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    ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD MANUEL DE METODOS ANALITICOS HARINA Y ACEITE DE PESCADO PRIMERA EDICION ABRIL 2000 0. mm WW. VL VIL vu. Ix. XI XI xin XIV. Xv. DETERMINACION DE PROTEINA DETERMINACION DE GRASA DETERMINACION DE HUMEDAD DETERMINACION DE CENIZAS. DETERMINACION DEL CONTENIDO DE CLORUROS DETERMINACION DE ARENA. DETERMINACION DEL CONTENIDO DE. NITROGENO AMONIACAL DETERMINACION DE ANTIOXIDANTE DETERMINACION DE HISTAMINA, DETERMINACION DE DIGESTIBILIDAD ‘TORRY MODIFICADO DETERMINACION DE LA GRANULOMETRIA NUMERO DE FLUJO DETERMINACION DE HUMEDAD DE ACEITE DETERMINACION DE LA ACIDEZ LIBRE DE ACEITE DETERMINACION DE PROTEINA SOLUBLE 10 2 4 16 2 24 33 39 al B 48. 50. DETERMINACION DE PROTEINA CRUDA DO KJELDAHL OBJETIVO Determinar el contenido de Proteina en Harina de Pescado. METODO Método Kjeldahl PRINCIPIO Se basa en la conversién del Nitrogeno Orginico a Nitrégeno inorginico, (digestion de acuerdo al método Kjeidahl). El Sulfato de Amonio asi formado es diluido yy alcalinizado con Hidréxido de Sodio liberindose Amoniaco. El amoniaco es destilado y recibido en u volumen conocido de Acido sulfiirico y determindndose la cantidad de amonio titulando el Acido remanente con una solucién basica valorada. La digestin de la materia orginica por dcido sulfirico se realiza en presencia de un catalizador. El resultado de la reaccién es un producto alcalino que después se destila y titula el amoniaco liberado. Se calcula ef contenido de nitrégeno y multiplicando este resultado por el factor de conversién 6.25 se obtiene el contenido de proteina bruta. EQUIPOS Y MATERIALES 4.1 Balanza Analitica, con sensibilidad de 0,1 mg. 4.2 Equipo Kjeldahl de Digestién: calentador eléctrico, con regulador de temperatura, con un sistema de extraccién de los gases a generarse durante Ja digestion. 4.3 Equipo Destilador Kjeldahl. Consiste en una trampa de bulbo, conectada a u refrigerante, cuyo extremo inferior debe estar apenas sumergido en la solucién absorbente contenida e un erlenmeyer. La conexién entre la trampa de bulbo y el condensador debe hacerse con un angulo tal, que no permita que las gotas retenidas pase al refrigerante. 4.4 Balones Kjeldahl de una capacidad de 800 ml 4.5 Erlenmeyer de una capacidad de 500 ml 4.6 Bureta automatica de 50 ml. 4.7 Dispensador automatico para acidos inorganicos fuertes. REACTIVOS 5.1 Acido Sulfiiico concentrado (H:SO,) P.A. - libre de nitrégeno, densidad a 20°, 1.84 g/ml 5.2. Sulfato de Potasio Anhidro (K2S0,) P.A. 5.3 Sulfato de Cobre Pentahidratado (CuSO, 5H:0) P.A. 5.4 Hidréxido de Sodio en solucién al 33% por peso (m/m) 5.5 Cera parafinada 5.6 Solucién indicadora de Rojo de Metilo (1 gramo de rojo de metilo en 100m! de Metanol P.A 5.7 Acido sulfirico 0.1N estandarizado. 5.8 Solucién Hidrdxido de Sodio 0.1'N estandarizado. 5.9 Acetanilida (P.A), material estindar con contenido de nitrogeno 10.36% 5.10 Triptéfano con contenido de nitrégeno de 13.72% 5.11 Sacarosa, libre de nitrogeno 5.12 Papel tornasol 5.13 Ayuda para la ebullicién: Granallas de Zine. Piedra pomez granulada, perlas de vidrio de 5 a 7 milimetros de didmetro o virutas de carburundum lavadas en acido clorhidrico y agua destilada y Hevadas a cenizas. PROCEDIMIENTO Digestién de materia orginica. a) Pesar 1g de muestra preparada con una aproximada de 1 mg y colocar dentro en el balén de digestion Kjeldahl b) Aftadir 15g de sulfato de potasio Anhidro y 1g de sulfato de cobre Anhidro c) Afiadir 25 ml. de acido sulfirico concentrado, mezclar completamente asegurando que toda la muestra a ensayarse quede totalmente humedecida. 