Tema 7

Cintica Enzimtica

TEMA 7
CINTICA ENZIMTICA
1. DEFINICIONES
CMO ACTAN LOS ENZIMAS?
2. CINTICA ENZIMTICA
MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
REPRESENTACIONES
3. INHIBICIONES EN REACCIONES ENZIMTICAS
INHIBICIN COMPETITIVA Y NO COMPETITIVA

4. MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

DEFINICIONES

LAS ENZIMAS son protenas (RNA) que catalizan

reacciones qumicas en las clulas.
Cada enzima es altamente especfica para la reaccin
que cataliza.
Esta especificidad est determinada por el centro activo
de la enzima (en donde se hallan los grupos qumicos
responsables de la catlisis).
Muchas enzimas necesitan co-factores (co-reactivos, cosustratos) para cumplir su funcin cataltica.

Son Protenas de alto peso molecular (macromolculas,

104 a 106 g/mol, 102 a 104 aminocidos)
Su actividad depende de la integridad de su
conformacin proteica.
Metales pueden formar parte de su centro activo, o de
otra parte de la enzima (co-factor).
Los reactivos de la reacciones catalizadas por enzimas
se denominan sustratos.
Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima
cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta
sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido
de ellos.

Cmo actan los enzimas?

En una reaccin catalizada por un enzima:
La sustancia sobre la que acta el enzima (sustrato).
El sustrato se une a una regin concreta del enzima (centro
activo).
Un sitio de unin formado por los aminocidos que estn en
contacto directo con el sustrato.
Un sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente
implicados en el mecanismo de la reaccin.
Formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo
ciclo de reaccin

Cmo actan los enzimas?

Hiptesis de la Cerradura y la llave (E. Fischer, 1894)

Hiptesis del Ajuste Inducido (Daniel Koshland, 1958)

E Induce al S a configuracin aproximada al Estado de Transicin
1.
2.
3.
4.
5.

UNE S
REDUCE Ea
IMPULSA Catalisis
LIBERA P
SE REGENERA
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CINTICA ENZIMTICA
Estudio de la velocidad de reacciones catalizadas enzimticamente

La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima depende de

1. la concentracin de molculas de sustrato [S]
2. la temperatura
3. la presencia de inhibidores
4. pH del medio, que afecta a la conformacin (estructura
espacial) de la molcula enzimtica

CINTICA ENZIMTICA

Aparentemente:

MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Hiptesis bsicas:
enzima y sustrato forman un complejo intermedio ES

Etapa rpida

Etapa lenta

MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Modelo matemtico:

Definiciones:

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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN

11

MODELO DE MICHAELIS-MENTEN

12

MODELO DE MICHAELIS-MENTEN

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Representacin de Lineweaver-Burk
Representa 1/v frente a 1/s y permite determinar a partir de medidas
experimentales parmetros bsicos de la cintica enzimtica como la
constante de Michaelis y la velocidad mxima de reaccin

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Representacin de Eadie-Hofstee
v
v=V
K
max
m [S]

Vmax

pendiente=

-Km
Vmax
Km
v
[S]
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Representacin de Hanes-Woolf
K
[S]
1
m
=
+
[S]
v
V
V
max
max

[S]
v

Pendiente =

1
Vmax

Km
Vmax
-Km

[S]
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Representacin integrada de Michaelis-Menten

[S]o Vmax
1 ([S]o [S])
2,3
=

log
[S]
Km Km
t
t
Vmax
Km
2,3log[S]o
t
[S]

Pendiente = -1/Km

Vmax
([S]o-[S])
t
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INHIBICIN EN REACCIONES
ENZIMTICAS

Inhibicin enzimtica: molculas diferentes del sustrato pueden

unirse al enzima reduciendo total o parcialmente su actividad
cataltica. Estas molculas reciben el nombre de inhibidores

Inhibidor competitivo

Inhibidor no competitivo

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Inhibicin competitiva

El inhibidor reduce la velocidad de reaccin, pero la velocidad mxima

(concentraciones de sustrato grandes) sigue siendo la misma
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Inhibicin competitiva

20

Inhibicin no competitiva

Inhibicin no competitiva

El inhibidor reduce la velocidad mxima pero Km (la afinidad del

enzima por el sustrato) sigue siendo el mismo

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MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R

(relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms
afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio

Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores

positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo.
Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son los
moduladores negativos.
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Modulacin alostrica de la actividad enzimtica

Las molculas que favorecen la forma R

pero que actan sobre una regin del
enzima distinta del centro activo son los
activadores alostricos.

Si los moduladores negativos actan

en lugares distintos del centro activo
del enzima (inhibicin no competitiva)
se llaman inhibidores alostricos.
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