Está en la página 1de 7

CUANTIFICACINDEPROTENAS

FelipeMoraRestrepo
femorare@unal.edu.co
Biologa
BrandomCamiloMosqueraCadena
bcmosquera@unal.edu.co
Biologa
UNIVERSIDADNACIONALDECOLOMBIA
Bogot5deOctubredel2015

1.HIPTESIS
En la cuantificacin de protenas de la harina de haba se espera obtener un dato de
concentracin (mg de protena/ 100g de harina de haba) mayor por el mtodo de Kjeldahl
queporelmtododeBiuret.
Adicionalmente se espera obtener un valor de porcentaje de protena entre 7,9% y 15,8%
comoindicalaliteratura.
(1)(2)(3)

2.RESULTADOS

A continuacin se muestran los datos obtenidos por los grupos la curva de calibracin
utilizada para cuantificar la cantidad de protenas por el mtodo de Biuret y las
concentraciones halladas,adems delosrespectivosresultadosobtenidosporelmtodode
Kjeldahl.

Datosobtenidosporlosgrupos
Tabla1.Datosdeabsorbanciaobtenidosporlosgruposdelaboratorioparaelpatrnde
albminaydelamuestraproblema

CurvadecalibracinparacuantificacindeprotenasporelmtododeBiuret
Para realizar la curva de calibracin se promediaron las absorbancias obtenidas por los
gruposyseobtuvolaconcentracinenmiligramosdealbminaconlaquetrabajocadauno

Tabla2.Datosdeconcentracindealbminayabsorbanciautilizadosparaelaborarla
curvadecalibracin

Grfica1.Curvadecalibracinobtenidautilizandocomopatrnalbmina

Tabla3.Concentracindelamuestraproblemahalladaporcadagrupo


Tabla4.Medidasdedispersinobtenidasdelasconcentracionesdeprotenashalladaspor
cadagrupo

Tabla5.DatosmtododeKjeldahl

Tabla6.ConcentracionespormtododeKjeldahl

3.CLCULOS

Biuret

Concentracindeprotenaenlamuestraproblema

1
.
Dato=0,219en0,5mldelamuestra

0, 219 = 0, 0505x + 0, 0007 x = 4, 32mgdeprotenaen0, 5mldelamuestra

4,32mgdeprotena
10800mgdeprotena
100mL
* 8gharina * 100g = 100gdeharina
0,5mL
2.
Dato=0,436en1,0mldemuestra

0, 436 = 0, 0505x + 0, 0007 x = 8, 61mgdeprotenaen1, 0mldelamuestra

8,61mgdeproteina
10762mgdeproteina
100mL
* 8gharina * 100g = 100gdeharina
1,0mL

Kjeldahl


ConversinentremolaridadynormalidadparaelHCL=
N=M*H+
N=9,672mM*1H+=9,672mN
PorcentajedeprotenaporelMtododeKjeldahl

%Nt =

(V mV b)NHCL*14*100
Pesodemuestra(mg)

