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1-Fund Teorico Practicos Inmunoh Serie Roja PDF
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01/11/2011
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La aglutinacin es la agregacin,
mediada por anticuerpos, de las
partculas que expresan antgenos
de superficie.
Tiene dos etapas
1.
2.
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Sensibilizacin
Formacin de puentes entre las
clulas sensibilizadas.
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El grado de ionizacin de
las molculas
Depende
fundamentalmente del pH
del medio
Constante de equilibrio
(afinidad de los
anticuerpos)
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Albmina Humana
LISS (Low ionic saline solution)
PEG (Polietilenglicol)
POLYBRENE (BHDM)
Tcnicas con enzimas proteolticas
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Si el aglutinado persiste
prueba negativa
prueba positiva (aglutinacin irreversible a los GR
sensibilizados con Acs)
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Ventajas:
Aumenta la sensibilidad
de la PCI para detectar
Acs clnicamente
significativos
Detecta Acs en baja
concentracin y los de
baja afinidad que
pueden perderse con los
lavados
Reduce el tiempo de
incubacin
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Desventajas:
Debe ser sometido a
estricto control de
osmolaridad para evitar la
fijacin inespecfica de C
Los GR suspendidos el
LISS deben ser procesados
dentro de las 24 hs
Menor sensibilidad para
anti-K. (1 fase de
aglutinacin)
(Las ms usadas)
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Adherencia eritrocitaria
en fase slida
(Microplacas)
Aglutinacin en columna,
pruebas en gel y
separacin por afinidad
Qimioluminiscencia
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Pruebas Inmunoabsorbentes
ligadas a las enzimas (ELISA)
Inmunofluorescencia
Inmovilizacin de Antgenos
Eritrocitarios con Anticuerpos
Monoclonales Especficos
(IAEAM)
Radioinmunoensayo
F
e
n
o
t
i
p
i
f
i
c
a
c
i
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Ditiotreitol (DTT)
2-Mercaptoetanol (2-ME)
2-Aminoetilisotiouronio (AET)
Mecanismo de accin
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Principios
El tratamiento de los Acs IgM, anula las
actividades aglutinante y fijadora de
complemento
La visualizacin de la actividad de los Acs antes y
despus del tratamiento con sulfhidrilos es til
para determinar la clase de inmunoglobulina
El tratamiento con sulfhidrilos tambin se emplea
para abolir la actividad de los anticuerpos IgM y
permitir la deteccin de IgG coexistentes
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Preparacin
Conservacin
2 a 6 C
Causas
Preparacin incorrecta del DTT o concentracin superior a
0,01 M.
Incubacin de suero y DTT prolongada
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Calor (56C)
Calor suave (45C)
Congelacin-descongelacin
Fro-cido
Digitonina-cido
Diclorometano (DCM)
Glicina-HCl / EDTA
CLOROFORMO
XILENO
ETER
Dr. Silvio Rosell
Ventajas
Desventajas
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Recuperacin escasa
de otros auto y
aloanticuerpos de
grupo sanguneo
Ventajas
Adecuado para EHRN
por incompatibilidad
ABO
Rpido y fcil
Requiere un volumen
celular reducido
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Desventajas
Recuperacin escasa
de otros auto y
aloanticuerpos de
grupo sanguneo
Ventajas
Rpido y fcil
Sensibilidad
comparable a
digitonina-cido
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Desventajas
Menos sensible para
auto y aloanticuerpos
reactivos en caliente
Ventajas
Adecuado para anti-K
No inflamable
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Desventajas
Txico
Recuperacin escasa
de anti-Fyb
Ventajas
Mtodo de accin
rpida
Lquido no inflamable
Recuperacin de la
mayora de los
anticuerpos
significativos
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Desventajas
Sustancia reconocida
como carcinognica
Altamente txico
Efecto narctico
inhalatorio
Ventajas
Buena recuperacin
de la mayora de los
Acs significativos
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Desventajas
Carcinognico
Txico
Narctico
Provoca hemlisis
Ventajas
Excelente
recuperacin de la
mayora de los Acs de
grupo sanguneos
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Desventajas
Narctico
Txico
Explosivo
Muy inflamable
Poca recuperacin de
anti-S-s
Ventajas
No peligroso
Recuperacin
adecuada de la
mayora de los Acs
significativos
Kit comercial
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Desventajas
El lavado del estroma
es lento
Baja sensibilidad
sistema Kidd
Ventajas
Apropiado para preparar
eluatos y obtener clulas
PAD negativas
No destruye las clulas
tratadas
Sensibilidad comparable a
digitonina-cido
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Desventajas
Desnaturaliza los
Ag del sistema Kell
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Conservacin
2 a 6 C
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Principios
Es un mtodo semicuantitativo que se emplea
para determinar la concentracin de Acs en
muestras de suero o comparar la intensidad de
la expresin antignica en distintas muestras de
GR
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Aplicaciones
Estimar actividad de Acs en embarazadas
alosensibilizadas
Definir la especificidad relativa de los
autoanticuerpos
Caracterizar Acs de ttulo alto baja avidez (TABA)
Ejemplo
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Interpretacin
Observar la mayor dilucin que produce
aglutinacin 1+
El ttulo es la inversa de la dilucin
Si se advierte aglutinacin en el tubo que contiene
el suero mas diluido no se alcanz el punto final
En los estudios comparativos la diferencia
significativa en los ttulos es de 3 diluciones
Los ttulos solos sin la evaluacin adicional de la
intensidad de la aglutinacin pueden ser
engaosos
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Score de Mars
Asignar un valor numrico a la intensidad de la
aglutinacin
4 + = 12
3 + = 10
2+= 8
1+= 5
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Claves Tcnicas
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Nomenclatura
SISTEMA
GENES
ANTIGENOS
MNS
MNSs
Duffy
FYa FYb
Fy a y Fy b
Kell
K k Kpa Jsa
K k Kpa Jsa
Kidd
Jka Jkb
Jka Jkb
MNSs
FENOTIPOS
M+ N+ S-s+
Referentes histricos:
Issit, Daniels, Garratty, Pineda
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Jk (a+b+)
Hibridomas
La fusin de clulas
plasmticas normales,
productoras de anticuerpos,
con clulas plasmticas
neoplsicas permite obtener
lneas celulares con capacidad
reproductiva infinita.
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Macroscpica
BI
Haptoglobina
LDH
Hemoglobina libre en
plasma y orina
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Si no hay clnica ni
laboratorio de
hemlisis no se
justifican estudios
adicionales
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4
6
5
72
13
46
2
1
7
6
12p12.3
7
9
9
1
59
4
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6p21.3
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medicinatransfusional@hotmail.com
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