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1 Espectrofotometria
1 Espectrofotometria
Fundamento de la absorcin
La distribucin espacial de los electrones de una molcula da lugar a los
diferentes niveles electrnicos de la misma. La diferencia de energa entre estos niveles
electrnicos es del orden de 1 eV. Cada nivel electrnico lleva asociado diferentes
niveles vibracionales cuyas diferencias de energa son del orden de 0,1 eV, y que son
debidos a las vibraciones interatmicas. A su vez, cada nivel vibracional contiene varios
niveles rotacionales debidos al movimiento de las molculas alrededor de su centro de
gravedad, si bien estos ltimos tienen poca importancia ya que la diferencia de energa
entre ellos es del orden de 0,01 eV.
La absorcin de radiacin cuya longitud de onda se encuentra en el ultravioleta
visible promueve la transferencia de electrones desde el estado electrnico fundamental
a estados electrnicos excitados, lo que conlleva transferencia entre niveles
vibracionales y rotacionales.
E = Eelect + Evibrac +Erot
El primer trmino de la ecuacin es el ms importante, lo que permite clasificar
las especies absorbentes por el tipo de transiciones electrnicas que pueden tener lugar.
Ecuacin de Lambert-Beer
Cuando un haz de radiacin monocromtica de una determinada longitud de
onda, atraviesa una capa de disolucin que contiene una especie absorbente, la
intensidad del haz incidente I0, se atena, disminuyendo hasta una intensidad I. La
transmitancia (T) se define como la fraccin de radiacin incidente que consigue
atravesar la muestra, de modo que la absorbancia A=-log T.
Para una capa de disolucin absorbente de espesor infinitamente pequeo (db),
la disminucin de la intensidad (dI), viene dada por dI=-kICdb donde k es una constante
de proporcionalidad y C es la concentracin de la especie absorbente. Integrando y
reagrupando se obtiene:
dI
kCdb
I
I
log
I0
b
dI
kCdb
I0 I
0
= -logT =A
A=bC
I
ln
I0
I
kCb 2.3 log
I0
donde =
k
y b es el espesor de la muestra.
2 .3
Aplicaciones
En principio, cualquier especie qumica que absorba radiacin electromagntica
en las regiones ultravioleta y visible es susceptible de poder ser determinada por
tcnicas espectrofotomtricas. El mayor campo de aplicacin se encuentra en el anlisis
cuantitativo siendo la espectrofotometra una de las tcnicas ms usadas.
Anlisis cualitativo.
Los espectros de absorcin ultravioleta-visible son, en general, poco tiles con
fines cualitativos debido a la anchura de las bandas. La identificacin de un compuesto
requiere la comparacin emprica de los detalles del espectro de la muestra problema
con el espectro del compuesto puro. El estudio de espectros de un elevado nmero de
molculas ha permitido establecer correlaciones entre estructuras qumicas y posicin
de los mximos de absorcin. Las ms conocidas son las reglas establecidas por
Woodward, Fieser y Scout, referidas a compuestos carbonlicos, dienos o esteroides.
Anlisis cuantitativo.
La absorcin de radiacin luminosa en las regiones ultravioleta y visible
presenta multitud de aplicaciones en anlisis cuantitativo. No es necesario que el
compuesto a analizar absorba directamente radiacin si se puede transformar en un
derivado que posea un cromforo. Mediante este mecanismo es posible analizar tambin
una gran variedad de especies qumicas cuya absorcin es inicialmente muy dbil o bien
se encuentran en una parte del espectro en la que coexisten otras absorciones que
interfieren. Con este fin, la medida de absorbancia est precedida de una transformacin
qumica que debe ser especfica, total, rpida, reproducible y conducir a un derivado
estable en disolucin.
Para el anlisis de un analito individual se comienza por el establecimiento de
una curva de calibrado A=f(C), a partir de disoluciones de concentraciones conocidas
del analito, sometidas al mismo tratamiento que la muestra. Esta curva, frecuentemente
ajustada a una lnea recta para disoluciones diluidas, permite deducir la concentracin.
Instrumentacin
El equipo utilizado para realizar espectros de absorcin es un espectrofotmetro.
Los componentes bsicos son: una fuente de radiacin, un sistema que permita
seleccionar una banda estrecha de longitudes de onda, una cubeta o recipiente que
contenga la muestra, un detector, y un sistema de tratamiento y lectura de la seal.
Las fuentes de radiacin deben ser continuas en una amplia zona del espectro,
de intensidad elevada y constante con la longitud de onda. En la zona del visible la
fuente ms utilizada es la lmpara de filamento de volframio, basada en la emisin de
radiacin por efecto de la temperatura. Por debajo de 350 nm su potencia es inadecuada
por lo que se utilizan fuentes de descarga formadas por una ampolla que contiene dos
electrodos en el seno de un gas (H2, D2, Ar, Xe). Los electrodos aplican una descarga
elctrica que excita las partculas de gas, de modo que cuando stas vuelven al estado
fundamental lo hacen emitiendo luz ultravioleta.