%P rotenabruta = %Nt * 100


16

8g
1000mg
Pesodelamuestra=
2ml * 100ml
* 1g = 160mgdeharina

Concentracincalculadausandoelvolumenusadodeladigestinde
15min

%Nt=((2,650,25)*0,009672N*14*100)/160mg=0,203

%protenabruta=0,203*(100/16)=1,27%

8g
1000mg
Pesodelamuestra= 2ml * 100ml * 1g = 160mgdeharina

1,27gproteina
100gdeharina

1000mgproteina
1gproteina

mgdeproteina
= 12, 7mgproteina
gharina 12, 7 * 100 = 1270 100gdeharina

Concentracincalculadausandoelvolumenusadodeladigestinde1
hora

(16,250,25)*0,00967*14*100
%Nt =
= 1, 35%
160

%proteinabuta = 1, 35 * 100
16 = 8, 46%

8,46gproteina
100gdeharina

1000mgproteina
1gprotena

mgdeproteina
= 84, 6mgproteina
gharina 84, 6 * 100 = 8460 100gdeharina

4.ANLISISDERESULTADOS

Dado que la cuantificacin de protenas por el mtodo de Kjeldahl es en realidad


una estimacin de protenas y que lo que verdaderamente mide esla cantidadde
nitrgeno total en la muestra
(3)
, se esperaba que se obtuviera un dato de
concentracin mayor en este, aun as se puede ver queseobtuvoundatoinferior
con un 8,46 % para la digestin completa, respecto al 12,7% obtenido por el
mtodo de biuret. Al ser el mtodo deKjeldahluna estimacin, est sujeta a estar
tantoen valores porencimacomopordebajorespectoalotromtodo,pueshayque
recordar que para hacer la conversin entre nitrgeno total y protenas en la

muestra se lleva a cabo una multiplicacin por 6,25, valor que puede variar
dependiendodelacantidaddenitrgenoquehayencadaprotena.
(4)

Adicionalmente se puede observar que la digestin incompleta arroj un dato de


porcentaje de protena mucho menor que la digestin completa (1,27% y 8,46%
respectivamente) , esto es explicable por el tiempo transcurrido ya que no todo el
nitrgeno logr convertirse en amonio, que este luego es elque se alcaliniza para
formar amoniacoyque en presencia de cido brico se transforma enNH4H2BO3,
queeslamolculaquesevaloraenlatitulacinconelHCl
(5)

El porcentaje de protena presente en la harina de haba quese esperaba obtener


estaba entre 7,9% y 15,8%.El valorobtenido enel laboratorio fue de 8,46% por el
mtodo de Kjeldahl acercndose as al valor reportado por USDA (
United States
Departament of Agriculture) ques de 7,92%
(1)
,yde 12,7%por biuret acercndose
alvalorreportadoporLpezCyBermdezASquesde12,89%
(2)
.
Engeneralseobtuvieronresultadosmuyacordesaloesperado,estoenparteaque
se manejaron datos con una varianzamuybaja entreellos,ademsdel empleode
dosmtodosdiferentesquelopermitieroncorroborar.

5.CUESTIONARIO

1. Al efectuar la extraccin de protenas con base en la solubilidad, usted por


error us agua en lugar de NaCl al 1, qu obtuvo en el sobrenadante?qu
protenasquedaronenelresiduo?
En la fase acuosa o sobrenadante quedarn aquellas protenas que tengan una mayor
afinidad por el agua, tpicamente son la protenas globulares (aquellas que poseen varios
tipos de estructuras secundarias) por otra parte en el precipitado quedarn aquellas que
tienen una solubilidad muy baja, estas son las protenas fibrosas (quienes tienen en su
mayoraunmismotipodeestructurasecundaria).
(6)
2. Qu tcnicas se aplican para desnaturalizar protenas?cules de esos son
reversibles?
Por accin del calor, en este caso esunatcnicairreversibleyaque sepierdelafuncinde
laprotenaysureacomodamientoconformacionalesbastantedifcildeinducir.
En cuanto a otras tcnicas como utilizar extremos de pHs, empleo de diferentes solventes
orgnicos, algunos solutos o detergentes, son principalmente casos reversibles ya que
adems de no romper los enlaces covalentes de las molculas, en lamayorade loscasos
basta con retirar los agentes desnaturalizantes para tener nuevamente la protena en su
estadoinicial.
(6)
3. Usted realiz la curva de calibracin de Biuret (valores de absorbancia entre
0,17 y 1,53) y al leer la Absorbancia de los tubos que contienen la muestra a
analizar , se obtuvo un valor de 2,10.Qu hara usted en este caso con la
muestra?

