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INTRODUCCIN A LA CROMATOGRAFA
INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los
componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.
a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una
fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido anclado a un
soporte slido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por
una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.
El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo
de la fase estacionaria, impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de
elucin. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionara, mientras que
la mvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a
distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas
con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la
muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase mvil y la fase
estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase
estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario
los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con
rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la
muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa
y/o cuantitativamente.
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TIPOS DE CROMATOGRAFA.
Dependiendo de la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase mvil se
pueden distinguir distintos tipos de cromatografa
a) Cromatografa slido-lquido. La fase estacionaria es un slido y la
mvil un lquido.
b) Cromatografa lquido-lquido. La fase estacionaria es un lquido
anclado a un soporte slido.
c) Cromatografa lquido-gas. La fase estacionaria es un lquido no
voltil impregnado en un slido y la fase mvil es un gas.
d) Cromatografa slido-gas. La fase estacionaria es un slido y la mvil
un gas.
Segn el tipo de interaccin que se establece entre los componentes de la
mezcla y la fase mvil y estacionaria podemos distinguir entre.
a)
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b)
c)
CROMATOGRAFA DE ADSORCIN
La adsorcin es la propiedad que tienen ciertos slidos de aumentar la
concentracin en su superficie de otras sustancias. La separacin se debe a las
diferencias de adsorcin de los componentes de una mezcla sobre la fase
estacionaria. La fase estacionaria ha de ser un slido polar de gran superficie
(adsorbente). La fase mvil puede ser un gas o un lquido dando lugar a la
cromatografa gas-slido (CGS) o lquido-slido (CLS).
El grado de adsorcin vara segn la naturaleza y superficie especfica de
los adsorbentes y naturaleza de los solutos. Los enlaces entre molculas
adsorbidas y el adsorbente han de ser dbiles para que su fijacin sea reversible,
las uniones son debidas a fuerzas intermoleculares (interacciones dipolo-dipolo
o puentes de hidrgeno). Como regla general, las polaridades del adsorbente y
de los solutos han de ser opuestas.
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Frmula qumica
Punto de
ebullicin
Constante
dielctrica
Densidad
Disolventes no polares
Hexano
CH3-(CH2)4-CH3
69 C
2,0
0,655 g/ml
Benceno
C6H6
80 C
2,3
0,879 g/ml
Tolueno
C6H5-CH3
111 C
2,4
0,867 g/ml
ter dietlico
CH3CH2-O-CH2-CH3
35 C
4,3
0,713 g/ml
Cloroformo
CHCl3
61 C
4,8
1,498 g/ml
CH3-C(=O)-O-CH2-CH3
77 C
6,0
0,894 g/ml
2,3
1,033 g/ml
Acetato de etilo
1,4-Dioxano
CH2-CH2-O-CH2-CH2-O
101 C
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Tetrahidrofurano (THF)
CH2-CH2-O-CH2-CH2
66 C
7,5
0,886 g/ml
Diclorometano (DCM)
CH2Cl2
40 C
9,1
1,326 g/ml
CH3-C(=O)-CH3
56 C
21
0,786 g/ml
CH3-CN
82 C
37
0,786 g/ml
Dimetilformamida
(DMF)
H-C(=O)N(CH3)2
153 C
38
0,944 g/ml
Dimetil sulfxido
(DMSO)
CH3-S(=O)-CH3
189 C
47
1,092 g/ml
Acetona
Acetonitrilo (MeCN)
118 C
6,2
1,049 g/ml
CH3-CH2-CH2-CH2-OH
118 C
18
0,810 g/ml
Isopropanol (IPA)
CH3-CH(-OH)-CH3
82 C
18
0,785 g/ml
n-Propanol
CH3-CH2-CH2-OH
97 C
20
0,803 g/ml
CH3-CH2-OH
79 C
24
0,789 g/ml
CH3-OH
65 C
33
0,791 g/ml
H-C(=O)OH
100 C
58
1,21 g/ml
H-O-H
100 C
82
1,000 g
cido actico
n-Butanol
Etanol
Metanol
cido frmico
Agua
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Cromatografa en columna.
Es el mtodo ms utilizado para la separacin de compuestos orgnico a
escala preparativa. La fase estacionaria se deposita en el interior de una columna
de vidrio que termina con una placa porosa que impide su paso y en un
estrechamiento con una llave. La mezcla se deposita sobre la parte superior de la
fase estacionaria mientras que la fase mvil atraviesa el sistema. Los
compuestos van saliendo por separado de la columna y se recogen en fracciones,
los ms polares quedan ms retenidos y para que salgan generalmente hace falta
aumentar la polaridad del disolvente. El tiempo necesario para eluir un
compuesto de la columna se llama tiempo de retencin.
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Cromatografa en papel.
Es la ms sencilla de las tcnicas, pero slo nos dar resultados
cualitativos. Est casi en desuso. El mtodo se basa en un mecanismo de reparto,
y consiste en depositar una pequea cantidad de muestra en el extremo de una
tira de papel de filtro, que se deja evaporar. Luego se introduce la tira en una
cubeta que contenga el disolvente, de manera que ste fluya por la tira por
capilaridad.
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CROMATOGRAFA DE PARTICIN.
La cromatografa lquido-lquido, tambin llamada de particin se
caracteriza por emplear una fase estacionaria lquida, anclada a un soporte
slido, y una fase mvil tambin lquida. El soporte slido por lo general es gel
de slice, sobre cuya superficie se ha anclado una fase lquida con la
incorporacin de una cadena hidrocarbonada larga, mediante la transformacin
de los grupos silanol (Si-OH) de la gel de slice en grupos siloxano (Si-O-Si-R),
lo que proporciona una fase lquida estacionaria trmicamente estable y difcil
de hidrolizar en condiciones normales.
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Funcionalidad
Diamino
Aminopropilo
Nitrilo
Nitro
Diol
Dimetilamino
Propilo
Fenilo
Octilo
Octadecilo
Estructura
-(CH2)3-NH(CH2)2-NH2
-(CH2)3-NH2
-(CH2)n-CN
-(CH2)n-NO2
(CH2)3-OCH2-CH(OH)-CH2OH
-(CH2)3-N(CH3)2
-(CH2)2-CH3
-(CH2)n-Ph
-(CH2)7-CH3
-(CH2)17-CH3
Polaridad
Tipo
Muy alta
Alta
Media
Media
Dbil
Dbil
Baja
Baja
Baja
Muy baja
Normal
Normal
Normal
Normal
Normal
Normal
Inversa
Inversa
Inversa
Inversa
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CROMATOGRAFA-2011
C + D
Otros
Reactivos
Mezcla de reaccin
Productos de reaccin
Extraccin
Purificacin
Separacin
cromatogrfica
Caracterizacin
Cristalizacin
Pf
Destilacin
Peb
RMN
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Procedimiento general
Para el proceso de separacin-purificacin por cromatografa de columna se
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Se sujeta la columna a un
Se deposita la muestra en
con
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F)
Las
fracciones
recogidas
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