,
1988).
Ini
oosit
matang
hancur
oleh
ultrasentrifugasi pada 100, OOOxg selama 1 jam dalam buffer yang mengandung
inhibitor
fosfatase
dan
EGT
A.
Setelah
sentrifugasi,
lima
lapisan utama yang diperoleh, dari sentripetal ke kutub sentrifugal, adalah:
supernatan,
lapisan
hijau,
kuning,
korion,
dan
alveoli
kortikal.
Itu
Lapisan
hijau
diperkaya
dengan
organel
seluler
seperti
mitokondria
dan
retikulum
endoplasma.
Kegiatan
MPF
masing-masing
lapisan
ditentukan
menggunakan
Xenopus
oosit
injeksi
pengujian kadar logam. Kegiatan MPF terlokalisasi dalam supernatan dan hijau
lapisan;
injeksi
dari
lapisan
hijau
disebabkan
lisis
sel.
MPF
Kegiatan
itu
juga
diambil
dari
oosit
matang
in
vitro
oleh
17a, 20 ~ -dP, tetapi bukan dari oosit dewasa atau oosit diaktifkan.
Kegiatan
MPF
diekstrak
dari
ikan
juga
efektif
bila
disuntikkan
menjadi
oosit
ikan
dewasa
dalam
kondisi
protein
terhambat
perpaduan.
oosit
yang
disuntikkan
matang
lebih
cepat
dari
oosit
diinduksi untuk dewasa dengan inkubasi dengan 17a, 20B-DP: GVBD50 adalah
sekitar 2,5 jam dalam pematangan MPF-diinduksi, tapi sekitar 6 jam ketika
diinduksi
oleh
17a,
20B-DP.
GVBD
biasanya
terjadi
di
pusat
oosit
MPF-disuntikkan,
karena
pergerakan
GV
ke
hewan
kutub
tidak
terjadi.
migrasi
GV
selalu
terjadi
di
oosit matang secara alami, in vivo dengan HCG, atau in vitro oleh 17 (, (, 20BDP. Dengan
demikian,
aktivitas
MPF
pasca-translasi
hadir
dalam
matang
mas
dan
ikan
mas
oosit.
MPF
dari
oosit
matang
pada
ikan
mas
diinduksi
GVBD
saat
disuntikkan ke oosit Xenopus dan sebaliknya. Hal ini juga menunjukkan
sebelumnya
bahwa
ikan
mas
MPF
diinduksi
pematangan
dewasa
oosit
dari
laut,
Asterina
pectinifera
(Kishimoto,
1988).

Temuan
ini
konsisten
dengan
gagasan
bahwa
MPF
mirip
antara
vertebrata
dan
invertebrata
(Kishimoto,
1988).
pemurnian
MPF
dan
karakterisasi
Meskipun
upaya
di
beberapa
laboratorium,
kemajuan
dalam
MPF
pemurnian
telah
sangat
lambat
sampai
sangat
baru-baru.
terobosan
dalam pemurnian dicapai oleh Lohka et al. (1988), yang dimurnikan
XenopusMPF
sekitar
3.000
kali
lipat;
fraksi
MPF
ini
terkandung
dua
protein
dominan,
dengan
massa
molekul
relatif
34
dan
45
kDa,
masing-masing.
Mantan
protein
telah
diidentifikasi
sebagai
Xenopus
homolog
dari
protein
fisi
ragi
yang
dikode
oleh
gen
(Cdc2 +), yang diperlukan forthe G2 / M transisi dalam siklus sel mitosis
(Gautier et al., 1988). Produk dari gen cdc2 + adalah 34 kDa
serine
/
treonin
protein
kinase,
p34cdc2
ditunjuk
orcdc2
kinase.
Komponen
lain
dari
Xenopus
MPF,
protein
45
kDa,
memiliki
diidentifikasi
sebagai
Xenopus
B-tipe
cyclin
(Gautier
et
al.,
1990).
Mirip
MPF
juga
telah
dimurnikan
di
laut
(Labbe
et
al.,
1989a,
b).
Kami baru-baru ini dimurnikan dan ditandai MPF (Yamashita et al.,
1992a)
dan
histon
H1
kinase
(Yamashita
et
al.,
1992b)
dari
1 OO, OOOxg supernatan dari hancur, natu, sekutu ovulasi, yang tidak dibuahi
Telur ikan mas menggunakan empat langkah kromatografi termasuk Q_
Sepharose Fast-Flow, P13 ' "" - afinitas Sepharose, Mono S, dan
Superose
12.
aktivitas
MPF
dari
berbagai
fraksi
selama
pemurnian
ditentukan
oleh
Xenopus
oosit
uji
injeksi
mikro.
