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Determinaci

Determinacin del n
n de
microorganismos

Evaluaci
Evaluacin del
crecimiento microbiano

Mtodos directos: recuento total


Recuento microscpico directo
(cmara de Neubauer)

Mtodos indirectos: recuento de


viables
Recuento en placa
Nmero ms probable (NMP)

Curso Microbiologa 2010 Facultad de Agronoma

Prctico 6

Recuento en c
cmara de
Neubauer
Mtodo para contar clulas de una muestra de
cultivo diluida en cmara de volumen pequeo y
conocido. Se cuentan clulas en varios cuadrados
de la cmara y se realiza promedio

Ventajas




Es rpido
Las exigencias del equipo
son mnimas
Se pueden observar las
diferencias morfolgicas
de los microorganismos

Desventajas








No se distinguen clulas vivas


de muertas
Se analiza poca cantidad de
muestra
Provoca cansancio del
operador
Slo sirve para muestras con
cargas superiores a 10.000
por ml
Dficil distinguir los m.o de
las partculas de la muestra
Una inadecuada distribucin
de la muestra sobre la
superficie del portaobjetos
ocasiona errores

Consta de un cuadrado central


de 1 mm de lado, dividido en
25 cuadrados. Cada uno de
ellos a su vez, dividido en 16
cuadraditos.
 El espacio entre el
portaobjetos y el cubreobjetos
es de 0.02 mm. La rejilla
tiene un rea total de 1 mm2
y un volumen total de 0.02
mm3
 Promedio de clulas
contenidas en dicho volumen
se expresa por ml de muestra


Recuento en placa

Para obtener colonias


contables se deben
hacer diluciones
seriadas de la muestra

El contaje de viables
se expresa en UFC/ml

Siembra en placa

Ejemplo:

50 colonias

Clculo del n de ufc/ml

Ufc/ml= n de colonias contadas (30300) x 1/dilucin


x 1/ vol. Sembrado (ml)
Ej. 50 x 1/10-6 x 1/0.1 ml = 5.0 x 108ufc/ml

Ventajas


Esta tcnica es la ms
utilizada ya que permite
contar clulas viables

De alta sensibilidad

Se pueden utilizar medios


muy selectivos para m.o
muy exigentes

Desventajas


Nmero m
ms probable (NMP)

El conteo depende del


medio de cultivo y las
condiciones y tiempo de
incubacin empleadas
Las clulas en el medio de
cultivo no se desarrollan
al mismo tiempo (cultivos
mixtos)

menor

Ventajas


Determina cargas microbianas bajas (menores


de 10 por gramo).

Indicado para microorganismos de lento


crecimiento o cuando han sido sometidos a
condiciones adversas (temperaturas altas,
desecacin, etc.)

Tambin se aplica a microorganismos


anaerobios utilizando en los tubos medio
prerreducido sellados con un tapn de
vaselina-parafina