MEDIOS DE CULTIVOS

Los componentes de los medios de

cultivo son de naturaleza qumica,
desempean un rol esencial en los
procesos
porque
requerimientos del crecimiento
formacin de productos
suministrar energa para la sntesis
de metabolitos y mantenimiento
celular.

CAROLINA VITA

Diseo y optimizacin
de medios de cultivo
Optimizacin de la expresin
celular:
Produccin

de algn producto
Aumento de produccin de biomasa
Mejorar la velocidad o rendimiento
de algn producto

Efectores que intervienen en el

crecimiento y formacin de
productos :
Efectores intracelulares

informacin gentica que posee el MO.

Puede ser modificada por el agregado o
extraccin de genes.
Efectores extracelulares son los
factores del entorno que pueden
modificar la expresin:
fsicos y qumicos

Efectores extracelulares
Fisicoqumicos
Relacionados con las
caractersticas del sistema
de cultivo
pH

Agitacin
Aeracin

formacin de
espuma
nutrientes del
medio de cultivo

presin osmtica
estado redox
parmetros fsicos
como T y P

Categorias de nutrientes
Macronutrientes

[ g/l ]

Representados por: fuentes de C, N, S, P, K y Mg;

Micronutrientes

[mg/l o g/l]

o elementos trazas

Representados por: sales de Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y

Co
Factores de crecimiento
componentes orgnicos suministrados en []
no son sintetizados ni metabolizados por las
clulas, son incorporados a estructuras
celulares y de funcin metablica especfica,
como vitaminas, aa, cidos grasos no
saturados, etc..

Clasificacion de medios

Por naturaleza qumica de los componentes,

medios sintticos o medios qumicamente

definidos
2. medios complejos en cuya composicin son
sustancias de origen animal o vegetal como
peptonas, extracto de levadura, macerado
de maz, harina de soja, etc.
qumicamente indefinidas y de composicin
variable.
1.

Diseo

Finalidad: eleccin de los componentes

necesarios para lograr el crecimiento y
la formacin de productos
Debe tener en cuenta:
los requerimientos nutricionales del MO
la disponibilidad real de los
componentes

Requerimientos nutricionales
Los requerimientos nutricionales estn
determinados por el tipo de metabolismo
celular
Autotrfico:

MO que obtienen el carbono del

C02 (algas y algunas bacterias)

heterotrficos: necesitan compuestos

orgnicos como fuente de carbono

Otro factor esencial es el 02( aerobico o

anaerobico)
Las fuentes de carbono cumplen tambin el rol de
ser fuente de energa.

Requerimientos
nutricionales
Fuentes de nitrgeno
De

naturaleza inorgnica u orgnica.

Es utilizado para la biosntesis de

protenas, cidos nucleicos y
polmeros de la pared celular.

Requerimientos
nutricionales
otros

macronutrientes como el P y el
S son suministradosen forma de P04
H y S04 (o aminocidos azufrados).
El P se incorpora en cidos nucleicos,
y polmeros celulares.
El S es asimilado para la sntesis de
aa azufrados, y adems se necesita
para la biotina, coenzima A, tiamina
y otros componentes.

Requerimientos
nutricionales

K y Mg son esenciales

Una parte importante del K est unida al RNA

El in K actua como coenzima y
probablemente acta como catin en la
estructura aninica de varios componentes
celulares.
El in Mg es esencial para la estabilidad de
los ribosomas y actua como cofactor en
numerosas reacciones del metabolismo.
K y Mg se incorporan como sales de fosfato y
sulfato.

Requerimientos
nutricionales
los micronutrientes se distinguen 2 categoras
1. frecuentemente esenciales para el
crecimiento como Ca, Mn, Fe, Co, Cu y Zn y
b)
2. raramente esenciales como B, Na, Al, Si, Cl,
V, Cr, Ni, As, Se, Mo,
Sn, e I.
A veces es difcil demostrar un requerimiento
de un micronutriente
porque generalmente est presente en
suficiente cantidad como impureza de los
componentes principales.

Disponibilidad de los
componentes
Los nutrientes adems de estar presentes en
el medio de de cultivo, deben estar
disueltos para estar disponibles para ser
usados por la clula.
POR QU PUEDEN NO ESTAR
DISPONIBLES?
la esterilizacin por calor. Se debe tener en
cuenta la T, tiempo de calentamiento, pH
del medio
reacciones
entre componentes antes,
durante o despus de la esterilizacin

Disponibilidad de los
componentes
Es importante tener en cuenta la
naturaleza de los compuestos
orgnicos que tienen capacidad para
actuar como ligandos, y
el ion metlico considerado

Importante: [ ] libre del in

Modificacin de la calidad
nutricional de un medio de
cultivo durante la
esterilizacin
Los cambios
que se producen
durante la esterilizacin pueden ser
importantes
A veces puede haber modificaciones
beneficiosas o perjudiciales
dependiendo del tiempo de
esterilizacin.