Analisis
dengan
SDS-gel
poliakrilamid
(PAGE)
menunjukkan
bahwa
kebanyakan fraksi aktif setelah Mono S berisi empat protein, dengan
massa
molekul
33,
34,
46,
dan
48
kDa.
Ketika
aktif
Fraksi setelah Mono S yang diterapkan untuk Superose 12, MPF dielusi sebagai
puncak tunggal dengan berat molekul yang jelas dari sekitar 100 kDa.
SDS-PAGE
dari
fraksi
aktif
setelah
Superose
12
mengungkapkan
empat protein yang sama seperti yang diperoleh setelah Mono S, menunjukkan bahwa
protein ini membentuk kompleks (es) dari sekitar 100 kDa di asli mereka
bentuk. Persiapan akhir dimurnikan lebih dari 1, ODD kali lipat dengan
pemulihan
sekitar
1%.
Disarankan
dari
perbandingan
komponen
dimurnikan ikan mas MPF dengan orang-orang dari Xenopus MPF bahwa di antara empat
protein yang ditemukan dalam ikan mas MPF, protein the34-kDa, dan protein 46- dan 48-kDa
sesuai
dengan
cdc2
kinase
dan
cyclin
B
dari
Xenopus
MPF,
masing-masing.
Untuk
sepenuhnya
ciri
empat
protein
ini,
kita
klon
cDNA
terisolasi
encoding
homolognya
ikan
MPFterkait
protein,
termasuk
cdc2
kinase
(Kajiura
et
al.,
1993),
Cdk2
kinase
(Hirai et al., 1992b), cyelin A (Katsu et al., Tidak dipublikasikan), dan cyclin
B (Hirai et al., 1992a) dari perpustakaan cDNA oosit ikan mas.
Monoclonalantibodies
againstthe
C-terminal
urutan
ikan
mas
cdc2
kinase
(Kajiura
et
al.,
1993),
hamparan
unik
16
amino
asam
(EGVPSTAIREISLLKE,
disebut
urutan
PSTAIR)
yang
sempurna dilestarikan di cdc2 kinase dan homolognya yang dari ragi
manusia
(Yamashita
et
al.,
1991),
urutan
C-terminal
ikan mas Cdk2 kinase (Hirai et al., 1992b), dan E.coli-diproduksi fulllength ikan mas cyelin
A
(Katsu
et
al.,
tidak
dipublikasikan)
dan
B
(Hirai
et

al.,
1992a)
dibesarkan.
Antibodi
monoklonal
yang
digunakan
untuk
mengkarakterisasi
ikan mas murni MPFwhich mengandung 33-, 34-, 46- dan 48-kDaproteins.
Kedua protein 33- dan 34-kDa diakui oleh antibodi antiPSTAIR, menunjukkan bahwa mereka
adalah
cyclin-dependent
kinase.
Antibodi
anti-cdc2
C-terminal
bereaksi
dengan
34-kDa,
tapi bukan protein 33-kDa. Yang terakhir ini diakui dengan anticdk2 C-terminal antibodi
(Hirai
et
al.,
1992b).
The
46dan
48-kDa
protein
diakui
oleh
panjang
anti-penuh
cyclin
B
antibodi,
tetapi
tidak oleh anti-cyclin A antibodi (Yamashita et al, 1992a;. Katsu et
al., tidak dipublikasikan). Hal ini disimpulkan dari temuan ini bahwa ikan mas MPF
adalah kompleks cdc2 kinase (34-kDa) dan cyclin B (46- dan 48-kDa).
aktivasi
MPF
Telah
dilaporkan
bahwa
pada
oosit
matang
dari
Xenopus
dan
bintang laut, cdc2 kinase membentuk kompleks dengan cyclin Bas pra-MPF. Sebaliknya,
oosit
ikan
mas
dewasa
mengandung
aktif
35.kDa
cdc2 kinase tapi tidak ada cyclin B, dan oosit matang mengandung kedua
35-kDa
tidak
aktif
dan
34-kDa
kinase
cdc2
aktif
dan
cyclin
B
(Hirai et a /, 1 992a;.. Katsu et al, 1993). Munculnya 34-kDa aktif cdc2 kinase bertepatan
dengan
munculnya
cyclin
8
hanya
betore
GVBD.
Anti-cyclin
B
immunobiots
dari
p13
'
""
endapan
dan
anti-cdc2
immunoblots
kinase
anti-cyclin
B
immunoprecipitates
menunjukkan
bahwa
pengikatan
cdc2
kinase
dan
cyclin
B
bertepatan
dengan
munculnya
cyclin
B
dan
34-kDa
aktif
cdc2
kinase.