4) Colocar el balén de modo que su eje quede inclinado en un angulo de 30° a 45° de la vertical, mantener el balén en esta posicién todo el tiempo de calentamiento. Calentar el balén moderadamente al comienzo para prevenir el espumeo que se produce en el cuello del balén, agitando de tiempo en tiempo hasta que la masa se haya carbonizado y haya desaparecido el espumeo. Luego llevar a ebullicién vigorosa, hasta que la solucién quede limpia y se mantiene el calentamiento durante 2 horas. ©) Se debe evitar que queden adheridas sustancias orginicas en las paredes del balén para prevenir las pérdidas de nitrégeno, éstas no deben sobrecalentarse. £) Dejar enfriar a temperatura ambiente, Si empieza a solidificarse afiadir algo de agua y mezelar con agitacién. Destilacién del Amoniaco a) Después de entriar se diluye el liquido, agregando cuidadosamente 400 ml de agua destilada. El sulfato debe disolverse totalmente y la solucién acida debe ser bien enftiada. ) Afiadir cualquiera de los agentes antiespumantes mencionados. ©) Agregar 100 ml de hidréxido de sodio al 3% cuidando de hacerlo resbalar por Jas paredes del balén, con esto se consigue volver el contenido fuertemente 4) Inmediatamente, se debe conectar et balin al bulbo del refrigerante, el otro extremo del refrigerante o su prolongacién debe estar sumergido en 100 ml. de acido sulfiirico 0.1N contenidos en el erlenmeyer. Se agita el balén para mezclar perfectamente ef contenido y se calienta hasta que todo el amoniaco haya destilado, hasta un volumen aproximado de 300 ml. (volumen total). ©) Antes de retirar el erlenmeyer se lava con agua destilada el extremo o su prolongacién del refrigerante. ©) Afiadir 25 ml. de dcido sulfirico concentrado, mezclar completamente asegurando que toda la muestra a ensayarse quede totalmente humedecida. 4) Colocar el balén de modo que su eje quede inclinado en un angulo de 30° a 45° de la vertical, mantener el balén en esta posicién todo el tiempo de calentamiento. Calentar el balén moderadamente al comienzo para prevenir el espumeo que se produce en el cuello del balén, agitando de tiempo en tiempo hasta que la masa se haya carbonizado y haya desaparecido el espumeo. Luego llevar a ebullicién vigorosa, hasta que la solucién quede limpia y se mantiene el calentamiento durante 2 horas. ©) Se debe evitar que queden adheridas sustancias organicas en las paredes del balon para prevenir las pérdidas de nitrogeno, éstas no deben sobrecalentarse. ) Dejar enfriar a temperatura ambiente, Si empieza a solidificarse afladir algo de agua y mezelar con agitacién. Destilacién del Amoniaco a) Después de enfriar se diluye el liquido, agregando cuidadosamente 400 ml de agua destilada, El sulfato debe disolverse totalmente y la solucidn ficida debe set bien enfriada, b) Afiadir cualquiera de los agentes antiespumantes mencionados. ©) Agregar 100 ml de hidréxido de sodio al 3% cuidando de hacerlo resbalar por las paredes del balén, con esto se consigue volver el contenido fuertemente alealino, 