METODOLOGA DE LA INVESTIGACIN

RECOLECCIN DE LA MUESTRA BIOLGICA

Los especmenes sern anestesiados por va intra-peritoneal con Ketamina 120mg/kg.
Despus sern decapitados:

Se colocara la cabeza en papel toalla doblada y utilizando el bistur #11, se har una
incisin en el medio, cerca del hueso nasal y corriendo en direccin caudal hasta el
hueso occipital. Asegurndonos de cortar por completo a travs del musculo cutneo, y

exponer los puntos de sutura en la superficie dorsal del crneo.

Se cortara a travs de las placas de crneo con tijeras de estuche de diseccin y
sosteniendo firmemente la cabeza con las manos sobre la mesa se ingresara la parte
baja de la tijera en el agujero occipital y se cortara a travs de la placa occipital, y luego

a lo largo de la lnea media de la sutura de las placas parietales hasta la parte frontal.
Se retirara con una esptula y con ayuda de una cuchara de plstico el cerebro y sern

colocados en solucin lquido cefalorraqudeo helado.

Los cerebros se pesarn y se conservaran a -70C hasta su anlisis

PREPARACION DE LA MUESTRA NEURAL

La muestra neuronal ser homogenizada en 8ml de Buffer 20mM de tampn fosfato de

potasio helado (pH7.4)

Centrifugar a 4000 rpm por 10 minutos.
Recoger el sobrenadante (3ml).
Llevar a Bao Mara por 1 hora a 37C en oscuridad.
Luego aadir 0.02 ml de ATC al 10%
Centrifugar a 2400 rpm por 10 minutos.

DETERMINACION DE LA LIPOPEROXIDACION EN MEMBRANAS NEURONALES

Colocar en 1 ml de fraccin soluble en cada tubo y mezclar con 2ml de TBA al 0.67%
Llevar a ebullicin por 1 hora a 05-100C.
Enfriar las muestras en hielo por 15 minutos.
Aadir 2.5ml de n-butanol piridina (15:1) y 0.5ml de agua.
Centrifugar a 24000 rpm por 10 minutos.
Separar la fase orgnica y realizar la lectura de las absorbancias a 532nm.

RECOLECCIN DE LA MUESTRA BIOLGICA

Ketamina 120mg/kg.
papel toalla doblada bistur #11

estuche de diseccin
Balanza analtica

PREPARACION DE LA MUESTRA NEURAL

Buffer 20mM de tampn fosfato de potasio helado (pH7.4)

Centrifuga
Tubos de ensayo
Papel aluminio
Bao Mara.
ATC al 10%

DETERMINACION DE LA LIPOPEROXIDACION EN MEMBRANAS NEURONALES

TBA al 0.67%
Llevar a ebullicin por 1 hora a 05-100C.
hielo
n-butanol piridina (15:1)
agua destilada
Espectrofotmetro