128 e Analize si evaluaritoxicologice DETERMINAREA CANTITATIVA A FENOLULUI TOTAL DIN URINA Determinarea fenolului total din urind se efectueazi pentru aprecierea intoxicatiilor cu fenol sau benzen, care se metabolizeaz in principal ta fenol. in uultimul caz, este necesari analiza complementara a benzenului din sange. Jzolarea din urina: Fenolul conjugat se hidrolizeazi in mediu acid si apoi fenolul total se izoleazi prin distilare. Se dilueazi 5 ml urin& cu 75 ml apa si se aciduleaza cu acid sulfuric 1:1. Se distill a flactr& mic’, culegindu-se aproximativ 45 ml distilat intr- un balon cotat de 50 ml. Se completeaza balonul cotat la semn cu apa distilats. Principiul_metodei: Fenolul reduce acidul fosfomolibdenic (reactivul Foli Ciocilteu) Ia albastru de molibden, colorimetrabil. Sensibilitatea reactiei este de 0,2 ug fenol/ml. Metoda este specifica. Reactivis 1) acid sulfuric 1:1, viv 2) Reactiv Folin-Ciocilteu: La intrebuintare, solujia de reactiv se dilueaz cu un volum egal de apa distilata. 3) Carbonat de sodiu 20% 4) Solutie standard stoc de fenol: Se dizolva 120 mg fenol in acid clorhidric 0,1 N intr-un balon cotat de 100 ml, Se determina confinutul exact de fenol: intr-un vas conic cu dop rodat se iau 10 mi din solutia stoc si se adaugt 20 ml hidroxid de sodiu 0,1 N. Se {nealzeste pe baia de apai pana la temperatura de 65°C, cAnd se adauga repede 20 ml solutie de iod 0,1 N. Se inchide balonul gi se titreaza excesul de iod cu tiosulfat de sodiu 0,1 N, folosind ca indicator solujie de amidon (1 ml solujie de iod 0,1 N este consumat de 1,567 mg fenol). 5) Solujie standard de lucru: se dilueaz extempore solufia_stoc corespunzitoare, pentru a obfine o concentrafie de 10 pg/ml. Tehnica de ueru: intr-o eprubeti se iau 5 ml distilat si se adaugi 0,25 ml reactiv Folin Ciocilteu gi 1 ml carbonat de sodiu 20%. in paralel cu proba se prelucreaz si un blanc de reactivi (5 ml ap&). Se agiti si se introduc eprubetele intr-o baie de apa. Se masoara absorbanta dupa 5-10 minute la spectrofotometru, la 720 nm in cuva de 1 cm, fafa de blancul de reactivi Cateul: Cantitatea de fenol din proba analizati (Cp = pig fenol/ Sml) se calculeaz& din ‘ecuatia dreptei de calibrare (Fig.1): y= A+ Bx, unde:Analize unor substanye toxice : Fige de lucru « 129 A= 0,033 0,0168 cunosednd absorbanta probei citita la spectrofotometru, = 0,033 + 0.0168 r= 0,99972 . Me @ 0 e 2 % CConcentratia(microgrameys mi) Fig.1. Dreapta de regresie a curbei etalon pentru dozarea fenolilor $i parametrt el caracteristiel img fenol total / | urina = [Cp x V]/[n xp], unde V este volumul balonului cotat, n reprezints volumul de distilat prelucrat, iar peste volumul de urind supusd distilirii, Interpretarea rezultatelor: Fenolul urinar reprezint& un in benzen, Persoanele neexpuse elimina in mod normal prin urin& pani la 10-16 mg / 24 ore fenol total. Fenolul urinar creste si dupa administrare de salicilati. ator sensibil pentru expunerea la fenol si la