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Manual de Prcticas de Biologa Celular


Prctica No. 1
USO DE MICROPIPETAS
OBJETIVO
El alumno se familiarizar con el apropiado uso de las micropipetas.
INTRODUCCIN
Durante el desarrollo de diversas tcnicas y protocolos en Biologa
Experimental es necesario utilizar volmenes pequeos de diversas soluciones.
Para poder manejar estos volmenes, se utilizan micropipetas de diferentes
capacidades, dentro de las ms comunes se encuentran micropipetas de
volumen variable de: 0.5-10 L, 2-20

L, 10-100 L y 100-1000 L o de

volumen fijo: 10, 20, 50, 100, 200 y 1000 L, las de mltiples canales
(multicanal) con posibilidad de 8 o 12 puntas con volmenes varialbes de 20 a
200 o hasta 300 L.
La unidad de medida de volumen es el litro (L), en las tcnicas de
Biologa Experimental las unidades ms usadas son el microlitro (L) y el
mililitro (mL).
1 litro = 1000 mL, 1 mL = 1000 L
EQUIPO Y MATERIALES
Micropipetas de volumen fijo de 10, 100 y 1000 L
Micropipetas de volumen variable: 2-20, 20-200 y 100-1000 L
Microtubos cnicos de 1.8 ML
Viales de vidrio de 2 ML de capacidad
Puntas para micropipeta con capacidad correspondiente a cada micropipeta
Balanza analtica
Centrfuga clnica
Agua destilada
Soluciones colorantes: rojo y azul

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Aspectos importantes acerca del uso de micropipetas:
1. Las micropipetas son MUY COSTOSAS y son de uso indispensable en el
laboratorio. Por lo que se

requiere que todos los procedimientos que

realices con las micropipetas sean con mucho cuidado y poniendo atencin
en todo momento.
2.

Siempre que use la micropipeta, asegrese de tener una punta acorde al


modelo de la micropipeta.

3.

Mantenga en posicin vertical la micropipeta cuando est pipeteando la


solucin de trabajo.

4. Respete el rango especificado en la micropipeta. No trate de usar un


volumen que no se encuentre en ese rango.
5. Controle la velocidad en la cual el mbolo de la micropipeta desciende y
asciende. SIEMPRE PRESIONAR EL EMBOLO SUAVEMENTE.
Para el uso de las micropipetas es importante:
1.

Verificar que se haya seleccionado la micropipeta correcta para el volumen


que necesitas utilizar. En el laboratorio cuenta con las siguientes
micropipetas: P-10 (para volmenes de 0.5 a 10 L), P-20 (para volmenes
de 2 a 20 L), P-200 (para volmenes de 20 a 200 L) y P-1000 (para
volmenes de 100 a 1000) L.

2. Ajustar la micropipeta al volumen deseado.


3. Seleccionar y poner la punta correcta en la micropipeta. Verificar que la
punta est correctamente colocada en el extremo de la micropipeta.
Existen diferentes tipos de puntas, generalmente las puntas de color amarillo
se pueden utilizar con las micropipetas P-20 y P-200. Las puntas azules son
para la micropipeta P-1000.
El instructor mostrar el correcto uso de la micropipeta. PONGA MUCHA
ATENCIN.

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Para tomar el volumen deseado de la solucin de trabajo:
1. Primeramente, debe abrir el contenedor de la solucin (microtubo, tubo,
frasco, etc.).
2. Sujete la micropipeta con una mano en posicin vertical, mantenga el tubo
con la otra mano. Realice este procedimiento a la altura de su vista.
3. Presione SUAVEMENTE y mantenga el mbolo de la micropipeta al nivel
del primer tope. Sumerja la punta (2 - 3 mm) hacia la solucin de trabajo.
4. Aspire el volumen de la solucin LENTA Y UNIFORMEMENTE. NO LIBERE
DE UN SOLO GOLPE EL MBOLO DE LA MICROPIPETA.
Para vertir el volumen aspirado de la solucin a un contenedor:
1. Abra el contenedor al cual vertir la solucin aspirada por la micropipeta.
2. Sujete la micropipeta con una mano en posicin vertical, mantenga el tubo
con la otra mano. Realice este procedimiento a la altura de su vista.
3. Con la punta toque la pared del tubo en donde colocar la solucin.
4. Presione SUAVEMENTE y mantenga el mbolo de la micropipeta al nivel
del segundo tope. Asegrese de que todo el lquido haya salido de la
punta.
5. Manteniendo el mbolo presionado, retire lentamente la micropipeta del
tubo y asegrese de NO succionar nada de la solucin previamente vertida.
6. Si necesita manejar otra solucin de trabajo con la micropipeta, deber
cambiar la punta y realizar el mismo procedimiento previamente descrito.
7. Para quitar la punta de la micropipeta, debe presionar el botn expulsador
de la misma. Dependiendo de la marca y modelo de la micropipeta ser el
mecanismo expulsador de puntas.
PROCEDIMIENTO
Pipeteo de soluciones:
El maestro le proporcionar 3 soluciones de trabajo: Azul (A), Roja (B) e
Incolora (C)
Con la micropipeta P-10, P-100 y P-1000 realice lo siguiente:
1. Rotule

2 microtubos con los nmeros 1 y 2 para cada una de las

micropipetas a utilizar

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2. Adicione los volmenes de las soluciones A, B y C especificados en la
siguiente tabla a cada uno de los tubos
Pipeta p-10
Pipeta p-100
Pipeta p-1000
Solucin en L Tubo 1 Tubo 2 Tubo 1 Tubo 2 Tubo 1 Tubo 2
A
3
2
30
20
300
200
B
5
4
50
40
500
400
C
2
3
20
30
200
300
3. Una vez concluidos estos procedimientos, centrifugue los microtubos a
500xg por 3 min. a temperatura ambiente.
4. Mida el volumen de cada uno de los tubos y regstrelos en la siguiente tabla:
Pipeta P-10
Tubo
Tubo
1
2

Pipeta P-100
Tubo
Tubo
1
2

Pipeta P-1000
Tubo
Tubo 2
1

Volumen recuperado en
L
Reproducibilidad
Utilizando las micropipetas P-10, P-100 y P-1000, realice lo siguiente:
1. Adicione 10, 100 y 1000 L

de agua destilada con las micropipetas

correspondientes y virtalos en un contenedor tarado, determine el peso de


esos volmenes y regstrelos.
2. Repita el mismo procedimiento 10 veces.
3. Registre el peso en cada ocasin utilizando el siguiente cuadro:
Peso en g Pipeta P-10 Pipeta P-100 Pipeta P-1000
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

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ACTIVIDADES
1. En base a los resultados obtenidos en la tabla 1 discuta

las posibles

causas de obtener volmenes diferentes a los esperados

2. Investigue el efecto de la temperatura y la presin atmosfrica sobre el


peso del agua.

3. Con los datos obtenidos determine el error sistemtico y la exactitud de


medicin.

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CONCLUSIONES

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
http://www.google.com.mx/url?
sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ved=0CCwQFjAA&url=http
%3A%2F%2Fwww.eppendorf.com%2Fscript%2Fbinres.php%3FRID
%3D35501%26DOW
%3D1&ei=o07MUr7XIIuG2wWV54CQAQ&usg=AFQjCNHCNQZ5CDoAp3cr0
qtgbDnGJSAyow
http://ocw.uv.es/ocw-formacio-permanent/11.Pipetasautomaticas.pdf