Los filtros y monocromadores son sistemas que seleccionan un haz de radiacin
con un estrecho rango de longitudes de onda. Existen filtros de absorcin, basados en la
absorcin selectiva de ciertos rangos de longitudes de onda, y filtros de interferencia,
que mediante reflexiones de la radiacin en un dielctrico transparente recubierto en
ambas caras por un material reflectante, refuerzan unas longitudes de onda mientras que
las otras sufren interferencias destructivas. Los filtros de absorcin se usan en la regin
del visible y los de interferencia en las regiones ultravioleta y visible. Los
monocromadores se caracterizan por producir un haz de gran pureza espectral y por
variar la longitud de onda de la radiacin de forma continua y en un amplio intervalo.
Los componentes bsicos de un monocromador son, una rendija de entrada, que
selecciona un haz de radiacin policromtica entrante, un elemento dispersante -prisma
o red-, que dispersa la radiacin en sus longitudes de onda individuales, y una rendija de
salida, que asla la banda espectral deseada.
Los detectores son transductores que convierten la radiacin electromagntica en
un corriente o voltaje que posteriormente es amplificada y cuantificada. As, los
fototubos, basan su funcionamiento en el efecto fotoelctrico. Los electrones que emiten
ciertos materiales cuando reciben el impacto de fotones de determinadas longitudes de
onda, generan una diferencia de potencial proporcional a la cantidad de fotones recibida.
Los fotomultiplicadores son una combinacin de un fototubo y una cadena interna
multiplicadora de electrones. Los fotodiodos, consisten en una unin semiconductora.
Cuando un fotn impacta en el diodo, los electrones llegan hasta la banda de
Solucionando problemas
Problema1. Aparece error al conectar el instrumento.
Cada fabricante tiene en su manual de instrucciones una serie de errores
clasificados, pero los problemas ms frecuentes son:
Estos tres problemas se producen porque cada vez que el aparato se conecta,
mide la intensidad que emite la lmpara y la que recibe el detector, que han de ser
iguales y determinadas. Si hay una celda dentro, o se pierde intensidad por la puerta
abierta o la lmpara ya no emite la intensidad que debe aparece un error.
Para cambiar las lmpara de wolframio, hay que tener una de repuesto. Conviene
tener lmparas de repuesto de cada colormetro, para lo cual hay que saber qu tipo de
lmpara necesitamos. Lo primero es saber los voltios y los watios que suelen ir
estampados sobre la lmpara. Si se pide la lmpara adecuada a la casa comercial del
aparato el precio ser aproximadamente el triple de lo que vale. Existen casas
comerciales como rs Amidata que venden componentes elctricos y electrnicos por
internet. Slo con introducir los voltios y los watios aparecen las lmparas de esas
caractersticas. Adems cada lmpara lleva escrito sobre ella un cdigo que describe la
lmpara fsicamente, as podemos conseguir lmparas idnticas a las que lleva el
aparato. Para cambiar la lmpara se desconecta el aparato de la corriente se abre la
portezuela, se agarra la lmpara lo ms cerca posible de los bornes y se estira. Algunos
fabricantes sellan la lmpara al portalmpras para que el cambio de lmpara sea caro
(hay que sustituir las dos piezas) y difcil. En estos casos se puede sacar el
portalmparas, quitar el sello y colocar una lmpara nueva.
Para colocar la lmpara nueva se evitar tocarla con los dedos para lo cual un
trozo de papel es suficiente.
En el caso de espectrofotmetros UV-visible, tenemos dos lmparas, y
normalmente el instrumento dispone de algn apartado en su software que indica el
tiempo de vida que le resta. Las de tungsteno se cambian como la de los colormetros,
pero el cambio de la lmpara UV es ms complicado sobre todo por el precio,
(aproximadamente 600 euros). La mejor opcin es comprar la lmpara, tenerla de
repuesto y esperar una visita del tcnico para que la cambie. La pgina web de la casa
comercial Heraeus Noblelight te indica el tipo de lmpara que necesitas con slo
introducir la marca y modelo del aparato. Dado que el precio de las lmparas UV es tan
alto, algunos de estos aparatos tienen la opcin de encenderla o no. Si vamos a medir
toda una sesin en el visible, la lmpara UV es innecesaria por lo que podemos tenerla
apagada y ahorrar tiempo de vida del elemento. Cuando un aparato se retira como
obsoleto o porque no tiene arreglo, es buena idea conservar las lmparas, seguro que en
la Universidad existe en algn lugar un instrumento similar que puede aprovecharlas