Modificacin de la calidad
nutricional del medio por la
esterilizacin
Los aa y factores
de crecimiento son muy
lbiles al calor. puede sufrir
descomposicin.

se recomienda esterilizarlas por filtracin.

Las sales de NH4 + se deben autoclavar a
pH 7 o menor se volatiliza.
La esterilizacion por calor depende tambin
de la T, duracin del calentamiento, pH del
medio, y de la agitacin.

Los HPO4 utilizados como fuente de P y buffer

deben esterilizarse separados de las sales de
Mg, con Na, K y NH4
NaMgPO4
NH4MgPO4
KMgPO4

poseen baja solubilidad

Los PO4 deben esterilizarse

separadamente
de las sales de Mg y NH4

 Los

azcares pueden descomponerse por la

accin del calor en presencia de sales
inorgnicas y compuestos amnicos.
sales, H+
sacarosa
hidroliza

Los

grupos carbonilos de los azcares con los

grupos amino de las protenas, aminocidos,
etc., dan productos de condensacin (reaccin
de Maillard), los cuales disminuyen
significativamente las cantidades de
carbohidratos y N amnico disponible.
azcares reductores + -NH2
condensacin
Los carbohidratos se deben esterilizar por
separado de los compuestos nitrogenados
orgnicos.

Disponibilidad de los
nutrientes

Es aconsejable entonces, esterilizar los

componentes de los medios de cultivo en
fracciones separadas:

Fraccin 1: Fte. de C, micronutrientes, sales de Mg, Ca,

etc.

Fraccin 2: Fte. de N en caso que se descomponga

por calor (urea) debe esterilizarse por filtracin, o
en caso de que reaccione con la fuente de C
puede esterilizarse por calor pero separadamente.

Fraccin 3: Vitaminas y factores de crecimiento . Se

preparan soluciones 1000 veces mas
concentradas y se esterilizan por filtracin.

Fraccin 4: Fosfatos, se esterilizan por calor.

Materias primas
fundamentales
Los

componentes empleados en la
industrias:
costo
disponibilidad
estabilidad en su composicin qumica
el costo de los nutrientes representa
entre al 10 y el 60% del costo total de
mucho productos obtenidos por
fermentacin

Materias primas
fundamentales
Las

fuentes de carbono pueden

1. Hidratos de carbono como glucosa o
dextrosa, sacarosa, lactosa, almidn,
dextrina;
2. Alcoholes como el glicerol y manitol
3. Hidrocarburos como hexadecano,
octadecano y otros.

Materias primas
fundamentales
Las fuentes de nitrgeno
Inorgnica: amonaco o sales de amonio.
Las orgnicas estn representadas por
varios productos, como ser:
1. Hidrolizados de protenas (Peptonas) que
son obtenidas por hidrlisis cida o
enzimtica de distintas fuentes proteicas
como carne de animales, pescado, casena,
gelatina, harina de soja, algodn,
girasol,etc..

2.
3.

4.
5.

Materias primas
fundamentales

Extracto de carne, que se obtiene por

extraccin acuosa y concentracin posterior
Extracto de levadura, que puede ser
obtenida mediante autlisis o plasmlisis de
la levadura,
Extracto de malta, que es el extracto
soluble en H2O de la malta de la cebada
"Cornsteep", el agua de maceracin de la
industria del maz se utiliza como
componente esencial de los medios para la
produccin de antibiticos y enzimas.

Diseo, Formulacin,
Optimizacin de medios de
Diseo: Eleccincultivo
de los componentes

necesarios para lograr el crecimiento y la

formacin de productos

Formulacin:

Proporciones,
concentraciones de cada componente.

Optimizacin:

Encontrar la mejor
formulacin para lograr el objetivo (mx
biomasa, producto, etc.)

Formulacin
La

formulacin tiene que ver con los

aspectos cuantitativos de los medios
establecer las concentraciones de
cada componente a ser utilizadas.

Optimizacin

1.
2.

3.

4.

Pueden ocurrir situaciones en las cuales sea

imperativo la optimizacin de los medios de
cultivo.
Podemos mencionar las siguientes:
Existencia de limitaciones nutricionales ocultas
(microelementos y factores de crecimiento)
Uso de medios con exceso respecto de los
requerimientos nutricionales del mo que pueden
causar inhibicin del crecimiento.
Ensayo de sustancias estimulantes, activadoras e
inhibidoras del crecimiento y formacin del
producto.
Empleo de fuentes nutricionales no
convencionales.

Optimizacin
La

metodologa ms elemental consiste en

realizar experimentos, en los cuales se
vara la [] del componente a ensayar
mantenindose constante las [] de los
dems.
Para organismos aerobios generalmente se
utiliza como sistema de cultivo
erlenmeyers agitados.
se analiza el efecto de la variable escogida
sobre la velocidad de crecimiento y la [] de
biomasa obtenida.