The
cyclin
B
yang
muncul
selama
oosit
pematangan diberi label dengan 35S-metionin (Hirai et a /., 1992a),
mendemonstrasikan
de
novo
sintesis
selama
pematangan
oosit.
pada
ather
tangan,
anti-cyclin
immunoprecipitates
B
dari
oosit
matang
ekstrak
kadang-kadang
mengandung
35.kDa
aktif
cdc2
kinase
(Hirai
et
al.,
1992a),
dan
35-kDa
cdc2
kinase,
serta
34-kDa
bentuk, dapat mengikat cyclin B dalam sistem sel-bebas (Yamashita et a /.,
tidak dipublikasikan). Oleh karena itu, kemungkinan besar bahwa 35-kDa tidak aktif
cdc2 kinase mengikat de novo disintesis cyclin B pada awalnya, maka adalah
cepat
diubah
menjadi
bentuk
aktif
34-kDa
(Gambar.
4).
Hasil
sebelumnya
menunjukkan
bahwa
penampilan
ot
cyclin
B
diperlukan
dan
cukup
untuk
menginduksi
pematangan
oosit
in
ikan mas. Untuk mengkonfirmasi bahwa penampilan cyclin B cukup untuk
merangsang pematangan oosit, E. coli diproduksi panjang fult ikan mas
cyclin
B
protein
disuntikkan
ke
oosit
matang.
bahkan
di
bawah
kondisi
sintesis
protein
menghambat,
disuntikkan
cyclin
B menginduksi
pematangan oosit dalam 1 jam setelah injeksi dalam tergantung dosis
cara.
Pengenalan
ikan
mas
cyclin
B
ke
ikan
mas
dewasa
ekstrak
oosit
juga
disebabkan
cdc2
aktivasi
kinase,
bersamaan
dengan pergeseran massa molekul dari cdc2 kinase dari 35-ke 34-kDa, seperti yang
ditemukan
pada
oosit
matang
dengan
17a,
20B-DP.
Phosphoamino
analisis
asam
menunjukkan
bahwa
treonin
(THR)
fosforilasi
dari
34-kDa
cdc2
kinase
dan
serin
fosforilasi
cyclin
B
terkait
dengan
aktivasi.
Itu
fosforilasi yang sama ditemukan pada oosit matang oleh 17a, 20BDP. Cyclin B-diinduksi
aktivasi
cdc2
kinase
tidak
diamati
ketika

treonin
fosforilasi
cdc2
kinase
dan
serin
fosforilasi
ofcyclin
B
dihambat
oleh
inhibitor
protein
kinase,
meskipun
pengikatan
35-kDa
cdc2
kinase
cyclin
B
terjadi
bahkan
di
hadapan
inhibitor.
Sebaliknya,
cdc2
kinase
adalah
diaktifkan
dengan
siklin
mutan
yang
tidak
menjalani
serin fosforilasi
selama
aktivasi.
Situs
otthreonine
fosforilasi
pada
cdc2
kinase
dipetakan
ke
residu
Thr161.
Temuan
ini
menunjukkan
bahwa
yang
Thrl61
fosforilasi
cdc2
kinase,
tapi
tidak
serin
fosforilasi
cyclin
B,
diperlukan
untuk
cdc2
kinase
(MPF)
aktivasi
pada
oosit
ikan
mas.
Baru-baru ini kami telah mengisolasi klon cDNA encoding ikan mas
homolog
p40M015,
subunit
katalitik
dari
protein
kinase
yang
telah
ditunjukkan
untuk
mengaktifkan
cdc2
kinase
melalui
fosforilasi
ofThrl6t, dari cDNA library ikan mas oosit (Onoe et al .. 1993).
Northern
dan
Western
blot
mengungkapkan
bahwa
kedua
p40M015
mRNA
dan
protein
yang
sudah
ada
dalam
ikan
mas
dewasa
oosit
dan
tidak
muncul
untuk
menunjukkan
perubahan
terukur
selama hormon yang diinduksi pematangan (Onoe et a / .. 1993; Onoe,
tidak dipublikasikan). Dengan demikian, disarankan agar p40M015 mungkin itu sendiri
diatur
oleh
asosiasi
subunit
dan
/
atau
fosforilasi
protein.
Preferensi
substrat
p40M015
juga
perlu
ditentukan.
Pada
oosit
Xenopus,
defosforilasi
treonin
(ThrI4)
dan
tirosin
(Tyr15)
diperlukan
untuk
aktivasi
cdc2
kinase
(Malter,
1991).
