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HISTOLOGÍA Y EMBRIOLOGÍA 2ºC 2013

ANÁLISIS DE UN TRABAJO CIENTÍFICO
Objetivos de la actividad:
-

Conocer la estructura de un trabajo científico

-

Analizar un trabajo científico relacionado con la disciplina Histología y Embriología
Veterinaria

Actividades:
1-Especificar:
a) Título del trabajo
Vitrificación de tejido ovárico porcino: efecto de diferentes agentes crioprotectores en la
preservación de la morfología de folículos prenatales.
b) Lugares de trabajo (instituciones participantes y países de los autores)
Artículo de investigación realizado por Gabriel, P. (cátedra de física biológica), Torres, P.
(cátedra de física biológica), Boviez, J. (cátedra de histología), Cisale, H. (cátedra de física
biológica), Lombardo, D.M (cátedra de histología) y Fischman, ML. (Cátedra de física
biológica) todos pertenecientes al Instituto de investigación y tecnología en reproducción
animal de la facultad de ciencias veterinarias de la Universidad de Buenos Aires.
c) Partes del trabajo (subtítulos), aclarando de qué trata cada una.
Resumen: La vitrificación de tejido ovárico permite conservar gran cantidad de ovocitos
contenidos en folículos preantrales (FPA). El objetivo del presente trabajo fue analizar el efecto
de distintas combinaciones de crioprotectores en la preservación de la estructura histológica de
FPA porcinos durante la exposición (toxicidad) y en el proceso de vitrificación. Se analizó la
respuesta frente a distintos crioprotectores. Los FPA primordiales tratados con etilenglicol
presentaron menor cantidad de alteraciones morfológicas, En los FPA primarios el etilenglicol
resultó menos tóxico. La vitrificación en presencia de concentraciones crecientes de sacarosa
disminuyó significativamente el porcentaje de folículos primordiales normales. Para todos los
tratamientos, los folículos primarios presentaron más daños. En conclusión, el medio de
elección para la vitrificación resultó ser TCM 199-Hepes con 30% etilenglicol y 0 o 0,25M de
sacarosa.
Introducción: Almacenar gametas y embriones es una herramienta fundamental para
salvaguardar material genético de especies en peligro de extinción o de individuos con
genotipo destacable para su especie.
La criopreservacion de ovocitos en diferentes estadios de maduración meiotica tiene resultados
aleatorios debido a múltiples factores. El tamaño de los ovocitos y las características de su
membrana citoplasmática hacen q los procesos de deshidratación y reemplazo del agua

De Bouin. Las células germinales contenidas en los FPA son menos vulnerables al daño criogénico. De vitrificación. Se han realizado ensayos con esta técnica en porcinos obteniendo resultados poco satisfactorios lo cual llevo a plantear la vitrificación como alternativa.  14 muestras de cada ovarios (n= 10). pudiéndose producir liberación prematura de los gránulos corticales y en consecuencia el endurecimiento de la zona pelucida además. estos ovocitos son más pequeños. 2 para control. De equilibrio durante 5min. Experimento 1: Determinación de la respuesta folicular a distintos agentes crioprotectores permeables. De equilibrio durante 5min a Tº ambiente. Obtención del tejido ovárico:  Ovarios de faena  Colectados en frigorífico  Transportados a 32-35 ºC  Lavados con Sc.  Control: se fijó en Sc. De vitrificación y llevadas a nitrógeno líquido durante 1 semana. Las muestras para toxicidad fueron lavadas y fijadas y las muestras para vitrificación colocadas en criotubos con Sc. colocada 1min en Sc.intracelular por agentes crioprotectores sea difícil. 2 para control.  Toma de muestra de láminas de corteza ovárica de 5x2x1 mm utilizando cuchillas de micrótomo. Bouin 24hs y luego a formol al 5% hasta procesamiento histológico. rodeados por menos celular de la granulosa. carecen de zp y de gránulos corticales y tienen escasa cantidad de lípidos intracitoplasmaticos. Los criotubos son llevados a nitrógeno líquido luego descongelado y enfrentado 5 min a una Solución de lavado y finalmente fijadas en Sc. en consecuencia. aneuploidia.  Todas las muestras luego de ser fijadas fueron deshidratadas.  Control: ídem experimento 1. descongeladas a Tº ambiente 5min. incluidas en parafina y cortadas con micrótomo. el resto para toxicidad y vitrificación.  Vitrificación: enfrentadas a Sc. Fisiológica estéril  Procesados a 20ºC dentro de las 5hs posteriores a la faena. como son arrestados en la profase de la 1ra división meiotica.  En función a los resultados del experimento 1 se utilizó etilenglicol como agente crioprotector permeable. clarificadas. Bouin. disminuyen los riesgos de alteración genética y favorece reparación posterior de organelas y otras estructuras. lavadas con SB y finalmente fijadas con Sc.  Tinción con H-E  Microscopia de campo claro (400X) Experimento 2: Determinación de la respuesta de FPA a la vitrificación frente a concentraciones crecientes de sacarosa. Luego se colocaron en Sc. el huso meiotico se despolimeriza ocasionando la migración de los cromosomas y. el resto para vitrificación. presentan baja tasa metabólica. Metodología: Reactivos: en todos los casos M199 y suero fetal bovino.  10 muestras de cada ovario (n= 10).  Teñidos con H-E .  Toxicidad y vitrificación: expuestas a Sc. De vitrificación durante 1min.