4) Inmediatamente, se debe conectar el balén al bulbo del refrigerante, el otro extremo del refrigerante o su prolongacién debe estar sumergido en 100 ml. de ficido sulfiirico 0.1N contenidos en el erlenmeyer. Se agita el balén para mezclar perfectamente el contenido y se calienta hasta que todo el amoniaco haya destilado, hasta un volumen aproximado de 300 mi, (volumen total) ©) Antes de retirar el erlenmeyer se lava con agua destilada el extremo 0 su prolongacién del refrigerante f) Titular el exceso de Acido sulfirrico con una solucién de hidréxido de sodio 0.1N, usando rojo de metile como indicador. El indicador se vuelve amarillo ene el punto final 2) Prueba en blanco: Para probar la pureza de los reactivos se debe correr un blanco (digestion, destilacién) afiadiendo 2g de sacarosa libre de nitrogeno. h) Prueba de comprobacién: Efectuar una prueba de comprobacién determinando el contenido de nitrogeno de acetanilida mas 1g de sacarosa. La recuperacién de la acetanilida debe ser por lo menos 99.5% para la acetanilida 7. CALCULOS Y EXPRESION DE RESULTADOS 7.1 Céilculo del contenido de proteinas GP = (Vg = Vy) x 0.0140067 x Nx Fx fs x 100 w donde: Vo = Gasto de NaOH 0.1N de la prueba en blanco vi = Gasto de NaOH 0.1N de la muestra 0.140067 = Miliequivalente de nitrégeno N = Normalidad de la solucin fs = Factor de solucién F = Factor de conversién de Nitrégeno a Proteina (6.25) w = Peso de la muestra 1.2 Precision La diferencia entre los resultados de dos determinaciones llevadas a cabo por el mismo analista en forma simulténeo no deberd exceder el 4% REFERENCIA: Método : ISO 5983, Segunda Edicién 1997 - 11 - 01 DETERMINACIO’ PROTEINAS CRUDA EN EQUIPO BUCHI 1. EQUIPOS Y MATERIALES Ld 12 1) 14 Ls 1.6 7 21 22 23 24 25 2.6 2, 28 29 Balanza Analitica, con sensibilidad de 0,1 mg Digestor BUCHI 426 Digestor BUCHI 323 Modeladora | Mole Tubos a BUCHI x 200 mi Erlenmeyer o vasos de una capacidad de 500 ml Bureta automatica de 50 ml REACTIVOS Acido Sulfitrico concentrado (H,SO,) P.A. - libre de nitrégeno, densidad a 20°C - 1,84 g/ml Sulfato de Potasio Anhidro (KS0,) P.A. Sulfato de Cobre Pentahidratado (CuSQ,.5H:0) P.A Hidrdxido de Sodio en solucién al 40% por peso (m/m) Solucién indicadora de Rojo de Metilo (1 gramo de rojo de metilo en 100 ml de Metanol P.A. Acido Sulfirico 0,25N estandarizado Solucién Hidréxido de Sodio 0,25 estandarizado Acetanilida (P.A), material esténdar con contenido de nitrdgeno 10,36% Tript6fano con contenido de nitrdgeno de 13,72% 2.10. Sacarosa, libre de nitrégeno, 3. PROCEDIMIENTO. 31 32 Pesar 1,00 g de muestra homogeneizada. Colocar la muestra en tubos Bachi que contienen 9,00 g de Sulfato de Potasio Anhidro y 1,00 g de Sulfato de cobre, luego aftadir 20 ml de Acido Sulfiirico concentrado. 3.3. Instalar los tubos en el Digestor BUCHI, regulando la entrada de agua y aumentando la temperatura gradualmente, de la siguiente manera: ESCALA. TIEMPO (min) \ 4 20 1 20 10 60 3.4 Deberd aumentarse la escala del equipo como se detalla, en el punto c), sin embargo estos valores y tiempos son obtenidos a partir que la muestra se toma de color verde esmeralda, mas 5 minutos donde finaliza la digestién. 3.5 Terminada la digestion dejar enfriar los tubos a temperatura ambiente y agregar 30 ml de agua destilada. (En caso de trabajar con Destilador Buchi 316, agregar 100 mt de agua destilada y proceder al destilado. 