Namun,
diragukan
fhat
tirosin
(Tyr15)
defosforilasi
cdc2
kinase
merupakan
prasyarat
untuk
aktivasi
selama ikan mas pematangan oosit, karena aktivasi tidak dihambat oleh vanadat, inhibitor
protein
fosfatase
umum
digunakan untuk menghambat aktivitas cdc25 yang dephosphorylates tirosin
(Tyrt
5)
ofcdc2
kinase,
sehingga
menghambat
aktivasi.
Selanjutnya,
antibodi anti-phosphotyrosine tidak bereaksi silang dengan 35-kDa cdc2 kinase, serta bentuk
34-kDa,
yang
mengikat
cyclin
B.
Juga,
sebuah
antibodi
yang
diakui
bentuk
dephosphorylated
dari Tyr15 bereaksi silang dengan kedua 34- dan 35-kDa cdc2 kinase.
Oleh karena itu, 35-kDa cdc2 kinase ditemukan di matang goidfish
oosit
mungkin
telah
de
terfosforilasi
pada
Thr14
dan
Tyr15
dan
fosforilasi
treonin
(ThrI61)
mungkin
hanya
diperlukan
untuk
aktivasi.
Secara
bersama-sama,
itu
sangat
disarankan
17a, 20B-DP menginduksi oosit untuk mensintesis Cyc / di B, yang pada gilirannya
mengaktifkan
sudah
ada
35-kDa
cdc2
kinase
melalui
treonin
nya
(Thr161)
fosforilasi,
memproduksi
34-kDa
cdc2
aktif
kinase.
Mekanisme
ini
aktivasi
MPF
pada
ikan
ternyata
berbeda
dari
mereka di Xenopus dan bintang laut, di mana cyclin B hadir dalam
oosit matang dan membentuk kompleks dengan cdc2 kinase (preMPF).
Struktur
teleost
testis
Testis
dari
teleosts,
seperti
yang
ot
vertebrata
lainnya,
terdiri
dari
(tubular)
kompartemen
interstitial
dan
lobular.
interstitium
antara
lobulus
terdiri
dari
sel-sel
interstitial
(sel
Leydig),
tibroblasts,
dan pembuluh darah dan limfe. Berbagai enzim yang terlibat dalam steroid

sintesis
hormon
telah
dibuktikan
oleh
histokimia
di
sel-sel
Leydig
dari
sejumlah
teleosts.
Sel-sel
ini
memiliki
ultrastructural fitur yang biasa ditemukan di sel steroid yang memproduksi
seperti
agranular
retikulum
endoplasma
dan
mitokondria
dengan
tubular
krista
(Nagahama,
1983).
The
lobular
(tubular)
komponen
dari testis teieost mengandung dua jenis sel: sel germinal dan berbeda
sel
somatik
liningthe
pinggiran
lobulus,
sel
Sertoli.
Ini
masih
sel
whetherSertoli
pasti
dapat
menghasilkan
steroid.
ultrastructural
Bukti
umumnya
tidak
menunjukkan
steroid
tor
kapasitas
sintetis
celis
ini.
Namun,
spesies
tertentu
tampaknya
memiliki
beberapa
fitur
histokimia
dan
ultrastructural
sesuai
untuk
steroidogenesis (Nagahama, 1983).
produksi
steroid
selama
spermatogenesis
Dalam sejumlah spesies teleost, seperti dalam spesies teleost lainnya,
kadar
plasma
testosteron
dan
11-ketotestosterone
tinggi
selama
tahap
spermatogenesis
dan
cepat
menurun
Aher
timbulnya
spermiation
(Fostier
ef
al,
1983;.
Ueda
ef
al
..
1983a),
Dalam
studi
Inkubasi
vifro
pada
11-ketotestosterone
produksi dengan fragmen testis pada tahap perkembangan yang berbeda
telah
mengungkapkan
bahwa
kapasitas
fragmen
untuk
menghasilkan
ini
steroid dalam menanggapi gonadotropin tinggi selama tahap-tahap selanjutnya
spermatogenesis
dan
cepat
menurun
setelah
onset
spermiation
(Sakai
ef
ai
"1989).
Hasil
ini
menunjukkan
bahwa
androgen
yang
terlibat
dalam
spermatogenesis
di
salmon
Amago.
Peraturan
hormonal
spermatogenesis
Spermatogenesis
pada
ikan
teleost
berlangsung
dalam
testis
kista dibentuk oleh sel-sel Ser10li. Dalam setiap kista pengembangan sel germinal
terjadi
serentak
(Grier,
1981;
Billard
ef
al
..