25M) aumenta la cantidad de folículos preantrales normales al descongelado. se observó que el porcentaje de folículos dañados fue mayor al emplear concentraciones más elevadas.dimetilsulfóxido. Folículos primordiales (ovocitos rodeados por monocapa de células de la granulosa plana) y folículos primarios (ovocitos rodeados por monocapa de células de la granulosa cuboides). 0M: 48%. Agradecimientos: Agradecimientos a personas involucradas en el trabajo y al establecimiento donde se realizó. 1M: 9%).  Para la aparición de lesiones foliculares: estadística descriptiva (tablas y gráficos de frecuencia). . los folículos primarios presentaron más daños. Conclusiones: De acuerdo a los resultados obtenidos se sugiere que. en la especie porcina. En cuanto a la vitrificación en presencia de sacarosa. normales y anormales. DMSO: 17% y etilenglicol + DMSO: 26%. etilenglicol. y concentraciones mayores (0. etilenglicol: 34%). p<0. 20% suero fetal bovino 0 ó 0. el estadio folicular mas resistente es el de folículo primordial y el mejor medio para la vitrificación TMC 199-Hepes con agregado de 30% de etilenglicol. Los resultados concuerdan con lo descripto por Moniruzzaman. Fabbri demostraron que las sustancias ACP permeables .preservan la integridad estructural y funcional de la membrana celular. Discusión: Los resultados obtenidos permitieron determinar que la mera exposición a las soluciones de vitrificación (ensayo de toxicidad) produce alteraciones morfológicas en los FPA primordiales y primarios.75M: 12%. quienes sugieren que el agregado de bajas concentraciones de sacarosa al medio de vitrificación (hasta 0. Friedman. Análisis estadísticos:  Para experimentos: test no paramétrico de la varianza por rangos de Friedman.25M de sacarosa.  Dos categorías según el daño. 0.05). Los folículos primordiales resultaron más resistentes a los primarios. propilenglicol y glicerol.  Para saber si vitrificación fue equivalente en ambos experimentos: test de la mediana para muestras independientes. Microscopia de campo claro (400x) Criterios de clasificación y evaluación folicular:  Dos categorías según morfología de las células de la granulosa.50M) incrementan el número de ovocitos y células de la granulosa anormales. Para todos los tratamientos. La vitrificación en presencia de concentraciones crecientes de sacarosa disminuyó significativamente el porcentaje de folículos primordiales normales (Control: 64%. Este hecho podría deberse a que los primarios han comenzado diferenciación y crecimiento y por ende son mas sensibles al efecto toxico de los distintos ACP y a las bajas temperaturas. En los FPA primarios el etilenglicol resultó menos tóxico (Control: 70%. 0. Resultados: Los FPA primordiales tratados con etilenglicol presentaron menor cantidad de alteraciones morfológicas que los expuestos a DMSO y a la combinación de etilenglicol + DMSO (Control: 87%. etilenglicol: 52%.25M: 42%. mientras que la respuesta a la vitrificación del grupo etilenglicol + DMSO fue superior (20%).

