Determinacion de azucares totales-Metodo

fenol sulfurico

Materiales y equipo.
-Tubos de ensayo
-Embudo de vidrio
-Papel filtro
-Pipetas volumtricas
-Pipetas mohr
-Agitador
-Gradilla
-Centrifugadora
-Bao de hielo
-Espectrofotmetro UV-Visible
Reactivos.
-Solucin de sulfato de Zinc 10%
-Solucin de NaOH 0.5 N
-Solucin de fenol 5%
-Acido Sulfrico concentrado
-Solucin patrn de carbohidrato

Procedimiento.
Desproteinizacin de las muestras.
-Pesar 2 g de muestra homogenizada y suspender en 20 mL agua
desmineralizada. Homogenizar.
-Filtrar y tomar 10 mL del filtrado, a este adicionar 1 mL de una solucin de
Sulfato de Zinc al 10% y 1 mL de NaOH 0.5 N.
-Mantener en reposos durante 15 minutos y luego centrifugar a 200 rpm
durante 15 minutos. Utilizar el sobrenadante para la cuantificacin de azucares
totales.
Determinacin de Azucares Totales
NOTA. Realizar todo el procedimiento para un tubo antes de seguir con el
siguiente.

-Preparar una solucin o suspensin de la muestra en agua, procurando que

los carbohidratos se encuentren en el intervalo de sensibilidad del mtodo (10100g/mL).
-En tubos de ensayo perfectamente etiquetados, colocar 1 mL de la solucin o
suspensin acuosa de la muestra.
-Para cada tubo adicionar 0.6 mL de una solucin acuosa de fenol al 5%.
Mezclando perfectamente.
-Adicionar cuidadosamente 3.6 mL de cido sulfrico concentrado,
homogeneizar.
-Dejar enfriar la mezcla a temperatura ambiente (aproximadamente 30 min.).
-Determinar la intensidad del color naranja obtenido en un espectrofotmetro a
490 nm, frente a un blanco preparado de la misma manera utilizando agua
desmineralizada.
-Calcular la cantidad de carbohidratos presentes en la muestra a partir de una
curva patrn preparada con el carbohidrato de inters en el intervalo del
mtodo, tratada de la misma manera que el problema.