1982;
Nagahama,
1983; Callard. 1991) .Dalam belut Jepang laki-laki dibudidayakan. anguilla
japonica. satu-satunya sel germinal hadir dalam testis adalah tipe A dan
Jenis
awal
B
spermatogonium
yang
spermatogonium
primitif
yang
belum mulai berkembang biak. Dengan demikian, studi menggunakan hewan-hewan ini
dapat
memberikan
keuntungan
besar
atas
penggunaan
yang
sangat
sistem spermatogenik kompleks dalam vertebrata yang lebih tinggi. Tunggal
injeksi
HCG
untuk
laki-laki
ini
disebabkan
spermatogenesis
dalam
18days (Miura ef al., 1991a). Dalam waktu 1 hari aherthe HCG injection.
sel
Leydig
dan
sel-sel
Ser10ii
yang
nyata
diaktifkan.
Kemudian
(3
hari
setelah
injeksi
HCG).
spermatogonium
mulai
proliferasi.
dan
tipe
B
spermatogonium
muncul.
Berikut
kira-kira
10
mitosis.
spermatogonium
mulai
meiosis.
spermatosit
dengan kompleks synaptonemal pertama kali muncul di testis 12 hari setelah
injeksi.
Spermatid
dan
spermatozoa
yang
diamati
Aher
18
hari.
Sebuah serum bebas. sistem kultur organ rumus kimia untuk belut
testis
telah
dikembangkan,
dan
digunakan
untuk
mengetahui
pengaruh
HCG
dan
berbagai
hormon
steroid
pada
induksi
spermatogenesis
in
vitro.
Budaya
fragmen
testis
media
mengandung
HCG
diinduksi
seluruh
proses
spermatogenesis
dari spermatogonium premitotic ke spermatozoa dalam waktu 24 hari

(Miura
Al_
ef.
1991c).
spermatogenesis
HCG-induced
ini
disertai
dengan
aktivasi
ditandai
sel
Ser10li
dan
Leydig
sel,
terjadi
priorto
awal
proliferasi
spermatogonium.
aktivasi
sel
Leydig
ditandai
dengan
fitur
ultra
produksi
steroid
aktif.
Fur1hermore.
penambahan
HCG
untuk
media
kultur
yang
mengandung
fragmen
testis
diinduksi
ditandai,
peningkatan
pesat
dalam
produksi
11-ketotestosterone.
hasil
ini
menunjukkan
bahwa
gonadotropin
memicu
spermatogenesis
di
Jepang
belut. dan selanjutnya menunjukkan bahwa efek ini dari gonadotropin dimediasi
melalui
tindakan
sel
somatik
testis,
mungkin
melalui
produksi
11-ketotestosterone
oleh
sel
Leydig.
saran
ini
dikonfirmasi
oleh
eksperimen
budaya
organ
menunjukkan
bahwa
11-ketotestosterone
dapat
menginduksi
semua
tahapan
spermatogenesis
termasuk
spermatogonium
proliferasi,
pembelahan
meiosis
dan
spermiogenesis di vifrowithin 21 hari (Miura ef al., 1991d) (Gambar. 5).
11-ketotestosterone
juga
menyebabkan
aktivasi
sitologi
ditandai
sel Ser10li, tetapi tidak sel Leydig. menunjukkan bahwa aksi 11-ketotestosterone pada
spermatogenesis
dimediasi
melalui
Tindakan
sel
Ser10li.
Ini
adalah
sistem
hewan
pertama
di
mana
Seluruh
proses
spermatogenesis
telah
diinduksi
oleh
hormon
manipulasi
in
vitro.
Aktivin
B:
mediator
potensi
gonadotropin-diinduksi
spermatogenesis
Seperti
dijelaskan
di
atas,
perubahan
morfologi
sel
germinal.
sel Leydig. dan sel Ser10li yang pertama terlihat satu hari Aher HCG
pengobatan. Kami telah menggunakan hibridisasi subtraktif untuk mengidentifikasi
gen yang diekspresikan secara berbeda di testis belut di 24 jam pertama
setelah
pengobatan
HCG
in
vivo,
yang
akhirnya
menyebabkan
spermatogenesis.
Satu
up-diatur
cDNA
diisolasi
dari
perpustakaan cDNA subtraktif berasal dari mRNA yang diekstrak dari
mengontrol testis dan testis satu hari setelah suntikan tunggal HCG.
Dari
urutan
asam
amino
dideduksi
nya.
klon
ini
diidentifikasi
sebagai
coding
untuk
subunit
aktivin
B.