Sacarosa: modifica el gradiente osmótico promoviendo la deshidratación celular e inhibiendo la formación de cristales intracelulares. La ventaja de esta técnica es que no se produce formación de cristales de hielo que romperían las células. Objetivo: Analizar el efecto de distintas combinaciones de agentes crioprotectores en la preservación de la estructura histológica de FPA porcinos durante la exposición y en el proceso de vitrificación. Esta deshidratación se logra incorporando un agente crioprotector al medio de congelación. Al ser congelados los tejidos. 6. el cual puede ser permeable o impermeable. también estabiliza los fosfolípidos presentes en la membrana celular e incrementa la supervivencia celular luego del descongelado. y durante la introducción se amplia.¿En qué parte del trabajo se especifican el o los objetivos? En el resumen se presenta el objetivo. Vitrificación: técnica empleada para llevar a cabo la investigación Porcino: animal doméstico elegido para la obtención de los ovocitos. gráficos de columnas. 2.Mencione todas las técnicas que se emplearon y elija una de ellas para explicar su fundamento. carente de toda estructura cristalina. tipos de gráficos. necesitan ser deshidratados parcialmente a fin de evitar la formación de cristales que lesionan las estructuras citoplasmáticas. 4. Ovario – vitrificación – porcino – crioprotectores – sacarosa Ovario: se utiliza su tejido ya que permite conservar gran cantidad de ovocitos.Enuncie las formas que usaron los autores para la presentación de los resultados (dibujos.). microfotografías. Criopreservacion Vitrificación: es el proceso de conversión de un tejido en un sólido amorfo similar al vidrio. etc. Las palabras clave son una lista de términos descriptivos del contenido principal del artículo.Bibliografía : Enumeración de todos los trabajos citados en este articulo d) las palabras clave y averigüe cuál es su importancia. además de la rápida velocidad de enfriamiento.Enuncie los objetivos y/o hipótesis planteados en el trabajo. 3. disminuyendo la formación de cristales de hielo en el interior de la célula. tablas. En este trabajo se utilizaron. Crioprotectores: cumplen la función de reemplazar al agua intracitoplasmatica. Es necesario seleccionar estos términos cuidadosamente para que el artículo se clasifique correctamente y llegue a más investigadores. tablas y micrografías. 5. . también es importante que no sea tóxico.Explique las conclusiones arribadas (no confunda conclusiones con resultados y discusión cuya implicación es la interpretación de los mismos de acuerdo a los antecedentes sobre el tema).

8..Indique si la bibliografía o referencias incluyen citas actualizadas (de los últimos cinco años). Effect of hydroxyapatite nanoparticles on MII-stage porcine oocytes vitrification and the study of its mechanism 10. Revista de Salud Animal. 34(1).Se llegó a la conclusión de que en la especie porcina el estadio folicular más resistente seria el folículo primordial.google. Wang. VIABILIDAD DE OVOCITOS PORCINOS INMADUROS Y MADURADOS in vitro VITRIFICADOS CON ETILÉN GLICOL Y TREHALOSA. F.Enuncie los interrogantes que plantean los autores para futuros estudios sobre el tema. E. W. J. las incluye son 7 en total e incluyen los años: 2009. y el medio para la vitrificación seria TCM 199-Hepes con agregado de 30% de etilenglicol. 2012.. (2012). H. Fernández Reyes.. VIABILIDAD DE OVOCITOS PORCINOS INMADUROS Y MADURADOS in vitro VITRIFICADOS CON ETILÉN GLICOL Y TREHALOSA 2. 9. & Castellanos García. Sí. D.. 7. (2013).25M de sacarosa. 2.. Los autores señalan que es importante tener en cuenta que existen diferencias especieespecificas en las propiedades de las membranas de las celular ováricas. Zhou.. 789-793.2010. Zhang.Consigne los buscadores usados y escriba las citas siguiendo las formas del trabajo analizado. Hernández Pichardo. Liu. Li. .es/ 1. B.. [Effect of hydroxyapatite nanoparticles on MII-stage porcine oocytes vitrification and the study of its mechanism]. Dai. Buscador utilizado: Google académico http://scholar. X. 46-52. 30(4). haciendo que la permeabilidad de los agentes crioprotectores varíe en función a la especie estudiada. Sheng wu yi xue gong cheng xue za zhi= Journal of biomedical engineering= Shengwu yixue gongchengxue zazhi. 1. L. & Xu.. J. 20% de suero fetal bovino 0 o 0. G.Busque al menos dos trabajos actuales sobre el tema a través de buscadores online que les sugerirá su tutor.