3.6 Llevar los tubos a destilar en el Bachi 323, programando el equipo para que adicione: © 40 ml de agua destilada para diluir la solucién acida. ‘= 70 ml de‘OH al 40% (hasta obtener una coloracién negruzca, para hacer la solucién fuertemente alcalina) ‘+ Tiempo de destilado: 10 minutos (recibir aprox. 350 mi de destilado) 3.7. El destilado se recibe en 35 ml de Acido sulfiurico 0.25N, al que se ha agregado 03 gotas del indicador rojo de metilo, 3.8 Titular el exceso de la solucién cida, con la solucién alcalina de Hidréxido de Sodio al 0.25 N estandarizada, 3.9. Prueba en blanco: Para probar la pureza de los reactivos se debe correr un ‘blanco (digestion, destilacién) afiadiendo 2g de sacarosa libre de nitrégeno. De esta forma determinamos el valor de Vb. 4. CALCULOS (Vp = Vey x 2.18855 %P = Pm Vo : Volumen del gasto para el blanco Ve : Volumen del gasto para la muestra Pm : Peso de la muestra 2.18855 6,25 x0,25N x 14,0067 x 100 1000 En el caso de la materia prima, ésta se realiza en base seca y el procedimiento ¢s igual al andlisis de harina, el % de Proteinas de la materia prima se calcula: %P = (Vy Va) x 2,18855. x (1 -H/100) Pm Donde Hi: % de agua de ta materia prima, DETERMINACION DE GRASA OBJETIVO La presente norma establece un método para la determinacién del extracto de hexano en la harina de pescado. PRINCIPIO DEL METODO La grasa se extrae con un solvente (hexano) y el extracto obtenido se pesa despues de la evaporacién del solvente. EQUIPOS Y MATERIALES 3.1 Balanza Analitica con sensibilidad 0.1 mg 3.2. Equipo de extraccién tipo Soxhlet u otro equivalente (Bachi 810) 3.3. Estufa de secado con regulador de temperatura automatic 34 Dedal de extraccién, libre de aceites y_grasas 3.5. Desecador de vidrio con silica gel u otro deshidratante 3.6 Calentador eléctrico con termostato 3.7 Algodén hidr6filo, libre de grasa. REACTIVOS 4.1. Hexano técnico, compuesto basicamente de hidrocarburos con seis étomos de carbono, del cual menos del 5% destilado bajo 50° Cy mis del 95 % entre 50° C y 70° C. Su valor de bromuro debe ser menor de 1. Sino se dispone de este tipo de hexano puede usarse otro equivalente, pero en ambos solventes el residuo de evaporacién debe ser menos de 2 mg por 100 ml. PROCEDIMIENTO 5.1 Se pesa 2,000 gr. de nuestra en papel de filtro y se forma ef dedal de extraccién, 5.2 Se tapa el dedal conteniendo la muestra con el algodén, 5.3. Se coloca el dedal de extraccién en la camara de extraccién se hace con hhexano durante 04 horas, regulado la temperatura, de manera que los sifones ‘ocurra 15 veces por hora. El extracto de hexano se recibe en vaso Buchi seco y tarado. 5.4 Elextracto obtenido, se evapora y se seca en la Estufa a 103 °C + - 2°C por 01 hora, se enfria en el desecador hasta temperatura ambiente y se pesa el vaso o balon. 6. CALCULOS: Py =P) x 100 P donde : G = Contenido de grasa en porcentaje de masa P = Peso de la muestra en gramos. P= _ Peso del vaso o baldn vacio en gramos P: = Peso del vaso 0 balén residuo seco. oh PRECISION : La diferencia entre los resultados de dos determinaciones sucesivas Ilevadas a cabo simulténeamente 0 en répida sucesién por el mismo analista no debe excederde 0.2% REFERENCIA N.T.P. - 204.033. Marzo 1985. HARINA DE PESCADO- ‘Norma Panamerica COPANT 720 - 1975, Mayo de 1975 DETERMINACION DE HUMEDA| 1, OBJETIVO Determinar el contenido de humedad en la harina pescado. 