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aislamiento de Hongos de Diferentes Fuentes

aislamiento de Hongos de Diferentes Fuentes

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Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza Carrera de Química Farmacéutica Biológica Laboratorio de Microbiología II

AISLAMIENTO DE HONGOS DE DIFERENTES FUENTES
Equipo:7 Integrantes:
 CEDILLO BRAVO JOSE NICOLAS FLORES ALVAREZ ALEJANDRA ISELA PEREZ LOPEZ OMAR JONATHAN RICARDO GONZALEZ VICTORIA

REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES
no son fotosintéticos
Son heterótrofos

 Saprofitos: Cuando
toman nutrientes de materias orgánicas muertas o en descomposición

 Parásitos : Cuando se
nutren de materia viva

• Su estructura consta de un complejo llamado talo o micelio, que a su vez esta constituida por múltiples filamentos (hifas) • No poseen clorofila • Presentan tanto reproducción sexual como asexual • Los alimentos se disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; después se absorben a través de la fina pared de la célula ( principalmente de quinina) • Se distribuyen por difusión simple en el protoplasma.

teniendo un rango de temperatura entre 20 y 30°C.

acidófilos, siendo su pH optimo de 5.6

Temperatura

pH

Condiciones de crecimiento
Base Nutriente Humedad Actividad de agua

humedad del 60%

aw =0.80

carbohidratos, sales de nitrógeno, proteínas, agua y los iones inorgánicos básicos.

• su fuente primordial es a base de CO2, H2O, sales de nitrógeno y de carbohidratos, sobre todo la glucosa, sacarosa y maltosa.

• Necesitan de iones inorgánicos mas comunes. • Pueden sintetizar vitaminas, que le son necesarias pero hay especies que llegan a ser deficientes de estas y las toman del medio externo, esto se presenta sobre todo con tiamina y biotina.

Se deben estudiar las características siguientes: Forma y tamaño Color en la superficie o en el reverso. Difusión del pigmento. Coloración: blanca, rosada, gris ,anaranjada, verde, rojiza, negra.

Textura: yesosa, glabra, terrosa, granulosa, vellosa, cérea, cremosa. Superficie: elevada o plana, levantamiento central. Aspecto: plegado, radiado, cerebriforme, crateriforme. Consistencia: dura, suave, firme, membranosa. Rapidez de crecimiento: por ejemplo las levaduras y los oportunistas crecen en 24 a 48 h, y los dermatófitos en 5 a 10 días.

IDENTIFICACIÓN PRELIMINAR DE CULTIVOS DE HONGOS
• Se observa si una colonia de hongos es filamentosa o levaduriforme. • Observar la consistencia de la superficie de la colonia • El plegamiento • La nitidez del borde de las colonias • Presencia de pigmento en la superficie o el reverso de la colonia o su difusión hacia el medio circundante.

Penicillium sp.
• Presenta micelios de crecimiento rápido • Aspecto: Aterciopelado o pulvurulento y rugosidades radiales. • La colonia es inicialmente blanca y vellosa; a medida que se producen esporas pigmentadas, toman matiz verde o verde azulado. A veces se observan variantes amarillas o tostadas. A menudo se forman rugosidades radiales.
• CRECIMIENTO: 22-30º, 7-10 dias

Aspergillus sp
Macroscópicament e crecen entre 3-6 días a temperaturas de 25º y 37º, C 7-10 días las colonias están cubiertas con un micelio aéreo blanco, velloso. A medida que la colonia madura se observa una superficie cubierta de esporas negras. El reverso de la colonia presenta un color claro o verdoso.

A. niger (Agar Czapek)

Aspergillus sp. (Agar Micosel)

A. terreus (Agar Czapek)

A. flavus (Agar Czapek)

Geotrichum sp.
• Es de rápido crecimiento, presenta una colonia gris o gris amarillenta. • Producen cadenas de artroconidios hialinos, lisos, de una sola célula, semiglobosos o cilíndricos a partir de hifas no diferenciadas

Curvularia sp
•Micelio aéreo bien desarrollado, denso, algodonoso. Gris-blanco al comienzo se forma pronto marrón oscuro a rojo púrpura. Bordes enteros. El reverso es rojo púrpura a negro.