Se puede hacer una dilucin, al medir nuevamente la absorbancia ser mucho menor y
entrar dentro del rango,assepuedehacerelclculodeconcentracinyalfinalsolobasta
conmultiplicarlaconcentracinporelfactordedilucinempleado.
(7)
4. Qudiferenciahayentreprotenabrutayprotenaverdadera?
La protena bruta es una estimacin del contenido de protena en sustancia que se
determina a partir de la cantidad del nitrgeno total, pese a ser una medida altamente
extendida,estanodiferenciaelnitrgenototaldelproteico.
La protena verdadera, como su nombre lo indica es la medida de la cantidad de protena
realquehayenunamuestra.
(8)
5. Indique cual es la composicin de la mezcla catalizadora usada en el mtodo
deKjeldahl
K2SO497,0%
CuSO5H2O1,5%
Selenio1,5%
(9)
6. QuesycmofuncionaelIndicadordeTashiro?
El indicador Tashiro est compuesto por rojo de metilo y azul de metileno en proporciones
aproximadamenteal2%ydisueltosenalcoholetlico.
El indicador tashiro funciona como un indicador cido base, el funcionamiento de estos
bsicamente se debe a un cambio estructural a diferentes pHs el cual produce un cambio
en la coloracin, como la mayora de indicadores, este posee anillos aromticos cuyos
rangosdeabsorcinytransmisindeluzcambianenelpHquemiden.
(10)

6.CONCLUSIONES

1. La concentracin de protena en la harina de haba hallada a travs del


mtodo de Kjeldahl (8460 mg/100 de harina) fue menoral obtenido atravs
delmtododeBiuret(12080mg/100deharina).
2. El porcentajedeprotenaobtenidoporambosmtodosentradentrodelrango
esperadode7,915,8%.

7.BIBLIOGRAFA

1. UnitedStatesDepartmentofAgriculture,NationalDatabaseforStandardReference
Release.FullReport(Allnutrients):11973,bean,fava,inpod,raw,consultadoel4
deoctubredel2015atravsde:
http://ndb.nal.usda.gov/ndb/foods/show/3615?fg=&man=&lfacet=&count=&max
=35&sort=&qlookup=11973&offset=&format=Full&new=&measureby=
2. LopzC,BermdezAS,Efectodelaacetilacinsobrelaspropiedadesfuncionalesy
nutricionalesdealmidonesdehaba(Viciafaba),consultadoel4deoctubredel2015
atravsde:

http://www.bdigital.unal.edu.co/25057/1/22302766801PB.pdf

3. Saludybuenosalimentos,ClasificacionyproiedadesdelasHabas(Viciafaba),
consultadoel4deoctubredel2015atravsde:
https://saludybuenosalimentos.es/alimentos/index.php?s1=Verduras%252FHor
talizas&s2=Semillas&s1LI=classes%2F%3As2%3As2%3Aid%3Aop%3Arel%3A0
&s3=Habas&s2LI=classes%2F%3As3%3As3%3Aid%3Aop%3Arel%3A0
4. Fundacionespaolaparaeldesarrollodelanutricionanimal,Proteinabruta,Metodo
deKjedahl,consultadoel4deoctubredel2015atravsde:
http://www.fundacionfedna.org/tecnicas_de_analisis/proteinabrutam%C3%A9
todokjeldahl
5. FacultaddecienciasagrariasU.N.C.,Valoracionesdeneutralizacin:aplicaciones,
consultadoel4deoctubrede2015atravsde:
http://campus.fca.uncu.edu.ar/pluginfile.php/24556/mod_resource/content/1/Ca
p%204%20Vol.%20neutralizacion%20aplicaciones%202015.pdf
6. LehningerAL(2005).Principiosdebioquimica.4taedicin.pag147153.
7. http://www.geocities.ws/jorgecon/guiaespectrofotometria.pdf
8. Grupodetrabajoenbobinosparacarne,lacalidaddelacarnederes,consultadoel
4deoctubrede2015atravsde:
http://www.uprm.edu/ciag/inpe/resinformativa/res3n34.pdf
9. UniversidaddeBogotJorgeTadeoLozano.GuiaNo:3.2.Determinacionde
protenabrutaporelmtododeKjeldhal,consultadoel4deoctubredel2015a
travsde:
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/bioqui
mica/guia_3_2.pdf
10. DiarioOficialdelaUninEuropea.CaptuloIII.Determinaciondelaconcentracion
deNBVTenpescadosyproductosdepesca,consultadoel4deoctubredel2015a
travsde:
http://eurlex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2005:338:0027:005
9:ES:PDF