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APLICADA A LA HEMATOLOGIA
MORFOLOGA <----->
BIOQUMICA
Son un complemento de las tinciones hematolgicas.
Por medio de ellas se localizan enzimas y sustancias
inorgnicas.
As se mejora la diferenciacin celular.
Tambin sirven para el diagnstico
CITOMORFOLOGIA.
70-80%
CITOQUIMICA.
90-95%
INMUNOFENOTIPO
MAS
MICROSC. ELECTRN.
CITOGENETICA Y BIOL. MOLECULAR
99-100%
MUESTRAS UTILIZADAS
EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA
PUNCION DE MDULA SEA
PUNCION DE GANGLIOS
LCR
TIPOS DE TINCIONES
Se pueden clasificar en:
Atendiendo al nivel de vitalidad de las clulas que se
Colorantes neutros:
neutros son sales de un cido y de una base
Colorantes indiferentes:
indiferentes son los que no tienen afinidad por
CITOQUMICA ELCTRNICA
CITOQUMICA FLUORESCENTE
INMUNOCITOQUMICA
NO FLUORESCENTE
CITOQUMICA AUTOMATIZADA
Citoqumica automatizada:
CITOQUIMICA ELECTRONICA:
CITOQUIMICA FLUORESCENTE:
INMUNES
NO INMUNES
INMUNOCITOQUMICA NO FLUORESCENTE
Inmunocitoqumica con deteccin
indirecta y enzimtica. La seccin se
obtiene de tejido previamente fijado.
Inmediantemante despus se incuban
en una solucin de bloqueo que
satura los posibles sitios de unin
inespecfica, gracias a una alta
concentracin de protena como la
albmina de suero bovino. Tras cada
paso de unin de anticuerpos o del
complejo avidina-biotina-peroxidasa
se procede a lavar los cortes en una
solucin tamponada de fosfato
(tampn fosfato), en la que tambin
van disueltos los anticuerpos. La
reaccin de la peroxidasa convierte
unos sustratos, la diaminobencidina y
el perxido de hidrgeno, en un
producto insoluble y coloreado
visible con el microscopio tico.
CITOQUIMICA AUTOMATIZADA:
ESTANDARIZACION DE METODOS EN
CITOQUIMICA
Preparacin estricta de los reactivos
Practicas permanentes de las reacciones con preparados testigos
Realizacin, la fijacin y conservacin adecuada de los preparados y
reactivos
Determinacin de tiempos exactos para cada uno de los pasos
dem de temperatura (especial para enzimas)
Tiempo y condiciones de la inmersin para la lectura
Dimetros y conservacin idneos de los elementos sobre los cuales
clulas.
Incubacin en el medio de reaccin: como consecuencia se generan
reaccin .
sensibilidad, especificidad y
reproductibilidad.
ENZIMAS RECONOCIBLES
1-DNA Y RNA.
2-PROTEINAS.
3-HEMOGLOBINA.
4-HIDRATOS DE CARBONO.
5-LIPIDOS.
6-FOSFOLIPIDOS.
7-METALES
1-MIELOPEROXIDASAS (MPO)
2-FOSFATASA ALCALINA (FAL)
3-FOSFATASA ACIDA (FAC)
4-ESTERASAS (EST)
5-FOSFATASA ACIDA TARTRATO
RESISTENTE (FAC-TR)
6-DEHIDROGENASAS (DH)
CITOQUIMICA CLASICA
reconocimiento por:
principios no enzimticos
principios enzimticos
MPO
Fe hemosidernico: PERLS
FAL
FAL
ESTEARASAS
CATALASAS
ENZIMAS HIDROLITICAS
TINCIONES CLASICAS
1) RECONOCIMIENTO DE SUSTRATOS NO
ENZIMATICOS
TINCIN DE PAS
(Peryodic Schiff Acid)
Se basa en la rotura de los enlaces -C-C- presentes en los
carbohidratos por la accin del cido perydico, potente
agente oxidante, liberndose grupos aldehdo que al
combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de
color rojo prpura intenso.
-C-C-
ALDEHIDOS
ACIDO PERYODICO
PURPURA
SCHIFF
TINCION DE PERLS
Se basa en la liberacin de los iones frricos de su
Sideroblastos en anillo
Reflejando una anormalidad
en la acumulacin de Fe en
las mitocondrias
(azul de Prusia)
Hemocromatosis
(cortes histolgicos de
hgado)
HEMOGLOBINA FETAL
Test de Kleihauer-Betke
El producto de la
reaccin es
negro y granular
2) RECONOCIMIENTO DE SUSTRATOS
ENZIMATICOS
MIELOPEROXIDASA
La demostracin citoqumica de esta enzima se
basa en la accin oxidante de la peroxidasa sobre
un sustrato (bencidina) en presencia de perxido
de hidrgeno, apareciendo un precipitado azul en
el lugar del citoplasma en donde se ha producido
la reaccin.
BENCIDINA
H2O2
MPO
Resultados.
siempre patrones granulares!
ERITROCITOS Y SU PROGENIE : NEGATIVOS (etanol)
GRANULOCITOS Y SU PROGENIE : (+) patrn granular intenso en
NORMALES.
.
PATOLOGICOS
ESTRES OXIDATIVO
Scorificacin de MPO en granulocitos:
Se categorizaron los neutrfilos de acuerdo al contenido de grnulos presente en
FOSFATASA ALCALINA
La FA es una fosfomonoesterasa que es activa francamente a ph
Alfa-naftil fostato
ph alcalino
FAL
naftilo
fosfato
Colorante diazoico
Compuesto diazotado
Cuidados:
Efectuar la reaccin en frotis de no mas de 24 hs.
Conservar los preparados en heladera envueltos en papel
absorbente con un desecador.
Ph de la reaccin
La actividad granulocitica de la FA se
manifiesta en forma de un
precipitado de color pardo negruzco
localizado en el citoplasma
coloreados
Grado II: mayor densidad cromtica, por lo general
citoplasma.
Grado IV: completamente oscuro
FOSFATASA ACIDA
Se basa en la hidrlisis del substrato
naftol-AS-Bi-fosfato.
La aplicacin prctica del estudio de la FA se refiere sobre todo al estudio de
los sndromes linfoproliferativos crnicos (LPC) y leucemia aguda
linfoblstica (LAL), dnde existe una buena correlacin entre el tipo de
positividad y el fenotipo de membrana.
ESTEARASAS
4 sustratos:
Naftol-AS-C-cloroacetato (CAE)
Naftol-AS-D-acetato
-naftil-acetato
-naftil-butirato
hidrolizados
sal diazoica
precipitado insoluble
ESTERASAS
Son un grupo de enzimas capaces de hidrolizar steres en sus componentes
cidos y alcoholes. Existen diferentes variedades segn el substrato
empleado.
GR y su
progenie
Granulocitos y su
progenie
Linfocitos y su
progenie
Monocitos y su
progenie
Naftil
butirato/
acetato
Normales (-)
(+) M6
(-) o + dbil
(+++++)
Fluoruro
sensible
Naftil cloro
acetato
Idem
(+++++)
(-)
(+)
EN RESUMEN..
PAS
Fe
MPO
FAL
FAC
ANAE
NCAE
Sudan
Black
Granulocitos
Linfocitos
Mb
Seg
Lbl
Lin
Monocitos
Mbl
Mon
Plaquetas
Mg
Pq
Eritrocitos
PEbl
GR