Alternaria sp
Macroscopicamente las colonias tienen un aspecto denso,algodonoso grisblanco al comienzo, tornandose posteriormente a color marrón oscuro.

Fusarium sp
En un principio las colonias son blancas y cubiertas por un micelio aéreo velloso bien desarrollado. Con la madurez se forman delicados pigmentos lavanda a rojo púrpura en la superficie de la colonia y en su reverso presenta color naranja o violeta, difusible al medio.

Mucor sp
Macroscópicamente las colonias son de crecimiento muy rápido, algodonoso color blanco amarillento, que se convierte a gris oscuro con el desarrollo del esporangio.

Rhizopus ssp
Macroscopicamente las colonias crecen rapidamente en aproximadamente 4 días a 37º C, cubriendo la superficie del agar con un crecimiento denso con apariencia algodonosa que primero luce blanca, posteriormente grisacea, de amarillenta a café y el reverso se ve de color blanco.

Microsporum fulvum
•Aspecto inconfundible: vellosas, algodonosas, pulverulentas. •De vistosos y variados colores •Crecen radialmente de modo progresivo •Colonias de mayor tamaño

Sacharomyces cerevisiae
(Levaduras)
Características macroscópicas Anverso: Forma colonias blancas cremosas, lisas. Reverso: -Pigmento: Blancas cremosas, que no difunden al medio.

Trichosporon sp.
(Hongos levaduriformes)
Macroscopicamente las colonias crecen rapidamente en aproximadamente 8 días a 37º C , cubriendo la superficie del agar con apariencia cremosa blanca, posteriormente amarillenta

MEDIOS DE CULTIVO
Medios de cultivo para aislamiento

Nutrientes básicos en medio de cultivo
• Materias nitrogenadas como peptona. • Azucares como glucosa o maltosa. • Un soporte solido como la gelosa. • pH ácido (5 a 6). • Vitaminas (impurezas de la peptona)

AGAR SABOURAUD Composición: *Peptona 10g *Glucosa 20g *Agar-Agar 20g *Agua destilada 1000ml pH 5.6 ± 0.2

USO: Para cultivo de hongos patógenos y no patógenos, particularmente dermatofitos, levaduras y m.o. acidúricos.

AGAR PAPA DEXTROSA (PDA) Composición: *Pulpa de papa 250g *Glucosa 20g *Agar 20g *Agua destilada 1000ml pH final 5.6 +- 0.2.

USO: Para cultivo, aislamiento y determinación del numero de hongos y levaduras.

AGAR LITTMAN Composición: *Peptona, *Estreptomicina *Dextrosa, *Cristal Violeta *Agar

10.0g 15.0g 10.0g 0.01g 20.0g

USO: Medio selectivo, que suplementado con estreptomicina, se emplea para el aislamiento primario y cultivo de hongos, especialmente dermatofitos.

AGAR BIGGY *Sulfito de bismuto *Dextrosa *Extracto de levadura *Glicina *Agar *Citrato de Amonio y Bismuto pH 6.8 ± 0.2  8,0g  10,0g  1,0g  10,0g  16,0g  5,0g
USO: El Agar Biggy (por sus siglas en inglés Bismuth-Glucose-GlycineYeast) es utilizado para el aislamiento y diferenciación de especies de Candida. También es conocido como Agar de Nickerson.

HONGOS EN SUELO
• • • • • • • • • Fusarium solani Fusarium oxysporum Penicillium spp Aspergillus flavus Aspergillus fumigatus Rhizopus spp Rhizoctonia solani Macrophomina phaseolina Curvularia sp

HONGOS DEL AIRE
El aire no es un medio en el que pueden desarrollarse los microorganismos pero es el portador de aerosoles biológicos como polvo, gotitas de agua y otros, que pueden estar cargados de los diversos grupos de microorganismos . De las capas de aire se han encontrado esporas de hongos que proceden principalmente del suelo, de la vegetación y del mar. El aire es también el medio de diseminación de hongos saprófitos

HONGOS EN FRUTAS Y VERDURAS
• • • • • • • • • • • • • Rhizopus sp. Gloeosporium sp Sclerotinia sp. Fusarium sp. Botrytis sp. Alternaria sp. Penicillium sp. Trichotechium sp. Cladosporium sp. Venturia sp. Fusicladium sp. Mucor sp. Phytotphora sp.