Nukleotida
urutan
belut
aktivin B cDNA adalah 3_3 kb. Sebuah kodon metionin pada nukleotida 1572
memulai reading frame panjang terbuka menentukan protein dari 395
asam amino. Menggunakan analisis blot Utara dan hibridisasi in situ
teknik,
kami
menguji
perubahan
berurutan
di
transkrip
testis
aktivin
B
selama
spermatogenesis
HCG-diinduksi.
Tidak
transkrip untuk aktivin B yang ditemukan di testis sebelum injeksi HCG.
Sebaliknya. 3.3 transkrip kb mRNA untuk aktivin B yang menonjol
di
testis
satu
hari
setelah
injeksi.
Konsentrasi
transkrip
mulai
berkurang
tiga
hari
setelah
injeksi. diikuti oleh penurunan tajam fur1her oleh sembilan hari. Itu
aktivin B mRNA ekspresi HCG tergantung pada testis dikonfirmasi oleh hibridisasi in situ
menggunakan
RNA
digoksigenin-Iabeled
menyelidiki; sinyal dibatasi untuk sel Serfoli di testis diobati dengan
HCG
untuk
satu
fo
tiga
hari.
Diambil
bersama-sama.
tindings
ini
menunjukkan
urutan
berikut
ef
induksi
hormonal
spermatogenesis
pada
belut.
Gonadotropin merangsang sel Leydig untuk menghasilkan 11-ketotestosterone. yang, pada

gilirannya,
mengaktifkan
sel-sel
Sertoli
untuk
menghasilkan aktivin B. Aktivin B kemudian bertindak pada spermatogonia untuk
menginduksi
mitosis
yang
mengarah
ke
pembentukan
spermatosit.
produksi
steroid
selama
pematangan
testis
akhir
17a,
20B-DP
telah
dilaporkan
tinggi
dalam
plasma
atau
serum
beberapa
spesies
ids
salmon
selama
spermiation
(Scott
dan
Baynes,
1982;
Ueda
dkk.,
1983a,
b,
1984).
Selain
itu,
kapasitas
fragmen
testis
untuk
menghasilkan
17a,
20B-DP
rendah
selama
spermatogenesis
dan
meningkat
tajam
pada
saat
spermiation
(Ueda
et
ai,
1983b;
Sakai
et
Al"
1989).
Dengan
demikian,
berbeda
pergeseran
jalur
steroidogenik
dari
androgen
ke
17a,
20B-DP
tampaknya
terjadi
di
testis
dari
Amago
salmon
sekitar
onset
dari spermiation (Sakai et al., tidak dipublikasikan). Hasil ini menunjukkan
bahwa
17a,
20B-DP
berperan
dalam
proses
testis
akhir
atau
pematangan
sperma
dalam
beberapa
teleosts.
Menggunakan
tiga
persiapan
testis
yang
berbeda
(testis
utuh
fragmen,
fragmen
testis
sperma
bebas
dan
sperma
persiapan),
kami
meneliti
peran
somatik
testis
dan
unsur
sel
benih
dalam
produksi
testis
gonadotropin-induced
dari
17a,
20B-DP
(Ueda
et
al.,
1984).
fragmenfs
testis
utuh
menghasilkan sejumlah besar 17a, 20B-DP dalam menanggapi gonadotropin
atau
17a-hidroksiprogesteron.
Gonadotropin
tidak
merangsang
17a, 20B-DP produksi oleh salah satu fragmen testis sperma bebas
atau persiapan sperma, tapi nyata dirangsang 17ahydroxyprogesterone produksi oleh
fragmenfs
testis
sperma
bebas.
Baik
fragmen
testis
sperma
bebas
atau
persiapan
sperma
saja
yang
mampu
menghasilkan
17a,
20B-DP
dalam
menanggapi
gonadotropin.
17a-Hidroksiprogesteron
nyata
dirangsang
17a, 20B-DP produksi persiapan sperma, buf bukan dengan persiapan testis spermIree.
Akhirnya,
17a,
20B-DP
diidentifikasi
sebagai
satu-satunya
metabolit
utama
saat
persiapan
sperma
diinkubasi
dengan
[
"C]
17a-hidroksiprogesteron.
Hasil
ini
menunjukkan
bahwa
lokasi
17a,
produksi
20B-DP
adalah
sperma,
tetapi
produksinya
tergantung
pada
penyediaan
prekursor
steroid
(mungkin
17a-hidroksiprogesteron)
yang
diproduksi
oleh
sel
somatik
testis
di
bawah
pengaruh
gonadotropin.
Itu
Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa distribusi 20B-HSD di testis dari
spermiating rainbow trout terbatas hanya untuk sperma. Baru-baru ini,
Asahina et al. (1990) melaporkan bahwa terisolasi sperma dari fhe umum
ikan mas mengandung 20a-HSD. Sebaliknya, Loir (1988) melaporkan bahwa di
spermiating
pelangi
trout
berbagai
persiapan
sel
testis
sebagian besar tanpa sperma mensekresikan 17a, 20B-DP terlepas dari
gonadotropin
stimulasi.