2. PRINCIPIO DE METODO Se basa en la pérdida de masa del_ producto bajo ciertas condiciones de secado. 3. EQUIPOS Y MATERIALES, * Balanza Analitica, con 0,5 mg de sensibilidad * Placas Petri provistas de tapas. * Estufa eléctrica de secado rapido, bien aislada y con termostato automético, Esta estufa debe ser capaz de calentarse de nuevo rapidamente después de abrirse, La temperatura de 103° C debe distribuirse uniformemente ( 1° C de tolerancia ). Se requiere una ventilacién del fondo hacia arriba. * Desecador de vidrio con silica gel como indicador. 4. PROCEDIMIENTOS 4.1 Pesar 5,0000 g de nuestra con una aproximacién de 1 mg, en placa petri o pesa filtros que haya sido secada y tarada. 4.2 Colocar la placa Petri abierta conteniendo la muestra en la estufa, previamente calentada a 103° C por espacio de 4 h 4.3. Después de transcurrida las 4 horas se tapa la placa ripidamente y se coloca en el desecador hasta que haya alcanzado la temperatura ambiente ' 4.4 Pesar exactamente con la aproximacion de 1 mg. 5. CALCULOS: % Humedad = (MO-M1) 100 MO donde : MO ~Es la masa en gr. de la muestra original. MI = Es la masa en gr. de la muestra después de Secado, 6. PRECISION Y EXACTITUD La diferencia entre los resultados de dos determinacién, Mevadas a cabo simulténeamente 0 en répida sucesién por el mismo analista no debera exceder el mismo analista no debera exceder el 0.2%. REFERENCIA TSO/DIS 6496 : 1995 N.T.P. - 204.030.1985 HARINA DE PESCADO Determinacién del contenido de humedad. DETERMINACION DE CENIZAS OBJETIVO Determinacién de las Cenizas en la Harina de Pescado. PRINCIPIO DEL METODO El se basa en la descomposicién por incineracién y pesado de la ceniza obtenida EQUIPOS Y MATERIALES 3.1 Balanza Analitica con sensibilidad de 0,1 mg 3.2. Homo de mufla eléctrico a 550° C con termostato, cw 3.3. Crisoles de porcelana, con un diémetro minimo 4.4 (nm/o area equivalente 3.4 Estufa de Secado a 103°C + 2°C ; 3.5. Desecador con silica gel con indicador. 3.6 Homilla de Plancha o quemador de gas. PROCEDIMIENTO 4.1 Se pesan exactamente 2 g de la muestra preparada, con una aproximacién de 0.1 mg. en un crisol previamente calentado por lo menos 30 minuto a 550° C. enfriando en un desecador y tarado con una aproximacion de 0.1 mg. 4.2 Se coloca la muestra sobre una hornilla de plancha a fuego lento hasta que la muestra esté completamente carbonizada. 4.3. Se coloca la muestra dentro del horno mufla a una temperatura de 550° C durante 4 horas, 4.4 Se inspecciona visualmente si la Ceniza esti libre de particulas carbonosas. Si todavia no lo esta se vuelve a colocar el Crisol en el Hono y se calienta 1 n caso que todavia sean visibles las particulas carbonosas, 0 hr. adicional, si existe alguna duda al respecto de deja enfriar las cenizas se humedecen con agua y se evapora cuidadosamente hasta el secado en la estufa a una temperatura de 103°C + 2° C se vuelve a colocar el erisol en el homo y se calienta por 1 hr. mas 4.5 Finalmente, se coloca el crisol en el desecador, se le enfria a temperatura ambiente y se pesa con una aproximacién de 1 mg. 5. CALCULOS: La Ceniza cruda expresada como porcentaje en masa, se determina por medio de Ja siguiente formula Leeniens

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