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MINISTERIO DE EDUCACION NACIONAL

UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
Nit. 891.190.346-1
GUIA PRÁCTICA N.

“xxx”
NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP) DE COLIFORMES TOTALES Y
FECALES
PRUEBA PRESUNTIVA Y CONFIRMATIVA
OBJETIVO
Objetivos específicos
La obtención de microorganimso coliformes totales se fundamenta en
la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con
producción de ácido y gas al incubarlos a 35°C +/- 1°C durante 48
horas, usando un medio que contenga sales biliares.
Fase Presuntiva. El medio de cultivo que se utiliza en algunas
ocasiones el caldo lauril sulfato de sodio el cual permite la
recuperación de microorganismo que sean capaces de utilizar la
lactosa como fuente de carbono.
Fase Confirmatoria. Se emplea como medio de cultivo el caldo
lactosado bilis verde brillante, selectivo y solo permite el desarrollo de
aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares
como el verde brillante.
MUESTRA: Aguas residuales o un alimento sin cocción de venta
callejera. Buscar una tabla para Número más probable
Está conformado por cuatro géneros principales: Enterobacter,
Escherichia, Citrobacter y Klebsiella.
PROCEDMIENTO PRUEBA PRESUNTIVA
PREPARAR EL ÁREA DE TRABAJO
1. Preparación del medio de cultivo
Tome un frasco de caldo Brilla o caldo lactosado bilis verde brillante;
lea las instrucciones de preparación y calcule la cantidad en gramos
necesaria para preparar 90 ml de caldo.
Pese la cantidad de reactivo necesaria y dilúyalo con agua destilada.
Pipetee 10 ml de caldo en tubo tapa rosca con campana de Durham.
Coloque los tubos en una gradilla y esterilize en autoclave por 15
minutos.
Laboratorio de Biotecnología y control de calidad microbiológico
Email: gbiotecnologiaccm@gmail.com Tel: 3002821190

Laboratorio de Biotecnología y control de calidad microbiológico Email: gbiotecnologiaccm@gmail. 2. Homogenice Muestra líquida: Destape cuidadosamente el empaque del alimento.346-1 Deje enfriar y verifique que no haya burbujas de gas en las campanas. Incubación Incubar a 35°C +/.1%. Homogenice Prepare la dilución 10-2. Agregue la muestra a 90ml de agua peptonada al 0. Homogenice 3. si hay formación de gas. tome 10ml de la muestra.1%. Realizar prueba confirmativa. Preparación de la muestra Prepare la dilución 10-1: Muestra sólida: Tome 10g de la muestra y macere hasta que sea posible diluir. Use una pipeta estéril de 1ml y tome 1 ml de la dilución 10-1 y agréguelo a un tubo con 9ml de agua peptona al 0.com Tel: 3002821190 . 3 de cada dilución 4. tomar una asada de los tubos positivos y sembrar por aislamiento en una caja de Petri con Agar EMB (Eosina Metil Blue ) o VRB ( Rojo Neutro. continuar la incubación hasta las 48 horas. Bilis. Con la ayuda de una pipeta estéril y un pipeteador.2 por 24-48 horas Revisar los tubos a las 24 horas. Agar). Siembra Pipetee 1ml de cada una de las diluciones en tres tubos con 10 ml de caldo Brilla marcado con el número de la dilución 9 tubos en total.190. 891. Agregue la muestra macerada en 90ml de agua peptonada al 0. si no hay formación de gas.MINISTERIO DE EDUCACION NACIONAL UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Nit. Realizar prueba confirmativa a los tubos que presenten turbidez y/o formación de gas Realizar informe de acuerdo a la tabla de NMP PROCEDIMIENTO PRUEBA CONFIRMATIVA Con un asa redonda.1%.

346-1 Incubar las cajas invertidas a 35°C +/. agregue unas gotas de reactivo de Kovacs para evaluar la producción de indol. Siembre una asada en un tubo con caldo Brilla y campana de Durham y en un tubo con caldo triptófano. Incubar por 48 horas.190. Cuál es la diferencia entre coliformes totales y fecales? ANEXAR LA TABLA DE MC CRADY Buscar… Castillo Jorge – Aspectos estadísticos del análisis microbiológico www. Lectura e interpretación de resultados.com Tel: 3002821190 .MINISTERIO DE EDUCACION NACIONAL UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA Nit. ¿Cuál es el fundamento bioquímico de la prueba de triptófano? 2. Calcule el NMP de acuerdo a la tabla PREGUNTAS 1. ¿Cuáles son los componentes de los medios EMB y VRB y cuál es la función de cada uno de ellos? 3. siga este procedimiento. 891.u-cursos.cl/ingenieria/2004/2 Laboratorio de Biotecnología y control de calidad microbiológico Email: gbiotecnologiaccm@gmail. Se consideran coliformes fecales si hay producción de gas e indol.2°C por 24 horas Leer las colonias compatibles con coliformes (Revisar bibliografía) Anotar el número de tubos confirmado como positivo Para calcular el NMP de organismos coliformes por gramo o mililitro utilizar la tabla COLIFORMES FECALES A partir de los tubos positivos realice la prueba de Mac – kenzie. Evalúe la producción de gas en la campana de Durham y en el caldo triptófano.

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