Spermiation
Meskipun
spermatozoa
ikan
di
testis
sudah
selesai
dua divisi meiosis, mereka mungkin tidak subur. Sebagai contoh, salmonid
spermatozoa
di
testis
yang
imotil,
dan
memperoleh
motilitas
mereka

selama
perjalanan
melalui
saluran
sperma
(Morisawa
dan
Morisawa,
1986). Selanjutnya, spermiation, yang merupakan prasyarat untuk sukses
fertilisasi,
umumnya
terjadi
pada
teleosts
segera
sebelum
atau
selama pemijahan hasil period.The dijelaskan di atas menunjukkan kemungkinan keterlibatan
dari
17a,
20B-DP
dalam
proses,
dari
spermiation.
Ini
sangat
didukung
oleh
penelitian
kami
menunjukkan
bahwa
suntikan
tunggal
gonadotropin untuk non-spermiating Amago salmon diinduksi dewasa sebelum waktunya
spermiation
1-2
bulan
sebelum
periode
spermiation
normal,
bersamaan-dengan peningkatan yang ditandai dalam kadar plasma dari 17c..t, 20BDP.
Demikian
pula,
dua
suntikan
berturut
17Cl,
20B-DP
disebabkan
dewasa sebelum waktunya spermiation, tapi respon terhadap 17a, 20B-DP adalah dari
skala yang lebih kecil daripada gonadotropin. testosteron dan tidak pula
ll-ketotestosterone
efektif
(Ueda
et
al
..
1985).
dianggap
togefher, hasil ini memberikan bukti yang menunjukkan 17a itu, 20BDP adalah mediator
steroid
testis
dari
gonadotropin-diinduksi
spermiation
di
id
salmon.
Saran
serupa
juga
telah
dibuat
untuk
ikan
mas
(Kobayashi
et
al.,
1986).
sperma
motilitas
Dalam
ikan
salmonid
seperti
masu
salmon,
Oncorhynchus
masou,
sperma di testis dan saluran sperma tidak motil. Jika saluran sperma
sperma diencerkan dengan air segar, maka untuk pertama kalinya, mereka mendapatkan
motilitas. Jika testis sperma diencerkan dengan air segar, namun, mereka
tidak akan menjadi motil. Dengan demikian, dua proses yang terpisah yang terlibat
dalam induksi motilitas sperma pada id salmon. Salah satunya adalah akuisisi
kemampuan motil ketika bergeser dari testis ke saluran sperma, dan
lainnya adalah inisiasi motilitas bila diencerkan dengan air segar. Di awal musim kawin,
namun,
sperma
dari
saluran
sperma
tidak
mendapatkan motilitas bahkan ketika mereka diencerkan dengan air tawar. Ini
karakteristik,
yaitu
periode
di
mana
sperma
menjadi
motil,
membuat
masu
salmon
sistem
yang
baik
untuk
mempelajari
mekanisme
endokrinologis
terlibat
dalam
akuisisi
sperma
motilitas.
Efek
dari
dua
suntikan
intramuskular
setiap
hari
berturut-turut
tiga
hormon
steroid
pada
perolehan
motilitas
sperma
di
masu
salmon
selama
musim
kawin
awal
diperiksa
(Miura
et
al.,
1991
b).
Suntikan
17a,
20B-DP
signifikan
mengangkat
persentase
sperma
motil
dan
durasi
motilitas
sperma.
Di
Sebaliknya, dua steroid lainnya menunjukkan tidak berpengaruh signifikan terhadap
motilitas sperma. efek stimulasi yang sama 17a, 20B-DP pada sperma
motilitas yang diamati pada belut Jepang (Miura ef al., 1991 e).
Hasil
suggestthat
17a,
20
B-DP
terlibat
dalam
akuisisi
motilitas
sperma
di
masu
salmon
dan
belut.
Wethen
meneliti
efek
dari
17a,
20B-DP
pada
pengembangan
motilitas
sperma
in
vitro.
Dalam
hal
ini,
saluran
sperma
imotil
spermatozoa tidak mengembangkan motilitas ketika mereka diinkubasi di
plasma mani buatan pada pH 7,4 yang mengandung berbagai dosis
17a, 20B-DP, menunjukkan 17a itu, 20B-DP tidak memiliki tindakan langsung pada
pengembangan
motilitas
sperma.