Ejemplos de hongos que se encuentran en el medio ambiente.
Aire
Penicillium

Suelo

Plantas

Cladosporium
Trichoderma Fusarium solani

× × ×

× ×

× × ×

Fusarium
Aspergillus

× ×

Fenómenos fúngicos
• DIMORFISMO Fenómeno en el cual un hongo muestra en su ciclo biológico tanto un micelio filamentoso como un aspecto levaduriforme. algunos hongos principalmente las especies patógenas presentan dimorfismo

Temperatura dependiente

•forma filamentosa a 25 °C y 20°C • forma de levadura a 37°C.

hongos dimorficos

Temperatura y nutrición dependientes

temperatura de 37 °C necesita la presencia de una atmósfera de CO2 de 15 a 20% para crecer en forma levaduriforme

Nutrición dependientes

obedece a una variedad de factores ambientales, como oxigeno, CO2, hexosas (azucares), metales pesados

Temperatura dependiente
Blastomices dermatitides

Temperatura dependiente Candida albicas.

Diferentes formas de Candida albicans

Temperatura y nutrición dependientes Histoplasma capsulatum

Nutrición dependientes Mucor racemosus (esporangios)

Polimorfismo
• Fenómeno que se da cuando un mismo hongo a diferentes condiciones de desarrollo presenta diferente color.

Pleomorfismo
• Es un fenómeno fúngico que se presenta en los medios de cultivo , consiste en la transformación irreversible de una cepa por un exceso de carbohidratos, esta tiende a cambiar dando un micelio blanco, estéril y algodonoso.

Pleomorfismo Se debe a aberraciones y mutaciones cromosomicas es propio de los dermatofitos. En el caso de los dermatofitos, el pleomorfismo está relacionado con la pérdida de su capacidad de esporulación. Al final acaba formándose un micelio carente de conidios o con muy pocas estructuras de reproducción.

Epidermophyton floccosum Colonia, Pleomorfismo.

Metodo de aislamiento

Aislamiento de Hongos del aire
Aislamiento de hongos del aire En una caja petri con agar Saboraud y otra con agar Litman Exponerlas abiertas a la corriente de aire por 15 min. Incubar a temperatura ambiente

Realizar lectura, reportar características macroscópicas

Aislamiento de Hongos del suelo
Aislamiento de hongos en suelo Pesar 0.5 g de tierra y agregar a un tubo 4.5mL de la solución salina estéril Dil 1:10 Fundir Saboraud y Littman 25º -30º se añaden 2 gts de la mezcla de antibióticos. PenicilinaStreptomicina 1:1

Añadir el contenido

*

Diluciones

hasta alcanzar

10 6

Realizar lectura, reportar características macroscópicas

Incubar a temperatura ambiente

De las diluciones del paso ( * ) colocar 1 mL de las diluciones en dos cajas con agar Saboraud y dos con Littman

Diluciones realizadas para el aislamiento micologico del suelo

Aislamiento de hongos de verduras y frutos
En el centro de la caja y fojandolo

Aislamiento de Hongo de verduras y frutas

Colocar un poco de tejido de la verdura o fruta que contenga el hongo

Pasarlos unos minutos por hipoclorito

Sembrar en agar Saboraud y Littman

No realizar si el hongo es de aspecto polvoso

Incubar a temperatura ambiente

Realizar lectura, reportar características macroscópicas

Bibliografía
1.

2.

Tay Z.J, Velasco C. O. micologia medica. Editorial Mendez editores. Mexico, 1991 Arenas R. micologia medica. Editorial Mc Graw-Hill. México, 1993

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