Protocolo para la extraccin de ADN bacteriano por el mtodo

CTAB.
1. Se toma 5ml (o 3 dependiendo del crecimiento) de un cultivo
bacteriano de 24H de crecimiento y se centrifuga a 14,000 rpm por 1
minuto para obtener la masa celular.
2. Se agrega 500l de amortiguador CTAB (CETAB 2% + 1.4 M NaCl) y
agregar 2% v/v de mercaptoetanol. NOTA: Se calienta a 60 o C antes
de incorporarla. La mezcla se incuba a por 15min a esta temperatura.
3. Dejar enfriar a temperatura ambiente adicionar 250l de cloroformo
y 250l de fenol saturado. Se agita por inmersin hasta obtener una
consistencia lechosa.
4. Centrifugar a 12,000 rpm por 10min.
5. Pasar el sobrenadante a un nuevo tubo y adicionar 250l de
cloroformo a fin de eliminar las trazas de feno y centrifugar a 12,000
rpm por 10min.
6. El sobrenadante agregar 0.1 volmenes de acetato de sodio 3M (pH
5.2) y 0.6 vol. de alcohol isoproplico (300l) para precipitar el ADN.
7. Incubar por 2hras a -20o C y centrifugar a 10,000 rpm por 15min.
8. Lavar la pastilla con etanol al 75% y centrifugar a 7,500 rpm por
5min.
9. Repetir el paso 8.
10.Re suspender la pastilla en un volumen adecuado de agua estril.
11.Medir la concentracin de ADN a 260nm.
12.Realizar una electroforesis.