Percobaan
berikutnya
adalah
dirancang
untuk
menentukan
dampak
dari
suntikan
hormon
pada
pH
plasma mani di saluran sperma, karena kami menemukan bahwa pH

plasma
mani
dari
laki-laki
masu
salmon
selama
pembibitan
awal
musim,
ketika
spermatozoa
dalam
saluran
sperma
masih
imotil,
secara signifikan lebih rendah (pH 7,4-7,5) dibandingkan dengan saluran sperma
laki-laki
selama
musim
kawin
aktif
(pH
8,5).
Kedua
SGA
dan
17a,
20B-DP
signifikan
meningkatkan
pH
dari
saluran
sperma
dari
7,4-8,0.
Sebaliknya,
suntikan
ini
tidak
meningkatkan
pH
testis.
Baik
11-ketotestosterone
atau
suntikan
testosteron
yang efektif dalam meningkatkan pH dari testis atau sperma saluran.
Secara
kolektif,
hasil
ini
menunjukkan
bahwa
aksi
17a,
20B-DP
pada
akuisisi
motilitas
sperma
dimediasi
melalui
peningkatan
pH
dari
saluran
sperma.
Pada
percobaan
berikutnya.
pengaruh
pH
pada
akuisisi
motilitas
sperma
diselidiki.
Ketika
imotil
spermatozoa
dikumpulkan
dari
testis
diinkubasi
dalam
plasma
mani
buatan
dari berbagai pH, spermatozoa tersebut diperoleh kapasitas untuk motilitas
dalam
plasma
mani
buatan
pH
lebih
tinggi
dari
7,8.
Selanjutnya,
spermatozoa
diinkubasi
di
kisaran
pH
8,0-9,0,
yang
sama
pH
kisaran
af
yang
akuisisi
motilitas
sperma
terjadi,
memiliki
signifikan
peningkatan
kadar
cAMP.
Imotil
testis
spermatozoa
juga diperoleh motilitas ketika diinkubasi dengan dbcAMP, tapi tidak dengan
dbcGMP
(Miura
ef
al.,
tidak
dipublikasikan).
Secara bersama-sama, temuan yang dijelaskan di atas membawa kita untuk menyimpulkan
Berikut
urutan
untuk
akuisisi
motilitas
sperma
di
masu
ikan salmon; gonadotropin merangsang testis untuk menginduksi produksi
dari 17a, 20B-DP, yang bertindak untuk meningkatkan pH saluran sperma, ini pada gilirannya
meningkatkan cAMP dalam sperma yang memungkinkan akuisisi motilitas sperma
(Gambar.
6).
Kesimpulan
Artikel
ini
menyajikan
gambaran
saat
ini
regulasi
hormonal
gametogenesis
pada
teleosts.
mediator
steroid
pertumbuhan
oosit,
pematangan
oosit,
spermatogenesis,
dan
pematangan
sperma
memiliki
telah diidentifikasi dalam beberapa spesies teleost, khususnya di salmonids.
Dalam kedua perempuan dan laki-laki, pergeseran steroidogenik yang terjadi
segera
sebelum
oosit
dan
pematangan
sperma
tampaknya
langkah prasyarat untuk pertumbuhan sel-sel germinal untuk memasuki tahap akhir
pematangan.
switch
ini
membutuhkan
kompleks
dan
terintegrasi
jaringan
regulasi
gen
yang
melibatkan
sel-kekhususan,
hormonal
regulasi,
dan
pola
perkembangan.
pusat
upaya
kami
saat
ini
pada
kloning
dan
sekuensing
gen
yang
mengkode
beberapa
enzim steroidogenik bertanggung jawab untuk estradiol-17B, 11-ketotestosterone dan 17a,
20B-DP
biosintesis.
Kami
kemudian
akan
menyelidiki bagaimana gonadotropin dan faktor lainnya bertindak atas gonad
sel somatik untuk menghidupkan dan mematikan ekspresi spesifik ini
gen
pada
waktu
tertentu
selama
berbagai
tahap
gametogenesis.
mediator
non-steroid
lainnya
yang
mengatur
gametogenesis
ikan
juga
telah
ditentukan.
Ini
termasuk
MPF
(mediator
17a, aksi 2013-DP pada pematangan oosit) dan aktivin B (mediator
dari
11-ketotestosterone
tindakan
pada
spermatogenesis).
temuan
ini
pada teleosts mungkin salah satu contoh terbaik didokumentasikan dari
peran
hormon
steroid
dalam
regulasi
gametogenesis
di

vertebrata,
dan
tentunya
akan
memberikan
dasar
untuk
tingkat
molekul
regulasi
hormonal
pembangunan
sel
dan pematangan.

studi
di
germinal